CN109666652A - 一株宽宿主谱美人鱼发光杆菌噬菌体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株可裂解美人鱼发光杆菌的噬菌体FSN17‑1 Photobacterium damselae phage FSN17‑1，保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2018393；该美人鱼发光杆菌噬菌体在30‑60℃和pH为5.0‑9.0的条件下都能够稳定存活，亲水性好，裂解谱广，对美人鱼发光杆菌均具有很强的裂解能力，并且对美人鱼发光杆菌的感染具有良好的治疗效果，为该病原菌的防治提供了新途径。

Description

一株宽宿主谱美人鱼发光杆菌噬菌体及其应用
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株美人鱼发光杆菌噬菌体菌株及其在防治美人鱼发光杆菌感染中的应用。
背景技术
美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)是一种革兰阴性菌，是美人鱼发光杆菌病的病原菌。美人鱼发光杆菌广泛存在于海洋环境中，能够感染多种海洋经济鱼类，且没有明显的宿主特异性，患病动物的典型特征为出血性败血症，发病迅速，死亡率高，往往造成重大的经济损失。另外该病原亦能够感染人和哺乳动物，对于人类生命和健康造成威胁。
早在1963年，美人鱼发光杆菌即在美国切萨匹克海滨的白鲈和条纹鲈天然种群中发现，而自1990年至今，多个欧洲国家的养殖鱼群中均暴发了该病原的疫情，造成了严重经济损失。我国曾经被认为是该病的无病疫区，但近年来我国的美人鱼发光杆菌的感染报道逐渐增多。2006年海南省卵形鲳鲹网箱养殖场、2007年山东省青岛市半滑舌鳎养殖场、2010年福建省宁德市大黄鱼养殖场、2013年浙江省舟山市条石鲷网箱养殖场及2015年河北省秦皇岛市大菱鲆养殖场均暴发了该病原，该病原的不断蔓延及暴发给我国渔业造成了严重的损失，严重威胁着我国渔业的健康发展。因此，亟须开发针对美人鱼发光杆菌的防控措施。
目前，针对美人鱼发光杆菌感染的防控措施主要为疫苗和抗生素。国内已有研究表明疫苗对美人鱼发光杆菌的感染具有一定的预防作用(苏友禄，郭志勋，冯娟，孙秀秀，王江勇.美人鱼发光杆菌疫苗及其制备方法和应用[P].中国专利:CN101461940，2009-01-09)(张晓君，阎斌伦.半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备与使用方法[P].中国专利:CN102139103A，2011-04-07)，但是，一方面水产疫苗的研究相对滞后，另一方面接种时操作难度比较大，普及度并不高，这都给美人鱼发光杆菌的预防工作带来很大的困难。而针对美人鱼发光杆菌的治疗，抗生素一直是最直接、最有效的方法。但是在养殖过程中，有些养殖户为促进鱼类生长及控制疾病，选择长期使用抗生素，这就导致美人鱼发光杆菌的耐药菌株不断出现。随着国家对兽用抗生素的限制使用，一些中草药复方制剂也被用来治疗美人鱼发光杆菌的感染，但是由于中草药成分复杂、作用机理不明且疗效不确切，所以在实际使用中效果并不理想。面临2020年我国饲料端“全面禁抗”，养殖端“减抗、限抗”等政策的制定，急需一种不依赖于抗生素且无副作用的防控措施。
噬菌体是细菌的天敌，通过特异的裂解酶裂解细菌，噬菌体的宿主特异性强，不会破坏正常菌群，另外噬菌体的增殖速度快、治疗效率高，并且不会产生药物残留。如果将抗感染的广谱抗生素治疗看成是"密集轰炸"，噬菌体抗感染疗法则可以被视为"精准制导"。在细菌对抗生素耐药越来越严重的情况下，噬菌体抗感染治疗的研究和应用显得尤为迫切，具有极大的应用价值和商业前景。早在100年前噬菌体就被发现，随后被尝试用于抗细菌感染的治疗，并取得了良好的治疗效果。2011年，美国FDA批准了第1种由噬菌体构成的人类食品添加剂，将该添加剂喷洒于猪肉表面可预防O157：H7大肠杆菌感染。截至目前，美国FDA已经批准了3种由噬菌体组成的人类食品添加剂。2014年，美国过敏与传染病研究所将噬菌体疗法确定为治疗耐药菌的措施之一。针对美人鱼发光杆菌噬菌体的研究有限，目前仅日本的Yamaki,S等分离到了一株美人鱼发光杆菌的噬菌体，但是这株噬菌体的裂解谱极窄，在所试验的10株美人鱼发光杆菌，仅能裂解其中一株，裂解率仅为10％(Yamaki,S,Kawai,Y.,&Yamazaki,K.Characterization ofa novel bacteriophage,Phda1,infectingthe histamine-producing Photobacterium damselae subsp.Damselae[J].JournalofApplied Microbiology,2015,118(6),1541-1550.)，而在国内尚未有关于美人鱼发光杆菌噬菌体的报道和研究。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种针对美人鱼发光杆菌的宽裂解谱、强裂解性的美人鱼发光杆菌噬菌体，该噬菌体可以单独或作为药物组合物或饲料添加剂与其他物质复配使用，既可以用于预防和治疗美人鱼发光杆菌的感染，也可以作为环境消毒剂清除养殖环境、运输过程及加工过程中的美人鱼发光杆菌。
为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：
本发明首先提供了一株美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1，申请人将该噬菌体命名为FSN17-1，并于2018年6月22日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072；保藏号为CCTCC M 2018393，其分类学名称为美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1(Photobacterium damselae phage FSN17-1)；该噬菌体对美人鱼发光杆菌的裂解率能够达到85.2％，裂解效果好，该噬菌体在2216E培养基中可形成圆形、透明、边缘整齐的噬菌斑；该噬菌体在30-60℃环境中放置30min，活性稳定，处于pH 4.0-11.0时，噬菌体仍能存活，处于pH 5.0-9.0时，其效价与初始效价无显著性差异；该噬菌体的全基因组序列已获得，并且该噬菌体不携带耐药基因和毒力基因。
其次，本发明还提供了上述保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1在制备防控美人鱼发光杆菌感染的药物组合物中的应用；所述药物组合物的制剂形式为口服给药剂型、喷雾剂型、体内注射型或肠外给药剂型等医学上可接受的制剂形式。
第三、本发明提供了保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1在制备防控美人鱼发光杆菌感染的饲料添加剂中的应用。
第四、本发明提供了上述保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1在杀灭环境及水体内美人鱼发光杆菌中的应用。具体而言，即向环境及水体中喷洒终浓度为1×105～1×107PFU/mL的保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体，以杀灭环境及水体中的美人鱼发光杆菌。
第五，本发明提供了一种用于防控美人鱼发光杆菌感染的药物组合物，该药物组合物包含上述保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体，可进行复配并应用于预防或治疗美人鱼发光杆菌的感染。
第六，本发明提供了一种饲料添加剂，该饲料添加剂包含上述保藏编号为CCTCCM2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体，可进行复配并应用于预防或治疗美人鱼发光杆菌的感染。
第七，本发明还提供了一种包含上述保藏编号为CCTCC M 2018393的美人鱼发光杆菌噬菌体环境杀菌剂，该环境杀菌剂还包括SM缓冲液，所述环境杀菌剂中美人鱼发光杆菌噬菌体的浓度为1×107PFU/mL。该环境杀菌剂可应用于在养殖环境、运输过程及加工过程中喷洒，净化、杀灭环境或水体中的美人鱼发光杆菌。
本发明所提供的美人鱼发光杆菌噬菌体，对多个渔场分离的美人鱼发光杆菌均能够起到裂解作用，裂解率达到85.2％，该噬菌体的发现将为美人鱼发光杆菌感染的防治提供一条新的途径，既可以作为药物组分或饲料添加剂使用防控美人鱼发光杆菌的感染，也可以作为环境杀菌剂清除养殖环境、运输过程及加工过程中的美人鱼发光杆菌，具有较高的应用价值和商业价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体能够特异性杀灭美人鱼发光杆菌，尤其是对美人鱼发光杆菌的裂解谱较宽。
(2)本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体是一种防治美人鱼发光杆菌感染的新型组分；
(3)本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体不携带耐药基因和毒力基因，在基因水平上保证了噬菌体的安全性；
(4)经过斑马鱼攻毒试验验证，本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体无毒副作用，安全性高；
(5)本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体，增殖速度快、效价高，便于发酵和规模化生产；
(6)本发明提供的美人鱼发光杆菌噬菌体具有较好的亲水性，容易作为作为药物组合物或饲料添加剂与其他物质复配，或作为环境消毒剂，便于该噬菌体的应用，且应用效果良好。
附图说明
图1噬菌体的噬菌斑形态。
图2噬菌体的透射电镜图片。
图3温度对噬菌体活性的影响。
图4pH值对噬菌体活性的影响。
图5噬菌体的全基因组图谱。
图6噬菌体在培养基中的杀菌效果。
图7噬菌体对大黄鱼的治疗效果试验。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例中涉及的菌株及培养基:
实施例中所使用的27株细菌均为美人鱼发光杆菌临床分离株，由江苏省农业科学院分离并保存，其16S rDNA序列均已上传至GenBank并公开，各菌株(表1中编号菌株1-27)的登录号分别依次为MK285666-MK285692。
2216E液体培养基购自北京索莱宝科技有限公司。
2216E固体培养基：向2216E液体培养基中加入终浓度为1.5％的琼脂配制而成。
实施例1噬菌体的分离及制备
本发明试验用噬菌体的宿主菌为美人鱼发光杆菌临床分离株NDA12(GenBank登录号为MK285669)。
本发明样品为采自福建省宁德市三都澳的发病大黄鱼腹腔内容物，将样品剪碎后溶于15mL SM液体，12000rpm离心20min，再用0.22μm滤膜过滤上清。取10mL过滤上清，加入0.5mL宿主菌过夜培养物，再加入无菌CaCl2母液至终浓度为1.25mM后混匀，加入20mL2216E培养基，放置于30℃培养箱中培养6-8h后，取上述培养物以12000rpm，离心30min，取上清；再取此上清10mL，加入0.5mL宿主菌过夜培养物，加入无菌CaCl2母液至终浓度为1.25mM后混匀，加入20mL 2216E培养基，按上述培养方法培养离心，获得富集的上清；按照以上的试验方法再富集一次，将富集三次的上清用0.22μm滤膜过滤，形成噬菌体原液。
将2216E固体培养基分为9个区域：吸取宿主菌液200μl滴于平板正中央，用涂棒将菌液均匀地涂开；待其晾干后，取每种噬菌体原液10μl滴于其中3个区域；待自然晾干后，置于30℃培养箱中培养10h后，观察滴加噬菌体区域有无空斑形成。如果有空斑形成，证明有噬菌体存在。
取噬菌体原液100μL，进行一系列的10倍比稀释，取10-2、10-4和10-6稀释液各100μL与过夜培养的宿主菌液100μl混匀，室温作用15min后，加入约4mL 0.6％2216E培养基，混匀后迅速倾倒入2216E固体培养基上层，摇匀平置10min，待其凝固，置于30℃温箱培养12h后观察，获得形成单个噬菌斑的双层平板。
实施例2噬菌体的扩增和纯化
在实施例1形成噬菌斑的双层平板上，用移液器的枪头挑取直径较大的单个噬菌斑，接种于5mL 2216E培养基中，加入处于对数生长期的宿主菌液0.1mL，混匀，室温作用15min，30℃培养12h，12000rpm，4℃离心10min，取上清，加入0.3％氯仿。如此反复挑取4-5次单个噬菌斑，直至将噬菌体纯化成大小一样的噬菌斑。
取1mL新鲜培养的宿主菌，加0.5mL噬菌体裂解液(以单个噬菌体培养物与宿主菌分别按照1:1、1:10和1:100的比例)。30℃温育20min，使噬菌体颗粒吸附于宿主菌；加入100mL 2216E液体培养基，再加入CaCl2母液至终浓度为1.25mM，30℃摇振培养12-16h，12000rpm，4℃离心10min，取上清，得到大量噬菌体。随后进行以下操作：
CsCl等密度梯度离心纯化:离心管底部先缓慢加入1.6gm/cc CsCl 10mL，再依次加入1.4gm/cc CsCl 10mL，25％蔗糖5mL，噬菌体裂解液10mL，平衡；加入离心管套中，缓慢悬挂于转子中；打开超速离心机(Optima L-80XP Ultracentrifuge,Beckman)开关，设置转速30000rpm，时间120min，温度18℃；离心结束后待真空下降为0时，打开仓门，取出样品，关机；样品下端有一层白色带，即1.4gm/cc与1.6gm/cc间，用细针头从带侧面插入，小心吸取，20mL样品最终获得约5-8mL；将样品置于透析袋中，用10mM Tris-HCl，PH为7.4，100mMMgCl2缓冲液进行透析；最终将样品吸出，体积约为10mL，测定噬菌体效价。
采用双层平板法检测噬菌体效价：将以上纯化的噬菌体液进行10倍比梯度稀释，取相应的几个梯度的噬菌体稀释液各0.1mL与宿主菌液0.1mL充分混匀，铺双层琼脂平板，30℃恒温培养10h左右，对每个琼脂平皿进行噬菌斑计数。根据稀释的倍数计算得到的噬菌体初始浓度即得噬菌体效价。纯化的噬菌体如图1所示，噬菌体在的2216E固体培养基中可以形成透亮空斑，周围无晕环，边缘清晰规则，直径约为0.6mm左右。
取纯化的噬菌体颗粒做电镜观察，加10μL样本滴在铜网上，待其沉淀15min,用滤纸吸去多余的液体，用2％的磷钨酸(PTA)染色1-2min，干燥后进行透射电镜(日立H-7650)观察，其电镜图片如图2所示，该噬菌体头部呈正多面体，头部直径约为50nm，尾长约为180nm。根据国际病毒分类委员会(ICTV)2011年发表的《病毒分类—国际病毒分类委员会第九次报告》，Photobacterium damselae phage FSN17-1属于长尾噬菌体科(Siphoviridae)。
申请人将纯化的噬菌体保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2018393，保藏日期为2018年6月22日，分类学名称：美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1(Photobacterium damselae phage FSN17-1)，保藏单位地址：中国·武汉·武汉大学，邮编430072。
实施例3温度及酸碱度对噬菌体的影响
取0.1mL 1×109pfu/mL纯化的噬菌体FSN17-1(实施例2提供)于30-90℃水浴分别作用30min或60min，将样品冷却后测其效价；分别取pH 3.0-12.0的蛋白胨水和1×108pfu/mL纯化噬菌体等量混合，30℃水浴作用2h后测其效价。
温度对噬菌体存活的影响如图3所示，由图3可见，噬菌体在30-60℃分别作用30min或60min后，其活性无显著变化；在70℃作用后，噬菌体效价出现了显著下降；80℃作用1h后，无噬菌体存活。
pH对噬菌体存活的影响如图4所示，由图4可见，在pH为3.0时，检测不到存活的噬菌体；在pH为4.0和11.0时，噬菌体仍存活，但效价相对较低；在pH为5.0-10.0时，其效价与初始效价无显著性差异；而当pH为12.0时，检测不到存活的噬菌体。
实施例4噬菌体的全基因组测序及耐药基因、毒力基因的分布
将实施例2提供的噬菌体按噬菌体DNA试剂盒(北京艾比根生物科技有限公司)的说明进行基因组的提取。将提取的基因组送至北京诺禾致源生物信息科技有限公司进行全基因组测序。
将所获得全基因组序列在耐药基因数据库CARD(https://card.mcmaster.ca/)数据库中进行注释，确定噬菌体FSN17-1是否携带耐药基因；将噬菌体FSN17-1的全基因组序列在毒力基因数据库VFDB(http://www.mgc.ac.cn/VFs/main.htm)中进行注释，确定噬菌体FSN17-1是否携带毒力基因。
噬菌体FSN17-1的全基因组序列如图5所示，基因组大小为82.3Kb，对其全基因组序列的分析表明，该噬菌体不携带耐药基因及毒力基因，在基因水平上是安全的，在使用过程中不会导致耐药基因及毒力基因的扩散。
实施例5噬菌体的裂解谱分析
以实施例2的提供的噬菌体FSN17-1进行此实验，将其效价调整为1×108pfu/mL备用。
试验选择27株分离自4个不同渔场的美人鱼发光杆菌，每个渔场选择6-8株菌，通过对27株美人鱼发光杆菌进行裂解实验确定噬菌体FSN17-1的裂解谱，具体操作如下：分别取100μL培养至对数期的美人鱼发光杆菌菌液，滴加在2216E固体培养基中央，用涂布棒将它们涂制成均匀的菌苔。然后将每个平板平均分成6个区域，其中3个区域，取10μL噬菌体滴加在菌苔表面，另3个区域滴加10μL生理盐水作为对照，待液滴干燥后倒置于30℃培养12h，观察结果，结果如表1所示：
表1噬菌体FSN17-1的裂解谱
注：“+”表示可形成透亮的噬菌斑；“-”表示不能形成透亮的噬菌斑。
由表1可见，噬菌体FSN17-1对27株美人鱼发光杆菌中的23株有裂解作用，可形成透明、圆形、无晕斑的噬菌斑，裂解率为85.2％，说明该噬菌体是一株宽宿主谱噬菌体，对美人鱼发光杆菌裂解效果良好。
实施例6噬菌体在培养基中的杀菌效果
取1.0mL培养至对数期的美人鱼发光杆菌NDA12，用2216E培养基将其OD600值调整为1.0(约为5.0×108CFU/mL)，分别加入实施例2提供的噬菌体FSN17-15×105PFU/mL(MOI＝0.001)、5×106PFU/mL(MOI＝0.01)、5×107PFU/mL(MOI＝0.1)和5×108PFU/mL(MOI＝1)，5×109PFU/mL(MOI＝10)和5×1010PFU/mL(MOI＝100)于37℃静置培养，同时以加入等体积的SM缓冲液作为对照组。在培养0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h和5h后分别检测OD600值的变化。
结果如图6所示，由图6可见，与SM缓冲液对照组(MOI＝0)相比，噬菌体FSN17-1不同感染比处理组的细菌增长速度均显著较低，并且在处理1.5h后，细菌总量出现下降，当MOI>0.1时，3h后美人鱼发光杆菌的数量已控制到较低值，且5h时OD600值接近于0，说明噬菌体FSN17-1在培养基中杀菌迅速且彻底。
实施例8噬菌体清除水体中的美人鱼发光杆菌
试验在容积为5L的水箱中进行，每个水箱中装入1L的海水，共设置6组水箱，其中3组为试验组，3组为对照组，每组各有3个水箱。在试验组中，预先将美人鱼发光杆菌NDA12撒入水箱，并使水箱中的美人鱼发光杆菌NDA12终浓度分别为1×105cfu/mL、1×106cfu/mL及1×107cfu/mL，随后按照MOI＝1的比例，在每组的水箱中喷洒噬菌体FSN17-1；而在对照组中，在向每组水箱中加入美人鱼发光杆菌NDA12，使其终浓度为1×105cfu/mL、1×106cfu/mL及1×107cfu/mL后，只加入与试验组中噬菌体等体积的海水，并不加入噬菌体。随后将各组水箱静置于30℃条件下，并在12h内每隔1h测定一次海水中的细菌浓度。
结果表明，使用噬菌体FSN17-1喷洒1h后，试验组各组水体中的美人鱼发光杆菌的浓度均出现了下降，使用噬菌体喷洒6h后，细菌初始浓度为1×107cfu/mL的组别，其细菌浓度下降到6.8×102cfu/mL，其余两个试验组的细菌浓度已小于100cfu/mL；而各个对照组的细菌浓度均未出现显著下降。以上结果说明噬菌体FSN17-1可有效清除水体中的美人鱼发光杆菌。
实施例8噬菌体对斑马鱼的毒性试验
选择模式动物蓝白斑斑马鱼作为试验对象，平均体长2.5cm，共36条，购自国家斑马鱼资源中心。
将斑马鱼随机分为4组，每组9条；
其中，将实施例2获得的噬菌体FSN17-1用SM缓冲液调整浓度后进行腹腔注射，实验组1-3中，噬菌体FSN17-1的注射量依次为1×108pfu/0.02mL/条、1×109pfu/0.02mL/条及1×1010pfu/0.02mL/条；
对照组腹腔注射等体积SM缓冲液。
注射后将斑马鱼置于30℃条件下饲养，观察斑马鱼的运动状态、进食情况及存活情况，试验进行6天，其中每隔2天，自每组中各取3条斑马鱼麻醉处死，取其肝脏制作病理切片并观察。
结果显示，各组斑马鱼均存活，实验组三种剂量的噬菌体对斑马鱼的运动状态、进食情况均没有影响，解剖检查未见任何异常，病理切片观察结果亦表明各组斑马鱼的脏器均属正常，与对照组组斑马鱼没有显著差异。
实施例9噬菌体对斑马鱼的治疗效果试验
选择模式动物蓝白斑斑马鱼作为试验对象，平均体长2.5cm，共110条，购自国家斑马鱼资源中心。
将斑马鱼随机分为11组，每组10条；其中5组分别腹腔注射培养至对数期的美人鱼发光杆菌NDA121×104cfu/0.02mL/条、1×105cfu/0.02mL/条、1×106cfu/0.02mL/条、1×107cfu/0.02mL/条及1×108cfu/0.02mL/条；另外5组分别腹腔注射培养至对数期的美人鱼发光杆菌NDA121×104cfu/0.02mL/条、1×105cfu/0.02mL/条、1×106cfu/0.02mL/条、1×107cfu/0.02mL/条及1×108cfu/0.02mL/条1h后，再按照MOI＝1的剂量腹腔注射用SM缓冲液稀释的噬菌体FSN17-1，剂量分别为1×104pfu/0.02mL/条、1×105pfu/0.02mL/条、1×106pfu/0.02mL/条、1×107pfu/0.02mL/条及1×108pfu/0.02mL/条；对照组腹腔注射等体积的SM缓冲液。注射后将斑马鱼置于30℃条件下饲养，每天观察斑马鱼的存活情况，试验进行6天，最后计算每组噬菌体对斑马鱼的保护率，结果如表2所示：
表2噬菌体FSN17-1对斑马鱼的治疗效果
由表2可见，在细菌攻毒剂量为1×108cfu的条件下，噬菌体的保护率为80％，其他各组噬菌体的保护率都能够达到100％，试验结果表明噬菌体FSN-17对于美人鱼发光杆菌对斑马鱼的感染具有良好的治疗效果。
实施例10噬菌体对大黄鱼的治疗效果试验
该试验在福建省宁德市的大黄鱼养殖场进行，选取6个由美人鱼发光杆菌感染造成大黄鱼死亡的渔排作为试验对象，首先记录6个渔排每天的大黄鱼死亡数量，连续记录3天(第0-2天)，从第3天开始试验；其中3个渔排(A组、B组及C组)为噬菌体FSN17-1治疗组，具体处理措施为：将美人鱼发光杆菌噬菌体与大黄鱼慢沉配合饲料(厦门嘉盛饲料有限公司)及水进行混合，混合比例为1:10:9(质量比例)，最终饲料中所含噬菌体的效价为1×108pfu/kg，随后将含有噬菌体的饲料饲喂大黄鱼，饲喂过程中采取少量多次的饲喂方式，待大黄鱼将浮在水面的饲料吃掉后再继续饲喂，减少噬菌体在水中的损失；同时作为对照的3个渔排(D组、E组及F组)，将饲料与水进行1:1混合(质量比例)，从第3天开始以同样的方式进行饲喂。连续饲喂7天，记录每天的大黄鱼死亡数量，并以第0天的死亡数量作为参考，对噬菌体的治疗效果进行评价。
结果如图7所示，A组、B组及C组经过噬菌体治疗后，大黄鱼的死亡数量出现了显著下降，而未经过噬菌体治疗的D组、E组及F组，其大黄鱼死亡数量反复波动，但未出现明显下降，说明噬菌体FSN 17-1对由美人鱼发光杆菌引起的大黄鱼感染具有较好的治疗效果。

Claims (8)

1.一株美人鱼发光杆菌噬菌体FSN17-1（Photobacterium damselae phage FSN17-1），其保藏号为CCTCC NO：M 2018393。
2.如权利要求1所述的美人鱼发光杆菌噬菌体在制备预防或治疗美人鱼发光杆菌感染的药物组合物中的应用。
3.如权利要求1所述的美人鱼发光杆菌噬菌体在制备预防或治疗美人鱼发光杆菌感染的饲料添加剂中的应用。
4.如权利要求1所述美人鱼发光杆菌噬菌体在杀灭环境及水体内美人鱼发光杆菌中的应用。
5.一种包含权利要求1所述美人鱼发光杆菌噬菌体的药物组合物。
6.一种包含权利要求1所述美人鱼发光杆菌噬菌体的饲料添加剂。
7.一种环境杀菌剂，该环境杀菌剂包括所述美人鱼发光杆菌噬菌体。
8.如权利要求7所述的环境杀菌剂，其特征在于，所述环境杀菌剂中美人鱼发光杆菌噬菌体的浓度为1×107 PFU/mL。
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