CN113970472A - 组织切片方法以及用于组织切片的成型装置 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种组织切片方法及用于组织切片的成型装置,该方法首先利用带有柔性模具的成型装置和包埋剂,将多个组织块包埋在同一凝块中,然后再将凝块从柔性模具中取出,并进一步对凝块进行包埋处理,最后再进行切片,因此,本公开的方法能够同时对多个组织块进行切片,具有省时省力的优点,特别适用于大规模的药物筛选。
Description
技术领域
本公开涉及生物技术领域,具体地,涉及一种组织切片方法以及用于组织切片的成型装置。
背景技术
活性组织块能够较好地保留和反应生物个体的原始生理/病理状态,因此,活性组织块被越来越多地用于药物筛选。但是,活性组织块存在难以进行荧光标记、难以进行增殖活性和生物标志物的检测等问题,因此,在药物效果评价时通常需要将活性组织块进行切片研究。
相关技术中,通常利用包埋剂包埋组织后进行切片。然而,现有的组织切片技术中,一次仅能对单块组织进行切片,当进行大规模的药物筛选时,现有的组织切片技术存在耗时耗力的问题。
发明内容
本公开的目的是解决现有组织切片技术中存在的耗时耗力的问题,提供一种组织切片方法以及用于组织切片的成型装置。
为了实现上述目的,本公开提供一种组织切片方法,该方法包括:
a、将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,得到装载有组织培养物的第二成型装置,所述组织培养物包括组织块和培养基;其中,所述第一成型装置包括第二培养板和设置在所述第二培养板上表面的柔性模具,所述柔性模具包括底板和设置在所述底板上的边框,所述底板上设有至少一个凹孔,所述底板与所述第二培养板的上表面接触,且所述底板上的凹孔与所述第二培养板上的第二培养孔对应重合,所述组织培养物置于所述凹孔内;
b、对所述第二成型装置进行预处理,除去所述组织培养物中的培养基,得到装载有组织块的第三成型装置;
c、在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂至所述包埋剂的液面高于所述底板的上表面,并使所述包埋剂凝固,得到装载有凝块的第四成型装置,其中,所述凝块中含有至少一个所述凹孔内的组织块;
d、从所述第四成型装置中取出所述凝块,置于包埋盒内,然后在所述包埋盒内加入包埋剂,并使所述包埋剂凝固,得到包埋块;
e、对所述包埋块进行切片处理,得到组织切片。
可选地,步骤e中对所述包埋块进行切片处理时,切片方向与所述组织块在所述包埋块中的排列方向平行。
可选地,所述柔性模具由柔性材料制成;优选地,所述柔性材料包括软胶、硅胶、和TPE中的至少一种。
可选地,步骤b中所述对所述第二成型装置进行预处理,包括:
对所述第二成型装置进行甩板离心,所述甩板离心的条件包括:转速为100~2000rpm,时间为1~10min。
可选地,在所述第一成型装置中,所述柔性模具的底板的外形与所述第二培养板的外形相匹配,所述底板上的凹孔的外形和数量与所述第二培养板上的第二培养孔的外形和数量相匹配;
所述第二培养板的第二培养孔的数量不少于所述第一培养板的第一培养孔的数量。
可选地,步骤a中所述将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,包括:
将所述第一培养板的至少一个第一培养孔内的组织培养物对应转移至所述第一成型装置的至少一个凹孔内。
可选地,步骤c中,在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂时,所述包埋剂的液面高出所述底板的上表面2~30mm;
所述包埋剂包括组织冷冻包埋剂、石蜡包埋剂和塑料包埋剂中的至少一种。
可选地,该方法还包括:
步骤d中,在从所述第四成型装置中取出所述凝块后,将所述凝块切割成预设大小的子凝块,然后再将所述子凝块置于包埋盒内进行包埋处理;或者,
步骤e中,在对所述包埋块进行切片处理之前,将所述包埋块切割成预设大小的子包埋块,然后再对所述子包埋块进行切片处理。
可选地,每个所述子凝块或每个所述子包埋块中含有m×n个所述凹孔内的组织块,其中,m和n为正整数,且1≤m≤30,1≤n≤60;优选地,m=3,n=6。
本公开还提供一种用于组织切片的成型装置,该成型装置包括第二培养板和设置在所述第二培养板上表面的柔性模具,所述柔性模具包括底板和设置在所述底板上的边框,所述底板上设有至少一个凹孔,所述底板与所述第二培养板的上表面接触,且所述底板上的凹孔与所述第二培养板上的第二培养孔对应重合。
通过上述技术方案,本公开提供的组织切片方法中,首先利用带有柔性模具的成型装置和包埋剂,将多个组织块包埋在同一凝块中,然后再将凝块从柔性模具中取出,并进一步对凝块进行包埋处理,最后再进行切片,因此,本公开的方法能够同时对多个组织块进行切片,具有省时省力的优点,特别适用于大规模的药物筛选。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解,并且构成说明书的一部分,与下面的具体实施方式一起用于解释本公开,但并不构成对本公开的限制。在附图中:
图1是本公开实施例提供的成型装置的结构示意图;
图2是本公开实施例提供的柔性模具的结构示意图;
图3是本公开实施例提供的冷冻切片的染色图。
附图标记说明
1 成型装置 101 第二培养板
102 柔性模具 1011 第二培养孔
1021 底板 1022 边框
1023 凹孔
具体实施方式
以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是,此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开,并不用于限制本公开。
本公开的第一方面提供一种组织切片方法,该方法包括:a、将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,得到装载有组织培养物的第二成型装置,所述组织培养物包括组织块和培养基;其中,所述第一成型装置包括第二培养板和设置在所述第二培养板上表面的柔性模具,所述柔性模具包括底板和设置在所述底板上的边框,所述底板上设有至少一个凹孔,所述底板与所述第二培养板的上表面接触,且所述底板上的凹孔与所述第二培养板上的第二培养孔对应重合,所述组织培养物置于所述凹孔内;b、对所述第二成型装置进行预处理,除去所述组织培养物中的培养基,得到装载有组织块的第三成型装置;c、在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂至所述包埋剂的液面高于所述底板的上表面,并使所述包埋剂凝固,得到装载有凝块的第四成型装置,其中,所述凝块中含有至少一个所述凹孔内的组织块;d、从所述第四成型装置中取出所述凝块,置于包埋盒内,然后在所述包埋盒内加入包埋剂,并使所述包埋剂凝固,得到包埋块;e、对所述包埋块进行切片处理,得到组织切片。
其中,上述技术方案中使包埋剂凝固的方法可以是将成型装置或包埋盒置于冰箱等低温环境中,也可以是将成型装置或包埋盒置于干冰上,或者依据包埋剂的具体种类和特性进行凝固处理。
上述技术方案中涉及到的组织块,可以是领域内需要进行切片研究的任意组织块,例如可以包括体外培养的活组织、正常组织或肿瘤组织来源的类器官、诱导性多能干细胞来源的类器官,以及在药物筛选过程中经药物处理后的上述组织块。
上述技术方案中涉及的第一培养板和第二培养板可以是领域内常规的,例如可以是48孔培养板、96孔培养板等。
在上述技术方案中,成型装置包括柔性模具,柔性模具包括设有凹孔的底板和设置在底板上的边框,凹孔可以用于放置组织块,边框可以使包埋剂在液面高出底板上表面时不会流出,因此,利用上述成型装置可以将多个组织块包埋在同一凝块中。同时,柔性模具与第二培养板之间可分离,而且柔性模具具有柔韧性,因此可以在保持凝块完整性的前提下,很容易地从柔性模具中将凝块整块取出。取出后的凝块经包埋处理后即可进行切片。由此可见,本公开的方法能够同时对多个组织块进行切片,具有省时省力的优点,特别适用于大规模的药物筛选。
优选地,步骤e中对所述包埋块进行切片处理时,切片方向与所述组织块在所述包埋块中的排列方向平行。在上述优选情况下,切片方向与组织块在包埋块中的排列方向平行,确保一次切片能够切到凝块中的所有组织块。
根据本公开,所述柔性模具可以由柔性材料制成。所述柔性材料可以在较大的范围内选择,例如,所述柔性材料可以包括软胶、硅胶、和TPE中的至少一种。
根据本公开,步骤b中所述对所述第二成型装置进行预处理,例如可以包括:对所述第二成型装置进行甩板离心,所述甩板离心的条件包括:转速可以为100~2000rpm,时间可以为1~10min。甩板离心能够使组织培养物中的组织块沉积在凹孔的底部,便于除去组织培养物中的培养基。
可选地,在所述第一成型装置中,所述柔性模具的底板的外形与所述第二培养板的外形相匹配,所述底板上的凹孔的外形和数量与所述第二培养板上的第二培养孔的外形和数量相匹配;所述第二培养板的第二培养孔的数量不少于所述第一培养板的第一培养孔的数量。
可选地,步骤a中所述将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,例如可以包括:将所述第一培养板的至少一个第一培养孔内的组织培养物对应转移至所述第一成型装置的至少一个凹孔内。将每个第一培养孔内的组织培养物对应转移至每个凹孔中,保证能够根据组织培养物所处的凹孔的位置回溯到其在第一培养板中的位置,避免组织培养物的编号或标识在转移过程中被打乱。具体地,可以利用多通道移液器将组织培养物从第一培养板的第一培养孔中转移至成型装置的凹孔中。
优选地,步骤c中,在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂时,所述包埋剂的液面可以高出所述底板的上表面2~30mm。在该优选情况下,包埋剂凝固后形成的凝块不易破碎且厚度适宜。所述包埋剂可以包括组织冷冻包埋剂、石蜡包埋剂和塑料包埋剂中的至少一种。
根据本公开,为了适应不同研究场景的需求,步骤d中,在从所述第四成型装置中取出所述凝块后,还可以将所述凝块切割成预设大小的子凝块,然后再将所述子凝块置于包埋盒内进行包埋处理。或者,步骤e中,在对所述包埋块进行切片处理之前,可以将所述包埋块切割成预设大小的子包埋块,然后再对所述子包埋块进行切片处理。
其中,每个子凝块或者每个子包埋块的大小可以根据研究场景的需求来进行设定,例如,每个所述子凝块中可以含有m×n个所述凹孔内的组织块,其中,m和n为正整数,且1≤m≤30,1≤n≤60。示例性地,对于显微镜观察来说,由于受显微镜及载玻片大小的限制,m和n的取值可以是m=3,n=6。
本公开的第二方面提供一种用于组织切片的成型装置。图1是本公开实施例提供的成型装置的结构示意图,图2是本公开实施例提供的柔性模具的结构示意图。如图1和图2所示,该成型装置1包括第二培养板101和设置在所述第二培养板101上表面的柔性模具102,所述柔性模具102包括底板1021和设置在所述底板1021上的边框1022,所述底板1021上设有至少一个凹孔1023,所述底板1021与所述第二培养板101的上表面接触,且所述底板1021上的凹孔1023与所述第二培养板101上的第二培养孔1011对应重合。
可选地,所述柔性模具102可以由柔性材料制成。所述柔性材料可以在较大的范围内选择,例如,所述柔性材料可以包括软胶、硅胶和TPE中的至少一种。
可选地,在所述第一成型装置1中,所述柔性模具102的底板1021的外形与所述第二培养板101的外形相匹配,所述底板1021上的凹孔1023的外形和数量与所述第二培养板101上的第二培养孔1011的外形和数量相匹配;所述第二培养板101的第二培养孔1011的数量不少于所述第一培养板的第一培养孔的数量。
下面通过实施例来进一步说明本公开,但是本公开并不因此而受到任何限制。
本公开实施例中所涉及的原料、试剂、仪器和设备,如无特殊说明,均可通过购买获得。
为了便于说明,本公开实施例中以组织块为经药物处理后的活性组织块为例来进行说明。
制备实施例
本实施例用于说明经药物处理后的活性组织块的制备。
(1)活性组织块的准备
将用于药物筛选的活性组织块经细胞组织专用筛布进行筛选,得到直径为0.2μm~2μm的活性组织块。将上述筛选得到的活性组织块与相应培养基混匀,并使用多道移液器或连续分液器接种于96孔培养板中,使得每个培养孔中活性组织块和培养基的体积相等。
(2)药物对活性组织块的处理培养
在步骤(1)得到的接种有活性组织块的96孔板中加入测试药物,每孔一种药物,每种药物设置平行重复孔(重复孔的数量范围可以为1-5个),并设置未加药物的对照组(对照组可以不加任何物质,或者可以加入同药物测试孔同样体积的药物溶剂)。将上述加有测试药物的96孔板置于活性组织的培养条件下培养一定时间,得到含有经药物处理后的活性组织块的96孔板。
实施例1
本实施例用于说明本公开的组织切片方法。
(1)将硅胶模具铺在96孔板的上表面,得到第一成型装置。其中,硅胶模具的长和宽分别与96孔板的长和宽相等,硅胶模具由底板和设置在底板上的边框组成,底板上具有96个凹孔,该96个凹孔的大小和位置分别与96孔板的96个培养孔的大小和位置相匹配;边框高出底板上表面的厚度为10mm。硅胶模具铺在96孔板的上表面时,硅胶模具的96个凹孔分别与96孔板的96个培养孔重合。
(2)使用多通道移液器将制备实施例中得到的经药物处理后的活性组织块连同剩余药物和培养基一起平移至第一成型装置的凹孔中,得到装载有活性组织块的第二成型装置。
(3)将第二成型装置置于甩板离心机上进行甩板离心,离心机转速为1000rpm,离心时间为5min。离心结束后,除去培养基,得到装载有组织块的第三成型装置。
(4)在第三成型装置的各个凹孔内加入冷冻切片包埋剂OCT(购自美国Sakura公司),直至冷冻切片包埋剂的液面高于底板的上表面8mm,然后将第三成型装置置于干冰上,待OCT完全凝固形成凝块,得到装载有凝块的第四成型装置。
(5)将第四成型装置的硅胶模具和96孔板分离,然后将硅胶模具中的凝块取出,并采用微型手持切割机将凝块切割成3孔/列、3孔/行的矩形子凝块。将切割得到的子凝块置于大小适宜的包埋盒内,加入冷冻切片包埋剂OCT(购自美国Sakura公司),然后将包埋盒置于干冰上,待OCT完全凝固形成包埋块。
(6)将步骤5得到的包埋块在低温下(不高于-10℃)转移至冰冻切片机,固定于样品托上,进行冰冻切片,切片厚度为5-50μm,切片方向与成型装置底板的上表面平行。切片结束后,将切片粘附在冷冻切片通用载玻片上,低温保存。
测试实施例
本实施例用于验证本公开组织切片方法的合理性。
将实施例1中制备得到冷冻切片载玻片进行HE染色,然后置于显微镜先进行观察,结果如图3所示。
由图3可以看出,实施例1制备得到的冷冻切片中包含9个活性组织。说明本公开的方法能够同时对多个组织块进行切片。
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式,但是,本公开并不限于上述实施方式中的具体细节,在本公开的技术构思范围内,可以对本公开的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本公开的保护范围。
另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合,为了避免不必要的重复,本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外,本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合,只要其不违背本公开的思想,其同样应当视为本公开所公开的内容。
Claims (10)
1.一种组织切片方法,其特征在于,该方法包括:
a、将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,得到装载有组织培养物的第二成型装置,所述组织培养物包括组织块和培养基;其中,所述第一成型装置包括第二培养板和设置在所述第二培养板上表面的柔性模具,所述柔性模具包括底板和设置在所述底板上的边框,所述底板上设有至少一个凹孔,所述底板与所述第二培养板的上表面接触,且所述底板上的凹孔与所述第二培养板上的第二培养孔对应重合,所述组织培养物置于所述凹孔内;
b、对所述第二成型装置进行预处理,除去所述组织培养物中的培养基,得到装载有组织块的第三成型装置;
c、在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂至所述包埋剂的液面高于所述底板的上表面,并使所述包埋剂凝固,得到装载有凝块的第四成型装置,其中,所述凝块中含有至少一个所述凹孔内的组织块;
d、从所述第四成型装置中取出所述凝块,置于包埋盒内,然后在所述包埋盒内加入包埋剂,并使所述包埋剂凝固,得到包埋块;
e、对所述包埋块进行切片处理,得到组织切片。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤e中对所述包埋块进行切片处理时,切片方向与所述组织块在所述包埋块中的排列方向平行。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述柔性模具由柔性材料制成;
优选地,所述柔性材料包括软胶、硅胶和TPE中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤b中所述对所述第二成型装置进行预处理,包括:
对所述第二成型装置进行甩板离心,所述甩板离心的条件包括:转速为100~2000rpm,时间为1~10min。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述第一成型装置中,所述柔性模具的底板的外形与所述第二培养板的外形相匹配,所述底板上的凹孔的外形和数量与所述第二培养板上的第二培养孔的外形和数量相匹配;
所述第二培养板的第二培养孔的数量不少于所述第一培养板的第一培养孔的数量。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤a中所述将至少一个第一培养孔内的组织培养物从第一培养板转移至第一成型装置中,包括:
将所述第一培养板的至少一个第一培养孔内的组织培养物对应转移至所述第一成型装置的至少一个凹孔内。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤c中,在所述第三成型装置的凹孔内加入包埋剂时,所述包埋剂的液面高出所述底板的上表面2~30mm;
所述包埋剂包括组织冷冻包埋剂、石蜡包埋剂、和塑料包埋剂中的至少一种。
8.根据权利要求1~7中任意一项所述的方法,其特征在于,该方法还包括:
步骤d中,在从所述第四成型装置中取出所述凝块后,将所述凝块切割成预设大小的子凝块,然后再将所述子凝块置于包埋盒内进行包埋处理;或者,
步骤e中,在对所述包埋块进行切片处理之前,将所述包埋块切割成预设大小的子包埋块,然后再对所述子包埋块进行切片处理。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,每个所述子凝块或每个所述子包埋块中含有m×n个所述凹孔内的组织块,其中,m和n为正整数,且1≤m≤30,1≤n≤60;优选地,m=3,n=6。
10.一种用于组织切片的成型装置,其特征在于,该成型装置包括第二培养板和设置在所述第二培养板上表面的柔性模具,所述柔性模具包括底板和设置在所述底板上的边框,所述底板上设有至少一个凹孔,所述底板与所述第二培养板的上表面接触,且所述底板上的凹孔与所述第二培养板上的第二培养孔对应重合。
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