CN109456898B - 一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用，属于发酵技术、酶制剂、制糖工业领域，本发明通过正交实验优化培养基成分和发酵条件确定球毛壳菌高产右旋糖酐酶的发酵方法，提高了右旋糖酐酶的产量，达到698.22U/mL，右旋糖酐酶水解高分子量葡聚糖，在酶的终浓度为2U/ml，15分钟内，对高分子量的葡聚糖(T2000)水解速率达到97.9％，球毛壳菌右旋糖酐酶对变异链球菌形成生物膜的抑制率达到71.58％，对生物膜的清除率达到49.07％，本发明方法在食品和制糖工业以及医药领域具有很好的应用前景。

Description

一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用
技术领域
本发明涉及一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用，属于发酵技术、酶制剂、工业应用领域。
背景技术
酶制剂是指从生物中提取的具有酶类性质的物质，现已应用在医药、化工、食品、酿造等各领域，应用范围非常的广泛。食品加工业与人们的生活关系紧密，酶在食品加工业中的应用越来越多，作用也越来越重要，在肉类加工、蛋白质的深度水解和作为食品添加剂中有很大体现。
右旋糖酐酶是专一性地裂解右旋糖酐分子中的α-1,6葡萄糖苷键的水解酶。从酶对葡聚糖的水解作用来看，将已知的右旋糖酐酶分为两类，内切右旋糖酐酶和外切右旋糖酐酶。内切右旋糖酐酶水解右旋糖酐中的α(1→6)键，使其分子量变小。外切右旋糖酐酶，从还原端水解右旋糖酐中的α(1→6)键，并释放出葡萄糖。
右旋糖酐酶广泛应用于食品工业，医药和糖业。在食品工业中对糖蜜和饮料加工中起着至关重要的作用，在医学上，天然葡聚糖部分水解产物被用于制备血液代用品以及预防龋齿。右旋糖酐酶将高分子量的葡聚糖水解为不同分子量的α-葡聚糖，已被用作色谱介质，血容量扩展器和药物运载工具。
但目前，右旋糖酐酶的发酵产量还比较低，不能满足工业制备的需求，导致没有大量右旋糖酐酶的商业化产品。因此，如何通过改善发酵策略来提高右旋糖酐酶的发酵产量成为亟待解决的问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用，本发明从土壤中筛选出可以产右旋糖酐酶的菌株，生产的右旋糖酐酶是具有严格底物特异性的内切酶，本发明提高了右旋糖酐酶的产量，减轻了下游分离制备右旋糖酐酶的成本，能够利用右旋糖酐酶特异性地切除葡聚糖α-1,6糖苷键残基。
本发明的第一个目的是提供一种从土壤中筛选出的球毛壳菌(Chaetomiumglobosum)，已于2018年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCC No.15867，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的第二个目的是提供所述菌株在发酵领域的应用。
本发明的第三个目的是提供一种培养所述菌株的方法，所述方法是将球毛壳菌接种于发酵培养基中，发酵培养基的成分为：碳源和氮源浓度为0.5～5％，K2HPO4和MgSO4浓度为0～4％，初始pH分别为4.5～9.0，接种量为1～6％，摇瓶装液量为20～90mL/250mL，摇床转速为140～220r/min；发酵温度为24～34℃。
进一步的，发酵培养基中，碳源包括α-乳糖，马铃薯淀粉，葡萄糖，鱼粉蛋白胨，麦芽糖，葡聚糖T20、T40、T2000，蔗糖、可溶性淀粉中的任意一种或多种。
进一步的，发酵培养基中，氮源包括尿素、硝酸钠、鱼粉蛋白胨、牛肉浸膏、大豆蛋白胨、酵母提取物、胰蛋白胨、硫酸铵、马铃薯淀粉中的任意一种或多种。
进一步的，发酵培养基的成分为：葡聚糖T20 20g/L，酵母提取物10g/L，K2HPO4和MgSO4添加量分别为2g/L和0.5g/L，初始pH为7.0，接种量为3％，装液量为50/250mL，发酵转速220r/min，培养温度为26℃。
本发明的第四个目的是提供了一种右旋糖酐酶的纯化方法，将培养球毛壳菌生产右旋糖酐酶所得的发酵液依次用硫酸铵盐析，透析除盐，凝胶柱纯化，超滤浓缩进行纯化。
本发明的第五个目的是提供上述纯化方法得到的右旋糖酐酶在水解葡聚糖中的应用。
本发明的第六个目的是提供上述球毛壳菌在制备防治龋齿的药物或口腔用品方面的应用。
本发明的第七个目的是提供上述球毛壳菌在医药领域的应用。
本发明的第八个目的是提供上述球毛壳菌在食品领域的应用。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：本发明从土壤中筛选出一株产右旋糖酐酶的菌株，经18s rDNA鉴定，此菌株为球毛壳菌Chaetomium globosum。以此菌株为发酵产酶出发菌株，发酵培养最初酶活为38.01U/mL，经发酵优化后得到右旋糖酐酶的酶活达698.22U/mL，是优化前最高水平的18.37倍。经过粗酶液的逐步纯化，纯化的右旋糖酐酶具有很高的比活力(7535.8U/mg)，最终纯化倍数为10.97，收率为18.7％。纯化的右旋糖酐酶的SDS-PAGE和活性电泳显示该酶的分子量为53kDa。
分离纯化的右旋糖酐酶是一种内切型水解酶，对α-1,6糖苷键有高度特异性水解作用，对高分子量的葡聚糖有高效的水解力，右旋糖酐酶将高分子量的葡聚糖水解为低分子量的葡聚糖，低分子量的葡聚糖在医药工业中有重要应用。
右旋糖酐酶对变异链球菌的生长有抑制作用，随着酶浓度的增加，抑制作用增强。球毛壳菌右旋糖酐酶对变异链球菌生物膜的形成和清除作用很明显，当酶浓度达到50U/mL时，抑制率达到71.58％，清除率达到49.07％。
生物材料保藏
一种球毛壳菌(Chaetomium globosum)，已于2018年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCC No.15867，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1是实施例1中球毛壳菌的菌落特征照片。
图2是实施例1中球毛壳菌的菌落的扫描电镜图。
图3是实施例3中发酵培养基的初始pH对菌体湿重和右旋糖酐酶活力的影响曲线。
图4是实施例3中发酵培养基的接种量对菌体湿重和右旋糖酐酶活力的影响曲线。
图5是实施例3中发酵培养基的装液量对菌体湿重和右旋糖酐酶活力的影响曲线。
图6是实施例3中发酵培养基的搅拌转速对菌体湿重和右旋糖酐酶活力的影响曲线。
图7是实施例3中发酵培养基的发酵温度对菌体湿重和右旋糖酐酶活力的影响曲线。
图8是实施例4中右旋糖酐酶酶解产物的TLC和HPLC图。
图9是实施例5中右旋糖酐酶的SDS-PAGE及活性电泳图。
图10是实施例6中右旋糖酐酶对变异链球菌生长的抑制效果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
生物材料样品：产右旋糖酐酶的菌株为球毛壳菌(Chaetomium globosum)，已于2018年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCC No.15867，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
右旋糖酐酶酶活力测定方法：以葡聚糖T2000为底物(底物储藏液用acetatebuffer 5.5配制，浓度为20mM)，反应混合物包括0.2mL稀释后的酶液，1.8mL acetatebuffer 5.5配制的1％的底物储藏液，50℃水浴反应10min，立即加入3mL DNS终止反应，并于沸水中反应10min，冰水冷却后在540nm处测定吸光值。
酶活单位(U)定义为：50℃以葡聚糖T2000为底物每分钟释放相当于1umol葡萄糖的还原糖的量。
蛋白质浓度的测定：使用结晶牛血清白蛋白作为蛋白质标准来确定。将酶用蒸馏水稀释至适当的浓度，并将4mL考马斯亮蓝加入到1mL稀释的酶液中使总体积为5ml。准确反应2min，在595nm处观察吸光度并计算蛋白质浓度。
葡聚糖分子量分布检测：Waters1525高效液相色谱仪(配示差检测器和Empower工作站Waters 2410)，使用Ultrahydrogel TM Linear(300mm×7.8mmid×2)，在30℃下以0.9mL/分钟的流速操作色谱仪。保留时间和Mw的校准曲线用200,30.06,13.503,0.9750,0.27kDa葡聚糖标准品(sigma，USA)和葡萄糖(180Da)制备。
实施例1：产右旋糖酐酶的菌株的筛选与鉴定
将土壤样品用生理盐水稀释至10-5涂布PDA培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g)，28℃培养5天，经过初筛得到纯菌株，将菌株用蓝色葡聚糖T2000培养基进行复筛，通过透明圈比较，得到一株产酶量较高的菌株。经过电镜观察和18S rDNA鉴定，此菌株为球毛壳菌，18S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。球毛壳菌的菌落特征照片见图1，扫描电镜图见图2。
实施例2：发酵培养基的优化
挑取球毛壳菌丝体接入到种子培养基中，使用回旋式恒温摇床进行培养，摇床转速为220r/min，培养温度28℃，培养60h，制得种子液；种子培养基成分为：葡萄糖5g/L、氯化钠0.5g/L、酵母粉5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L，灭菌后加入过滤除菌的卡那霉素至终浓度为50μg/mL。
将种子液以1％的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中，发酵温度为28℃。
用不同类型的葡聚糖(葡聚糖T20，T40，T2000)和不同物质(葡萄糖，麦芽糖，乳糖，可溶性淀粉，玉米糊精，蔗糖，鱼粉蛋白胨)作为碳源；酵母提取物，尿素，胰蛋白胨，牛肉膏，硫酸铵，马铃薯淀粉作为氮源；设置最佳碳源和最佳氮源的浓度分别为0.5％、1％、2％、3％、4％、5％。设置K2HPO4和MgSO4浓度分别为0、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.4％。对碳源浓度，氮源浓度，K2HPO4，MgSO4做正交实验，测定产酶量和细胞生长量，以确定最佳培养基。
结果表明，不同物质作为碳源，菌株有不同的右旋糖酐酶产生能力。葡聚糖用作发酵碳源时的产酶量最高。与其他碳源相比，葡聚糖T20是右旋糖酐酶形成的最佳诱导剂。发酵培养基的正交试验结果表明：葡聚糖T20，酵母提取物，K2HPO4和MgSO4的最佳浓度分别为20g/L，10g/L，2g/L和0.5g/L。在最佳条件下进行三个平行实验，酶活达到329.8920U/mL(相对标准偏差为3％)。
实施例3：发酵产酶条件的优化
挑取球毛壳菌丝体接入到种子培养基中，使用回旋式恒温摇床进行培养，摇床转速为220r/min，培养温度28℃，培养60h，制得种子液；种子培养基成分为：葡萄糖5g/L、氯化钠0.5g/L、酵母粉5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L，灭菌后加入过滤除菌的卡那霉素至终浓度为50μg/mL。
将种子液以1％的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中，发酵温度为28℃，以优化过的最优培养基为基础，对产酶发酵条件进行依次优化，初始pH分别设置为4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、9.0。接种量分别设置为1％、2％、3％、4％、5％、6％。装液量分别设置为20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL。搅拌转速分别设置140rpm、160rpm、180rpm、200rpm、220rpm。发酵温度分别设置为24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃。发酵时间为8d。测定菌体湿重、右旋糖酐酶活力等。
结果见图3-7，经过发酵条件的依次优化，发酵的最佳条件为：发酵初始pH值为7.0，接种量为3％，体积为50mL/250mL，转速为200r/min，培养温度为26℃。在最佳条件下进行三个平行实验，酶活达到698.22U/mL(相对标准偏差为3％)。
右旋糖酐酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
对比例1
挑取球毛壳菌丝体接入到种子培养基中，使用回旋式恒温摇床进行培养，摇床转速为220r/min，培养温度28℃，培养60h，制得种子液；种子培养基成分为：葡萄糖5g/L、氯化钠0.5g/L、酵母粉5g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.2g/L，灭菌后加入过滤除菌的卡那霉素至终浓度为50μg/mL。
发酵培养基的成分为：葡聚糖T20 25g/L，酵母提取物10g/L，磷酸氢二钾和硫酸镁添加量分别为2.5g/L和2.5g/L。
将种子液以1％的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中，发酵转速为220r/min，发酵温度为28℃，初始pH自然。发酵培养8天，得到酶活为38.01U/mL。
实施例4：右旋糖酐酶的酶解产物分析和对葡聚糖的水解作用
用0.2M乙酸缓冲液(pH 5.5)制备葡聚糖T2000(3％)，并在50℃温育。加入球毛壳菌右旋糖酐酶至终浓度为5U/mL。将反应液在50℃下机械搅拌90分钟，分别在30min,60min,和90min时取样，将样品在沸水浴中加热30分钟以终止反应，然后用薄层色谱(TLC)分析，使用以7:5:4:2(v/v/v/v)正丁醇：异丙醇：乙酸：水溶剂体系展开的硅胶板。葡萄糖，异麦芽糖和异麦芽三糖作标准品，热灭活的右旋糖酐酶的混合物作为对照样品。通过含二苯胺(4g)，苯胺(4mL)和85％磷酸(20mL)的200mL丙酮溶液喷雾在TLC板上使碳水化合物显色，然后在95℃下加热10分钟。此外，将反应混合物作为样品处理并通过HPLC-MS(Waters，USA)分析，使用WATERS ACQUITY UPLC色谱仪，BEH AMIDE(2.1×100mm 1.7um)分析柱，柱温45℃下以0.3mL/min的流速，进样量2μL操作，连接WATERS MALDI SYNAPT Q-TOF MS质谱仪，以ESI-方式进行质谱测定。
考察右旋糖酐酶对高分子量的葡聚糖的水解能力，葡聚糖T2000(3％)由0.2M乙酸盐缓冲液(pH 5.5)配制，50℃孵育10min，加入球毛壳菌右旋糖酐酶，终浓度为2U/mL，均匀搅拌。反应混合物的样品以1至120分钟的时间间隔获得，煮沸30分钟以停止反应，反应溶液中的杂质用滤纸重复滤出，反应上清液加热煮沸15分钟，并再次过滤掉杂质。将稀释的样品通过混合纤维素酯膜(具有0.22μm孔径和25mm直径的滤膜)过滤，并通过HPLC(Waters1525，Milford，USA)进行分析，使用Ultrahydrogel TM Linear(300mm×7.8mmid×2)，在30℃下以0.9mL/分钟的流速操作色谱仪，然后连接到示差检测器和Empower工作站(Waters2410)。
考察不同酶浓度对高分子量的葡聚糖的水解能力，用同样浓度的底物使酶的终浓度分别达到1U/ml、3U/ml、5U/ml、7U/ml，于50℃反应15min，之后操作如上所述；考察右旋糖酐酶对不同分子量葡聚糖的水解能力，用0.2M乙酸盐缓冲液(pH 5.5)分别配制3％葡聚糖T20、T40、T70、T2000，50℃保温10min，加入右旋糖酐酶使其终浓度为1U/mL，于50℃反应15min，之后操作如上所述。保留时间和Mw的校准曲线用200,30.06,13.503,0.9750,0.27kDa葡聚糖标准品(sigma，USA)和葡萄糖(180Da)制备。
右旋糖酐酶酶解产物的TLC和HPLC结果见图8，结果显示，来自球毛壳菌的右旋糖酐酶催化葡聚糖T2000水解的最终产物是异麦芽糖，异麦芽三糖和一些低聚异麦芽糖，不产生葡萄糖。表明球毛壳右旋糖酐酶是一种典型的内切葡聚糖酶。右旋糖酐酶水解葡聚糖T2000的结果如表1显示，在15分钟内葡聚糖分子量降至41000Da。反应15分钟的葡聚糖分子量比之后时间段下降更快，表明酶对分子量更高的α-葡聚糖有更高的亲和力。水解反应120分钟后得到的葡聚糖的Mw为2506Da。表2结果表明不同酶浓度对α-葡聚糖有不同的水解力，随着酶浓度的增大，葡聚糖降解速率增大。以上结果综合表明右旋糖酐酶对高分子量葡聚糖具有高的水解速率，且酶浓度越高，水解速率越快。
表1不同反应时间右旋糖酐酶的酶解效果
Figure BDA0001724211770000061
Figure BDA0001724211770000071
表2不同右旋糖酐酶浓度对葡聚糖的酶解效果
Figure BDA0001724211770000072
本发明通过考察右旋糖酐酶水解葡聚糖T2000，得到的水解物中不含有葡萄糖，且葡聚糖的分子量随反应时间和酶浓度的增大而变小，能有效地降解高分子量葡聚糖，在工业应用中有很大潜力。
实施例5：右旋糖苷酶的分离纯化方法
室温下添加50％至70％饱和度的固体硫酸铵于磁力搅拌器上不断搅拌来浓缩粗酶提取物，10,000×g离心10min收集沉淀蛋白。将沉淀蛋白置于透析袋内(最大透过8kD)于0.2M乙酸盐缓冲液(pH5.5)中，4℃透析过夜。
透析浓缩的酶样品用0.22μm孔径的膜滤器过滤后低温下上样到用预冷的0.2M乙酸盐缓冲液(pH5.5)预平衡的Sephadex G75柱(1.5cm i.d.×60cm)上，流速为12mL/h。以每管2mL收集级分进行峰收集。在280nm处测量每个级分的吸光度用以在色谱分离期间监测蛋白质，确定每个部分的蛋白质浓度。收集具有高右旋糖酐酶活性的级分测定右旋糖酐酶活性和蛋白质浓度。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在还原条件下测定酶的纯度及其分子量，使用12％聚丙烯酰胺凝胶进行SDS-PAGE。电泳后，将凝胶用考马斯蓝G-250染色。右旋糖酐酶的SDS-PAGE及活性电泳图见图9。
经测定，右旋糖酐酶的比酶活达到7535.8U/mg，最终纯化倍数为10.97，收率为18.7％，分子量为53kDa。
实施例6：右旋糖酐酶在防治龋齿方面的研究
(1)将过滤除菌的右旋糖酐酶用含1％蔗糖的脑心浸液肉汤培养基稀释，使其终浓度分别为0、10、20、30、40、50、60、70U/mL。取4.5mL酶液分别加入500uL变异链球菌的菌悬液(OD600nm＝1.0)于37℃，220r/min培养24h后测定600nm处的吸光值，未接菌液的培养基为对照。
(2)在96深孔细胞培养板中分别加入含不同浓度右旋糖酐酶的1％蔗糖脑心浸液肉汤培养基180uL，接种上述菌悬液20uL，对照组不含酶液。37℃、10％CO2培养箱培养24h后用生理盐水清洗孔板去除未附着的菌体。晾干后用1％的结晶紫染色10min后用蒸馏水洗去染色液，加入200uL无水乙醇于150r/min震荡40min后在酶标仪上测600nm处吸光值。生物膜形成抑制率＝(1-实验组/对照组)×100％。
(3)在96深孔细胞培养板中分别加入含1％蔗糖脑心浸液肉汤培养基180uL，接种上述菌悬液20uL，37℃、10％CO2培养箱培养24h后移去菌液，加入400μL无菌水轻轻洗涤数次，加入以含1％蔗糖培养基稀释至不同浓度的右旋糖酐酶200μL，37℃、10％CO2培养箱培养24h后按照上述方法测600nm处吸光值。生物膜清除率＝(1-实验组/对照组)×100％。
从图10可以看出，来自球毛壳菌的右旋糖酐酶对变异链球菌的生长有明显的抑制作用，随着右旋糖酐酶浓度的增大，对变异链球菌生长的抑制作用增强，当右旋糖酐酶的浓度达到50U/mL时，对变异链球菌生物膜形成的抑制率达到71.58％，对变异链球菌形成的生物膜的清除率达到49.07％。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 江南大学
<120> 一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1238
<212> DNA
<213> 球毛壳菌（Chaetomium globosum）
<400> 1
ctcattaaat cagttatcgt ttatttgata gtaccttact acatggataa ccgtggtaat 60
tctagagcta atacatgcta aaaatcccga cttcggaagg gatgtattta ttagattaaa 120
aaccaatgcc cttcggggct ctctggtgat tcataataac ttctcgaatc gcacggcctt 180
gcgccggcga tggttcattc aaatttctgc cctatcaact ttcgacggct gggtcttggc 240
cagccgtggt gacaacgggt aacggagggt tagggctcga ccccggagaa ggagcctgag 300
aaacggctac tacatccaag gaaggcagca ggcgcgcaaa ttacccaatc ccgacacggg 360
gaggtagtga caataaatac tgatacaggg ctctttcggg tcttgtaatt ggaatgagta 420
caatttaaat cccttaacga ggaacaattg gagggcaagt ctggtgccag cagccgcggt 480
aattccagct ccaatagcgt atattaaagt tgttgaggtt aaaaagctcg tagttgaacc 540
ttgggcctag ccggccggtc cgcctcaccg cgtgcactgg ctcggctggg tctttccttc 600
tggagaaccg catgcccttc actgggtgtg ccggggaacc aggactttta ctctgaacaa 660
attagatcgc ttaaagaagg cctatgctcg aatacattag catggaataa tagaatagga 720
cgtgtggttc tattttgttg gtttctagga ccgccgtaat gattaatagg gacagtcggg 780
ggcatcagta ttcaattgtc agaggtgaaa ttcttggatt tattgaagac taactactgc 840
gaaagcattt gccaaggatg ttttcattaa tcaggaacga aagttagggg atcgaagacg 900
atcagatacc gtcgtagtct taaccataaa ctatgccgat tagggatcgg acggcgttat 960
tttttgaccc gttcggcacc ttacgataaa tcaaaatgtt tgggctcctg ggggagtatg 1020
gtcgcaaggc tgaaacttaa agaaattgac ggaagggcac caccaggggt ggagcctgcg 1080
gcttaatttg actcaacacg gggaaactca ccaggtccag acacgatgag gattgacaga 1140
ttgagagctc tttcttgatt tcgtgggtgg tggtgcatgg ccgttcttag ttggtggagt 1200
gatttgtctg cttaattgcg ataacgaacg agacctta 1238
<210> 2
<211> 1764
<212> DNA
<213> 球毛壳菌（Chaetomium globosum）
<400> 2
atgtatgcat gttcagccgg cggttggact tgcattccgc cacgcaaccg caaccacacg 60
gtgtgcaaca accagctgtg cacctggtgg cacgacaacg gcgaaatcaa cacagacagc 120
atggtgcagc tgggcaacgt tcgccagtca cgcaagtact tggtgcaagt gagcattgcc 180
ggcgctgata acttctacga ctcgttcgcc tacgagtcga tcccccgcaa cggccgtggc 240
cgcatctact cgccctggga caccgctgac agcaacaccc tggcgtcaga cgtggatgat 300
ggcatcacca ttgaacccag cgtcggcatc aatatggcct ggtcccagtt tgagtactcc 360
aagggcgttg acgtcaaaat ccgcacacgc gacggctcat ccctccctgg cccgtctggg 420
gtcaagatcc gtccgacggc catcagctac gacattcgct catctggcga cggcggtatc 480
attatccacg tgccgcacga cccgaacggc cgtaggttct cggtcgagtt cgacaatgat 540
ttgtacatat accgctccga cggcttgcac tacgtccact cgggcggctc tgtcgtgggc 600
gtggaaccga aaaatgccct gcttatcttc gcaagcccct tcttgcctgc cgacttggtc 660
ccgcgcatcg acgcgcctga caccaaagtt atgactcctg ggccgatcaa ccaaggtgac 720
tggggctcgt ccggtatctt atacttccct cctggggtgt attggatgaa ctccaaccgg 780
cagggccagg cgcctaagat tggcgagaac cacatccggc ttcaccccaa cacgtactgg 840
gtgtacttgg cgcctggtgc gtacgtcaag ggcgcgatcg agtactcgac caagtcgaac 900
ttttacgcaa ccggccacgg cgttttgtcc ggcgagcact acgtctacca ggccaacccg 960
gcgacctact accaggcctt gaagagcgac gccaccagct tgcgcatgtg ggggcacaac 1020
agcctcggtg gtggccagat gtggttctgc caaggcccga ccatcaacgc gccgccgttc 1080
aacaccatgg acttccacgg aagctccgac atcacgacac gcatctcgga ctacaagcaa 1140
gtgggcgcct ttttcttcca gactgacggg cctcaaatgt atcccaacag ccaggtccac 1200
gacgtcttct accacgtcaa tgacgacgcc atcaagacct actactcggg cgtgacggtg 1260
acgcgggcga ccatctggaa gggccacaac gaccccatcg tccagatggg gtgggatacg 1320
cgcgatgttt cgggcgtcac tttgcaggac atacacgtca ttcacacccg ctacatcaag 1380
tccgagacat atgtgccgtc ggccatcatc ggggcgtcgc cgttctacat gtccggacgc 1440
tcagtcgacc cgtccaagtc catcagcatg accatctccg gcctggtgtg cgaggggctg 1500
tgtccggcgc tgattcgcat cacgccgctg caaaactacc gcgacttccg catcgagaac 1560
gtcgcgttcc ccgacgggct gcagaccaac agcatcggca cgggcagaag tattgtccct 1620
gcctcctccg gtctcaggtt tggcgtgacc atctcaaact ggactgtggg cggccagcgg 1680
gtgacgatga gtaacttcca gtccgattcg cttgggcagc ttgatatcga ccattcttat 1740
tgggggcagt gggtcattcg ttaa 1764

Claims (8)

1.一种球毛壳菌(Chaetomium globosum)，其特征在于：菌株已于2018年6月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCC No.15867，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的菌株在水解葡聚糖中不以疾病的诊断和治疗为目的的应用。
3.一种培养权利要求1所述球毛壳菌的方法，其特征在于：将所述球毛壳菌接种于发酵培养基中，发酵培养基的成分为：碳源和氮源浓度分别为0.5～5％，K2HPO4和MgSO4浓度分别为0～4％，初始pH为4.5～9.0，接种量为1～6％，摇瓶装液量为20～90mL/250mL，摇床转速为140～220r/min；发酵温度为24～34℃。
4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于：所述碳源为α-乳糖，玉米糊精，葡萄糖，鱼粉蛋白胨，麦芽糖，葡聚糖T20，葡聚糖T40，葡聚糖T2000，蔗糖、可溶性淀粉中的任意一种或多种。
5.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于：所述氮源为尿素、牛肉膏、酵母提取物、胰蛋白胨、硫酸铵、马铃薯淀粉中的任意一种或多种。
6.根据权利要求3-5任一项所述的培养方法，其特征在于：发酵培养基的成分为：葡聚糖T20 20g/L，酵母提取物10g/L，K2HPO4和MgSO4添加量分别为2g/L和0.5g/L，初始pH为7.0，接种量为3％，装液量为50/250mL，发酵转速220r/min，培养温度为26℃。
7.权利要求1所述球毛壳菌在制备防治龋齿的药物或口腔用品方面的应用。
8.权利要求1所述球毛壳菌在食品领域中的应用。
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