发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此,本发明提供了一种5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,该衍生物可以用作微管蛋白抑制剂,作用于秋水仙碱结合位点。
本发明还提供了上述衍生物的制备方法。
本发明还提供了上述衍生物的应用。
本发明的第一方面提供了一种5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,包括式A所示结构的化合物及其药学上可接受的盐,所述式A为:
根据本发明的一些实施方式,所述Ar选自如式B或C所示的取代基,
其中,n为1~5的整数,R1,R2及R3分别独立地选自H、C1-C3烷基、卤素取代的C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、卤素取代的C1-C3烷氧基、3,4-亚甲二氧基、苯基、-NR4R5;
R4、R5分别独立地选自H、C1-C3烷基;
X选自C或N。
根据本发明的一些实施方式,X为C时,R2选自C1-C3烷基;X为N时,R2选自H或C1-C3烷基。
根据本发明的一些实施方式,所述Ar为3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基、7-吲哚基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-异丙基苯基、4-甲氧基苯乙烯基、3,4-二甲氧基苯基、3-(1-Boc吲哚基)、3-(5-甲氧基吲哚基)、4-(1-甲基吲哚基)、5-(1-甲基吲哚基)、6-(1-甲基吲哚基)、3-(1-Boc-5-甲氧基吲哚基)、3-(5-乙氧基吲哚基)、3-(1-Boc-5-乙氧基吲哚基)、3-(6-甲氧基吲哚基)、3-(1-Boc-6-甲氧基吲哚基)、3-羟基-4-甲氧基苯基、3,4-二甲基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-氯-4-甲氧基苯基、3-溴-4-甲氧基苯基和3-氨基-4-甲氧基苯基中的一种。
根据本发明的一些实施方式,Ar为4-甲氧基苯基时,5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为4-甲基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为4-吲哚基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-(N-Boc吲哚基)时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-吲哚基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为5-吲哚基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为6-吲哚基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为7-吲哚基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-(5-甲氧基吲哚基)时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-(1-Boc-5-甲氧基吲哚基)时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-(6-甲氧基吲哚基)时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-(1-Boc-6-甲氧基吲哚基)时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-羟基-4-甲氧基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3,4-二甲基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为异丙基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3,4-二甲氧基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为4-甲氧基苯乙烯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-氟-4-甲氧基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-氯-4-甲氧基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
根据本发明的一些实施方式,Ar为3-溴-4-甲氧基苯基时,所述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的化学结构为:
本发明的第二方面提供了制备上述5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的方法,包括以下步骤:
S1:以2-氯-4-肼基嘧啶和芳基甲醛ArCHO为原料,通过电化学阳极氧化反应得到式II所示化合物;
S2:式II所示化合物与3,4,5-三甲氧基苯硼酸发生Suzuki反应并同时发生Dimroth重排反应,即得;
根据本发明的一些实施方式,5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的制备方法为:
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,以2-氯-4-肼基嘧啶和ArCHO芳基甲醛为原料,原位生成苯腙中间体,同时通过电化学阳极氧化反应,以四正丁基氟硼酸铵为电解质,在恒压条件下(V可以为10V),在装有石墨棒(阳极)以及铂片(阴极)的电解池中进行环化反应,反应结束后用乙酸乙酯萃取,干燥,浓缩,通过柱层析纯化得到式II所示中间体。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,电化学阳极氧化反应,以铂片为阴极,碳棒为阳极,电化学阳极氧化反应过程中,反应体系使用的直流电压为5~20V。
根据本发明的一些实施方式,所述直流电压为10~15V。
根据本发明的一些实施方式,电化学阳极氧化反应过程中,反应体系的温度为25~40℃。
根据本发明的一些实施方式,电化学阳极氧化反应过程中,反应的时间为5~24小时。
根据本发明的一些实施方式,电化学阳极氧化反应过程中,反应的时间为5~12小时。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,2-氯-4-肼基嘧啶的结构为:
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,2-氯-4-肼基嘧啶和芳基甲醛ArCHO的摩尔比为1:(0.2~1.2)。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,2-氯-4-肼基嘧啶和芳基甲醛ArCHO的摩尔比为1:(0.4~1.0)。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,2-氯-4-肼基嘧啶和芳基甲醛ArCHO的摩尔比为1:(0.4~0.6)。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,电化学阳极氧化反应的电解质为四正丁基四氟硼酸铵、四正丁基醋酸铵、四正丁基硫酸氢铵和四正丁基六氟磷酸铵中的至少一种。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,电化学阳极氧化反应的电解质为四正丁基四氟硼酸铵、四正丁基醋酸铵、四正丁基硫酸氢铵和四正丁基六氟磷酸铵中的至少一种。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,反应溶剂为四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或甲醇四氢呋喃。
根据本发明的一些实施方式,步骤S1中,反应溶剂为四氢呋喃。
根据本发明的一些实施方式,步骤S2中,Suzuki反应及Dimroth重排反应:以式II所示的中间体和3,4,5-三甲氧基苯硼酸为原料,以四三苯基膦为催化剂,碳酸钾作为碱,1,4-二氧六环为反应溶剂,氮气保护下100℃加入反应10h,反应结束后用乙酸乙酯萃取,干燥,浓缩,通过柱层析纯化得到式A所示5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物。
根据本发明的一些实施方式,步骤S2中,式II所示的中间体、3,4,5-三甲氧基苯硼酸、钯催化剂、碱的摩尔比为1:(1~1.5):(0.01~0.1):(1.5~3)。
根据本发明的一些实施方式,步骤S2中,式II所示的中间体、3,4,5-三甲氧基苯硼酸、钯催化剂、碱的摩尔比为1:1.2:0.1:2。
根据本发明的一些实施方式,还包括在步骤S2之后,对产物进行提纯处理。
根据本发明的一些实施方式,所述提纯处理的方法为:向产物中加入乙酸乙酯淬灭反应,再加入饱和氯化钠溶液洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3~5次,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂,经柱层析即得。
根据本发明的一些实施方式,淬灭反应过程中,乙酸乙酯的体积用量以[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶类衍生物的物质的量计为5~55mL/mmol,饱和氯化钠溶液的体积用量以[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶类衍生物的物质的量计为4~30mL/mmol,每次萃取过程中,乙酸乙酯的体积用量以[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶类衍生物的物质的量计为4~30mL/mmol。
本发明的第三方面提供了一种药物组合物,所述药物组合物含有上述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物。
根据本发明的一些实施方式,药物组合物中,还包括活性成分或辅助治疗成分。
根据本发明的一些实施方式,活性成分包括烷化剂、氮芥类、塞替派类、亚硝尿类和甲基磺酸酯类活性成分,铂类化合物及丝裂霉素,二氢叶酸还原酶抑制剂、胸腺核苷合成酶抑制剂、嘌呤核苷酸合成酶抑制剂、核苷酸还原酶抑制剂及DNA多聚酶抑制剂,核酸转录抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白抑制剂,其他细胞毒药;激素类药物、生物反应调节剂、单克隆抗体,以及其他被证明对肿瘤具有抑制作用的药物。
根据本发明的一些实施方式,辅助治疗成分包括升血药、止呕药、肺动脉高压、镇痛药、抑制破骨细胞药。
本发明的第四方面提供了一种抗肿瘤药物,所述抗肿瘤药物含有上述的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物或药物组合物。
根据本发明的一些实施方式,所述抗肿瘤药物的剂型包括口服制剂、注射剂、气雾剂及外用制剂。
根据本发明的一些实施方式,所述注射剂包括冻干粉针剂、乳剂、乳浊液及混悬液。
根据本发明的一些实施方式,所述抗肿瘤药物的剂型包括片剂、胶囊剂、口服液体剂型、口服丸剂、口服颗粒剂、口服散剂中的一种。
本发明的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,至少具有以下有益效果:
本发明的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,具有较好的抗肿瘤活性,对人正常细胞水平均弱于对癌细胞的毒性,其中化合物A-2、A-3、A-5、A-6以及A-7等对多种肿瘤细胞株有显著的抑制水平,且毒性较小,具有开发前景。
本发明的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,原料便宜易得,所用试剂低毒,制备方法反应条件温和,后处理方便,绿色环境友好。
本发明的5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物,可以通过电化学方法制备,为氧化还原转化的常规化学方法提供了有效的替代方案,通过阳极氧化和阴极还原,电化学合成避免了在构造复杂分子中大量使用化学氧化剂和还原剂,简化了操作步骤,同时,避免了昂贵的催化剂的使用,节约了生产制造成本。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例,并结合实施例对本发明的技术方案作进一步的描述,但本发明并不限于这些实施例。
本领域技术人员可以理解,根据本领域中使用的惯例,本申请描述基团的结构式中所使用的
指相应的基团通过该位点与化合物中的其它片段、基团进行连接。
实施例1
本实施例制备了2-(4-甲氧基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-1,结构式为:
步骤S1:5-氯-3-(4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),4-甲氧基苯甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到中间体II-1。白色固体,产率81%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.84(d,J=6.5Hz,1H),7.71(d,J=6.5Hz,1H),7.52(d,J=7.9Hz,2H),7.35(d,J=7.9Hz,2H),3.50(s,3H)以及ESI-MS m/z:260.7([M+H]+)。
步骤S2:化合物2-(4-甲氧基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-1(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=4:1),得到产物A-1,产率66%。白色固体,熔点:184.2-184.7℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.34(d,J=6.0Hz,1H),8.32-8.27(d,J=8.7Hz,2H),8.19(s,2H),7.61(d,J=6.1Hz,1H),7.06(d,J=8.7Hz,2H),4.06(s,6H),4.01(s,3H),3.91(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ164.8,161.8,154.6,152.9,148.8,144.0,141.3,129.2,126.4,122.6,114.3,109.1,108.0,61.1,56.3,55.4.HRMS(ESI)(m/z):calcd forC21H20N4O4[M+H]+:393.1557,found:393.1552。
图1为化合物A-1的分子结构图,可确证其核心结构为[1,2,4]三唑[1,5-c],该杂环是由Suzuki反应以及Dimroth重排反应生成得到的。
实施例2
本实施例制备了2-(4-甲基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-2,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(4-甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),4-甲基苯甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-2。浅黄色固体,产率85%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.74(d,J=6.5Hz,1H),7.88(d,J=6.5Hz,2H),7.30(d,J=7.5Hz,2H),7.28(d,J=7.5Hz,1H),.2.48(s,3H)以及ESI-MS m/z:244.1([M+H]+)。
步骤S2:2-(4-甲基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-2(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-2,产率72%。白色固体,熔点:172.1-172.7℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.35(d,J=6.1Hz,1H),8.25(d,J=7.9Hz,2H),8.20(s,2H),7.64-7.63(m,1H),7.41-7.37(m,2H),4.06(s,6H),4.02(s,3H),2.46(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.0,154.6,153.0,148.9,144.0,141.3,141.2,129.6,127.6,127.3,126.4,109.3,108.0,61.1,56.3,21.6以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C21H20N4O3([M+H]+):377.1608,found:377.1602。
实施例3
本实施例制备了2-(1H-4-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-3,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(1H-4-吲哚基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),4-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-3。浅黄色固体,产率74%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.55(brs,1H),7.86(d,J=6.5Hz,1H),7.74(d,J=6.5Hz,1H),7.65-7.63(m,1H),7.36(s,1H),7.35(d,J=2.4Hz,1H),7.33-7.32(m,1H),6.30-6.29(m,1H)以及ESI-MS m/z:269.1([M+H]+)。
步骤S2:2-(1H-4-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-3(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-3,产率62%。白色固体,熔点:214.6-215.5℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.54(brs,1H),8.37(d,J=6.1Hz,1H),8.27(d,J=7.4Hz,1H),8.21(s,2H),7.68(d,J=6.1Hz,1H),7.67-7.62(m,1H),7.61(d,J=8.1Hz,1H),7.45-7.35(m,2H),4.06(s,6H),4.04(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,154.0,152.9,149.0,143.9,141.2,136.6,126.8,126.1,125.5,122.0,121.7,121.3,113.9,109.3,108.0,104.2,61.1,56.4以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C22H19N5O3([M+H]+):402.1561,found:402.1560。
实施例4
本实施例制备了3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]-2-嘧啶基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯,编号A-4以及2-(1H-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-5,结构如下:
S1:3-(5-氯-3-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),N-Boc-3-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-4。白色固体,产率75%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.56(d,J=7.0Hz,1H),8.49(s,1H),8.28(d,J=8.4Hz,2H),8.05(s,1H),7.89(d,J=6.5Hz,1H),7.76(d,J=6.5Hz,1H)1.71(s,9H)以及ESI-MS m/z:369.1([M+H]+)。
步骤S2:3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑[1,5-c]-2-嘧啶基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁基酯的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-4(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-4,产率63%。白色固体。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.59(d,J=7.8Hz,1H),8.53(s,1H),8.36(d,J=6.1Hz,1H),8.30(d,J=8.2Hz,1H),8.20(s,2H),7.62(d,J=6.1Hz,1H),7.44(t,J=7.8Hz,1H),7.36(t,J=7.8Hz,1H),4.07(s,6H),4.02(s,3H),1.71(s,9H)13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.2,160.8,152.9,149.8,147.2,147.1,138.7,134.8,129.5,129.5,125.5,124.7,121.8,119.9,115.0,111.4,110.3,98.2,83.6,60.7,56.3,27.9.HRMS(ESI)(m/z):calcdfor C27H27N5O5([M+H]+):501.2012,found:501.2008.
步骤S3:2-(1H-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取单口圆底烧瓶,分别加入化合物A-4(0.3mmol)以及二氯甲烷(3mL),0℃下滴加三氟乙酸(1mL),室温搅拌1小时。反应结束后,经减压蒸馏得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=1:1),得到产物A-5,产率68%。白色固体,熔点:194.4-195.3℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.74(brs,1H),8.62(d,J=7.6Hz,1H),8.35(d,J=6.0Hz,1H),8.26(s,2H),8.21(d,J=2.6Hz,1H),7.60(d,J=6.0Hz,1H),7.52(d,J=8.0Hz,1H),7.35(t,J=7.5Hz,1H),7.31(t,J=7.5Hz,1H),4.10(s,6H),4.04(s,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ162.4,153.9,152.9,148.7,144.1,141.2,136.5,127.3,126.8,125.4,123.2,121.7,121.2,111.7,108.5,108.1,108.0,61.1,56.4.HRMS(ESI)(m/z):calcd forC22H19N5O3([M+H]+):402.1560,found:402.1555。
实施例5
本实施例制备了2-(1H-5-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-6,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(1H-5-吲哚基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),5-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-5。浅黄色固体,产率74%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.48(brs,1H),7.93(d,J=8.8Hz,1H),7.84(dd,J=8.8,6.5Hz,1H),7.73-7.70(m,1H),7.55-7.51(m,1H),7.49-7.45(m,1H),7.36-7.34(m,1H),6.69(d,J=2.9Hz,1H)以及ESI-MS m/z:269.1([M+H]+)。
以及ESI-MS m/z:269.1([M+H]+)。
步骤S2:2-(1H-5-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-5(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-6,产率51%。白色固体,熔点:207.5-208.4℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.44(brs,1H),8.54(s,1H),8.44(d,J=6.1Hz,1H),8.18(s,2H),8.12–8.02(m,1H),7.86(d,J=6.1Hz,1H),7.58(d,J=8.5Hz,1H),7.50–7.40(m,1H),6.61(s,1H),3.97(s,6H),3.84(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ165.9,154.6,152.9,148.2,144.7,141.0,137.9,128.3,127.2,126.8,121.0,120.8,120.4,112.5,109.8,108.3,102.7,60.8,56.5以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C22H19N5O3([M+H]+):402.1560,found:402.1554。
实施例6
本实施例制备了2-(1H-6-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-7,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(1H-6-吲哚基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),5-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-6。浅黄色固体,产率74%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.48(brs,1H),7.95(d,J=8.2Hz,1H),7.87(d,J=8.8,6.5Hz,1H),7.70–7.68(m,1H),7.50-7.49(m,1H),7.42-7.40(m,1H),7.32-7.30(m,1H),6.70(d,J=3.0Hz,1H)以及ESI-MS m/z:269.1([M+H]+)。
步骤S2:2-(1H-6-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-6(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-7,产率61%。白色固体,熔点:197.4-198.2℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.52(brs,1H),8.47(s,1H),8.35(d,J=6.1Hz,1H),8.21(s,2H),8.15(d,J=8.3Hz,1H),7.79(d,J=8.3Hz,1H),7.63(d,J=6.1Hz,1H),7.39-7.34(m,1H),6.66(s,1H),4.08(s,6H),4.03(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.0,154.6,152.9,148.8,144.0,141.2,135.8,130.1,126.5,126.5,123.7,121.1,119.3,111.1,109.0,108.1,103.1,61.1,56.4以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C22H19N5O3[M+H]+:402.1560,found:402.1559。
实施例7
本实施例制备了2-(1H-7-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-8,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(1H-7-吲哚基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),5-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-7。浅黄色固体,产率78%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ9.39(brs,1H),7.88-7.81(m,3H),7.63(d,J=6.5Hz,1H),7.38(d,J=6.5Hz,1H),7.33-7.31(m,1H),6.69-6.68(m,1H)以及ESI-MS m/z:269.1([M+H]+)。
步骤S2:2-(1H-7-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-7(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-8,产率68%。白色固体,熔点:194.3-195.1℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.52(d,J=6.1Hz,1H),8.16(s,2H),8.12(d,J=7.6Hz,1H),7.93(d,J=6.1Hz,1H),7.81(d,J=7.8Hz,1H),7.54(t,J=2.5Hz,1H),7.25(t,J=7.6Hz,1H),6.62(t,J=2.5Hz,1H),3.96(s,6H),3.84(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ164.0,154.3,153.0,148.5,145.1,141.1,133.9,129.6,127.3,126.7,123.9,121.3,119.8,113.2,109.9,108.3,102.3,60.7,56.5以及HRMS(ESI)(m/z):calcd forC22H19N5O3([M+H]+):402.1560,found:402.1553。
实施例8
本实施例制备了3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]-2-嘧啶基)-5-甲氧基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(编号为A-9)以及2-(1H-5-甲氧基-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶(编号为A-10),结构如下:
S1:3-(5-氯-3-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶基)-5-甲氧基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),N-Boc-6-甲氧基-3-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=4:1),得到中间体II-8。白色固体,产率68%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),8.38(dd,J=6.0,1.5Hz,1H),8.20(d,J=6.7Hz,1H),8.16(s,2H),8.10(s,1H),7.76(d,J=8.6Hz,1H),7.06(d,J=9.0Hz,1H),4.07(s,6H),4.02(s,3H),3.91(s,3H),1.72(s,9H)以及ESI-MS m/z:400.1([M+H]+)。
步骤S2:3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-5-甲氧基-[1,2,4]三唑[1,5-c]-2-嘧啶基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁基酯的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-8(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=4:1),得到产物A-9,产率68%。白色固体。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.51(s,1H),8.38(dd,J=6.0,1.5Hz,1H),8.20(d,J=6.7Hz,1H),8.16(s,2H),8.10(s,1H),7.76(d,J=8.6Hz,1H),7.06(d,J=9.0Hz,1H),4.07(s,6H),4.02(s,3H),3.91(s,3H),1.72(s,9H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.2,160.8,152.9,149.8,147.2,147.1,138.7,134.8,129.5,129.5,125.5,124.7,121.8,119.9,115.0,111.4,110.3,98.2,83.6,60.7,56.3,27.9以及HRMS(ESI)(m/z):calcd forC28H29N5O6([M+H]+):532.2112,found:532.2119。
步骤S3:2-(1H-5-甲氧基-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取单口圆底烧瓶,分别加入化合物A-9(0.3mmol)以及二氯甲烷(3mL),0℃下滴加三氟乙酸(1mL),室温搅拌1小时。反应结束后,经减压蒸馏得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=1:1),得到产物A-10,产率63%。白色固体,熔点:190.2-191.1℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.97(brs,1H),8.32(d,J=6.1Hz,1H),8.17(s,2H),8.14(s,1H),8.07(s,1H),7.57(d,J=6.1Hz,1H),7.37(d,J=8.8Hz,1H),6.97(d,J=8.8Hz,1H),4.06(s,6H),4.02(s,3H),3.90(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.5,155.5,153.8,152.9,148.8,144.1,141.4,131.7,127.8,126.8,126.2,112.5,112.2,108.5,108.3,107.6,104.7,61.1,56.6,56.1以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C23H21N5O4([M+H]+):432.1666,found:432.1662。
实施例9
本实施例制备了3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]-2-嘧啶基)-6-甲氧基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯(编号为A-11)以及2-(1H-6-甲氧基-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶(编号为A-12),结构如下:
S1:3-(5-氯-3-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶基)-6-甲氧基-1H-吲哚-1-甲酸叔丁酯的制备:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),N-Boc-6-甲氧基-3-吲哚甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=4:1),得到中间体II-9。白色固体,产率68%。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.93(s,1H),7.87(d,J=6.5Hz,2H),7.74(d,J=6.5Hz,1H),7.34(d,J=8.0Hz,1H),6.95(d,J=8.0,1H),3.93(s,3H),1.72(s,9H)以及ESI-MS m/z:400.1([M+H]+)。
步骤S2:6-甲氧基-3-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑[1,5-c]-2-嘧啶基)-1H-吲哚-1-甲酸叔丁基酯的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-9(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=4:1),得到产物A-11,产率68%。白色固体。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.45(d,J=8.7Hz,1H),8.42(s,1H),8.38(d,J=6.1Hz,1H),8.20(s,2H),7.82(d,J=8.2Hz,1H),7.63(d,J=7.0Hz,1H),7.59(t,J=7.0Hz,1H),4.08(s,6H),4.04(s,3H),3.95(s,3H),1.72(s,9H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ161.2,160.8,160.2,152.8,149.8,147.2,147.1,138.7,135.2,129.6,126.8,125.5,120.4,111.7,111.4,110.3,98.2,97.6,83.6,60.7,56.3,55.6,27.9以及HRMS(ESI)(m/z):calcdfor C28H29N5O6([M+H]+):532.2112,found:532.2115。
步骤S3:2-(1H-6-甲氧基-3-吲哚基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取单口圆底烧瓶,分别加入化合物A-11(0.3mmol)以及二氯甲烷(3mL),0℃下滴加三氟乙酸(1mL),室温搅拌1小时。反应结束后,经减压蒸馏得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=1:1),得到产物A-12,产率72%。白色固体,熔点:247.6-248.1℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.60(brs,1H),8.40(d,J=6.0Hz,1H),8.27(d,J=8.6Hz,1H),8.20(s,2H),8.10(s,1H),7.77(d,J=6.0Hz,1H),7.03(s,1H),6.86(d,J=8.3Hz,1H),3.98(s,6H),3.84(s,3H),3.82(s,3H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ162.7,156.7,154.0,152.9,147.9,144.6,141.0,138.0,127.7,127.0,121.7,119.6,111.1,109.1,108.2,106.5,95.6,60.8,56.5,55.7.以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C23H21N5O4([M+H]+):432.1666,found:432.1662。
实施例10
本实施例制备了2-甲氧基-5-(5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]-2-嘧啶基)苯酚,编号为A-13,结构为:
步骤S1:5-(5-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-c]-3-嘧啶基)-2-甲氧基苯酚:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),3-羟基-4-甲氧基苯甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-10。白色固体,产率75%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.82(d,J=6.5Hz,1H),7.74(d,J=6.5Hz,1H),7.17-7.15(m,2H),6.81(d,J=7.5Hz,1H),5.51(brs,1H)3.71(s,3H)以及ESI-MS m/z:277.0([M+H]+)。
步骤S2:化合物2-(4-甲氧基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-10(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到产物A-13,产率76%。白色固体,熔点:200.8-201.2℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.34(d,J=6.1Hz,1H),8.19(s,2H),7.93–7.88(m,2H),7.62(d,J=6.1Hz,1H),7.03–7.00(m,1H),5.79(brs,1H),4.06(s,6H),4.01(s,3H),4.00(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ164.7,154.6,152.8,149.0,148.7,145.9,144.0,141.2,126.3,123.3,120.3,113.8,110.7,109.1,108.0,61.1,56.3,56.0以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C21H20N4O5([M+H]+):409.1506,found:409.1503。
实施例11
本实施例制备了2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶,编号为A-14,结构为:
步骤S1:5-氯-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶:
取三口圆底烧瓶,以碳棒(φ6mm)作为阳极,铂片(10mm×10mm×0.1mm)作为阴极,分别加入2-氯-4-肼基嘧啶I(0.5mmol),3-氟-4-甲氧基苯甲醛(0.55mmol),四正丁基氟硼酸铵(0.5mmol),四氢呋喃(8mL)。室温条件下在恒定电压(10V)下电解5-6h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到中间体II-11。白色固体,产率75%。
取上述中间体进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.84(d,J=6.5Hz,1H),7.39(d,J=6.5Hz,1H),7.33-7.30(m,2H),6.84(d,J=7.5Hz,1H),3.83(s,3H)以及ESI-MS m/z:279.7([M+H]+)。
步骤S2:化合物2-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶的制备。
取三口圆底烧瓶,分别加入中间体II-11(0.4mmol),3,4,5-三甲氧基苯硼酸(0.48mmol),四三苯基膦钯(0.04mmol),碳酸钾(0.6mmol)以及1,4-二氧六环(4mL),氮气保护下100℃反应12h。反应结束后加入乙酸乙酯10mL淬灭反应,加入5mL饱和食盐水洗涤,分出有机相,水相再用乙酸乙酯萃取3次,每次乙酸乙酯用量为5mL,合并有机相,加入无水硫酸钠干燥,经减压蒸馏除去溶剂得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到产物A-14,产率79%。白色固体,熔点:215.4-216.3℃。
取上述产物进行NMR和MS表征,表征数据如下:
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.34(d,J=6.1Hz,1H),8.16(s,2H),8.11–8.09(m,1H),8.06–8.03(m,1H),7.60(d,J=6.1Hz,1H),7.10(t,J=8.5Hz,1H),4.05(s,6H),4.01(s,3H),3.99(s,3H).13C NMR(125MHz,CDCl3)δ163.8,154.6,152.9,152.3(C-F,1JC-F=246.7),149.9(C-F,2JC-F=10.9),148.8,144.2,141.4,126.2,124.1(C-F,3JC-F=3.5),123.1(C-F,3JC-F=7.3),115.3(C-F,2JC-F=20.3),113.2,109.2,108.0,61.1,56.3,56.3以及HRMS(ESI)(m/z):calcd for C21H19FN4O4([M+H]+):411.1463,found:411.1458。
抗肿瘤细胞增殖活性测试
本发明所用到的细胞株有人宫颈癌细胞株HeLa,人乳腺癌细胞株MCF-7,人结肠癌细胞株HCT-116。
取对数生长期的宫颈癌细胞(HeLa),乳腺癌细胞(MCF-7),结肠癌细胞(HCT116),胰酶消化,调整细胞数浓度为5×104/mL,按100μL/孔接种到96孔板中。在37℃ 5%CO2细胞培养箱中培养过夜,待细胞贴壁。吸弃旧的培养基加入不同浓度的含药培养基,每个化合物设置六个浓度,每个浓度设置三个复孔。加药培养48h后,向每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后吸弃培养基,向每孔加入150μL的DMSO后在摇床避光防止10min溶解结晶紫后,用酶标仪读各孔在570nm下的吸光值。根据公式计算肿瘤细胞生长抑制率。
抑制率=[1-(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%,其中As:加药孔的吸光值,Ab:空白孔的吸光值,Ac:对照孔的吸光值。
结果见下表1。在浓度为0.1μM时,把高于50%抑制细胞生长能力的化合物标记为“+++”;在浓度为1μM时,把高于50%抑制细胞生长能力的化合物标记为“++”;在浓度为10μM时,把高于50%抑制细胞生长能力的化合物标记为“+”;在浓度为10μM时,把不能抑制50%细胞生长能力的化合物标记为“–”。
微管蛋白聚集抑制实验
微管蛋白聚集的测试方法参考Cytoskeleton公司的tubulin polymerizationassay kit试剂盒(BK110P)进行操作,具体操作方法为:在冰上,用PEM缓冲液重悬将微管蛋白(2mg/mL)配置成tubulin工作液,在冰上保存,将待测化合物用DMSO稀释成10×的测试浓度,加入至96孔板中并在37℃下预热1min,向各孔加入tubulin工作液,混匀,用酶标仪在37℃下以1min为间隔记录各孔的荧光值(ex:360nm;em:450nm),共90min,计算各组的微管蛋白聚集的抑制率。在浓度为10μM时,把高于50%以上抑制微管蛋白聚集的化合物标记为“+”;在浓度为10μM时,未能高于50%以上抑制微管蛋白聚集的化合物标记为“–”;未测定的化合物标记为“NT”。
表1
HeLa细胞流式实验
取对数生长期的HeLa细胞,经胰酶消化制成细胞悬液,调整细胞浓度,以3×105个/孔接种到六孔板上,待HeLa细胞生长24小时后,加入含不同浓度的化合物培养48小时,以不加入化合物的组作为阴性对照,然后弃去培养液,用PBS缓冲液清洗细胞3次,经胰酶消化制成细胞悬液,1000RPM/分钟离心5分钟收集细胞。按照碧云天的Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒的方法检测各组细胞的凋亡情况。随后向各组细胞加入染色结合液(195μL),轻轻重悬细胞,加入Annexin-V-FITC溶液(5μL)轻轻混匀,在加入PI溶液(10μL)。室温下避光孵育20分钟,用流式细胞仪对各组细胞进行检测,结果如图2所示。与对照组相比,化合物A-5与HeLa细胞作用24h后,可以剂量依赖性的方式提高HeLa细胞的凋亡率。
上面结合实施例对本发明作了详细说明,但是本发明不限于上述实施例,在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内,还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。