具体实施方式
为了示例性目的,可以使用下列实施例,以下实施例仅用于解释说明本发明的技术方案,并不意图将本发明限制为这些实施例。
实施例1
酰胺AN-1的合成:
步骤一:
在氮气保护下,将水杨酸甲酯(1-1,5.0g),N-Boc-D-丙氨醇(1-1a,5.76g),偶氮二甲酸二异丙酯(7.30g)与三苯基膦(9.48g)溶解于无水THF(50mL),室温反应过夜。TLC显示反应完全,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,过滤旋干得粗产品,柱层析分离纯化的淡黄色液体(1-2,7.6g),LC-MS:332.2[M+Na]+。
步骤二:
原料(1-2,3.0g)溶于二氯甲烷(20mL)中,加入4N盐酸/二氧六环(20mL),室温反应过夜,TLC显示反应完全,加水淬灭,用乙酸乙酯洗涤水相,水相用1M NaOH 调pH至9,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,过滤旋干得粗产品1-3,LC-MS:210.1 [M+H]+。
步骤三:
原料(1-3,1.0g)溶于THF(10mL)中,加入TEA(2mL),80度反应过夜,TLC 显示反应完全,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,过滤旋干得粗产品,柱层析分离纯化的淡黄色液体(1-4,700mg),LC-MS:178.1[M+H]+。
步骤四:
原料(1-4,300mg)溶于无水THF(10mL)中,加入氢化铝锂(3.0eq.),80度反应2小时,TLC显示反应完全,加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,过滤旋干得粗产品,柱层析分离纯化的淡黄色液体(1-5,230mg)。
步骤五:
在冰浴下,溴乙酰溴(1.1eq.)的二氯甲烷溶液滴加到原料(1-5,230mg)与三乙胺(1.5eq.)的二氯甲烷中,反应液在0℃下反应1小时,TLC显示反应完全,加饱和的碳酸氢钠溶液,用二氯甲烷萃取,无水硫酸钠干燥,过滤旋干,粗产品用柱层析提纯得无色油状液体(AN-1,390mg),LC-MS:284.1[M+H]+。
实施例2
酰胺AN-2的合成:
步骤一:
原料(2-1,250mg)溶解在二氯甲烷(20mL)中,加入BOC酸酐(1.05eq.),反应在室温下搅拌30分钟后旋干得粗品(2-2,420mg),直接用于下一步。
步骤二:
粗品(2-2,400mg)溶解在甲醇(20mL)中,加入醋酸(150mg)和37%甲醛水溶液(55mg),反应在室温下搅拌10分钟后加入氰基硼氢化钠(315mg),反应完全后,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,干燥,旋干得粗品(2-3,300mg)。
步骤三:
原料(2-3,300mg)加入三氟醋酸(2mL),搅拌20分钟后减压蒸馏除去多余的三氟醋酸,加入2N氢氧化钠水溶液(20mL)后,用二氯甲烷萃取,干燥,旋干得粗品(2-4, 150mg)。
步骤四:
原料(2-4,150mg)溶解在无水二氯甲烷(20mL),加入溴乙酰溴(565mg),反应在室温下搅拌半小时,加水淬灭,分层直接柱层析得产品(AN-2,150mg),LC-MS:283.1 [M+H]+。
实施例3
酰胺AN-3的合成:
步骤一:
硫代水杨酸甲酯(3-1,1.0g)溶解在无水DMF(10mL)中,冰浴下冷却下慢慢加入NaH(60%,480mg)。搅拌10分钟后,加入叠氮化合物(3-1a,1.11g)后,升温到室温继续搅拌半小时后,TLC显示反应完全。冰水浴条件下,慢慢加水萃灭,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得油状物3-2(700mg),粗品直接用于下一步。
步骤二:
底物(3-2,700mg)溶解在四氢呋喃(20mL)中,加入三苯基膦(1.57g)。反应液55 度搅拌1小时后。TLC检测原料消失。然后加入5mL水,继续搅拌2小时。TLC检测中间体完全消失。反应液冷却到室温,倒入到水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得黄色固体3-3(415mg)。
步骤三:
底物(3-3,400mg)溶解在无水甲醇(20mL)中,冰水浴条件下加入甲醇钠(810mg),然后室温搅拌过夜。TLC检测反应完全。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得黄色油状物3-4(320mg),粗品直接用于下一步。
步骤四:
室温条件下,将底物3-4(320mg)溶解在无水四氢呋喃(20mL),分批加入四氢铝锂(190mg)。反应液加热回流搅拌3小时,TLC检测原料消失。反应液冷却后,小心加入水淬灭,析出固体过滤,滤液用乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得油状物3-5(200mg),粗品直接用于下一步。
步骤五:
将底物3-5(200mg)溶解在无水二氯甲烷(20mL)中,冰浴下加入溴乙酰溴(505mg),室温搅拌1小时,TLC检测还有少量原料未反应完,补加三乙胺(152mg),搅拌0.5小时后,TLC显示原料反应完全。反应液加水萃灭,分离有机相,水相用二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析得到目标产物淡黄色油状物AN-3(215mg)。LC-MS:286.1[M+H]+。
实施例4
酰胺AN-4的合成:
原料4-1(120mg)溶解在无水二氯甲烷(10mL)中,室温下加入溴乙酰溴(505mg),搅拌30分钟,TLC显示反应完成。反应液倒入冰水中,分离有机相,水相用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析得 AN-4(150mg)。LC-MS:270.1[M+H]+。
实施例5
酰胺AN-5的合成:
原料5-1(400mg,盐酸盐)溶解在水中,用2N的NaOH水溶液调节pH为11~12,用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和盐水洗,干燥浓缩到约20mL。溴乙酰溴(1.2 g)在冰水浴冷却下慢慢加入,然后室温下搅拌30分钟,TLC显示反应完成。反应液倒入冰水中,分离有机相,水相用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析得AN-5(416mg)。LC-MS:268.1[M+H]+。
实施例6
酰胺AN-6的合成:
步骤一:
将2-氰基苯甲醛(6-1,3.0g)和1-三苯基膦-2-丙酮(6-1a,11.0g)的室温下加入到无水四氢呋喃(80mL)中,然后反应液加热到50度下反应2小时。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入到冰水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析分离纯化的淡黄色固体(6-2,3.0g)。
步骤二:
底物原料6-2(3.0g),10%Pd/C(600mg)溶解在甲醇(80mL)中,氮气置换3次,氢气置换2次后在氢气(1.5atm)条件下搅拌2天。TLC显示反应结束,小心过滤除去 Pd/C,有机相浓缩直接得到6-3(2.8g),粗品直接用于下一步。LC-MS:162.2[M+H]+。
步骤三:
在冰浴下,将溴乙酰溴(3.5g)的二氯甲烷溶液滴加到底物6-3(2.8g)的二氯甲烷溶液中,并搅拌3小时。TLC显示反应完全,旋干,粗品柱层析分离纯化得淡黄色油状液体AN-6(700mg)。LC-MS:282.1[M+H]+。
对消旋体AN-6进行手性拆分,得到手性酰胺AN-6-1和手性酰胺AN-6-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相90%正己烷+10%乙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间21.8分钟;峰2,出峰时间23.9分钟。
实施例7
酰胺AN-7的合成:
原料7-1(300mg)溶解在无水二氯甲烷(15mL)中,室温下加入溴乙酰溴(1.21g),搅拌1小时,TLC显示反应完成。反应液倒入冰水中,分离有机相,水相用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析得 AN-7(355mg)。LC-MS:268.1[M+H]+。
实施例8
酰胺AN-8和AN-12的合成:
步骤一:
α-溴代环丙乙酮(8-1,15.0g),三苯基膦(28.5g)加入到甲苯(500mL)中,加热回流6小时。TLC显示反应完全,反应液降温到室温,固体过滤并用200mL乙醚分批洗涤。固体干燥后加入到350mL二氯甲烷和200mL水的混合溶液中,然后加入5N氢氧化钠溶液(250mL),于室温下搅拌4小时后,有机相分离,水相用二氯甲烷萃取有机相。合并有机相用水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,干燥得8-2(23.2g)。
步骤二:
将底物8-2(20.0g)和2-醛基苯甲酸甲酯(8-2a,8.58g)加入到250mL四氢呋喃中,反应液加热回流反应5小时,TLC显示反应完全,反应液浓缩干,粗产品直接硅胶柱层析得产物8-3(9.21g)。
步骤三:
将底物8-3(9.0g)溶解在100mL甲醇中,加入10%Pd/C(1.0g)。反应液氮气置换2次后,氢气置换2次,然后在氢气球条件下,室温下搅拌过夜。TLC显示反应完全,过滤除去Pd/C,Pd/C用甲醇洗涤。合并有机相浓缩得到还原产物8-4(粗品),可直接用于下一步。
步骤四:
将底物8-4溶解到100mL甲苯中,然后依次加入(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(8-4a,3.15 g),钛酸四乙酯(7.84g)。反应液加热回流搅拌6小时后,TLC显示反应完成。反应液倒入冰水中,搅拌30分钟后,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析得产物8-5(2.5g)。
步骤五:
将底物8-5(2.5g)溶解在甲醇(30mL)中,在冰水浴下缓慢加入硼氢化钠(568mg),反应在冰浴中搅拌半小时后TLC显示原料反应完全;反应液慢慢加水淬灭,然后乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得产物8-6(2.0g),可直接做下一步。
步骤六:
将底物8-6(2.0g)溶解在甲醇(30mL)中,加入饱和的HCl(g)/甲醇溶液(10mL), 反应液在室温下搅拌半小时;TLC显示原料反应完全。反应液直接旋干,然后用饱和碳酸氢钠调节pH至碱性,二氯甲烷萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得氨基化合物8-7(1.2g),粗品直接做下一步。LC-MS:234.4[M+H]+。
步骤七:
将底物8-7(1.2g)溶解在甲醇(30mL)中,室温条件下慢慢加入甲醇钠(555mg),反应液在70度下搅拌3小时;TLC显示反应完全;反应液冷却到室温,然后倒入冰水中,水相用乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物8-8 (830mg),粗品直接做下一步。LC-MS:202.2[M+H]+。
步骤八:
将底物8-8(830mg)溶解在无水四氢呋喃(30mL)中,加入四氢铝锂(380mg),反应液体在70度下搅拌3小时;TLC显示反应完全;反应液冷却到室温,小心慢慢加水淬灭,水相乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到产物 8-9和8-10的混合物(685mg)直接做下一步。
步骤九:
将混合物8-9和8-10(685mg)溶解在无水二氯甲烷(30mL)中,冰水浴条件下慢慢加入溴乙酰溴(2.22g),反应液然后在室温下搅拌1小时后;TLC显示反应完全,反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离得到AN-8(240mg),LC-MS:308.1[M+H]+;AN-12(440mg),LC-MS: 310.1[M+H]+。
对消旋体AN-8进行手性拆分,得到手性酰胺AN-8-1和手性酰胺AN-8-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相90%正己烷+10%乙醇等梯度,波长220nm;总时间30分钟;1号峰,出峰时间21.4分钟;2号峰,出峰时间25.9分钟。
对消旋体AN-12进行手性拆分,得到手性酰胺AN-12-1和手性酰胺AN-12-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;总时间40分钟;峰1,出峰时间21.6分钟;峰2,出峰时间24.9分钟。
实施例9
酰胺AN-9的合成:
步骤一:
将1-溴-3-甲基-2-丁酮(9-1,3.30g)溶于甲苯(35mL)中,室温下加入三苯基膦(5.25 g),反应液加热回流反应3小时,TLC显示反应完全,冷却后,将析出的固体过滤,甲苯洗涤。将固体干燥后加入到70mL二氯甲烷和40mL水的混合溶液中,然后加入5N 氢氧化钠溶液(50mL),于室温下搅拌4小时后,有机相分离,水相用二氯甲烷萃取有机相,合并有机相用水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,干燥得白色固体9-2(4.8 g)。
步骤二:
将2-醛基苯甲酸甲酯(8-2a,1.5g)和底物9-2(4.80g)溶于四氢呋喃(20mL)中加热回流搅拌反应4小时,TLC显示大部分原料反应完全,直接浓缩柱层析得黄色油状液体(9-3,1.34g)。
步骤三:
将底物9-3(1.34g)溶解在20mL甲醇中,加入10%Pd/C(200mg)。反应液氮气置换2次后,氢气置换2次,然后在氢气球条件下,室温下搅拌过夜。TLC显示反应完全,过滤除去Pd/C,Pd/C用甲醇洗涤。合并有机相浓缩得到产物9-4(1.34g),粗品直接用于下一步。
步骤四:
往甲苯(100mL)中加入原料9-4(5.00g),钛酸四乙酯(7.0g),R-叔丁基亚磺酰胺(8-4a,2.8g)。110度搅拌3小时后TLC检测反应完全。反应液冷却到室温,倒入冰水中过滤,滤饼用乙酸乙酯洗涤。水相乙酸乙酯萃取,合并有机相,加入2N稀盐酸洗涤,饱和食盐水洗后,干燥浓缩得粗品。粗品溶解在甲醇(60mL),冰水浴条件下加入硼氢化钠(1.0g),室温搅拌30分钟后加入饱和食盐水破坏,水相乙酸乙酯萃取。合并有机相,盐水洗一次后,干燥浓缩得到产物9-5,粗品可直接用于下一步。
步骤五:
将底物9-5中加入氯化氢的甲醇溶液(10mL,4M)。室温搅拌30分钟后,TLC检测反应完全。浓缩加入水和乙酸乙酯搅拌10分钟。有机相水洗1次后,合并水相。水相调至中性,乙酸乙酯萃取,合并有机相用水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得产物9-6。LC-MS:236.2[M+H]+。
步骤六:
将底物9-6(1.2g)溶解在甲醇(30mL),室温下加入甲醇钠(2.75g),然后加热60 度搅拌3小时后,TLC显示原料反应完全。冷却到室温,反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相用水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到环合产物9-7。LC-MS: 204.2[M+H]+。
步骤七:
将底物9-7溶解在无水四氢呋喃(20mL),氮气保护四氢铝锂(950mg)。反应液加热回流36小时后,TLC检测原料还有部分未反应完。冷却至室温后,加入15%氢氧化钠水溶液直到未有气泡冒出。加入水和乙酸乙酯搅拌过滤,滤饼用乙酸乙酯洗。合并有机相,加入4N盐酸搅拌10分钟后,水相调至中性,乙酸乙酯萃取,合并有机相用水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到产物9-8(570mg),粗品直接用于下一步。LC-MS: 190.2[M+H]+。
步骤八:
将底物9-8(570mg,粗品)溶解在二氯甲烷(20mL)中,加入溴乙酰溴(910mg)。室温搅拌1小时后。TLC检测反应完全。反应液倒入水中,分离有机相,水相二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析分离得到AN-9 (620mg)。LCMS:310.1[M+H]+。
对消旋体AN-9进行手性拆分,得到手性酰胺AN-9-1和手性酰胺AN-9-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相90%正己烷+10%异丙醇等梯度,波长220nm,总时间35分钟;峰1,出峰时间21.7分钟;峰2,出峰时间25.5分钟。
实施例10
酰胺AN-10的合成:
步骤一:
2-溴-5-氟苯甲醛(10-1,50g),乙二醇(150mL),对甲苯磺酸(1.0g)溶解在甲苯(100mL)中,加热100度搅拌5小时后,TLC检测原料基本反应完全。冷却至室温,乙酸乙酯稀释后,加入盐水搅拌,分液。水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,盐水洗涤,无水硫酸钠干燥浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到油状物10-2(48.5g)。
步骤二:
将底物10-2(20.0g),三(二亚苄基丙酮)二钯(750mg),三苯基膦(2.36g)和氰化锌(19.1g)溶解在无水NMP(100mL)。反应液在氮气保护下100度搅拌3小时,TLC 检测原料反应完全。反应液冷却到室温后用乙酸乙酯稀释,固体过滤并用乙酸乙酯洗涤,有机相用水洗,饱和盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到白色固体10-3(8.72g)。
步骤三:
将底物10-3(8.72g)溶解在1,4-二氧六环(100mL)中,加入浓盐酸(33mL)。反应液室温搅拌过夜。TLC检测原料反应完全。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相用水洗,饱和盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析分离得到产物10-4 (6.32g)。
步骤四:
将底物10-4(6.70g),磷叶立德试剂(10-4a,18.64g)溶解在四氢呋喃(50mL) 加热回流条件下度搅拌2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却,直接浓缩,粗品硅胶柱层析分离得到淡黄色液体10-5(7.67g)。
步骤五:
原料10-5(5.71g)溶解在甲醇(80mL)中,加入10%Pd/C(500mg),置换氢气后在氢气下搅拌过夜;反应完全后,抽滤除去Pd/C,滤饼用少量甲醇洗涤,合并滤液并加入雷尼镍(800mg)和TEA(0.5mL),置换氢气后在氢气下40度搅拌过夜;反应完全后,抽滤,滤饼用甲醇洗涤,合并滤液,得到产物10-6的甲醇溶液粗品直接用于下一步。LC-MS: 196.1[M+H]+。
步骤六:
将在上一步产物10-6的甲醇溶液粗品加入醋酸(1mL),室温下加入氰基硼氢化钠(3.14g),反应液在室温下搅拌1小时;TLC显示反应结束,反应液倒入冰水中,2N NaOH 水溶液调节pH至碱性后用二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到粗品10-7直接用于下一步。LC-MS:180.2[M+H]+。
步骤七:
将在上一步粗品10-7溶解在二氯甲烷(50mL)中,加入溴乙酰溴(10.1g)并在室温下搅拌1小时;TLC显示反应完成,反应液倒入水中,分离有机相,水相二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析分离得到AN-10(2.2 g)。LC-MS:300.1[M+1]+。
对消旋体AN-10进行手性拆分,得到手性酰胺AN-10-1和手性酰胺AN-10-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相90%正己烷+10%乙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间18.8分钟;峰2,出峰时间20.5分钟。
实施例11
酰胺AN-11的合成:
步骤一:
将原料11-1(6.7g),磷叶立德试剂(11-1a,18.6g)溶解在四氢呋喃(50mL)加热回流条件下度搅拌2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却,直接浓缩,粗品硅胶柱层析分离得到淡黄色液体11-2(7.67g)。
步骤二:
将底物11-2(5.71g)溶解在甲醇(80mL)中,加入10%Pd/C(500mg),置换氢气后在氢气下搅拌过夜;反应完全后,抽滤除去Pd/C,滤饼用少量甲醇洗涤,合并滤液并加入雷尼镍(800mg)和三乙胺(0.5mL),置换氢气后在氢气下40度搅拌过夜;反应完全后,抽滤,滤饼用甲醇洗涤,合并滤液,得到产物11-3的甲醇溶液粗品直接用于下一步。
步骤三:
在上一步产物11-3的甲醇溶液中加入醋酸(1mL),室温下加入氰基硼氢化钠(3.14g),反应液在室温下搅拌1小时;TLC显示反应结束,反应液倒入冰水中,2N NaOH水溶液调节pH至碱性后用二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到粗品11-4直接用于下一步。LCMS:206.2[M+H]+。
步骤四:
将粗品11-4溶解在二氯甲烷(50mL)中,加入溴乙酰溴(10.09g)并在室温下搅拌1小时;TLC显示反应完成,反应液倒入水中,分离有机相,水相二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析分离得到AN-11(2.21g)。 LCMS:326.1[M+H]+。
对消旋体AN-11进行手性拆分,得到手性酰胺AN-11-1和手性酰胺AN-11-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间23.4分钟;峰2,出峰时间26.3分钟。
实施例12
酰胺AN-13的合成:
步骤一:
2-溴苯腈(12-1,20g),丙烯酸乙酯(12-1a,22.03g),二异丙基乙胺(42.6g)溶解在干燥DMF(100mL)中,醋酸钯(494mg),以及三(邻甲基苯基)磷(1.0g)加入后,反应液在氮气条件下加热100度搅拌8小时。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品用石油醚(80mL)/乙酸乙酯(20mL)混合溶剂溶解,析出固体过滤,少量石油醚洗涤,干燥得到产物12-2(17.13g)。
步骤二:
原料12-2(10.0g)溶解在四氢呋喃与正己烷(100mL/50mL)混合溶剂中,(三氟甲基) 三甲基硅烷(12-2a,14.2g)和3mL 3N的TBAF的四氢呋喃溶液,反应液在室温下反应过夜后,补加(三氟甲基)三甲基硅烷(14.2g)和3mL 3N的TBAF的四氢呋喃溶液继续反应3小时。TLC显示原料基本反应完全。反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品硅胶柱层析分离得到中间体(14.0 g)。粗产品溶解在四氢呋喃(30mL)中,在室温下加入4M HCl(30mL),30℃搅拌3 小时,TLC显示反应完全。加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品硅胶柱层析分离得到12-3(6.5g)。
步骤三:
底物12-3(3.50g)溶解在甲醇(100mL)中,加入10%Pd/C(300mg),置换氢气后在氢气下搅拌过夜;反应完全后,小心抽滤除去Pd/C,滤饼用少量甲醇洗涤。合并滤液加入雷尼镍(200mg)和TEA(0.5mL),置换氢气后在氢气下40度搅拌过夜;反应完全后,抽滤,滤饼用少量甲醇洗涤,合并滤液得到产物12-4的甲醇溶液,直接用于下一步。
步骤四:
室温条件下将产物12-4的甲醇溶液中加入醋酸(1mL)和氰基硼氢化钠(1.89g),反应液在室温下搅拌1小时后TLC显示反应完全;反应液倒入冰水,加入2N稀盐酸调节pH为1~2,用乙酸乙酯萃取,水相用2N NaOH水溶液调节pH至碱性后用二氯甲烷萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到粗品12-5(700mg)直接用于下一步。
步骤五:
将粗品12-5(700mg)溶解在二氯甲烷(50mL)中,加入溴乙酰溴(1.41g)并在室温下搅拌过夜;TLC显示反应完成,加水淬灭,分液,水相二氯甲烷萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析得AN-13(420mg)。LC-MS:336.0[M+1]+
对消旋体AN-13进行手性拆分,得到手性酰胺AN-13-1和手性酰胺AN-13-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相90%正己烷+10%乙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间15.1分钟;峰2,出峰时间18.2分钟。
实施例13
酰胺AN-14的合成:
步骤一:
2-溴-4-氟苯甲腈(13-1,30.0g),丙烯酸乙酯(12-1a,32mL)溶于干燥DMF(200 mL)中,二异丙基乙胺(44mL),醋酸钯(494mg),与三(邻甲基苯基)磷(1.0g)加入后,反应液在氮气条件下加热100度搅拌4小时。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品硅胶柱层析分离得到产物13-2(24.2g)。
步骤二:
在氮气保护下,将底物13-2(8.0g)与(三氟甲基)三甲基硅烷(12-2a,7.82g)溶解在四氢呋喃(100mL)与正己烷(50mL)的混合溶剂中,慢慢滴加1N TBAF的四氢呋喃溶液(3mL),反应液在室温下反应过夜,TLC显示未反应完全,补加(三氟甲基)三甲基硅烷(7.82g),1N TBAF的四氢呋喃溶液(3mL)溶液,室温下继续反应3小时,TLC 显示还剩少量原料。反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品硅胶柱层析分离得到中间体(3.0g)。粗产品溶解在四氢呋喃(20 mL)中,在室温下加入TFA水溶液(50%)(30mL),30℃搅拌3小时,TLC显示反应完全。加水淬灭,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗产品硅胶柱层析分离得到产物13-3(2.21g)。
步骤三:
将底物13-3(2.0g)溶解在甲醇(20mL)中,加入10%Pd/C(200mg),置换氢气后在氢气下搅拌过夜;小心抽滤除去Pd/C,滤饼用少量甲醇洗涤。合并滤液加入雷尼镍(200 mg)和TEA(0.5mL),置换氢气后在氢气下40度搅拌过夜;反应完全后,抽滤,滤饼用少量甲醇洗涤,合并滤液得到产物13-4的甲醇溶液,直接用于下一步。
步骤四:
室温条件下将产物13-4的甲醇溶液中加入醋酸(0.5mL)和氰基硼氢化钠(0.96g),反应液在室温下搅拌1小时后TLC显示反应完全;反应液倒入冰水,加入2N稀盐酸调节 pH为1-2,用乙酸乙酯萃取,水相用2N NaOH水溶液调节pH至碱性后用二氯甲烷萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到粗品13-5(330mg),可直接用于下一步。
步骤五:
将粗品13-5(330mg)溶解在二氯甲烷(50mL)中,加入溴乙酰溴(705mg)并在室温下搅拌过夜;TLC显示反应完成,加水淬灭,分液,水相二氯甲烷萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,干燥,浓缩。粗产品硅胶柱层析得AN-14(360mg)。LC-MS:354.1[M+1]+
对消旋体AN-14进行手性拆分,得到手性酰胺AN-14-1和手性酰胺AN-14-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相97%正己烷+3%乙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间25.1分钟;峰2,出峰时间29.3分钟。
实施例14
酰胺AN-15的合成:
步骤一:
将5-氟-2-羟基苯腈(14-1,2.0g),α-溴代环丙乙酮(8-1,4.76g)和碳酸钾(4.04g)溶解在丙酮(60mL)中,反应液在50℃下反应3小时,TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,过滤除去盐,滤液直接旋干,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体14-2(3.01 g)。
步骤二:
将底物14-2(3.00g),TEA(0.5mL)溶解在甲醇(60mL)中,加入雷尼镍(880mg),置换氢气后在氢气下40度搅拌3小时;TLC显示反应完全,抽滤除去雷尼镍,滤液中加水,用HCl(1M)调至酸性,水相用乙酸乙酯萃取,之后用1N NaOH溶液调至碱性,然后用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到淡黄色油状液体 14-3(1.7g),粗品直接用于下一步。
步骤三:
将底物14-3(1.7g)溶于甲醇(50mL)中,加入氰基硼氢化钠(940mg)与醋酸(0.5mL)室温条件下加入,室温搅拌30分钟后,TLC显示反应结束。反应液中倒入水中,用1N稀盐酸调至酸性,水相用乙酸乙酯萃取后用1N氢氧化钠溶液调至碱性,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到淡黄色油状液体14-4 (1.1g),粗品直接用于下一步。
步骤四:
将底物14-4(1.1g),三乙胺(860mg)溶解在二氯甲烷(30mL)中,在冰水浴中慢慢加入溴乙酰溴(1.31g),然后在室温下反应30分钟,TLC显示反应完全。反应液倒入冰水中,分离有机相,水相用二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,加水淬灭,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到AN-15(610mg)。LCMS:328.1 [M+1]+
对消旋产物AN-15进行手性拆分,得到手性酰胺AN-15-1和手性酰胺AN-15-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相96%正己烷+4%乙醇等梯度,波长254nm,总时间60分钟;峰1,出峰时间28.6分钟;峰2,出峰时间42.6分钟。
实施例15
螺环SP-1的合成:
步骤一:
将5-溴茚酮(15-1,30.0g),碳酸铯(90.0g),乙酰胺(16.7g)溶解在无水1,4-二氧六环(400mL),氮气保护下条件下加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.6g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(700mg),混合物在氮气下加热至100℃搅2小时,TLC显示原料消失。反应液冷却到室温,固体过滤,固体用二氯甲烷洗涤,浓缩溶剂,残留倒入冰水中,用二氯甲烷萃取,合并有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得粗品15-2(26.0 g),直接用于下一步。LC-MS:190.1[M+H]+。
步骤二:
所得粗品15-2(26.0g)溶解在甲苯(125mL)中加入乙腈(125mL),在室温下加入三甲基氰硅烷(15.5g)和碘化锌(2.26g),混合物升温到75度搅拌4小时。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物15-3(20.5g)。LC-MS:289.1[M+H]+。
步骤三:
将底物15-3(20.5g)溶剂在无水乙醇(100mL),在0度下慢慢通入干燥的氯化氢气体5小时,然后30度下减压蒸馏除去大部分乙醇后,用乙醚洗涤,旋干后得到粗品15-4,直接用于下一步。
步骤四:
将粗品15-4溶解在无水四氢呋喃(100mL)中,在0度下缓慢滴加三乙胺(18.52g),滴加完成后,三光气(5.97g)溶解在四氢呋喃(50mL)中并滴加到反应中;反应在0度下搅拌1小时后,加入1N HCl(20mL)并继续搅拌半小时;TLC显示反应完全,反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相用饱和碳酸氢钠洗涤,水相用少量乙酸乙酯萃取后用1N HCl调节pH至3~4左右,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。得到粗品15-5(6.81g)。LC-MS:259.1[M-H]-。
步骤五:
将底物15-5(25.0g)溶解在甲醇(50mL)中,加入6N HCl(100mL)反应液在 75度下搅拌3小时;TLC显示反应完全。反应液冷却到室温,用饱和碳酸氢钠调节pH 至中性;乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物15-6(18.1g)。
步骤六:
将底物15-6(14.0g)溶解在无水四氢呋喃(100mL),加入对硝基氯甲酸苯酯(14.2g),反应在室温下搅拌半小时。甲胺盐酸盐(13.0g)溶解在甲醇(100mL)加入TEA(32.5 g),搅拌10分钟后,将上面的反应液加入,混合物在室温下继续搅拌1小时后,TLC显示反应完全;反应液倒入冰水中,用1N HCl调节pH至3~4,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到SP-1(10.2g)。LC-MS: 276.1[M+H]+。
对消旋螺环SP-1进行手性拆分,得到手性螺环SP-1-1和手性螺环SP-1-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:15mL/min,流动相80%正己烷+20%异丙醇等梯度,波长220nm,总时间30分钟;峰1,出峰时间13.6分钟;峰2,出峰时间18.4分钟。
实施例16
螺环SP-2的合成:
步骤一:
5-氨基茚酮(16-1,2.30g)溶解在无水四氢呋喃(20mL),加入对硝基氯甲酸苯酯(3.63 g),反应在室温下搅拌半小时,TLC显示反应完全。甲胺盐酸盐(5.40g)溶解于甲醇(30 mL),加入三乙胺(8.10g),室温下搅拌10分钟后,将上面的反应液加入,混合物在室温下继续搅拌1小时后,TLC显示反应完全;反应液倒入冰水中,用1N HCl调节pH至 3~4,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到16-2(1.52g)。LC-MS:205.1[M+H]+。
步骤二:
将底物16-2(1.52g),三甲基氰硅烷(3.0g),氟化铵(3.0g),碳酸铵(7.50g)溶解在氨水(30mL)与乙醇(60mL)的混合液在60度下反应48小时,LC-MS显示剩30%原料。旋干乙醇,加入碳酸氢钠的饱和溶液,水相用乙酸乙酯萃取后用1M HCl调pH至 3~4,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩至20-30mL,析出固体过滤得白色固体SP-2(580mg)。LC-MS:275.1[M+H]+。
实施例17
螺环SP-3的合成:
将底物15-6(550mg),Boc-1-氨基环丙基甲酸(17-1a,600mg),HATU(1.45g) 与三乙胺(405mg)溶解在无水DMF(15mL)中室温搅拌过夜,TLC显示反应完全,反应液倒入水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析分离纯化的淡黄色固体SP-3(420mg)。LC-MS:402.2[M+H]+。
实施例18
螺环SP-4-Boc-1和SP-4-Boc-2的合成:
将底物15-6(550mg),N-叔丁氧羰基-2-甲基丙氨酸(18-1a,610mg),HATU(1.45 g)与三乙胺(405mg)溶解在无水DMF(15mL)中室温搅拌过夜,TLC显示反应完全。反应液倒入水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离纯化的淡黄色固体SP-4-Boc(510mg)。LC-MS:404.2[M+H]+。
对消旋螺环SP-4-Boc进行手性拆分,得到手性螺环SP-4-Boc-1和手性螺环 SP-4-Boc-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:12mL/min,流动相65%正己烷+35%异丙醇等梯度,波长254nm,总时间20分钟;峰1,出峰时间8.7分钟;峰2,出峰时间13.7分钟。
实施例19
螺环SP-5-Boc-1和SP-5-Boc-2的合成:
Boc-1-氨基环丁烷羧酸(19-1a,740mg)与三乙胺(405mg)溶解在干燥DMF(30 mL),室温下加入HATU(1.31g),反应液搅拌2小时后,加入将底物15-6(550mg,2.52 mmol),反应液室温下继续搅拌48小时,TLC显示反应完全。反应液倒入水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离纯化的淡黄色固体SP-5-Boc(820mg)。LC-MS:416.2[M+1]+。
对消旋螺环SP-5-Boc进行手性拆分,得到手性螺环SP-5-Boc-1和手性螺环 SP-5-Boc-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相65%正己烷+35%异丙醇等梯度,波长254nm,总时间25分钟;峰1,出峰时间17.6分钟;峰2,出峰时间19.4分钟。
实施例20
螺环SP-6的合成:
步骤一:
原料15-1(20g),硼酸酯20-3a(23.6g),Pd(dppf)Cl2(0.6g),碳酸钠(40g),二氧六环200mL,水20mL,氮气保护下,100℃反应17小时,TCL显示原料消失,过滤,二氯甲烷洗滤饼,滤液加水/二氯甲烷,分液,干燥,旋干,过柱得产品20g油状物20-2。
步骤二:
原料20-2(5g),TMSCN(1.1eq.),碘化锌(0.05eq.),甲苯(50mL),乙腈(50mL); 75℃下反应3小时,TLC(DCM:MeOH=20:1)显示原料消失,体系加水/乙酸乙酯。分液,干燥,浓缩,过柱得油状物20-3(5g)。
步骤三:
原料20-3(5g),加入150mL无水乙醇,0℃下,投入干燥得氯化氢气体5小时。 40℃下浓缩,得油状物,加入THF,打浆,过滤,固体(20-4)直接投下一步。
步骤四:
原料20-4中加入50mL四氢呋喃,三乙胺(4eq.),0℃下加入三光气(2eq.),体系不澄清,冰水下搅拌30分钟,TLC显示原料消失,加入50mL稀盐酸,体系澄清,室温搅拌30分钟,旋干,加乙酸乙酯/水,分液,水洗3次,有机层用氢氧化钠水溶液洗2 次,水层再用有机层洗1次,保留水层,加入稀盐酸调至酸性,有机层萃取2次,保留有机层,水洗,饱和食盐水洗,干燥,旋干得1.45g黄色固体(SP-6),LC-MS:[M+H]+=284.1。
实施例21
螺环SP-7的合成
原料(3.0g),TMSCN(6.0g),NH4F(6.0g),(NH4)2CO3(15.0g)溶解在30%氨水(40mL)与乙醇(100mL)的混合液在60度下反应6小时,旋干乙醇,加入NaHCO3的饱和溶液,水相用乙酸乙酯萃取后用1M HCl调pH至3-4,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩至析出固体过滤得白色固体SP-7。LC-MS:[M+H]+=283.1。
实施例22
螺环SP-8的合成:
步骤一:
将15-1(1.89g)溶于DMF(70mL)和水(10mL),加入碳酸钠(2.85g),22-1a (2.5g),氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2(660mg),100℃搅拌5小时,LCMS显示反应完,加入水,加入乙酸乙酯萃取,有机相合并,盐洗,硫酸钠干燥,旋干柱层析得1.51g 灰色固体22-2,LC-MS:[M+H]+=270.1。
步骤二:
在250mL单口瓶中依次加入22-2(1.50g),无水乙醇(100mL),TMSCN(5.55g), NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),80℃搅拌5小时,TLC显示原料大量剩余,补加TMSCN(5.55g),NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),继续80℃反应6小时,TLC仍有部分原料剩余,继续补加同上的量,65℃搅拌8小时, TLC显示基本反应完,将反应液降至室温,加入水(200mL),用乙酸乙酯萃取,合并有机相,硫酸钠干燥旋干柱层析得850mg黄色固体SP-8,LC-MS:[M+H]+=340.1。
实施例23
螺环SP-9的合成:
步骤一:
将15-1(1.89g)溶于DMF(70mL)和水(10mL),加入碳酸钠(2.85g),23-1a (2.58g),氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2(660mg),100℃搅拌5小时,LC-MS显示反应完,加入水,加入乙酸乙酯萃取,有机相合并,盐洗,硫酸钠干燥,旋干柱层析得固体 23-2,LC-MS:[M+H]+=284.1。
步骤二:
在250mL单口瓶中依次加入23-2(1.5g),无水乙醇(100mL),TMSCN(5.6g), NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),80℃搅拌5小时,TLC显示原料大量剩余,补加TMSCN(5.55g),NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),继续80℃反应6小时,TLC仍有部分原料剩余,继续补加同上的量,65℃搅拌8小时,TLC显示基本反应完,将反应液降至室温,加入水,用乙酸乙酯萃取,合并有机相,干燥,旋干,柱层析得固体SP-9,LC-MS:[M+H]+=354.1。
实施例24
螺环SP-10的合成:
步骤一:
将15-1(1.89g)溶于DMF(70mL)和水(10mL),加入碳酸钠(2.85g),24-1a (2.4g),氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2(660mg),100℃搅拌5小时,LC-MS显示反应完,加入水,加入乙酸乙酯萃取,有机相合并,盐洗,硫酸钠干燥,旋干柱层析得固体 24-2,LC-MS:[M+H]+=256.1。
步骤二:
在250mL单口瓶中依次加入24-2(1.5g),无水乙醇(100mL),TMSCN(5.6g), NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),80℃搅拌5小时,TLC显示原料大量剩余,补加TMSCN(5.55g),NH4F(2.07g),碳酸铵(8.08g)和氨水(8mL),继续80℃反应6小时,TLC仍有部分原料剩余,继续补加同上的量,65℃搅拌8小时, TLC显示基本反应完,将反应液降至室温,加入水,用乙酸乙酯萃取,合并有机相,干燥,旋干,柱层析得固体SP-10,LC-MS:[M+H]+=326.1。
实施例25
螺环SP-11的合成:
步骤一:
将5-溴茚酮(3.0g)溶解在甲苯(10mL)中加入乙腈(10mL),在室温下加入三甲基氰硅烷(1.6g)和碘化锌(0.2g),混合物升温到75度搅拌。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物25-2。LC-MS:310.1[M+H]+。
步骤二:
将底物25-2(2g)溶剂在无水乙醇(15mL),在0度下慢慢通入干燥的氯化氢气体 5小时,然后30度下减压蒸馏除去大部分乙醇后,用乙醚洗涤,旋干后得到粗品25-3,直接用于下一步。
步骤三:
将粗品25-3溶解在无水THF(20mL)中,在0度下缓慢滴加三乙胺,滴加完成后,三光气(5.1g)溶解在THF(10mL)中并滴加到反应中;反应在0度下搅拌1小时后,加入1N HCl并继续搅拌半小时;TLC显示反应完全,反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相用饱和碳酸氢钠洗涤,水相用乙酸乙酯萃取后调节pH至3~4左右,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。得到粗品25-4。
步骤四:
底物25-4(2g),硼酸酯24-1a(2.3g),Pd(dppf)Cl2(0.06g),碳酸钠(4g),二氧六环200mL,水20mL,氮气保护下,100℃反应17小时,TCL显示原料消失,过滤,二氯甲烷洗滤饼,滤液加水/二氯甲烷,分液,干燥有机层,旋干溶剂后经柱层析得到产物SP-11,LC-MS:327.1[M+H]+。
实施例26
螺环SP-12的合成:
底物25-4(2g),硼酸酯23-1a(2.5g),Pd(dppf)Cl2(0.06g),碳酸钠(4g),二氧六环200mL,水20mL,氮气保护下,100℃反应17小时,TCL显示原料消失,过滤, DCM洗滤饼,滤液加水/二氯甲烷,分液,干燥有机层,旋干后经柱层析得到产物SP-12, LC-MS:355.1[M+H]+。
实施例27
螺环SP-13的合成:
底物25-4(2g),硼酸酯22-1a(2.4g),Pd(dppf)Cl2(0.06g),碳酸钠(4g),二氧六环200mL,水20mL,氮气保护下,100℃反应17小时,TCL显示原料消失,过滤,二氯甲烷洗滤饼,滤液加水/二氯甲烷,分液,干燥,旋干后经柱层析得到产物SP-13, LC-MS:341.1[M+H]+。
实施例28
螺环SP-14的合成:
步骤一:
所得粗品28-1溶解在甲苯中,加入乙腈,在室温下加入三甲基氰硅烷和碘化锌,混合物升温到75度搅拌4小时。TLC显示反应完全,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物28-2。
步骤二:
将底物28-2溶在无水乙醇中,在0度下慢慢通入干燥的氯化氢气体5小时,然后减压蒸馏除去大部分乙醇后,用乙醚洗涤,旋干后得到粗品28-3,直接用于下一步。
步骤三:
将粗品28-3溶解在无水THF中,在0度下缓慢滴加三乙胺,滴加完成后,三光气溶解在THF中并滴加到反应中;反应在0度下搅拌1小时后,加入1N HCl并继续搅拌半小时;TLC显示反应完全,反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相用饱和碳酸氢钠洗涤,水相用少量乙酸乙酯萃取后用1N HCl调节pH至3~4左右,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。得到粗品28-4。
步骤四:
将底物28-4溶解在甲醇中,加入6N HCl反应液在75度下搅拌3小时;TLC显示反应完全。反应液冷却到室温,用饱和碳酸氢钠调节pH至中性;乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物28-5。LC-MS:233.1 [M+H]+。
步骤五:
将底物28-5溶解在无水THF,加入对硝基氯甲酸苯酯,反应在室温下搅拌半小时。甲胺盐酸盐溶解在甲醇加入TEA,搅拌10分钟后,将上面的反应液加入,混合物在室温下继续搅拌1小时后,TLC显示反应完全;反应液倒入冰水中,用1N HCl调节pH至3~4,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到 SP-14。LC-MS:290.1[M+H]+。
对其进行手性拆分得到中间体SP-14-1和SP-14-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相80%正己烷+ 20%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:16.82分钟;峰2出峰时间:30.68分钟。
实施例29
螺环SP-15的合成:
步骤一:
称取化合物29-1(17.52g)溶于250mL四氢呋喃中,向其中滴加对硝基氯甲酸苯酯(10.0g,事先溶于250mL四氢呋喃中)溶液与室温下反应2小时,取样分析反应完全。向其中加入盐酸甲胺(8.4g)于室温下搅拌1小时,向其中加入三乙胺(19.0g)于室温下搅拌2小时,取样分析反应完全。将反应液浓缩干,向其中加入水和乙酸乙酯萃取分液。饱和碳酸氢钠溶液洗涤有机相,有大量固体析出,过滤,固体干燥得5.1g。有机相浓缩干,向其中加入(石油醚/乙酸乙酯=2/1)20mL打浆,过滤,水淋洗固体,干燥得固体29-2(3.2g)。
步骤二:
在250mL单口瓶中依次加入29-2(8.3g),无水乙醇(500mL),TMSCN(37.7g), NH4F(14.1g),碳酸铵(55g)和氨水(30mL),80℃搅拌10小时,TLC显示基本反应完,将反应液降至室温,加入水,用乙酸乙酯萃取,合并有机相,干燥,旋干,柱层析得固体SP-15,LC-MS:[M+H]+=289.1。
实施例30
SYY-B002的合成:
将底物SP-1(100mg)溶解在干燥DMF(15mL)中,室温下加入碳酸钾(138mg) 和酰胺片断AN-7(134mg),反应液在室温下搅拌1小时,TLC显示反应完成。反应液倒入水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经柱层析分离得到终产物SYY-B002(45mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(brs,1H),7.56(m,1H),7.35(m,1H),7.25-7.21(m,5H),6.08(m,1H),4.97-4.48(m,5H),4.30-4.10(m,1H),3.20-3.00(m,3H),2.65-2.49(m,5H), 1.15-0.99(m,3H).LC-MS:[2M+H]+=925.3。
实施例31
SYY-B003的合成:
除了使用酰胺片断AN-6代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B003。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.56(m,1H),7.35-7.11(m,6H),6.08(m,1H),4.92-4.58(m,3H),4.42-3.77(m,3H),3.17-2.96(m,3H),2.65-2.49(m,5H),2.07-1.82(m, 2H),1.35-1.18(m,3H).LC-MS:[M+H]+=477.2。
实施例32
SYY-B009的合成:
除了使用酰胺片断AN-5代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B009。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(m,1H),7.53(m,1H),7.41-7.11(m,6H),6.07(m,1H),4.73(m,1H),4.57-4.44(m,3H),3.82-3.79(m,2H),3.14-2.94(m,4H),2.65-2.57(m,4H), 2.44(m,1H),1.82-1.67(m,2H).LC-MS:[2M+H]+=925.3。
实施例33
SYY-B010的合成:
除了使用酰胺片断AN-4代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B010。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.53(m,1H),7.29-7.20(m,4H), 7.09-6.98(m,2H),6.08(m,1H),4.77(s,1H),4.67(m,1H),4.53(m,2H),4.22(m,1H),4.11 (m,1H),3.95–3.91(m,2H),3.15–2.94(m,2H),2.65–2.61(m,4H),2.49(m,1H).LC-MS: [M+H]+=465.2。
实施例34
SYY-B012-1和SYY-B012-2的合成:
除了使用酰胺片断AN-3代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B012。
对SYY-B012进行手性拆分,得到手性产物SYY-B012-1和SYY-B012-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相75%正己烷+25%乙醇等梯度,波长254nm;总时间60分钟;峰1,出峰时间36分钟;峰2,出峰时间45分钟。
SYY-B012-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.58–7.44(m,3H), 7.35-7.22(m,4H),6.10(m,1H),4.87(s,1H),4.66(m,1H),4.52–4.48(m,2H),4.00(m,2H), 3.08–2.92(m,4H),2.64(m,4H),2.49–2.44(m,1H).LC-MS:[M+H]+=481.1。
SYY-B012-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.58–7.44(m,3H), 7.35-7.21(m,4H),6.09(m,1H),4.88(s,1H),4.66(m,1H),4.53-4.44(m,2H),4.01(m,2H), 3.04–2.92(m,4H),2.64(m,4H),2.40–2.44(m,1H).LC-MS:[M+H]+=481.1。
实施例35
SYY-B013的合成:
除了使用酰胺片断AN-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B013。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(m,1H),7.54(m,1H),7.30-7.21(m,4H), 6.97-6.83(m,2H),6.18(m,1H),4.64-4.49(m,4H),3.72(m,2H),3.16-3.07(m,4H),2.88(s, 3H),2.64(m,4H),2.48(m,1H).LC-MS:[M+H]+=478.2。
实施例36
SYY-B014-1和SYY-B014-2的合成:
除了使用酰胺片断AN-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B014。
对SYY-B014进行手性拆分,得到手性产物SYY-B014-1和SYY-B014-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AY-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:12mL/min,流动相85%正己烷+15%乙醇等梯度,波长254nm;总时间50分钟;峰1,出峰时间18.5分钟;峰2,出峰时间30分钟。
SYY-B014-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.53(m,1H),7.30-7.20(m,4H),7.00-6.85(m,2H),6.08(m,1H),5.00-4.59(m,3H),4.39-4.17(m,3H),3.83(m,1H),3.09-2.99(m,2H),2.64-2.55(m,4H),2.47(m,1H),1.29-1.11(m,3H).LC-MS:[M+H]+=479.2。[α]D 20-24.9°(c 0.61,DCM:MeOH=9:1)。
SYY-B014-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.53(m,1H),7.30-7.20(m,4H),7.00-6.85(m,2H),6.08(m,1H),5.00-4.59(m,3H),4.39-4.17(m,3H),3.82(m,1H),3.09-2.99(m,2H),2.64-2.55(m,4H),2.47(m,1H),1.29-1.11(m,3H).LC-MS:[M+H]+=479.2。[α]D 20+26.8°(c 0.57,DCM:MeOH=9:1)。
实施例37
SYY-B015-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-6-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B015-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.40(brs,1H),7.49(brs,1H),7.26(m,3H),7.15(m,3H),5.94(m,1H),4.70-3.93(m,5H),3.14-3.09(m,1H),3.04-2.97(m,2H),2.78-2.63 (m,5H),2.48-2.44(m,1H),2.07-1.91(m,2H),1.27(m,3H).LC-MS:[2M+H]+=953.3.[α]D 20 -35.6°(c 0.72,DMSO)。
实施例38
SYY-B015-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-6-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B015-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.33(brs,1H),7.49(brs,1H),7.26(m,3H),7.15(m,3H),5.90(m,1H),4.80-3.88(m,5H),3.14-3.09(m,1H),3.04-2.97(m,2H),2.78-2.63 (m,5H),2.48-2.44(m,1H),2.07-1.91(m,2H),1.28(m,3H).LC-MS:[M+H]+=477.2。[α]D 20 +31.6°(c 0.86,DMSO)。
实施例39
SYY-B016-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-6-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B016-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.53(brs,1H),7.30-7.13(m,6H),6.09(m,1H),4.89-4.64(m,3H),4.42-4.18(m,2H),3.82(m,1H),3.13-2.78(m,3H),2.64-2.55(m,4H), 2.45(m,1H),1.93-1.89(m,2H),1.35-1.20(m,3H).LC-MS:[M+H]+=477.2。[α]D 20-35.7°(c 0.83,MeOH)。
实施例40
SYY-B016-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-6-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B016-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.53(m,1H),7.30-7.12(m,6H),6.10(m,1H),4.91-4.58(m,3H),4.38-4.18(m,2H),3.80(m,1H),3.13-2.78(m,3H),2.64-2.55(m,4H), 2.45(m,1H),1.93-1.89(m,2H),1.35-1.20(m,3H).LC-MS:[M+H]+=477.2。[α]D 20+40.6°(c 0.58,DMSO)。
实施例41
SYY-B017-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B017-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(m,1H),7.52(m,1H),7.33-7.12(m,6H),6.07(m,1H),4.93-4.70(m,2H),4.50-4.30(m,1H),3.80-3.47(m,2H),3.10-2.92(m,3H),2.73-2.56(m, 5H),2.45(m,1H),1.99(m,2H),1.42(m,1H),0.57-0.29(m,4H).LC-MS:[M+H]+=503.2。[α]D 20-58.3°(c 0.51,MeOH)。
实施例42
SYY-B017-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B017-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(m,1H),7.52(m,1H),7.33-7.12(m,6H),6.07(m,1H),4.93-4.70(m,2H),4.50-4.30(m,1H),3.80-3.47(m,2H),3.10-2.92(m,3H),2.73-2.56(m, 5H),2.45(m,1H),1.99(m,2H),1.47-1.25(m,1H),0.57-0.29(m,4H).LC-MS:[M+H]+=503.2。[α]D 20+53.6°(c 0.53,MeOH)。
实施例43
SYY-B018-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B018-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.33(brs,1H),7.48(brs,1H),7.30-7.17(m,6H),5.90(m,1H),4.76-3.58(m,5H),3.14-3.09(m,2H),3.04-2.97(m,1H),2.72-2.62(m,5H), 2.47-2.43(m,1H),2.09-2.00(m,2H),1.28(m,1H),0.62-0.37(m,4H).LC-MS:[M+H]+= 503.2。[α]D 20-38.6°(c 0.42,DMSO)。
实施例44
SYY-B018-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B018-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.31(brs,1H),7.48(brs,1H),7.30-7.17(m,6H),5.89(m,1H),4.76-3.58(m,5H),3.14-3.09(m,2H),3.04-2.97(m,1H),2.72-2.61(m,5H), 2.47-2.43(m,1H),2.09-2.00(m,2H),1.32(m,1H),0.63-0.38(m,4H).LC-MS:[M+H]+= 503.2。[α]D 20+46.3°(c 0.44,DMSO)。
实施例45
SYY-B019-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-9-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B019-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.35(brs,1H),7.48(brs,1H),7.30-7.10(m,6H),5.91(m,1H),4.90-4.24(m,4H),3.86-3.68(m,1H),3.14-3.09(m,1H),3.03-2.94(m,2H), 2.79-2.62(m,5H),2.47-2.43(m,1H),2.20-2.11(m,1H),2.02-1.86(m,2H),1.08-0.88(m,6H). LC-MS:[M+H]+=505.2。[α]D 20-34.4°(c 0.82,DCM:MeOH=10:1)。
实施例46
SYY-B019-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-9-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B019-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.32(brs,1H),7.48(brs,1H),7.30-7.11(m,6H),5.89(m,1H),4.90-4.24(m,4H),3.86-3.68(m,1H),3.13-3.08(m,1H),3.01-2.95(m,2H), 2.80-2.60(m,5H),2.47-2.43(m,1H),2.20-2.11(m,1H),2.03-1.84(m,2H),1.02-0.90(m,6H). LC-MS:[M+H]+=505.2。[α]D 20+62.9°(c 0.76,DCM:MeOH=10:1)。
实施例47
SYY-B020-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-9-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B020-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(m,1H),7.53(brs,1H),7.30-7.11(m,6H),6.11(m,1H),4.91-4.20(m,4H),3.81-3.64(m,1H),3.17-2.89(m,3H),2.73-2.53(m,5H),2.47-2.40(m, 1H),2.15-1.85(m,3H),0.99-0.85(m,6H).LC-MS:[M+Na]+=527.3。[α]D 20-61.5°(c0.78, MeOH)。
实施例48
SYY-B020-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-9-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B020-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(m,1H),7.53(m,1H),7.30-7.10(m,6H),6.08(m,1H),4.93-4.02(m,4H),3.77(m,1H),3.09-2.89(m,3H),2.74-2.53(m,5H),2.47-2.40(m,1H), 2.15-1.85(m,3H),0.99-0.85(m,6H).LC-MS:[M+H]+=505.2。[α]D 20+23.3°(c 0.64,MeOH)。
实施例49
SYY-B021-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-10-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B021-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(m,1H),7.53(m,1H),7.38-7.21(m,3H), 7.07-6.94(m,2H),6.17(m,1H),4.90-4.64(m,3H),4.38-3.76(m,2H),3.13-2.94(m,3H), 2.64-2.57(m,5H),2.44(m,1H),2.02-1.90(m,2H),1.35-1.19(m,3H).LC-MS:[M+H]+= 495.2。[α]D 20-11.4°(c 0.64,MeOH)。
实施例50
SYY-B021-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-10-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B021-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.38-7.21(m,3H), 7.07-6.94(m,2H),6.09(m,1H),4.88-4.64(m,3H),4.41-3.79(m,2H),3.13-2.94(m,3H), 2.64-2.57(m,5H),2.45(m,1H),2.02-1.88(m,2H),1.34-1.19(m,3H).LC-MS:[M+H]+=495.2。[α]D 20+31.6°(c 0.68,MeOH)。
实施例51
SYY-B022-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-10-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B022-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(m,1H),7.52(m,1H),7.38-7.19(m,3H), 7.07-6.91(m,2H),6.09(m,1H),4.88-4.64(m,3H),4.42-3.79(m,2H),3.13-2.94(m,3H), 2.64-2.57(m,5H),2.45(m,1H),2.02-1.88(m,2H),1.34-1.19(m,3H).LC-MS:[M+H]+= 495.2。[α]D 20-37.8°(c 0.41,MeOH)。
实施例52
SYY-B022-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-10-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B022-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.37-7.20(m,3H), 7.08-6.91(m,2H),6.08(m,1H),4.90-4.64(m,3H),4.37-3.77(m,2H),3.15-2.94(m,3H), 2.64-2.57(m,5H),2.45(m,1H),2.02-1.88(m,2H),1.35-1.19(m,3H).LC-MS:[M+H]+= 495.2。
实施例53
SYY-B023-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-12-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B023-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.34(brs,1H),7.48(brs,1H),7.31-7.12(m,6H),5.91(m,1H),4.86-3.86(m,5H),3.14-3.09(m,1H),3.02-2.97(m,2H),2.79-2.62(m,5H), 2.47-2.43(m,1H),2.11-1.44(m,6H),1.01(m,3H).LC-MS:[M+H]+=505.2。
实施例54
SYY-B023-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-12-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B023-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.12(m,6H),6.07(m,1H),4.90-4.58(m,3H),4.39-3.80(m,2H),3.12-2.94(m,3H),2.66-2.56(m,5H),2.44(m,1H), 2.08-1.42(m,6H),0.99-0.90(m,3H).LC-MS:[M+H]+=505.2。[α]D 20+28.9°(c 0.81,DCM:MeOH=10:1)。
实施例55
SYY-B024-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-12-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B024-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.12(m,6H),6.14(m,1H),4.89-4.58(m,3H),4.39-3.80(m,2H),3.11-2.95(m,3H),2.66-2.56(m,5H),2.44(m,1H), 2.08-1.42(m,6H),0.99-0.90(m,3H).LC-MS:[M+H]+=505.3。[α]D 20-33.3°(c 0.42,MeOH)。
实施例56
SYY-B024-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-12-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B024-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.12(m,6H),6.10(m,1H),4.92-4.61(m,3H),4.36-3.77(m,2H),3.12-2.94(m,3H),2.66-2.56(m,5H),2.44(m,1H), 2.05-1.38(m,6H),1.00-0.89(m,3H).LC-MS:[M+H]+=505.2。[α]D 20+48.6°(c 0.57,MeOH)。
实施例57
SYY-B025-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B025-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.34(brs,1H),7.48(brs,1H),7.33-7.21(m,3H),6.98(m,2H),5.91(m,1H),4.75-3.88(m,5H),3.14-3.09(m,2H),3.02-2.97(m,1H),2.73-2.62(m,5H),2.48-2.43(m,1H),2.05(m,2H),1.30(m,1H),0.62-0.40(m,4H).LC-MS:[M+H]+=521.2。
实施例58
SYY-B025-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B025-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.32(brs,1H),7.48(brs,1H),7.34-7.22(m,3H),6.96(m,2H),5.91(m,1H),4.75-3.79(m,5H),3.14-3.09(m,2H),3.01-2.97(m,1H),2.73-2.62(m,5H),2.46-2.43(m,1H),2.06(m,2H),1.32(m,1H),0.63-0.37(m,4H).LC-MS:[M+H]+=521.2。[α]D 20+41.6°(c 0.78,MeOH)。
实施例59
SYY-B026-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B026-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.52(m,1H),7.39-6.92(m,5H),6.09(m,1H),4.91-4.32(m,3H),3.89-3.46(m,2H),3.15-2.91(m,3H),2.65-2.54(m,5H),2.47-2.41(m, 1H),2.08-1.95(m,2H),1.49-1.32(m,1H),0.66-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=521.2。[α]D 20 -38.6°(c 0.6,MeOH)。
实施例60
SYY-B026-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B026-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(m,1H),7.53(m,1H),7.37-6.99(m,5H),6.08(m,1H),4.94-4.30(m,3H),3.89-3.46(m,2H),3.13-2.93(m,3H),2.65-2.54(m,5H),2.47-2.41(m, 1H),2.09-1.96(m,2H),1.50-1.33(m,1H),0.63-0.39(m,4H).LC-MS:[M+H]+=521.2。
实施例61
SYY-B027-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-13-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B027-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(m,1H),7.54(m,1H),7.29-7.16(m,6H),6.09(m,1H),5.26-4.32(m,4H),3.80(m,1H),3.13-2.89(m,3H),2.73-2.54(m,5H),2.50-2.30(m,3H). LC-MS:[M+H]+=531.2。
实施例62
SYY-B027-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-13-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B027-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.17(m,6H),6.10(m,1H),5.29-3.81(m,4H),3.13-2.91(m,4H),2.79-2.56(m,5H),2.49-2.31(m,3H).LC-MS: [M+H]+=531.2。[α]D 20+101.3°(c 0.67,MeOH)。
实施例63
SYY-B028-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-13-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B028-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.17(m,6H),6.08(m,1H),5.27-3.81(m,5H),3.12-2.91(m,3H),2.74-2.56(m,5H),2.50-2.31(m,3H).LC-MS: [M+H]+=531.2。[α]D 20-102.6°(c 1.0,MeOH)。
实施例64
SYY-B028-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-13-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B028-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.31-7.17(m,6H),6.10(m,1H),5.29-3.78(m,5H),3.14-2.89(m,3H),2.79-2.56(m,5H),2.49-2.31(m,3H).LC-MS: [M+H]+=531.2。
实施例65
SYY-B029-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B029-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.53(m,1H),7.26-6.92(m,5H),6.10(m,1H),5.07-4.06(m,6H),3.83(m,1H),3.15-2.94(m,2H),2.64-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H), 1.15(m,1H),0.65-0.33(m,4H).LC-MS:[M+H]+=523.2。[α]D 20-46.1°(c 0.81,MeOH)。
实施例66
SYY-B029-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B029-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.53(m,1H),7.25-6.91(m,5H),6.10(m,1H),5.07-4.05(m,6H),3.85(m,1H),3.14-2.92(m,2H),2.65-2.55(m,4H),2.49-2.42(m,1H), 1.16(m,1H),0.63-0.33(m,4H).LC-MS:[M+H]+=523.2。[α]D 20+40.2°(c 0.74,MeOH)。
实施例67
SYY-B030-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B030-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.53(m,1H),7.26-6.92(m,5H),6.10(m,1H),5.07-4.06(m,6H),3.83(m,1H),3.15-2.94(m,2H),2.64-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H), 1.35-1.12(m,1H),0.65-0.33(m,4H).LC-MS:[M+H]+=523.2。[α]D 20-44.8°(c 0.61,MeOH)。
实施例68
SYY-B030-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B030-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(m,1H),7.54(m,1H),7.26-6.90(m,5H),6.10(m,1H),5.07-4.06(m,6H),3.83(m,1H),3.15-2.94(m,2H),2.64-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H), 1.35-1.12(m,1H),0.65-0.33(m,4H).LC-MS:[M+H]+=523.2。[α]D 20+45.4°(c 0.61,MeOH)。
实施例69
SYY-B031-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B031-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,110℃)δ8.38(brs,1H),7.49(brs,1H),7.34-7.20(m,3H),7.02(m,2H),5.93(m,1H),5.26-3.91(m,5H),3.16-3.09(m,2H),3.02-2.97(m,1H),2.79-2.62(m,5H),2.48-2.44(m,1H),2.36(m,2H).LC-MS:[M+H]+=549.2。
实施例70
SYY-B031-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B031-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(m,1H),7.51(m,1H),7.35-7.03(m,5H),6.09(m,1H),5.24-3.79(m,5H),3.12-2.91(m,3H),2.73-2.56(m,5H),2.49-2.25(m,3H).LC-MS: [M+H]+=549.2。[α]D 20+92.8°(c 0.71,MeOH)。
实施例71
SYY-B032-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B032-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.35-6.96(m,5H),6.09(m,1H),5.25-3.80(m,5H),3.14-2.91(m,3H),2.73-2.56(m,5H),2.49-2.27(m,3H).LC-MS: [M+H]+=549.2。[α]D 20-88.7°(c 0.67,MeOH)。
实施例72
SYY-B032-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B032-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(m,1H),7.54(m,1H),7.34-6.96(m,5H),6.10(m,1H),5.29-3.80(m,5H),3.15-2.93(m,3H),2.75-2.56(m,5H),2.49-2.29(m,3H).LC-MS: [M+H]+=549.2。
实施例73
SYY-B033-1和SYY-B033-2的合成:
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B033。
对SYY-B033进行手性拆分,得到手性产物SYY-B033-1和SYY-B033-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:12mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;总时间60分钟;峰1,出峰时间15.2分钟;峰2,出峰时间20.5分钟。
SYY-B033-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(m,1H),8.55(m,1H),7.42-7.14(m,3H),7.06-6.94(m,3H),6.02(m,1H),4.85-4.65(m,2H),4.40-4.14(m,1H),3.87-3.43(m,2H), 3.17-2.88(m,3H),2.75-2.55(m,4H),2.44(m,1H),2.16-1.92(m,3H),1.33(m,1H),0.65-0.23 (m,4H).LC-MS:[M+H]+=520.2。
SYY-B033-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(m,1H),8.54(m,1H),7.42-7.14(m,3H),7.06-6.89(m,3H),6.01(m,1H),4.84-4.66(m,2H),4.40-4.14(m,1H),3.86-3.43(m,2H), 3.17-2.88(m,3H),2.74-2.55(m,4H),2.44(m,1H),2.16-1.92(m,3H),1.33(m,1H),0.65-0.23 (m,4H).LC-MS:[M+H]+=520.2。
实施例74
SYY-B034-1和SYY-B034-2的合成:
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B034。
对SYY-B034进行手性拆分,得到手性产物SYY-B034-1和SYY-B034-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;总时间60分钟;峰1,出峰时间41.6分钟;峰2,出峰时间51.4分钟。
SYY-B034-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(m,1H),8.54(m,1H),7.42-7.14(m,3H),7.06-6.89(m,3H),6.01(m,1H),4.84-4.66(m,2H),4.40-4.14(m,1H),3.87-3.43(m,2H), 3.17-2.88(m,3H),2.75-2.55(m,4H),2.44(m,1H),2.16-1.92(m,3H),1.33(m,1H),0.65-0.23 (m,4H).LC-MS:[M+H]+=520.3。
SYY-B034-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(m,1H),8.54(m,1H),7.42-7.14(m,3H),7.06-6.89(m,3H),6.01(m,1H),4.84-4.66(m,2H),4.40-4.14(m,1H),3.87-3.43(m,2H), 3.17-2.88(m,3H),2.75-2.55(m,4H),2.44(m,1H),2.16-1.92(m,3H),1.33(m,1H),0.65-0.23 (m,4H).LC-MS:[M+H]+=520.2。
实施例75
SYY-B035-Boc-1和SYY-B035-Boc-2的合成:
除了使用螺环片断SP-3代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B035。
对SYY-B035进行手性拆分,得到手性产物SYY-B035-Boc-1和SYY-B035-Boc-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;总时间65分钟;峰1,出峰时间43.7分钟;峰2,出峰时间55.2分钟。
实施例76
SYY-B035-1的合成:
将SYY-B035-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B035-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.68(m,1H),7.46-7.28(m,3H),6.98-6.83(m,2H),4.89(m,1H),4.87-4.47(m, 2H),4.09-3.47(m,2H),3.25-3.04(m,3H),2.88-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.76(m,2H),1.49 (m,2H),1.31(m,1H),0.69-0.42(m,4H).LC-MS:[M+H]+=547.3。
实施例77
SYY-B035-2的合成
将SYY-B035-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B035-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.68(m,1H),7.46-7.28(m,3H),6.98-6.83(m,2H),4.92(m,1H),4.84-4.40(m, 2H),4.09-3.47(m,2H),3.25-3.04(m,3H),2.88-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.76(m,2H),1.49 (m,2H),1.31(m,1H),0.69-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=547.3。
实施例78
SYY-B036-Boc-1和SYY-B036-Boc-2的合成:
除了使用螺环片断SP-3代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B036。
对SYY-B036进行手性拆分,得到手性产物SYY-B036-Boc-1和SYY-B036-Boc-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:40mL/min,流动相65%正己烷+35%乙醇等梯度,波长254nm;总时间35分钟;峰1,出峰时间21.3分钟;峰2,出峰时间28.7分钟。
实施例79
SYY-B036-1的合成:
将SYY-B036-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B036-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.68(m,1H),7.46-7.28(m,3H),6.98-6.83(m,2H),4.92(m,1H),4.85-4.47(m, 2H),4.09-3.47(m,2H),3.25-3.04(m,3H),2.88-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.76(m,2H),1.49 (m,2H),1.31(m,1H),0.69-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=547.3。
实施例80
SYY-B036-2的合成:
将SYY-B036-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B036-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.68(m,1H),7.46-7.28(m,3H),6.98-6.83(m,2H),4.92(m,1H),4.85-4.47(m, 2H),4.06-3.48(m,2H),3.25-3.04(m,3H),2.87-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.76(m,2H),1.49 (m,2H),1.31(m,1H),0.69-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=547.3。
实施例81
SYY-B037-1的合成:
除了使用螺环片断SP-4-Boc-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B037-Boc-1。
将SYY-B037-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B037-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.73(m,1H),7.50-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.92(m,1H),4.85-4.40(m, 2H),4.05-3.48(m,2H),3.25-3.05(m,3H),2.87-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.53(s,6H),1.31 (m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=549.3。[α]D 20-43.5°(c 0.91,MeOH)。
实施例82
SYY-B037-2的合成:
除了使用螺环片断SP-4-Boc-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B037-Boc-2。
将SYY-B037-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B037-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.73(m,1H),7.50-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.93(m,1H),4.85-4.46(m, 2H),4.08-3.48(m,2H),3.25-3.05(m,3H),2.87-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.51(s,6H),1.30 (m,1H),0.68-0.42(m,4H).LC-MS:[M+H]+=549.3。[α]D 20-32.6°(c 0.79,MeOH)。
实施例83
SYY-B038-1的合成:
除了使用螺环片断SP-4-Boc-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B038-Boc-1。
将SYY-B038-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B038-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.73(m,1H),7.50-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.97-4.93(m,1H),4.87-4.47 (m,2H),4.09-3.48(m,2H),3.25-3.05(m,3H),2.87-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.70(s,6H), 1.31(m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=549.3。[α]D 20+28.2°(c 0.54,MeOH)。
实施例84
SYY-B038-2的合成:
除了使用螺环片断SP-4-Boc-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B038-Boc-2。
将SYY-B038-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B038-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.73(m,1H),7.50-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.92(m,1H),4.87-4.40(m, 2H),4.06-3.48(m,2H),3.25-3.05(m,3H),2.87-2.50(m,3H),2.13(m,2H),1.71(s,6H),1.31 (m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=549.3。[α]D 20+35.3°(c 0.61,MeOH)。
实施例85
SYY-B039-1的合成:
除了使用螺环片断SP-5-Boc-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B039-Boc-1。
将SYY-B039-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B039-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.75(m,1H),7.56-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.92(m,1H),4.87-4.41(m, 2H),4.06-3.48(m,2H),3.25-3.07(m,3H),2.94-2.71(m,4H),2.61-2.52(m,1H),2.46-2.34(m, 3H),2.31-2.11(m,3H),1.31(m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=561.3。
实施例86
SYY-B039-2的合成:
除了使用螺环片断SP-5-Boc-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B039-Boc-2。
将SYY-B039-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B039-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.76(m,1H),7.56-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.93(m,1H),4.87-4.47(m, 2H),4.09-3.46(m,2H),3.25-3.07(m,3H),2.94-2.71(m,4H),2.61-2.52(m,1H),2.46-2.34(m, 3H),2.31-2.11(m,3H),1.31(m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=561.3。
实施例87
SYY-B040-1的合成:
除了使用螺环片断SP-5-Boc-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B040-Boc-1。
将SYY-B040-Boc-1溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B040-1为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.74(m,1H),7.58-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.92(m,1H),4.87-4.41(m, 2H),4.09-3.46(m,2H),3.25-3.07(m,3H),2.94-2.71(m,4H),2.61-2.52(m,1H),2.46-2.34(m, 3H),2.31-2.11(m,3H),1.31(m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=561.3。
实施例88
SYY-B040-2的合成:
除了使用螺环片断SP-5-Boc-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B040-Boc-2。
将SYY-B040-Boc-2溶于TFA(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2小时,TLC显示反应完全,旋干得到产物SYY-B040-2为三氟乙酸盐;1H NMR(400MHz, CD3OD)δ7.75(m,1H),7.56-7.27(m,3H),6.98-6.81(m,2H),4.92(m,1H),4.87-4.41(m, 2H),4.09-3.46(m,2H),3.25-3.07(m,3H),2.94-2.71(m,4H),2.61-2.52(m,1H),2.46-2.34(m, 3H),2.31-2.11(m,3H),1.31(m,1H),0.68-0.41(m,4H).LC-MS:[M+H]+=561.3。
实施例89
SYY-B041-1和SYY-B041-2的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B041。
对SYY-B041进行手性拆分,得到手性产物SYY-B041-1和SYY-B041-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;总时间60分钟;峰1,出峰时间37.0分钟;峰2,出峰时间41.7分钟。
SYY-B041-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(m,1H),7.89(m,1H),7.57-7.50(m,2H),7.41-7.25(m,2H),7.08-6.89(m,2H),4.94-4.29(m,4H),3.87-3.45(m,4H),3.18-2.98(m, 3H),2.76-2.53(m,2H),2.44(m,1H),2.02(m,2H),1.22(m,1H),0.55-0.23(m,4H).LC-MS: [M+H]+=529.3。[α]D 20-60.1°(c 0.96,MeOH)。
SYY-B041-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(m,1H),7.89(m,1H),7.57-7.49(m,2H),7.41-7.25(m,2H),7.08-6.89(m,2H),4.91-4.32(m,4H),3.87-3.45(m,4H),3.18-2.98(m, 3H),2.76-2.53(m,2H),2.44(m,1H),2.02(m,2H),1.22(m,1H),0.55-0.23(m,4H).LC-MS: [M+H]+=529.3。[α]D 20+45.9°(c 0.81,MeOH)。
实施例90
SYY-B042-1和SYY-B042-2的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B042。
对SYY-B042进行手性拆分,得到手性产物SYY-B042-1和SYY-B042-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AS-H,填料粒径(10μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:35mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;总时间65分钟;峰1,出峰时间52.4分钟;峰2,出峰时间58.2分钟。
SYY-B042-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,1H),7.90(s,1H),7.59-7.52(m,2H),7.43-7.27(m,2H),7.09-6.90(m,2H),4.96-4.31(m,4H),3.87-3.45(m,4H),3.18-2.98(m, 3H),2.76-2.53(m,2H),2.44(m,1H),2.02(m,2H),0.86(m,1H),0.55-0.23(m,4H).LC-MS: [M+H]+=529.2。
SYY-B042-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(m,1H),7.89(m,1H),7.59-7.50(m,2H),7.41-7.25(m,2H),7.08-6.89(m,2H),4.91-4.33(m,4H),3.87-3.45(m,4H),3.18-2.98(m, 3H),2.76-2.53(m,2H),2.44(m,1H),2.02(m,2H),0.86(m,1H),0.55-0.23(m,4H).LC-MS: [M+H]+=529.2。
实施例91
SYY-B043-1和SYY-B043-2的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B043:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70 (m,1H),8.10(m,1H),7.83(m,1H),7.47-6.92(m,6H),4.73-4.14(m,3H),3.87-3.45(m,5H), 2.98(m,3H),2.68(m,2H),2.15-1.90(m,3H),1.35(m,1H),0.55-0.27(m,4H).LC-MS: [M+H]+=528.2。
对SYY-B043进行手性拆分,得到手性产物SYY-B043-1和SYY-B043-2。
手性分离条件:分析柱CHIRALPAK@AD-H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm),长度(250mm),流速:1mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;总时间20分钟,峰1,出峰时间:10.45分钟;峰2,出峰时间:12.08分钟。
实施例92
SYY-B044-1和SYY-B044-2的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B044:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72 (m,1H),8.13(m,1H),7.85(m,1H),7.49-6.90(m,6H),4.85-4.15(m,3H),3.87-3.45(m,5H), 3.18-2.98(m,3H),2.76-2.53(m,2H),2.21-1.94(m,3H),1.34(m,1H),0.55-0.23(m,4H). LC-MS:[M+H]+=528.2。
对SYY-B044进行手性拆分,得到手性产物SYY-B044-1和SYY-B044-2。
手性分离条件:半制备柱子CHIRALPAK@AS-H,填料粒径(10μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;总时间65分钟;峰1,出峰时间12.1分钟;峰2,出峰时间30.6分钟。
实施例93
SYY-B045的合成:
除了使用螺环片断SP-8代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B045:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72 (m,1H),8.14-7.89(m,3H),7.52-7.01(m,6H),4.76-4.70(m,5H),4.39-3.45(m,3H),3.12-2.98 (m,3H),2.73-2.53(m,4H),2.21-1.94(m,3H),1.42(m,1H),0.55-0.25(m,4H).LC-MS: [M+H]+=585.3。
对SYY-B045进行手性拆分,得到手性产物SYY-B045-1和SYY-B045-2。
手性分离条件:分析柱子CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm), 长度(250mm),流速:1.0mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长210nm;总时间30分钟,峰1,出峰时间:10.23分钟;峰2,出峰时间:16.08分钟。
实施例94
SYY-B046-1和SYY-B046-2的合成:
除了使用螺环片断SP-8代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B046:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73 (m,1H),8.14-7.90(m,3H),7.52-6.98(m,6H),4.85-4.68(m,5H),4.41-3.45(m,3H),3.12-2.98 (m,3H),2.73-2.53(m,4H),2.21-1.94(m,3H),1.47(m,1H),0.55-0.25(m,4H).LC-MS: [M+H]+=585.3。
对SYY-B046进行手性拆分,得到手性产物SYY-B046-1和SYY-B046-2。
手性分离条件:分析柱CHIRALPAK@AS-H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm),长度(250mm),流速:1mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长210nm;总时间30分钟,峰1,出峰时间:6.44分钟;峰2,出峰时间:11.33分钟。
实施例95
ZB-P-01的合成:
除了使用螺环片断SP-9代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-01:LC-MS:[M+H]+=599.2。
实施例96
ZB-P-02的合成:
除了使用螺环片断SP-10代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-02:LC-MS:[M+H]+=571.2。
实施例97
ZB-P-03的合成:
除了使用螺环片断SP-11代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-03:LC-MS:[M+H]+=572.2。
实施例98
ZB-P-04的合成:
除了使用螺环片断SP-12代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-04:LC-MS:[M+H]+=600.2。
实施例99
ZB-P-05的合成:
除了使用螺环片断SP-13代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-05:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.20(m,1H),8.04(m,1H),7.94(m,1H),7.61-7.54(m,2H),7.43-7.26(m,2H),7.10-6.91(m, 2H),4.96-3.47(m,7H),3.20-2.98(m,3H),2.79-2.51(m,6H),2.07-1.99(m,2H),1.49-1.23(m, 1H),0.59-0.27(m,4H).LC-MS:[M+H]+=586.2。
实施例100
ZB-P-06的合成:
除了使用螺环片断SP-14代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-06:LC-MS:[M+H]+=535.2。
实施例101
ZB-P-07的合成:
除了使用螺环片断SP-15代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-07:LC-MS:[M+H]+=534.2。
实施例102
ZB-P-08的合成:
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-08:LC-MS:[M+H]+=548.2。
实施例103
ZB-P-09的合成:
除了使用螺环片断SP-3代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-09-Boc。将ZB-P-09-Boc溶于二氯甲烷 (3mL),加入TFA(1mL),室温搅拌2小时,TLC显示均反应完,将反应液旋干得到产物ZB-P-09。LC-MS:[M+H]+=575.2。
实施例104
ZB-P-10的合成:
除了使用螺环片断SP-4-Boc代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-10-Boc。将ZB-P-10-Boc溶于二氯甲烷(3mL),加入TFA(1mL),室温搅拌2小时,TLC显示均反应完,将反应液旋干得到产物ZB-P-10。LC-MS:[M+H]+=577.2。
实施例105
ZB-P-11的合成:
除了使用螺环片断SP-5-Boc代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-11-Boc。将ZB-P-11-Boc溶于二氯甲烷(3mL),加入TFA(1mL),室温搅拌2小时,TLC显示均反应完,将反应液旋干得到产物ZB-P-11。LC-MS:[M+H]+=589.2。
实施例106
ZB-P-12的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-12:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19 (m,1H),7.91(m,1H),7.60-7.51(m,2H),7.41-7.27(m,2H),7.11-6.98(m,2H),5.23-4.31(m, 5H),3.86(s,3H),3.15-3.06(m,3H),2.75-2.52(m,2H),2.47-2.28(m,3H).LC-MS:[M+H]+=557.2。
对ZB-P-12进行手性拆分,得到手性产物ZB-P-12-1和ZB-P-12-2。
手性分离条件:分析柱,纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm),长度(250 mm),流速:1mL/min,流动相70%正己烷+30%异丙醇等梯度,波长254nm;总时间 60分钟,峰1,出峰时间:29.12分钟;峰2,出峰时间:33.97分钟。
实施例107
ZB-P-13的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-13:LC-MS:[M+H]+=556.2。
实施例108
ZB-P-14的合成:
除了使用螺环片断SP-8代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-14:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80 (m,1H),8.14(m,1H),8.04(m,1H),7.90(m,1H),7.52-7.46(m,2H),7.36-7.19(m,2H), 7.10-7.02(m,2H),5.22-3.67(m,7H),3.02-2.98(m,3H),2.75-2.52(m,4H),2.42-2.15(m,4H). LC-MS:[M+H]+=613.2。
对ZB-P-14进行手性拆分,得到手性产物ZB-P-14-1和ZB-P-14-2。
手性分离条件:分析柱CHIRALPAK@OD-H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm),长度(250mm),流速:1mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长210nm;总时间30分钟,峰1,出峰时间:7.98分钟;峰2,出峰时间:10.69分钟。
实施例109
ZB-P-15的合成:
除了使用螺环片断SP-13代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-15:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.20(m,1H),8.04(m,1H),7.94(m,1H),7.62-7.53(m,2H),7.43-7.26(m,2H),7.13-6.92(m, 2H),5.26-3.78(m,7H),3.21-3.01(m,3H),2.78-2.52(m,6H),2.45-2.27(m,2H).LC-MS: [M+H]+=614.2。
实施例110
ZB-P-16的合成:
除了使用螺环片断SP-9代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-16:LC-MS:[M+H]+=627.2。
实施例111
ZB-P-17的合成:
除了使用螺环片断SP-12代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-17:LC-MS:[M+H]+=628.2。
实施例112
ZB-P-18的合成:
除了使用螺环片断SP-10代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-18:LC-MS:[M+H]+=599.2。
实施例113
ZB-P-19的合成:
除了使用螺环片断SP-11代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-19:LC-MS:[M+H]+=600.2。
实施例114
ZB-P-20的合成:
除了使用螺环片断SP-14代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-20:LC-MS:[M+H]+=563.2。
实施例115
ZB-P-21的合成:
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-21:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70 (m,1H),8.55(m,1H),7.41(m,1H),7.24-6.88(m,5H),6.01(m,1H),5.01-3.70(m,7H),2.93 (m,2H),2.62(m,3H),2.44(m,1H),2.14(m,1H),1.33(m,1H),0.55-0.30(m,4H).LC-MS: [M+H]+=522.2。
对其手性拆分后得到ZB-P-21-1和ZB-P-21-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:12.54分钟;峰2出峰时间:38.69分钟。
实施例116
ZB-P-22的合成:
除了使用螺环片断SP-11代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-22:LC-MS:[M+H]+=574.2。
实施例117
ZB-P-23的合成:
除了使用螺环片断SP-10代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-23:LC-MS:[M+H]+=573.2。
实施例118
ZB-P-24的合成:
除了使用螺环片断SP-13代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-24:LC-MS:[M+H]+=588.2。
实施例119
ZB-P-25的合成:
除了使用螺环片断SP-8代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-25:LC-MS:[M+H]+=587.2。
实施例120
ZB-P-26的合成:
除了使用螺环片断SP-13代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-26:LC-MS:[M+H]+=602.2。
实施例121
ZB-P-27的合成:
除了使用螺环片断SP-9代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-27:LC-MS:[M+H]+=601.2。
实施例122
ZB-P-28的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-28:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76 (m,1H),8.13(m,1H),7.86(m,1H),7.46(m,2H),7.25-6.90(m,4H),5.02-3.73(m,10H),3.01 (m,2H),2.53(m,1H),2.22-1.98(m,1H),1.33-1.18(m,1H),0.60-0.35(m,4H).LC-MS: [M+H]+=530.2。
对其手性拆分后得到ZB-P-28-1和ZB-P-28-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:25.82分钟;峰2出峰时间:28.18分钟。
实施例123
ZB-P-29的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-29:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19 (m,1H),7.91(m,1H),7.59-7.50(m,2H),7.41(m,1H),7.24-6.92(m,3H),5.07-4.06(m,6H), 3.85(m,4H),3.21-2.96(m,2H),2.70-2.53(m,2H),1.33-1.18(m,1H),0.60-0.35(m,4H). LC-MS:[M+H]+=531.2。
对其手性拆分后得到ZB-P-29-1和ZB-P-29-2:制备柱子采用纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:29.51分钟;峰2出峰时间:33.99分钟。
实施例124
螺环SP-16的合成:
步骤一:
0℃下,将三乙胺(33.2mL)慢慢滴加到甲酸(22.4mL)中搅拌15分钟,而后慢慢加入到3-溴-4-氟苯甲醛(124-1,40.0g)以及丙二酸环(亚)异丙酯(28.4g)的DMF(200mL) 溶液中,反应液慢慢升温到100℃,搅拌24小时。TCL显示原料消失,反应液冷却到室温,冰水浴冷却条件下加入1N NaOH水溶液调至碱性,乙酸乙酯萃取,水层再用4N HCl 调至pH到1-2,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到目标产物124-2(25.1g),LC-MS:[M-H]-=245.0。
步骤二:
原料124-2(24.7g)溶解在1,2-二氯乙烷(100mL)室温条件下慢慢加入氯化亚砜(10mL)和干燥DMF(0.5mL),反应液在70℃下搅拌3小时,然后直接旋干。粗品溶解在干燥二氯甲烷(100mL),室温条件下慢慢滴加到无水氯化铝(40.0g)的二氯甲烷溶液中,混合液在40℃下反应3小时,反应液冷却到室温,然后慢慢倒入冷却的冰盐酸中,二氯甲烷萃取,合并的有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到目标产物124-3(13.2g)。LC-MS:[M+H]+=229.0。
步骤三:
原料124-3(8.0g),乙酰胺(4.0g),碳酸铯(22.0g)溶解在干燥的1,4-二氧六环(200 mL)中,氮气保护的条件下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3,300mg);4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos,400mg);反应液在氮气保护下,100℃下反应3小时。TLC显示原料消失,反应液冷却到室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到的粗品124-4直接用于下一步。LC-MS: [M+H]+=208.1。
步骤四:
粗品124-4溶解在6N HCl(40mL)/甲醇(100mL),反应液70℃下搅拌2小时,TLC 显示反应完全,反应液冷却到室温,冰水浴条件下,用1N NaOH调至中性,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到的粗品124-5(3.2g, 粗品),直接用于下一步。LC-MS:[M+H]+=166.1。
步骤五:
粗品124-5溶解在THF(50mL),室温条件下加入对硝基苯基氯甲酸酯(4.28g),室温反应1小时。甲胺盐酸盐(2.6g)溶解在甲醇(100mL)中加入TEA(5mL)搅拌 10分钟后,将上面的反应液慢慢加入,反应液室温反应1小时,反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到目标产物124-6(3.11g),LC-MS:[M+H]+=223.1。
步骤六:
原料124-6(1.50g),TMSCN(3.0g);NH4F(3.0g),(NH4)2CO3(6.0g)溶解在氨水(20mL)/乙醇(50mL)中,反应液加热70℃下反应70小时,LCMS显示反应完全,反应液冷却到室温,旋干乙醇,加入碳酸氢钠的饱和溶液,水相用乙酸乙酯萃取后用1M HCl调pH至3-4,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,析出固体过滤得白色固体SP-16(1.53g),LC-MS:[M+H]+=293.1。
实施例125
螺环SP-17的合成:
步骤一:
原料124-4(6.10g);TMSCN(3.1g);碘化锌(0.4g)溶解在甲苯(50mL)/乙腈(50mL)中,反应液75度搅拌4小时。TLC显示反应完全,反应液直接旋干,粗品柱层析得油状物125-2(4.7g)。
步骤二:
原料125-2(4.71g)溶解在无水乙醇(70mL)中,在0℃下通入干燥得氯化氢气体 5小时,旋干,得油状物,加20mL THF超声,丢弃上清液,得油状物125-3投下一步。
步骤三:
粗品125-3溶解在无水THF(50mL)中,在0度下缓慢滴加TEA(1.5g),滴加完成后,将三光气(8.90g)溶解在THF(50mL)中并滴加到反应中;反应在0度下搅拌1 小时后,加入1NHCl(20mL)并继续搅拌半小时;TLC显示反应完全,反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相用饱和碳酸氢钠洗涤2次,水相用少量乙酸乙酯萃取2次后用1N HCl调节pH至3-4左右,用乙酸乙酯萃取3次,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品得到125-4(1.11g),LC-MS:[M+H]+=279.1。步骤四:
原料125-4(1.1g);加入6N HCl 30mL,甲醇30mL,升至75℃,搅拌3小时体系由浑浊变澄清,TLC显示原料消失,用NaOH调至中性,乙酸乙酯萃取,分液,干燥,旋干得产品125-5(0.9g),粗品直接用于下一步,LC-MS:[M+H]+=237.1。
步骤五:
粗品125-5溶解在无水THF(30mL),加入对硝基氯甲酸苯酯(0.92g,4.1mmol),反应在室温下搅拌半小时,待用。甲胺盐酸盐(0.52g)溶解在甲醇(50mL)加入TEA (0.70g),搅拌10分钟后,将上面的反应液加入,混合物在室温下继续搅拌1小时后, TLC显示反应完全;反应液倒入冰水中,用1N HCl调节pH至3-4,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到SP-17(680mg), LC-MS:[M+H]+=294.1。
实施例126
螺环SP-18的合成:
步骤一:
将原料124-5(1g)溶解于乙酸乙酯/水的混合溶液(体积比2:1),加入碳酸氢钠固体(1.14g)冷却至0℃搅拌,滴加氯甲酸甲酯(0.52mL),继续保持在0℃搅拌15分钟,回温至室温反应过夜,加乙酸乙酯稀释反应液,1M稀盐酸洗,分液,饱和食盐水洗,分液,干燥浓缩。经柱层析分离得到产物126-2(0.8g),LC-MS:[M+H]+=224.1。
步骤二:
原料126-2(1.50g),TMSCN(3.0g);NH4F(3.0g),(NH4)2CO3(6.0g)溶解在氨水(20mL)/乙醇(50mL)中,反应液加热70℃下反应70小时,LCMS显示反应完全,反应液冷却到室温,旋干乙醇,加入碳酸氢钠的饱和溶液,水相用乙酸乙酯萃取后用1M HCl调pH至3-4,再用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,析出固体过滤得白色固体SP-18,LC-MS:[M+H]+=294.1。
实施例127
ZB-P-30的合成:
除了使用螺环片断SP-16代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-30:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(m,1H),8.32(m,1H),8.05(m,1H),7.39-6.88(m,4H),6.50(m,1H),4.92-3.41(m,5H),3.10-1.90(m,11H),1.30(m,1H),0.60-0.24(m,4H).LC-MS:[M+H]+=538.2。
对其进行手性拆分得到ZB-P30-1和ZB-P30-2:制备柱子采用纳微OD-5H填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相85%正己烷+15%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:62.18分钟;峰2出峰时间:78.65分钟。
实施例128
ZB-P-31的合成:
除了使用螺环片断SP-17代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-31:
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(m,1H),8.18(m,1H),7.38-6.90(m,4H),6.58(m,1H),4.95-3.48(m,5H),3.10-1.98(m,11H),1.30(m,1H),0.60-0.24(m,4H).LC-MS:[M+H]+=539.2。
对其进行手性拆分得到ZB-P31-1和ZB-P31-2:制备柱子采用纳微OD-5H填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相80%正己烷+20%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:28.10分钟;峰2出峰时间:31.59分钟。
实施例129
ZB-P-32的合成:
除了使用螺环片断SP-18代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-32:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.36(m,1H),8.80(m,1H),7.55(m,1H),7.38-7.23(m,2H),7.08-6.90(m,2H),4.85-3.45(m, 8H),3.20-2.93(m,3H),2.74-2.51(m,2H),2.21-1.96(m,3H),1.48-1.31(m,1H),0.63-0.22(m, 4H).LC-MS:[M+H]+=539.2。
对ZB-P-32进行手性拆分,得到手性产物ZB-P-32-1和ZB-P-32-2。
手性分离条件:分析柱纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(4.6mm),长度(250 mm),流速:1mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;总时间 40分钟,峰1,出峰时间:7.54分钟;峰2,出峰时间:14.94分钟。
实施例130
ZB-P-33的合成:
除了使用螺环片断SP-16代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-33:LC-MS:[M+H]+=566.2。
实施例131
ZB-P-34的合成:
除了使用螺环片断SP-16代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-34:LC-MS:[M+H]+=540.2。
实施例132
ZB-P-35的合成:
除了使用螺环片断SP-16代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-35:LC-MS:[M+H]+=520.2。
实施例133
ZB-P-36的合成:
除了使用螺环片断SP-17代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-36:LC-MS:[M+H]+=567.2。
实施例134
ZB-P-37的合成:
除了使用螺环片断SP-17代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-37:LC-MS:[M+H]+=541.2。
实施例135
ZB-P-38的合成:
除了使用螺环片断SP-17代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-38:LC-MS:[M+H]+=521.2。
实施例136
ZB-P-39的合成:
除了使用螺环片断SP-18代替SP-1,以及酰胺片断AN-14-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-39:LC-MS:[M+H]+=567.2。
实施例137
ZB-P-40的合成:
除了使用螺环片断SP-18代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-40:LC-MS:[M+H]+=541.2。
实施例138
ZB-P-41的合成:
除了使用螺环片断SP-18代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-41:LC-MS:[M+H]+=521.2。
实施例139
ZB-P-42的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-42:LC-MS:[M+H]+=511.2。
实施例140
ZB-P-43的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-43:LC-MS:[M+H]+=510.2。
实施例141
ZB-P-44的合成:
除了使用螺环片断SP-8代替SP-1,以及酰胺片断AN-8-2代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物ZB-P-44:LC-MS:[M+H]+=567.2。
实施例142
酰胺AN-16的合成:
步骤一:
氮气保护下,将3,3,3-三氟丙酮酸乙酯(25.0g,0.147mol)溶于二氯甲烷(100mL),加入氨基甲酸叔丁酯(13.5g,0.115mol),室温搅拌16小时,TLC显示反应完全。浓缩干燥得白色固体粗品141-2(32.4g)。
步骤二:
氮气保护下,将底物141-2(32.4g)和吡啶(55mL,0.452mol)加入乙醚(400mL),冰浴下慢慢加入三氟乙酸酐(56.7g,0.226mol),室温搅拌16小时,TLC显示反应完全。反应液过滤,滤饼用乙醚洗涤。固体干燥后溶于二氯甲烷,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得淡黄色半固体粗品141-3(30g)直接用于下一步。
步骤三:
底物141-3(30g,粗品)溶解于无水四氢呋喃(300mL)中,冰水浴冷却,氮气保护条件下分批加入四氢铝锂(7.7g,0.2mol),然后慢慢升温到室温,继续搅拌16小时。 TLC显示反应完全。反应液在冰水浴下慢慢加入15%氢氧化钠溶液淬灭,然后加入水,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得淡黄色固体粗品141-4 (15g)直接用于下一步。
步骤四:
将底物141-4(11.0g)溶解在二氯甲烷(200mL)中,加入对甲基苯磺酰氯(15.2g,80mmol),三乙胺(12.3g,122mmol)和4-二甲氨基吡啶(7.44g,61mmol)并继续搅拌3小时。 TLC显示原料反应完,反应液慢慢加水淬灭,二氯甲烷萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析得产物141-5(10.2g)。
步骤五:
将5-氟-2-羟基苯甲酸甲酯(6.00g,35.3mmol)溶解在干燥DMF中(30mL)中,加入141-5(13.5g,35.3mmol)和碳酸钾(9.67g,70mmol),室温下搅拌12小时。TLC显示原料反应完成。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析得产物141-6(2.52g)
步骤六:
将底物141-6(2.52g,3.93mmol)溶解在无水四氢呋喃(50mL)中,室温慢慢加入四氢铝锂(500mg,13.16mmol),室温下搅拌1小时后TLC显示反应完全。慢慢加入15%氢氧化钠溶液,然后加入水,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得141-7(2.05g,粗品),直接用于下一步。LC-MS:376.1[M+Na]+。
步骤七:
将底物141-7(1.60g,粗品)溶解在二氯甲烷(200mL)中,加入活性二氧化锰(8.0g),室温下搅拌2小时后TLC显示反应完全。反应液过滤,浓缩得粗品141-8(1.2g),LC-MS: 374.1[M+Na]+。
步骤八:
将底物141-8(1.2g)溶于三氟乙酸(15mL),室温下搅拌30分钟后TLC显示反应完全。反应液浓缩得粗品141-9直接用于下一步。
步骤九:
将底物141-9溶于二氯甲烷(20mL),加入氰基硼氢化钠(204mg,3.3mmol),室温下搅拌30分钟后TLC显示反应完全。反应液倒入冰水中,二氯甲烷萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离得到产品141-10(440mg),LC-MS:236.1 [M+H]+。
步骤:
将底物141-10(440mg,1.87mmol)溶解在无水二氯甲烷(20mL)中,加入溴乙酰溴),室温下搅拌过夜后TLC显示反应完全。处理纯化得目标化合物AN-16(506mg,产率76%),LC-MS:356.0[M+H]+。
对AN-16进行手性拆分,得到手性产物AN-16-1和AN-16-2。
手性分离条件:制备柱子,纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相80%正己烷+20%乙醇等梯度,波长220nm;总时间20 分钟,峰1出峰时间:12.9分钟;峰2出峰时间:16.2分钟;
实施例143
螺环SP-19的合成:
步骤一:
将原料142-1(4.7g,20.7mmol)溶于甲苯/乙腈(50/50mL)混合溶剂中,室温下加入TMSCN(6.2g,42.9mmol)和ZnI2(1.4g,1.44mmol),升温至80℃反应18小时。TLC显示反应完全后,反应液冷区至室温,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品。硅胶柱层析得到142-2(6.21g)。步骤二:
将底物142-2(6.2g,19.1mmol)溶于无水乙醇(30mL)中,冷却至0℃下,持续通入干燥的HCl气体6小时。然后35℃下浓缩,加入THF打浆,过滤,滤饼烘干得到142-3(粗品),直接用于下一步。
步骤三:
将粗品142-3溶于无水四氢呋喃(10mL)中,加入三乙胺(5.79g,57.2mmol),冰浴下冷却条件下加入三光气(2.27g,7.64mmol),搅拌反应10分钟,TLC显示反应完全后,加入浓盐酸调节至酸性5-6,搅拌30分钟,TLC显示反应完全后,反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取两次,有机相用加入4N NaOH搅拌10分钟,分离出有机相,水相用浓盐酸调节至弱酸性,有固体析出,固体柱层析提纯得到目标产物SP-19(750mg), LCMS:298.1[M+H]+。
实施例144
螺环SP-20的合成:
步骤一:
6-氨基-1,2,3,4-四氢-1-萘酮143-1(10.0g,62.0mmol)溶于48%氢溴酸水溶液(120 mL)溶液中,-5-5℃条件下,慢慢滴加NaNO2(4.70g,68.2mmol)/H2O(50mL)溶液,在温度下反应30分钟。然后反应液慢慢加入到CuBr(19.5g,136.4mmol)/HBr(20 mL)的混合液中,反应液在室温下搅拌30分钟,TLC显示反应完全,乙酸乙酯萃取,合并的有机相,水洗,饱和碳酸氢钠溶液洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到目标产物143-2(5.2g)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.13-2,19(m,2H), 2.67(t,J=6.8Hz,2H),2.97(t,J=6.0Hz,2H),7.46-7.48(m,2H),7.90-7.92(m,1H)。
步骤二:
将原料143-2(8.3g,36.9mmol)和1-甲基-1H-吡唑-4-硼酸频那酯(11.62g,55.4mmol) 溶于干燥DMF(50ml)中,室温下加水(5mL),碳酸钠(7.8g,73.8mmol)和Pd(dppf)Cl2(400mg,3.69mmol),氮气置换三次,氮气保护下70℃反应3小时。TLC显示反应完全,反应液冷却至室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析得到143-3(4.7g),LCMS:227.1[M+H]+。
步骤三:
室温条件下将底物143-3(1.0g,4.4mmol)溶于EtOH(20mL)中,室温下加入TMSCN(4.4g,44mmol),氟化铵(1.6g,44mmol),碳酸铵(6.4g,66mmol)和氨水(10mL),然后升温至60℃反应18小时。TLC显示还有部分原料,补加碳酸铵(3.2g,33mmol) 继续反应6小时,反应液冷区至室温后,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到SP-20(340mg),LCMS:295.1[M-H]-。
实施例145
螺环SP-21的合成:
步骤一:
将底物144-1(12.0g,52.8mmol)溶于甲苯(100mL)和乙腈(100mL)的混合溶剂中,加入TMSCN(5.7g,58.1mmol)和碘化锌(0.8g,2.6mmol),75℃下反应3 小时,反应液浓缩硅胶柱层析得144-2(7.4g)
步骤二和步骤三:
将底物144-2(7.4g,22.7mnmol)溶于无水乙醇(150mL)中,0℃下通入干燥 HCl气体,反应5小时,38℃下浓缩得粗品白色固体144-3。将144-3溶于四氢呋喃(20 mL),超声5分钟,过滤,滤饼溶于四氢呋楠(50mL),冰浴下加入三光气(6.7g,22.7 mmol),三乙胺(6.8g,68.3mmol),反应结束,加入稀HCl调至弱酸性,体系澄清,室温搅拌30分钟,浓缩,加水,乙酸乙酯萃取,有机相用氢氧化钠水溶液洗,水相再用乙酸乙酯萃取,保留水相,加入稀盐酸调至酸性,乙酸乙酯萃取,保留有机相,水洗,饱和食盐水洗,干燥,浓缩得白色固体144-4(890mg),LC-MS:296.0[M+H]+。
步骤四:
将底物144-4(890mg,2.9mmol),甲基脲(443mg,5.8mmol),Pd2(dba)3(3.27mg,0.03mmol),xantphos(34mg,0.06mmol),碳酸铯(2g,5.8mmol)溶于二氧六环(50 mL)中,氮气保护下反应。反应完全后,加水,乙酸乙酯萃取,干燥,浓缩,硅胶柱层析得SP-21,160mg。
实施例146
螺环SP-22的合成:
步骤一:
将间溴苯酚145-1(34.6g,0.2mol)溶于3-氯丙酸(21.7g,0.2mol)中,滴加氢氧化钠(19.2g,0.48mol)的水(100mL)溶液。70度搅拌72小时。反应液冷却到室温,冰水浴冷却条件下用稀盐酸调至弱酸性,加入乙酸乙酯萃取。有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品柱层析得145-2黄色色固体(13.6g),LCMS:243.1[M-H]-。
步骤二:
将底物145-2(13.6g,55.5mmol)溶于二氯亚砜(100mL)中,加入催化量DMF, 70度回流2小时。TLC取样加入甲醇检测,原料反应完全。浓缩得到粗品145-3直接用于下一步。
步骤三:
将底物145-3溶于二氯甲烷(200mL),慢慢加入三氯化铝(22.4g,0.167mol),反应液40度回流3小时后,TLC显示反应完全。反应液倒入冰稀盐酸(2N,100mL)。二氯甲烷萃取,水洗,饱和食盐水洗,干燥浓缩。粗品硅胶柱层析分离得淡黄色粗产品145-4 (8.4g)。
步骤四:
将底物145-4(3.0g,13.2mol)溶于1,4-二氧六环(150mL),加入N-甲基脲(1.90g,26.4mol),Cs2CO3(8.6g,26.4mmol),Xantphos(153mg,0.264mmol)和Pd2(dba)3(120 mg,0.132mmol)。氮气保护下,100度反应3小时。TLC检测原料反应完全。加入乙酸乙酯稀释后过滤,滤液浓缩硅胶柱层析得1.22g淡黄色固体145-5。
步骤五:
将底物145-5(1.8g,8.18mmol)溶于乙醇(60mL)中,加入碳酸铵(9.1g,94.8mol),氟化胺(3.6g,97.3mol),氨水(24mL)和TMSCN(3.6g,36.4mol),65度反应2天。 TLC检测还有少量原料未反应完。加入饱和食盐水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,干燥浓缩,二氯甲烷打浆过滤得白色固体SP-22(1.1g),LC-MS:291.1[M+H]+。
实施例147
酰胺AN-17的合成:
步骤一:
3-羟基-2-噻吩甲酸甲酯146-1(10g,63.2mmol)溶于DMF(100mL)中,加入碳酸钾固体(17.4g,126.4mmol),室温搅拌反应10分钟后,加入溴甲基环丙基酮(15.4g,94.8 mmol),室温搅拌反应2小时,TLC检测反应完全。反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。得到产物146-2(17.2g) 直接用于下一步。1HNMR:(CDCl3,400MHz):1.01-1.05(m,2H),1.13-1.17(m,2H), 2.45-2.50(m,1H),3.86(s,3H),4.81(s,2H),6.73(d,J=5.6Hz,1H),7.42(d,J=5.6Hz,1H)。
步骤二:
将底物146-2(17.2g,粗品)溶于正丁醇(120mL),加入醋酸铵(48.7g,632mmol) 和氰基硼氢化钠(19.8g,316mmol),反应混合液加热至60度反应1小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,反应液倒入冰水中,用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品经柱层析纯化得到白色固体146-3(11.2g)。
步骤三:
将146-3(3.0g,12.43mmol)溶于二氯甲烷(60mL),加入TEA(1.9g,18.64mmol),冷却至0度,滴加Boc酸酐(3.0g,13.7mmol)的二氯甲烷溶液,滴毕,恢复至室温搅拌反应2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,反应液倒入冰水中,用二氯甲烷萃取,合并的有机相,1N盐酸溶液洗涤,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到目标产物146-4(4.03g)淡黄色油状物。直接用于下一步。LC-MS:364.1[M+Na]+。
步骤四:
将底物146-4(4.03g,粗品)溶于THF(80mL)中,氮气下,冷却至0度左右,滴加入四氢铝锂的四氢呋喃溶液(7.4mL,18.64mmol,2.5mol/L),0度下继续搅拌反应1 小时。TLC检测反应完全。0度下,向反应液中依次滴加入水(0.7mL),15%的氢氧化钠水溶液(0.7mL)和水(2.1mL),剧烈搅拌反应半小时后过滤,滤液浓缩得到粗品。粗品用乙酸乙酯溶解,有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到目标产物146-5(2.71g)为微黄色油直接用于下一步。
步骤五:
将粗品146-5(2.71g)溶于二氯甲烷(50mL)中,加入二氧化锰(15.0g,172.25mmol),体系加热至回流反应2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却,过滤,浓缩,得到146-6 (2.3g)为淡黄色油状物,直接用于下一步。LC-MS:334.1[M+Na]+。
步骤六:
粗品146-6(2.3g)溶于二氯甲烷(30mL)中,加入三氟乙酸(5mL),反应液室温搅拌反应半小时,LCMS检测反应完全。直接浓缩得到粗品146-7(1.81g)为黄色固体,直接用于下一步。LC-MS:194.1[M+H]+。
步骤七:
粗品146-7(1.81g)溶于甲醇(50mL)中,0度下,加入硼氢化钠(378mg,10mmol),继续搅拌反应半小时,TLC检测反应完全。反应液倒入1N盐酸水溶液中,用二氯甲烷萃取,合并的有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品经柱层析纯化得到产物146-8(1.31g)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):0.36-0.39(m,2H),0.58-0.64(m,2H), 0.84-0.88(m,1H),2.26-2.31(m,1H),3.78-3.83(m,1H),3.91(d,J=15.2Hz,1H),4.04(d,J= 15.6Hz,1H),4.37(d,J=2Hz,0.5H),4.40(d,J=2Hz,0.5H),6.70(d,J=5.6Hz,1H),6.90 (d,J=5.6Hz,1H)
步骤八:
将146-8(700mg,3.58mmol)溶于二氯甲烷(35mL)中,加入TEA(543mg, 5.37mmol),氮气下,冷气至0度,滴加入溴乙酰溴(867mg,4.3mmol)的二氯甲烷溶液,0度下继续反应1小时,TLC检测基本反应完全。反应液加冰水淬灭,二氯甲烷萃取,水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品经柱层析纯化得到酰胺AN-17(610mg), LCMS:316.0[M+H]+。
对酰胺AN-17进行手性拆分,分离条件:制备柱子纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1,出峰时间20.19分钟;峰2,出峰时间24.60分钟。
实施例148
SYY-B057-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-16-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B057-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70 (m,1H),7.54(m,1H),7.23-6.97(m,5H),6.08(m,1H),5.58(m,1H),5.16-3.91(m,6H), 3.13-2.90(m,2H),2.64-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H).LC-MS:[M+H]+=551.1。
实施例149
SYY-B057-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-16-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B057-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.75(m,1H),7.53(m,1H),7.26-6.96(m,5H),6.11(m,1H),5.59(m,1H),5.13-3.93(m,6H), 3.14-2.90(m,2H),2.65-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H).LC-MS:[M+H]+=551.2。
实施例150
SYY-B074的合成:
除了使用螺环片断SP-22代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B074:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.86(m,1H),8.54(m,1H),7.40-6.79(m,6H),6.01(m,1H),4.84-4.68(m,2H),4.40-3.43(m, 5H),3.17-3.05(m,1H),2.73-2.56(m,4H),2.44-2.00(m,4H),1.40-1.33(m,1H),0.60-0.24(m,4H).LC-MS:[M+H]+=536.2。
对其手性制备得化合物SYY-B074-1和SYY-B074-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:8.29分钟;峰2出峰时间:17.13分钟。
实施例151
SYY-B077的合成:
除了使用螺环片断SP-21代替SP-1,以及酰胺片断AN-11-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B077:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(m,1H),7.38-6.83(m,6H),6.09(m,1H),4.92-4.78(m,2H),4.47-3.43(m,5H),3.18-3.05 (m,1H),2.78-2.54(m,4H),2.39-2.29(m,2H),2.08-1.96(m,2H),1.40-1.33(m,1H),0.64-0.26 (m,4H).LC-MS:[M+H]+=537.2。
对其手性拆分得到SYY-B077-1和SYY-B077-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;1号峰出峰时间:34.32分钟;2号峰峰时间:48.67分钟。
实施例152
SYY-B083的合成:
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-16-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B083:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75 (m,1H),8.55(m,1H),7.42(m,1H),7.24-6.94(m,5H),6.01(m,1H),5.55(m,1H),5.10-4.48 (m,5H),3.78(m,1H),2.97-2.91(m,2H),2.62(m,3H),2.49-2.43(m,1H),2.15(m,1H). LC-MS:[M+H]+=550.2。
对其手性拆分后得到SYY-B083-1和SYY-B083-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:8.56分钟;峰2出峰时间:26.33分钟。
实施例153
SYY-B084的合成:
除了使用螺环片断SP-6代替SP-1,以及酰胺片断AN-16-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B084:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18 (m,1H),7.90(m,1H),7.60-7.54(m,2H),7.38(m,1H),7.21(m,1H),6.99(m,2H),5.59(m, 1H),5.10-3.86(m,9H),3.21-3.01(m,2H),2.68-2.50(m,2H).LC-MS:[M+H]+=559.2。
对其手性拆分后得到SYY-B084-1和SYY-B084-2:制备柱子采用纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相70%正己烷+30%异丙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:68.20分钟;峰2出峰时间:77.29分钟。
实施例154
SYY-B085的合成:
除了使用螺环片断SP-7代替SP-1,以及酰胺片断AN-16-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B085:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.82 (m,1H),8.13(m,1H),7.86(m,1H),7.47(m,2H),7.20(m,2H),7.10-6.92(m,2H),5.55(m, 1H),5.12-3.80(m,9H),3.02(m,2H),2.55(m,1H),2.22(m,1H).LC-MS:[M+H]+=558.2。
对其手性拆分得到SYY-B085-1和SYY-B085-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:32.11分钟;峰2出峰时间:42.08分钟。
实施例155
SYY-B086-1和SYY-B086-2的合成:
除了使用螺环片断SP-14-1及SP-14-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,分别制备得到化合物SYY-B086-1和SYY-B086-2: LC-MS:[M+H]+=537.2。
实施例156
SYY-B092的合成:
除了使用螺环片断SP-15代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B092:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(m,1H),8.47(m,1H),7.25-6.88(m,6H),6.00(m,1H),5.02-4.92(m,1H),4.76-4.68(m, 2H),4.45-3.71(m,4H),2.68-2.61(m,5H),2.02(m,2H),1.85(m,2H),1.40-1.33(m,1H), 0.58-0.24(m,4H).LC-MS:[M+H]+=536.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B092-1和SYY-B092-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+ 40%异丙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:11.23分钟;峰2出峰时间:21.82分钟。
实施例157
SYY-B093的合成:
除了使用螺环片断SP-20代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B093:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.87(m,1H),8.12(m,1H),7.84(m,1H),7.39-6.88(m,6H),5.02-4.02(m,6H),3.84-3.73(m, 4H),2.77(m,2H),2.05(m,2H),1.91(m,2H),1.33(m,1H),0.62-0.31(m,4H).LC-MS: [M+H]+=544.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B093-1和SYY-B093-2:制备柱子采用纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+ 40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:21.27分钟;峰2出峰时间:31.24分钟。
实施例158
SYY-B094的合成:
除了使用螺环片断SP-19代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B094:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.19(m,1H),7.88(m,1H),7.47-7.39(m,3H),7.25-7.19(m,1H),7.07-6.88(m,2H),5.07-4.52 (m,3H),4.48-4.04(m,3H),3.99-3.74(m,4H),2.85(m,2H),2.22(m,2H),2.00(m,1H),1.82 (m,1H),1.18(m,1H),0.59-0.36(m,4H).LC-MS:[M+H]+=545.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B094-1和SYY-B094-2:制备柱子采用大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷 +40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:60.88分钟;峰2出峰时间:76.10分钟。
实施例159
SYY-B099的合成:
除了使用螺环片断SP-22代替SP-1,以及酰胺片断AN-15-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B099:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.88(m,1H),8.54(m,1H),7.24-6.79(m,6H),6.01(m,1H),5.02-4.92(m,1H),4.78-4.68(m, 2H),4.40-3.43(m,6H),2.62(m,3H),2.25-2.00(m,2H),1.40-1.33(m,1H),0.60-0.24(m,4H).LC-MS:[M+H]+=538.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B099-1和SYY-B099-2:制备柱子采用大赛璐AD-H填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+ 40%乙醇等梯度,波长220nm;峰1出峰时间:12.0分钟;峰2出峰时间:21.15分钟。
实施例160
SYY-B100-1的合成:
除了使用螺环片断SP-1-1代替SP-1,以及酰胺片断AN-17-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B100-1:1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.79(m,1H),7.53(m,1H),7.27-7.21(m,3H),6.66(m,1H),6.16(m,1H),5.12-3.90(m,7H), 3.14-2.93(m,2H),2.65-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H),1.10(m,1H),0.63-0.32(m,4H). LC-MS:[M+H]+=511.2。
实施例161
SYY-B100-2的合成:
除了使用螺环片断SP-1-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-17-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B100-2:1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.81(m,1H),7.53(m,1H),7.26-7.21(m,3H),6.66(m,1H),6.15(m,1H),5.13-3.93(m,7H), 3.14-2.93(m,2H),2.65-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,1H),1.08(m,1H),0.63-0.32(m,4H). LC-MS:[M+H]+=511.2。
实施例162
胺AN-18的合成:
步骤1:
2-甲基-3-溴吡啶161-1(20.0g,116.3mmol)溶于1,4-二氧六环(200mL)和水(20mL)的混合溶剂中,加入二氧化硒(26.0g,234.3mmol),反应体系加热至110度反应7 小时,后补加二氧化硒(13.0g,117.2mmol),继续加热反应过夜,TLC检测大部分原料反应完成。反应液冷却至室温,过滤,滤液浓缩后用乙酸乙酯溶解,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到淡黄色固体161-2(9.12g)。1H-NMR: (CDCl3,400MHz):δ10.23(s,1H),8.75(dd,J1=4.8Hz,J2=1.6Hz,1H),8.04(dd,J1=8.0 Hz,J2=1.2Hz,1H),7.38(q,J=3.6Hz,1H).
步骤2:
化合物161-2(2.8g,15.05mmol)溶于甲苯(50mL)中,依次加入乙二醇(1.9g,30.1mmol)和对甲基苯磺酸(500mg,3.01mmol),反应液加热至130度分水3小时, TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,倒入冰的碳酸钠水溶液中,乙酸乙酯萃取,洗涤,干燥,浓缩,得到3.2g黄色油状物161-3,直接投下一步反应。
步骤3:
原料161-3(3.2g,粗品)溶于四氢呋喃(30mL)中,氮气下,冷却至-70度左右,滴加入正丁基锂溶液(6.1mL,15.3mmol),加毕,-70度搅拌反应1小时,滴加入DMF (5.1g,69.55mmol)的THF溶液,加毕,继续搅拌反应1小时,TLC检测基本反应完全。反应液用饱和氯化铵水溶液淬灭,萃取,洗涤,干燥,浓缩,粗品经柱层析纯化得到黄色油状物161-4(512mg)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ10.57(s,1H),8.78(dd,J1= 4.8Hz,J2=1.6Hz,1H),8.26(dd,J1=8.0Hz,J2=1.6Hz,1H),7.48(q,J=2.8Hz,1H),6.16 (s,1H),4.28-4.24(m,2H),4.16-4.12(m,2H).
步骤4:
将底物161-4(3.6g,20.1mmol)和wittig试剂(7.6g,22.1mmol)在四氢呋喃(50mL)中加热至回流反应1小时,TLC检测基本反应完全。反应液浓缩硅胶柱层析纯化得到黄色油状物161-5(4.2g)。
步骤5:
将底物161-5(350mg,1.43mmol)溶于甲醇(10mL)中,加入钯炭(100mg),氢气置换三次后,室温搅拌反应2小时,LC-MS检测反应完全,过滤,浓缩,得到淡黄色油状物161-6(300mg)。
步骤6:
将底物161-6(500mg,2.02mmol)溶于正丁醇(10mL)中,加入醋酸铵固体(1.6 g,20.2mmol),搅拌下加入氰基硼氢化钠固体(638mg,10.1mmol),补加正丁醇(10mL),体系加热至80度反应1.5小时,TLC检测反应完全。反应液浓缩干后用水稀释,二氯甲烷萃取,母液用二氯甲烷和异丙醇萃取两次,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到无色油状物161-7(390mg)。LC-MS:249.2[M+1]+。
步骤7:
将底物161-7(390mg,1.57mmol)在浓盐酸(10mL)中加热至60度反应2小时, TLC检测反应完全。反应液浓缩至少量后用碳酸钠中和,二氯甲烷和异丙醇萃取两次,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油状物161-8(190mg)。LC-MS:187.2 [M+1]+。
步骤8:
将底物161-8(190mg,1.02mmol)溶于甲醇(5mL)中,加入钯炭(100mg),氢气置换三次后,室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,滤液浓缩得到淡黄色油状物胺AN-18(140mg)。LC-MS:189.2[M+1]+。
实施例163
酰胺AN-19的合成:
步骤1:
将底物2-溴-4,5-二氟苯甲酸162-1(30.0g,0.127mol)溶解在四氢呋喃(150mL)中,冰浴下加入硼烷的四氢呋喃溶液(140mL,0.139mol),然后升温至80度回流2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温后冰浴下滴加2N氢氧化钾溶液(66mL)。加入乙酸乙酯稀释后,过滤,饱和食盐水洗,合并有机相,浓缩干燥得白色固体162-2(28.2g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.42-7.38(m,2H),4.70(s,2H),2.18(brs,1H).
步骤2:
将底物162-2(28.2g)溶于二氯甲烷中(300mL),室温下加入二氧化锰(110g,1.27mol),室温反应16小时,TLC检测反应完全。反应液硅藻土过滤,滤饼用二氯甲烷洗涤,滤液干燥浓缩得白色固体162-3(27.6g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.24(d,J=3.2Hz, 1H),7.81-7.76(m,1H),7.55-7.51(m,1H),
步骤3:
将底物162-3(27.6g,粗品)溶于甲苯(200mL)中,室温下加入乙二醇(200mL) 和对甲苯磺酸(1.0g,5.8mmol),升温至100度反应24小时,TLC检测反应完全。反应液冷却到室温后,乙酸乙酯萃取,合并有机相水洗,饱和食盐水洗,干燥浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到162-4为黄色油状物(18.1g)。
步骤4:
将底物162-4(18.1g,68.4mol)溶于干燥NMP(150mL)中,室温氮气保护下加入Pd2(dba)3(1.8g,2.05mol),三苯基膦(1.8g,6.84mol)和氰化锌(16.0g,0.137mol),然后升温至100度反应16小时。反应液冷却至室温后加入乙酸乙酯稀释,过滤,滤液,水洗,饱和食盐水洗,干燥浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到162-5为白色固体(5.08g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.58-7.47(m,2H),5.98(s,1H),4.25-4.10(m,4H).
步骤5:
将底物162-5(5.00g,23.7mmol)二溶于二氧六环(100mL)中,室温下加入盐酸(33mL,12N),室温搅拌1小时,TLC检测反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得162-6直接用于下一步。1H-NMR(400MHz, CDCl3):δ10.29(d,J=2.4Hz,1H),7.92-7.88(m,1H),7.73-7.69(m,1H),
步骤6:
将底物162-6溶于四氢呋喃(150mL)中,室温下加入磷叶立德试剂(12.3g,35.9mmol),升温至80度回流2小时,TLC检测反应完全。反应液浓缩硅胶柱层析得黄色固体162-7(5.1g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.79(dd,J1=16.0Hz,J2=1.2Hz,1H), 7.63-7.55(m,2H),6.92(d,J=16.0Hz,1H),2.34-2.28(m,1H),1.24-1.20(m,2H),1.10-1.05(m, 2H).LC-MS:[M+1]:234.1。
步骤7:
将底物162-7(5.1g,21.9mmol)溶于甲醇(100mL)中,室温下加入10%Pd/C(1.0g),氢气置换3次,室温反应3小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,滤饼用甲醇洗涤,滤液162-8直接用于下一步。
步骤8:
上一步得到的滤液162-8中,室温下加入雷尼镍(800mg)和TEA(2mL,14.4mmol),氢气置换3次,室温反应16小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,滤饼用甲醇洗涤,滤液162-9直接用于下一步。LCMS:[M+1]+240.1。
步骤9:
上一步得到的滤液162-9中,加室温下入醋酸(1mL)和氰基硼氢化钠(2.6g,43.8mmol),室温反应1小时,TLC检测反应完全。加入饱和食盐水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得162-10直接用于下一步。LC-MS: [M+1]+224.2。
步骤10
将底物162-10溶于二氯甲烷中(100mL),室温下加入溴乙酰溴(4mL,47.4mmol),室温反应3小时,TLC检测原料反应完全。加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)搅拌10分钟后,二氯甲烷萃取,合并有机相,饱和食盐水水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。,粗品 pre-HPLC制备得黄色油状物AN-19(1.5g)。LC-MS:[M+1]:344.1。
手性拆分制备得到AN-19-1和AN-19-2,方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相95%正己烷+5%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:28.85分钟;峰2出峰时间:38.65分钟。
实施例164
胺AN-20的合成:
步骤1:
2-溴-3-吡啶甲醛163-1(20.0g,108mmol),对甲苯磺酸(4.0g)和乙二醇(50mL)溶于甲苯(150mL)中,然后加热100度下搅拌4小时。TLC检测原料基本反应完全。反应液冷却到室温后,倒入冰水中,用EtOAc萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到163-2(21.51g)。LC-MS:230.0[M+1]+
步骤2:
将原料163-2(21.52g,93.54mmol)溶解于300mL四氢呋喃中,氮气置换三次,干冰浴冷至-65℃,然后慢慢滴加丁基锂(59mL,148mmol),加完后继续搅拌1小时后,将干燥DMF(11mL,148mmol)。然后升至室温继续搅拌30分钟后,将反应液用水萃灭。水相用EtOAc萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到163-3 (18.2g),直接用于下一步。LC-MS:180.1[M+1]+。
步骤3:
将163-3(18.2g)和磷叶立德试剂(27.0g,80mmol)溶于四氢呋喃(200mL)中,反应液加热到70℃搅拌1小时,TLC反应完全,反应液冷却到室温直接浓缩,粗品硅胶层析柱得到163-4(10.63g)。
步骤4:
将原料163-4(10.0g,40mmol)溶于乙酸乙酯中(250mL),加入10%Pd/C(1.7g), 氢气置换,在氢气(1atm)条件下室温搅拌2小时,TLC反应完全,反应液硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,合并的有机相干燥,浓缩得到163-5(9.65g)直接用于下一步产品。
步骤5:
粗品163-5(9.65g)溶于甲醇(150mL)中,加入乙酸铵(31g,400mmol),加入氰基硼氢化钠(12g,200mmol),室温反应16小时,TLC原料反应完全。反应液加水萃灭,用EtOAc萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到163-6(4.12g),LCMS:249.2[M+1]+。
步骤6:
将底物163-6(4.12g,16.6mmol)溶于40mL TFA中,加入10mL水,80℃反应 4小时,TLC显示反应完全,浓缩,粗品倒入水中,然后用1N NaOH调节为碱性,乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到163-7(1.51g,粗品)直接用于下一步。LC-MS:187.1[M+1]+。
步骤7:
将底物163-7溶于15mL甲醇中,加入0.5mL乙酸,加入氰基硼氢化钠(2.0g,30mmol),室温反应2小时,TLC显示反应完全,浓缩,粗品倒入水中,然后乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到胺AN-20(628mg)为白色固体。LC-MS:189.2[M+1]+。
实施例165
胺AN-21的合成:
步骤1:
3-溴-4-吡啶甲醛164-1(22.0g,118mmol),乙二醇(14.7g,236mmol)和TsOH(6.1g,35mmol)加入甲苯(150mL)中,反应液加热回流分水反应3小时,TLC显示原料反应完。反应液冷却到室温后,倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到164-2(26.7g)为黄色油直接用于下一步。
步骤2:
氮气保护下,底物164-2(26.7g)溶解在无水THF(400mL)中,-65℃反n-BuLi(51ml,0.12mol),滴完,继续搅拌1小时。将干燥DMF(42.4g,0.58mol)。搅拌30分钟后,然后慢慢升至室温继续搅拌30分钟后,将反应液用水萃灭。水相用EtOAc萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到164-3(8g)。 LC-MS:180.1[M+1]+。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ10.44(s,1H),9.09(s,1H),8.84(d,J= 4.2Hz,1H),7.66(d,J=4.2Hz,1H),6.44(s,1H),4.12(br,4H),
步骤3:
氮气保护下,底物164-3(10.8g,60.33mmol)和磷叶立德试剂(23g,66.36mmol) 溶解到无水THF(200mL)中,75℃搅拌1.5小时,TLC显示原料反应完)。反应液冷却到室温直接浓缩,粗品硅胶层析柱得到164-4(9.5g)淡黄色油。LC-MS:246.2 [M+1]+。
步骤4:
将底物164-4(9.5g,38.7mmol)溶于甲醇中(200mL),加入10%Pd/C(2.0g), 氢气置换,在氢气(1atm)条件下室温搅拌2小时,TLC反应完全,反应液硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,合并的有机相干燥,浓缩得到164-5(9.4,粗品)直接用于下一步产品。
步骤5:
将底物164-5(9.4g,粗品)溶于甲醇(150mL)中,加入乙酸铵(31g,400mmol), 加入氰基硼氢化钠(12g,200mmol),室温反应16小时,TLC原料反应完全。反应液加水萃灭,用EtOAc萃取,合并的有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到产物164-6(1.61g),LC-MS:249.2[M+1]+。
步骤6:
将底物164-6(1.61g,6.45mmol)溶于20mL浓盐酸中,60℃反应2小时,TLC 显示反应完全,浓缩,粗品倒入水中,然后用饱和碳酸钠调节为碱性,萃取,有机相盐洗,无水硫酸钠干燥,浓缩干得到164-7(1.0 5g,粗品)直接用于下一步。
步骤7:
将底物164-7(1.05g,粗品)溶解在甲醇(40ml)中,再加入10%Pd/C(600mg),氢气置换3次,然后在氢气(1atm)条件下室温搅拌2小时,TLC反应完全,反应液硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,合并的有机相干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析得到将产物胺AN-21 (730mg)。LC-MS:189.2[M+1]+。
实施例166
SYY-B081-1和SYY-B082-1的合成:
步骤1:
将底物SP-1-1(130mg,0.472mmol)溶于DMF(4mL)中,室温下加入2-溴乙酸苄酯(162mg,0.698mmol)和碳酸钾(130mg,0.942mmol),室温反应1小时,TLC 显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶层析柱得到165-2(300mg)。
步骤2:
将底物165-2(300mg)溶于甲醇(10mL)中,室温下加入Pd/C(82mg),氢气置换,室温反应2小时,TLC显示反应完全。硅藻土过滤,滤液浓缩得到165-3(160mg)。
步骤3:
将底物165-3(160mg,0.480mmol)和胺AN-20(90mg,0.478mmol)溶于干燥DMF(5mL)中,室温下加入DIPEA(150mg,0.96mmol)和HATU(300mg,0.789mmol),氮气保护下室温反应1小时,TLC显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到产物SYY-B081/082-1(40mg)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37-8.28(m,1H),7.28-7.74(m,1H),7.50-7.18(m,4H), 5.01-3.57(m,7H),3.22-3.10(m,2H),3.07-2.85(m,3H),2.74-2.68(m,1H),2.53(m,1H),2.24 (m,2H),1.48(m,1H),0.72-0.38(m,4H).LC-MS:[M+H]+=504.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B081-1和SYY-B082-1。制备方法:手性柱大赛璐AD-H,填料粒经(5μm),内经(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:15.07分钟;峰2出峰时间:30.56分钟。
实施例167
SYY-B081-2和SYY-B082-2的合成:
步骤1:
将底物SP-1-2(200mg)溶于DMF(5mL)中,室温下加入2-溴乙酸苄酯(183mg) 和碳酸钾(150mg)室温反应1小时,TLC显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶层析柱得到166-2(250mg)。
步骤2:
将底物166-2(250mg)溶于甲醇(10mL)中,室温下加入Pd/C(100mg),氢气置换,室温反应2小时,TLC显示反应完全。硅藻土过滤,滤液浓缩得到166-3(160mg)。
步骤3:
将底物166-3(160mg)和胺AN-20(90mg)溶于干燥DMF(5mL)中,室温下加入 DIPEA(150mg)和HATU(300mg),氮气保护下室温反应1小时,TLC显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到产物SYY-B081/082-2(35mg).1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.37-8.28(m,1H),7.28-7.74 (m,1H),7.50-7.18(m,4H),5.01-3.57(m,7H),3.22-3.10(m,2H),3.07-2.85(m,3H),2.74-2.68 (m,1H),2.53(m,1H),2.24(m,2H),1.48(m,1H),0.72-0.38(m,4H).LC-MS:[M+H]+= 504.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B081-2和SYY-B082-2。制备方法:手性柱大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(20mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相80%正己烷+20%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:14.10分钟;峰2出峰时间:18.93 分钟。
实施例168
SYY-B088的合成:
将手性酰胺AN-19-1(100mg,0.290mmol)溶于DMF(6mL)中,室温下加入螺环 SP-2(100mg,0.364mmol)和碳酸钾(80mg,0.579mmol),室温反应16小时,TLC检测原料反应完全。加入饱和食盐水稀释后,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得白色固体SYY-B088(170mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.68-8.54(m,2H),7.48-7.00(m,5H),6.01(m,1H),4.88-3.44(m,5H),3.11-2.91(m,3H), 2.71-2.52(m,4H),2.46(m,1H),2.14(m,1H),2.02(m,2H),1.42(m,1H),0.65-0.27(m,4H). LC-MS:[M+H]+=538.3。
对其进行手性拆分得到SYY-B088-1和SYY-B088-2。制备方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:20mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:9.46分钟;峰2出峰时间:15.27分钟;
实施例169
SYY-B090-1的合成:
将底物AN-19-1(70mg,0.203mmol)溶于DMF(6mL)中,室温下加入SP-1-1(70 mg,0.254mmol)和碳酸钾(80mg,0.579mmol),室温反应16小时,TLC检测原料反应完全。加入饱和食盐水稀释后,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得白色固体SYY-B090-1(90mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H), 7.52-7.18(m,5H),6.09(m,1H),4.85-3.48(m,5H),3.13-2.91(m,3H),2.74-2.52(m,4H),2.43 (m,1H),2.14(m,1H),2.02(m,2H),1.42(m,1H),0.66-0.27(m,4H).LC-MS:[M+H]+= 539.2。
实施例170
SYY-B090-2的合成:
将底物AN-19-1(70mg,0.203mmol)溶于DMF(6mL)中,室温下加入SP-1-2(70 mg,0.254mmol)和碳酸钾(80mg,0.579mmol),室温反应16小时,TLC检测原料反应完全。加入饱和食盐水稀释后,乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得白色固体SYY-B090-2(80mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H), 7.52-7.18(m,5H),6.09(m,1H),4.85-3.48(m,5H),3.13-2.91(m,3H),2.74-2.52(m,4H),2.46 (m,2H),2.02(m,2H),1.42(m,1H),0.66-0.27(m,4H).LC-MS:[M+H]+=539.2。
实施例171
SYY-B095的合成:
步骤1:
将底物SP-1-1(100mg,0.36mmol)溶于DMF(5mL)中,加入碳酸钾(70mg,0.5mmol),搅拌10分钟后,加入2-溴乙酸苄酯(91mg,0.40mmol),加毕,室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色粘稠油170-2(200mg,粗品)。
步骤2:
将底物170-2(200mg)溶于甲醇(15mL)中,加入钯炭(100mg),氢气置换三次后,室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,浓缩,得到固体170-3(98 mg)。
步骤3:
将底物170-3(98mg,0.29mmol)和胺AN-18(150mg)溶于DMF(5mL)中,加入DIPEA(75mg,0.58mmol),再加入HATU(165mg,0.44mmol),反应液室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加入水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品经Pre-TLC纯化得到黄色固体(70mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ8.72(m,1H),8.33(m,1H),7.62-7.51(m,2H),7.25-7.16(m,3H),6.08(m,1H),5.06-3.52(m, 6H),3.03(m,3H),2.76-2.54(m,4H),2.42(m,1H),2.02(m,2H),1.46(m,1H),0.62-0.28(m, 4H).LC-MS:[M+H]+=504.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B095-1和SYY-B095-2。制备方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:20.38分钟;峰2出峰时间:57.16分钟。
实施例172
SYY-B096的合成:
步骤1:
将底物SP-1-2(250mg)溶于DMF(10mL)中,加入碳酸钾(176mg),搅拌10 分钟后,加入2-溴乙酸苄酯(228mg),加毕,室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色粘稠油 171-2(430mg)。
步骤2:
将底物171-2(430mg)溶于甲醇(15mL)中,加入钯炭(100mg),氢气置换三次后,室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,浓缩,得到固体171-3(280 mg)。
步骤3:
将底物171-3(150mg)和胺AN-18(169mg)溶于DMF(10mL)中,加入DIPEA (116mg),再加入HATU(257mg),反应液室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加入水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品经Pre-TLC 纯化得到黄色固体(80mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(m,1H),8.33(m,1H), 7.62-7.51(m,2H),7.25-7.16(m,3H),6.08(m,1H),5.06-3.52(m,6H),3.03(m,3H),2.76-2.54 (m,4H),2.42(m,1H),2.02(m,2H),1.46(m,1H),0.62-0.28(m,4H).LC-MS:[M+H]+= 504.2。
对其进行手性拆分得到SYY-B096-1和SYY-B096-2。制备方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:64.99分钟;峰2出峰时间:82.02分钟。
实施例173
SYY-B097-1和SYY-B098-1的合成:
氮气保护下,将底物165-3(89mg,0.26mmol)和消旋胺AN-21(50mg,0.26mmol) 溶于DMF(5mL)中,室温下加入DIEA(68mg,0.52mmol)和HATU(150mg,0.39 mmol),室温反应1小时,TLC显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到产物(110mg)。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ8.68(m,1H),8.39-8.30(m,2H),7.52-7.19(m,4H),6.07(m,1H),4.93-3.52(m, 6H),3.03(m,3H),2.76-2.54(m,4H),2.42(m,1H),2.02(m,2H),1.46(m,1H),0.62-0.28(m, 4H).LC-MS:[M+H]+=504.2。
对其进行手性拆分得到化合物SYY-B097-1和SYY-B098-1。制备方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷 +30%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:34.31分钟;峰2出峰时间:49.21分钟。
实施例174
SYY-B097-2和SYY-B098-2的合成:
氮气保护下,将底物166-3(143mg)和消旋胺AN-21(81mg)溶于DMF(10mL) 中,室温下加入DIPEA(111mg)和HATU(245mg),室温反应1小时,TLC显示反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,有机相饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩粗品硅胶柱层析得到产物(60mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77(m,1H),8.39-8.30(m,2H), 7.52-7.19(m,4H),6.07(m,1H),4.93-3.52(m,6H),3.03(m,3H),2.76-2.54(m,4H),2.42(m, 1H),2.02(m,2H),1.46(m,1H),0.62-0.28(m,4H).LC-MS:[M+H]+=504.2。
对其进行手性拆分得到化合物SYY-B097-2和SYY-B098-2。制备方法:大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:15.26分钟;峰2出峰时间:25.10 分钟。
实施例175
酰胺AN-22的合成
步骤1:
甲苯(100mL)中加入原料174-1(35g,0.184mmol),乙二醇(100mL)和催化量对甲苯磺酸,100度反应过夜。TLC检查还有少量原料未反应完全。后加入饱和食盐水,乙酸乙酯萃取2次后,有机相饱和食盐水洗涤2次,水洗2次后,干燥浓缩过柱得27g黄色油状物174-2。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ4.04-4.10(m,2H),4.14-4.20(m,2H),6.16 (s,1H),6.99(d,J=5.2Hz,1H),7.33(d,J=5.2Hz,1H)。
步骤2:
NMP(50mL)中加入原料174-2(5g,0.0215mol),氰化锌(5g,0.0429mol), Pd2(dba)3(0.98g,1.07mmol)和三苯基膦(0.563g,2.15mmol),氮气保护下100度反应过夜。 TLC检测还有大部分原料未反应完全。加入饱和食盐水,乙酸乙酯萃取2次后,有机相饱和食盐水洗涤2次,水洗2次后,干燥浓缩过柱得800mg黄色油状物174-3,LC-MS: 182.1[M+1]+。
步骤3:
二氯甲烷(100mL)中加入原料174-3(9g,0.0497mol)和浓盐酸(12N,33mL),室温搅拌1小时后,LCMS检测原料反应完全。加入饱和食盐水稀释,乙酸乙酯萃取2次。合并有机相,有机相饱和食盐水洗涤2次,无水硫酸钠干燥,浓缩得到174-4,直接用于下一步。
步骤4:
将上一步产品(6.8g)溶解在四氢呋喃中(200mL),加入磷叶立德试剂(20g,0.0581mol),60度搅拌两小时后,TLC检测反应完全。直接浓缩过柱的11克白色固体174-5。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.05-1.08(m,2H),1.21-1.23(m,2H),2.27-2.31(m,1H),6.91(d, J=16Hz,1H),7.30(d,J=5.2Hz,1H),7.45(d,J=5.2Hz,1H),7.83(d,J=16Hz,1H)。
步骤5:
甲醇(150mL)中加入原料174-5(11g,0.478mol)和Pd/C(2g),氢气条件下搅拌6 小时。TLC检测原料大部分反应完。过滤,滤液直接用于下一步。
步骤6:
上一步滤液中加入雷尼镍(2g)和三乙胺(2mL),氢气条件下搅拌7小时。TLC 检测原料大部分反应完。过滤,滤液直接用于下一步。
步骤7:
上一步滤液中加入氰基硼氢化钠和醋酸(2mL),室温搅拌1小时。TLC检测原料反应完全。加入饱和食盐水淬灭,乙酸乙酯萃取2次。合并有机相,有机相饱和食盐水洗涤 2次,无水硫酸钠干燥,浓缩得到174-8,直接用于下一步。
步骤8:
上一步浓缩的产品中加入二氯甲烷,缓慢滴加溴乙酰溴。室温搅拌过夜。加水搅拌半小时后,二氯甲烷2次。有机相合并,饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次后,干燥浓缩过柱得 2.4g淡黄色油状物AN-22。LC-MS[M+1]+:314.0。
手性拆分得到AN-22-1和AN-22-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm), 内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:19.33分钟;峰2出峰时间:34.96分钟。
实施例176
化合物SYY-B102-1的合成
室温条件下AN-22-1(50mg,0.159mmol),螺环SP-1-1(53mg,0.193mmol)和碳酸钾(66mg,0.477mmol)溶解于干燥DMF(5mL)。反应2小时后,TLC检测,原料大部分反应完全。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。分离得到目标产物SYY-B102-1(21mg)为白色固体。1H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ8.72(m,1H),7.53(m,1H),7.27-7.15(m,3H),6.90(m,1H),6.10(m,1H), 5.01-3.58(m,5H),3.18-2.92(m,3H),2.65-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,2H),2.12(m,2H),1.28 (m,1H),0.55-0.31(m,4H).LC-MS:[M+H]+=509.2。
实施例177
化合物SYY-B102-2的合成
室温条件下噻吩七元环酰胺AN-22-1(70mg,0.223mmol),螺环SP-1-2(70mg,0.254mmol)和碳酸钾(100mg,0.723mmol)加入到干燥DMF(6mL)中。室温搅拌3小时后,TLC检测原料大部分反应完。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。分离得到目标产物SYY-B102-2(40mg)白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),7.52(m,1H),7.27-7.15(m,3H),6.90(m,1H), 6.09(m,1H),5.05-3.58(m,5H),3.18-2.92(m,3H),2.65-2.56(m,4H),2.49-2.43(m,2H),2.12 (m,2H),1.28(m,1H),0.55-0.31(m,4H).LC-MS:[M+H]+=509.2。
实施例178
化合物SYY-B104的合成
室温条件下,噻吩七元环酰胺AN-22-1(150mg,0.479mmol),消旋螺环SP-2(150mg,0.545mmol)和碳酸钾(198mg,1.437mmol)依次加入到干燥DMF(6mL)。室温搅拌3小时后,TLC检测原料大部分反应完。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,分离得到目标产物SYY-B104(180mg)为白色固体。手性拆分得化合物SYY-B104-1和SYY-B104-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径 (5um),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:9.75分钟;峰2出峰时间:50.31分钟。
实施例179
螺环SP-23的合成
步骤一:
5-溴苯酞178-1(100.0g,0.469mmol)溶解在四氢呋喃(350ml)/甲醇(50ml)中,反应在室温下加入140g KOH溶液(40g氢氧化钾溶解在100ml水),反应液体在室温下搅拌5小时;TLC显示反应完全;减压蒸馏除去大部分有机溶剂后,在冰水浴冷却条件下用2N盐酸调节PH 1-2,析出固体抽滤,水洗,烘干得目标产物178-2(100.2g,粗品) 黄色固体,直接用于下一步。LC-MS:231.0[M+1]+。
步骤二:
冰水浴冷却条件下,NaH(60%,80.0g)慢慢加入到无水乙醇(800ml)中,将原料178-2(100.2g,粗品)以及溴乙酸(90.0g,0.647mmol)溶解在无水四氢呋喃(900ml) 中并在冰水浴下慢慢滴加到乙醇溶液中,反应液在室温条件下搅拌半小时后,将碘化钠(10 g)加到得反应液中并升温到80度搅拌24小时;反应液冷却到室温后倒入到冰水中,用 2N盐酸调节PH 1~2,用乙酸乙酯萃取2次,有机相水洗,盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到178-3(180.2g,粗品)。LC-MS:289.0[M+1]+。
步骤三:
原料178-3(180.2g,粗品)溶解在干燥DMF(400ml)中,反应在室温下加入碘甲烷(100ml,1.61mmol)和碳酸钾(200.0g,1.45mmol),在室温下搅拌过夜;反应液倒入冰水中,用乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和NaCl溶液洗,无水硫酸钠干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到模板产物178-4(80.4g,3步产率54%)。LC-MS:317.0[M+1]+。
步骤四:
将钠氢(60%,12.0g)溶解在干燥DMSO(200ml)中,反应在室温下搅拌2小时后,把原料178-4(80.4g,0.254mmol)溶解在干燥DMSO(200ml)中,慢慢加入到反应液中并在50度下搅拌过夜;TLC显示基本反应完全;冰水冷却条件下将反应液慢慢倒入到稀盐酸中,析出固体抽滤,洗涤,烘干得黄色粗品178-5(60.5g,粗品)。
步骤五:
原料178-5(50.0g,粗品)溶解在乙酸(400ml)中,在室温下加入浓盐酸(37%,150ml),反应在60度下搅,1小时,反应体系由浑浊变澄清;TLC显示反应完全,处理烘干得产品 (26g)粗品178-6直接用于下一步。1H-NMR:(400MHz,DMSO-d6):7.82-7.80(m,1H), 7.89-7.67(m,2H),4.89(s,2H),4.37(s,2H).
步骤六:
原料178-6(5.0g,粗品)溶解在乙醇(100ml)中,在室温下加入氨水(20ml)碳酸铵(21.1g 0.22mmol),氟化胺(4.0eq)以及TMSCN(21.8g 0.22mmol),反应在60度下搅拌过夜;减压蒸馏除去大部分乙醇后,乙酸乙酯多次萃取,有机相盐水,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品柱层析分离得到目标产物SP-23(1.5g),LC-MS:297.0[M+1]+。
实施例180
化合物SYY-B106的合成
步骤1:
消旋螺环SP-23(300mg,1mmol)和酰胺AN-15-1(300mg,0.91mmol)溶解在DMF(6mL)中,加入碳酸钾(300mg,2.1mmol),室温反应3小时。反应液倒入50ml冰水,搅拌10分钟,过滤,滤饼水洗,石油醚洗。滤饼用乙酸乙酯溶解,然后水洗,饱和盐水洗干燥浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到目标产物179-2(310mg,63%)白色固体。LC-MS: 544.1[M+1]+。
步骤2:
原料179-2(310mg,0.56mmol)溶解在二氧六环(30ml)中,加入甲基脲(168mg,2.2mmol),碳酸铯(367mg,1.1mmol),最后加入Pd2(dba)3(30mg,0.056mmol),xantphos(60mg,0.056mmol),氮气置换,100度反应3小时。冷却到室温后,倒入到冰水中,乙酸乙酯萃取,有机相水洗,饱和盐水洗,无水硫酸干燥,浓缩。粗品硅胶柱层析分离得到 SYY-B106(200mg),LC-MS:538.2[M+1]+。
对其进行手性拆分后得到SYY-B106-1和SYY-B106-2。制备柱子:大赛璐AD-H (30*250mm),填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:18.64分钟;峰2出峰时间:87.83分钟。
实施例181
化合物SYY-B108的合成
除了使用螺环片断SP-2代替SP-1,以及酰胺片断AN-17-1代替AN-7以外,采用与实施例30中相同的方法,制备得到化合物SYY-B108。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.71-8.54(m,2H),7.42(m,1H),7.25-7.04(m,3H),6.65(m,1H),6.01(m,1H),5.09-3.80(m, 7H),2.93(m,2H),2.62(m,3H),2.49-2.43(m,1H),2.16(m,1H),1.08(m,1H),0.53-0.35(m, 4H).LC-MS:[M+H]+=510.1。
对其进行手性拆分后得到SYY-B108-1和SYY-B108-2。制备柱子:大赛璐AD-H (30*250mm),填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm,峰1出峰时间:20.03分钟;峰2出峰时间:86.35分钟。
实施例182
螺环SP-24的合成
步骤一:
原料178-6(13.0g,57.3mmol)溶解在无水二氯甲烷(80mL)中,加入N-甲基-N- 氧化吗啉(4.02g,34.3mmol)和三甲基氰硅烷(18.0g,181mmol),反应在室温下搅拌2小时后,TLC显示反应完全,加入石油醚(200mL)后减压蒸馏除去大部分二氯甲烷后,再加入石油醚(200mL),并继续搅拌15分钟后抽滤,浓缩后得到中间体181-2(9.2g,粗品)
步骤二:
中间体181-2(9.2g,粗品)溶解在无水乙醇(70mL)中,在0度下通入干燥的氯化氢气体5.5小时,反应在30度减压旋干得到的粗品用四氢呋喃溶解直接下一步;所得固体中加入在无水四氢呋喃(100mL)中,在0度下缓慢滴加三乙胺(17.4g,172mmol),滴加完成后,三光气(8.6g,29mmol)溶解在四氢呋喃中并滴加到反应中;反应在0度下搅拌1小时后,加入1N盐酸并继续搅拌半小时;TLC显示反应完全,乙酸乙酯萃取,得到的乙酸乙酯用饱和碳酸氢钠洗涤,得到的水溶液用乙酸乙酯再萃取,水相用1N盐酸调节PH至3-4左右,乙酸乙酯萃取,干燥,旋干得化合物SP-24(4.1g),LC-MS:298.0 [M+1]+。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.43(br,1H),7.56-7.53(m,2H),7.29(d,J= 8.0Hz,1H),4.86(d,J=15.6Hz,1H),4.73(d,J=12.8Hz,1H),4.03(d,J=12.8Hz,1H)。
实施例183
螺环SP-25的合成
步骤1:
将6-溴茚酮182-1(10.0g,47.38mmol),乙二醇(30.0g,483.3mmol)和对甲基苯磺酸(80mg,0.46mmol)溶于甲苯(300mL)中,加热回流(125℃)分水过夜,分水完成,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,浓缩去除溶剂,饱和碳酸钠水溶液中和,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色油状物182-2(10.5g)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.31(t,J=7.2 Hz,2H),2.90(t,J=7.2Hz,2H),4.07-4.11(m,2H),4.18-4.22(m,2H),7.12(d,J=8.0Hz,1H), 7.43(dd,J1=8.4Hz,J2=2.0Hz,1H),7.48(d,J=2.0Hz,1H)。
步骤2:
将油状物182-2(2.8g,10.98mmol)溶于丙酮(120mL)中,依次加入高锰酸钾(17.3g,109.5mmol)和硫酸镁(4.0g,33.23mmol)的水溶液(16mL),加毕,体系加热至 65度反应过夜,TLC检测原料剩余。反应液冷却至室温,硅藻土过滤,洗涤,浓缩,粗品用乙酸乙酯溶解后,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,经硅胶柱层析纯化得到白色固体182-3(680mg)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.93(s,2H),4.12-4.15(m, 2H),4.26-4.29(m,2H),7.59-7.61(m,1H),7.66-7.68(m,1H),7.78(d,J=1.2Hz,1H)。
步骤3:
将底物182-3(1.7g,6.32mmol),吡唑硼酸酯182-3a(2.0g,10.30mmol)和碳酸钠(1.4g,13.21mmol)分散在二氧六环(30mL)和水(5mL)中,加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(258mg,0.32mmol),体系经氮气置换3次后,加热至100度反应两小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到淡黄色固体182-4(1.8g)。LC-MS:271.1[M+1]+。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.94 (s,2H),3.96(s,3H),4.13-4.19(m,2H),4.27-4.33(m,2H),7.62-7.64(m,1H),4.68-4.73(m, 3H),7.85(s,1H)。
步骤4:
粗品182-4(1.8g),氟化铵(2.8g,75.59mmol),碳酸胺(7.0g,72.85mmol)和三甲基氰硅烷(2.8g,28.22mmol)分散在30%氨水(18mL)和乙醇(54mL)中,加热至60度反应过夜,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,浓缩,剩余物用1N盐酸调至pH=6左右,二氯甲烷和异丙醇(3.5V/1V)萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到2.2g红棕色粗品,经硅胶柱层析纯化得到橙色固体SP-25 (1.4g)。LC-MS:341.2[M+1]+。
实施例184
螺环SP-26的合成
步骤1:
将4-溴-2-氟苯甲酸183-1(20.0g,91.32mmol)溶于无水甲醇(330mL)中,降温至0度,滴加氯化亚砜(33.0g,277.4mmol),加完加热回流3小时。反应液冷却至室温,浓缩,将粗品溶于乙酸乙酯,用饱和碳酸钠水溶液洗,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到白色固体183-2(20.5g)。
步骤2:
固体粗品183-2(24.0g)溶于无水四氢呋喃(240mL)中,室温下分批加入甲硫醇钠(10.8g,154.1mmol),加完加热回流6小时。反应液冷却至室温,加水,浓缩除去四氢呋喃,水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到白色固体183-3(20g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.81(d,J=8.3Hz,1H),7.47 (d,J=1.8Hz,1H),7.43(dd,J=8.3,1.9Hz,1H),3.82(s,3H),2.45(s,3H)。
步骤3:
将粗品183-3(20.0g)溶于二氧六环/水(400mL/200mL)中,分批加入过硫酸氢钾Oxone@(142g,231.0mmol),加完室温搅拌过夜。反应液过滤,乙酸乙酯洗,滤液浓缩,加水稀释,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和硫代硫酸钠溶液洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到白色固体183-4(23.8g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(d,J=1.8Hz,1H),8.08 (dd,J=8.1,1.9Hz,1H),7.72(d,J=8.2Hz,1H),3.87(s,3H),3.42(s,3H)。
步骤4:
将底物183-4(6.0g),1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑 182-3a(5.12g,24.61mmol),碳酸钠(6.51g,61.42mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(837mg,1.02mmol)溶于1,4-二氧六环/水(60mL/50mL)中,加热至100度反应3小时。反应液冷却至室温,浓缩,倒入水中,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到黄色固体183-5(5.16g)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.11(d,J=1.7Hz,1H), 8.01(d,J=0.7Hz,1H),7.98(dd,J=8.0,1.8Hz,1H),7.72(d,J=8.0Hz,1H),3.87(s,3H), 3.84(s,3H),3.39(s,3H)。
步骤5:
将183-5(5.97g,20.28mmol)溶于无水四氢呋喃(100mL)中,冰水浴冷却下分批加入钠氢(60%,2.44g,61mmol),加完加热回流6小时。反应液冷却至室温,滴加 1N稀盐酸淬灭反应,调pH至8;浓缩除去四氢呋喃,将析出的固体过滤,滤饼水洗,干燥得到黄色固体183-6(6.0g),LC-MS:263.1[M+1]+;1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.55(s,1H),8.35(d,J=1.1Hz,1H),8.23(d,J=0.6Hz,1H),8.12(dd,J=8.2,1.5Hz,1H), 7.95(d,J=8.4Hz,1H),4.55(s,2H),3.88(s,3H)。
步骤6:
将183-6(3.0g),氟化铵(4.87g,131.5mmol),碳酸铵(12.1g,126.0mmol)和三甲基氰硅烷(5.67g,57.15mmol)依次加入到乙醇(75mL)和30%氨水(30mL)中,加热至60度反应23小时。反应液冷却至室温,浓缩,粗品加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到金黄色固体SP-26(1.56g)。LC-MS:333.1[M+1]+;1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.31(s,1H), 8.78(s,1H),8.39(s,1H),8.10–8.04(m,2H),7.98(dd,J=8.3,1.7Hz,1H),7.53(d,J=8.2 Hz,1H),4.11(d,J=14.5Hz,1H),3.86(s,3H),3.72(d,J=14.5Hz,1H)。
实施例185
螺环SP-27的合成
步骤1:
乙酰乙酸乙酯(35.0g,268.9mmol)和硅胶(2.7g)混合液慢慢滴至28%氨水溶液中(19.4g,0.32mol),反应液在室温下搅拌过夜,TLC显示反应完全。反应液过滤,滤饼乙酸乙酯洗,滤液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到无水透明油状产物184-2(32.0g)
步骤2:
将粗品184-2(67.5g)和丙炔酸甲酯184-2a(65.5g,779.1mmol)溶于甲苯(150mL)中,加热回流搅拌过夜,TLC(石油醚:乙酸乙酯=10:1)显示反应完全。反应液降至室温,浓缩,加入甲醇打浆,过滤,滤饼少量甲醇洗,得到淡黄色固体184-3(70.7g)。LC-MS: 214.1[M+1]+。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.36(t,J=7.2Hz,3H),2.26(s,3H),3.72(s, 3H),4.25(q,J=7.2Hz,2H),5.48(br,1H),6.15-6.19(m,1H),7.63-7.66(m,1H),9.60(br,1H)。
步骤3:
将中间体184-3(80.9g)溶于N,N’-二甲基甲酰胺(400mL)中,氮气保护下,加热回流搅拌3天,LCMS显示原料还有少量剩余。反应液浓缩去除溶剂,加入甲苯打浆,过滤,滤饼再加入乙酸乙酯打浆,过滤,滤饼少量乙酸乙酯洗,得到灰色固体184-4(57.81g)。 LC-MS:182.1[M+1]+。
步骤4:
粗品184-4(57.8g)溶于三氯氧磷(196.26g,1.28mol)中,氮气保护下,加热回流搅拌两小时,TLC显示原料反应完。反应液降至室温,浓缩,将残留液倒入冰水中,用8M NaOH水溶液调节pH至碱性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到白色固体产品184-5(58.7g)。LC-MS:200.1[M+1]+。
步骤5:
底物184-5(30.0g,0.15mol),N-溴代丁二酰亚胺(29.4g,0.17mol)和偶氮二异丁腈 (2.5g,0.015mol)溶于四氯甲烷(400mL)中,氮气保护,加热回流搅拌10小时。反应液降至室温,加入硅胶拌样,硅胶柱层析纯化,得到无色油184-6(40.5g)。LC-MS:278.0/280.0[M+1]+。
步骤6:
丙二酸二乙酯(31.7g,197.92mmol)溶于四氢呋喃(300mL)中,氮气保护下,冰水浴冷却至0~5度,加入钠氢(7.9g,197.52mmol,60%),加完室温下搅拌半小时,加入底物184-6(40.5g,98.88mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液,室温反应过夜,TLC显示原料反应完。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到无色油184-7(26.5g)。LC-MS:358.1[M+1]+。
步骤7:
将底物184-7(26.5g,74.07mmol)溶于甲苯(400mL)中,氮气保护下,冰水浴冷却至0~5度,加入钠氢(3.6g,90mmol,60%),加完加热回流搅拌4小时,LC-MS显示原料反应完。反应液降至室温,冰水浴冷却,加水淬灭,用1M盐酸调节pH至中性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品加入甲醇打浆,过滤,滤饼洗涤干燥得土黄色固体184-8(12.0g,粗品)。LC-MS:240.1[M+1]+。
步骤8:
将底物184-8(6.00g),1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑 182-3a(6.25g,30.04mmol),碳酸钠(5.30g,50mmol)和Pd(dppf)2Cl2(1.02g,1.25mmol) 溶于1,4-二氧六环/水(50mL/10mL)中,升温至100度反应过夜,LC-MS显示原料反应完。反应液冷却至室温,硅藻土过滤,滤饼乙酸乙酯洗,滤液分液,水相用1M盐酸调节pH至中性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到棕色固体184-9(3.85g),LC-MS:214.1[M+1]+。
步骤9:
将184-9(1.50g,7.03mmol),三甲基氰硅烷(3.00g,30.24mmol),氟化铵(2.86g,77.21mmol)和碳酸铵(7.77g,80.86mmol)溶于30%氨水(10mL)与乙醇(30mL) 的混合溶剂中,氮气保护下,加热至60度反应8小时。反应液冷却至室温,浓缩,用1M盐酸调节pH至中性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到淡黄色固体SP-27(1.25g),LC-MS:284.1[M+1]+。
实施例186
螺环SP-28的合成
步骤1:
2-氯-正甲氧基-正甲基乙酰胺(20.0g,145.39mmol)溶于乙腈(250mL)中,室温下加入三苯基膦(43.0g,163.94mmol),升温至80℃反应30小时,LCMS监控反应完全。反应液浓缩干,溶于二氯甲烷(150mL)中,加入2N二异丙基氨基锂(100mL),搅拌2小时,分液,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到棕色油185-2a (48.0g)。
步骤2:
氮气保护下,5-溴-2-氯吡啶185-1(10.0g,51.96mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中,-65℃下滴加二异丙基氨基锂(19.0ml,19mmol,1.0M),搅拌20分钟后,慢慢加入干燥N’N-二甲基甲酰胺(10mL),缓慢升至室温反应过夜,TLC监测反应。反应液滴加饱和氯化铵水溶液淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到红棕色固体185-2(2.6g)。
步骤3:
将底物185-2(5.2g,23.59mmol)溶于甲苯(100ml)中,室温下加入制备好的185-2a(9.5g),升温至100℃回流3小时,TLC监控反应完全。反应液浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体185-3(3.3g)。LC-MS:305.0[M+1]+。
步骤4:
固体185-3(2.2g,7.20mmol)溶于乙酸乙酯(70mL)中,室温下加入Rh/Al2O3(440mg,20%w/w),氢气置换3次,升温至40℃反应3小时,补加Rh/Al2O3(220mg,20% w/w),继续反应3小时,补加Rh/Al2O3(220mg,20%w/w),继续反应3小时,LCMS 监控大部分反应完全。反应液冷却至室温,过滤,滤液浓缩得到黄色油185-4(2.0g), LC-MS:307.0[M+1]+。
步骤5:
将粗品185-4(2.0g)溶于干燥四氢呋喃(70ml)中,氮气置换3次,-70℃滴加正丁基锂(3.2ml,8.0mmol,2.5M),加完-70℃反应2小时,LCMS监控反应完全。反应液加饱和氯化铵溶于淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体185-5(950mg),LC-MS:168.1[M+1]+。1H-NMR: (CDCl3,400MHz):δ2.72-2.75(m,2H),3.15-3.18(m,2H),7.47(d,J=1.2Hz,1H),8.74(s,1H)。
步骤6:
固体185-5(1.1g,6.56mmol)溶于1-4–二氧六环(30ml)和水(5ml)中,室温下加入1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑182-3a(2.6g,13.54mmol),[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(270 mg,0.33mmol)和碳酸钠(2.1g,19.81mmol),氮气置换3次,升温至100℃反应3小时,LCMS监控反应完全。反应液降至室温,加入乙酸乙酯,过滤,滤液饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到固体,随后加入混合液(二氯甲烷/石油醚=1/10)打浆,过滤,滤饼洗涤干燥得到淡黄色固体185-6(1.09g)。LC-MS:214.1[M+1]+。1H-NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.62-2.63(m,2H),3.09-3.12(m,2H),3.88(s,3H),7.84(s, 1H),8.10(s,1H),8.39(s,1H),8.75(s,1H)。
步骤7:
粗品185-6(500mg)溶于乙醇(30ml)和水(10ml)中,室温下加入三甲基氰硅烷(1.0g,10.08mmol),氟化铵(1.0g,27.0mmol)和碳酸铵(2.5g,26.02mmol),升温至60℃反应16小时,LCMS监控反应完全。反应液浓缩干,加入1N盐酸调节PH至 6~7,混合液(二氯甲烷/异丙醇=3.5/1)萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品加入混合液(二氯甲烷/甲醇=10/1)打浆,过滤,滤饼洗涤干燥得到黄色固体SP-28(400mg),LC-MS:284.1[M+1]+。1H-NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ 2.14-2.21(m,1H),2.48-2.52(m,1H),3.00(t,J=6.8Hz,2H),3.86(s,3H),7.61(s,1H),7.98 (s,1H),8.27(d,J=8.4Hz,2H),8.48(s,1H),10.87(s,1H)。
实施例187
螺环SP-29的合成
步骤1:
6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶186-1(20.0g,0.168mol)和三氯化铝(56.0g,0.42mol) 的混合物加热至100度,滴加溴素(32.0g,0.2mol),两小时内滴加完毕,继续在该温度下反应15分钟。反应液冷却至室温,倒入冰水中,用2M氢氧化钠水溶液调节pH至14,甲基叔丁基醚萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到浅咖啡色固体186-2(7.73g)。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.12-2.18(m, 2H),2.91-2.97(m,4H),7.60-7.61(m,1H),8.37-8.38(m,1H)。
步骤2:
将186-2(7.13g,36.0mmol)溶于二氯甲烷(140mL)中,冰浴降温至0度,分批加入间氯过氧苯甲酸(85%,14.8g,72.9mmol),加完升至室温反应1小时。反应液冰浴冷却,滴加2M氢氧化钠水溶液,调节pH至14,二氯甲烷萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到褐色固体186-3(5.38g), LC-MS:214.1[M+1]+。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.16-2.22(m,2H),3.02(t,J=7.6Hz, 2H),3.09(t,J=8.0Hz,2H),7.26(s,1H),8.18(s,1H)。
步骤3:
固体186-3(5.38g,25.13mmol)溶于乙酸酐(35mL)中,加热至90度反应过夜。反应液冷却至室温,浓缩,粗品倒入水中,加饱和碳酸氢钠水溶液调至碱性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到红色油状物186-4(3.62g)。
步骤4:
将186-4(3.62g,14.14mmol)溶于甲醇/水(45mL/45mL)中,加入碳酸钾(4.88g,35.30mmol),室温反应2小时。反应液浓缩,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到红色固体186-5(2.74g),LC-MS:214.1[M+1]+。1H-NMR: (CDCl3,400MHz):δ2.04-2.11(m,1H),2.53-2.60(m,1H),2.79-2.87(m,1H),3.00-3.07(m, 1H),3.84(br,1H),5.16(t,J=7.2Hz,1H),7.71(s,1H),8.49(s,1H)。
步骤5:
将186-5(2.34g,粗品)溶于二甲基亚砜(45mL)中,分批加入2-碘酰基苯甲酸(6.12g,21.86mmol),加完室温搅拌2小时,LCMS检测反应完全。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到固体186-6(2.19g),LC-MS:212.1[M+1]+。1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.75-2.78(m, 2H),3.15-3.18(m,2H),8.04-8.05(m,1H),8.79-8.80(m,1H)。
步骤6:
氮气保护下,将196-6(2.24g,10.56mmol),1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑182-3a(2.64g,12.69mmol),碳酸钠(3.36g,31.70mmol)和[1,1'- 双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(432mg,0.53mmol)分散到二氧六环/ 水(22mL/11mL)中,加热回流2小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水稀释,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到黄色固体186-7(1.53g),LC-MS:214.1[M+1]+。1H-NMR:(CDCl3,400 MHz):δ2.78(t,J=6.0Hz,2H),3.17(t,J=5.6Hz,2H),4.00(s,3H),7.81(s,1H),7.88(s, 2H),8.88(s,1H)。
步骤7:
将186-7(1.0g,4.69mmol),氟化铵(2.0g,54.00mmol),碳酸铵(4.96g,51.62mmol)和三甲基氰硅烷(2.33g,23.48mmol)分散到30%氨水(13mL)和乙醇(33mL)中,加热至60度反应过夜。反应液冷却室温,浓缩,二氯甲烷萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶经柱层析分离得到白色固体SP-29(1.3g),LC-MS: 284.1[M+1]+。1H-NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.16-2.22(m,1H),2.57-2.61(m,1H),2.98 (t,J=7.6Hz,2H),3.86(s,3H),7.89-7.90(m,1H),7.94(d,J=0.8Hz,1H),8.24(s,1H),8.37(s, 1H),8.63-8.64(m,1H),10.78(s,1H)。
实施例188
酰胺AN-23的合成
步骤1:
将溴化铜(23.6g,164.5mmol)和亚硝酸叔丁酯(17.6g,170.7mmol)依次溶于无水乙腈(105mL)中,升温至30度,搅拌下滴加2-氨基-4,5-二甲基噻酚-3-羧酸乙酯187-1(21.0g,105.4mmol)的乙腈(105mL)溶液,内温升到约50度,加热至60度反应1 小时。反应液冷却至室温,浓缩,加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离得到黄色液体187-2(19.52g)。1H-NMR (400MHz,CDCl3)δ4.36(q,J=7.2Hz,2H),2.28(d,J=0.8Hz,3H),2.22(d,J=0.6Hz,3H), 1.39(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤2:
氮气保护下,将原料187-2(5.0g,19.0mmol)和氰化亚铜(2.4g,26.7mmol)依次溶于N-甲基吡咯烷酮(24mL)中,加热至155度反应9小时。反应液冷却至室温,倒入200毫升水和60毫升乙酸乙酯中,析出固体,过滤,滤饼乙酸乙酯洗涤直至无产物点 (TLC监测)。滤液分液萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到白色固体187-3(2.7g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.43(q,J=7.2Hz,2H),2.44(d,J=0.4Hz,3H),2.36(d,J=0.4Hz,3H),1.45(t,J=7.2Hz, 3H)。
步骤3:
将Raney Ni(400mg),化合物187-3(1.41g,6.74mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.21 g,10.13mmol)依次溶于乙醇(60mL)中,室温氢化反应过夜。反应液经硅藻土过滤,乙醇洗涤,滤液浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到无色液体187-4(1.94g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ5.36(s,1H),4.57(d,J=6.2Hz,2H),4.35(q,J=7.2Hz,2H),2.31(s,3H), 2.26(s,3H),1.46(s,9H),1.40(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤4:
将底物187-4(1.94g,6.19mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)中,降温至-30度,分批加入四氢铝锂(500mg,13.18mmol),加完升至0度搅拌30分钟,TLC显示原料反应完全。反应液依次加入水(0.5mL),15%氢氧化钠溶液(0.5mL)和水(1.5mL),过滤,乙酸乙酯洗涤,滤液浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到紫色液体187-5(1.51g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.06(s,1H),4.54(s,2H),4.38(d,J=6.2Hz,2H),3.17(s,1H), 2.31(s,3H),2.11(d,J=0.5Hz,3H),1.41(s,9H)。
步骤5:
将底物187-5(1.51g,5.56mmol)溶于二甲基亚砜(19mL)中,分批加入2-碘酰基苯甲酸(3.13g,11.18mmol),室温反应1.5小时,TLC显示原料反应完全。反应液加水和乙酸乙酯稀释,过滤除去不溶物,滤液分液,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色液体187-6(1.7g),粗品直接用于下一步。
步骤6:
将粗品187-6(1.7g,以5.57mmol计)和磷试剂187-6a(2.87g,8.33mmol)依次溶于无水四氢呋喃(40mL)中,加热回流过夜。反应液冷却至室温,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到黄色液体187-7(1.5g)。
步骤7:
将187-7(1.50g,4.47mmol)溶于乙酸乙酯(25mL)中,加入钯碳(含量10%,750mg),室温氢化反应过夜。反应液垫硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,滤液无水硫酸钠干燥,浓缩得到灰白色固体187-8(1.33g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ4.87(s,1H),4.35(d, J=5.5Hz,2H),2.77(d,J=7.4Hz,2H),2.73–2.67(m,2H),2.29(s,3H),2.01(s,3H),1.88(s, 1H),1.44(s,9H),1.00-1.04(m,2H),0.91–0.81(m,2H)。
步骤8:
将底物187-8(1.01g,2.99mmol)溶于1,4-二氧六环(7mL),滴加6N盐酸(5mL,30mmol),滴加完毕,室温反应4.5小时。反应液滴加饱和碳酸钠溶液淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到褐色液体(708mg)。
将上一步粗品(708mg)溶于1,2-二氯乙烷(10mL),滴加醋酸(6滴),室温搅拌 2小时,分批加入氰基硼氢化钠(283mg,4.49mmol),搅拌5分钟,加无水甲醇(5mL),室温反应过夜。反应液加饱和碳酸氢钠溶液淬灭,浓缩去除有机溶剂,残留物用二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到187-9(褐色固体457mg)。
LC-MS:222.2[M+1]+。
步骤9:
将底物187-9(457mg,2.07mmol)溶于无水二氯甲烷(12mL)中,滴加溴乙酰溴(1.25g,6.19mmol),室温反应2小时。反应液滴加饱和碳酸氢钠溶液淬灭,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色油状物AN-23(520mg)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ4.63(d,J=18.2Hz,1H), 4.50(d,J=17.4Hz,1H),4.11(m,1H),3.90(d,J=10.9Hz,1H),3.88(s,1H),3.69(d,J= 10.9Hz,1H),2.72(dd,J=17.1,7.0Hz,1H),2.28(s,3H),2.27–2.16(m,2H),2.06(dd,J= 16.1,9.1Hz,1H),1.94(s,3H),1.01–0.87(m,1H),0.65–0.49(m,2H),0.47–0.31(m,2H), HPLC纯度98%。
手性拆分得到AN-23-1和AN-23-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:10.308分钟;峰2出峰时间:20.407分钟。
实施例189
酰胺AN-24的合成
步骤1:
2-甲基乙酰乙酸乙酯188-1(15.2g,105.4mmol)和巯基乙酸乙酯188-1a(25.3g,210.5 mmol),在-10度下慢慢通入干燥的氯化氢气体至饱和,反应液在室温下搅拌3小时,加二氯甲烷稀释,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,中间产物溶于甲醇(30mL),慢慢滴入至2N KOH的甲醇溶液(165mL),室温搅拌1小时后,将反应液加入冰水,在 -3~0度下,用3N盐酸调节PH至1,过滤,水洗,收集固体,滤液用乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,浓缩,与收集固体一并柱层析纯化,得到白色固体产物188-2(12.0g)。LC-MS:187.0[M+1]+。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ2.02(d,J=0.8 Hz,3H),2.35(d,J=0.4Hz,3H),3.87(s,3H),9.73(br,1H)。
步骤2:
将化合物188-2(3.5g,18.79mmol),碳酸钾(3.9g,28.22mmol)和α-溴代环丙乙酮188-2a(3.7g,22.70mmol)依次加入到N,N’-二甲基甲酰胺(50mL)中,室温搅拌过夜。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到白色固体188-3(3.6g)。LC-MS:269.1[M+1]+。
步骤3:
将底物188-3(3.6g,13.42mmol),醋酸铵(10.3g,133.6mmol)和氰基硼氢化钠(4.2g,66.84mmol)依次加入到正丁醇中(150mL),升温至70度搅拌1小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水,分液,有机相浓缩;水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到无色油状物188-4(3.1g)。LC-MS:270.1[M+1]+。
步骤4:
将化合物188-4(3.1g,11.51mmol)和三乙胺(1.8g,17.79mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中,冰浴冷却至0~5度,缓慢滴加二碳酸二叔丁酯(2.8g,12.83mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液,反应室温搅拌2小时,TLC显示反应完全。反应液加水,分液,水相用乙酸乙酯萃取,合并有机相,1N盐酸洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到无色油状物188-5(3.9g)。LC-MS:392.1[M+Na]+。
步骤5:
将底物188-5(3.9g)溶于四氢呋喃(80mL)中,冰浴冷却至0~5度,分批加入四氢铝锂(600mg,15.81mmol),反应在此温度搅拌4小时,TLC显示反应完全。反应液缓慢滴加水0.6毫升,15%氢氧化钠水溶液0.6毫升,加水1.8毫升,室温搅拌10分钟后,硅藻土过滤,滤液浓缩,得到无色油状产物188-6(2.5g,粗品)。LC-MS:364.2[M+Na]+。
步骤6:
将底物188-6(2.5g,粗品)溶于二氯甲烷(80mL)中,室温下加入二氧化锰(12.7 g,146.1mmol),加热回流2小时,反应液降至室温,TLC(石油醚:乙酸乙酯=5:1)显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体188-7(1.4 g)。LC-MS:362.2[M+Na]+。
步骤7:
将底物188-7(1.4g,4.12mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中,加入三氟乙酸(5mL),室温搅拌反应2小时,TLC检测反应完全,加入冰水,碳酸钠水溶液中和,二氯甲烷萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色油状物188-8,粗品直接投下一步反应。LC-MS:222.1[M+1]+。
步骤8:
粗品188-8溶于甲醇(20mL)中,冷却至0度,分批加入硼氢化钠(180mg,4.76mmol),反应液0度下反应1小时,LCMS检测反应完全。反应液缓慢加水,搅拌半小时,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色油状物 188-9(980mg)。LC-MS:224.1[M+1]+。
步骤9:
粗品188-9(980mg)溶于二氯甲烷(20mL)中,氮气保护下,冷却至0度左右,随后加入溴乙酰溴(3.6g,17.84mmol)的二氯甲烷溶液,加毕,缓慢恢复室温反应,TLC 检测反应完全。反应液倒入冰水中,二氯甲烷萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到无色油状物AN-24(1.6g),LC-MS:344.0[M+1]+。
手性拆分得到AN-24-1和AN-24-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:11.10分钟;峰2出峰时间:21.10分钟。
实施例190
酰胺AN-25的合成
步骤1:
α-溴代环丙乙酮(16.2g,99.38mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(80mL)中,室温下加入醋酸钾(19.6g,199.7mmol),升温至50度反应1小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油189-3a(16.7g)。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ0.95-0.97(m,2H),1.09-1.13 (m,2H),1.90-1.96(m,1H),2.16(s,3H),4.82(s,2H)。
步骤2:
将化合物189-3a(16.7g)溶于甲醇(60mL)和水(60mL)中,加入碳酸钠固体(10.6g,100.0mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色油189-3b (5.4g)。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ0.99-1.04(m,2H),1.14-1.18(m,2H),1.83-1.89(m, 1H),3.18(br,1H),4.41(2,1H)。
步骤3:
3-溴噻吩189-1(20.0g,122.68mmol)溶于四氢呋喃(200mL)中,氮气保护下,冷却至0度左右,滴加LDA(74mL,148.0mmol,2.0M),约0.5小时加完,继续在0 度下搅拌1小时;滴加入硼酸三甲酯(25.5g,245.4mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液,加毕,缓慢升至室温反应2小时。反应液冷却至0度,滴加水淬灭,反应液用1N盐酸调节至酸性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到淡黄色固体189-2(29.0g)。
步骤4:
将底物189-2(29.0g)溶于二氯甲烷(300mL)中,加入饱和碳酸氢钠水溶液(125mL),再加入30%双氧水(27mL),室温反应1小时,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液用混合液(二氯甲烷/甲醇=10/1)萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,盐水相与水相合并用混合液(二氯甲烷/异丙醇=3.5/1)萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到棕黄色固体189-3(9.5g)。LC-MS: 178.9[M+1]+。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ4.02(d,J=3.2Hz,2H),7.67(t,J=2.8Hz,1H)。
步骤5:
氮气保护下,偶氮二甲酸二异丙酯(13.6g,67.26mmol)滴加入冷却至-10度的三苯基膦(17.6g,67.10mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液中,搅拌10分钟后,滴加189-3b (6.7g,66.92mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液,加毕,-10度下搅拌反应20分钟,再滴加入化合物189-3(5.0g,27.93mmol)的二氯甲烷溶液,加毕,缓慢升至室温反应1 小时,TLC检测原料基本反应完全。反应液用石油醚稀释后直接上柱,柱层析纯化得到红棕色油189-4(4.2g)。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.00-1.05(m,2H),1.12-1.18(m,2H), 2.27-2.23(m,1H),4.75(s,2H),6.70-6.72(m,1H),6.75-6.77(m,1H)。
步骤6:
将化合物189-4(5.1g,19.53mmol)和乙酸铵(15.05g,195.3mmol)溶于甲醇(60mL)中,加入氰基硼氢化钠(6.14g,97.65mmol),室温反应过夜,TLC检测反应基本完全。反应液浓缩,剩余物加水溶解,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,得到红棕色油189-5(4.5g)。LC-MS:262.0[M+1]+。
步骤7:
将化合物189-5(4.5g)溶于二氯甲烷(80mL)中,加入N,N-二异丙基乙胺(4.2g,32.5mmol),搅拌5分钟后,冷却至0度左右,滴加入Boc酸酐(5.3g,24.2mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液,加毕,恢复至室温搅拌反应2小时,TLC检测反应完全。反应液浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到淡黄色油189-6(2.7g)。LC-MS:384.0[M+Na]+。
步骤8:
将底物189-6(2.7g,7.45mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)和水(12mL)中,室温下依次加入乙烯基三氟硼酸钾(3.0g,22.4mmol),N,N-二异丙基乙胺(3.8g,29.4 mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物催化剂(5%催化量),氮气置换3次后,加热至100度反应6小时,LCMS检测反应完全。反应液冷却至室温,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到淡黄色油189-7(1.55g)。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ 0.31-0.34(m,1H),0.44-0.48(m,1H),0.54-0.60(m,2H),1.14-1.18(m,1H),1.45(s,9H), 3.17-3.21(m,1H),4.15-4.22(m,2H),4.98(br,1H),6.66-6.67(m,1H),6.73-6.74(m,1H)。
步骤9:
将底物189-7(1.55g,5.01mmol)溶于丙酮(60mL)和水(30mL)中,依次加入 N-甲基-N-氧化吗啉(1.2g,10.24mmol)和锇酸钾二水合物(50mg)的水溶液,室温反应 1小时,TLC检测反应完全;反应液加入高碘酸钠(2.2g,10.28mmol),室温反应1小时,TLC检测反应完全。反应液过滤,滤液浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到淡黄色油 189-8(1.2g)。LC-MS:334.1[M+Na]+。
步骤10:
将底物189-8(1.2g,3.85mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中,加入三氟乙酸(4mL),室温下反应1小时后,TLC检测反应完全。反应液用饱和碳酸钠水溶液中和,二氯甲烷萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油189-9(700mg)。 LC-MS:194.1[M+1]+。
步骤11:
将底物189-9(450mg,2.32mmol)溶于甲醇(10mL)中,冷却至0度左右,加入硼氢化钠(175mg,4.64mmol),加完0度下反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加水,搅拌半小时,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油189-10(490mg)。LC-MS:196.1[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ 0.33-0.38(m,2H),0.45-0.48(m,2H),0.75-0.84(m,1H),2.35-2.39(m,1H),3.61-3.79(m,3H), 3.91-3.95(m,1H),4.28,4.31(dd,J1=12.0Hz,J2=2.0Hz,1H),6.65-6.68(m,2H)。
步骤12:
将底物189-10(490mg)溶于二氯甲烷(10mL)中,混合液缓慢滴加入溴乙酰溴(2.0g,9.91mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中,加完室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液用饱和碳酸钠水溶液中和,二氯甲烷萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品用乙酸乙酯溶解,加入碳酸钠水溶液搅拌1小时,分液,有机饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到微黄色粘稠油AN-25(640 mg)。LC-MS:316.0/318.0[M+1]+。
手性拆分得到AN-25-1和AN-25-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:17.953分钟;峰2出峰时间:22.417分钟。
实施例191
酰胺AN-26的合成
步骤1:
将3-噻吩甲酸190-1(20.0g,156mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中,氮气保护,干冰浴-78度下缓慢滴加正丁基锂的四氢呋喃溶液(126mL,315mmol,2.5M),滴加完-78 度搅拌半小时,随后缓慢滴加液溴(8.6mL,168mmol),同时维持温度不超过-60度,滴加完后缓慢升至室温过夜,LCMS检测原料反应一半。反应液加入稀盐酸淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物190-2,粗品直接用于下一步。LC-MS:205.0[M-1]-。
步骤2:
将化合物190-2溶于N,N’-二甲基甲酰胺(100mL)中,加入碳酸钾(64.0g,463mmol)和碘甲烷(20mL,321mmol),室温搅拌1小时,TLC检测反应完全。反应液加入饱和食盐水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得粗品 190-3直接用于下一步。
步骤3:
原料化合物190-3(29g,31.2mmol)和氰化亚铜(18g,196.83mmol,1.5eq)在 N-甲基吡咯烷酮(300mL)中加热至155度反应9小时,TLC检测有原料剩余。反应液冷却至室温,加入水和甲基叔丁基醚,剧烈搅拌,垫硅藻土过滤,洗涤,滤液分取有机相,洗涤,水洗再用甲基叔丁基醚萃取一次后,合并有机相,洗涤,干燥,浓缩,粗品经柱层析纯化得到3.7g淡黄色固体产物190-4。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ3.96(s,3H),7.58(q, J=3.6Hz,1H)。
步骤4:
将原料化合物190-4(3.5g,20.94mmol)溶于甲醇(300mL)中,加入Boc酸酐(13.9g,63.69mmol)和雷尼镍(800mg),室温下催化氢化反应过夜,TLC检测没有反应完全,补加雷尼镍(400mg),继续催化氢化反应5小时,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,洗涤,滤液浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色油状物190-5(4.2g)。1H NMR: (CDCl3,400MHz):δ1.46(s,9H),3.88(s,3H),4.72(d,J=6.4Hz,2H),5.50(br,1H),7.12(d, J=5.6Hz,1H),7.41(d,J=5.6Hz,1H)。
步骤5:
将四氢铝锂(900mg,23.72mmol)分散在干燥四氢呋喃(20mL)中,氮气保护下,冷却至0度左右,滴加化合物190-5(4.2g,15.48mmol)的四氢呋喃(80mL)溶液,加毕,0度下反应半小时,TLC检测反应完全。反应液依次加0.9mL水,0.9mL15%的氢氧化钠水溶液和2.7mL水,剧烈搅拌反应半小时,垫硅藻土过滤,洗涤,滤液浓缩,剩余物用乙酸乙酯溶解,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到淡黄色油状物 190-6(3.2g)。
步骤6:
将化合物190-6(3.2g,13.15mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中,加入二氧化锰固体(34.0g,391mmol),体系加热回流反应2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,垫硅藻土过滤,洗涤,滤液浓缩得到淡黄色油状物190-7(2.6g)直接用于下一步。1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.46(s,9H),3.88(s,3H),4.74(d,J=6.0Hz,2H),5.43(br, 1H),7.21(d,J=5.6Hz,1H),7.42(d,J=5.2Hz,1H),10.03(s,1H)。
步骤7:
将底物190-7(2.6g)和Wittig试剂190-7a(4.1g,11.9mmol)在四氢呋喃(50mL) 中加热至回流反应2小时,TLC检测基本反应完全。反应液浓缩,剩余物用石油醚/乙酸乙酯(5v/1v)打浆,滤液合并浓缩,粗品经柱层析纯化得到黄色油状物190-8(3.0g)。 LC-MS:330.1[M+Na]+。
步骤8:
将底物190-8(3.0g,9.76mol)溶于乙酸乙酯(100mL)中,加入10%钯炭(1.0g),氢气置换3次后,在氢气条件下室温搅拌反应过夜,TLC检测大部分原料没有反应。补加10%钯炭1g,继续反应3小时,TLC检测大约剩余10%左右原料,换氢气球继续反应1小时,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,洗涤,滤液浓缩,得到淡黄色油190-9 (3.2g),粗品直接用于下一步。LC-MS:332.1[M+Na]+。
步骤9:
将化合物190-9(2.9g)溶于二氯甲烷(45mL)中,滴加入三氟乙酸(14mL)的二氯甲烷(14mL)溶液,室温反应30分钟,TLC检测反应完全。反应液用二氯甲烷洗稀释,饱和碳酸钠水溶液中和,分液,水相再用二氯甲烷/异丙醇(3.5v/1v)萃取两次,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色油状物190-10(1.9g)。LC-MS:192.1[M+1]+。
步骤10:
将化合物190-10(1.9g)溶于1,2-二氯乙烷(50mL)中,加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.8g,22.65mmol),体系加热至70度反应2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,浓缩,粗品加水稀释,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,纯化后得到灰色固体190-11(0.75g)。LC-MS:194.1[M+1]+。
步骤11:
将底物190-11(750mg)溶于二氯甲烷(20mL)中,加入溴乙酰溴(3.1g,15.36mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液用饱和碳酸钠水溶淬灭,分液,浓缩,剩余物用乙酸乙酯溶解,再用饱和碳酸钠水溶液洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到无色油状物AN-26(800mg)。LC-MS:336.0[M+Na]+。
手性拆分得到AN-26-1和AN-26-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:18.534分钟;峰2出峰时间:30.857分钟。
实施例192
酰胺AN-27的合成
步骤1:
3-溴吡啶-4-醛191-1(10.0g,53.76mmol)和乙二醇(6.7g,107.53mmol),对甲基苯磺酸(900mg,5.38mmol)在甲苯(200mL)中加热回流分水3小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,倒入冰的饱和碳酸钠水溶液中,分液,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到淡黄色油状物191-2(13.1g),粗品直接投下一步反应。
步骤2:
化合物191-2(6.0g)溶于四氢呋喃(100mL)中,氮气保护下,冷却至-70度左右,滴加入正丁基锂溶液(11.5mmol,28.70mmol,2.5M),滴毕,-70度反应1小时,滴加 N’N-二甲基甲酰胺(9.5g,130.45mmol)的四氢呋喃溶液,加毕,继续反应1小时,缓慢升至室温反应1小时,TLC检测反应完全。反应液饱和氯化铵溶液淬灭,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色油191-3(1.3 g)。
步骤3:
将化合物191-3(2.1g,11.73mmol)溶于甲醇(30mL)中,冷却至0度左右,分批加入硼氢化钠固体(669mg,17.6mmol),0度下搅拌反应半小时,TLC检测反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色油 191-4(2.3g)。LC-MS:182.1[M+1]+。
步骤4:
将化合物191-4(2.3g)溶于3N盐酸(30mL)中,加热至80度反应3小时,TLC 检测反应完全。反应液冷却至室温,用饱和碳酸钠水溶液中和,二氯甲烷/异丙醇(3.5V/1V) 萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色棕色固体191-5(1.5g)。
步骤5:
将化合物191-5(1.5g)和Wittig试剂190-7a(3.8g,10.95mmol)在四氢呋喃(50mL)中加热回流反应1小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,浓缩,得到粗品 191-6直接投下一步反应。LC-MS:204.1[M+1]+。
步骤6:
将化合物191-6溶于N’N-二甲基甲酰胺(30mL)中,室温下加入咪唑(2.2g,32.85mmol),搅拌5分钟后,加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.5g,16.43mmol),加热至60度反应2小时,TLC检测基本反应完全。反应液冷却至室温,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄棕色油状物191-7(2.9 g)。
步骤7:
将化合物191-7(2.9g,9.13mmol)溶于乙酸乙酯(60mL)中,加入钯炭(500mg),室温下加氢反应0.5小时,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,洗涤,浓缩,得到淡黄色油状物191-8(2.65g)。LC-MS:320.2[M+1]+。
步骤8:
将化合物191-8(2.65g)和醋酸铵(6.4g,82.9mmol)溶于正丁醇(50mL)中,加入氰基硼氢化钠(2.6g,41.5mmol),加毕,加热至70度反应2小时,TLC检测反应完全。反应液冷却至室温,加水,搅拌半小时后,分液,正丁醇相浓缩干得化合物191-9,直接投下一步反应。LC-MS:321.1[M+1]+。
步骤9:
化合物191-9溶于四氢呋喃(30mL)中,加入2N氢氧化钠水溶液(15mL,30.0mmol),冷却至0度左右,滴加入Boc酸酐(4.0g,18.33mmol),加毕,恢复至室温搅拌反应2 小时,TLC检测基本反应完全。加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到棕色固体191-10(1.3g)。LC-MS:421.3[M+1]+。
步骤10:
化合物191-10(1.3g,3.09mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中,加入四丁基氟化铵一水合物(1.0g,3.09mmol),室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到棕色油状物191-11(1.1g)。
步骤11:
化合物191-11(1.1g)溶于二氯甲烷(50mL)中,室温下加入二氧化锰(4.6g,52.91mmol),加热回流反应2小时,TLC检测基本反应完全。反应液冷却至室温,垫硅藻土过滤,洗涤,滤液浓缩,得到棕褐色油状物191-12(1.1g)。
步骤12:
化合物191-12(1.1g)溶于二氯甲烷(15mL)中,加入三氟乙酸(5mL),室温搅拌反应1小时,TLC检测反应完全。反应液室温浓缩,用冰水稀释,饱和碳酸钠溶液中和,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到棕色粘稠油状物化合物 191-13(530mg)。
步骤13:
将化合物191-13(530mg,2.85mmol)溶于甲醇(10mL)中,冷却至0度左右,分批加入硼氢化钠固体(108mg,2.85mmol),0度下继续反应半小时,TLC检测基本反应完全。反应液加水,室温反应半小时,用二氯甲烷/异丙醇(3.5V/1V)萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油状物,经纯化得到黄色油状物AN-27(200mg)。 LC-MS:189.1[M+1]+。
实施例193
酰胺AN-28的合成
步骤1:
氮气保护下,将141-5(12.6g,32.87mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(130mL)中,加入3-羟基-2-噻吩甲酸甲酯192-1(10.4g,65.75mmol)和碳酸钾(13.6g,98.4mmol), 室温反应3天,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体192-2(7.1g)。 LC-MS:392.1(M+Na)+。
步骤2:
氮气保护下,LiAlH4(1.17g,30.83mmol)分散在干燥四氢呋喃(80mL)中,冰浴降温,低温下滴加化合物192-2(7.6g,20.58mmol,20ml四氢呋喃溶解),滴完,室温反应1小时,TLC监控反应完全。反应液滴加1.2ml水,1.2ml 15%氢氧化钠,3.6ml水,加入无水硫酸钠,搅拌30分钟,过滤,滤液浓缩,得到淡黄色固体192-3(5.39g)。LC-MS: 364.1(M+Na)+。
步骤3:
氮气保护下,将化合物192-3(5.39g,粗品)溶于二氯甲烷(160ml)中,加入二氧化锰(27.5g,316.3mmol),室温反应1小时,TLC监控反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩,得到黄色固体192-4(5.2g)。LC-MS:362.0(M+Na)+。1H NMR:(CDCl3,400 MHz):δ1.46(s,9H),3.86(s,3H),4.17-4.20(m,1H),4.48-4.56(m,2H),5.01(d,J=9.6Hz, 1H),6.81(d,J=5.6Hz,1H),7.43(d,J=5.6Hz,1H)。
步骤4:
将化合物192-4(5.0g)溶于二氯甲烷(50ml)中,冰水浴冷却至0度左右,滴加三氟乙酸(40ml),室温反应1小时,TLC监控反应完全。反应液加入二氯甲烷,滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节PH至弱碱性,分液,合并有机相,饱和碳酸氢钠水溶液洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得到黄色固体192-5(2.83g)。LC-MS:222.1(M+1) +。
步骤5:
氮气保护下,将192-5(2.83g)溶于甲醇(30ml)中,加入硼氢化钠(0.97g,25.64mmol),室温反应过夜,LCMS监控反应完全。反应液加入水淬灭,搅拌30分钟,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到黄色固体192-6(2.72g)。LC-MS:224.1(M+1)+。
步骤6:
氮气保护下,将化合物192-6(2.72g,12.19mmol)溶于二氯甲烷(60ml)中,冰水浴冷却至0度左右,滴加溴乙酰溴(9.86g,48.79mmol,10ml二氯甲烷稀释),滴完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液倒入冰水中,碳酸氢钠调节PH至弱碱性,分液,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品用乙酸乙酯稀释,饱和碳酸氢钠水溶液调节至碱性,搅拌30分钟,分液,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体AN-28(3.16g)。LC-MS:344.0(M+1)+。
手性拆分得到AN-28-1和AN-28-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:18.523分钟;峰2出峰时间:23.813分钟。
实施例194
酰胺AN-29的合成
步骤1:
将底物188-2(7.3g,39.20mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(120ml)中,加入碳酸钾(8.1g,58.61mmol)和141-5(7.5g,19.56mmol),室温搅拌4天,TLC监测。反应液倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到白色固体193-2(3.0g)。LC-MS:420.1[M+Na]+。1H-NMR: (CDCl3,400MHz):δ1.48(s,9H),2.01(s,3H),2.33(s,3H),3.84(s,3H),4.21-4.24(m,1H), 4.40-4.43(m,1H),4.52(br,1H),6.06(d,J=8.8Hz,1H)。
步骤2:
将化合物193-2(5.3g,13.34mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中,氮气保护条件下,分批加入四氢铝锂(0.76g,20.03mmol),加完在此温度下搅拌2小时,TLC显示反应完全。反应液依次慢慢滴加水(0.68mL),15%氢氧化钠水溶液(0.8mL),加水(2.4mL),室温搅拌10分钟后,垫硅藻土过滤,滤液浓缩,得到白色固体193-3(4.9g),粗品直接用于下一步。LC-MS:392.1[M+Na]+,1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.48(s,9H),1.99(s, 4H),2.28(s,3H),4.15(s,2H),4.54(br,1H),4.63(d,J=5.2Hz,2H),5.5(d,J=9.2Hz,1H)。
步骤3:
将193-3(4.90g)溶于二氯甲烷(100mL)中,加入二氧化锰(22.95g,264.0mmol),加热回流2小时,TLC显示反应完全。反应液降至室温,垫硅藻土过滤,滤液浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到白色固体193-4(4.2g,两步产率86%)。LC-MS:390.1[M+Na]+, 1H NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.47(s,9H),2.01(s,3H),2.38(s,3H),4.33-4.41(m,2H),4.62 (br,1H),5.38(d,J=9.6Hz,1H),9.81(s,1H)。
步骤4:
将193-4(3.7g,10.07mmol)溶于二氯甲烷(12mL)中,加入三氟乙酸(6mL), 室温下搅拌半小时,TLC显示反应完全。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液调节PH至碱性,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到淡黄色油状产物193-5(2.4g),粗品直接用于下一步。
步骤5:
将193-5(2.4g)溶于甲醇(40mL)中,氮气条件下加入硼氢化钠(550mg,14.54mmol),室温搅拌过夜,LCMS显示原料还有少量未反应完。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到淡黄色固体193-6(2.1g)。LC-MS:252.1[M+H]+,1H-NMR:(CDCl3,400MHz):δ1.94(s,3H),2.24 (s,3H),3.65-3.69(m,1H),3.82-3.86(m,1H),3.96-4.01(m,1H),4.10,4.14(m,1H),4.55(dd,J1=12.4Hz,J2=2.8Hz,1H).
步骤6:
将193-6(2.1g,8.36mmol)溶于二氯甲烷(80mL)中,氮气置换三次后,冷却至0~ 5度,一次性加入溴乙酰溴(6.75g,33.44mmol),室温搅拌过夜,TLC显示原料还有少量未反应完。反应液冷却至0~5度,加水淬灭,分液,二氯甲烷萃取,合并有机相,浓缩,加入乙酸乙酯稀释,饱和Na2CO3水溶液洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析纯化,得到白色固体AN-29(2.9g)。LC-MS:372.0[M+1]+。
手性拆分得到AN-29-1和AN-29-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相95%正己烷+5%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:10.240分钟;峰2出峰时间:19.173分钟。
实施例195
中间体195-9的合成
步骤一:
4-溴-2-羟基苯乙酮195-1(20.0g,93.0mmol)和碳酸钾(25.7g,185.9mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺中,室温滴加苄溴(19.1g,111.7mmol),加完室温反应过夜,TLC显示反应完全。反应液加水淬灭,过滤,滤饼水洗,干燥后得白色固体195-2(29.5g)。LC-MS: 327.1[M+Na]+。
步骤二:
将化合物195-2(15.0g)溶于二氯甲烷(50mL)和甲醇(50mL)的混合溶剂中,冰浴下分批加入硼氢化钠(4.7g,124.2mmol),加完冰浴下反应1小时,TLC显示反应完全。反应液加冰水淬灭,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到白色固体195-3(15.0g)。
步骤三:
将化合物195-3(15.0g,粗品)和对甲苯磺酸(930mg,4.9mmol)溶于甲苯中,加热回流3小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物195-4(14.1g)。
步骤四:
将化合物195-4(14.1g)和N-甲基-N-氧化吗啉(17.0g,145.1mmol)溶于丙酮(50mL) 和水(50mL)的混合溶剂中,加入二水合锇酸钾(1.78g,4.84mmol),室温搅拌3小时,TLC显示反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体195-5(6.5g)。LC-MS: 345.0[M+Na]+。1H NMR:(CD3OD,400MHz):δ3.27-3.33(m,1H),3.52-3.57(m,1H), 4.71(t,J=6.0Hz,1H),4.92-4.96(m,1H),5.15(d,J=3.2Hz,2H),5.20(d,J=4.4Hz, 1H),7.14(dd,J1=8.0Hz,J2=1.6Hz,1H),7.23(d,J=1.6Hz,1H),7.32-7.47(m,6H)。
步骤五:
将化合物195-5(6.5g,20.1mmol)和苯甲醛二甲缩醛(3.7g,24.3mmol)溶于甲苯(50mL)中,加入对甲苯磺酸(173mg,1.0mmol),室温搅拌过夜,TLC显示反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,得产物195-6(8.1g)。LC-MS:411.0[M+1]+。
步骤六:
将化合物195-6(8.1g)溶于甲苯(50mL)中,冰浴冷却至0度,加入二异丁基氢化铝(49mL,49mmol),室温搅拌过夜,TLC显示反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体195-7(3.7g)。LC-MS:413.1[M+1]+。1H NMR:(CD3OD,400MHz): δ3.33-3.38(m,1H),3.52(dd,J1=10.0Hz,J2=2.8Hz,1H),4.45(s,2H),5.07-5.10(m,1H), 5.13(s,2H),5.38(d,J=4.8Hz,1H),7.14,7.16(dd,J1=8.4Hz,J2=2.0Hz,1H),7.22-7.43 (m,12H)。
步骤七:
将化合物195-7(3.7g,8.95mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中,滴加Dess-Martine(4.56g,10.75mmol),加完室温搅拌过夜,TLC显示反应完全。反应液加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体195-8(3.4g)。LC-MS:411.0[M+1]+。1H NMR:(CD3OD,400MHz): δ4.45(s,2H),4.61(s,2H),5.25(s,2H),7.23-7.52(m,12H),7.64-7.66(m,1H)。
步骤八:
将化合物195-8(3.4g,8.27mmol)溶于氨水(30mL)和乙醇(80mL)的混合溶剂中,室温下加入三甲基氰硅烷(7.4g,74.59mmol),氟化铵(7.4g,199.8mmol),碳酸铵(17.0g,176.9mmol),升温至80度反应过夜,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物195-9(3.5g)。LC-MS:481.1[M+1]+。
实施例196
化合物SYY-B110的合成
步骤一:
将化合物195-9(1.40g,2.91mmol)和碳酸钾(804mg,5.82mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(25mL)中,室温下加入AN-15-1(1.05g,3.20mmol),加完升温至50度搅拌1小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水淬灭,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体196-2(2.1g)。
步骤二:
将化合物196-2(1.1g,1.51mmol),1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2- 基)-1H-吡唑182-3a(0.47g,2.45mmol)和碳酸钠(320mg,3.02mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)与水(6mL)的混合溶剂中,室温下加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(122mg,0.15mmol),在氮气保护下,升温至100度搅拌3小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体196-3(920mg)。
步骤三:
将化合物196-3(920mg,1.26mmol)溶于甲醇中,加入10%Pd/C(40mg),在氢气氛围中,升温至50℃反应6小时,TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩得196-4(620mg)。
步骤四:
将化合物196-4(300mg)和三苯基膦(290mg,1.10mmol)溶于四氢呋喃(10mL) 中,室温下搅拌10分钟,加入偶氮二甲酸二异丙酯(224mg,1.10mmol),在氮气保护下,室温反应30分钟,TLC显示反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体 SYY-B110(180mg)。LC-MS:532.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.34-0.58(m, 4H),1.12-1.15(m,1H),3.72-3.89(m,4H),4.00-4.23(m,2H),4.38-4.78(m,5H),4.90-5.02 (m,1H),6.87-7.27(m,6H),7.86-7.88(m,1H),8.14-8.16(m,1H),9.06-9.09(m,1H)。
手性拆分得到SYY-B110-1和SYY-B110-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:23.166分钟;峰2出峰时间:62.642分钟。
实施例197
化合物SYY-B112的合成
步骤1:
将螺环中间体SP-24(400mg,1.34mmol)溶于干燥N’N-二甲基甲酰胺(20ml)中,室温下加入酰胺片段AN-15-1(400mg,1.22mmol)和碳酸钾(338mg,2.44mmol),室温下搅拌过夜,反应完全。反应液加水(100ml),搅拌10分钟,过滤,滤饼水洗,石油醚洗,乙酸乙酯溶解,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得化合物197-2(560mg)。 LC-MS:545.1[M+1]+。
步骤2:
将化合物197-2(560mg)溶于干燥1,4-二氧六环(20ml)中,室温下加入甲基脲(163 mg,2.20mmol),三(二亚苄基丙酮)二钯(50mg,0.06mmol),4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(64mg,0.11mmol)以及碳酸铯(711mg,2.20mmol),氮气保护下,升温至100度搅拌40分钟,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,倒入冰水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和盐水洗,无水硫酸干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得到SYY-B112 (208mg)。LC-MS:539.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.36-0.58(m,4H), 1.25-1.38(m,1H),2.63(m,3H),3.77-4.51(m,6H),4.55-5.06(m,5H),6.13-6.15(m,1H), 6.92-7.05(m,2H),7.20-7.37(m,4H),8.76(m,1H)。
手性拆分得到SYY-B112-1和SYY-B112-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:19.372分钟;峰2出峰时间:25.430分钟。
实施例198
化合物SYY-B116-1的合成
将螺环中间体SP-1-1(38mg,0.14mmol)和碳酸钾(39mg,0.28mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(1mL)中,搅拌5分钟,加入酰胺片段AN-23-1(43mg,0.13mmol),室温反应6小时。反应液倒入15ml水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离纯化得到白色固体SYY-B116-1(51mg)。 LC-MS:559.2[M+Na]+;1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),7.51(s,1H),7.27-7.21 (m,2H),6.04-6.07(m,1H),4.90-3.59(m,6H),3.13–2.91(m,2H),2.75–2.56(m,5H), 2.44-1.97(m,6H),1.89-1.91(m,3H),1.22-1.20(m,1H),0.52-0.31(m,4H)。
实施例199
化合物SYY-B116-2的合成
将螺环中间体SP-1-2(38mg,0.14mmol)和碳酸钾(43mg,0.31mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(1mL)中,搅拌5分钟,加入酰胺片段AN-23-1(42mg,0.12mmol),室温反应过夜。反应液倒入15ml水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离纯化得到白色固体SYY-B116-2(60mg)。 LC-MS:559.2[M+Na]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.67(m,1H),7.51(m,1H), 7.25-7.17(m,2H),6.04-6.07(m,1H),4.87-3.58(m,6H),3.11–2.91(m,2H),2.71–2.55(m, 5H),2.48-2.33(m,1H),2.23-1.99(m,5H),1.90(s,3H),1.22-1.20(m,1H),0.54-0.32(m,4H)。
实施例200
化合物SYY-B118-2的合成
将螺环中间体SP-1-2(64mg,0.23mmol)和酰胺片段AN-24-1(80mg,0.23mmol),碳酸钾(96mg,0.7mmol)在N’N-二甲基甲酰胺(3mL)中室温搅拌反应2小时,TLC 检测反应完全。反应液加入水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到类白色固体SYY-B118-2(50mg)。LC-MS:539.1[M+H]+;1H-NMR: (DMSO-d6,400MHz):δ0.35-0.64(m,4H),1.09-1.13(m,1H),1.85-1.87(m,3H),2.20-2.22 (m,3H),2.43-2.48(m,1H),2.57-2.64(m,5H),2.93-3.14(m,2H),3.89-3.99(m,1H),4.19-4.99 (m,5H),6.06-6.10(m,1H),7.19-7.27(m,2H),7.54(m,1H),8.70-8.71(m,1H)。
实施例201
化合物SYY-B120-1的合成
将螺环中间体SP-1-1(37mg,0.134mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(4mL)中,依次加入碳酸钾(27mg,0.195mmol)和酰胺片段AN-25-1(40mg,0.126mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到类白色固体SYY-B120-1(42mg)。LC-MS: 511.2[M+H]+;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.31-0.58(m,4H),1.17-1.32(m,1H),2.43 (m,1H),2.54-2.62(m,4H),2.90-3.11(m,2H),3.80-5.12(m,7H),6.14(m,1H),6.75(m,2H), 7.24(m,2H),7.52(m,1H),8.79(m,1H)。
实施例202
化合物SYY-B120-2的合成
将螺环中间体SP-1-2(37mg,0.134mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(4mL)中,依次加入碳酸钾(27mg,0.195mmol)和酰胺片段AN-25-1(40mg,0.126mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到类白色固体SYY-B120-2(47mg)。LC-MS: 511.2[M+H]+;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.31-0.58(m,4H),1.17-1.32(m,1H), 2.41-2.46(m,1H),2.56-2.63(m,4H),2.91-3.12(m,2H),3.79-3.97(m,1H),4.15-4.52(m,4H), 4.68-5.11(m,2H),6.11-6.12(m,1H),6.68-6.76(m,2H),7.18-7.25(m,2H),7.52(m,1H), 8.76-8.78(m,1H)。
实施例203
化合物SYY-B122的合成
将螺环中间体SP-2(91mg,0.332mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5mL)中,依次加入碳酸钾(66mg,0.478mmol)和酰胺片段AN-25-1(100mg,0.316mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到淡黄色固体SYY-B122(150mg)。LC-MS:510.2 [M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.28-0.56(m,4H),1.15-1.28(m,1H),2.09-2.16 (m,1H),2.43-2.46(m,1H),2.61-2.62(m,3H),2.88-2.98(m,2H),3.82(m,1H),4.10-5.07(m, 6H),6.00-6.01(m,1H),6.69-6.76(m,2H),7.03-7.18(m,2H),7.41(m,1H),8.55(m,1H), 8.68-8.72(m,1H)。
手性拆分得到SYY-B122-1和SYY-B122-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相70%正己烷+30%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:13.052分钟;峰2出峰时间:18.095分钟。
实施例204
化合物SYY-B124的合成
将螺环中间体SP-2(135mg,0.49mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5ml)中,加入酰胺片段AN-26-1(140mg,0.44mmol)和碳酸钾(93mg,0.67mmol),室温反应过夜, TLC显示反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B124(140mg)。LC-MS:530.2 [M+Na]+;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.26-0.59(m,4H),1.21-1.28(m,1H),1.96-2.09 (m,3H),2.28-2.45(m,2H),2.60-2.62(m,3H),2.81-2.95(m,3H),3.54-3.89(m,2H),4.16-4.35 (m,1H),4.63-5.00(m,2H),5.98-6.02(m,1H),6.76-6.82(m,1H),7.03-7.25(m,3H), 7.40-7.41(m,1H),8.53-8.67(m,2H)。
手性拆分得到SYY-B124-1和SYY-B124-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5 μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:10.024分钟;峰2出峰时间:39.011分钟。
实施例205
化合物SYY-B126-1的合成
将螺环中间体SP-1-1(75mg,0.27mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(3ml)中,加入酰胺片段AN-26-1(78mg,0.25mmol)和碳酸钾(52mg,0.38mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,经纯化得到白色固体SYY-B126-1(75mg)。LC-MS:509.2 (M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.28-0.54(m,4H),1.22-1.31(m,1H),1.96-2.07 (m,2H),2.34-2.45(m,2H),2.55-2.62(m,4H),2.86-3.07(m,3H),3.57-3.94(m,2H),4.35-5.05 (m,3H),6.06(m,1H),6.77-6.85(m,1H),7.19-7.28(m,3H),7.52(m,1H),8.68(m,1H)。
实施例206
化合物SYY-B126-2的合成
将螺环中间体SP-1-2(75mg,0.27mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(3mL)中,加入酰胺片段AN-26-1(78mg,0.25mmol)和碳酸钾(52mg,0.38mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,经纯化得到白色固体SYY-B126-2(75mg)。LC-MS:509.2 (M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.29-0.55(m,4H),1.22-1.31(m,1H),1.96-2.07 (m,2H),2.31-2.45(m,2H),2.52-2.62(m,4H),2.84-3.11(m,3H),3.55-3.91(m,2H),4.33-4.58 (m,1H),4.71-5.04(m,2H),6.04-6.07(m,1H),6.78-6.84(m,1H),7.17-7.27(m,3H),7.51-7.52 (m,1H),8.67-8.69(m,1H)。
实施例207
化合物SYY-B130的合成
将螺环中间体SP-26(122mg,0.367mmol)和碳酸钾(106mg,0.767mmol)溶于 N’N-二甲基甲酰胺(2mL)中,搅拌20分钟,加入酰胺片段AN-16-1(100mg,0.281mmol),室温反应过夜。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到黄色固体SYY-B130(166mg)。LC-MS: 608.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.29-9.33(m,1H),8.39(m,1H),8.13–7.97 (m,3H),7.61-7.57(m,1H),7.25–6.93(m,3H),5.55-5.53(m,1H),5.12–5.00(m,5H),4.27– 3.79(m,6H)。
手性拆分得到SYY-B130-1和SYY-B130-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5 μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:35.245分钟;峰2出峰时间:49.580分钟。
实施例208
化合物SYY-B170-1和SYY-B170-2的合成
步骤1:
将螺环中间体SP-25(500mg,1.47mmol),酰胺片段AN-15-1(528mg,1.61mmol) 和碳酸钾(444mg,3.21mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10mL)中,室温反应过夜, TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色固体208-2(720mg)。
步骤2:
将化合物208-2(720mg,1.22mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中,加入6N盐酸(1 mL,0.6mmol),室温反应过夜,TLC检测反应完全。反应液浓缩得到黄色固体208-3(700 mg)。
步骤3:
将化合物208-3(700mg)溶于四氢呋喃(20mL)中,加入4-二甲氨基吡啶(催化量)和二碳酸二叔丁酯(422mg,1.93mmol),室温反应过夜。反应液浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到白色固体208-4(770mg)。
手性拆分得到化合物208-4-1和化合物208-4-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径 (5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:33.650分钟;峰2出峰时间:38.393分钟。
步骤4:
将化合物208-4-1(370mg,0.57mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中,加入TFA(1.2mL),室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液30度浓缩干得到化合物208-5-1(370mg),粗品直接投下一步反应。将208-5-1溶于甲醇(6mL)中,析出固体,加入四氢呋喃(6mL),冷却至0度,加入硼氢化钠(34mg,0.9mmol)固体,反应液澄清,TLC检测反应完全。反应液加水搅拌半小时,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,经纯化得到淡黄色固体SYY-B170-1(20mg)。LC-MS:546.2[M+1]+。1H NMR: (DMSO-d6,400MHz):δ0.33-0.58(m,4H),1.13-1.22(m,1H),2.23-2.33(m,1H),2.42-2.45 (m,1H),3.75-3.85(m,4H),4.03-4.25(m,2H),4.33-4.78(m,3H),4.92-5.02(m,1H),5.24-5.30 (m,1H),5.52-5.57(m,1H),6.88-7.27(m,4H),7.50-7.54(m,2H),7.85-7.87(m,1H),8.15-8.17 (m,1H),8.73-8.75(m,1H)。
步骤5:
将化合物208-4-2(290mg,0.57mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中,加入三氟乙酸(1.2mL),室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液30度浓缩干得到化合物208-5-2(370 mg),粗品直接投下一步反应。将208-5-2溶于甲醇(6mL)中,析出固体,加入四氢呋喃(6mL),冷却至0度,加入硼氢化钠(34mg,0.9mmol)固体,反应液澄清,TLC 检测反应完全。反应液加水搅拌半小时,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,经纯化得到淡黄色固体SYY-B170-2(15mg)。LC-MS:546.2 [M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.32-0.61(m,4H),1.13-1.22(m,1H),2.26-2.32(m, 1H),2.43-2.47(m,1H),3.76-3.84(m,4H),4.02-4.25(m,2H),4.33-4.76(m,3H),4.93-5.03(m, 1H),5.269(q,J=6.8Hz,1H),5.53-5.55(d,J=7.2Hz,1H),6.89-7.27(m,4H),7.51-7.53(m, 2H),7.86(m,1H),8.16(m,1H),8.73-8.77(m,1H)。
实施例209
化合物SYY-B132-1的合成
将化合物SYY-170-1(120mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中,氮气保护下,冷却至-70度左右,加入二乙胺基三氟化硫(83mg,0.51mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液,加毕,-70度反应2小时,TLC检测少量原料未反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到类白色固体SYY-B132-1(42mg)。LC-MS:548.3[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6, 400MHz):δ0.32-0.56(m,4H),1.10-1.15(m,1H),2.24-2.37(m,1H),2.98-3.16(m,1H), 3.70-3.85(m,4H),3.97-4.23(m,2H),4.31-5.00(m,4H),6.00-6.18(m,1H),6.85-7.34(m,4H), 7.71(m,2H),7.92-7.94(m,1H),8.21-8.23(m,1H),9.00-9.02(m,1H)。
实施例210
化合物SYY-B132-2的合成
将化合物SYY-170-2(140mg,0.26mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中,氮气保护下,冷却至-70度左右,加入二乙胺基三氟化硫(83mg,0.51mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液,加毕,-70度反应2小时,TLC检测少量原料未反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液,二氯甲烷萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到类白色固体SYY-B132-2(31mg)。LC-MS:548.3[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6, 400MHz):δ0.27-0.54(m,4H),1.08-1.16(m,1H),2.25-2.36(m,1H),2.98-3.02(m,1H), 3.70-3.84(m,4H),3.98-4.22(m,2H),4.30-5.00(m,4H),6.02-6.19(m,1H),6.85-7.31(m,4H), 7.69-7.72(m,2H),7.93(m,1H),8.22(m,1H),9.00-9.03(m,1H)。
实施例211
化合物SYY-B136-1和SYY-B137-1的合成
步骤1:
将螺环中间体SP-1-1(200mg,0.73mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5mL)中,加入碳酸钾(201mg,1.46mmol),室温反应半小时,加入溴乙酸苄酯(174mg,0.76mmol),加毕,室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油状物211-1(370mg),粗品直接投下一步反应。
步骤2:
化合物211-1(370mg)溶于甲醇(10mL)中,加入钯炭(100mg),氢气置换3次后,室温搅拌反应过夜,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩得到淡黄色固体211-2(270mg)。
步骤3:
化合物211-2(270mg)和酰胺片段AN-27(100mg,0.53mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5mL)中,加入N,N-二异丙基乙胺(137mg,1.06mmol),搅拌5分钟后,加入HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)(302mg,0.8mmol),室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B136(180mg)。LC-MS:504.2[M+1]+;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.36-0.55(m,4H),1.39-1.51(m,1H),1.99-2.10(m,2H), 2.35-2.45(m,1H),2.52-2.87(m,5H),2.92-3.14(m,3H),3.48-3.89(m,1H),4.33-4.92(m,4H), 6.04-6.06(m,1H),7.15-7.24(m,3H),7.51(m,1H),8.28-8.48(m,2H),8.67(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B136-1和化合物SYY-B137-1:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:20.95分钟;峰2出峰时间:31.04 分钟。
实施例212
化合物SYY-B136-2和SYY-B137-2的合成
步骤1:
将螺环中间体SP-1-2(200mg,0.73mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5mL)中,加入碳酸钾(201mg,1.46mmol),室温反应半小时,加入溴乙酸苄酯(174mg,0.76mmol),加毕,室温搅拌反应2小时,TLC检测反应完全。。反应液加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩得到黄色油状物212-1(340mg),粗品直接投下一步反应。
步骤2:
将化合物212-1(340mg)溶于甲醇(10mL)中,加入10%钯炭(100mg),氢气置换3次后,室温搅拌反应过夜,TLC检测反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩得到淡黄色固体212-2(250mg)。
步骤3:
将化合物212-2(250mg)和酰胺片段AN-27(100mg,0.53mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5mL)中,加入N,N-二异丙基乙胺(137mg,1.06mmol),搅拌5分钟后,加入HATU(2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)(302mg,0.8mmol, 1.5当量),室温反应2小时,TLC检测反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经Pre-TLC纯化得到白色固体SYY-B137(190mg)。 LC-MS:504.2[M+1]+;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.38-0.55(m,4H),1.22-1.39(m, 1H),1.98-2.10(m,2H),2.37-2.45(m,1H),2.52-2.78(m,5H),2.93-3.11(m,3H),3.44-3.81(m, 1H),3.84-4.36(m,1H),4.49-4.92(m,3H),6.05-6.08(m,1H),7.04-7.23(m,3H),7.50-7.51(m, 1H),8.29-8.48(m,2H),8.67-8.69(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B136-2和化合物SYY-B137-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:31.74分钟;峰2出峰时间:41.83 分钟。
实施例213
化合物SYY-B138的合成
将螺环中间体SP-2(93mg,0.34mmol)和碳酸钾(97mg,0.70mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(1.5mL)中,搅拌5分钟,加入酰胺片段AN-23-1(96mg,0.28mmol),室温反应过夜。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得到黄色固体SYY-B138(158mg)。LC-MS: 536.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.31-0.57(m,4H),1.07-1.19(m,1H), 1.90-1.91(m,3H),2.05-2.33(m,7H),2.43-2.48(m,1H),2.62-2.74(m,4H),2.90-2.96(m,2H), 3.57-3.91(m,2H),4.17-4.35(m,1H),4.60-4.84(m,2H),5.98-6.02(m,1H),7.03-7.06(m,1H), 7.13-7.18(m,1H),7.41-7.43(m,1H),8.53-8.68(m,2H)。
手性拆分得到化合物SYY-B138-1和化合物SYY-B138-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:8.051分钟;峰2出峰时间:33.764 分钟。
实施例214
化合物SYY-B140-1的合成
步骤1:
氮气保护下,SP-1-1(48mg,0.174mol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5ml)中,加入碳酸钾(36mg,0.260mol),室温搅拌下加入AN-28-1(60mg,0.174mol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B140-1(50mg)。LC-MS: 539.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.43-2.44(m,1H),2.48-2.52(m,4H), 2.93-3.11(m,2H),3.97-5.23(m,6H),5.63-5.73(m,1H),6.08-6.09(m,1H),6.67-6.71(m,1H), 7.20-7.33(m,3H),7.52(s,1H),8.72(s,1H)。
实施例215
化合物SYY-B140-2的合成
步骤1:
氮气保护下,SP-1-2(48mg,0.174mol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(5ml)中,加入碳酸钾(36mg,0.260mol),室温搅拌下加入AN-28-1(60mg,0.174mol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B140-2(60mg)。LC-MS: 539.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.37-2.47(m,1H),2.58-2.63(m,4H), 2.91-3.12(m,2H),3.99-5.03(m,6H),5.66-5.74(m,1H),6.08-6.09(m,1H),6.67-6.71(m,1H), 7.21-7.33(m,3H),7.52(s,1H),8.73(s,1H)。
实施例216
化合物SYY-B142的合成
氮气保护下,将螺环中间体SP-2(123mg,0.448mol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(84mg,0.608mol),室温搅拌下加入酰胺片段AN-28-1(140mg,0.407 mol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品纯化后得到白色固体SYY-B142 (150mg)。LC-MS:538.1[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.10-2.19(m,1H), 2.44-2.50(m,4H),2.90-2.94(m,2H),3.88-5.18(m,6H),5.61-5.66(m,1H),5.98-6.01(m,1H), 6.67(m,1H),7.03-7.31(m,3H),7.41(m,1H),8.54(m,1H),8.72-8.76(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B142-1和化合物SYY-B142-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:10.505分钟;峰2出峰时间:48.704 分钟。
实施例217
化合物SYY-B144的合成
步骤1:
氮气保护下,将螺环中间体SP-6(126mg,0.445mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(84mg,0.608mmol),室温搅拌下加入AN-28-1(140mg,0.407mmol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品纯化后得到白色固体SYY-B144(200mg)。 LC-MS:547.1(M+1)+。LC-MS:547.1(M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.48-2.64 (m,2H),3.03-3.16(m,2H),3.85(s,3H),4.01-5.23(m,6H),5.69(br,1H),6.69(m,1H), 7.26-7.58(m,4H),7.89(s,1H),8.16(s,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B144-1和化合物SYY-B144-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:42.326分钟;峰2出峰时间:52.483 分钟。
实施例218
化合物SYY-B146的合成
氮气保护下,将螺环中间体SP-7(126mg,0.446mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(84mg,0.608mmol),室温搅拌下加入酰胺片段AN-28-1(140mg,0.407mmol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加入水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体(150 mg)。LC-MS:546.1(M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.13-2.24(m,1H),2.51-2.58 (m,1H),3.00(m,2H),3.84-3.92(m,4H),4.47-5.18(m,5H),5.63(br,1H),6.67(m,1H), 7.20-7.31(m,2H),7.43-7.49(m,2H),7.84(m,1H),8.12(m,1H),8.81-8.84(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B146-1和化合物SYY-B146-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相50%正己烷+50%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:33.8分钟;峰2出峰时间:40.4分钟。
实施例219
化合物SYY-B148-1和SYY-B148-2的合成
将螺环中间体SP-1-1(50mg,0.182mmol)和碳酸钾(37mg,0.268mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(3mL)中,搅拌半小时后,加入酰胺片段AN-29-1(82mg,0.220mmol),室温反应过夜。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到白色固体SYY-B148-1(50mg)。LC-MS:567.2 [M+1]+.1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ1.86(s,3H),2.17-2.21(m,3H),2.43-2.46(m,1H), 2.56-2.62(m,4H),2.92-3.11(m,2H),3.97-5.10(m,6H),5.61-5.73(m,1H),6.01-6.09(m,1H), 7.19-7.25(m,2H),7.53(s,1H),8.70(s,1H)。
将螺环中间体SP-1-2(50mg,0.182mmol)和碳酸钾(37mg,0.268mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(3mL)中,搅拌半小时后,加入酰胺片段AN-29-1(82mg,0.220mmol),室温反应过夜。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到白色固体SYY-B148-2(65mg)。LC-MS:567.2 [M+1]+.1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ1.85-1.87(m,3H),2.18-2.21(m,3H),2.43-2.46 (m,1H),2.56-2.62(m,4H),2.91-3.12(m,2H),4.00-5.10(m,6H),5.62-5.74(m,1H),6.04-6.08 (m,1H),7.19-7.26(m,2H),7.53(s,1H),8.70(s,1H)。
实施例220
化合物SYY-B150的合成
将螺环中间体SP-2(100mg,0.364mmol)和碳酸钾(124mg,0.897mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(5mL)中,室温搅拌半小时后,加入AN-29-1(147mg,0.395mmol),室温搅拌2小时,TLC显示反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析分离得到淡黄色固体SYY-B150 (156mg)。LC-MS564.2[M-1]-;1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ1.84-1.86(m,3H), 2.10-2.21(m,4H),2.44-2.48(m,1H),2.61(d,J=4.4Hz,3H),2.87-2.97(m,2H),3.87-5.05(m,6H), 5.58-5.64(m,1H),5.96-6.02(m,1H),7.03-7.17(m,2H),7.42(s,1H),8.54(s,1H),8.74-8.77(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B150-1和化合物SYY-B150-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:7.624分钟;峰2出峰时间:29.843 分钟。
实施例221
化合物SYY-B152的合成
氮气保护下,将螺环中间体SP-6(117mg,0.413mol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(78mg,0.564mol),室温搅拌下加入酰胺片段AN-29-1(140mg,0.376 mol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B152(220 mg)。LC-MS:575.2(M+1)+。1H-NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ1.85-1.87(m,3H),2.19-2.21 (m,3H),2.51-2.68(m,2H),2.99-3.20(m,2H),3.85(s,3H),4.01-5.10(m,6H),5.60-5.75(m, 1H),7.40-7.42(m,1H),7.51-7.58(m,2H),7.88-7.89(m,1H),8.16-8.17(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B152-1和化合物SYY-B152-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:28.659分钟;峰2出峰时间:35.103 分钟。
实施例222
化合物SYY-B154的合成
氮气保护下,将螺环中间体SP-7(117mg,0.414mol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(78mg,0.564mol),室温搅拌下加入AN-29-1(140mg,0.377mol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到淡黄色固体SYY-B154(150 mg)。LC-MS:574.2(M+1)+。
手性拆分得到化合物SYY-B154-1和化合物SYY-B154-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%异丙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:11.173分钟;峰2出峰时间:18.061 分钟。
实施例223
化合物SYY-B155的合成
氮气保护下,将螺环中间体SP-7(120mg,0.425mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入碳酸钾(75mg,0.543mmol),室温搅拌下加入AN-29-2(134mg,0.361mmol),加完室温反应过夜,TLC监控反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到淡黄色固体SYY-B155(180 mg)。LC-MS:574.2(M+1)+。
手性拆分得到化合物SYY-B155-1和化合物SYY-B155-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:25.5分钟;峰2出峰时间:46.6分钟。
实施例224
化合物SYY-B156的合成
步骤一:
将中间体196-2(1.0g,1.37mmol),甲基脲(210mg,2.83mmol)和碳酸铯(1.12 g,3.44mmol)溶于二氧六环(15mL)中,室温下加入Pd2(dba)3(73mg,0.08mmol) 和XanPhos(46mg,0.08mmol),在氮气保护下,升温至100度搅拌3小时,TLC显示反应完全。反应液冷却至室温,加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体224-2(460mg)。
步骤二:
将底物224-2(460mg,0.64mmol)溶于甲醇中,加入Pd/C(40mg),在氢气氛围中,室温反应3小时,TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤,滤液浓缩得产物224-3(270 mg)。
步骤三:
将底物224-3(270mg)和三苯基膦(261mg,1.00mmol)溶于四氢呋喃(10mL) 中,加入DIAD(201mg,1.00mmol),在氮气保护下,室温反应过夜,TLC显示反应完全。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,水洗,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体SYY-B156(210mg)。LC-MS:524.2[M+1]+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ0.32-0.57(m,4H),1.10-1.12(m,1H),2.60-2.61(m,3H), 3.70-3.79(m,1H),3.99-4.23(m,2H),4.32-4.76(m,5H),4.89-5.01(m,1H),6.00-6.04(m,1H), 6.73-7.22(m,6H),8.65-8.67(m,1H),9.00-9.02(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B156-1和化合物SYY-B156-2:制备柱子为大赛璐AD-H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:11.518分钟;峰2出峰时间:20.135 分钟。
实施例225
化合物SYY-B161的合成
将螺环中间体SP-28(175mg,0.62mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10ml)中,加入酰胺片段AN-16-1(200mg,0.56mmol)和碳酸钾(117mg,0.85mmol),室温反应过夜, TLC监控原料反应完。反应液加水,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经纯化得到白色固体SYY-B161(260mg)。LC-MS:559.2(M+1) +。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.18-2.24(m,1H),2.51-2.54(m,1H),3.01-3.02(m,2H), 3.80-4.23(m,4H),4.48-5.10(m,5H),5.53(m,1H),6.94-7.22(m,3H),7.61(m,1H),7.98(m, 1H),8.26(m,1H),8.36(m,1H),8.92-8.94(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B161-1和化合物SYY-B161-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:14.263分钟;峰2出峰时间:33.038 分钟。
实施例226
化合物SYY-B163的合成
将螺环中间体SP-29(150mg,0.53mmol)和碳酸钾(100mg,0.72mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(4ml)中,搅拌20分钟,加入酰胺片段AN-16-1(171mg,0.48mmol)室温反应3小时,TLC监控原料反应完。反应液倒入水中,有固体析出,过滤,滤饼水洗,干燥得到SYY-B163白色固体270mg。LC-MS:559.2(M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400 MHz):δ2.18-2.25(m,1H),2.54-2.65(m,1H),2.97-3.03(m,2H),3.78-4.20(m,4H),4.47-5.06 (m,5H),5.43-5.55(m,1H),6.94-7.24(m,3H),7.92(m,2H),8.24(m,1H),8.62(m,1H), 8.79(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B163-1和化合物SYY-B163-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:16.179分钟;峰2出峰时间:26.537 分钟。
实施例227
化合物SYY-B165的合成
将螺环中间体SP-27(165mg,0.58mmol)和碳酸钾(111mg,0.80mmol)溶于N’N- 二甲基甲酰胺(4ml)中,搅拌20分钟,加入酰胺片段AN-16-1(186mg,0.52mmol) 室温反应过夜,TLC监控原料反应完。反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取,合并有机相,饱和食盐水,无水硫酸钠干燥,浓缩,粗品经硅胶柱层析纯化得淡黄色固体SYY-B165(270 mg)。LC-MS:559.2(M+1)+。1H NMR:(DMSO-d6,400MHz):δ2.19-2.22(m,1H),2.53-2.55 (m,1H),3.02-3.05(m,2H),3.78-4.22(m,4H),4.48-5.08(m,5H),5.48-5.57(m,1H),6.92-7.21 (m,3H),7.52-7.60(m,2H),7.97-7.98(m,1H),8.28-8.29(m,1H),8.88-8.90(m,1H)。
手性拆分得到化合物SYY-B165-1和化合物SYY-B165-2:制备柱子为纳微OD-5H,填料粒径(5μm),内径(30mm),长度(250mm),流速:30mL/min,流动相60%正己烷+40%乙醇等梯度,波长254nm;峰1出峰时间:14.691分钟;峰2出峰时间:26.624 分钟。
实施例228
组蛋白乙酰转移酶p300酶活性测定实验:
利用放射性同位素实验技术检测不同浓度的小分子化合物对组蛋白乙酰转移酶p300 活性的影响,并用GraphPad Prism 5.0软件拟合计算出化合物的IC50值(最高抑制浓度的 50%)。P300酶(购自BPS公司,Cat.No.50071)催化辅因子[3H]标记乙酰辅酶A ([3H]-Ac-CoA)(购自PerkinElmer公司,Cat.No.NET290)和组蛋白底物多肽反应(多肽序列为ARTKQTARKSTGGKAPRKQLA-GG-K(Biotin)-NH2),将辅因子[3H]-Ac-CoA上的 [3H]同位素标记的乙酰基转移到组蛋白赖氨酸底物上,最终用没有同位素标记的Ac-CoA (Sigma,Cat.No.A2056)终止反应。若p300乙酰转移酶活性被抑制,则在底物多肽上无法检测到同位素信号,以此评价化合物对p300乙酰转移酶活抑制活性。
在酶反应体系中,首先用Echo将200nL稀释好的化合物(100%DMSO)转移到测试板子里,化合物在酶反应体系中的终浓度范围为0.25~5000nM,然后转移10μL/孔p300 蛋白(终浓度为0.05nM),与化合物在室温孵育15分钟;再加入10μL/孔底物混合液(组蛋白多肽和[3H]-Ac-CoA终浓度分别为600nM和250nM),启动酶催化反应,在室温孵育60分钟;随后加入10μL/孔的250μM cold Ac-CoA溶液终止反应;最终转移25μL/孔反应溶液到384-wellFlashplate(Perkin Elmer,Cat.No.SMP410A001PK),室温孵育一小时。用双蒸水+0.1%Tween-20洗三次,使用Microbeta读取信号值。用GraphPad Prism 5.0软件分析数据,获得IC50值。
阳性对照药物为艾伯维制药公司研发的化合物A-485(参考文献:Abbvie Inc.,WO2016044770;Nature,2017;ACS Med.Chem.Lett.,2018,9,28–33)。
实施例229:
细胞生长抑制实验
(1)人套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株MAVER-1(来自ATCC,CRL-3008)用含10%胎牛血清(Gibco,购自Life Technologies公司,10099-141)及1%抗生素(盘尼西林和链霉素,购自Life Technologies公司,10378016)的RPMI 1640培养基(Gibco,购自LifeTechnologies公司,22400-089)于CO2细胞培养箱(37℃,5%CO2)中培养。在细胞生长抑制实验中,将指数生长期的MAVER-1细胞铺种在96孔板(购自Corning公司,3599) 中,体积为100μL/孔,细胞密度为1*10E5个细胞/孔。细胞种板后置于CO2培养箱中静置培养1小时。在含有细胞的96孔板中加入100μL不同浓度的3倍梯度稀释的化合物或 DMSO,化合物的终浓度范围为0.3~10000nM,DMSO的终浓度为0.05%,作为对照组。在化合物处理五天。使用CellTiter-Glo试剂(购自Promega公司,G7572)测定细胞存活率:将化合物处理5天的细胞按20μL/孔加入CellTiter-Glo试剂,室温孵育十分钟后,转移80μL到白色96孔板(OptiPlate-96,购自PerkinElmer公司,605299)。随后用多功能酶标仪EnVision(购自PerkinElmer公司)在400~700nm波长下检测冷发光信号。用 GraphPad Prism 5.0软件分析数据,获得IC50值。
(2)人去势抵抗前列腺癌细胞细胞株22Rv1和LNCaP clone FGC(22Rv1细胞株来自ATCC,CRL-2505,LNCaP clone FGC细胞株购自中科院细胞库)用含10%胎牛血清 (Gibco,购自Life Technologies公司,10099-141)及1%抗生素(盘尼西林和链霉素,购自LifeTechnologies公司,10378016)的RPMI 1640培养基(Gibco,购自Life Technologies公司,22400-089)于CO2细胞培养箱(37℃,5%CO2)中培养。在细胞生长抑制实验中,将指数生长期的22Rv1和LNCaP clone FGC细胞铺种在96孔板(购自 Corning公司,3599)中,体积为150μL/孔,细胞密度为1,500个细胞/孔。细胞种板后置于CO2培养箱中静置培养过夜使细胞贴壁。次日在含有细胞的96孔板中加入50μL 不同浓度的3倍梯度稀释的化合物或DMSO,化合物的终浓度范围为0.3~10000nM, DMSO的终浓度为0.05%,作为对照组。在化合物处理五天。使用CellTiter-Glo试剂(购自Promega公司,G7572)测定细胞存活率:将化合物处理5天的细胞按40μL/孔加入 CellTiter-Glo试剂,室温孵育十分钟后,转移70μL到白色96孔板(OptiPlate-96,购自 PerkinElmer公司,605299)。随后用多功能酶标仪EnVision(购自PerkinElmer公司)在 400~700nm波长下检测冷发光信号。用GraphPad Prism 5.0软件分析数据,获得IC50值。
阳性对照药物为艾伯维制药公司研发的化合物A-485(参考文献:Abbvie Inc.,WO2016044770;Nature,2017;ACS Med.Chem.Lett.,2018,9,28–33)。