CN116178375A - 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用 - Google Patents

一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116178375A
CN116178375A CN202310166475.7A CN202310166475A CN116178375A CN 116178375 A CN116178375 A CN 116178375A CN 202310166475 A CN202310166475 A CN 202310166475A CN 116178375 A CN116178375 A CN 116178375A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ethyl
reaction
stirring
triazolopyrimidine compound
synthesizing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310166475.7A
Other languages
English (en)
Inventor
黄玖红
冉凯
王娟丽
王佳敏
唐典勇
陈中祝
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing University of Arts and Sciences
Original Assignee
Chongqing University of Arts and Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing University of Arts and Sciences filed Critical Chongqing University of Arts and Sciences
Priority to CN202310166475.7A priority Critical patent/CN116178375A/zh
Publication of CN116178375A publication Critical patent/CN116178375A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

本发明公开了一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用，本发明涉及化合物合成技术领域。该方法包括以下步骤：将3‑氨基‑1,2,4‑三氮唑和丙酰乙酸乙酯混合于冰乙酸中，反应，制得白色固体；溶于三氯氧磷中，搅拌反应，制得红棕色固体粗品；溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，加入4‑硝基苯硫酚和碳酸钾，搅拌反应，制得淡黄色固体；溶于乙酸乙酯中，加入钯碳，反应，制得淡黄色固体粗品；溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸、HATU和DIPEA，搅拌反应，制得三唑并嘧啶化合物。本发明提供的方法简单便捷，只需要五个步骤即可合成出目标产物，该产物具有抗前列腺癌效果，可应用于相关的生物医学领域药物研发。

Description

一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用
技术领域
本发明涉及化合物合成技术领域，具体涉及一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用。
背景技术
三唑并嘧啶类化合物由于分子结构中具有三唑和嘧啶这两类重要的活性单元，因而具有广泛的生物活性，受到人们的长期关注，三唑并嘧啶类化合物主要应用于农业领域，通常被作为除草剂，抗菌剂使用；此外，三唑并嘧啶类化合物还具有治疗心血管疾病的作用。然而，现有的三唑并嘧啶类化合物合成方法步骤繁琐，经济性不高，没有在抗肿瘤方面的应用，因此，迫切需要开发一种新的三唑并嘧啶类化合物合成方法。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种三唑并嘧啶化合物的合成方法，以解决现有三唑并嘧啶类化合物合成方法步骤繁琐，经济性不高的问题；并将其应用到抗前列腺癌药物制备中。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种三唑并嘧啶化合物的合成方法，包括以下步骤：
(1)将3-氨基-1,2,4-三氮唑和丙酰乙酸乙酯混合于冰乙酸中，于110-130℃条件下搅拌反应5-7h，然后冷却至室温，再析晶、减压抽滤、洗涤和真空干燥，制得白色固体，即5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮；
(2)将步骤(1)制得的白色固体溶于三氯氧磷中，于80-100℃条件下搅拌反应3-5h，然后冷却至室温，倒入冰水中搅拌，再进行萃取、洗涤、干燥和减压浓缩，制得红棕色固体粗品，即7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶；
(3)将步骤(2)制得的红棕色固体粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入4-硝基苯硫酚和碳酸钾，于50-70℃条件下搅拌反应1.5-2.5h，然后冷却至室温，加水稀释，再进行萃取、洗涤、干燥、减压浓缩和纯化，制得淡黄色固体，即5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(4)将步骤(3)制得的淡黄色固体溶于乙酸乙酯中，加入钯碳，于室温条件下反应，然后过滤和减压浓缩，制得淡黄色固体粗品，即4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺；
(5)将步骤(4)制得的淡黄色固体粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸、HATU和DIPEA，于室温条件下搅拌反应8-12h，然后减压浓缩，加水稀释溶解，再进行萃取、洗涤、干燥、减压浓缩和纯化，制得三唑并嘧啶化合物，即2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺。
本发明的有益效果为：本发明发现了一种化合物(2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺)(#46-4)的新的合成方法，该方法具有合成步骤少，经济高效的优点；本发明制得的化合物具有较好的抗肿瘤活性，在体外培养肿瘤细胞中，能抑制肿瘤细胞增殖，导致肿瘤细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)上升，进而导致细胞死亡，此外，该化合物对正常细胞毒性较小，具有开发成抗肿瘤药物的潜力。
进一步，三唑并嘧啶化合物的合成方法如下：
Figure BDA0004096110380000021
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：
进一步，步骤(1)中，3-氨基-1,2,4-三氮唑、丙酰乙酸乙酯和冰乙酸的质量体积比为400-450mg：700-750mg：4-6mL。
进一步，步骤(1)中，搅拌条件下加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶液进行析晶。
进一步，步骤(1)中，冰乙酸和混合溶液的体积比为1：2.8-3.2。
进一步，混合溶液中乙酸乙酯和石油醚的体积比为1：1.8-2.2。
进一步，步骤(1)中，采用体积比为1：1.8-2.2乙酸乙酯和石油醚的混合溶液进行洗涤。
进一步，步骤(2)中，白色固体和三氯氧磷的质量体积比为500-550mg：8-12mL。
进一步，步骤(2)中，氮气保护下，于80-100℃条件下搅拌反应3-5h。
进一步，步骤(2)中，倒入冰水中搅拌5-15min。
进一步，步骤(2)中，冰水体积为反应液体积的9-11倍。
进一步，步骤(2)中，采用二氯甲烷萃取2-3次。
进一步，步骤(2)中，将萃取后的有机相合并，依次采用水和饱和食盐水进行洗涤。
进一步，步骤(2)中，采用无水硫酸钠干燥。
进一步，步骤(2)中，干燥后去除干燥剂，再减压浓缩。
进一步，步骤(3)中，红棕色固体粗品、4-硝基苯硫酚、碳酸钾和N,N-二甲基甲酰胺的摩尔体积比为0.8-1.2mmol：1-1.5mmol：1.8-2.2mmol：4-6mL。
进一步，步骤(3)中，加水稀释为原体积的5-6倍。
进一步，步骤(3)中，采用乙酸乙酯萃取2-3次。
进一步，步骤(3)中，将萃取后的有机相合并，依次采用氢氧化钠溶液、水和饱和食盐水进行洗涤。
进一步，氢氧化钠溶液的浓度为0.8-1.2mol/L。
进一步，步骤(3)中，采用无水硫酸钠干燥。
进一步，步骤(3)中，干燥后去除干燥剂再减压浓缩。
进一步，步骤(3)中，采用柱层析进行纯化。
进一步，步骤(4)中，淡黄色固体、钯碳和乙酸乙酯的质量体积比为150-200mg：40-60mg：5-10mL。
进一步，步骤(4)中，在氢气气氛中进行反应。
进一步，步骤(4)中，采用硅藻土过滤。
进一步，步骤(5)中，淡黄色固体粗品、对氯苯氧乙酸、HATU和DIPEA和N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为120-150mg：100-110mg：200-250mg：100-150mg：3-6mL。
进一步，步骤(5)中，采用二氯甲烷萃取2-3次。
进一步，步骤(5)中，将萃取后的有机相合并，采用饱和食盐水进行洗涤。
进一步，步骤(5)中，采用无水硫酸钠干燥。
进一步，步骤(5)中，干燥后去除干燥剂再减压浓缩。
进一步，步骤(5)中，采用柱层析进行纯化。
本发明还提供上述三唑并嘧啶化合物的合成方法合成的三唑并嘧啶化合物。
本发明还提供上述三唑并嘧啶化合物在抗前列腺癌药物制备方面的应用。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的方法简单便捷，只需要五个步骤即可合成出目标产物，具有简单高效的特点，经济高效的合成(2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺)(#46-4)。
2、本发明中提及的化合物具有抗前列腺癌效果，可应用与相关的生物医学领域药物研发，用于前列腺癌的治疗，或作为前体分子开发抗前列腺癌药物。
附图说明
图1为实施例1制得的#46-4抑制前列腺癌细胞PC3增殖图；
图2为实施例1制得的#46-4对前列腺癌细胞PC3的半数抑制浓度；
图3为实施例1制得的#46-4抑制前列腺癌细胞PC3克隆形成图；
图4为实施例1制得的#46-4对正常前列腺细胞PNT1A细胞毒性实验图；
图5为实施例1制得的#46-4抑制前列腺癌细胞PC3增殖图；
图6为实施例1制得的#46-4抑制细胞增殖信号通路图；
图7为实施例1制得的#46-4诱导细胞产生活性氧图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1：
一种三唑并嘧啶化合物，其合成方法包括以下步骤：
(1)制备5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮(3)
将商业购买的3-氨基-1,2,4-三氮唑(1，420mg，5mmol)和丙酰乙酸乙酯(2，720mg，5mmol)混合于5mL的冰乙酸中，于120℃条件下搅拌反应6h，反应完全后，将反应液冷却至室温，搅拌下缓慢加入乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比1：2，15mL)，进行析晶，减压抽滤收集析出来的固体、并用少量乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比1：2)洗涤滤饼，滤饼经真空干燥，制得白色固体，即5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮(574mg，收率70％)；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ13.18(s,1H),8.21(s,1H),5.85(s,1H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),1.23(t,J＝7.5Hz,3H)；
(2)制备7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶(4)
将步骤(1)制得的白色固体(3，516mg，3.1mmol)溶于10mL三氯氧磷中，氮气保护下，于90℃条件下搅拌反应4h，反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢倒入10倍体积的冰水中并搅拌10min，然后用二氯甲烷萃取2次，合并萃取所得有机相，经水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液经减压浓缩，制得红棕色固体粗品(179mg，收率32％)，即7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶；
(3)制备5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(6)
将步骤(2)制得的红棕色固体粗品(4，1mmol)溶于5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入4-硝基苯硫酚(5，182mg，1.2mmol)和碳酸钾(270mg，2mmol)，于60℃条件下搅拌反应2h，反应完全后，将反应液冷却至室温，加水稀释为原体积的5倍，用乙酸乙酯萃取2次，合并萃取所得有机层，经1mol/L氢氧化钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体(186mg，收率62％)，即5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,2H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),6.69(s,1H),2.78(q,J＝7.5Hz,2H),1.19(t,J＝7.5Hz,3H)；
(4)制备4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺(7)
将步骤(3)制得的淡黄色固体(6，180mg，0.6mmol)溶于8mL的乙酸乙酯中，加入钯碳(50mg)，于氢气气氛中，室温条件下反应反应完全后，垫硅藻土过滤，滤液经减压浓缩，制得淡黄色固体粗品(160mg，收率98％)，即4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺；
(5)制备2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺(#46-4)
将步骤(4)制得的淡黄色固体粗品(140mg，0.5mmol)溶于4mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸(107mg，0.6mmol)、HATU(237mg，0.6mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺，130mg，1mmol)，于室温条件下搅拌反应10h，反应完全后，减压浓缩除去溶剂N,N-二甲基甲酰胺，加水稀释溶解残余物，用二氯甲烷萃取2次，合并萃取所得有机层，经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体(69mg，收率31％)，即三唑并嘧啶化合物2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺。
实施例2：
一种三唑并嘧啶化合物，其合成方法包括以下步骤：
(1)制备5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮(3)
将商业购买的3-氨基-1,2,4-三氮唑(1，400mg)和丙酰乙酸乙酯(2，700mg)混合于4mL的冰乙酸中，于110℃条件下搅拌反应7h，反应完全后，将反应液冷却至室温，搅拌下缓慢加入乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比1：1.8，11.2mL)，进行析晶，减压抽滤收集析出来的固体、并用少量乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比1：1.8)洗涤滤饼，滤饼经真空干燥，制得白色固体，即5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ13.18(s,1H),8.21(s,1H),5.85(s,1H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),1.23(t,J＝7.5Hz,3H)；
(2)制备7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶(4)
将步骤(1)制得的白色固体(3，500mg)溶于8mL三氯氧磷中，氮气保护下，于80℃条件下搅拌反应5h，反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢倒入9倍体积冰水中并搅拌5min，然后用二氯甲烷萃取2次，合并萃取所得有机相，经水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液经减压浓缩，制得红棕色固体粗品，即7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶；
(3)制备5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(6)
将步骤(2)制得的红棕色固体粗品(4，0.8mmol)溶于4mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入4-硝基苯硫酚(5，1mmol)和碳酸钾(1.8mmol)，于50℃条件下搅拌反应2.5h，反应完全后，将反应液冷却至室温，加水稀释为原体积的6倍，用乙酸乙酯萃取2-3次，合并萃取所得有机层，经0.8mol/L氢氧化钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体，即5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,2H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),6.69(s,1H),2.78(q,J＝7.5Hz,2H),1.19(t,J＝7.5Hz,3H)；
(4)制备4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺(7)
将步骤(3)制得的淡黄色固体(6，150mg)溶于5mL的乙酸乙酯中，加入钯碳(40mg)，于氢气气氛中，室温条件下反应反应完全后，垫硅藻土过滤，滤液经减压浓缩，制得淡黄色固体粗品，即4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺；
(5)制备2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺(#46-4)
将步骤(4)制得的淡黄色固体粗品(120mg)溶于3mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸(100mg)、HATU(200mg)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺，100mg)，于室温条件下搅拌反应8h，反应完全后，减压浓缩除去溶剂N,N-二甲基甲酰胺，加水稀释溶解残余物，用二氯甲烷萃取2次，合并萃取所得有机层，经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体，即三唑并嘧啶化合物2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺。
实施例3：
一种三唑并嘧啶化合物，其合成方法包括以下步骤：
(1)制备5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮(3)
将商业购买的3-氨基-1,2,4-三氮唑(1，450mg)和丙酰乙酸乙酯(2，750mg)混合于6mL的冰乙酸中，于130℃条件下搅拌反应5h，反应完全后，将反应液冷却至室温，搅拌下缓慢加入乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比为1：2.2，19.2mL)，进行析晶，减压抽滤收集析出来的固体、并用少量乙酸乙酯/石油醚混合溶液(体积比为1：2.2)洗涤滤饼，滤饼经真空干燥，制得白色固体，即5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ13.18(s,1H),8.21(s,1H),5.85(s,1H),2.61(q,J＝7.5Hz,2H),1.23(t,J＝7.5Hz,3H)；
(2)制备7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶(4)
将步骤(1)制得的白色固体(3，550mg)溶于12mL三氯氧磷中，氮气保护下，于100℃条件下搅拌反应3h，反应完全后，将反应液冷却至室温，缓慢倒入11倍体积冰水中并搅拌10min，然后用二氯甲烷萃取3次，合并萃取所得有机相，经水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液经减压浓缩，制得红棕色固体粗品，即7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶；
(3)制备5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(6)
将步骤(2)制得的红棕色固体粗品(4，1.2mmol)溶于6mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入4-硝基苯硫酚(5，1.5mmol)和碳酸钾(2.2mmol)，于70℃条件下搅拌反应1.5h，反应完全后，将反应液冷却至室温，加水稀释为原体积的6倍，用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取所得有机层，经1.2mol/L氢氧化钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体，即5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；1H-NMR(400Hz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,2H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),6.69(s,1H),2.78(q,J＝7.5Hz,2H),1.19(t,J＝7.5Hz,3H)；
(4)制备4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺(7)
将步骤(3)制得的淡黄色固体(6，200mg)溶于10mL的乙酸乙酯中，加入钯碳(60mg)，于氢气气氛中，室温条件下反应反应完全后，垫硅藻土过滤，滤液经减压浓缩，制得淡黄色固体粗品，即4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺；
(5)制备2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺(#46-4)
将步骤(4)制得的淡黄色固体粗品(150mg)溶于6mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸(110mg)、HATU(250mg)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺，150mg)，于室温条件下搅拌反应12h，反应完全后，减压浓缩除去溶剂N,N-二甲基甲酰胺，加水稀释溶解残余物，用二氯甲烷萃取3次，合并萃取所得有机层，经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压浓缩滤液，残余物经柱层析纯化，制得淡黄色固体，即三唑并嘧啶化合物2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺。
试验例
将实施例1制得的三唑并嘧啶化合物2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺，即#46-4，按照如下方法进行性能检测。
一、抑制前列腺癌细胞PC3增殖
将PC3细胞计数按3000个细胞/每孔，接种入96孔板中，接种24h后，分别加入1μmol/L、2μmol/L、3μmol/L的小分子化合物#46-4和等体积的DMSO，采用高内涵分析系统，对各孔细胞进行拍照；然后将培养板置于37℃、5％CO2培养箱中，培养24h，再次用高内涵分析系统再次对同一位置进行拍照，结果见图1。
由图1可知，#46-4具有抑制前列腺癌细胞增殖的能力，且具有剂量依赖性。
将前列腺癌细胞PC3按3000个/孔接种于96孔板中，将细胞置于CO2细胞培养箱中(37℃，5％CO2)培养过夜。实验组分别加入0.08μmol/L、0.16μmol/L、0.32μmol/L、0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的小分子化合物#46-4，对照组加入等体积的DMSO，继续培养48h后，每孔加入20μL MTT溶液，放入细胞培养箱继续孵育4h，弃去培养液，加入200μL DMSO，将细胞培养板置于摇床上使结晶充分溶解(室温下180rpm振摇10min)。用酶标仪(BioTek Cytation5)读取570nm出OD值，然后按下列公式计算细胞抑制率，
Figure BDA0004096110380000111
Figure BDA0004096110380000112
再利用GraphpadPrism 8做出#46-4浓度与相应细胞抑制率的柱状图，并计算出半数抑制浓度(IC50)，结果见图2。
由图2可知，#46-4对前列腺癌细胞PC3的IC50为595±8mol/L。
二、抑制前列腺癌细胞PC3克隆形成
将PC3细胞计数，按500个细胞/每孔接种入6孔板中，接种24h后，分别加入0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L的小分子化合物#46-4和等体积的DMSO，置于37℃、5％CO2培养箱中培养7d；弃掉上清，用4％多聚甲醛固定细胞，随后用结晶紫染色30min，PBS洗涤3次，每次2min，将细胞培养板在室温晾干后，用扫描仪扫描细胞培养板，结果见图3。
由图3可知，#46-4具有抑制前列腺癌克隆形成的能力，且具有剂量依赖性。
三、对正常前列腺细胞PNT1A细胞毒性实验
将正常前列腺细胞PNT1A按3000个/孔接种于96孔板中，将细胞置于CO2细胞培养箱中(37℃，5％CO2)培养过夜。实验组分别加入0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的小分子化合物#46-4，对照组加入等体积的DMSO，继续培养72h后，每孔加入20μL MTT溶液，放入细胞培养箱继续孵育4h，弃去培养液，加入200μL的DMSO，将细胞培养板置于摇床上使结晶充分溶解(室温下180rpm振摇10min)，采用酶标仪(BioTekCytation5)读取570nm处OD值，然后按下列公式计算细胞存活率，
Figure BDA0004096110380000121
再利用Graphpad Prism 8做出#46-4浓度与相应细胞存活率的柱状图，结果见图4。
由图4可知，各浓度#46-4处理的正常前列腺细胞PNT1A，其细胞存活率均不受影响，表明小分子化合物#46-4对正常前列腺细胞毒性较小，具有较高的安全性。
四、抑制前列腺癌细胞PC3增殖
将前列腺癌细胞PC3按10000个/每孔接种于96孔板中，置于细胞培养箱中(37℃，5％CO2)培养过夜，然后加入小分子化合物#46-4，使其终浓度为1μmol/L、2μmol/L和3μmol/L，对照组加入等体积的DMSO，继续培养24h，后续按照说明书，使用Edu细胞增殖检测试剂盒(碧云天，C0078S)检测PC3细胞增殖，简略步骤为：加入EdU使其终浓度为10μmol/L，将细胞放入培养箱继续培养2h，去除培养液，用4％多聚甲醛在室温下固定15min，用PBS清洗细胞3次，加入通透液(含0.3％ Triton X-100的PBS)，室温孵育15min，配置点击反应液，室温下避光进行30min点击反应，去除反应液，用PBS清洗细胞3次，加入Hoechst 33342溶液，室温避光反应10min，去除反应液，用PBS清洗细胞3次。采用倒置荧光显微镜(Olympus，IX73)对每个孔的细胞拍照，结果见图5。
由图5可知，#46-4抑制前列腺癌细胞PC3增殖。且呈现剂量依赖性。
五、抑制细胞增殖信号通路
将前列腺癌细胞PC3按500000个/每孔接种于6孔板中，将细胞置于细胞培养箱中(37℃，5％ CO2)培养过夜，然后加入小分子化合物#46-4，使其终浓度为1μmol/L、2μmol/L和3μmol/L，对照组加入等体积的DMSO，继续培养24h，用细胞裂解液裂解细胞并提取总蛋白，后续进行蛋白质免疫印迹实验，分别用Ras、c-Raf、p-c-Raf、MEK、p-MEK、Erk1/2、p-Erk1/2、tubulin抗体检测对应蛋白的表达量，结果见图6。
由图6可知，#46-4抑制细胞增殖信号通路相关蛋白质Ras、p-C-Raf、p-MEK和p-Erk1/2表达，且呈现剂量依赖性，表明#46-4在前列腺癌细胞中抑制细胞增殖信号通路。
六、诱导细胞产生活性氧(ROS)
将前列腺癌细胞PC3按10000个/每孔，接种于96孔板中，将细胞置于细胞培养箱中(37℃，5％CO2)培养过夜，然后加入小分子化合物#46-4，使其终浓度为1μmol/L、2μmol/L和3μmol/L，对照组加入等体积的DMSO，继续培养6h，再使用活性氧检测试剂盒(碧云天，S0033S)检测细胞中的ROS，后续按照说明书步骤操作，结果见图7。
由图7可知，#46-4诱导细胞中产生ROS，且产生ROS的细胞数量与#46-4浓度成正比。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将3-氨基-1,2,4-三氮唑和丙酰乙酸乙酯混合于冰乙酸中，于110-130℃条件下搅拌反应5-7h，然后冷却至室温，再析晶、减压抽滤、洗涤和真空干燥，制得白色固体，即5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7(4H)-酮；
(2)将步骤(1)制得的白色固体溶于三氯氧磷中，于80-100℃条件下搅拌反应3-5h，然后冷却至室温，倒入冰水中搅拌，再进行萃取、洗涤、干燥和减压浓缩，制得红棕色固体粗品，即7-氯-5-乙基-[1,2,4]三唑[1,5-a]嘧啶；
(3)将步骤(2)制得的红棕色固体粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入4-硝基苯硫酚和碳酸钾，于50-70℃条件下搅拌反应1.5-2.5h，然后冷却至室温，加水稀释，再进行萃取、洗涤、干燥、减压浓缩和纯化，制得淡黄色固体，即5-乙基-7-((4-硝基苯基)硫代)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(4)将步骤(3)制得的淡黄色固体溶于乙酸乙酯中，加入钯碳，于室温条件下反应，然后过滤和减压浓缩，制得淡黄色固体粗品，即4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯胺；
(5)将步骤(4)制得的淡黄色固体粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入对氯苯氧乙酸、HATU和DIPEA，于室温条件下搅拌反应8-12h，然后减压浓缩，加水稀释溶解，再进行萃取、洗涤、干燥、减压浓缩和纯化，制得三唑并嘧啶化合物，即2-(4-氯苯氧基)-N-(4-((5-乙基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)硫代)苯基)乙酰胺。
2.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，3-氨基-1,2,4-三氮唑、丙酰乙酸乙酯和冰乙酸的质量体积比为400-450mg：700-750mg：4-6mL。
3.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(1)中，搅拌条件下加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶液进行析晶。
4.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(2)中，白色固体和三氯氧磷的质量体积比为500-550mg：8-12mL。
5.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(3)中，红棕色固体粗品、4-硝基苯硫酚、碳酸钾和N,N-二甲基甲酰胺的摩尔体积比为0.8-1.2mmol：1-1.5mmol：1.8-2.2mmol：4-6mL。
6.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，淡黄色固体、钯碳和乙酸乙酯的质量体积比为150-200mg：40-60mg：5-10mL。
7.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(4)中，在氢气气氛中进行反应。
8.根据权利要求1所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法，其特征在于，步骤(5)中，淡黄色固体粗品、对氯苯氧乙酸、HATU和DIPEA和N,N-二甲基甲酰胺的质量体积比为120-150mg：100-110mg：200-250mg：100-150mg：3-6mL。
9.权利要求1-8任一项所述的三唑并嘧啶化合物的合成方法合成的三唑并嘧啶化合物。
10.权利要求9所述的三唑并嘧啶化合物在抗前列腺癌药物制备方面的应用。
CN202310166475.7A 2023-02-24 2023-02-24 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用 Pending CN116178375A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310166475.7A CN116178375A (zh) 2023-02-24 2023-02-24 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310166475.7A CN116178375A (zh) 2023-02-24 2023-02-24 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116178375A true CN116178375A (zh) 2023-05-30

Family

ID=86434325

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310166475.7A Pending CN116178375A (zh) 2023-02-24 2023-02-24 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116178375A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102985416B (zh) 制备凝血酶特异性抑制剂的方法
CA3080138A1 (en) Processes for the resolution of benzodiazepin-2-one and benzoazepin-2-one derivatives
CA2930203A1 (en) N-benzyl tryptanthrin derivative, and preparation method and application thereof
CA2711645C (en) Process for the preparation of 8-methoxy-quinolone-carboxylic acids
CN109369724A (zh) 一种有机砷化合物及其用途
CN103360398B (zh) 一种三唑并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法与应用
CN110483418B (zh) 3-取代喹唑啉酮-2-甲酰胺衍生物及其制备方法和应用
Shukla et al. Synthesis, characterization and in vitro biological evaluation of a series of 1, 2, 4-triazoles derivatives & triazole based schiff bases
CN115197225A (zh) 一种五元杂环并喹唑啉酮类化合物及其制备方法
CN116178375A (zh) 一种三唑并嘧啶化合物及其合成方法和应用
MXPA02002356A (es) Intermediarios para la produccion de derivados de acido quinoloncarboxilico.
CN112250682B (zh) 一种芳杂环修饰的萘酰亚胺衍生物及其制备方法和用途
CN110078706B (zh) 一种伊马替尼衍生物及其制备方法和用途
CN110305128B (zh) 5-氨基苯并[b][1,8]萘啶类化合物的制备方法和应用
CN113816959A (zh) 一种以恩诺沙星为原料制备的异白叶藤碱类似物及其制备方法和应用
TWI617562B (zh) 用於由４－胺基－２，５－二甲氧基嘧啶製備２－胺基－５，８－二甲氧基［１，２，４］三唑并［１，５－ｃ］嘧啶的改良方法
CN109705117A (zh) 三环类化合物、其制备方法及用途
CN115109083B (zh) Pyridostatin类化合物及其制备方法、应用、药物组合物
CN110317171B (zh) 4-二硫代甲酸哌嗪-1,8-萘酰亚胺衍生物及其制备方法和应用
CN114853729B (zh) 一种喹唑啉-2-酮类化合物及其制备方法和应用
WO1997019934A1 (en) Quinoxaline compounds, pharmaceutical preparations containing them and a process for the preparation thereof
CN115340502B (zh) Bcl-xl抑制剂及其制备方法和用途
CN115232134B (zh) 一种伐地那非类似物及其合成方法和应用
CN111943979B (zh) 一种异环磷酰胺中间体及其制备方法和应用
CN115322208B (zh) 2-氨基噻唑类衍生物及其制备方法和医药用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination