CN107686816A - 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用 - Google Patents

一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107686816A
CN107686816A CN201610638659.9A CN201610638659A CN107686816A CN 107686816 A CN107686816 A CN 107686816A CN 201610638659 A CN201610638659 A CN 201610638659A CN 107686816 A CN107686816 A CN 107686816A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
chaetomium globosum
pillworm
armochaetoglobin
grams
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610638659.9A
Other languages
English (en)
Inventor
张勇慧
薛永波
陈春梅
朱虎成
张锦文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong University of Science and Technology
Original Assignee
Huazhong University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong University of Science and Technology filed Critical Huazhong University of Science and Technology
Priority to CN201610638659.9A priority Critical patent/CN107686816A/zh
Publication of CN107686816A publication Critical patent/CN107686816A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/96—Spiro-condensed ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/044—Ortho-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一株鼠妇共生菌──球毛壳霉(chaetomium globosum)及其在制备具有抗肿瘤作用的吲哚生物碱类化合物中的应用，提供了来源于球毛壳霉(chaetomium globosum)次生代谢产物的新吲哚生物碱类化合物1至10的活性及结构，并提供了这些新化合物的分离纯化制备方法和结构鉴定。本发明所述的球毛壳霉(chaetomium globosum)保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M2016343；保藏日期：2016年6月23日，保藏地点为中国·武汉·武汉大学。本发明为开发新的抗肿瘤药物提供了备选化合物，对药用昆虫共生菌资源的开发利用具有重要意义。

Description

一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一株鼠妇共生菌──球毛壳霉(chaetomiumglobosum)，及其在制备具有抗肿瘤作用化合物中的应用，以及所产具有抗肿瘤作用化合物的化合物及其制备方法。
背景技术
共生菌是长期与宿主共同生活的一大类群的特殊微生物，依照宿主的不同,可分为植物内生菌、鼠妇共生菌、海绵共附生菌和其它共生菌。鼠妇共生菌是重要的活性次生代谢产物的源泉，它们在鼠妇体内也有着非常重要的作用。随着植物资源的限制，从植物和植物内生菌中发现新的活性成分的几率越来越小。鼠妇的种类非常丰富，已经报道的鼠妇接近100万种，是植物的三倍。然而，与鼠妇的种类多样性相比，对其共生菌及其代谢产物的研究非常少。鼠妇共生菌特殊的代谢产物将成为药物研发新的源泉。
恶性肿瘤是威胁人类和动物生命安全的主要疾病之一。因此，从鼠妇共生菌中筛选具有抗肿瘤作用的新的天然产物具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的任务是提供一种鼠妇共生菌──球毛壳霉(chaetomium globosum)及其在制备具有抗肿瘤作用的吲哚生物碱类化合物中的应用，还提供了来源于球毛壳霉(chaetomium globosum)次生代谢产物的新的吲哚生物碱类化合物1至10的活性及结构，并提供了这些新化合物的分离纯化制备方法和结构鉴定。
实现本发明的技术方案是：本发明提供的球毛壳霉(chaetomium globosum)保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M 2016343；保藏日期：2016年6月23日，保藏地点为中国·武汉·武汉大学。本发明提供的来源于球毛壳霉(chaetomiumglobosum)次生代谢产物的新的吲哚生物碱类化合物1至10分别具有以下式一至式十所示结构：
化合物1：鼠妇球毛壳菌素A(armochaetoglobin A)
化合物2：鼠妇球毛壳菌素B(armochaetoglobin B)
化合物3：鼠妇球毛壳菌素C(armochaetoglobin C)
化合物4：鼠妇球毛壳菌素D(armochaetoglobin D)
化合物5：鼠妇球毛壳菌素E(armochaetoglobin E)
化合物6：鼠妇球毛壳菌素F(armochaetoglobin F)
化合物7：鼠妇球毛壳菌素G(armochaetoglobin G)
化合物8：鼠妇球毛壳菌素H(armochaetoglobin H)
化合物9：鼠妇球毛壳菌素I(armochaetoglobin I)
化合物10：鼠妇球毛壳菌素J(armochaetoglobin J)。
本发明提供的吲哚生物碱类化合物的制备方法包括以下步骤：
S1.种子培养基的制备：球毛壳霉菌株(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCCM2016343；保藏日期：2016年6月23日)接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；所述摇床培养的条件为：25～28℃下，摇床转速100～120转每分钟，培养时间为3～5天；所述种子培养基的组分为：酵母膏3克，麦芽膏3克，蛋白胨5克，葡萄糖10克，水1升；
S2.接种：采用固体发酵方式，在发酵瓶中加入大米固体发酵培养基，接种S1中种子培养液，静置培养；所述大米固体发酵培养基为每1升的三角锥形瓶中加入大米200g，水200毫升；所述静置培养的时间为25～30天，培养温度为25～28℃；
S3.将S2发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取，减压浓缩回收甲醇，得到浸膏；
S4.将S3所得浸膏经层析分离，得到式一到式十中所示化合物1至化合物10，所述的层析分离方法包括是硅胶柱层析、凝胶柱层析或高效液相色谱。
本发明通过对球毛壳霉(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCC M 2016343；保藏日期：2016年6月23日)固体发酵和对其发酵产物的甲醇提取物进行分离纯化，得到10个新化合物。运用多种波谱分析方法和其他手段，确 定其结构为吲哚生物碱类化合物，具体结构如式一到式十所示。通过对化合物2-10的抗肿瘤活性评价，发现化合物2-5,7,8,10对白血病细胞HL-60，人肝癌细胞SMMC-7721，人肺癌细胞A-549，人乳腺癌细胞MCF-7，人结肠癌细胞SW480中的部分细胞表现出较好的活性，其中化合物8的活性尤其显著，化合物4选择性的抑制人肝癌细胞SMMC-7721，可以作为治疗抗肝癌细胞药物开发的先导化合物。
本发明的第二个目的是提供化合物4和化合物8在制备抗肿瘤药物中的应用。当为化合物4时，所述的抗肿瘤药物优选为抗人肝癌的药物。当为化合物8时，所述的抗肿瘤药物优选为抗白血病，人肝癌，人肺癌细胞，人乳腺癌细胞，人结肠癌细胞。
附图说明
图1：从球毛壳霉(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCC M2016343；保藏日期：2016年6月23日)中分离得到的化合物6的X射线晶体衍射结构图。
具体实施方式
实施例1：化合物鼠妇球毛壳菌素A的制备和结构鉴定。
(一)如式一所示化合物鼠妇球毛壳菌素A的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共 得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素A(1.5毫克)。
(二)如式一所示化合物鼠妇球毛壳菌素A的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素A进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物1：白色粉末；比旋光度为+16.2(c＝0.04,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝204(5.05)nm；红外vmax＝3428,2925,1677,1632,1454,1384cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)206(-0.6),225(+0.6),238(-0.3)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二:表一是从球毛壳霉(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCC M2016343；保藏日期：2016年6月23日)中分离得到的化合物1-10的氢谱数据；表二是从球毛壳霉(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCC M2016343；保藏日期：2016年6月23日)中分离得到的化合物1-10的碳谱数据。高分辨质谱HRESIMS([M+H]+m/z 512.2893,计算值为C32H38N3O3,512.2913)，由此得出化合物1的结构式为
化合物1：鼠妇球毛壳菌素A (armochaetoglobin A)
实施例2：化合物鼠妇球毛壳菌素B的制备和结构鉴定。
(一)如式二所示化合物鼠妇球毛壳菌素B的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭 菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素B(11.1毫克)。
(二)如式二所示化合物鼠妇球毛壳菌素B的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素B进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物2：白色粉末；比旋光度为+33.6(c＝0.40,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝203(4.73),225(4.49),283(3.67)nm；红外vmax＝3401,2924,1685,1632,1454,1431,1383cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)212(-1.4),223(-1.3),239(-0.4),274(+1.6)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 557.2969,计算值为C32H42N2O5Na,557.2991)，由此得出化合物2的结构式为
化合物2：鼠妇球毛壳菌素B(armochaetoglobin B)
实施例3：化合物鼠妇球毛壳菌素C的制备和结构鉴定。
(一)如式三所示化合物鼠妇球毛壳菌素C的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄 糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素C(3.5毫克)。
(二)如式三所示化合物鼠妇球毛壳菌素C的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素C进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物3：白色粉末；比旋光度为+24.8(c＝0.11,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝205(4.48),223(4.62),281(3.71)nm；红外vmax＝3419,2927,1682,1455,1384cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)235(-2.7),275(+1.6)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 555.2815,计算值为C32H42N2O5Na,555.2835)，由此得出化合物3的结构式为
化合物3：鼠妇球毛壳菌素C(armochaetoglobin C)
实施例4：化合物鼠妇球毛壳菌素D的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素D的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素D(6.9毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素D的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素D进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物4：白色粉末；比旋光度为+12.0(c＝0.57,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝204(4.00),223(4.23),276(3.18)nm；红外vmax＝3349,2925,1678,1453,1385cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)221(-3.7),236(-3.4),272(+0.9)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 569.2603,计算值为C32H42N2O5Na,569.2627)，由此得出化合物4的结构式为
化合物4：鼠妇球毛壳菌素D(armochaetoglobin D)
实施例5：化合物鼠妇球毛壳菌素E的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素E的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素E(3.8毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素E的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素E进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物5：白色粉末；比旋光度为+25.5(c＝0.13,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(log ε)＝202(4.35),223(4.56),281(3.51)nm；红外vmax＝3349,2925,1678,1453,1385cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)225(-10.4),233(-7.6)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 583.2762,计算值为C32H42N2O5Na,583.2784)，由此得出化合物5的结构式为
化合物5：鼠妇球毛壳菌素E(armochaetoglobin E)
实施例6：化合物鼠妇球毛壳菌素F的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素F的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素F(4.3毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素F的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素F进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱和X射线单晶衍射等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物6：无色晶体；比旋光度为-231.3(c＝0.14,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝205(4.41),222(4.43),282(3.43)nm；红外vmax＝3425,2923,1693,1455cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)227(-8.5),295(-8.5)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 583.2762,计算值为C32H42N2O5Na,583.2784)，X射线单晶衍射结构式如图1所示，由此得出化合物6的结构式为
化合物6：鼠妇球毛壳菌素F(armochaetoglobin F)
实施例7：化合物鼠妇球毛壳菌素G的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素G的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分1再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素F(4.3毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素G的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素G进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物7：白色粉末；比旋光度为-10.9(c＝0.57,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝205(4.54),222(4.64),283(3.80)nm；红外vmax＝3414,2930,1674,1439,1381cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)205(+4.8),231(-7.5)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 537.2708,计算值为C32H42N2O5Na,537.2729)，由此得出化合物7的结构式为
化合物7：鼠妇球毛壳菌素G(armochaetoglobin G)
实施例8：化合物鼠妇球毛壳菌素H的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素H的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分2再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素H(6.1毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素H的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素H进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物8：白色粉末；比旋光度为-214.7(c＝0.18,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝203(4.44),221(4.52),276(3.66)nm；红外vmax＝3403,2921,1682,1455,1382cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)217(-39.6),273(-2.9)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 551.2510,计算值为C32H42N2O5Na,551.2522)，由此得出化合物8的结构式为
化合物8：鼠妇球毛壳菌素H(armochaetoglobin H)
实施例9：化合物鼠妇球毛壳菌素I的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素I的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分2再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素I(7.0毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素I的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素I进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物9：白色粉末；比旋光度为-20.2(c＝0.23,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(log ε)＝205(4.42),221(4.37),283(3.58)nm；红外vmax＝3415,2927,1603,1447,1384cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)232(-3.7),273(+1.1)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 539.2830,计算值为C32H42N2O5Na,539.2886)，由此得出化合物9的结构式为
化合物9：鼠妇球毛壳菌素I(armochaetoglobin I)
实施例10：化合物鼠妇球毛壳菌素J的制备和结构鉴定。
(一)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素J的制备
1、发酵条件
种子培养液的配置：取酵母膏3.0克，麦芽膏3.0克，蛋白胨5.0克，葡萄糖10.0克，溶于适量的水中，再用水定容至1升，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将鼠妇共生菌球毛壳霉(菌种保藏号：CCTCC M2016343)接种到上述培养基中，25～28℃，100～120转每分钟条件下摇床培养为3～5天，得到种子培养液。
发酵：将200克大米装入1升锥形瓶中，加入200毫升水，121℃下高温灭菌30分钟，备用。将上述种子培养液接种到大米培养基中，25～28℃条件下静置培养25～30天。
2、提取分离
将发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取4次，低于40℃下减压浓缩回收甲醇，得到213.0克浸膏。将总浸膏100-200目硅胶拌样，干法装柱后，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(10:1–3:1)，薄层色谱(TLC)检测，合并相同的组分，共得到4个组分。组分2再经过反复的正反相硅胶柱色谱，凝胶色谱和高效液相色谱分离得到化合物鼠妇球毛壳菌素J(11.0毫克)。
(二)如式四所示化合物鼠妇球毛壳菌素J的结构鉴定
对化合物鼠妇球毛壳菌素J进行质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，从而确定化合物的结构。
化合物10：白色粉末；比旋光度为-4.5(c＝0.46,CD3OD)；紫外(MeOH)λmax(logε)＝(4.46),221(4.55),283(3.91)nm；红外vmax＝3406,2927,1706,1626,1456,1420cm–1；圆二色谱ECD(MeOH)λmax(Δε)241(-2.4),295(-2.0)nm；氢谱和碳谱数据见表一和表二；高分辨质谱HRESIMS([M+Na]+m/z 567.2407,计算值为C32H42N2O5Na,567.2471)，由此得出化合物10的结构式为
化合物10：鼠妇球毛壳菌素J(armochaetoglobin J)
实施例11：化合物2-10对白血病细胞HL-60，人肝癌细胞SMMC-7721，人肺癌细胞A-549，人乳腺癌细胞MCF-7，人结肠癌细胞SW480活性细胞的抑制活性。化合物2-10的抗肿瘤活性通过MTS法对白血病细胞HL-60，人肝癌细胞SMMC-7721，人肺癌细胞A-549，人乳腺癌细胞MCF-7，人结肠癌细胞SW480五种人体肿瘤细胞进行评价。结果如表三所示：表三是从球毛壳霉(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCC M2016343；保藏日期：2016年6月23日)中分离得到的化合物2-10的细胞毒活性数据。

Claims (9)

1.一种生产具有抗肿瘤作用化合物的球毛壳霉(chaetomium globosum)，保藏于中国典型培养物保藏中心，其菌种保藏号为CCTCC M2016343；保藏日期为2016年6月23日，保藏地点为中国.武汉.武汉大学。
2.具有以下式一至式十结构的吲哚生物碱类化合物1至化合物10：
化合物1：鼠妇球毛壳菌素A(armochaetoglobin A)
化合物2：鼠妇球毛壳菌素B(armochaetoglobin B)
化合物3：鼠妇球毛壳菌素C(armochaetoglobin C)
化合物4：鼠妇球毛壳菌素D(armochaetoglobin D)
化合物5：鼠妇球毛壳菌素E(armochaetoglobin E)
化合物6：鼠妇球毛壳菌素F(armochaetoglobin F)
化合物7：鼠妇球毛壳菌素G(armochaetoglobin G)
化合物8：鼠妇球毛壳菌素H(armochaetoglobin H)
化合物9：鼠妇球毛壳菌素I(armochaetoglobin I)
化合物10：鼠妇球毛壳菌素J(armochaetoglobin J)。
3.权利要求1所述的球毛壳霉(chaetomium globosum)在微生物发酵制备权利要求2所述化合物中的应用。
4.权利要求2所述的吲哚生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.种子培养基的制备：球毛壳霉菌株(chaetomium globosum；菌种保藏号：CCTCCM2016343；保藏日期：2016年6月23日)接入种子培养基，摇床培养，得到种子培养液；所述摇床培养的条件为：25～28℃下，摇床转速100～120转每分钟，培养时间为3～5天；所述种子培养基的组分为：酵母膏3克，麦芽膏3克，蛋白胨5克，葡萄糖10克，水1升；
S2.接种：采用固体发酵方式，在发酵瓶中加入大米固体发酵培养基，接种S1中种子培养液，静置培养；所述大米固体发酵培养基为每1升的三角锥形瓶中加入大米200g，水200毫升；所述静置培养的时间为25～30天，培养温度为25～28℃；
S3.将S2发酵得到的菌丝体及培养基用甲醇提取，减压浓缩回收甲醇，得到浸膏；
S4.将S3所得浸膏经层析分离，得到式一到式十中所示化合物1至化合物10。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述的层析分离方法包括是硅胶柱层析、凝胶柱层析或高效液相色谱。
6.权利要求2中所述的化合物2、3、4、5、7、8或10在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗白血病药物、抗肝癌药物、抗肺癌药物、抗乳腺癌药物或抗结肠癌药物。
8.具有以下式四结构的化合物4鼠妇球毛壳菌素D(armochaetoglobin D)在制备抗肝癌药物中的应用，
化合物4：鼠妇球毛壳菌素D(armochaetoglobin D)。
9.具有以下式八结构的化合物8鼠妇球毛壳菌素H(armochaetoglobin H)在制备抗白血病药物、抗肝癌药物、抗肺癌药物、抗乳腺癌药物和/或抗结肠癌药物中的应用，
化合物8：鼠妇球毛壳菌素H(armochaetoglobin H)。
CN201610638659.9A 2016-08-05 2016-08-05 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用 Pending CN107686816A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610638659.9A CN107686816A (zh) 2016-08-05 2016-08-05 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610638659.9A CN107686816A (zh) 2016-08-05 2016-08-05 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107686816A true CN107686816A (zh) 2018-02-13

Family

ID=61151258

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610638659.9A Pending CN107686816A (zh) 2016-08-05 2016-08-05 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107686816A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109456898A (zh) * 2018-07-09 2019-03-12 江南大学 一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用
CN110563634A (zh) * 2019-09-09 2019-12-13 湖南省中医药研究院 吲哚细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用
CN111662827A (zh) * 2020-04-26 2020-09-15 河北工程大学 一种筛选产油丝状真菌的方法
CN114854804A (zh) * 2022-04-26 2022-08-05 大连大学 球毛壳菌素e的制备方法及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104370924A (zh) * 2014-10-17 2015-02-25 华中科技大学 具有抗肿瘤细胞增殖作用化合物及其制备方法及应用
CN105085538A (zh) * 2015-08-21 2015-11-25 华中科技大学 具有肿瘤细胞g1期阻滞作用的化合物及其制备和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104370924A (zh) * 2014-10-17 2015-02-25 华中科技大学 具有抗肿瘤细胞增殖作用化合物及其制备方法及应用
CN105085538A (zh) * 2015-08-21 2015-11-25 华中科技大学 具有肿瘤细胞g1期阻滞作用的化合物及其制备和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHUNMEI CHEN等: "Armochaetoglobins A−J: Cytochalasan Alkaloids from Chaetomium globosum TW1-1, a Fungus Derived from the Terrestrial Arthropod Armadillidium vulgare", 《J. NAT. PROD.》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109456898A (zh) * 2018-07-09 2019-03-12 江南大学 一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用
CN110563634A (zh) * 2019-09-09 2019-12-13 湖南省中医药研究院 吲哚细胞松弛素类化合物及其制备方法和应用
CN111662827A (zh) * 2020-04-26 2020-09-15 河北工程大学 一种筛选产油丝状真菌的方法
CN114854804A (zh) * 2022-04-26 2022-08-05 大连大学 球毛壳菌素e的制备方法及应用
CN114854804B (zh) * 2022-04-26 2024-03-29 大连大学 球毛壳菌素e的制备方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103037879A (zh) 微量人参皂苷成分得到增加的新型加工人参或加工人参提取物的制备方法
CN107686816A (zh) 一种鼠妇共生菌球毛壳霉及其在制备抗肿瘤化合物中的应用
CN102311981B (zh) 制备提纯灵菌红素的方法
CN110452247B (zh) 一种杂萜化合物及其制备方法和应用
JPH0678757A (ja) 抗菌性ｃｌ−１５７７を生産できる放線菌
CN108795774A (zh) 一种拟茎点霉及其次生代谢产物中新甾体类化合物的分离应用
CN103740606A (zh) 植生链霉菌及其产生新抗生素诺沃巢霉素的方法与应用
CN101720772B (zh) 一种防治作物真菌病害的大环内脂类组合物及其制备工艺
CN110066283A (zh) 一种吲哚二酮哌嗪类生物碱及其制备方法和用途
CN103911407B (zh) 一种海洋真菌来源的Azaphilone类二聚体化合物的制备方法及应用
CN111153908B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的嗜氮酮生物碱、制备方法及其用途
CN110218200B (zh) 一种红树内生真菌中环缩肽化合物及其制备方法与应用
CN103724290A (zh) 一种环肽化合物clavatustide A及其产生菌、制备方法和应用
CN104370924A (zh) 具有抗肿瘤细胞增殖作用化合物及其制备方法及应用
CN103146594B (zh) 纤维堆囊菌菌株及其在埃博霉素合成方面的应用
CN112300243B (zh) 一种环肽化合物及其制备方法和应用
CN105585573B (zh) 一种托酚酮类化合物及其药物组合物和其制备方法与应用
CN101074234B (zh) 一种抗肿瘤抗生素及其制备方法
CN107226820A (zh) 一种具有抗肿瘤作用的毛菌素j及其制备方法与用途
CN102452916B (zh) 一类芳香聚酮及其提取方法和应用
CN104450818B (zh) 一种利用羊肚菌制备吡咯酸化合物的方法及其应用
CN105803015A (zh) 通过Clonostachys sp.发酵转化荷包牡丹碱为(4S,6aR)-4-羟基荷包牡丹碱的方法
CN105837590A (zh) 具有抗白色念珠菌活性的化合物及其制备方法和应用
CN114213379B (zh) 聚酮类二聚体化合物及其制备方法与用途
CN104212852B (zh) 一种酚嗪类抗肿瘤抗生素及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180213

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication