CN105021433A - 一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 - Google Patents
一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105021433A CN105021433A CN201510304481.XA CN201510304481A CN105021433A CN 105021433 A CN105021433 A CN 105021433A CN 201510304481 A CN201510304481 A CN 201510304481A CN 105021433 A CN105021433 A CN 105021433A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- root
- tip
- elymus
- dissociate
- distilled water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种披碱草属植物根尖染色体压片方法，包括以下顺序的步骤：1)取材；2)预处理；3)固定；4)保存；5)解离；6)染色；7)制片；8)镜检。通过确定关键步骤的处理液及处理时间，为披碱草属植物细胞学特征、遗传机制、遗传育种、基因定位等的深入研究提供标本奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及植物根尖染色体压片方法，特别涉及一种披碱草属植物根尖染色体压片方法。
背景技术
披碱草属(Elymus L.)是禾本科(Gramineae)小麦族(Triticeae)重要的多年生属，该属是小麦族植物中遗传和物种多样性较为丰富的类群，多数种质饲用价值高，适应性广，抗逆性强，其基因组中含有普通小麦不具有的抗逆基因，可作为改良麦类作物的基因资源库。
披碱草属牧草在我国已经广泛种植，并在发展畜牧业和建设生态环境中发挥了巨大作用。除了形态学研究，关于该属的地理分布、细胞学、分子生物学以及资源的评价与利用等方面的系统研究也十分必要，且对于了解披碱草属物种的起源，植物多样性以及遗传育种和资源合理开发等都有特别重要的意义。
有关披碱草属植物细胞学方面的研究和报道都很少，国内已有披碱草属部分植物的核型报道，而对中国披碱草属植物进行核型进化程度的研究及通过核型似近系数进行聚类分析、探讨其亲缘关系方面的研究则属空白。
染色体是基因的载体，遗传育种中可用于人工创造新物种，培育或改良植物新品种。制备染色体标本是基础，优良的染色体制片技术是进行细胞染色体观察和分析，进行染色体显带、原位杂交等的先决条件，对于进行染色体行为和细胞变异等遗传现象的分析具有重要的意义。鉴定植物的染色体数目是染色体分析的一种非常重要的分析，根尖是有丝分裂的高发区，因而成为染色体计数常用的材料。
根尖染色体压片法包括取材、预处理、固定、解离、软化、染色、压片和镜检，每一步的关键是适合的处理液和处理时间。目前，披碱草属植物尚未有这方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种披碱草属植物根尖染色体压片方法，通过确定关键步骤的处理液及处理时间，为披碱草属植物细胞学特征、遗传机制、遗传育种、基因定位等的深入研究提供标本奠定基础。
本发明的技术方案是：一种披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：
1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于22—28℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:00—9:00剪取根尖作为实验材料；
2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴加饱和对二氯苯，室温条件下处理6h；
3)固定：将经过预处理的根尖用蒸馏水清洗干净，然后放入卡诺固定液中，于室温下固定24h；
4)保存：固定后的根尖先用去蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；
5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离10—20min；
6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色20—40min；
7)制片：于染色后的材料上盖上盖玻片，吸水纸包住后，铅笔头轻敲或拇指轻压；
8)镜检：使用10倍显微镜找到所述材料的观察目标范围，然后使用40倍显微镜寻找处于分裂期的细胞，拍摄图片，然后再根据图片对染色体进行计数。
步骤4)所述的混合酶为：纤维素酶2g，加果胶酶2.5ml，再加入A+B缓冲液7.5ml制成混合酶10ml；其中A+B缓冲液为40ml 0.1mol/L柠檬酸+60ml 0.1mol/L柠檬酸钠，在4℃条件下储存，用灭菌蒸馏水稀释10倍后使用。
进一步地，所述的步骤1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:00—9:00剪取根尖作为实验材料。
进一步地，所述的步骤1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30剪取根尖作为实验材料。
进一步地，所述的步骤5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离17min。
进一步地，所述的步骤6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min。
进一步地，所述的步骤2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴入冰水混合物，最后将小瓶放入4℃冰箱中培养24h。
进一步地，所述的步骤5)解离：将固定好的根尖用双蒸水清洗3次，再放入蒸馏水浸泡20min，彻底清除根尖上残留的溶液，然后放入装有l mol/L HCl的离心管中，于室温下保持15—25min进行解离。
进一步地，所述的步骤5)解离后，需要用蒸馏水冲洗材料，放入45％醋酸处理30min，软化材料。
本发明的有益效果是：
(1)确定了披碱草属植物根尖染色体压片法根尖的最适萌发温度和最适取样时间，即筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30剪取根尖作为实验材料；这时间段取材能获得较多的细胞分裂相，有利于染色体相关的分析。
(2)确定了披碱草属植物根尖染色体压片法的最适预处理液和处理时间，即根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴加饱和对二氯苯，室温条件下处理6h；
(3)确定了披碱草属植物根尖染色体压片法的最适解离方法及解离时间，即于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离10—20min；
(4)确定了披碱草属植物根尖染色体压片法的最适软化时间，即用蒸馏水冲洗材料，放入45％醋酸处理30min；
(5)确定了披碱草属植物根尖染色体压片法最适染色液及染色时间，即蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min。
通过确定关键步骤的处理液及处理时间，提供一种披碱草属植物根尖染色体压片方法，这将为披碱草属植物细胞学特征、遗传机制、遗传育种、基因定位等的深入研究提供标本奠定基础。
附图说明
图1为本发明披碱草属植物无芒披碱草在40倍显微镜下观察到的染色体中期分裂相；
图2为本发明披碱草属植物老芒麦在40倍显微镜下观察到的染色体中期分裂相；
图3为本发明披碱草属植物披碱草在40倍显微镜下观察到的染色体中期分裂相。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。
本发明所述的混合酶为：纤维素酶2g，加果胶酶2.5ml，再加入A+B缓冲液7.5ml制成混合酶10ml；其中A+B缓冲液为40ml 0.1mol/L柠檬酸+60ml 0.1mol/L柠檬酸钠，在4℃条件下储存，用灭菌蒸馏水稀释10倍后使用。
实施例一：
一种披碱草属植物无芒披碱草根尖染色体压片方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：
1)取材：筛选无芒披碱草饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30min剪取根尖作为实验材料；
2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴加饱和对二氯苯，室温条件下处理6h；
3)固定：将经过预处理的根尖用蒸馏水清洗干净，然后放入卡诺固定液中，于室温下固定24h；
4)保存：固定后的根尖先用去蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；
5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离17min；
6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min；
7)制片：于染色后的材料上盖上盖玻片，吸水纸包住后，铅笔头轻敲或拇指轻压；
8)镜检：使用10倍显微镜找到所述材料的观察目标范围，然后使用40倍显微镜寻找处于分裂期的细胞，拍摄图片1，然后再根据图片1对染色体进行计数。
实施例二：
一种披碱草属植物老芒麦根尖染色体压片方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：
1)取材：筛选老芒麦饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30min剪取根尖作为实验材料；
2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴入冰水混合物，最后将小瓶放入4℃冰箱中培养24h；
3)固定：将经过预处理的根尖用蒸馏水清洗干净，然后放入卡诺固定液中，于室温下固定24h；
4)保存：固定后的根尖先用去蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；
5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离17min；
6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min；
7)制片：于染色后的材料上盖上盖玻片，吸水纸包住后，铅笔头轻敲或拇指轻压；
8)镜检：使用10倍显微镜找到所述材料的观察目标范围，然后使用40倍显微镜寻找处于分裂期的细胞，拍摄图片2，然后再根据图片2对染色体进行计数。
实施例三：
一种披碱草属植物披碱草根尖染色体压片方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：
1)取材：筛选披碱草饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30min剪取根尖作为实验材料；
2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴入冰水混合物，最后将小瓶放入4℃冰箱中培养24h；
3)固定：将经过预处理的根尖用蒸馏水清洗干净，然后放入卡诺固定液中，于室温下固定24h；
4)保存：固定后的根尖先用去蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；
5)解离：将固定好的根尖用双蒸水清洗3次，再放入蒸馏水浸泡20min，彻底清除根尖上残留的溶液，然后放入装有l mol/L HCl的离心管中，于室温下保持20min进行解离；解离后，需要用蒸馏水冲洗材料，放入45％醋酸处理30min，软化材料；
6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min；
7)制片：于染色后的材料上盖上盖玻片，吸水纸包住后，铅笔头轻敲或拇指轻压；
8)镜检：使用10倍显微镜找到所述材料的观察目标范围，然后使用40倍显微镜寻找处于分裂期的细胞，拍摄图片3，然后再根据图片3对染色体进行计数。
综上所述，本发明的技术方案可以充分有效的实现上述发明目的，且本发明的结构及功能原理都已经在实施例中得到充分的验证，能达到预期的功效及目的，在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对发明的实施例做出多种变更或修改。因此，本发明包括一切在专利申请范围中所提到范围内的所有替换内容，任何在本发明申请专利范围内所作的等效变化，皆属本案申请的专利范围之内。
Claims (8)
1.一种披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于包括以下顺序的步骤：
1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于22—28℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:00—9:00剪取根尖作为实验材料；
2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴加饱和对二氯苯，室温条件下处理6h；
3)固定：将经过预处理的根尖用蒸馏水清洗干净，然后放入卡诺固定液中，于室温下固定24h；
4)保存：固定后的根尖先用去蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；
5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离10—20min；
6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色20—40min；
7)制片：于染色后的材料上盖上盖玻片，吸水纸包住后，铅笔头轻敲或拇指轻压；
8)镜检：使用10倍显微镜找到所述材料的观察目标范围，然后使用40倍显微镜寻找处于分裂期的细胞，拍摄图片，然后再根据图片对染色体进行计数。
2.根据权利要求1所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:00—9:00剪取根尖作为实验材料。
3.根据权利要求2所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤1)取材：筛选植物饱满的种子，放入铺有湿滤纸的培养皿中，置于25℃的培养箱中萌发，待根部长到1.5cm时，于上午8:30剪取根尖作为实验材料。
4.根据权利要求1所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤5)解离：于2mL离心管中加入混合酶解液置于37℃水浴锅中解离17min。
5.根据权利要求1所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤6)染色：蒸馏水冲洗材料，用石炭酸品红染液染色30min。
6.根据权利要求1所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤2)预处理：根尖用清水洗净后，用刀片切取分生区部分0.5cm放入小瓶，然后向其中滴入冰水混合物，最后将小瓶放入4℃冰箱中培养24h。
7.根据权利要求1所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤5)解离：将固定好的根尖用双蒸水清洗3次，再放入蒸馏水浸泡20min，彻底清除根尖上残留的溶液，然后放入装有l mol/L HCl的离心管中，于室温下保持15—25min进行解离。
8.根据权利要求7所述的披碱草属植物根尖染色体压片方法，其特征在于：所述的步骤5)解离后，需要用蒸馏水冲洗材料，放入45％醋酸处理30min，软化材料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510304481.XA CN105021433A (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510304481.XA CN105021433A (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105021433A true CN105021433A (zh) | 2015-11-04 |
Family
ID=54411568
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510304481.XA Pending CN105021433A (zh) | 2015-06-05 | 2015-06-05 | 一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105021433A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105699141A (zh) * | 2016-02-16 | 2016-06-22 | 中国林业科学研究院热带林业研究所 | 一种桉树染色体的压片方法 |
| CN106092704A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-11-09 | 天津农学院 | 一种新疆野苹果染色体铺展的方法 |
| CN106092677A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-11-09 | 四川省农业科学院生物技术核技术研究所 | 甘薯及其近缘属植物细胞中期分裂相标本快速制备方法 |
| CN111398275A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-07-10 | 湖北和诺生物工程股份有限公司 | 一种基于发状根培养的根尖压片分析方法 |
| CN112255069A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-22 | 南京农业大学 | 一种霍山石斛根尖标本片及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101266200A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-17 | 上海交通大学 | 水稻根尖染色体制片方法 |
| CN102183394A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 沈阳农业大学 | 一种洋水仙根尖染色体制片的方法 |
| CN102564821A (zh) * | 2011-12-08 | 2012-07-11 | 北京林业大学 | 一种梅花茎尖染色体制片方法 |
| CN102589943A (zh) * | 2012-02-08 | 2012-07-18 | 河南省农业科学院 | 花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法 |
-
2015
- 2015-06-05 CN CN201510304481.XA patent/CN105021433A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101266200A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-17 | 上海交通大学 | 水稻根尖染色体制片方法 |
| CN102183394A (zh) * | 2011-03-08 | 2011-09-14 | 沈阳农业大学 | 一种洋水仙根尖染色体制片的方法 |
| CN102564821A (zh) * | 2011-12-08 | 2012-07-11 | 北京林业大学 | 一种梅花茎尖染色体制片方法 |
| CN102589943A (zh) * | 2012-02-08 | 2012-07-18 | 河南省农业科学院 | 花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王琴: "披碱草属植物核型分析及亲缘关系的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库基础科学辑》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105699141A (zh) * | 2016-02-16 | 2016-06-22 | 中国林业科学研究院热带林业研究所 | 一种桉树染色体的压片方法 |
| CN106092677A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-11-09 | 四川省农业科学院生物技术核技术研究所 | 甘薯及其近缘属植物细胞中期分裂相标本快速制备方法 |
| CN106092677B (zh) * | 2016-05-30 | 2018-10-26 | 四川省农业科学院生物技术核技术研究所 | 甘薯及其近缘属植物细胞中期分裂相标本快速制备方法 |
| CN106092704A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-11-09 | 天津农学院 | 一种新疆野苹果染色体铺展的方法 |
| CN111398275A (zh) * | 2020-03-18 | 2020-07-10 | 湖北和诺生物工程股份有限公司 | 一种基于发状根培养的根尖压片分析方法 |
| CN111398275B (zh) * | 2020-03-18 | 2023-06-09 | 湖北和诺生物工程股份有限公司 | 一种基于发状根培养的根尖压片分析方法 |
| CN112255069A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-01-22 | 南京农业大学 | 一种霍山石斛根尖标本片及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105021433A (zh) | 一种披碱草属植物根尖染色体压片方法 | |
| Finlay et al. | Estimating the growth potential of the soil protozoan community | |
| Mandáková et al. | Chromosome preparation for cytogenetic analyses in Arabidopsis | |
| CN102183394B (zh) | 一种洋水仙根尖染色体制片的方法 | |
| CN106508460B (zh) | 一种快速室内鉴定向日葵抗列当水平的方法 | |
| CN105510095B (zh) | 一种用于鉴别四倍体大燕麦、普通小麦或其杂交后代染色体数的制片方法 | |
| CN103695557A (zh) | 一种基于茎尖的银杏染色体核型分析方法 | |
| CN104297034A (zh) | 利用幼嫩子房对烟草单个植株进行染色体制片的方法 | |
| CN105230491A (zh) | 四倍体蓖麻的培育方法 | |
| Skibbe et al. | Gomphoneis tegelensis sp. nov.(Bacillariophyceae): a morphological and molecular investigation based on selected single cells | |
| Wang et al. | Histological, morpho-physiological, and biochemical changes during adventitious rooting induced by exogenous auxin in Magnolia wufengensis cuttings | |
| CN111175102A (zh) | 一种芍药属植物根尖染色体制片的方法 | |
| CN109632422A (zh) | 一种石蜡组织切片的制备方法 | |
| Shirokawa et al. | Developmental plasticity and genotype–environment interactions influence valve morphology in the Cyclotella meneghiniana species complex (Bacillariophyceae) | |
| Uradnikova | Species validity of five common northern/Arctic spring bloom diatoms: a combined morphological and molecular study | |
| Winsett et al. | Global distribution and molecular diversity of Didymium difforme | |
| Hashiguchi et al. | Lotus japonicus genetic, mutant, and germplasm resources | |
| CN104593508A (zh) | 黄瓜6号染色体探针的制备方法及应用 | |
| Li et al. | Production of triploid germplasm by inducing 2n pollen in Longan | |
| CN105238697B (zh) | 一株牡丹内生真菌及该菌生产丹皮酚的工艺 | |
| CN107699531A (zh) | 一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法 | |
| de Paula et al. | Technique to obtain mitotic chromosomes of Conyza bonariensis L. Cronquist (Asteraceae) | |
| CN110343717B (zh) | 杉木外源基因高效瞬时转化体系的建立方法 | |
| Li et al. | A set of sampling, preparation, and staining techniques for studying meiosis in cucumber | |
| CN105602886A (zh) | 一种薄荷多倍性的鉴定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151104 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |