CN109535161A

CN109535161A - 三唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

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Publication number: CN109535161A
Application number: CN201811105292.XA
Authority: CN
Inventors: 陆标; 王胜蓝; 沈晓冬; 贺峰; 陶维康
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-09-22
Filing date: 2018-09-21
Publication date: 2019-03-29
Anticipated expiration: 2038-09-21
Also published as: CN109535161B

Abstract

本发明涉及三唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的三唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为A_2a受体拮抗剂的用途和在制备用于治疗通过对A_2a受体的抑制而改善的病况或病症的药物中的用途，其中通式(I)的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

三唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种通式(I)所示的三唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂，特别是作为A_2a受体拮抗剂的用途和在制备用于治疗通过对A_2a受体的抑制而改善的病况或病症的药物中的用途。

背景技术

腺苷是天然存在的嘌呤核苷，是许多生理功能的内源性调节剂。在心血管系统、中枢神经、呼吸系统、肾脏、脂肪和血小板的功能调节中发挥重要作用。

腺苷的作用由G蛋白偶联受体家族介导，目前已知至少有四种亚型的腺苷受体，分类为A₁、A_2a、A_2b和A₃。其中A₁和A₃受体抑制酶腺苷酸环化酶的活性，而A_2a和A_2b受体刺激该酶的活性，由此调节细胞中环AMP水平，通过这些受体，腺苷调节广泛的生理功能。

A_2a受体(A_2aR)在机体分布较为广泛，在中枢神经系统主要表达于纹状体，在外周、心、肝、肺、肾等组织也均有表达。数个临床前研究表明，腺苷A_2a受体拮抗剂对于治疗神经变性疾病，主要是帕金森病、亨廷顿病或阿尔茨海默病具有惊人疗效(Trends inNeurosci.2006,29(11),647-654；Expert Opinion on Therapeutic Patents,2007,17,979-991等)。而且也可以用于治疗其他中枢神经系统(CNS)相关的疾病例如抑郁、多动综合征、睡眠障碍和焦虑症(Clin.Neuropharmacol.2010,33,55-60；J.Neurosci.2010,30(48),16284-16292；Parkinsonisn Relat.Disord.2010,16(6),423-426；及其中的参考献:Mov.Disorders,2010,25(2),S305)。此外，腺苷A_2a受体拮抗剂还具有作为神经保护剂的治疗潜力(参见Jenner P.J Neuro l.2000；247Supp12:1143-50)。

近来研究表明，在缺血低氧、炎症、创伤、移植等诸多病理过程中，腺苷A_2a受体的激活可以发挥重要的免疫调节作用，这可能与A_2a受体在T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞等多种免疫细胞上表达水平较高有关。此外，A_2a受体的活化可以促使机体产生免疫耐受，密切参与了肿瘤细胞“免疫逃逸”或“免疫抑制”的形成，为肿瘤的发生发展创造了有利条件。Lokshin及其同事(Cancer Res.2006Aug1；66(15):7758-65)证实自然杀伤细胞上的A_2a受体活化可以通过升高cAMP,激活PKA抑制自然杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤。还有研究表明，激活A_2a受体的活化可以促进黑色素瘤A375细胞、成纤维瘤NIH3T3细胞及嗜铬细胞瘤PC12细胞等肿瘤细胞的增殖，其可能与T细胞上A_2a受体的活化可以抑制T细胞活化、增殖、与肿瘤细胞的黏附及对肿瘤细胞产生细胞毒性作用相关；而A_2a受体基因敲除的小鼠则可以加强CD8⁺T细胞抗肿瘤的免疫作用,显著抑制肿瘤的增殖。因此，A_2a受体拮抗剂也可用于肿瘤的治疗。

尽管对多种腺苷受体亚型具有显著生物学活性的化合物可具有治疗作用，但它们可导致不想要的副作用。例如腺苷A₁受体在组织缺血/缺氧时，在中枢、循环、消化系统和骨骼肌中，细胞在处于缺氧和低氧的应激环境时，胞外聚集的腺苷通过激活胞膜上的A₁受体启动相应的保护机制，从而增加细胞对缺氧低氧的耐受。位于免疫细胞上的A₁受体在低氧环境中能促进细胞免疫应答。另外，A₁受体还能降低游离脂肪酸和甘油三酯，参与调节血糖。因此，A₁受体的持续阻断可能会引起机体组织中各种不良反应的发生(ChinesePharmacological Bulletin,2008,24(5),573-576)。如有文献报道，在动物模型上，阻断A₁受体将会产生焦虑、觉醒等不良反应(Basic&Clinical Pharmacology&Toxicology,2011,109(3),203-7)。腺苷受体A₃(如Gessi S等人，Pharmacol.Ther.117(1),2008,123-140所述)在心肌缺血期间释放的腺苷在心脏中发挥强力的保护作用，A₃受体的持续阻断可能增加由任何预先存在的或正在发展的缺血性心脏病引起的并发症的可能性，所述缺血性心脏病诸如心绞痛或心衰。

目前，虽然已有许多化合物被开发为A_2a受体的拮抗剂用于治疗很多疾病，如WO2007116106、WO2009080197、WO2011159302、WO2011095625、WO2014101373、WO2015031221中所述。但仍有低溶解性、光敏性、低活性、低选择性和生物利用率较低等问题存在。

本发明提供一种新型三唑并嘧啶类结构的腺苷A_2a受体拮抗剂，并发现具有此类结构的化合物具有强抑制活性和高选择性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐，

其中：

环A为芳基或杂芳基；

环B选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R¹相同或不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氘代烷基、羟基、羟烷基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R²相同或不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、氘代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R³选自氢原子、氘原子、烷基和环烷基，其中所述的烷基和环烷基各自独立地任选被选自卤素、氘原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；

s为0、1、2、3或4；且

n为0、1、2、3或4。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的环A和环B相同或不同，各自独立地选自：苯基、吡啶基、吡唑基、咪唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基或苯并噻吩基，优选为苯基或吡啶基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(II)所示的化合物：

其中：

R¹～R³、s和n如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R¹选自氢原子、卤素和烷基，所述卤素优选氟原子、氯原子或溴原子，所述烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或戊基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R²选自氢原子、卤素、烷基和卤代烷基，所述卤素优选氟原子、氯原子或溴原子，所述烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或戊基，所述卤代烷基优选三氟甲基或二氟甲基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R³选自氢原子、烷基和环烷基，所述卤素优选氟原子、氯原子或溴原子，所述烷基优选甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或戊基，所述环烷基优选环丙基、环丁基、环戊基或环己基。

本发明的典型化合物包括但不限于：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式或其可药用的盐。

本发明的另一方面涉及一种通式(IA)所示的化合物，其为制备通式(I)化合物的中间体，

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，

其中：

X为卤素；

环A为芳基或杂芳基；

R³选自氢原子、氘原子、烷基和环烷基，其中所述的烷基和环烷基各自独立地任选被选自卤素、氘原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；且

n为0、1、2、3或4。

本发明的另一方面涉及一种通式(IB)所示的化合物，其为制备通式(I)化合物的中间体，

其中：

X为卤素；

环A为芳基或杂芳基；

R³选自氢原子、氘原子、烷基或环烷基，其中所述的烷基和环烷基各自独立地任选被选自卤素、氘原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；且

n为0、1、2、3或4。

本发明的典型中间体化合物包括但不限于：

本发明的另一方面涉及一种制备通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：

通式(IA)的化合物和通式(ID)的化合物在碱性条件下(优选碳酸氢钠等)发生偶联反应，得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

通式(IB)的化合物和通式(ID)的化合物在碱性条件下(优选碳酸氢钠等)发生偶联反应和Dimroth重排(优选氢氧化钠)，得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

通式(IC)的化合物在碱性条件下(优选氢氧化钠)反应，得到通式(I)的化合物，

其中：

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

本发明的另一方面涉及一种制备通式(II)所示的化合物的方法，该方法包括：

通式(IIA)的化合物和通式(IIB)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下(优选碳酸氢钠等)发生偶联反应，得到通式(II)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

R¹～R³、n和s如通式(II)中所定义。

通式(IIA)的化合物和通式(IIB)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下(优选碳酸氢钠等)发生偶联反应和Dimroth重排(优选氢氧化钠)，得到通式(II)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

R¹～R³、n和s如通式(II)中所定义。

通式(IID)的化合物在碱性条件下(优选氢氧化钠)发生Dimroth重排，得到通式(II)的化合物，

其中：

R¹～R³、n和s如通式(II)中所定义。

本发明的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备用于抑制A_2a受体的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备用于治疗通过对A_2a受体抑制而改善的病况或病症的药物中的用途。

在本发明中，通过对A_2a受体抑制而改善的病况或病症选自肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症(帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化等)、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为；优选为肿瘤。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备治疗肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症(帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化等)、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为，优选肿瘤的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

本发明还涉及一种抑制A_2a受体的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物。

本发明还涉及一种治疗通过对A_2a受体抑制而改善的病况或病症的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物。

本发明涉及一种治疗肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症(帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化等)、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为，优选肿瘤的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物。

本发明进一步涉及一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用盐或包含其的药物组合物，其用作药物。

本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用作A_2a受体拮抗剂。

本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其治疗通过对A_2a受体抑制而改善的病况或病症。

本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症(帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病或肌萎缩性侧索硬化等)、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为，优选肿瘤。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗肿瘤。

本发明中所述的肿瘤选自黑色素瘤、脑瘤、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、神经母细胞瘤、肉瘤、骨软骨瘤、骨瘤、骨肉瘤、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、子宫癌、头颈肿瘤、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、白血病、甲状腺肿瘤、输尿管肿瘤、膀胱癌、胆囊癌、胆管癌、绒毛膜上皮癌和儿科肿瘤；优选为肺癌，更优选为非小细胞肺癌和小细胞肺癌。

含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，造粒剂、崩解剂，粘合剂，和润滑剂，。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。

也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。

通过加入水可使适用于制备水混悬的可分散粉末和颗粒提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂可说明上述的例子。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。

本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。

本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

发明的详细说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，优选包含3至10个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至10个环原子，其中1-4是杂原子；更优选包含5至6个环原子；其中1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2.3.6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“芳基”是具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代。

术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。

术语“羟基”指-OH。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

本发明还包括各种氘化形式的式(I)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(I)化合物。在制备氘代形式的式(I)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

方案一

本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第一步，通式(IB)的化合物在碱性条件下，发生Dimroth重排，得到通式(IA)的化合物；

第二步，通式(IA)的化合物与通式(ID)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下发生偶联反应得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、醋酸钾、醋酸钠、氨水、叔丁醇钠或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、磷酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸铯；其中Dimroth重排反应的碱性试剂优选为氢氧化钠和氢氧化锂，偶联反应的碱性试剂优选为碳酸氢钠和碳酸氢钾。

所述的催化剂包括但不限于钯/碳、四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯、双(二亚芐基丙酮)钯、氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,1’-双(二苄基磷)二氯二戊铁钯或三(二亚苄基丙酮)二钯，优选为[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯。

上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、乙二醇二甲醚、水或N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。

方案二

通式(IB)的化合物和通式(ID)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下发生偶联反应和Dimroth重排，得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

方案三

通式(IC)的化合物在碱性条件下，发生Dimroth重排，得到通式(I)的化合物，

其中：

环A、环B、R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于正丁基锂、二异丙基氨基锂、叔丁醇钠或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯；优选为氢氧化钠和氢氧化锂。

方案四

本发明通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

通式(IIA)的化合物与通式(IIB)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下发生偶联反应得到通式(II)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

R¹～R³、n和s如通式(II)中所定义。

上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、

1,4-二氧六环、乙二醇二甲醚、水或N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。

方案五

通式(IIC)的化合物与通式(IIB)的化合物在催化剂存在下，在碱性条件下发生偶联反应和Dimroth重排，得到通式(II)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

R¹～R³、n和s如通式(II)中所定义。

方案六

通式(IID)的化合物在碱性条件下，发生Dimroth重排，得到通式(II)的化合物，

其中：

R¹～R³、n和s如通式(I)中所定义。

具体实施方式

实施例

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。

手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。

高效液相制备使用Waters 2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson-281制备型色谱仪。

手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

实施例1

8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺1

第一步

2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶1b

在氮气氛下，依次加入(1,5-环辛二烯)甲氧基铱(I)二聚体(1.0g，1.55mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(15.7g，62.1mmol)和4,4'-二叔丁基-2,2'-二吡啶(0.83g，3.1mmol)溶解于100mL正己烷中，加热至50℃，搅拌反应10分钟，加入2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶1a(5g，31mmol，采用公知的方法“Chemical andPharmaceutical Bulletin,1990,38(9),2446-2458”制备而得)，继续搅拌反应4小时。停止反应，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题化合物1b(6g，产率：67.4％)。

MS m/z(ESI):288.1[M+1]

第二步

4-氯-6-苯基嘧啶-2-胺1e

在氮气氛下，依次将4,6-二氯嘧啶-2-胺1c(4g，24.39mmol，采用公知的方法“Organic Letters,2009,11(1),61-64”制备而得)、苯硼酸1d(2.97g，24.39mmol，采用公知的方法“Journal of Organic Chemistry,2008,73(5),1898-1905”制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(1.79g，2.44mmol)和碳酸钾(13.49g，97.57mmol)加入到125mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝4/1)的混合溶剂中，搅拌反应1小时。停止反应，加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物1e(1.51g，产率：30.1％)。MS m/z(ESI):206.4[M+1]

第三步

4-氯-5-碘-6-苯基嘧啶-2-胺1f

将化合物1e(1.51g，7.34mmol)溶于30mL乙酸中，0℃条件下，加入N-碘代丁二酰亚胺(1.82g，8.08mmol)，搅拌反应17小时。停止反应，反应液用碳酸氢钠饱和溶液调节pH大于7，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物1f(1.59g，产率：65.5％)。MS m/z(ESI):332.2[M+1]

第四步

4-氯-5-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-6-苯基嘧啶-2-胺1g

在氮气氛下，依次将化合物1f(1.59g，4.81mmol)、化合物1b(1.38g，4.81mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(352mg，0.48mmol)和碳酸钾(1.99g，14.42mmol)溶解于95mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，80℃条件下，搅拌反应3小时。停止反应，反应液过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物1g(1.3g，产率：74.3％)。

MS m/z(ESI):365.4[M+1]

第五步

4-肼基-5-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-6-苯基嘧啶-2-胺1h

依次将化合物1g(1.3g，3.57mmol)和85％水合肼(2.1g，35.71mmol)溶于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应1小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，残余物中加入100mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，有机相依次用水(100mL×1)、饱和氯化钠溶液(100mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，得粗品标题化合物1h(1.20g)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):361.4[M+1]

第六步

8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺1i

将粗品化合物1h(800mg，2.22mmol)加入到8.0mL原甲酸三乙酯中，140℃条件下，搅拌反应15分钟。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用高效液相色谱法纯化，得标题化合物1i(308mg，产率：37.5％)。

MS m/z(ESI):371.4[M+1]

第七步

将化合物1i(40mg，0.11mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(22mg，0.55mmol),100℃条件下，搅拌0.5小时，补加氢氧化钠(48mg，1.2mmol),100℃条件下，搅拌0.5小时，再补加氢氧化钠(50mg，1.25mmol),100℃条件下，搅拌0.5小时。停止反应，加入8mL乙酸乙酯，分液，有机相用无水硫酸钠干燥0.5小时，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层层析以展开剂体系A纯化，得标题化合物1(26mg，产率：65％)。

MS m/z(ESI):371.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.57(s,1H),8.37(brs,2H),7.54(s,1H),7.44(s,1H),7.38-7.34(m,5H),2.47(s,3H)。

实施例2

8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺2

第一步

5-溴-4-氯-6-苯基嘧啶-2-胺2a

将化合物1e(13g，7.34mmol)溶于300mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-溴代丁二酰亚胺(12.38g，69.54mmol)，搅拌反应1小时。停止反应，反应液倒入1L水中，搅拌20分钟，过滤，干燥滤饼，得粗品标题化合物2a(18g)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):285.9[M+1]

第二步

5-溴-4-肼基-6-苯基嘧啶-2-胺2b

将粗品化合物2a(17.99g，63.21mmol)溶于120mL乙醇中，加入50mL 85％水合肼，搅拌反应17小时。停止反应，反应液过滤，滤饼依次用乙醇(30mL×2)、正己烷(30mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物2b(12.26g，产率：69.2％)。

MS m/z(ESI):280.3[M+1]

第三步

8-溴-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺2c

将化合物2b(3g，10.71mmol)和原甲酸三乙酯(3.17g，21.42mmol)溶解于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用15mL乙醇打浆0.5小时，过滤，滤饼用无水乙醚(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物2c(2.67g，产率：85.93％)。

MS m/z(ESI):290.0[M+1]

第四步

8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺2e

在氮气氛下，依次加入化合物2c(120mg，0.414mmol)、2,6-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶2d(125mg，0.538mmol，采用公知的方法“Organicand Biomolecular Chemistry,2014,12(37),7318-7327”制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(30mg，0.041mmol)和碳酸钾(172mg，1.24mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌2小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物2e(20mg，产率：15.28％)。

MS m/z(ESI):317.4[M+1]

第五步

8-(2,6-二甲基吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺2

将化合物2e(10mg，0.032mmol)溶解于1.3mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝3/1)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(6mg，0.158mmol),100℃条件下，搅拌4小时。停止反应，反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯(30mL×4)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，所得残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系A纯化，得标题化合物2(5.8mg，产率：58％)。

MS m/z(ESI):371.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.50(s,1H),8.18(brs,2H),7.34-7.32(m,5H),6.92(s,2H),2.30(s,6H)。

实施例3

2-乙基-8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺3

第一步

8-溴-3-乙基-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺3a

将化合物2b(500mg，1.78mmol)和原丙酸(三)乙酯(378mg，2.14mmol)溶解于20mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL无水乙醚打浆0.5小时，过滤，干燥滤饼，得标题化合物3a(495mg，产率：87.16％)。

MS m/z(ESI):318.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物3a(150mg，0.471mmol)、化合物1b(189mg，0.66mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(35mg，0.047mmol)和碳酸钾(195mg，1.41mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌2小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物3(29.7mg，产率：15.81％)。

MS m/z(ESI):399.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(brs,2H),7.54(s,1H),7.39-7.32(m,6H),2.85-2.83(m,2H),2.46(s,3H),1.33-1.29(m,3H)。

实施例4

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺4

第一步

2-氯-6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶4b

在氮气氛下，依次将2-氯-6-甲基吡啶4a(5g，39.19mmol，采用公知的方法“Journal of Chemical Research-Part S,1996,4,194-195”制备而得)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(10.95g，43.11mmol)、(1,5-环辛二烯)甲氧基铱(I)二聚体(779mg，1.18mmol)和4,4'-二叔丁基-2,2'-二吡啶(631mg，2.35mmol)溶解于125mL正己烷中，加热至80℃，搅拌17小时。停止反应，冷却至室温，减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题化合物4b(4.9g，产率：49.31％)。

MS m/z(ESI):254.4[M+1]

第二步

4-氯-6-(4-氟苯基)嘧啶-2-胺4e

在氩气氛下，依次将4,6-二氯嘧啶-2-胺4c(10g，60.98mmol,采用公知的方法“Organic Letters,2009,11(1),61-64”制备而得)、(4-氟苯基)硼酸4d(8.53g，60.98mmol,采用专利申请“US5312975A1”公开的方法制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(4.46g，6.10mmol)和碳酸钾(16.83g，121.96mmol)溶解于250mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝4:1)的混合溶剂中，加热至60℃，搅拌3小时。停止反应，加入300mL水，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物4e(11.0g，产率：76.0％)。

MS m/z(ESI):224.3[M+1]

第三步

5-溴-4-氯-6-(4-氟苯基)嘧啶-2-胺4f

将化合物4e(11.0g，49.19mmol)溶于100mL N,N-二甲基甲酰胺中，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(8.75g，49.19mmol)，搅拌1小时。反应液中加入400mL水，用乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并有机相，有机相依次用水(100mL×3)和饱和氯化钠溶液(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，得粗品标题化合物4f(6.0g)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):301.9[M+1]

第四步

5-溴-4-(4-氟苯基)-6-肼基嘧啶-2-胺4g

依次将粗品化合物4f(5.5g，18.18mmol)和10mL 85％水合肼溶于20mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，搅拌反应0.5小时。过滤，滤饼依次用乙醇(3mL×2)和乙醚(3mL×2)洗涤，收集滤饼，滤饼干燥，得粗品标题化合物4g(4.4g,产率：81.2％)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):298.1[M+1]

第五步

8-溴-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺4h

依次将粗品化合物4g(500mg,1.68mmol)和原甲酸三乙酯(497mg，3.35mmol)加入20mL乙醇中，回流3小时。冷却，过滤，滤饼2mL乙醇洗涤一次，得标题化合物4h(460mg，产率：80.1％)。

MS m/z(ESI):307.9[M+1]

第六步

8-溴-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺4i

将化合物4h(300mg，0.97mmol)悬浮于10mL 1,4-二氧六环中，加入2mL 10％氢氧化钠溶液中，80℃反应1小时。冷却，加入20mL水，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物4i(240mg，产率：80.0％)。

MS m/z(ESI):307.9[M+1]

第七步

在氩气氛下，依次将化合物4i(470mg,1.53mmol)、化合物4b(464mg,1.83mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(223mg，0.31mmol)和碳酸钾(384mg，4.58mmol)溶解于20mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝4:1)的混合溶剂中，加热至90℃，搅拌3小时。停止反应，反应液中加入50mL水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，有机相减压浓缩，残余物用高效液相色制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物4(105mg，产率：19.4％)。

MS m/z(ESI):355.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.53(s,1H),8.40(brs,2H),7.38-7.42(m,2H),7.16-7.21(m,4H),2.35(s,3H)。

实施例5

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-2-乙基-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺5

第一步

8-溴-2-乙基-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺5a

将化合物4g(4.0g，13.42mmol)加入20mL的乙醇中，加入原丙酸三乙酯(3.55g，20.13mmol)，加热至回流，搅拌反应3小时。停止反应，冷却至室温，过滤，滤饼依次用乙醇(5mL)和乙醚(5mL×2)洗涤，收集滤饼，滤饼干燥，得标题化合物5a(4.0g，产率：88.7％)。

MS m/z(ESI):336.1[M+1]

第二步

在氩气氛下，依次将化合物5a(1.90g，5.65mmol)、化合物4b(2.15g，8.48mmol)、[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(0.83g，1.13mmol)和碳酸钾(1.56g，11.30mmol)溶解于40mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝4:1)的混合溶剂中，加热至90℃，搅拌3小时。停止反应，反应液中加入50mL水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物5(490mg，产率：22.6％)。

MS m/z(ESI):383.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.18(brs,2H),7.36-7.40(m,2H),7.15-7.20(m,3H),7.12(s,1H),2.83(q,2H),2.35(s,3H),1.30(t,3H)。

实施例6

8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-2-丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺6

第一步

8-溴-7-苯基-3-丙基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺6a

将化合物2b(500mg，1.78mmol)和原丁酸(三)乙酯(406mg，2.14mmol)溶解于20mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL无水乙醚打浆0.5小时，过滤，干燥滤饼，得标题化合物6a(580mg，产率：98.09％)。

MS m/z(ESI):332.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物6a(150mg，0.433mmol)、化合物1b(181mg，0.632mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(33mg，0.045mmol)和碳酸钾(187mg，1.35mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应2小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物6(30.5mg，产率：16.38％)。

MS m/z(ESI):413.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.24(brs,2H),7.53(s,1H),7.40-7.32(m,6H),2.81-2.78(m,2H),2.46(s,3H),1.80-1.74(m,2H),0.98-0.94(m,3H)。

实施例7

7-(4-氟苯基)-8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺7

在氮气氛下，依次加入化合物4h(170mg，0.55mmol)、化合物1b(206mg，0.72mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(80mg，0.11mmol)和碳酸钾(139mg，1.66mmol)溶解于10mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌2小时，加入1mL10％氢氧化钠溶液，继续搅拌1小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物7(75.1mg，产率：35.1％)。

MS m/z(ESI):389.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.56(s,1H),8.38(brs,2H),7.53(s,1H),7.45(s,1H),7.39-7.41(m,2H),7.16-7.21(m,2H),2.47(s,3H)。

实施例8

2-丁基-8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺8

第一步

8-溴-3-丁基-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺8a

将化合物2b(500mg，1.78mmol)和原戊酸(三)乙酯(459mg，2.14mmol)溶解于20mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL无水乙醚打浆0.5小时，过滤，干燥滤饼，得标题化合物8a(518mg，产率：84.05％)。

MS m/z(ESI):346.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物8a(150mg，0.433mmol)、化合物1b(174mg，0.606mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(32mg，0.043mmol)和碳酸钾(180mg，1.30mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应2小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物8(29.9mg，产率：16.18％)。

MS m/z(ESI):427.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.26-8.18(m,2H),7.52(s,1H),7.40-7.32(m,6H),2.84-2.80(m,2H),2.46(s,3H),1.75-1.71(m,2H),1.41-1.35(m,2H),0.93-0.89(m,3H)。

实施例9

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-7-(4-氟苯基)-2-丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺9

第一步

8-溴-7-(4-氟苯基)-3-丙基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺9a

将化合物4g(500mg，1.68mmol)加入15mL的乙醇中，加入原丁酸三乙酯(638mg,3.35mmol)，加热至回流，搅拌反应3小时。停止反应，冷却至室温，过滤，滤饼依次用乙醇(3mL)和乙醚(5mL×3)洗涤，收集滤饼，滤饼干燥，得标题化合物9a(470mg，产率：80.1％)。

MS m/z(ESI):350.2[M+1]

第二步

8-溴-7-(4-氟苯基)-2-丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺9b

将化合物9a(320mg，0.91mmol)悬浮于10mL 1,4-二氧六环和2mL 10％氢氧化钠中，80℃反应1小时。冷却，加入20mL水，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物9b(250mg,产率：78.1％)。

MS m/z(ESI):350.2[M+1]

第三步

在氮气氛下，依次加入化合物9b(250mg，0.71mmol)、化合物4h(235mg，0.93mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(104mg，0.14mmol)和碳酸氢钠(180mg，0.93mmol)溶解于10mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌2小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物9(60mg，产率：21.1％)。

MS m/z(ESI):397.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.19(brs,2H),7.36-7.39(m,2H),7.16-7.20(m,3H),7.12(s,1H),2.78(t,2H),2.35(s,3H),1.73-1.79(m,2H),0.95(t,3H)。

实施例10

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺10

第一步

4-氯-6-(2,4-二氟苯基)嘧啶-2-胺10d

在氮气氛下，依次将化合物1c(11g，63.72mmol)、(2,4-二氟苯基)硼酸10c(10.06g，63.72mmol，采用专利申请“US5312975A1”公开的方法制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(4.66g，6.37mmol)和碳酸钾(26.42g，191.17mmol)溶解于500mL1,4-二氧六环和水(V/V＝4/1)的混合溶剂中，搅拌反应2小时。停止反应，反应液过滤，滤液分液，水相用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并所有有机相，减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得标题化合物10d(14.04g，产率：91.19％)。

MS m/z(ESI):242.3[M+1]

第二步

5-溴-4-氯-6-(2,4-二氟苯基)嘧啶-2-胺10e

将化合物10d(14.04g，58.11mmol)溶于300mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-溴代丁二酰亚胺(11.38g，63.92mmol)，搅拌反应1小时。停止反应，反应液倒入1L水中，搅拌30分钟，过滤，干燥滤饼，得粗品标题化合物10e(16g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):320.0[M+1]

第三步

5-溴-4-(2,4-二氟苯基)-6-肼基嘧啶-2-胺10f

将粗品化合物10e(16g，49.92mmol)溶于250mL乙醇中，加入50mL 85％水合肼，搅拌反应17小时。停止反应，反应液过滤，滤饼依次用乙醇(20mL×2)、正己烷(20mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物10f(12g，产率：76.05％)。

MS m/z(ESI):316.0[M+1]

第四步

8-溴-7-(2,4-二氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺10g

将化合物10f(4g，12.65mmol)和原甲酸三乙酯(2.25g，15.18mmol)溶解于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL乙醇打浆0.5小时，过滤，滤饼用无水乙醚(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物10g(3.85g，产率：93.37％)。

MS m/z(ESI):326.2[M+1]

第五步

在氮气氛下，依次加入化合物10g(200mg，0.613mmol)、化合物4b(187mg，0.736mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(45mg，0.061mmol)和碳酸钾(255mg，1.84mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应2小时，加入氢氧化钠(200mg，5mmol)，100℃条件下，搅拌反应3小时。停止反应，反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物10(20.1mg，产率：8.79％)。

MS m/z(ESI):373.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.59(s,1H),8.43(brs,2H),7.59-7.57(m,1H),7.26-7.13(m,4H),2.35(s,3H)。

实施例11

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-2-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺11

第一步

8-溴-7-(2,4-二氟苯基)-3-乙基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺11a

将化合物10f(3.3g，10.44mmol)和原丙酸(三)乙酯(2.21g，12.53mmol)溶解于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应2小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用5mL无水乙醚打浆0.5小时，过滤，滤饼用无水乙醚(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物11a(1.2g，产率：32.46％)。

MS m/z(ESI):354.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物11a(120mg，0.339mmol)、化合物4b(112mg，0.44mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(25mg，0.034mmol)和碳酸钾(141mg，1.02mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应2小时，升温至100℃，搅拌反应3小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物11(23.1mg，产率：17.01％)。

MS m/z(ESI):401.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.29(brs,2H),7.58-7.52(m,1H),7.25-7.18(m,2H),7.12-7.11(m,2H),2.88-2.83(m,2H),2.35(s,3H),1.33-1.29(m,3H)。

实施例12

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-2-环丙基-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺12

第一步

8-溴-3-环丙基-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺12b

将化合物2b(2g，7.14mmol)和环丙烷甲酰亚氨酸乙酯盐酸盐12a(2.14g，14.28mmol，采用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2011,21(19),5849-5853”制备而得)和乙酸钠(2.93g，35.70mmol)溶解于80mL乙醇中，60℃下，搅拌反应17小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用70mL乙醇、正己烷和水(V/V/V＝1/1/10)的混合溶剂打浆0.5小时，过滤，滤饼用正己烷(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物12b(645mg，产率：27.36％)。MS m/z(ESI):330.4[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物12b(340mg，1.03mmol)、化合物4b(392mg，1.54mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(75mg，0.103mmol)和碳酸钾(427mg，3.09mmol)溶解于12mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应17小时。停止反应，反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物12(7.8mg，产率：2.01％)。

MS m/z(ESI):377.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13(brs,2H),7.35-7.29(m,5H),7.13-7.08(m,2H),2.33(s,3H),2.20-2.14(m,1H),1.04-0.98(m,4H)。

实施例13

7-(2,4-二氟苯基)-8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺13

在氮气氛下，依次将化合物10g(200mg，0.61mmol)、化合物1b(229mg，0.79mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(90mg，0.12mmol)和碳酸氢钠(154mg，1.84mmol)溶解于10mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌2小时，加入2mL 10％氢氧化钠溶液，继续反应1小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物13(75mg，产率：31.0％)。

MS m/z(ESI):407.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.61(s,1H),8.47(brs,2H),7.59-7.61(m,1H),7.51(s,1H),7.44(s,1H),7.20-7.24(m,2H),2.47(s,3H)。

实施例14

2-甲基-8-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7-苯基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺14

第一步

8-溴-3-甲基-7-苯基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺14a

将化合物2b(300mg，1.07mmol)和原乙酸三乙酯(393μL，2.14mmol)溶解于15mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应1小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用15mL正己烷打浆15分钟，过滤，干燥滤饼，得标题化合物14a(250mg，产率：76.7％)。

MS m/z(ESI):304.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物14a(120mg，0.394mmol)、化合物1b(158mg，0.552mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.039mmol)和碳酸钾(164mg，1.18mmol)溶解于6mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应4小时。停止反应，反应液中加入50mL水，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物14(5.2mg，产率：3.4％)。

MS m/z(ESI):385.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.54-7.53(m,1H),7.39-7.29(m,6H),2.55(s,3H),2.53(s,3H)。

实施例15

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-2-环丙基-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺15

第一步

8-溴-3-环丙基-7-(4-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺15b

将化合物4g(1g，3.35mmol)和化合物12a(1g，6.71mmol)和乙酸钠(1.10g，13.42mmol)溶解于80mL乙醇中，50℃下，搅拌反应65小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用70mL乙醇、正己烷和水(V/V/V＝1/1/10)的混合溶剂打浆0.5小时，过滤，滤饼用正己烷(10mL×2)洗涤，干燥滤饼，得标题化合物15b(370mg，产率：31.68％)。

MS m/z(ESI):348.3[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物15b(370mg，1.06mmol)、化合物4b(404mg，1.59mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(78mg，0.106mmol)和碳酸钾(441mg，3.19mmol)溶解于18mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应17小时。停止反应，反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物15(57.9mg，产率：13.80％)。

MS m/z(ESI):395.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.14(brs,2H),7.38-7.34(m,2H),7.19-7.11(m,4H),2.35(s,3H),2.19-2.14(m,1H),1.06-0.98(m,4H)。

实施例16

8-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-7-(2,4-二氟苯基)-2-丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺16

第一步

8-溴-7-(2,4-二氟苯基)-3-丙基-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺16a

将化合物10f(1g，3.16mmol)和原丁酸(三)乙酯(802mg，3.80mmol)溶解于50mL乙醇中，回流条件下，搅拌反应4小时。停止反应，冷却至室温，反应液减压浓缩，所得残余物用50mL乙醇和正己烷(V/V＝1/20)打浆0.5小时，过滤，干燥滤饼，得标题化合物16a(688mg，产率：59.07％)。

MS m/z(ESI):368.4[M+1]

第二步

在氮气氛下，依次加入化合物16a(200mg，0.543mmol)、化合物4b(151mg，0.598mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(40mg，0.054mmol)和碳酸钾(225mg，1.63mmol)溶解于12mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，90℃条件下，搅拌反应17小时。停止反应，反应液减压浓缩，残余物用高效液相制备(Waters 2767-SQDetecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物16(19.3mg，产率：8.56％)。

MS m/z(ESI):415.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.26(brs,2H),7.58-7.52(m,1H),7.24-7.16(m,2H),7.12-7.10(m,2H),2.83-2.67(m,2H),2.34(s,3H),1.80-1.73(m,2H),0.98-0.85(m,3H)。

实施例17

7-(4-氯-2-氟苯基)-8-(2-(二氟甲基)-6-甲基吡啶-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺17

第一步

4-氯-6-(4-氯-2-氟苯基)嘧啶-2-胺17b

在氩气氛下，依次将化合物1c(2.5g，15.245mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸17a(3.189g，18.289mmol，采用专利申请“WO2008114022A1”公开的方法制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(892mg，1.220mmol)和碳酸钾(5.267g，38.110mmol)加入120mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5/1)的混合溶剂中，加热至95℃，搅拌15小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，残余物用硅胶色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物17b(2.58g，产率：65.58％)。

MS m/z(ESI):258.0[M+1]

第二步

5-溴-4-氯-6-(4-氯-2-氟苯基)嘧啶-2-胺17c

将化合物17b(2.58g，9.997mmol)溶于35mL N,N-二甲基甲酰胺中，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(2.224g，12.496mmol)，搅拌5小时。反应液中加入350mL水，用乙酸乙酯萃取(80mL×3)，合并有机相，有机相依次用水(100mL×3)和饱和氯化钠溶液(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，得粗品标题化合物17c(4.15g)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):335.9[M+1]

第三步

5-溴-4-(4-氯-2-氟苯基)-6-肼基嘧啶-2-胺17d

依次将粗品化合物17c(4.15g，12.316mmol)和8mL 85％水合肼溶于80mL乙醇中，搅拌反应3小时。反应液过滤，滤饼依次用乙醇(3mL×2)和乙醚(3mL×2)洗涤，收集滤饼，真空干燥，得粗品标题化合物17d(2.98g)，产品不经纯化直接用于下一步反应。

MS m/z(ESI):332.0[M+1]

第四步

8-溴-7-(4-氯-2-氟苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺17e

依次将粗品化合物17d(2.98g,8.961mmol)和原甲酸(三)乙酯(1.66g，11.201mmol)加入50mL乙醇中，回流5小时。反应液减压浓缩，残留物用51mL乙醇和正己烷(V/V＝1/50)的混合溶剂打浆，过滤，收集滤饼，真空干燥，得标题化合物17e(0.91g，产率：29.65％)。

MS m/z(ESI):341.9[M+1]

第五步

氩气氛下，将粗品化合物17e(0.91g，2.662mmol)、2-(二氟甲基)-6-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶17f(860mg，3.195mmol，采用专利申请“WO201195625A1”公开的方法制备而得)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(195mg，0.266mmol)、碳酸钾(559mg，6.655mmol)加入60mL 1,4-二氧六环和水(V/V＝5:1)的混合溶剂中，加热至95℃，搅拌17小时。反应液减压浓缩，残余物用高效液相色制备(Waters 2767-SQ Detecor2，洗脱体系：碳酸氢铵，水，乙腈)纯化，得标题化合物17(200mg，产率：18.56％)。

MS m/z(ESI):405.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.43(s,1H),7.57-7.53(m,1H),7.42(s,1H),7.32-7.28(m,2H),7.13-7.10(m,1H),6.71-6.43(m,1H),2.50(s,3H)。

测试例：

生物学评价

测试例1、本发明化合物对腺苷A_2a受体(adenosine A_2a receptor，A_2aR)cAMP信号通路，腺苷A_2b受体(adenosine A_2b receptor，A_2bR)cAMP信号通路，腺苷A₁受体(adenosineA₁receptor，A₁R)cAMP信号通路和腺苷A₃受体(adenosine A₃receptor，A₃R)cAMP信号通路抑制活性的测定。

以下方法用来测定本发明化合物对腺苷A_2a受体cAMP信号通路，腺苷A_2b受体cAMP信号通路，腺苷A₁受体cAMP信号通路和腺苷A₃受体cAMP信号通路的抑制活性。实验方法简述如下：

一、实验材料及仪器

1.CHO-K1/A_2aR细胞(NM_000675.5)或CHO-K1/A_2bR细胞(NM_000676.2)或CHO-K1/A₁R细胞(NM_000674.2)或CHO-K1/A₃R细胞(NM_000677.3)

2.胎牛血清(Gibco,10099-141)

3.博来霉素(Thermo,R25001)或G418(ENZO,ALX-380-013-G005)或嘌呤霉素(Thermo,10687-010)

4.DMEM/F12培养基(GE,SH30023.01)

5.细胞分离缓冲液(Thermo Fisher,13151014)

6.HEPES(Gibco,42360-099)

7.牛血清白蛋白(MP Biomedicals,219989725)

8.咯利普兰(sigma,R6520-10MG)

9.腺苷脱氨酶(sigma,10102105001)

10.毛喉素(sigma，F6886)

11.2Cl-IB-MECA(Tocrics,1104/10)

12.N6-环戊基腺苷(Tocris，1702/50)

13.平衡盐缓冲液(Thermo,14025-092)

14.cAMP动态2试剂盒(cAMP dynamic 2kit)(Cisbio,62AM4PEB)

15.384孔板(Corning,4514)或(Nunc,267462#)

16.乙基咔唑(Torcis,1691/10)

17.PHERAstar多功能酶标仪(Cisbio,62AM4PEB)

二、实验步骤

2.1腺苷A_2a受体

CHO-K1/A_2aR细胞用含有10％胎牛血清和800μg/ml博来霉素的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为10⁶个/ml。在384孔板中每孔加入5μl细胞悬液，2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的乙基咔唑，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：10000，2000，400，80，16，3.2，0.64，0.128，0.0256，0.00512，0.001024nM，乙基咔唑终浓度是20nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物(Anti-cAMP-Eu-Cryptate)。每孔加入5μl稀释后的cAMP-d2，再加入5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值，见表1。

2.2腺苷A_2b受体

CHO-K1/A_2bR用含有10％胎牛血清和1mg/ml G418的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为10⁶个/ml。在384孔板中每孔加入5μl细胞悬液，2.5μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入2.5μl用含有20mMHEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的乙基咔唑(Torcis,1691/10)，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，乙基咔唑终浓度是1μM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入5μl稀释后的cAMP-d2，再加入5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值，见表2。

2.3腺苷A₁受体

CHO-K1/A₁R用含有10％胎牛血清和1mg/mlG418的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，然后用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为5×10⁵个/ml。在384孔板中每孔加入12.5μl细胞悬液，6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的毛喉素和N6-环戊基腺苷，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，毛喉素的终浓度是10μM，CPA的终浓度是10nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按照1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入12.5μl稀释后的cAMP-d2，再加入12.5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值，见表3。

2.4腺苷A₃受体

CHO-K1/A₃R用含有10％胎牛血清和10μg/ml嘌呤霉素的DMEM/F12培养基进行培养。实验时使用细胞分离缓冲液消化细胞，用含有20mM HEPES和0.1％牛血清白蛋白的平衡盐缓冲液重悬细胞并计数，将细胞密度调整为5×10⁵/ml。在384孔板中每孔加入12.5μl细胞悬液，6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的受试化合物，室温孵育30分钟。每孔再加入6.25μl用含有20mM HEPES，0.1％牛血清白蛋白，54μM咯利普兰和2.7U/ml腺苷脱氨酶的平衡盐缓冲液配制的4×浓度的毛喉素和2Cl-IB-MECA，室温孵育30分钟。化合物终浓度是：100000，10000，1000，100，10，1，0.1和0nM，毛喉素的终浓度是10μM，2Cl-IB-MECA的终浓度是5nM。细胞内cAMP浓度使用cAMP动态2试剂盒检测。用cAMP裂解缓冲液按照1：4的比例分别稀释cAMP-d2和抗cAMP-Eu-穴状化合物。每孔加入12.5μl稀释后的cAMP-d2，再加入12.5μl稀释后的抗cAMP-Eu-穴状化合物，室温避光孵育1小时。采用PHERAstar多功能酶标仪读取HTRF信号值。用Graphpad Prism软件计算化合物抑制活性的IC₅₀值，见表4。

表1本发明化合物对腺苷A_2a受体cAMP信号通路抑制活性的IC₅₀值。

实施例编号	IC<sub>50</sub>/nM(A<sub>2a</sub>R)
		1	0.1
2	0.2
		3	0.3
4	0.4
		5	0.5
6	0.5
		7	0.7
8	0.9
		9	1.2
10	0.6
		11	2.5
14	1.2
		15	1.0
16	3.2
		17	3.1

结论：本发明化合物对腺苷A_2a受体cAMP信号通路具有显著的抑制活性。

表2本发明化合物对腺苷A_2b受体cAMP信号通路抑制活性的IC₅₀值。

实施例编号	IC<sub>50</sub>(nM)	IC<sub>50</sub>比率(A<sub>2b</sub>R/A<sub>2a</sub>R)
			3	1124	3747
5	2075	4150
			6	1534	3068
8	659	732
			9	313	261
10	131	218
			11	5073	2029
14	339	282
			16	3671	1165
17	884	290

结论：本发明化合物对腺苷A_2b受体抑制活性作用较弱，说明本发明化合物对A_2a受体具有高选择性。

表3本发明化合物对腺苷A₁受体cAMP信号通路抑制活性的IC₅₀值。

实施例编号	IC<sub>50</sub>(nM)	IC<sub>50</sub>比率(A<sub>1</sub>R/A<sub>2a</sub>R)
			3	107	357
5	164	328
			8	100	111
10	114	190
			11	1320	528
15	476	476
			16	773	245
17	1009	336

结论：本发明化合物对腺苷A₁受体抑制活性作用较弱，说明本发明化合物对A_2a受体具有高选择性。

表4本发明化合物对腺苷A₃受体cAMP信号通路抑制活性的IC₅₀值。

实施例编号	IC<sub>50</sub>(nM)	IC<sub>50</sub>比率(A<sub>3</sub>R/A<sub>2a</sub>R)
			1	>10<sup>4</sup>	10<sup>5</sup>
2	>10<sup>4</sup>	5×10<sup>4</sup>
			3	>10<sup>4</sup>	3.3×10<sup>4</sup>
4	>9.5×10<sup>3</sup>	2.4×10<sup>4</sup>
			5	>10<sup>4</sup>	2×10<sup>4</sup>
6	>10<sup>4</sup>	2×10<sup>4</sup>
			7	>10<sup>4</sup>	1.4×10<sup>4</sup>
8	>10<sup>4</sup>	1.1×10<sup>4</sup>
			9	>10<sup>4</sup>	8.3×10<sup>3</sup>
10	>10<sup>4</sup>	1.7×10<sup>4</sup>
			11	>10<sup>4</sup>	8.3×10<sup>3</sup>
14	>10<sup>4</sup>	3.3×10<sup>4</sup>
			16	>10<sup>4</sup>	3.2×10<sup>3</sup>
17	>10<sup>4</sup>	3.3×10<sup>3</sup>

结论：本发明化合物对腺苷A₃受体基本没有抑制活性作用，说明本发明化合物对A_2a受体具有高选择性。

Claims

1.一种通式(I)所示的化合物：

其中：

环A为芳基或杂芳基；

环B选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

s为0、1、2、3或4；且

n为0、1、2、3或4。

2.根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的环A和环B相同或不同，各自独立地为苯基或吡啶基。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其为通式(II)所示的化合物：

其中：

R¹～R³、s和n如权利要求1中所定义。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R¹选自氢原子、卤素和烷基。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R²选自氢原子、卤素、烷基和卤代烷基。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其中所述的R³选自氢原子、烷基和环烷基。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的通式(I)所示的化合物，其选自:

8.一种通式(IA)所示化合物：

其中：

X为卤素；

环A为芳基或杂芳基；

n为0、1、2、3或4。

9.根据权利要求8中所述的通式(IA)所示的化合物，其选自:

10.一种通式(IB)所示化合物：

其中：

X为卤素；

环A为芳基或杂芳基；

n为0、1、2、3或4。

11.根据权利要求10中所述的通式(IB)所示的化合物，其选自:

12.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：

通式(IA)的化合物和通式(ID)的化合物在碱性条件下发生偶联反应，得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如权利要求1中所定义。

13.一种制备根据权利要求1所述的通式(I)所示的化合物的方法，该方法包括：

通式(IB)的化合物和通式(ID)的化合物在碱性条件下发生偶联和Dimroth重排，得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^b为

环A、环B、R¹～R³、n和s如权利要求1中所定义。

14.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

15.根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物在制备用于抑制A_2a受体的药物中的用途。

16.根据权利要求1～7中任一项所述的通式(I)所示的化合物或根据权利要求14所述的药物组合物在制备用于治疗通过对A_2a受体的抑制而改善的病况或病症的药物中的用途。

17.根据权利要求16所述的用途，其中所述的通过对A_2a受体的抑制而改善的病况或病症选自肿瘤、抑郁症、认知功能病症、神经退行性病症、注意力相关病症、锥体外症候群、异常运动障碍、肝硬化、肝纤维化、脂肪肝、皮肤纤维化、睡眠障碍、中风、脑损伤、神经炎症和成瘾行为；优选为肿瘤。

18.根据权利要求17所述的用途，其中肿瘤选自黑色素瘤、脑瘤、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、皮肤癌、神经母细胞瘤、肉瘤、骨软骨瘤、骨瘤、骨肉瘤、精原细胞瘤、睾丸肿瘤、子宫癌、头颈肿瘤、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、真性红细胞增多症、白血病、甲状腺肿瘤、输尿管肿瘤、膀胱癌、胆囊癌、胆管癌、绒毛膜上皮癌和儿科肿瘤。