CN109608561A - 一种蜈蚣藻多糖的提取方法 - Google Patents

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陈胜军
杨贤庆
刘欢
李来好
吴燕燕
胡晓
戚勃
李春生
邓建朝
马海霞
杨少玲
林婉玲
荣辉
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Abstract

本发明提供了一种蜈蚣藻多糖的提取方法，包括如下步骤：(1)将蜈蚣藻制成蜈蚣藻粉末；(2)将蜈蚣藻粉末加入蒸馏水中，进行超声处理结合酶解提取，再进行热水浸提，离心取上清液，得到蜈蚣藻提取液；(3)将蜈蚣藻提取液进行浓缩、醇沉、离心后取沉淀，对沉淀进行洗涤，冷冻干燥，即得成品蜈蚣藻多糖。本发明蜈蚣藻多糖的提取方法采用超声结合酶解的热水浸提方法，能够明显缩短提取时间，提高多糖提取率，从蜈蚣藻中提取多糖产品得率为51.01％～59.77％，纯度为33.73％～37.15％。

Description

一种蜈蚣藻多糖的提取方法
技术领域
本发明涉及一种蜈蚣藻多糖的提取方法。
背景技术
蜈蚣藻(Grateloupia filicina)为红藻门(Phodophyta)蜈蚣藻科(Grateloupiaceae)植物，是我国东南海域常见的大型藻类，主要生长于大干潮线附近的岩礁上或低潮带石上和石沼中，可以进行规模化的人工养殖。蜈蚣藻可供食用或制胶，也可供药用。其性咸寒，具有清热解毒驱虫之功效，可用于治疗喉炎，蛔虫病。蜈蚣藻的主要化学成分为多糖、萜类、有机酸、甾醇、溴酚、藻红蛋白、生物碱及氨基酸等。与几种常见的食用海藻相比，蜈蚣藻的蛋白质、脂肪、钙和铁含量高，而且其氨基酸组成平衡，蛋白质优质，不饱和脂肪酸中EPA含量较高，膳食纤维(可溶和不可溶性)也较一般蔬菜高，而有害元素As、Cd含量很低，有很好的利用价值及前景。
蜈蚣藻多糖，通常占到海藻干物质的50％以上，具有很高的经济价值，同时具有良好的凝胶性、稳定性、成膜性，也具有抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种生物活性。因此，在保健食品、化妆品、医药等方面有良好的市场前景。
目前，热水浸提法是常用的多糖提取方法，但是该方法提取温度高，得率低，操作费时。基于此，有必要提供一种蜈蚣藻多糖的提取方法，以缩短提取时间，提高蜈蚣藻多糖得率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蜈蚣藻多糖的提取方法，解决现有技术中蜈蚣藻多糖提取率低的问题。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种蜈蚣藻多糖的提取方法，包括如下步骤：
(1)将蜈蚣藻制成蜈蚣藻粉末；
(2)将蜈蚣藻粉末加入蒸馏水中，进行超声处理结合酶解提取，再进行热水浸提，离心取上清液，得到蜈蚣藻提取液；
(3)将蜈蚣藻提取液进行浓缩、醇沉、离心后取沉淀，对沉淀进行洗涤，冷冻干燥，即得蜈蚣藻多糖提取物。
本发明的一种实施例，蜈蚣藻粉末通过以下方法制得：将蜈蚣藻进行清洗、干燥后粉碎，再进行脱脂处理，得蜈蚣藻粉末。
进一步地，所述蜈蚣藻干燥为在40℃～55℃烘干3h～4h。
所述蜈蚣藻粉碎为将蜈蚣藻粉碎至粒径40目以上。
所述脱脂处理采用蜈蚣藻与无水乙醇质量比为1:1～1:3进行脱脂，脱脂时间为8h～15h。
所述步骤(2)中蜈蚣藻粉与水的料液比为1:30(g/mL)～1:50(g/mL)。
本发明可以做以下改进，所述步骤(2)中超声处理结合酶解提取为：在超声功率为100W～200W，温度为30℃～60℃的条件下超声处理15min～60min；加入蜈蚣藻粉与水料液总重的1％～3％的蛋白酶，在pH为6.0～8.0，温度为45℃～65℃，酶解1h～2h。
优选地，所述蛋白酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种。
本发明可以做以下改进，所述步骤(2)中热水浸提温度为80℃～100℃，时间为1h～2h。
本发明进一步改进，所述步骤(3)中浓缩为抽真空旋转蒸发浓缩至原提取液体积的1/2。
所述步骤(3)中醇沉为加入体积为浓缩后提取液体积2～3倍的乙醇溶液，在温度4℃～10℃静置12h～24h，乙醇溶液的浓度为体积分数90％～100％。
本发明的一种实施例，所述步骤(2)中离心为在5000-10000r/min的转速下，4℃～10℃离心10min～15min。
所述步骤(3)中离心为在5000-10000r/min的转速下，4℃～10℃离心10min～15min。
本发明还可做以下改进，所述步骤(3)中对沉淀进行洗涤依次用无水乙醇、丙酮洗涤沉淀。
本发明提取蜈蚣藻多糖的机理如下：超声波提取多糖主要是利用超声波空化产生的极大压力造成被破碎物细胞壁及整个生物体破裂，而且整个破裂过程在瞬间完成，有利于多糖的溶出；蜈蚣藻蛋白质含量较高，可以占到藻体干重的20％左右，酶解法提取多糖主要是利用蛋白酶对蛋白质起到水解作用，使细胞结构变得松散，有利于多糖的浸出；藻体粗脂肪含量在2％左右，脱脂处理可以起到去除脂肪和色素的作用，以提高多糖得率。
本发明具有以下有益效果：
本发明蜈蚣藻多糖的提取方法采用超声结合酶解的热水浸提方法，能够明显缩短提取时间，提高多糖提取率，从蜈蚣藻中提取多糖产品(粗产品)得率为51.01％～59.77％，纯度为33.73％～37.15％，以纯品计，得率为18.13％～21.14％。
具体实施方式
下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案，以便本领域技术人员更好理解和实施本发明的技术方案。
本发明实施例中蜈蚣藻多糖的得率和纯度的计算公式如下：
实施例1
一种蜈蚣藻多糖的提取方法，包括以下步骤：
将清洗后的蜈蚣藻晾干，40℃干燥3h；用高速粉碎机粉碎至50目，取1.0kg蜈蚣藻粉，用蜈蚣藻粉与无水乙醇质量比为1∶1进行脱脂处理8h，然后干燥处理；干燥后的蜈蚣藻粉末加水配成料液比为1:35(g/mL)的溶液，在超声功率为100W，超声温度为60℃的条件下处理45min，加入蜈蚣藻粉与水料液总重1.5％的中性蛋白酶，pH为7.0，在45℃条件下水浴1h；之后在90℃条件下浸提1.5h；将溶液在5000r/min的转速下，4℃离心10min取上清液；将上清液经抽真空旋转蒸发浓缩至原体积的1/2后，加入2.5倍体积分数95％的乙醇溶液，搅拌均匀后，4℃静置12h；将溶液在5000r/min的转速下，4℃离心10min取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤；冷冻真空干燥即得成品蜈蚣藻多糖提取物。本实施例中蜈蚣藻多糖(粗产品)得率为51.01％，按《GB 5009.7-2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定》和《GB5009.8-2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》，多糖纯度为37.15％。以纯品计，得率为18.95％。
实施例2
一种蜈蚣藻多糖的提取方法，包括以下步骤：
将清洗后的蜈蚣藻晾干，45℃干燥4h；用高速粉碎机粉碎至60目，取1.5kg蜈蚣藻粉，用蜈蚣藻粉与无水乙醇质量比为1∶2进行脱脂处理10h，然后干燥处理；干燥后的蜈蚣藻粉末加水配成料液比为1:40(g/mL)的溶液，在超声功率为150W，超声温度为45℃的条件下处理60min，加入蜈蚣藻粉与水料液总重2％的木瓜蛋白酶，pH为7.0，在50℃条件下水浴2h；之后在80℃条件下浸提2h；将溶液在7000r/min的转速下，4℃离心10min取上清液；将上清液经抽真空旋转蒸发浓缩至原体积的1/2后，加入3倍体积分数90％的乙醇溶液，搅拌均匀后，8℃静置18h；将溶液在8000r/min的转速下，8℃离心10min取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤；冷冻真空干燥即得蜈蚣藻多糖提取物。本实施例中蜈蚣藻多糖(粗产品)得率在53.77％，纯度为33.73％。以纯品计，得率为18.13％。
实施例3
一种蜈蚣藻多糖的提取方法，包括以下步骤：
将清洗后的蜈蚣藻晾干，50℃干燥3.5h；用高速粉碎机粉碎至60目，取2.0kg蜈蚣藻粉，用蜈蚣藻粉与无水乙醇质量比为1∶3进行脱脂处理，然后干燥处理15h；干燥后的蜈蚣藻粉末加水配成料液比为1:30(g/mL)的溶液，在超声功率为20W，超声温度为50℃的条件下处理30min，加入蜈蚣藻粉与水料液总重2.5％的碱性蛋白酶，pH为8.0，在60℃条件下水浴1.5h，之后在100℃条件下浸提1.5h，将溶液在8000r/min的转速下，4℃离心10min取上清液；将上清液经抽真空旋转蒸发浓缩至原体积的1/2后，加入2倍体积分数95％的乙醇溶液，搅拌均匀后，10℃静置24h；将溶液在8000r/min的转速下，10℃离心10min取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤；冷冻真空干燥即得蜈蚣藻多糖提取物。本实施例中蜈蚣藻多糖(粗产品)得率在59.77％，纯度为35.37％，以纯品计，得率为21.14％。
以上实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以上实施例。所属技术领域的普通技术人员依据以上本发明公开的内容均可实现本发明的目的，任何基于本发明构思基础上做出的改进和变形，均落入本发明的保护范围之内，具体保护范围以权利要求书记载的为准。

Claims (10)

1.一种蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将蜈蚣藻制成蜈蚣藻粉末；
(2)将蜈蚣藻粉末加入蒸馏水中，进行超声处理结合酶解提取，再进行热水浸提，离心取上清液，得到蜈蚣藻提取液；
(3)将蜈蚣藻提取液进行浓缩、醇沉、离心后取沉淀，对沉淀进行洗涤，冷冻干燥，即得成品蜈蚣藻多糖。
2.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声处理结合酶解提取为：在超声功率为100W～200W，温度为30℃～60℃的条件下超声处理15min～60min；加入蜈蚣藻粉与水料液总重1％～3％的蛋白酶，在pH为6.0～8.0，温度为45℃～65℃，酶解1h～2h。
3.根据权利要求2所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述蛋白酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种。
4.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中热水浸提温度为80℃～100℃，时间为1h～2h。
5.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中蜈蚣藻粉与水的料液重量体积比为1:30～1:50。
6.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述蜈蚣藻粉末通过以下过程制得：将蜈蚣藻进行清洗、干燥后粉碎，再进行脱脂处理，得蜈蚣藻粉末。
7.根据权利要求6所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述蜈蚣藻干燥为在40℃～55℃烘干3h～4h；所述蜈蚣藻粉碎为将蜈蚣藻粉碎至粒径40目以上；所述脱脂处理采用蜈蚣藻与无水乙醇质量比为1:1～1:3进行脱脂8h～15h。
8.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中浓缩为抽真空旋转蒸发浓缩至原提取液体积的1/2；醇沉为加入体积为浓缩后提取液体积2～3倍的乙醇溶液，在温度4℃～10℃静置12h～24h，乙醇溶液的浓度为体积分数90％～100％。
9.根据权利要求1所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中对沉淀进行洗涤依次用无水乙醇、丙酮洗涤沉淀。
10.根据权利要求1-9任一项所述的蜈蚣藻多糖的提取方法，其特征在于，所述离心为在5000-10000r/min的转速下，4℃～10℃离心10min～15min。
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