CN109608370A - 尼美舒利衍生物和制备方法及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及4种具有治疗肝脏恶性肿瘤作用的尼美舒利衍生物的制备方法。本发明将尼美舒利溶液与酸或碱性物质发生置换反应生成3种水溶性更好、更为稳定的盐，即为尼美舒利衍生物，或以对氨基苯甲腈为底物，通过一系列氧化还原反应生成第4种生物利用度更高的尼美舒利衍生物，共制备成功4种新型的尼美舒利衍生物，4种化合物均易溶于水，溶解度优于尼美舒利，有更好的吸收率及生物利用度，且在正常剂量时4种衍生物的肝脏毒性作用与尼美舒利无明显差异，仅有一种衍生物在超剂量是肝脏毒性增强。而4种衍生物与CIK细胞共培养时，对于BEL‑7402的抑制作用并不弱于甚至强于尼美舒利。4种尼美舒利衍生物可用于对人肝癌细胞抑制药物的制备。

Description

尼美舒利衍生物和制备方法及用途
技术领域
本发明涉及4种具有治疗肝脏恶性肿瘤作用的尼美舒利衍生物的制备方法。
背景技术
肝癌简称肝细胞癌，是常见的一种恶性肿瘤，近年来该病的发病率在全球范围内均有增加趋势，目前居恶性肿瘤的第5位，死亡率位居恶性肿瘤的第3位。我国是肝癌的高发国家，肝癌病例约占全球的55％，死亡率仅次于肺癌，位居第二，而在30～44岁年龄段的肝肿瘤死亡率位居各种肿瘤死亡的第一位。肝癌常见于男性，其发病率从地理分布上看，沿海高于内地，农村高于城市，从年龄组死亡曲线分布看，通常随着年龄的增长而上升。肝脏恶性肿瘤根据其来源可分为原发性和继发性两大类。原发性肝癌起源于肝脏的上皮或间叶组织，是我国高发的、危害极大的恶性肿瘤；继发性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏，较为少见。原发性肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其是一个多因素、多步骤的复杂病理过程，受环境、遗传双重因素影响。
肝癌诊断手段主要包括部分实验室检查、影像学检查及病理学检查，一旦发现可以通过多种手段尽快明确诊断。在确诊肝癌后，手术是首选的方案，也是最有效的方法，除此之外还有化学药物治疗、放射治疗、生物治疗、中医中药治疗等。
但无论是原发性肝癌还是继发性肝癌均起病隐匿，早期临床症状缺乏特异性，出现典型的临床症状和体征时一般已属中、晚期，失去了手术治疗的机会，但即使患者符合适应症完成手术，术后5年肿瘤复发转移率高达40％-70％。换言之，无论患者是否进行手术治疗，均需采用现代综合治疗方法，延长患者生存期。
目前现代综合治疗手段常限制在放、化疗和免疫治疗上，虽然的确可以获得一定的疗效，但是适应症极为有限，且这些药物均有极大的毒副作用：①传统的细胞毒性药物，如阿霉素、表阿霉素、氟尿嘧啶、顺铂和丝裂霉素等，在肝癌中的单药或传统联合用药有效率均不高，且毒副作用大，可重复性差；②利用免疫调节剂、免疫检查点阻断剂、肿瘤疫苗，这些治疗手段均有一定的抗肿瘤作用，但尚待大规模的临床研究加以验证这些治疗手段。
而且放化疗缺乏细胞特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时亦会造成正常组织细胞及免疫细胞的大量死亡，从而造成正常脏器功能损伤、免疫功能缺陷，而癌症晚期的患者身体本身的免疫能力是极差的，这些都增加了治疗过程中感染的风险，加重患者身体负荷从而较难耐受放、化疗过程，降低患者生存质量。肝癌的诊治现状仍极为严峻，寻找新的有效且安全的方案刻不容缓。
肝癌生物细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，它是运用生物技术和生物制剂分离、体外激活并回输患者自身或同种异体的肿瘤特异性或非特异性杀伤细胞的一种治疗方法。与传统的肿瘤治疗相比，该方案不仅可直接发挥抗肿瘤作用，而且可纠正机体的细胞免疫功能低下，促进宿主抗肿瘤免疫作用。过继免疫治疗的目的是恢复及增强机体免疫系统对肿瘤细胞的识别功能。以自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为主体的肿瘤过继免疫治疗已逐渐成为国内外学者关注的热点。
CIK细胞是一群由多种细胞因子(IFN-γ，IL-1，IL-2和anti-CD3)联合诱导的以CD3+和CD56+T细胞为主的异质细胞，兼具T淋巴细胞强大的杀瘤活性和NK细胞的非主要组织相容性复合物(MHC)限制性。CIK细胞可通过细胞毒性T细胞(CTL)溶细胞效应和细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用，并能消除术后微小残留病灶，防止癌细胞扩散与肿瘤复发，是一种新型的过继免疫治疗方法中的主要功能细胞。CIK增殖能力强，可在体外被诱导并大量增殖，细胞毒性作用强，具有一定的免疫特性。CIK生物细胞免疫治疗也可以在肝癌的直接治疗中发挥重要或主要作用，探索并合成可诱导CIL细胞激活或增强其活性的药物是一个引人注目的领域。而在我们的发明中，制备出的新型尼美舒利衍生物可在与CIK细胞共培养的过程中促进CIK对肝癌细胞的杀伤作用。
尼美舒利(nimesulide)系美国化学家George Moore合成的磺酰苯胺类非甾体抗炎药(non-steroidal antiinflammatory drugs，NSAIDs)。该药1974年获美国专利，1980年转让瑞士赫尔辛公司(Helsinn HealthcareSA)，1985年在意大利率先上市。目前在世界范围内近百个国家使用。尼美舒利属于环氧化酶-2(cyclooxygenase，COX-2)选择性抑制药，较少抑制COX-1，并且抑制白三烯及组胺的合成，有较大的pKa值，并具有抗氧化和自由基清除作用等，主要用于治疗慢性关节炎、手术和急性创伤后的疼痛和原发性痛经等。尼美舒利具有良好的抗炎、镇痛、解热作用，口服吸收迅速，起效快，作用强，罕见心脑血管、肾、肺及皮肤等器官和系统严重不良反应报道，胃肠耐受良好，有研究证实尼美舒利是导致上消化道出血风险最低的药物之一，但与其他NSAIDs相当，且尼美舒利的溶解度较低，这也导致其疗效的减弱。
在尼美舒利的临床应用中，偶有其造成严重肝功能损伤的案例报道，可能是因为尼美舒利干扰线粒体的呼吸链，导致线粒体内ATP衰竭，线粒体通透性改变，直接造成线粒体的肿胀和破裂。因而研制合成保留尼美舒利抗肿瘤细胞作用的同时降低其对于肝脏功能的损害的药物或许可以有效治疗肝癌。
发明内容
本发明针对上述不足，提供尼美舒利衍生物和制备方法及用途。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
尼美舒利衍生物，所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2NaO5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：330.03。
该种尼美舒利衍生物为粉末状白色固体，水溶性好，为易溶药物，溶解度(S≈1.75g/100gH2O)优于尼美舒利，用药后可获得更好的吸收和生物利用度，从而增强疗效。该衍生物正常剂量及超剂量给药时，均未发现明显的肝脏毒性。将化合物与CIK细胞共培养，检测对BEL-7402的抑制率发现该种尼美舒利衍生物对于BEL-7402的抑制作用并不弱于尼美舒利。
制备所述尼美舒利衍生物的方法，所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4-0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钠的水溶液，氢氧化钠水溶液的浓度为0.1-0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钠的摩尔比为0.8-1.1:1，将体系升温至45-55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1-1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4-6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
该制备方案简单，有极强的可行性及重复性，所需成本低廉，大大降低了患者用药的成本。制备效率高，获得的化合物纯度高。
尼美舒利衍生物，所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2KO5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：346.00。
该种尼美舒利衍生物为粉末状白色固体，水溶性好，为易溶药物，溶解度(S≈1.83g/100gH2O)优于尼美舒利及第一种我们所制备的尼美舒利衍生物，用药后可获得更好的吸收和生物利用度，从而增强疗效。该衍生物正常剂量给药时，未发现明显的肝脏毒性。将化合物与CIK细胞共培养，检测对BEL-7402的抑制率发现该种尼美舒利衍生物对于BEL-7402的抑制作用并不弱于甚至强于尼美舒利及第一种我们所制备的尼美舒利衍生物。
制备所述尼美舒利衍生物的方法，所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4-0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钾的水溶液，氢氧化钾水溶液的浓度为0.1-0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钾的摩尔比为0.8-1.1:1，将体系升温至45-55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1-1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4-6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
该制备方案简单，有极强的可行性及重复性，所需成本低廉，大大降低了患者用药的成本。制备效率高，获得的化合物纯度高。
尼美舒利衍生物，所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H14N2O3S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：278.07。
该种尼美舒利衍生物为粉末状白色固体，水溶性好，为易溶药物，溶解度优于尼美舒利，用药后可获得更好的吸收和生物利用度，增强疗效。该衍生物正常剂量及超剂量给药时，均未发现明显的肝脏毒性。将化合物与CIK细胞共培养，检测对BEL-7402的抑制率发现该种尼美舒利衍生物对于BEL-7402的抑制作用并不弱于尼美舒利。
制备所述尼美舒利衍生物的方法，所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利、锡和浓盐酸混合，浓盐酸的浓度为12mol/L，尼美舒利、锡和盐酸的摩尔比为6-7:11-12:1，在85-95℃下回流5-7h，反应完全后倾倒至冰水中，过滤出固体并用碱液将其碱性化，再用甲醇和氯仿的混合溶剂重结晶，得到浅棕色固体即为尼美舒利衍生物。
该制备方案简单，有极强的可行性及重复性，所需成本低廉，大大降低了患者用药的成本。制备效率高，获得的化合物纯度高。
尼美舒利衍生物，所述尼美舒利衍生物的分子式为：C14H11N3O5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：333.04。
该种尼美舒利衍生物为粉末状白色固体，水溶性好，为易溶药物，溶解度优于尼美舒利，用药后可获得更好的吸收和生物利用度，疗效增强。该衍生物正常剂量及超剂量给药时，均未发现明显的肝脏毒性。将化合物与CIK细胞共培养，检测对BEL-7402的抑制率发现该种尼美舒利衍生物对于BEL-7402的抑制作用并不弱于尼美舒利。
制备所述尼美舒利衍生物的方法，所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
1)中间体4-1的合成
将对氨基苯甲腈溶于蒸馏水中制成氨基苯甲腈水溶液，氨基苯甲腈水溶液的浓度0.1-0.2g/ml，向氨基苯甲腈水溶液中加入浓盐酸，浓盐酸的浓度为12mol/L，盐酸的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.02-0.03：1，室温下搅拌10-20min后转移至0℃冰浴中，将NaNO2,溶于蒸馏水中，NaNO2的浓度为0.08-0.09g/ml，NaNO2的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为1.1-1.3：1，逐滴滴入反应体系，滴加完毕后继续搅拌20-30min，向体系内投入四羟基二硼、NaOAc、蒸馏水，四羟基二硼的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2-3:1，,NaOAc的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2-3:1，蒸馏水的用量为氨基苯甲腈水溶液体积的3-4倍，0℃下搅拌1-1.5h，后转移至室温搅拌15-20min，用饱和碳酸钾水溶液调PH至8，并加入乙酸乙酯、浓度为1mol/L的山梨醇水溶液、浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液，乙酸乙酯的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为76-77:1，山梨醇的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04-0.06:1，碳酸钠的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04-0.06:1，搅拌20-25min，分液取水层，山梨醇水溶液有机相用浓度为1mol/L的山梨醇水溶液和浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液萃取一次，水层混合，用盐酸。调PH至1，用乙酸乙酯萃取4次，水洗3次，饱和食盐水洗1次，有机相用无水硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，得到黄色固体即为中间体4-1；
2)中间体4-2的合成
将2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐溶解在冰醋酸中，2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐、冰醋酸用量的摩尔比为1:1:6-7，在130-140℃下回流10-15h，冷却至室温，加入蒸馏水搅拌13-16min，蒸馏水的加入量为冰醋酸体积的1.1-1.3倍，抽滤得红棕色滤饼，将滤饼用乙醇重结晶，得到红棕色固体即为中间体4-2；
3)中间体4-3的合成
将N-oxide和二氯甲烷混合，将中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、含有N-oxide的二氯甲烷、吡啶加入反应器，所述中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、二氯甲烷、N-oxide、吡啶的质量比为1.5-1.6：1：1.2-1.3：6：32:0.3-0.4：1.4-1.5，通入O2，室温下反应70-75h，加入蒸馏水淬灭反应，将反应液滤出得到滤液，氯仿/正己烷/丙酮＝2：21：2，柱层析得到粉红色固体即为中间体4-3；
4)中间体4-4的合成
将中间体4-3溶于甲醇中，向反应体系中加入单水合肼，所述中间体4-3、甲醇、单水合肼的摩尔比3-4：1：24-25，加热回流反应10-15h，停止加热，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，向蒸干溶剂的残渣中加入质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液，质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液的用量与甲醇用量的体积比为4-5:7，拌30-35min，用氯仿萃取3次，分液后取有机层，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到浅黄色固体即为中间体4-4；
5)目标产物化合物4的合成
中间体4-4、吡啶、甲磺酰氯按照1：0.03-0.04：1的摩尔比加入反应器中，升温至85-95℃搅拌4-6h，将反应液倒入浓盐酸中，浓盐酸的浓度为12mol/L，浓盐酸的用量与吡啶用量的体积比为10:1，棕色固体析出，过滤得到固体用浓度为10％的盐酸洗2次，水洗1次，滤液用氯仿萃取3次，并将固体与滤液混合，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到黄色固体即为目标产物尼美舒利衍生物。
该制备方案区别于前3种衍生物基于尼美舒利成品上的制备方案，制备技术较前3种具有更强的创新性和独立性，整个方案中所用试剂更为基础，有更强的可行性及重复性，，制备效率高，获得的化合物纯度高。
所述尼美舒利衍生物的用途，所述尼美舒利衍生物可用于对人肝癌细胞抑制药物的制备。
经过大数据平台预测，我们自行合成并研发了尼美苏利的衍生物，其治疗肝癌有效果，因此我们使用肝癌细胞系BEL-7402与活化的cik细胞共培养在观察这类药物对肝癌细胞的杀伤力，同时还检测了这类药物的肝脏毒性，以此来探讨合成药物的疗效。
本发明采用以上技术方案，制备4种新型的尼美舒利衍生物，4种化合物均易溶于水，溶解度优于尼美舒利，有更好的吸收率及生物利用度，且在正常剂量时4种衍生物的肝脏毒性作用与尼美舒利无明显差异，仅有一种衍生物在超剂量是肝脏毒性增强。而4种衍生物与CIK细胞共培养时，对于BEL-7402的抑制作用并不弱于甚至强于尼美舒利。
总之，本发明利用新技术所制备出的4种新型尼美舒利衍生物可以在不增加药物毒副作用的基础上，促进吸收，提高生物利用率，增强对肿瘤细胞的抑制作用。
附图说明
图1是本发明第13天CIK细胞对BEL-7402的抑制率统计图；
图2是本发明第15天CIK细胞对BEL-7402的抑制率统计图；
图3是本发明第17天CIK细胞对BEL-7402的抑制率统计图；
图4是本发明CIK细胞联合NIM-K2对BEL-7402的抑制显微镜照片；
图5是本发明不同药物剂量给药12天后小鼠肝脏组织中ALT/AST含量的变化统计图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例中的尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2NaO5S；
化学结构式为：
分子量为：330.03。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钠的水溶液，氢氧化钠水溶液的浓度为0.1g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钠的摩尔比为0.8:1，将体系升温至45℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例2
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2KO5S；
化学结构式为：
分子量为：346.00。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钾的水溶液，氢氧化钾水溶液的浓度为0.1g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钾的摩尔比为0.8:1，将体系升温至45℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例3
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H14N2O3S；
化学结构式为：
分子量为：278.07。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利、锡和浓盐酸混合，浓盐酸的浓度为12mol/L，尼美舒利、锡和盐酸的摩尔比为6:11:1，在85℃下回流5h，反应完全后倾倒至冰水中，过滤出固体并用碱液将其碱性化，再用甲醇和氯仿的混合溶剂重结晶，得到浅棕色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例4
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C14H11N3O5S；
化学结构式为：
分子量为：333.04。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
1)中间体4-1的合成
将对氨基苯甲腈溶于蒸馏水中制成氨基苯甲腈水溶液，氨基苯甲腈水溶液的浓度0.1g/ml，向氨基苯甲腈水溶液中加入浓盐酸，浓盐酸的浓度为12mol/L，盐酸的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.02：1，室温下搅拌10min后转移至0℃冰浴中，将NaNO2,溶于蒸馏水中，NaNO2的浓度为0.08g/ml，NaNO2的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为1.1：1，逐滴滴入反应体系，滴加完毕后继续搅拌20min，向体系内投入四羟基二硼、NaOAc、蒸馏水，四羟基二硼的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2:1，NaOAc的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2:1，蒸馏水的用量为氨基苯甲腈水溶液体积的3倍，0℃下搅拌1h，后转移至室温搅拌15min，用饱和碳酸钾水溶液调PH至8，并加入乙酸乙酯、浓度为1mol/L的山梨醇水溶液、浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液，乙酸乙酯的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为76:1，山梨醇的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04:1，碳酸钠的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04:1，搅拌20min，分液取水层，山梨醇水溶液有机相用浓度为1mol/L的山梨醇水溶液和浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液萃取一次，水层混合，用盐酸调PH至1，用乙酸乙酯萃取4次，水洗3次，饱和食盐水洗1次，有机相用无水硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，得到黄色固体即为中间体4-1；
2)中间体4-2的合成
将2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐溶解在冰醋酸中，2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐、冰醋酸用量的摩尔比为1:1:6，在130℃下回流10h，冷却至室温，加入蒸馏水搅拌13min，蒸馏水的加入量为冰醋酸体积的1.1倍，抽滤得红棕色滤饼，将滤饼用乙醇重结晶，得到红棕色固体即为中间体4-2；
3)中间体4-3的合成
将N-oxide和二氯甲烷混合，将中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、含有N-oxide的二氯甲烷、吡啶加入反应器，所述中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、二氯甲烷、N-oxide、吡啶的质量比为1.5：1：1.2：6：32:0.3:1.4，通入O2，室温下反应70h，加入蒸馏水淬灭反应，将反应液滤出得到滤液，氯仿/正己烷/丙酮＝2：21：2，柱层析得到粉红色固体即为中间体4-3；
4)中间体4-4的合成
将中间体4-3溶于甲醇中，向反应体系中加入单水合肼，所述中间体4-3、甲醇、单水合肼的摩尔比3：1：24，加热回流反应10h，停止加热，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，向蒸干溶剂的残渣中加入质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液，质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液的用量与甲醇用量的体积比为4:7，搅拌30min，用氯仿萃取3次，分液后取有机层，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到浅黄色固体即为中间体4-4；
5)目标产物化合物4的合成
中间体4-4、吡啶、甲磺酰氯按照1：0.03：1的摩尔比加入反应器中，升温至85℃搅拌4h，将反应液倒入浓盐酸中，浓盐酸的浓度为12mol/L，浓盐酸的用量与吡啶用量的体积比为10:1，棕色固体析出，过滤得到固体用浓度为10％的盐酸洗2次，水洗1次，滤液用氯仿萃取3次，并将固体与滤液混合，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到黄色固体即为目标产物尼美舒利衍生物。
实施例5
本实施例中的尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2NaO5S；
化学结构式为：
分子量为：330.03。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钠的水溶液，氢氧化钠水溶液的浓度为0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钠的摩尔比为1.1:1，将体系升温至55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例6
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2KO5S；
化学结构式为：
分子量为：346.00。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钾的水溶液，氢氧化钾水溶液的浓度为0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钾的摩尔比为1.1:1，将体系升温至55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例7
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H14N2O3S；
化学结构式为：
分子量为：278.07。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利、锡和浓盐酸混合，浓盐酸的浓度为12mol/L，尼美舒利、锡和盐酸的摩尔比为7:12:1，在95℃下回流7h，反应完全后倾倒至冰水中，过滤出固体并用碱液将其碱性化，再用甲醇和氯仿的混合溶剂重结晶，得到浅棕色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例8
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C14H11N3O5S；
化学结构式为：
分子量为：333.04。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
1)中间体4-1的合成
将对氨基苯甲腈溶于蒸馏水中制成氨基苯甲腈水溶液，氨基苯甲腈水溶液的浓度0.2g/ml，向氨基苯甲腈水溶液中加入浓盐酸，浓盐酸的浓度为12mol/L，盐酸的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.03：1，室温下搅拌20min后转移至0℃冰浴中，将NaNO2,溶于蒸馏水中，NaNO2的浓度为0.09g/ml，NaNO2的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为1.3：1，逐滴滴入反应体系，滴加完毕后继续搅拌30min，向体系内投入四羟基二硼、NaOAc、蒸馏水，四羟基二硼的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为3:1，NaOAc的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为3:1，蒸馏水的用量为氨基苯甲腈水溶液体积的4倍，0℃下搅拌1.5h，后转移至室温搅拌20min，用饱和碳酸钾水溶液调PH至8，并加入乙酸乙酯、浓度为1mol/L的山梨醇水溶液、浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液，乙酸乙酯的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为77:1，山梨醇的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.06:1，碳酸钠的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.06:1，搅拌25min，分液取水层，山梨醇水溶液有机相用浓度为1mol/L的山梨醇水溶液和浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液萃取一次，水层混合，用盐酸调PH至1，用乙酸乙酯萃取4次，水洗3次，饱和食盐水洗1次，有机相用无水硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，得到黄色固体即为中间体4-1；
2)中间体4-2的合成
将2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐溶解在冰醋酸中，2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐、冰醋酸用量的摩尔比为1:1:7，在140℃下回流15h，冷却至室温，加入蒸馏水搅拌16min，蒸馏水的加入量为冰醋酸体积的1.3倍，抽滤得红棕色滤饼，将滤饼用乙醇重结晶，得到红棕色固体即为中间体4-2；
3)中间体4-3的合成
将N-oxide和二氯甲烷混合，将中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、含有N-oxide的二氯甲烷、吡啶加入反应器，所述中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、二氯甲烷、N-oxide、吡啶的质量比为1.6：1：1.3：6：32:0.4:1.5，通入O2，室温下反应75h，加入蒸馏水淬灭反应，将反应液滤出得到滤液，氯仿/正己烷/丙酮＝2：21：2，柱层析得到粉红色固体即为中间体4-3；
4)中间体4-4的合成
将中间体4-3溶于甲醇中，向反应体系中加入单水合肼，所述中间体4-3、甲醇、单水合肼的摩尔比4：1：25，加热回流反应15h，停止加热，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，向蒸干溶剂的残渣中加入质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液，质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液的用量与甲醇用量的体积比为5:7，搅拌35min，用氯仿萃取3次，分液后取有机层，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到浅黄色固体即为中间体4-4；
5)目标产物化合物4的合成
中间体4-4、吡啶、甲磺酰氯按照1：0.04：1的摩尔比加入反应器中，升温至95℃搅拌6h，将反应液倒入浓盐酸中，浓盐酸的浓度为12mol/L，浓盐酸的用量与吡啶用量的体积比为10:1，棕色固体析出，过滤得到固体用浓度为10％的盐酸洗2次，水洗1次，滤液用氯仿萃取3次，并将固体与滤液混合，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到黄色固体即为目标产物尼美舒利衍生物。
实施例9
本实施例中的尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2NaO5S；
化学结构式为：
分子量为：330.03。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.5g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钠的水溶液，氢氧化钠水溶液的浓度为0.15g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钠的摩尔比为0.9:1，将体系升温至50℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1.2h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用5℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例10
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2KO5S；
化学结构式为：
分子量为：346.00。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.5g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钾的水溶液，氢氧化钾水溶液的浓度为0.15g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钾的摩尔比为0.9:1，将体系升温至50℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1.2h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用5℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例11
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C13H14N2O3S；
化学结构式为：
分子量为：278.07。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利、锡和浓盐酸混合，浓盐酸的浓度为12mol/L，尼美舒利、锡和盐酸的摩尔比为6.5:11.5:1，在90℃下回流6h，反应完全后倾倒至冰水中，过滤出固体并用碱液将其碱性化，再用甲醇和氯仿的混合溶剂重结晶，得到浅棕色固体即为尼美舒利衍生物。
实施例12
本实施例尼美舒利衍生物的分子式为：C14H11N3O5S；
化学结构式为：
分子量为：333.04。
本实施例所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
1)中间体4-1的合成
将对氨基苯甲腈溶于蒸馏水中制成氨基苯甲腈水溶液，氨基苯甲腈水溶液的浓度0.15g/ml，向氨基苯甲腈水溶液中加入浓盐酸，浓盐酸的浓度为12mol/L，盐酸的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.025：1，室温下搅拌15min后转移至0℃冰浴中，将NaNO2,溶于蒸馏水中，NaNO2的浓度为0.085g/ml，NaNO2的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为1.2：1，逐滴滴入反应体系，滴加完毕后继续搅拌25min，向体系内投入四羟基二硼、NaOAc、蒸馏水，四羟基二硼的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2.5:1，NaOAc的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2.5:1，蒸馏水的用量为氨基苯甲腈水溶液体积的3.5倍，0℃下搅拌1.2h，后转移至室温搅拌17min，用饱和碳酸钾水溶液调PH至8，并加入乙酸乙酯、浓度为1mol/L的山梨醇水溶液、浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液，乙酸乙酯的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为76.5:1，山梨醇的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.05:1，碳酸钠的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.05:1，搅拌23min，分液取水层，山梨醇水溶液有机相用浓度为1mol/L的山梨醇水溶液和浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液萃取一次，水层混合，用盐酸调PH至1，用乙酸乙酯萃取4次，水洗3次，饱和食盐水洗1次，有机相用无水硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，得到黄色固体即为中间体4-1；
2)中间体4-2的合成
将2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐溶解在冰醋酸中，2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐、冰醋酸用量的摩尔比为1:1:6.5，在135℃下回流13h，冷却至室温，加入蒸馏水搅拌14min，蒸馏水的加入量为冰醋酸体积的1.2倍，抽滤得红棕色滤饼，将滤饼用乙醇重结晶，得到红棕色固体即为中间体4-2；
3)中间体4-3的合成
将N-oxide和二氯甲烷混合，将中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、含有N-oxide的二氯甲烷、吡啶加入反应器，所述中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、二氯甲烷、N-oxide、吡啶的质量比为1.55：1：1.25：6：32:0.35:1.45，通入O2，室温下反应73h，加入蒸馏水淬灭反应，将反应液滤出得到滤液，氯仿/正己烷/丙酮＝2：21：2，柱层析得到粉红色固体即为中间体4-3；
4)中间体4-4的合成
将中间体4-3溶于甲醇中，向反应体系中加入单水合肼，所述中间体4-3、甲醇、单水合肼的摩尔比3.5：1：24.5加热回流反应13h，停止加热，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，向蒸干溶剂的残渣中加入质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液，质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液的用量与甲醇用量的体积比为4.5:7，搅拌32min，用氯仿萃取3次，分液后取有机层，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到浅黄色固体即为中间体4-4；
5)目标产物化合物4的合成
中间体4-4、吡啶、甲磺酰氯按照1：0.035：1的摩尔比加入反应器中，升温至90℃搅拌5h，将反应液倒入浓盐酸中，浓盐酸的浓度为12mol/L，浓盐酸的用量与吡啶用量的体积比为10:1，棕色固体析出，过滤得到固体用浓度为10％的盐酸洗2次，水洗1次，滤液用氯仿萃取3次，并将固体与滤液混合，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到黄色固体即为目标产物尼美舒利衍生物。
上述实施例所述尼美舒利衍生物可用于对人肝癌细胞抑制药物的制备。
中间体与目标物的结构测定和解析
1H-NMR谱采用JNM-ECA-400超导NMR仪测定(TMS为内标、DMSO-d6为溶剂)测定；质谱采用API-150EX(ESI)型质谱仪测定。
1、中间体的结构测定和解析
对中间体4-1、4-2、4-3、4-4进行了1H-NMR谱的测定，以确证中间体的结构。
表1中间体的结构测定结果与解析
由上表分析结果可知：所检测的4种中间产物的化学结构式均符合一系列化学反应中理论上应生成的产物，证实了整个制备技术的可行性。2、目标化合物的结构测定和解析
表2目标化合物1H-NMR谱测定结果与解析
由上表结果可知：本项目根据之前所述的技术制备出的4种尼美舒利衍生物经1H-NMR谱检测后，其化学结构式均符合基于制备技术的理论上应生成的产物结构，验证了整个制备技术的可行性。
表3目标化合物MS谱测定结果与解析
由上表结果可知：本项目根据之前所述的技术制备出的第3、4种尼美舒利衍生物经MS谱检测后，其化学结构式均符合基于制备技术的理论上应生成的产物结构，表明了整个制备技术的可行性。
CIK细胞培养
实验材料及仪器
主要试剂：
外周血80ml：患者提供，签署知情同意书
淋巴细胞分离液(购自GE公司)
人细胞因子IFN-γ(购自上海凯茂生物医药有限公司)
抗人CD3单抗(购自ACROBiosystems)
IL-2(购自四环生物)
X-VIVO15无血清培养基(购自Lonza)
主要仪器
生物安全柜(购自Thermo)
CO2培养箱(购自Thermo)
水平低速离心机(购自Thermo)
CIK细胞培养过程
1.单个核细胞的分离
取80ml外周血,3000rmp、10min离心；收集下层血细胞，按1:2加生理盐水至45ml,吹打混均，然后鸡尾酒式的方法加入到3个盛有15ml FIcoll液的50ml离心管中,2000rmp、20min离心；弃上清，吸取白膜层单个核细胞于50ml离心管中，加生理盐水至45ml，洗涤2次，离心获得单个核细胞。
2.CIK细胞诱导
向获得的单个核细胞中加入25ml的X-VIVO15无血清培养基(已加IL-2，1000U/ml)，加入5ml的灭活血清，混匀，倒入包被好OKT3(5ug)的T225细胞培养瓶中，加人γ干扰素5万单位，摇匀，吸取0.5ml计数，检菌(不能打开盖子，针头插入即可)。将培养瓶放入培养箱(37℃，7.5％二氧化碳)。
3.CIK细胞培养补液
补液1(第2天)：细胞在包被瓶中刺激培养一天后补加5ml灭活血清，加45ml无血清培养基(已加IL-2，1000U/ml)。
补液2(第4天)：细胞在包被瓶中刺激培养96小时后，补加150ml培养基(已加IL-2，1000U/ml)，包括血清。
装袋(第5或6天)：CIK细胞在预包被瓶培养至补液250ml后一天进行。如细胞数量和状态不合格后延一天；补液至1000ml；
分袋(第八天)：1号袋分500ml，并补液，2号袋分500ml，并补液。
CIK细胞对BEL-7402杀伤实验方案
主要试剂
人肝癌细胞BEL-7402
cck-8试剂盒(日本同仁)
Thermo8道微量移液器及配套吸头
雷杜RT-6100酶标仪
实验步骤
1.靶细胞接种：实验前一天下午收集一瓶生长良好、融合度90％左右的BEL-7402细胞，吹打混匀，取样0.5ml计数，调整细胞密度，按10000个/孔，每孔100ul接种细胞。
2.CIK细胞的收集：镜下观察CIK细胞活性，分别取状态良好的第13d CIK细胞(培养箱静置培养90min以上)，轻轻翻转培养瓶，倒出悬浮的CIK细胞于一新瓶，吸取实验用量离心，计数，二倍稀释调整细胞密度至工作密度，CIK杀伤组按效靶比1:1、2:1、4:1、8:1、16:1、0杀伤孔(只接种肿瘤细胞，不加CIK，其他操作完全相同)、空白孔(不加肿瘤细胞、CIK细胞，其他操作完全相同)，每孔100ul加入CIK细胞，作用4h。
3.测试：镜下观察杀伤效果并保留图片，倾斜沿测壁轻轻吸出每孔培养基，尽量吸头不触碰孔底，用室温PBS和4度PBS各洗一遍(PBS加入后，轻轻晃动，室温放置3-5分钟，移出PBS)，吸取干净残留的PBS，镜下观察杀伤效果并保留图片，每孔加入100μl含有10％CCK-8试剂的培养基，孵育2.5h后450nm处测定其吸光度值；每隔两天(第13、15、17天)进行一次细胞杀伤实验。
4.数据处理：细胞杀伤率(％)/抑制率＝1-(实验组OD均值-空白孔/0杀伤组OD均值-空白孔)×100％，结果见图1-3。由以上结果可知，CIK细胞联合NIM-K2对BEL-7402的抑制率最高，尤其是在效靶比为32:1的时候，其显微镜照片见图4。
急性毒性实验
药物与试剂
NIM-K盐：
将1.25g NIM-K(NIM-K1和NIM-K2)盐溶于100g ddH2O中，经过搅拌0.5h以后我们可以看到黄色的悬浊液，有沉淀析出，并且继续搅拌沉淀不会重新被分解；
NIM-Na盐：
将3g NIM-Na(NIM-Na1和NIM-Na2)盐溶于100g ddH2O中，搅拌可以看到橙色的悬浊液，接近于胶体，药物扩散慢，隔夜才能析出沉淀，搅拌沉淀可重新被分解；
NIM-K1/Na1小急毒实验(预实验)
实验动物
选取5-7周清洁级BALB/c小鼠，雌雄不限，体重约为16-20g/只，每组10只小鼠，由山西医科大学实验动物中心提供，所有动物均在恒温恒湿的动物室饲养一周后进行试验。
急性毒性实验
BALB/c小鼠10只，雌雄不拘，每只小鼠经灌胃给药0.2ml上述盐溶液，排除灌胃操作造成小鼠致死和给药不准确的小鼠；2h内观察小鼠给药后活动情况。
实验过程及结果分析：
将药物浓度随机分为29组，每组六只小鼠，1-7组NIM-K1灌胃给药，8-14组NIM-K2灌胃给药，15-21组NIM-Na1灌胃给药，12-28组NIM-Na2灌胃给药，浓度分别为200mg/kg，250mg/kg，300mg/kg，350mg/kg，400mg/kg，450mg/kg，500mg/kg；第29为正常对照组即ddH2O灌胃；
中毒分为4个层次进行观察：
1.2h内未呈中毒，未致死；
2.2h内呼吸明显减少，活动明显减少，半倒状态，但有呼吸；
3.1h之前呼吸加快，活动减少，呈中毒；1.5h时四处躁动，行动失衡，站立不稳，之后致死；
4.0.5h内致死。
经过观察发现：NIM-K1的MTD＝350-500mg/kg；NIM-K1的MTD＝400-500mg/kg；
NIM-Na1和NIM-Na2的MTD＝400-500mg/kg。
接下来我们还测了各个药物的LD50.
将实验小鼠随机分为为20组，每组10只小鼠，1-5组NIM-K1灌胃给药，6-10组NIM-K2灌胃给药，11-15组NIM-Na1灌胃给药，16-20组NIM-Na2灌胃给药，浓度分别为400mg/kg，476mg/kg，566mg/kg，673mg/kg，800mg/kg；经过观察发现，NIM-K1：LD50＝519mg/kg,NIM-K2：LD50＝480mg/kg；NIM-Na1：LD50＝617mg/kg；NIM-Na2：LD50＝647mg/kg。
肝毒性实验
将实验小鼠随机分为为12组，每组10只小鼠，1-3组NIM-K1灌胃给药，4-6组NIM-K2灌胃给药，7-9组NIM-Na1灌胃给药，10-12组NIM-Na2灌胃给药，分为空白组，正常剂量组和超常剂量组，浓度分别为0mg/kg，103mg/kg，206mg/kg；一天一次，连续12天，分别在第0，3，6，9，12天分别测量每只小鼠的体重，并统计分析，结果见图5。
经过观察发现，与空白组相比，连续给药12天，NIM-Na组的ALT/AST含量几乎不变化，NIM-K2超常剂量组的ALT/AST含量提高，说明其有一定肝损伤。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.尼美舒利衍生物，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2NaO5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：330.03。
2.制备权利要求1所述尼美舒利衍生物的方法，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4-0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钠的水溶液，氢氧化钠水溶液的浓度为0.1-0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钠的摩尔比为0.8-1.1:1，将体系升温至45-55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1-1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4-6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
3.尼美舒利衍生物，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H11N2KO5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：346.00。
4.制备权利要求3所述尼美舒利衍生物的方法，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利溶于蒸馏水制成尼美舒利水溶液，尼美舒利水溶液的浓度为0.4-0.6g/ml，向尼美舒利水溶液中加入氢氧化钾的水溶液，氢氧化钾水溶液的浓度为0.1-0.2g/ml，加入的尼美舒利与氢氧化钾的摩尔比为0.8-1.1:1，将体系升温至45-55℃，不溶物完全溶解，继续搅拌1-1.5h，冷却至室温后转移至0℃冰浴，有大量黄色固体析出，用4-6℃的蒸馏水洗涤固体，常温真空干燥，得浅黄色固体即为尼美舒利衍生物。
5.尼美舒利衍生物，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的分子式为：C13H14N2O3S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：278.07。
6.制备权利要求5所述尼美舒利衍生物的方法，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
将尼美舒利、锡和浓盐酸混合，浓盐酸的浓度为12mol/L，尼美舒利、锡和盐酸的摩尔比为6-7:11-12:1，在85-95℃下回流5-7h，反应完全后倾倒至冰水中，过滤出固体并用碱液将其碱性化，再用甲醇和氯仿的混合溶剂重结晶，得到浅棕色固体即为尼美舒利衍生物。
7.尼美舒利衍生物，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的分子式为：C14H11N3O5S；
所述尼美舒利衍生物的化学结构式为：
所述尼美舒利衍生物的分子量为：333.04。
8.制备权利要求7所述尼美舒利衍生物的方法，其特征在于：
所述尼美舒利衍生物的合成路线为：
所述尼美舒利衍生物的制备步骤为：
1)中间体4-1的合成
将对氨基苯甲腈溶于蒸馏水中制成氨基苯甲腈水溶液，氨基苯甲腈水溶液的浓度0.1-0.2g/ml，向氨基苯甲腈水溶液中加入浓盐酸，浓盐酸的浓度为12mol/L，盐酸的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.02-0.03：1，室温下搅拌10-20min后转移至0℃冰浴中，将NaNO2,溶于蒸馏水中，NaNO2的浓度为0.08-0.09g/ml，NaNO2的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为1.1-1.3：1，逐滴滴入反应体系，滴加完毕后继续搅拌20-30min，向体系内投入四羟基二硼、NaOAc、蒸馏水，四羟基二硼的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2-3:1，,NaOAc的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为2-3:1，蒸馏水的用量为氨基苯甲腈水溶液体积的3-4倍，0℃下搅拌1-1.5h，后转移至室温搅拌15-20min，用饱和碳酸钾水溶液调PH至8，并加入乙酸乙酯、浓度为1mol/L的山梨醇水溶液、浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液，乙酸乙酯的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为76-77:1，山梨醇的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04-0.06:1，碳酸钠的用量与氨基苯甲腈用量的摩尔比为0.04-0.06:1，搅拌20-25min，分液取水层，山梨醇水溶液有机相用浓度为1mol/L的山梨醇水溶液和浓度为1mol/L的碳酸钠水溶液萃取一次，水层混合，用盐酸调PH至1，用乙酸乙酯萃取4次，水洗3次，饱和食盐水洗1次，有机相用无水硫酸镁干燥，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，得到黄色固体即为中间体4-1；
2)中间体4-2的合成
将2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐溶解在冰醋酸中，2-氨基-5-硝基苯酚、邻苯二甲酸酐、冰醋酸用量的摩尔比为1:1:6-7，在130-140℃下回流10-15h，冷却至室温，加入蒸馏水搅拌13-16min，蒸馏水的加入量为冰醋酸体积的1.1-1.3倍，抽滤得红棕色滤饼，将滤饼用乙醇重结晶，得到红棕色固体即为中间体4-2；
3)中间体4-3的合成
将N-oxide和二氯甲烷混合，将中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、含有N-oxide的二氯甲烷、吡啶加入反应器，所述中间体4-1、中间体4-2、乙酸铜、4A分子筛、二氯甲烷、N-oxide、吡啶的质量比为1.5-1.6：1：1.2-1.3：6：32:0.3-0.4：1.4-1.5，通入O2，室温下反应70-75h，加入蒸馏水淬灭反应，将反应液滤出得到滤液，氯仿/正己烷/丙酮＝2：21：2，柱层析得到粉红色固体即为中间体4-3；
4)中间体4-4的合成
将中间体4-3溶于甲醇中，向反应体系中加入单水合肼，所述中间体4-3、甲醇、单水合肼的摩尔比3-4：1：24-25，加热回流反应10-15h，停止加热，用旋转蒸发仪蒸除溶剂，向蒸干溶剂的残渣中加入质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液，质量百分比为10％的氢氧化钠水溶液的用量与甲醇用量的体积比为4-5:7，拌30-35min，用氯仿萃取3次，分液后取有机层，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到浅黄色固体即为中间体4-4；
5)目标产物化合物4的合成
中间体4-4、吡啶、甲磺酰氯按照1：0.03-0.04：1的摩尔比加入反应器中，升温至85-95℃搅拌4-6h，将反应液倒入浓盐酸中，浓盐酸的浓度为12mol/L，浓盐酸的用量与吡啶用量的体积比为10:1，棕色固体析出，过滤得到固体用浓度为10％的盐酸洗2次，水洗1次，滤液用氯仿萃取3次，并将固体与滤液混合，用无水硫酸钠干燥，氯仿/正己烷/丙酮＝1:8:1柱层析，得到黄色固体即为目标产物尼美舒利衍生物。
9.一种权利要求1、3、5、7任一项所述尼美舒利衍生物的用途，其特征在于：所述尼美舒利衍生物可用于对人肝癌细胞抑制药物的制备。
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