CN109632422A - 一种石蜡组织切片的制备方法 - Google Patents

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邓桦
周兆海
陈刚
梁浩钊
杨鸿�
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Abstract

本发明公开了一种石蜡组织切片的制备方法，其包括如下工艺步骤：1)制备井字型塑料档格，插固于包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成九个包埋格；2)取多个组织试样，分别依次进行固定、洗涤、脱水、透明和浸蜡处理，得组织块，备用；3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；4)将多组织蜡块置于切片中切片，得多组织切片。本发明的石蜡组织切片可使九个组织同时显示于同一切片上，且每个组织的面积远远大于组织芯片，能更广泛和更准确地观察组织结构，其制作方便快捷，临床普通实验室即可制备，大大减少石蜡组织切片的制作成本和时间，提高工作效率。

Description

一种石蜡组织切片的制备方法
技术领域
本发明涉及实验材料领域，特别涉及一种组织切片。
背景技术
在临床普通实验室中现有的常规组织切片制作方法的步骤包括取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和贴片，其存在步骤繁琐、耗时长、用药量巨大等弊端，当临床实验中制作大量组织切片时，将会耗费实验者大量的时间、精力和成本。随着组织芯片技术的出现，在很大程度上节省了实验时间。组织芯片又称组织微阵列(tissuemicroarray，TMA)，它是将数十个乃至数以千计不同来源的组织样品粘贴到同一张固相载体如玻璃片或硅片上，形成组织微阵列。而制备这种组织芯片的先决条件是大量筛选适宜的临床样本，约95％的工作量都花费在满足组织学要求和统计学意义上，同时又需要特定的组织芯片制作机。这就要求进行组织芯片制作时还需要接受复杂的组织芯片制作机使用培训过程，且组织芯片中每个组织的面积较小，无法广泛和准确地观察组织结构，完全不适合在临床普通实验室中使用。另外，临床普通实验室中现有的单组织石蜡包埋方法只能获得单组织切片，而且如果需要进行很多不同组织器官包埋时，按照现在常规的单组织石蜡包埋方法将会大大增加组织蜡块的制作成本和时间，获得的单组织蜡块在进行切片制作时，又会增加组织切片的制作成本和时间，比如会消耗更多的实验耗材，如载玻片、盖玻片、中性树胶等。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种石蜡组织切片的制备方法。
本发明所采取的技术方案是：一种石蜡组织切片的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)制备井字型塑料档格，插固于包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成九个包埋格；
2)取多个组织试样，分别依次进行固定、洗涤、脱水、透明和浸蜡处理，得组织块，备用；
3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；
4)将多组织蜡块置于切片中切片，得多组织切片。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述包埋框单元的长宽高为36mm×36mm×5mm。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的组织试样的长宽高为5mm×5mm×5mm。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的固定为采用4％的多聚甲醛固定液浸泡3～12h。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的洗涤为采用流水冲洗5～10h。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的脱水为依次采用70％、80％、95％、100％的酒精进行脱水。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的透明为采用二甲苯浸泡。
作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的浸蜡为在60℃恒温条件下采用蜡液浸泡2～4h。
本发明的有益效果是：
本发明的石蜡组织切片可使九个组织同时显示于同一切片上，且每个组织的面积远远大于组织芯片，能更广泛和更准确地观察组织结构，如可以在同一反应条件下进行免疫组化染色、原位杂交、FISH和原位PCR等以了解病变组织与相应正常组织内靶基因或蛋白质的细胞来源、分布特征和表达差异等，例如应用于对不同发育阶段，或者不同处理方法(不同组别)同一组织器官的观察，可对比性强，其制作方便快捷，临床普通实验室即可制备，大大减少石蜡组织切片的制作成本和时间，提高工作效率。
例如，在临床普通实验中5个不同组别，每个组别需要取6个小鼠的脾脏来制作组织切片，若使用现有的单组织石蜡包埋方法，则需要30(5×6)个蜡块，置于切片机上制作组织切片时将要操作30次；如果使用本方法，则只需要5(5×1)个蜡块，置于切片机上制作组织切片时只要操作5次，显而易见，这种方法极大减少了实验工作量，极大节省时间和成本等。
本发明的石蜡组织切片可有效减少实验误差，提高诊断的准确性，同时减少切片制备时间，缩短检测时间，减少人为造成的不同切片间的差异。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
实施例1
一种石蜡组织切片的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)制备井字型塑料档格，插固于长宽高为36mm×36mm×5mm的包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成长宽高为12mm×12mm×5mm的九个包埋格；
2)取多个组织试样，先采用4％的多聚甲醛固定液浸泡3h，然后采用流水冲洗10h，再依次采用70％、80％、95％、100％的酒精进行脱水，后采用二甲苯浸泡至透明，再在60℃恒温条件下采用蜡液浸泡2h，得组织块，备用；
3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；
4)将多组织蜡块置于切片中切片，得实施例1多组织切片。
免疫组织化学是以免疫学的抗原与抗体反应为原理，通过组织化学的手段定量检测抗原的分布及其数量。随着科技的进步，新的抗体的品种越来越多，如果用传统方法对每一种抗体在每一种组织做出一套系统免疫组织化学染色片，用时长、耗材多、费用高。
将实施例1多组织切片与免疫组织化学结合运用，在普通实验室中，利用实施例1多组织切片，可以同时进行多种抗原检测，实验中所有组织都在相同的条件下进行，具有实验误差小、易于对比等优点，并且省时、省力、节约开支。
实施例2
一种石蜡组织切片的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)制备井字型塑料档格，插固于长宽高为36mm×36mm×5mm的包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成长宽高为12mm×12mm×5mm的九个包埋格；
2)取多个组织试样，先采用4％的多聚甲醛固定液浸泡12h，然后采用流水冲洗5h，再依次采用70％、80％、95％、100％的酒精进行脱水，后采用二甲苯浸泡至透明，再在60℃恒温条件下采用蜡液浸泡4h，得组织块，备用；
3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；
4)将多组织蜡块置于切片中切片，得实施例2多组织切片。
原位组织学技术主要有原位杂交技术、荧光原位分子杂交技术和原位聚合酶链反应(PCR)技术。其原理是应用特定物质标记的已知探针与细胞或组织中的核酸杂交，形成杂交复合体后观察，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。
将实施例2多组织切片与原位组织学技术结合运用，在普通实验室中，利用实施例2多组织切片，可在基因水平上进行原位组织研究，了解组织细胞的基因或基因表达，具有高效、快速、可信度高等特点。
实施例3
一种石蜡组织切片的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)制备井字型塑料档格，插固于长宽高为36mm×36mm×5mm的包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成长宽高为12mm×12mm×5mm的九个包埋格；
2)取多个组织试样，先采用4％的多聚甲醛固定液浸泡8h，然后采用流水冲洗8h，再依次采用70％、80％、95％、100％的酒精进行脱水，后采用二甲苯浸泡至透明，再在60℃恒温条件下采用蜡液浸泡3h，得组织块，备用；
3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；
4)将多组织蜡块置于切片中切片，得实施例3多组织切片。
在病理学教学中，由于传统制片方法耗时、费力、费资源，而且同一组织蜡块进行连续切片时，随着切片数的增加，其蜡块上的病变特征会发生变化，特别是肿瘤与其周围组织交界的地方最为明显。这样制出来的切片，并不是每张切片上都有典型病变，这对学生的学习非常不利。对于少见病、罕见病其组织来源也难以得到保证。
将实施例3多组织切片与形态学教学结合运用，在普通实验室中，利用实施例3多组织切片，将几种典型病变组织集中在同一张切片上，学生可以进行系统观察，方便对比分析学习，也便于学生集中精力学习,提高学习效率。
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。

Claims (8)

1.一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
1)制备井字型塑料档格，插固于包埋框单元中，将包埋框单元平均分隔成九个包埋格；
2)取多个组织试样，分别依次进行固定、洗涤、脱水、透明和浸蜡处理，得组织块，备用；
3)每个包埋格中放置一个组织块并用包埋机对包埋框单元进行石蜡包埋处理，待石蜡凝固后，取出井字型塑料档格，得多组织蜡块；
4)将多组织蜡块置于切片中切片，得多组织切片。
2.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述包埋框单元的长宽高为36mm×36mm×5mm。
3.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的组织试样的长宽高为5mm×5mm×5mm。
4.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的固定为采用4％的多聚甲醛固定液浸泡3～12h。
5.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的洗涤为采用流水冲洗5～10h。
6.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的脱水为依次采用70％、80％、95％、100％的酒精进行脱水。
7.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的透明为采用二甲苯浸泡。
8.根据权利要求1所述的一种石蜡组织切片的制备方法，其特征在于：步骤2)中所述的浸蜡为在60℃恒温条件下采用蜡液浸泡2～4h。
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