CN112195124B - 来自海洋的假节杆菌rn-22及其产右旋糖酐酶的方法 - Google Patents

来自海洋的假节杆菌rn-22及其产右旋糖酐酶的方法 Download PDF

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Abstract

本发明是一种来自海洋的假节杆菌(Pseudarthrobacter sp.)RN‑22，其保藏号为CGMCC No.19740。本发明还公开了一种利用假节杆菌RN‑22产右旋糖酐酶的方法。假节杆菌RN‑22为革兰氏阴性短杆菌；该菌株生长温度范围为15‑45℃，最适生长温度为30℃；生长的pH适宜范围为6‑10，最适生长pH为7.0；在NaCl浓度为0％‑5％时可以生长，最适生长NaCl浓度为0％‑1％。假节杆菌RN‑22所产右旋糖酐酶，适合作用温度为60℃，产生的右旋糖酐酶的热稳定性好，在40℃下保温5h后酶活仍能保持80％以上；在pH 5.5～8.0的范围内稳定。本发明方法所产右旋糖酐酶在制糖行业、食品行业、医药行业、健康行业、日用品行业、化工行业等以上并不限于以上行业的应用。

Description

来自海洋的假节杆菌RN-22及其产右旋糖酐酶的方法
技术领域
本发明涉及一种微生物，特别是一种分离自中国山东省日照市海域海洋细菌(Pseudarthrobacter sp.)RN-22，菌种保藏号为CGMCC No.19740；本发明还涉及该菌株产右旋糖酐酶的方法。
背景技术
右旋糖酐(Dextran)是一种特异性结构聚D-葡萄糖，以葡萄糖α-1,6糖苷键连接成主链而成。右旋糖酐酶(EC3.2.1.11)，又叫α-葡聚糖酶，是一种专一性水解右旋糖酐中α-1,6糖酐键的水解酶。右旋糖酐酶目前已被广泛研究并应用于医学、工业、食品等多个领域。在医学研究的领域中，右旋糖酐酶能水解由变异链球菌，乳杆菌等细菌产生的水溶性胞外多糖中的α-1，6糖酐键，使细菌表面粘附力下降，从而达到降解牙菌斑预防龋齿的目的；在制糖工业中，右旋糖酐酶能够降低多糖的相对分子质量，从而降低糖的粘度；在食品工业中，右旋糖酐酶水解高分子右旋糖酐，制备功能性低聚异麦芽糖，生产益生元；经不同程度水解的右旋糖酐可用作食品添加剂，提高食品的柔软度。
发明内容
本发明所要解决的问题是针对现有技术的不足，提供一种新的能产右旋糖酐酶的来自海洋细菌假节杆菌(Pseudarthrobacter sp.)RN-22。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述来自海洋细菌的假节杆菌RN-22的产右旋糖酐酶的方法。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明公开的海洋菌株假节杆菌(Pseudarthrobacter sp.)RN-22是在中国山东省日照市海域的海泥中分离到的，其菌种保藏号为CGMCC No.19740。该菌株已于2020年04月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，联系电话：010-64807355。
本发明所述的来自海洋的假节杆菌RN-22的筛选方法是：将采集的样品用无菌水进行10倍梯度稀释，再涂布接种到初筛培养基，30℃培养48h-72h后，菌落长出观察菌落周围是否出现透明圈；挑取有透明圈的单菌落菌株接入产酶培养基，30℃、180r/min培养2d，10000r/min离心2min取上清液测定酶活力大小；选出透明圈较大和酶活力较高的菌株假节杆菌RN-22；
初筛培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，蓝色葡聚糖2000 0.2％，琼脂2％，陈海水配制，pH8.0。
产酶培养基：蛋白胨0.5％，麸皮0.5％，右旋糖酐T20 1％，陈海水，pH 8.0。
本发明还公开了一种如以上技术方案所述的假节杆菌RN-22产右旋糖酐酶的方法：将假节杆菌RN-22接种到2216E培养基中，转数180rpm，装液量20％，30℃培养12h得到种子液；将种子液以3％的接种量接种于产酶培养基中，180rpm，30℃培养48h，10000rpm离心2min，上清液为右旋糖酐酶粗酶液；
所述的产酶培养基的组成为：胰蛋白胨0.5％，麸皮0.5％，1％右旋糖酐T20，陈海水，pH 8.0；
2216E培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，琼脂2％，陈海水配制，pH8.0。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明假节杆菌RN-22是一种可以产右旋糖酐酶的新的菌株。假节杆菌RN-22为革兰氏阴性短杆菌；该菌株生长温度范围为15-45℃，最适生长温度为30℃；生长的pH适宜范围为6-10，最适生长pH为7.0；在NaCl浓度为0％-5％时可以生长，最适生长NaCl浓度为0％-1％。具有非常好的适应性。
2、假节杆菌RN-22所产右旋糖酐酶，适合作用温度为60℃，在30℃～70℃温度范围时有催化活力,产生的右旋糖酐酶的热稳定性好，在40℃下保温5h后酶活仍能保持80％以上；该酶在pH 5.5～8.0的范围内稳定。
3、本发明方法所产右旋糖酐酶在制糖行业、食品行业、医药行业、健康行业、日用品行业、化工行业等以上并不限于以上行业的应用。
附图说明
图1为菌株RN-22扫描电镜照片形态(X 6.00k)图；
图2为菌株RN-22在初筛平板上形成的透明圈；
图3为菌株RN-22系统进化树；
图4为温度对菌株RN-22生长的影响；
图5为pH对菌株RN-22生长的影响；
图6为NaCl浓度对菌株RN-22生长的影响；
图7为碳源对产酶的影响；
图8为氮源对产酶的影响；
图9为温度对产酶的影响；
图10为培养基pH对产酶的影响；
图11为发酵时间对产酶的影响；
图12为诱导剂对产酶的影响；
图13为温度对酶作用的影响；
图14为酶的热稳定性；
图15为pH对酶作用的影响■乙酸乙酸钠缓冲液，●磷酸钠缓冲液，▲Tris-HCl缓冲液；
图16为酶pH稳定性■乙酸乙酸钠缓冲液，●磷酸钠缓冲液，▲Tris-HCl缓冲液；
图17为菌株RN-22右旋糖酐酶的水解产物高效液相：
本发明假节杆菌Pseudarthrobacter sp.RN-22，其菌种保藏号：CGMCC No.19740。该已于2020年04月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCCNO.19740，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，联系电话：010-64807355。
具体实施方式
以下参照附图，进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步的理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1，来自海洋的假节杆菌(Pseudarthrobacter sp.)RN-22，保藏号为CGMCCNo.19740。菌株假节杆菌RN-22为革兰氏阴性短杆菌；在含有蓝色葡聚糖的固体培养基上的菌落特征：表面光滑，湿润、边缘整齐、白色不透明菌落；该菌株氧化酶反应、鸟氨酸、赖氨酸实验呈阳性。该菌株生长温度范围为15-45℃，最适生长温度为30℃；生长的pH适宜范围为6-10，最适生长pH为7.0；在NaCl浓度为0％-5％时可以生长，最适生长NaCl浓度为0％-1％。
1、本发明菌株的筛选方法
1.1本发明中涉及的培养基：
2216E培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，琼脂2％，陈海水配制，pH8.0。
初筛培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，蓝色葡聚糖2000 0.2％，琼脂2％，陈海水配制，pH8.0。
产酶培养基：蛋白胨0.5％，麸皮0.5％，右旋糖酐T20 1％，陈海水，
pH 8.0。
种子培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，陈海水配制，pH7.0。微量矿物盐溶液(每升)：
CuSO4·5H2O,0.01g；ZnSO4·7H2O,0.1g；CoCl2·6H2O,0.005g；MnCl2·4H2O,0.2g；Na2MoO4·2H2O,0.1g；KBr,0.05g；KI,0.05g；H3B03,0.1g；Na F,0.05g；LiCl,0.05g；Al2(SO4)3,0.05g；NiCl2·6H2O,0.01g；VoSO4·2H2O,0.005g；H2WO4·2H2O,0.002g；Na2SeO4,0.005g；SrCl·6H2O,0.005g；BaCl2,0.005g。
1.2菌株的筛选方法：
将采集的样品用无菌水进行10倍梯度稀释，再涂布接种到初筛培养基，30℃培养48h-72h后，菌落长出观察菌落周围是否出现透明圈。挑取有透明圈的单菌落菌株接入产酶培养基，30℃、180r/min培养2d，10000r/min离心2min取上清液测定酶活力大小。选出透明圈较大和酶活力较高的菌株。
2、本发明菌株RN-22的形态特征与生理生化特征。
2.1形态特征：
菌株RN-22为革兰氏阴性杆菌(见图1)，无芽孢，无鞭毛，在2216E固体培养基中培养48h后，菌落呈边缘整齐光滑、白色湿润。在含有蓝色葡聚糖的固体培养基中，能产生透明圈(见图2)。
2.2生理生化特征：
该菌株氧化酶反应、鸟氨酸、赖氨酸实验呈阳性。部分生理生化结果见表1。
表1菌株的生理生化特征
Figure BDA0002724919860000061
Figure BDA0002724919860000071
注：+：阳性；-：阴性
2.3菌株RN-22的分子生物学鉴定
用TIANamp Bacteria DNAKit细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株RN-22的基因组，选用扩增原核微生物16S rDNA序列的通用引物(27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGCTT-3’)。PCR反应体系和程序：PCR反应体系(50μL)：5xQ5Reaction Buffer10μL，10mMdNTPS 1μL，10μM Forward Primer 2.5μL，10μM ReverePrimer 2.5μL，模板DNA 2μL,Q5 High-Fidelity DNA polymerase 0.5μL，5xQ5 High GCEnhancer(optional)10μL,Nuclease-Free Water补齐到50μL。反应程序：98℃变性30S；98℃变性10S，55℃退火30S，72℃延伸30S，30个循环；72℃2min；4℃∞，将PCR产物送至上海生工测序，获得碱基片段序列。将菌株RN-22的16S rDNA基因序列提交NCBI数据库，通过16SrDNA序列同源性比较，可以初步确定改菌株为假节杆菌(Pseudarthrobacter)。将亲缘关系较近的菌株16S rDNA运用MEGA软件进行多重比较，用中邻接法(Neibor-joing method)建系统进化树，从进化树表明菌株RN-22与Pseudarthrobacter亲缘关系最近。参见图3。
3、本发明菌株RN-22的生长特性
本发明提供的菌株RN-22，对其生长特性进行了细致的研究，获得了该菌株的生长条件。
3.1种子液的制备：将菌株RN-22斜面种子接种到2216E培养基中，30℃，180rpm，装液量20％，培养12h。
3.2 NaCl对菌株RN-22生长的影响：
按照3.1方法制备种子液，在2216E培养基(将陈海水改用微量矿物盐溶液代替)中加入NaCl，使之为0％-10％的NaCl，在30℃培养12h，测定细胞浓度，生长的NaCl浓度为0％-5％，最适生长NaCl浓度为0-1％，见图4。
3.3 pH对菌株RN-22生长的影响：
在2216E培养基(将陈海水改用微量矿物盐溶液代替)加入不同pH的缓冲液，使培养基pH分别为4.0-10.0之间，30℃培养12h，测定细胞浓度，生长pH范围为6.0-10.0，最适生长pH为7.0，见图5。
3.4温度对菌株RN-22生长的影响：
将种子液以3％接种量于2216E培养基中，pH 7.0，转数180rpm，装液量20％，分别在不同温度下培养12h，选择在600nm波长下测定OD值，该菌株温度范围为15-45℃，最适生长温度为30℃，见图6。
实施例2，一种如实施例1所述来自海洋假节杆菌RN-22产右旋糖酐酶的方法，其步骤如下：将假节杆菌RN-22接种到2216E培养基中，转速180rpm，装液量20％，30℃培养12h得到种子液；将种子液以3％的接种量接种于产酶培养基中，180rpm，30℃培养48h，10000rpm离心2min，取上清液得到粗酶液。
4、菌株RN-22产右旋糖酐酶的方法
4.1碳氮源对菌株RN-22产酶的影响：
碳源：0.5％的碳源(麸皮、豌豆粉、蔗糖、葡萄糖、马铃薯、木薯、可溶性淀粉、乳糖、糊精、麦芽糖)和0.5％的氮源(鱼粉蛋白胨、花生粕、尿素、干酪素、豆粕、氯化铵、硝酸钠、硫酸铵)用于替换发酵培养基中的酵母粉和蛋白胨，接种后在30℃摇床培养48h后分别测酶液的活力。结果发现，麸皮作为培养基碳源可促进产右旋糖酐酶，而胰蛋白胨作为氮源时对产酶的促进也较为可观，见图7-8，选用0.5％麸皮和0.5％胰蛋白胨作为产酶培养基的碳氮源。
4.2发酵温度对菌株RN-22产酶影响：
将接种培养12h的种子培养基以3％接种量接种至发酵培养基，于15-45℃培养48h后分别测酶液的活力，结果见图9。菌株RN-22最佳产酶温度为30℃，低于20℃或高于40℃，产酶量均有大幅度下降。
4.3培养基初始pH对菌株RN-22产酶的影响：
以3％接种量接种至不同初始pH的发酵培养基，于30℃培养48h后分别测酶液的活力。初始pH调节范围为5-10。培养基初始pH对产酶的研究结果表明，培养48h，该菌株产酶的最适初始pH为7.0。随着pH的升高和下降，菌株的产酶均受到较大影响，当pH低于6.0时，由于菌株RN-22几乎不生长，其发酵液测不到明显酶活力，见图10。
4.4发酵时间对菌株RN-22产酶的影响：
将菌株RN-22发酵24h且每隔6h取样测酶活力，结果表明48h为产酶高峰，在48h之前菌株随着发酵时间延长产酶逐渐升高，而继续监控酶活力发现没有太大的变化趋势，结果如图11所示。
4.5不同诱导剂浓度对产酶的影响：
将右旋糖酐T20作为产酶诱导剂，将不同浓度的右旋糖酐T20加入发酵培养基中，接种培养后分别测酶液的活力。随着诱导剂浓度增大产酶逐渐增加，到达最佳浓度后缓慢下降。如图12所示，右旋糖酐T20含量为1％时为最佳产右旋糖酐酶诱导剂浓度，右旋糖酐T20含量超过1％后酶活力下降，不添加右旋糖酐检测不到酶活力。
5菌株RN-22右旋糖酐酶的性质
5.1粗酶液的制备：
将菌株RN-22接种到2216E培养基中，转数180rpm，装液量20％，培养12h，得种子液以3％的接种量至产酶培养基中，180rpm，30℃培养48h后，将酶液10000rpm离心2min，取上清液，4℃保藏备用。
5.2右旋糖酐酶活的测定：
①右旋糖酐酶活测定方法：将50μL酶液加入到150μL 3％的右旋糖酐T20的Tris-HCl缓冲液(0.1M，pH 8.0)中，在40℃水浴中反应15min，加入200μL DNS，沸水浴中煮沸5min，终止反应并显色，加入3mL去离子水震荡混匀，取200μL与96孔酶标板上与540nm下进行吸光值测定。
②酶活力单位定义(U/mL)：在一定温度和pH下，每分钟催化产1μmoL还原糖的酶量为一个活力单位
5.3酶作用温度对酶活性的影响：
将右旋糖酐酶置于不同温度下与底物发生反应，测定酶活力，结果见图13，酶的最适作用温度为60℃，在30℃-65℃温度范围时有较高的催化活力。
5.4酶的热稳定性：
取适量酶液置于不同温度(40℃、50℃、55℃)下保温5h，每隔1h取一组样品，迅速冷却置于4℃冰箱保存，待保温结束后统一标准条件下测定残余酶活力，以未处理酶液的酶活力设为100％，结果见图14，在40℃下保温5h后仍具有80％以上的酶活力。
5.5酶的作用pH对酶活性的影响：
将酶液与在不同pH的3％的右旋糖酐溶液中在60℃下进行酶活力的测定，不同pH的缓冲液为：50mM乙酸钠缓冲液(pH 4.0-6.0)、50mM磷酸钠缓冲液(pH 6.0-7.5)和50mMTris-HCl缓冲液(pH7.5-9.0)。结果见图15，该酶液的最适作用pH为7.5。
5.6酶的pH稳定性：
将适当酶液与不同pH的缓冲液(按照5.4中的缓冲液)混合，在25℃水浴锅中保温1h取出测酶活，将未处理酶液的酶活设为100％。结果见图16，结果表明在30℃保温1h后，右旋糖酐的酶活力在pH 5.5-9.0范围内稳定，残余酶活力保持在60％以上。
5.7金属离子、化学试剂对酶的作用：
金属离子与酶液混合，使其终浓度达到1.0mM、5mM、10mM，然后在酶最适温度60℃测定酶活力，并以不含化学试剂的酶液对照计算相对酶活力，结果见表2，Mg2+、Na+、、NH4 +、Ba2+、Si2+、K+可以提高酶的活性，Cd2+、Ni2+、降低了酶活性，低浓度的Co2+对酶活力有促进作用，但是5mM和10mM的浓度对酶活有抑制。加入Cu2+、Zn2+、Fe3+使酶活性完全丧失。其他金属离子在以上浓度未见对酶活力影响较小；化学试剂对酶有一定的影响，普遍具有抑制作用，结果表3所示。
表2金属离子对右旋糖酐酶活力的影响
Figure BDA0002724919860000131
Figure BDA0002724919860000141
表3化学试剂对右旋糖酐酶活性的影响
Figure BDA0002724919860000142
5.8菌株RN-22右旋糖酐酶底物特异性：
将酶液作用于多种不同底物(右旋糖酐T20、右旋糖酐T40、右旋糖酐T70、右旋糖酐T500、右旋糖酐T2000、可溶性淀粉、壳聚糖、普鲁兰多糖)，在标准条件下测量酶活力，结果如表4，菌株RN-22右旋糖酐酶能特异催化有α-1,6糖酐键组成的化合物-不同分子量的右旋糖酐，对有α-1，4和α-1，6糖酐键组成的可溶性淀粉接近8％的催化活力，不能水解由α-1,4糖苷键和β-1,4糖苷键组成的壳聚糖和普鲁兰，结果表明该酶只能特异水解α-1,6糖苷键。
表4菌株RN-22右旋糖酐酶底物特异性
Figure BDA0002724919860000151
6、菌株RN-22右旋糖酐酶的应用
6.1菌株RN-22右旋糖酐酶的水解产物：
本发明方法所产右旋糖酐酶在制糖工业的作用。将右旋糖酐酶水解不同时间的产物进行高效液相分析(见图17)。
实施例2所述的方法产右旋糖酐酶，该右旋糖酐酶具有以下特征：右旋糖酐酶的适合作用温度为60℃，在30℃～70℃温度范围时有催化活力,产生的右旋糖酐酶的热稳定性好，在40℃下保温5h后酶活仍能保持80％以上；该酶在pH 5.5～8.0的范围内稳定。
菌株RN-22右旋糖酐酶的应用,右旋糖酐酶对右旋糖酐酶的水解获得产物：将右旋糖酐酶水解不同时间的产物进行高效液相分析，获得寡糖含量。本发明方法所产右旋糖酐酶在制糖行业、食品行业、医药行业、健康行业、日用品行业、化工行业等以上并不限于以上行业的应用。

Claims (2)

1.一种来自海洋的假节杆菌(Pseudarthrobacter sp.)RN-22，其特征在于：菌株的保藏号为CGMCC No.19740。
2.一种如权利要求1所述的假节杆菌RN-22产右旋糖酐酶的方法，其特征在于：将假节杆菌RN-22接种到2216E培养基中，转数180rpm，装液量20％，30℃培养12h得到种子液；将种子液以3％的接种量接种于产酶培养基中，180rpm，30℃培养48h，10000rpm离心2min，上清液为右旋糖酐酶粗酶液；
所述的产酶培养基的组成为：胰蛋白胨0.5％，麸皮0.5％，1％右旋糖酐T20，陈海水，pH8.0；
2216E培养基：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，琼脂2％，陈海水配制，pH8.0。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962486A (zh) * 2015-07-23 2015-10-07 淮海工学院 来自海洋的亚罗酵母fa2-3及其所产低温淀粉酶与产酶方法
CN109679974A (zh) * 2019-02-03 2019-04-26 淮海工学院 海洋微生物节杆菌yj34产右旋糖酐酶基因及其重组工程菌
CN110358711A (zh) * 2019-07-29 2019-10-22 甘肃省农业科学院土壤肥料与节水农业研究所 一种假节杆菌及应用、及其生物有机肥及应用
KR102097042B1 (ko) * 2019-02-15 2020-04-06 이문현 식물 생장 촉진 및 식물병 방제 활성을 갖는 슈다스로박터 에퀴 ang28 균주 및 이의 용도

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104962486A (zh) * 2015-07-23 2015-10-07 淮海工学院 来自海洋的亚罗酵母fa2-3及其所产低温淀粉酶与产酶方法
CN109679974A (zh) * 2019-02-03 2019-04-26 淮海工学院 海洋微生物节杆菌yj34产右旋糖酐酶基因及其重组工程菌
KR102097042B1 (ko) * 2019-02-15 2020-04-06 이문현 식물 생장 촉진 및 식물병 방제 활성을 갖는 슈다스로박터 에퀴 ang28 균주 및 이의 용도
CN110358711A (zh) * 2019-07-29 2019-10-22 甘肃省农业科学院土壤肥料与节水农业研究所 一种假节杆菌及应用、及其生物有机肥及应用

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