CN109682896A - 用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，涉及分析化学领域。该方法采用多糖键合型手性柱，将待测泛酰内酯原料药或制剂粉末用稀释液配制成检测溶液，以正己烷‑异丙醇‑二乙胺(50‑50‑0.1)为流动相，流速为0.6ml/min，波长220nm，柱温35℃。本发明泛酰内酯手性异构体的高效液相色谱分离检测方法分离度高、专属性好，解决了泛酰内酯手性异构体分离难的问题，从而确保了泛酰内酯原料及其制剂的质量可控。

Description

用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，具体涉及用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法。

技术背景

泛酰内酯是一种可以用于生产药品及化妆品的重要的中间体化合物。比如：D-泛酰内酯可以用作生产泛醇的原材料。泛醇主要用于皮肤和黏膜疾病的局部施加的活性成分，也可以用作化妆品的护肤组成物。泛酰内酯与β-丙氨酸的反应产物-维生素B5，是在代谢中催化酰基转移的辅酶A的合成所需的，其参与碳水化合物、氨基酸、脂肪的合成和降解，以及参与胆固醇的合成，其中，胆固醇在生物体中可用于形成甾体激素。

泛酰内酯的化学名为二氢-3-羟基-4,4-二甲基-2(3H)-呋喃酮、β,β-二甲基-α-羟基-γ-丁内酯。CAS号为79-50-5；分子式为C₆H₁₀O₃；结构式如下：

采用常规的手性柱和常规流动相的高效液相色谱法的测定方法难以将泛酰内酯手性异构体有效分离、峰形较差、柱效很低。手性异构体在一般的高效液相色谱法中很难得到有效分离，必须采用合适的检测方法才能达到分离检测的目的。

为了保证泛酰内酯中间体有较高的光学纯度，有必要找到一种能简单高效的将泛酰内酯手性异构体分离的高效液相测定方法，对于实现泛酰内酯手性异构体的分离在泛酰内酯的合成和制剂的质量控制中具有重要意义。

本发明提供了一种直接使用高效液相色谱及手性柱即可分离检测泛酰内酯手性异构体的测定方法，可以高效准确的实现泛酰内酯手性异构体的分离测定。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对目前没有文献报道直接使用高效液相色谱及手性柱简单高效的分离检测出泛酰内酯手性异构体的问题，本发明提供了一种泛酰内酯手性异构体的高效液相色谱分离检测方法，该方法可以迅速高效的分离检测出泛酰内酯的手性异构体，实现泛酰内酯的质量可控。

(二)技术方案为实现以上目的，本发明通过以下技术实现：

一种用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，所述液相色谱的色谱条件为采用多糖键合型手性柱，所述的稀释液为无水乙醇，所述的检测溶液的浓度为2-3mg/ml，所述手性柱的柱温是30-40℃，以正己烷-异丙醇-有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱，所述流动相中正己烷-异丙醇-有机碱溶液的体积比为50：50：0.1。

优选的，所述的采用多糖键合型的手性柱为CHIRALPAK IG，规格4.6×250mm,5um。

优选的，所述的有机碱溶液为二乙胺溶液、三乙胺溶液。进一步优选地，所述的有机碱溶液为二乙胺溶液。

进一步优选地，所述的有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.05-0.15％，更优选地，所述的有机碱溶液中有机碱的体积百分比浓度为0.1％。

优选的，所述的流动相的流速为：0.4-0.8ml/min。

优选的，所述的液相色谱检测波长为：200-240nm。

优选的，所述的手性柱的柱温为：35℃。

优选的，所述的流动相等度洗脱的流速为：0.6ml/min。

优选的，所述的液相色谱检测波长为：220nm。

优选的，所述检测时的进样量为10ul。

一种用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，包括以下步骤：

对照溶液：取泛酰内酯消旋体对照品10mg，精密称定，置于5ml容量瓶中，加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml溶液中含有2mg的对照品的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液：取泛酰内酯D/L型异构体供试品15mg，精密称定，置于5ml容量瓶中加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml溶液中含有3mg的泛酰内酯D/L型异构体供试品的溶液，摇匀，即得；

精密量取无水乙醇空白溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。

精密量取对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。泛酰内酯的异构体依次流出，泛酰内酯的异构体之间分离度应符合要求，分离度大于1.5。

精密量取泛酰内酯D/L型异构体取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中，泛酰内酯的异构体依次流出，两者的分离度大于1.5。

(三)有益效果

由以上技术方案可知，本发明方法采用多糖键合型的手性柱，以正己烷-异丙醇-有机碱溶液为流动相，可以迅速准确地分离检测出泛酰内酯的手性异构体，峰形较好，分离度符合中国药典的规定，有效的解决了分离测定泛酰内酯手性异构体分离难的问题，从而有效地控制泛酰内酯及其制剂的质量，本发明方法分离度高、专属性好，灵敏度强。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术中描述中所需使用的附图作简单地介绍，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不限定本发明。

图1为本发明空白溶液的液相色谱图。

图2为本发明泛酰内酯消旋体的液相色谱图。

图3为本发明泛酰内酯D型异构体色谱峰的液相色谱图。

图4为本发明泛酰内酯L型异构体色谱峰的液相色谱图。

图5本发明泛酰内酯制剂的液相色谱图。

具体实施方式

本发明实施例公开了一种用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。需要特别指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被是被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清晰、完整的描述。

本发明一种用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其中液相色谱法的色谱条件为采用多糖键合型手性柱，所述手性柱为CHIRALPAK IG，以无水乙醇为稀释液，手性柱的柱温是30-40℃，以正己烷-异丙醇-二乙胺为流动相，所述流动相中正己烷-异丙醇-二乙胺溶液的体积比为50：50：0.1，流动相的流速为0.4-0.8ml/min，液相色谱检测波长为200-240nm。

实施例1：无水乙醇空白溶剂的HPLC检测

1、仪器与条件

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK IG(规格4.6×250mm,5um)

流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺＝50:50:0.1

检测波长220nm。

流速：0.6ml/min

柱温：35℃。

进样量：10ul。

本发明进样为手动进样。

2、实验步骤

精密量取10ul的无水乙醇空白溶剂，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。

由本试验方法检测结果图1得出：无水乙醇溶液对测定无干扰，可以用来泛酰内酯手性异构体分离检测。

实施例2：泛酰内酯消旋体混合溶液的HPLC检测

1、仪器与条件

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK IG(规格4.6×250mm,5um)

流动相：正己烷-异丙醇-二乙胺＝50:50:0.1

检测波长220nm。

流速：0.6ml/min

柱温：35℃。

进样量：10ul。

本发明进样为手动进样。

2、实验步骤

取泛酰内酯消旋体对照品10mg，精密称定，置于5ml容量瓶中，加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml溶液中含有2mg的对照品的溶液，作为对照品泛酰内酯消旋体溶液；

精密量取10ul的对照品泛酰内酯消旋体溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图2。

由图2可知该条件下泛酰内酯手性异构体的出峰时间分别为8.181min、10.065min，分离度达到5.231，且峰形好、柱效高，说明本方法可以有效的分离泛酰内酯的手性异构体，可以用于泛酰内酯手性异构体的分离测定。

实施例3：泛酰内酯D型异构体溶液的HPLC检测

1、仪器与条件

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK IG(规格4.6×250mm,5um)

流动相：正己烷-异丙醇-三乙胺＝50:50:0.1

检测波长220nm。

流速：0.6ml/min

柱温：35℃。

进样量：10ul。

本发明进样为手动进样。

2、实验步骤

取泛酰内酯D型异构体供试品15mg，精密称定，置于5ml容量瓶中加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml溶液中含有3mg的泛酰内酯D型异构体供试品的溶液，作为泛酰内酯D型异构体供试品溶液。

分别精密量取10ul的泛酰内酯D型异构体供试品溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。

由图3可以看出：图3中保留时间为9.991min色谱峰为泛酰内酯D型异构体的色谱峰，且峰形好、柱效高，说明本方法可以有效的检测泛酰内酯的D型异构体，可以用于泛酰内酯D型异构体的测定和质量监控。

实施例4：泛酰内酯L型异构体溶液的HPLC检测

1、仪器与条件

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK IG(规格4.6×250mm,5um)

流动相：正己烷-异丙醇-三乙胺＝50:50:0.1

检测波长220nm。

流速：0.6ml/min

柱温：35℃。

进样量：10ul。

本发明进样为手动进样。

2、实验步骤

取泛酰内酯L型异构体供试品15mg，精密称定，置于5ml容量瓶中加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml溶液中含有3mg的泛酰内酯L型异构体的溶液，作为泛酰内酯L型异构体溶液。

精密量取10ul的泛酰内酯L型异构体溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图4。

由图4可以看出：图4中保留时间为8.086min色谱峰为泛酰内酯L型异构体的色谱峰，且峰形好、柱效高，说明本方法可以有效的检测泛酰内酯的L型异构体，可以用于泛酰内酯L型异构体的测定和质量监控。

实施例5：泛酰内酯制剂的HPLC检测

1、仪器与条件

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK IG(规格4.6×250mm,5um)

流动相：正己烷-异丙醇-三乙胺＝50:50:0.1

检测波长220nm。

流速：0.6ml/min

柱温：35℃。

进样量：10ul。

本发明进样为手动进样。

2、实验步骤

用精密移液管精密量取泛酰内酯D型异构体制剂溶液1ml，置于10ml容量瓶中加入适量的无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为泛酰内酯D型异构体制剂溶液。

精密量取10ul的泛酰内酯D型异构体制剂溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图5。

由图5可以看出：图5中保留时间为10.006min色谱峰为泛酰内酯D型异构体制剂的色谱峰，且峰形好、柱效高，说明本方法可以有效的检测泛酰内酯制剂，可以用于泛酰内酯制剂测定和质量监控。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，而非对其限制。应当指出，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，还可以对本发明进行适当修改或者替换，这些修改和替换也落入本发明权利要求的保护范围内。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱法的色谱条件为采用多糖键合型手性柱，将待测泛酰内酯原料或其制剂用稀释液配置成检测溶液，以正己烷-异丙醇-有机碱溶液为流动相并进行等度洗脱。

2.根据权利1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述流动相中正己烷-异丙醇-有机碱溶液溶液的体积比为50：50：0.1，其中所述的有机碱溶液为二乙胺溶液、三乙胺溶液。

3.根据权利1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述手性柱的柱温是30-40℃。

4.根据权利1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，检测溶液的浓度为2-3mg/ml。

5.根据权利1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述的稀释液为无水乙醇。

6.根据权利要求1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述手性柱为：CHIRALPAK IG。

7.根据权利要求1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述流动相的流速为：0.4-0.8ml/min。

8.根据权利要求1所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱检测波长为：200-240nm。

9.根据权利要求7所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述流动相的流速为：0.6ml/min。

10.根据权利要求8所述的用高效液相色谱法分离检测泛酰内酯手性异构体的方法，其特征在于，所述液相色谱检测波长为：200nm。