CN109415366A

CN109415366A - 新型[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶衍生物

Info

Publication number: CN109415366A
Application number: CN201780036886.7A
Authority: CN
Inventors: 罗卡·戈比; 尤伟·格雷瑟; 沃尔夫冈·古帕; 朱莉安·克雷茨; 赖纳·E·马丁; 马蒂亚斯·瓦伦丁·韦斯特法尔
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2016-06-23
Filing date: 2017-06-20
Publication date: 2019-03-01
Anticipated expiration: 2037-06-20
Also published as: EP3475280B1; JP2019524669A; US20190127383A1; EP3475280A1; JP7090037B2; CN109415366B; US10457684B2; WO2017220516A1

Abstract

本发明涉及含有至少一个二氮杂环丙烯基的式(I)的化合物。所述式(I)的化合物是2型大麻素(CB2)受体调节剂，并且可以用作药物。

Description

新型[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶衍生物

本发明涉及对2型大麻素(CB2)受体具有亲和力的新型[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶衍生物、其制备及其诊断和治疗用途。

本发明特别涉及式(I)的化合物

其中

R¹是选自苯基、[1，2，5]二唑基、吡啶基、嘧啶基和异唑基的环，其中所述环被一个或两个独立地选自以下各项的取代基取代：烷基、卤代烷基、卤素、烯基、卤代烷基二氮杂环丙烯基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基羰基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基烷基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氧基烷基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氧基和氰基；

R²和R³独立地选自氢、卤素和羟基；

或者，R²和R³与它们所连接的碳原子一起形成二氮杂环丙烯基；

条件是R¹或R²和R³中的至少一个是包括二氮杂环丙烯基的基团；

并且

R⁴是烷基或苯基卤代烷基；

或其药用盐或酯。

已经发现了对于大麻素CB2受体具有高亲和力和高选择性的新型[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶衍生物。这些化合物对于CB2受体的活性具有调节作用。术语‘调节作用’尤其意指激动剂、拮抗剂和/或反向激动剂作用。

大麻素受体2的激动剂可用于哺乳动物的治疗和/或预防。式(I)的化合物特别可用于治疗或预防例如疼痛(pain)、动脉粥样硬化(atherosclerosis)、老年性黄斑变性(age-related macular degeneration)、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy)、青光眼(glaucoma)、糖尿病(diabetes mellitus)、炎症(inflammation)、炎性肠病(inflammatory bowel disease)、缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury)、急性肝功能衰竭(acute liver failure)、肝纤维化(liver fibrosis)、肺纤维化(lungfibrosis)、肾纤维化(kidney fibrosis)、系统性纤维化(systemic fibrosis)、急性同种异体移植排斥(acute allograft rejection)、慢性同种异体移植肾病(chronicallograft nephropathy)、糖尿病性肾病(diabetic nephropathy)、肾小球性肾病(glomerulonephropathy)、心肌病(cardiomyopathy)、心力衰竭(heart failure)、心肌缺血/梗死(myocardial ischemia/infarction)、系统性硬化病(systemic sclerosis)、热伤(thermal injury)、烧伤(burning)、增生性瘢痕(hypertrophic scars)、瘢痕瘤(keloids)、牙龈炎发热(gingivitis pyrexia)、肝硬变或肿瘤(liver cirrhosis ortumors)、骨量调节(regulation of bone mass)、神经变性(neurodegeneration)、卒中(stroke)、暂时性局部缺血发作(transient ischemic attack)或葡萄膜炎(uveitis)。

大麻素受体2的反向激动剂可用于哺乳动物的治疗和/或预防。

式(I)的化合物特别可用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、哮喘、骨质疏松、炎症、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、精神异常、类风湿性关节炎、精神病和变态反应。

式(I)的化合物特别用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛(neuropathic pain)、哮喘(asthma)、骨质疏松(osteoporosis)、炎症(inflammation)、精神疾病(psychiatricdiseases)、精神病(psychosis)、肿瘤(oncology)、脑炎(encephalitis)、疟疾(malaria)、变态反应(allergy)、免疫性病症(immunological disorders)、关节炎(arthritis)、胃肠道病症(gastrointestinal disorders)、精神异常(psychiatric disorders)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、精神病和变态反应。

大麻素受体是一类细胞膜受体，属于G蛋白-偶联受体超家族。目前存在两种已知亚型，称为大麻素受体1(CB1)和大麻素受体2(CB2)。CB1受体主要表达在中枢神经(即杏仁核小脑，海马体)系统中并且在外周中以较少量表达。由CNR2基因编码的CB2主要在免疫系统的细胞，如巨噬细胞和T-细胞上(Ashton，J.C.等Curr Neuropharmacol 2007，5(2)，73-80；Miller，A.M.等Br J Pharmacol 2008，153(2)，299-308；Centonze，D.，等Curr PharmDes 2008，14(23)，2370-42)，和在胃肠系统中(Wright，K.L.等Br J Pharmacol 2008，153(2)，263-70)外周表达。CB2受体还广泛分布于脑中，其中它主要发现于小胶质细胞而非神经元上(Cabral，G.A.等Br J Pharmacol 2008，153(2)：240-51)。

大麻素受体2的调节剂可用于哺乳动物的治疗和/或预防。

在过去十年对CB2受体激动剂的兴趣稳步上升(目前30-40件专利申请/年)，这是由于以下事实所致，即早期化合物中的多种已显示在大量人类疾病的临床前模型中具有优异作用，这些疾病包括慢性疼痛(Beltramo，M.Mini Rev Med Chem 2009，9(1)，11-25)，动脉粥样硬化(Mach，F.等J Neuroendocrinol 2008，20 Suppl 1，53-7)，骨量调节(Bab，I.等Br J Pharmacol 2008，153(2)，182-8)，神经性炎症(Cabral，G.A.等J Leukoc Biol 2005，78(6)，1192-7)，缺血/再灌注损伤(Pacher，P.等Br J Pharmacol 2008，153(2)，252-62)，系统性纤维化(Akhmetshina，A.等Artritis Rheum 2009，60(4)，1129-36；Garcia-Gonzalez，E.等Rheumatology(Oxford)2009，48(9)，1050-6)，肝纤维化(Julien，B.等Gastroenterology 2005，128(3)，742-55；Munoz-Luque，J.等J Pharmacol Exp Ther2008，324(2)，475-83)。

缺血/再灌注(I/R)损伤是在诸如卒中、心肌梗死、心肺旁路(cardiopulmonarybypass)和其他血管手术及器官移植的病症中发生的组织损伤的主要原因，以及使得多种病因学的循环性休克的过程复杂化的终末器官损伤的主要机制。所有这些病症的特征在于正常血压供应破坏，这导致不足的组织氧合。再氧合例如再灌注是用于恢复正常组织氧合的最后治疗。然而，来自血液的氧和营养的缺乏产生其中循环恢复导致进一步组织损伤的病况。再灌注损伤的损害部分地由于受损组织的炎性反应。由新回血携带至该区域的白血球响应于组织损伤而释放炎性因子如白介素的宿主以及自由基。恢复的血流在损害细胞蛋白、DNA和血浆膜的细胞内再引入氧。

远端缺血预处理(RIPC)代表用于控制身体对于由于缺血和再灌注引起的损伤的内源性能力的策略。其描述了其中一个器官或组织的短暂非致死性缺血和再灌注对于远端器官或组织中的“致死性”缺血再灌注损伤的后续发作(subsequent episode)提供抗性的一种非常有趣的现象。尽管已经提出多种假说，但是器官或组织的短暂缺血和再灌注通过其提供保护的实际机制在当前是未知的。

体液假说提出，在远端器官或组织中产生的内源性物质(如腺苷、缓激肽、阿片类、CGRP、内源性大麻素、血管紧缩素I或一些还没有被鉴别的体液因子的其他物质)进入血流并在靶组织中激活其相应受体，并由此募集在缺血预适应中涉及的心肌保护的各种细胞内途径。

近期数据表明，内源性大麻素及其受体，特别是CB2可能涉及预适应并且通过下调炎性反应而有助于预防再灌注损伤(Pacher，P等Br J Pharmacol 2008，153(2)，252-62)。具体地，利用CB2工具激动剂的近期研究证实了此构思对于减少以下各项器官中的I/R损伤的功效：心脏(Defer，N.等Faseb J 2009，23(7)，2120-30)、大脑(Zhang，M.等J CerebBlood Flow Metab 2007，27(7)，1387-96)、肝脏(Batkai，S.等Faseb J 2007，21(8)，1788-800)和肾脏(Feizi，A.等Exp Toxicol Pathol 2008，60(4-5)，405-10)。

此外，在过去的几年内，越来越多的文献表明，CB2在亚慢性和慢性情形中也可能引起人们的兴趣。CB1和CB2的特异性上调在与纤维化相关的慢性疾病的动物模型(Garcia-Gonzalez，E.等Rheumatology(Oxford)2009，48(9)，1050-6；Yang，Y.Y.等Liver Int 2009，29(5)，678-85)中与肌纤维母细胞(负责纤维化进展的细胞)中的CB2的相关表达是相关的。

CB2受体通过选择性CB2激动剂的激活事实上已经显示在扩散性系统硬化病中发挥抗纤维化作用(Garcia-Gonzalez，E.等Rheumatology(Oxford)2009，48(9)，1050-6)并且CB2受体已经在实验性皮肤纤维化(Akhmetshina，A.等Arthritis Rheum 2009，60(4)，1129-36)和肝脏病理生理学中作为关键靶标出现，包括与慢性肝病相关的纤维发生(fibrogenesis)(Lotersztajn，S.等Gastroenterol Clin Biol 2007，31(3)，255-8；Mallat，A.等Expert Opin Ther Targets 2007，11(3)，403-9；Lotersztajn，S.等Br JPharmacol 2008，153(2)，286-9)。

在过去十年对CB2受体配体的兴趣稳步上升(目前30-40件专利申请/年)。不同来源的证据支持这样的观点：通过CB2受体的脂内源性大麻素信号传导代表哺乳动物保护性医疗设备的一个方面(Pacher，P.Prog Lipid Res 2011，50，193)。通过选择性CB2受体激动剂或反向激动剂/拮抗剂(取决于疾病和其阶段)对其的调节在大量疾病中保持唯一的治疗潜能。对于CB2反向激动剂/拮抗剂，对于很多病理状况证明了治疗可能性：所述病理状况包括疼痛(Pasquini，S.J Med Chem 2012，55(11)：5391)，神经性疼痛(Garcia-Gutierrez，M.S.Br J Pharmacol 2012，165(4)：951)，精神病症(Garcia-Gutierrez，M.S.Br JPharmacol 2012，165(4)：951)，精神病(Garcia-Gutierrez，M.S.Br J Pharmacol 2012，165(4)：951)，骨质疏松和炎症(Sophocleous，A.Calcif Tissue Int 2008，82(Suppl.1)：Abst OC18)，精神疾病和精神病(Garcia-Gutierrez，M.S.Br J Pharmacol 2012，165(4)：951)，肿瘤(Preet，A.Cancer Prev Res 2011，4：65)，脑炎和疟疾(Zimmer，A.WO2011045068)，变态反应和炎症(Ueda，Y.Life Sci 2007，80(5)：414)，脑炎和疟疾(Zimmer，WO 2011045068)，哮喘(Lunn，C.A.J Pharmacol Exp Ther 2006，316(2)：780)，免疫性病症(Fakhfouri，G.Neuropharmacology 2012，63(4)：653)，类风湿性关节炎(Chackalamannil，S.US 7776889)，关节炎(Lunn，C.A.J Pharmacol Exp Ther 2006，316(2)：780)，和胃肠道病症(Barth，F.FR 2887550)。

本发明的化合物结合和调节CB2受体并且具有较低的CB1受体活性。

本发明的化合物含有二氮杂环丙烯部分(diazirin moiety)，其可以任选地用于在光化学激活之后与CB2受体形成共价键。作为共价改性剂的这样的小有机分子可用于检测和定位靶标、用于成像和用于治疗用途(对照，例如Adebayo A Adeniyi，RameshMuthusamy&Mahmoud ES Soliman，Expert Opin.Drug Discov.(2016)11(1)：79-90)。

在本说明书中，术语“烷基”，单独或组合地表示具有1至8个碳原子的直链或支链烷基，特别是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，更特别是具有1至4个碳原子的直链或支链烷基。直链和支链C₁-C₈烷基的实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、异构的戊基、异构的己基、异构的庚基和异构的辛基，特别是甲基、乙基、丙基、丁基和戊基。烷基的特别的实例是甲基、乙基和叔丁基。

术语“卤素”或“卤代”，单独或组合地表示氟、氯、溴或碘，并特别是氟、氯或溴，更特别是氟和氯。术语“卤代”，与另一基团组合地表示所述基团被至少一个卤素的取代，特别是被一至五个卤素，特别是一至四个卤素，即一、二、三或四个卤素的取代。

术语“卤代烷基”，单独或组合地表示被至少一个卤素取代的，特别是被一至五个卤素、特别是被一至三个卤素取代的烷基。特别的“卤代烷基”是三氟甲基和二氟甲基。

术语“炔基”，单独或组合地表示包含碳碳三键和2至不超过8个，优选不超过6个，特别优选不超过4个碳原子的直链或支链烃基基团。炔基的实例是乙炔基和1-丁炔基。

术语“羟基(hydroxyl)”和“羟基(hydroxy)”，单独或组合地表示-OH基团。

术语“氧基”，单独或组合地表示-O-基团。

术语“烷氧基”或“烷基氧基”，单独或组合地表示式烷基-O-的基团，其中术语″烷基″具有之前给出的含义，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。特别的“烷氧基”是乙氧基。

术语“羰基”，单独或组合地表示-C(O)-基团。

术语“氨基”，单独或组合地表示伯氨基(-NH₂)、仲氨基(-NH-)或叔氨基(-N-)。

术语“二氮杂环丙烯基(diazirinyl)”和“二氮杂环丙烯基(diazirenyl)”在本说明书中都用来指代以下基团

术语“药用盐”是指保持游离碱或游离酸的生物有效性和性质的那些盐，它们不是生物学上或其他方面不适宜的。所述盐用无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，特别是盐酸，以及有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、N-乙酰基半胱氨酸形成。此外，这些盐可以通过向游离酸的加入无机碱或有机碱而制备。得自无机碱的盐包括，但不限于，钠、钾、锂、铵、钙、镁盐。得自有机碱的盐包括，但不限于以下物质的盐：伯、仲和叔胺，取代的胺，包括天然存在的取代的胺、环状胺和碱性离子交换树脂，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚胺树脂。式(I)的化合物也可以以两性离子的形式存在。特别优选的式(I)的化合物的药用盐是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和甲磺酸的盐。

″药用酯″表示通式(I)的化合物可以在官能团处衍生化以提供能够体内转化回母体化合物的衍生物。这种化合物的实例包括生理上可接受的和易代谢的酯衍生物，如甲氧基甲酯，甲硫基甲酯和新戊酰基氧基甲酯。此外，通式(I)化合物的任何生理上可接受的等同物(类似于易代谢的酯且能够在体内产生通式(I)母体化合物)均在本发明的范围内。

如果原料之一或式(I)化合物含有一个或多个在一个或多个反应步骤的反应条件下不稳定或具有反应性的官能团，则可以应用本领域周知的方法在关键步骤之前引入合适的保护基(如例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts在“Protective Groups in OrganicChemistry”，第3版，1999，Wiley，New York中所述)。这样的保护基可以在合成的稍后阶段使用文献中所述的标准方法除去。保护基的实例是叔丁氧羰基(Boc)，氨基甲酸9-芴基甲酯(Fmoc)，氨基甲酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(Teoc)，苄氧羰基(Cbz)和对甲氧基苄氧基羰基(Moz)。

式(I)化合物可以含有几个不对称中心，并且其存在形式可以是光学纯对映异构体，对映异构体的混合物，如例如外消旋物，非对映异构体的混合物，非对映异构体外消旋物或非对映异构体外消旋物的混合物。

术语“不对称碳原子”表示具有四个不同取代基的碳原子。根据Cahn-Ingold-Prelog Convention，不对称碳原子可以为“R”或“S”构型。

本发明特别涉及式(I)的化合物，其中：

R¹是选自苯基、[1，2，5]二唑基、吡啶基、嘧啶基和异唑基的环，其中所述环被一个或两个独立地选自以下各项的取代基取代：烷基、卤代烷基、卤素、烯基、卤代烷基二氮杂环丙烯基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基羰基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基烷基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氧基烷基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基和炔基二氮杂环丙烯基烷基氧基；

R²和R³独立地选自氢、卤素和羟基；

或者R²和R³与它们所连接的碳原子一起形成二氮杂环丙烯基；

条件是R¹或R²和R³中的至少一个是包括二氮杂环丙烯基的基团；并且

R⁴是烷基或苯基卤代烷基；

或其药用盐或酯。

本发明还涉及；

一种式(I)的化合物，其中R¹是选自苯基或[1，2，5]二唑基的环，其中所述环被一个独立地选自以下各项的取代基取代：烷基、卤代烷基、卤代烷基二氮杂环丙烯基、炔基和炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基羰基；

一种式(I)的化合物，其中R¹是甲基[1，2，5]二唑基、三氟甲基苯基、三氟甲基二氮杂环丙烯基苯基、乙炔基苯基或丁炔基二氮杂环丙烯基乙基氨基羰基[1，2，5]二唑基；

一种式(I)的化合物，其中R²是氢并且R³是羟基，或者R²和R³与它们所连接的碳原子一起形成二氮杂环丙烯基；

一种式(I)的化合物，其中R⁴是叔丁基或苯基二氟甲基；

一种式(I)的化合物，其中R¹是选自苯基或[1，2，5]二唑基的环，其中所述环被一个或两个独立地选自以下各项的取代基取代：烷基、卤代烷基、卤代烷基二氮杂环丙烯基、炔基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基羰基和氰基；

一种式(I)的化合物，其中R¹是甲基[1，2，5]二唑基、三氟甲基苯基、三氟甲基二氮杂环丙烯基苯基、乙炔基苯基、丁炔基二氮杂环丙烯基乙基氨基羰基[1，2，5]二唑基或(三氟甲基二氮杂环丙烯基)(氰基)苯基；和

一种式(I)的化合物，其中R²是氢并且R³是羟基，或者R²和R³与它们所连接的碳原子一起形成二氮杂环丙烯基或者R²和R³二者同时是氟。

本发明还涉及式(I)的化合物，所述化合物选自：

5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3-{[2-(三氟甲基)苯基]甲基}-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-3-[(2-氯苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

3-[(2-氯苯基)甲基]-5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-3-({2-氯-4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

4-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺；

4-({5-叔丁基-7-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基}甲基)-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺；

N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-4-({5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基}甲基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-[5-叔丁基-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇；

(3S)-1-{5-[二氟(苯基)甲基]-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}吡咯烷-3-醇；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-3-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-[5-叔丁基-3-({4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-3-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-3-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-{5-[二氟(苯基)甲基]-3-({4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-3-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}吡咯烷-3-醇；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]嘧啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-[5-叔丁基-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]嘧啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]嘧啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-{5-[二氟(苯基)甲基]-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]嘧啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}吡咯烷-3-醇；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-[5-叔丁基-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-{5-[二氟(苯基)甲基]-3-({3-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-4-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基}吡咯烷-3-醇；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-2-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({5-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]吡啶-3-基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-3-甲基-1，2-唑-4-甲酰胺；

N-[(4-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙-1-胺；

5-叔丁基-3-{[4-({2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙氧基}甲基)-1，2，5-二唑-3-基]甲基}-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]-N-{[4-({5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基}甲基)-1，2，5-二唑-3-基]甲基}乙-1-胺；

3-{[4-({2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙氧基}甲基)-1，2，5-二唑-3-基]甲基}-5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-3-[(2-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙氧基}苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

2-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}苯胺；

3-[(2-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙氧基}苯基)甲基]-5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶；

N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-2-({5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基}甲基)苯胺；

5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，6-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-6-基)三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶；

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶；

(3S)-1-[5-叔丁基-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇；和

(3S)-1-[5-[二氟(苯基)甲基]-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇。

本发明进一步涉及选自如下各项的式(I)的化合物：

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶；和

(3S)-1-[5-叔丁基-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇。

本发明的式(I)的化合物的制备可以以顺序或收敛合成路线进行。本发明的化合物的合成在以下方案中显示。对于进行反应和所得产物的纯化所需的技巧对于本领域技术人员是已知的。除非有相反指示，在这些方法的以下描述中使用的取代基和指示具有前文所给出的含义。更具体地，式(I)的化合物可以通过以下给出的方法、通过实施例中给出的方法或通过类似方法制备。用于单独反应步骤的适当反应条件对于本领域技术人员是已知的。而且，对于影响所述反应的文献中描述的反应条件，参见例如：Comprehensive OrganicTransformations：AGuide to Functional Group Preparations(综合有机转化：官能团制备指南)，2nd Edition，Richard C.Larock.John Wiley&Sons，New York，NY.1999)。我们发现在溶剂存在或不存在下很顺利地进行反应。对于要采用的溶剂的性质没有特别限制，前提是其对所涉及的反应或试剂没有不利影响并且其可以溶解这些试剂，至少达到一定程度。所描述的反应可以在宽范围的温度下发生，并且精确的反应温度对于本发明不是关键。在-78℃至回流的温度范围内顺利地进行所描述的反应。反应所需的时间也可以宽泛地变化，其取决于许多因素，尤其是反应温度和试剂的性质。然而，0.5小时至几天的时间段通常将足以生成所述的中间体和化合物。反应顺序不限于在这些方案中展示的顺序，然而，取决于起始物料及其各自的反应性，反应步骤的顺序可以自由改变。起始物料要么可商购获得，要么可以通过与以下所给出的方法类似的方法、通过在本说明书中或实施例中所引述的文献中所描述的方法或者通过本领域已知的方法制备。

方案1

a)卤化物II要么可商购获得，要么可以根据本领域已知的方法合成。这些卤化物II便利地与叠氮化钠在合适溶剂如乙腈、乙醇或DMF中反应，得到叠氮化物衍生物III。备选的优选条件包括使用溶剂如DMA、NMP或DMSO，甚至更优选的是NMP和DMSO。在极性非质子溶剂如NMP和DMSO中，烷基化通常可以在比例如在乙腈中更低的温度下进行，通常在室温至40℃(例如对于BnCl、1-氯-2-(氯甲基)苯或PMB-Cl正是如此；这当然取决于卤化物II的反应性)并且因此提供更好的过程安全窗口(警告有机叠氮化物当然已知是潜在危险的并且过程安全性总是必须小心评估)。加入水可以是有利的，因为它增大叠氮化钠的溶解性，并且因为有助于溶解NaN₃的硬块，而提供更稳健的动力学曲线。还可以导致更好的最终叠氮化物反应混合物的可滤性。例如当在小通道反应器中以连续方式进行以下环加成时，可能需要反应混合物的过滤。叠氮化物不分离并且将其溶液最佳地引入下一步骤。这也避免了其也可能导致安全问题的分离。

b)三唑衍生物IV可以在适当碱如甲醇钠或乙醇钠存在下，在合适溶剂如甲醇、乙醇或DMF中，通过叠氮化物衍生物III与2-氰基乙酰胺的[3+2]环加成制备。备选的优选条件包括使叠氮化物与2-氰基乙酰胺在溶剂如NMP或DMSO中，在氢氧化钠存在下反应。分批工艺通常在室温至50℃，优选在室温至40℃(警告，过程安全性总是必须小心评估)进行。环加成过程也可修改成连续方式(对于相关文献，例如，参见Org.Process Res.Dev.，2009，13(6)，pp 1401-1406)并且在这种情况下，反应温度可以升高至高于50℃，例如(但不限于)50℃至90℃，优选地60℃至70℃。

c)三唑衍生物V可以在碱如DIEA、DMAP、吡啶等存在下通过IV与酰基卤的酰化作用获得。已观察到双酰化和腈副产物的形成。当例如在作为溶剂的吡啶中工作时，这些可以是很重要的。然而，当代替吡啶而使用DMA或NMP，优选地DMA作为溶剂时，这些可以被最小化。优选的条件包括在50-100℃，优选地75-85℃使用1.0-2当量的吡啶和新戊酰氯，优选地1.0至1.5当量，优选地约1.5当量。这些高沸点极性溶剂还可以压缩以下环化步骤，这大大地简化该过程。

d)三唑并嘧啶衍生物VI可以在有或没有溶剂如甲醇、乙醇、二烷和甲苯的情况下在碱如KHCO₃、Na₂CO₃和水存在下通过三唑衍生物V的分子内环化作用制备。备选的优选条件包括使用DMA或NMP作为溶剂，优选地使用DMA。反应可以在KHCO₃存在下在130-170℃，优选地140至160℃进行。化合物VI以互变异构体或互变异构体的混合物存在，例如：

任选地氨基酰胺IV可以与腈R⁴-CN在碱如K₂CO₃存在下在溶剂如DMF中，优先地在接近溶剂的沸点的温度下反应，以直接得到嘧啶酮VI。

e)氯化物VII可以在适当碱如N，N-二乙基苯胺、二甲基吡啶或吡啶存在下通过与氯化试剂如POCl₃、SOCl₂或(COCl)₂的反应获得。备选的优选条件包括使用Vilsmeier试剂作为氯化剂。其还可以通过使草酰氯与DMF反应原位产生。氯化可以例如在乙腈、DCM或AcOEt中，优选在DCM中进行。这些条件允许温和的反应温度并且例如避免在后处理时过量POCl₃的猝灭。粗产物可以被引入到下一步骤中。

f)氯化物VII在适当碱如三乙胺、DIEA或DBU存在下在合适溶剂如乙腈、甲醇、甲苯或DMF中与胺亲核试剂顺利地反应，得到三唑并-嘧啶衍生物I。

这些衍生物可以是最终化合物，然而，优选地当R¹-CH₂＝取代的苄基基团如对甲氧基苄基时，这些基团可以利用TFA、CAN、氢化作用等解离，以得到衍生物I(R¹-CH₂＝H)。R¹-CH₂＝苄基表示合适的备选保护基。其避免使用PMB-Cl(用于相应的叠氮化物中间体III的制备)，已知PMB-Cl具有一些热稳定性问题(参见例如Organic Process Research&Development 2005，9，1009-1012)以及根据供应商的质量改变。苄基基团可以同样例如在酸存在下在标准氢解条件下解离。当使用HCl时，衍生物I(R¹-CH₂＝H)可以潜在地作为盐被分离。

三唑衍生物I(R¹-CH₂＝H)在合适碱如DIEA、DBU、K₂CO₃、或Cs₂CO₃存在下在溶剂如DMF、二烷或甲苯中，与卤化物(或磺酸酯比如甲磺酸酯、全氟丁磺酸酯或甲苯磺酸酯)顺利地反应，或者备选地在适当溶剂如THF、DCM、甲苯中，在使用合适重氮二甲酸酯(DEAD、DIAD等)和膦如PBu₃或PPh₃的Mitsunobu反应条件下与醇顺利地反应，得到最终的三唑并-嘧啶衍生物I。

如果起始材料即式II的化合物(其是步骤c)中使用的酰化试剂或步骤f)中使用的胺)的一种含有一个或多个在一个或多个反应步骤的反应条件下不稳定或具有反应性的官能团，则可以利用本领域公知方法在关键步骤之前引入适当的保护基团(P)(如例如T.W.Greene等人，Protective Groups in Organic Chemistry，John Wiley and SonsInc.New York 1999，第3版所述的)。这样的保护基团可以在合成的较晚阶段使用本领域中已知的标准方法去除。

如果式II至VII的一个或多个化合物，即，是步骤d)中使用的酰化试剂或步骤f)中使用的胺，含有手性中心，则式I的三唑并嘧啶可以作为非对映异构体或对映异构体的混合物获得，其可以通过本领域中公知的方法，例如(手性)HPLC或结晶来分离。外消旋化合物可以例如经由非对映异构盐通过结晶或通过使用手性吸附剂或手性洗脱剂的特定色谱方法分离对映体而被分离为其对映体。

本发明还涉及一种用于制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括式(A)的化合物

在式(B)的化合物和碱存在下反应，

其中R¹至R⁴如上所定义。

在本发明的方法，所述碱例如是三乙胺、DIEA或DBU。

在本发明的方法，可以使用溶剂，其可以例如选自乙腈、甲醇、甲苯和DMF。

因此本发明还涉及根据本发明的方法制备的式(I)的化合物。

本发明的另一实施方案提供药物组合物或药物，其包含本发明的化合物和治疗惰性载体，稀释剂或赋形剂，以及使用本发明的化合物制备这种组合物和药物的方法。在一个实例中，可以将式(I)化合物通过如下配制：在环境温度在合适的pH，并在期望的纯度程度，与生理学上可接受的载体即在所采用的剂量和浓度对接受者无毒的载体混合成盖仑给药形式。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但是优选在约3至约8范围内的任意值。在一个实例中，将式(I)化合物在乙酸盐缓冲液中在pH 5配制。在另一个实施方案中，式(I)化合物是无菌的。可以将化合物例如作为固体或非晶组合物，作为冻干的制剂或作为水溶液储存。

组合物以与良好医疗实践相一致的方式进行配制，定剂量，和给药。在此考虑的因素包括所治疗的具体病症，所治疗的具体哺乳动物，个体患者的临床状况，病症的原因，药剂的输送位置，给药方法，给药的时间安排，和执业医师已知的其他因素。

本发明的化合物可以通过任何合适的方式给药，包括口服、局部(包括含服和舌下)、直肠、阴道、经皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外和鼻内，并且，如果需要局部治疗，则病灶内给药。肠胃外输液包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。

本发明的化合物可以以任何方便的给药形式给药，例如，片剂、散剂、胶囊、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳剂、贴剂等。这样的组合物可以含有药物制剂中的常规组分，例如，稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。

典型的制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂制备。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员周知的并详述于例如以下文献中：Ansel，Howard C.，等，Ansel’sPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia：Lippincott，Williams&Wilkins，2004：Gennaro，Alfonso R.，等Remington：The Scienceand Practice of Pharmacy.Philadelphia：Lippincott，Williams&Wilkins，2000；和Rowe，Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago，PharmaceuticalPress，2005。制剂还可以包括一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂(opaquing agent)、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、加香剂、增味剂、稀释剂和其他已知添加剂，以提供药物(即，本发明的化合物或其药物组合物)的优良存在形式或协助制备药物产品(即，药品)。

本发明因此还涉及：

式(I)的化合物，其用作治疗活性物质；

一种药物组合物，其包含式(I)的化合物和治疗惰性载体；

式(I)的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应；

一种式(I)的化合物，其用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应；

一种用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的式(I)的化合物；和

式(I)的化合物用于对CB2受体进行检测或成像的用途。

现在将利用以下实施例描述本发明，所述实施例不具有限制特性。

实施例

缩写

MS＝质谱；CAN＝硝酸高铈铵；CAN＝化学文摘服务编号；Ac＝乙酰基；DIEA＝N，N-二异丙基乙胺；DBU＝1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯；DMF＝二甲基甲酰胺；HPLC＝LC＝高效液相色谱；HRMS＝高分辨率质谱；MeCN＝乙腈；NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺；NCS＝N-氯代琥珀酰亚胺；NMR数据以相对于内标四甲基硅烷以百万分率(δ)报告，并且参比来自样品溶剂的氘锁信号(d₆-DMSO，除非另有说明)；偶联常数(J)以赫兹(Hertz)记；THF＝四氢呋喃；TFA＝三氟乙酸；DCM＝二氯甲烷。

实施例1

5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)3-((5-(叔丁基)-7-氯-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑

将5-(叔丁基)-3-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(CAS 1919022-49-3，235mg，0.812mmol，1.00当量)和一滴DMF溶解在CH₂Cl₂(2.71mL)中。加入草酰氯(80μL，0.89mmol，1.1当量)并将反应混合物在室温搅拌过夜。加入硅藻土(celite)并将溶剂除去。二氧化硅上的急骤色谱(在CH₂Cl₂中的0.5％MeOH)，得到3-((5-(叔丁基)-7-氯-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑(230mg，0.757mmol，92％收率)，为无色固体。HRMS(MALDI+)308.1021(M⁺)。

b)1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-甲酸叔丁酯

将3-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(CAS 101385-93-7，5.55g，30.0mmol，1.00当量)溶解在Et₂O(5mL)中并冷却至-78℃。将氨水(大约100mL)冷凝到烧瓶中并将反应混合物回流(干冰冷凝器)达6h。然后将反应混合物冷却回到-78℃并缓慢地加入羟胺-O-磺酸(3.73g，33.0mmol，1.10当量)在MeOH(20mL)中的溶液。将干冰/丙酮浴移除并将其在回流下再搅拌1.5h(干冰冷凝器)。然后加入MeOH(45mL)并使反应混合物温热至室温过夜。将所得的悬浮液过滤。滤饼用MeOH(2x 30mL)洗涤。将MeOH(50mL)加入至滤液并将其浓缩至初始体积的一半。加入MeOH(100mL)并将其再次浓缩至初始体积的一半。加入NEt₃(12mL，86mmol，2.87当量)并将反应混合物冷却至0℃。黄色溶液用碘在MeOH中的溶液(大约7g/100mL)滴定直至保持橙色。加入硅藻土并将溶剂除去。二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的10％EtOAc)，得到1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-甲酸叔丁酯(876mg，4.44mmol，15％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ＝3.63(d，J＝7.6，2H)，3.00(s，2H)，1.69(t，J＝7.4，2H)，1.46(s，9H)。

c)1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯盐酸盐

将l，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-甲酸叔丁酯(272mg，1.38mmol，1当量)溶解在Et₂O并加入HCl(在二烷中的4M，3.45mL，13.8mmol，10当量)。当TLC指示起始物料完全消耗时，将溶剂除去并且剩余物用Et₂O洗涤，得到1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯盐酸盐(170mg，1.27mmol，92％收率)，为褐色固体。

d)5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

将3-((5-(叔丁基)-7-氯-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑(107mg，0.349mmol，1.00当量)溶解在CH₂Cl₂(1.75mL)中。加入1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯盐酸盐(47mg，0.349mmol，1.00当量)和DIPEA(91μL，0.524mmol，1.5当量)并将其在室温搅拌30min。加入硅藻土并将溶剂除去。二氧化硅上的急骤色谱(在CH₂Cl₂中的1％EtOAc)，得到5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(92mg，0.247mmol，71％收率)，为无色固体。HRMS(ESI+)369.1896(M+H⁺)。

实施例2

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3-{[2-(三氟甲基)苯基]甲基}-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮

将5-氨基-1-(2-(三氟甲基)苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(CAS 93444-92-9，201mg，0.710mmol，1.0当量)加入至2，2-二氟-2-苯乙腈(162mg，1.06mmol，1.5当量)在DMF(2.3mL)中的溶液并加入K₂CO₃(487mg，3.52mmol，5.0当量)。将烧瓶盖上盖并加热至90℃过夜。加入EtOAc(100mL)并将混合物用5％LiCl水溶液和盐水洗涤。用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的60％EtOAc)，得到受污染的级分。收集含产物的级分并浓缩。剩余物用2-PrOH研磨并过滤，得到5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(79mg，27％收率)，为无色固体。HRMS(ESI+)422.1036(M+H⁺)。

b)7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

将5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(50mg，0.119mmol，1.0eq)溶解在CH₂Cl₂(1.2mL)中并加入DMF(3滴)。将反应混合物冷却至0℃并逐滴加入草酰氯(16μl，0.178mmol，1.5eq)。将冷却浴移除并将其在室温搅拌2h。加入另外的草酰氯(11.5μl，0.118mmol)并将反应混合物加热至回流。在1h之后，将反应混合物倒入到饱和NaHCO₃中。用EtOAc萃取，用5％LiCl、盐水洗涤，用MgSO₄干燥并浓缩，接着在二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的10％EtOAc)，得到7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(43mg，82％收率)，为无色固体。HRMS(ESI+)440.0696(M+H⁺)。

c)5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3-{[2-(三氟甲基)苯基]甲基}-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(21mg，0.048mmol)制备标题化合物并分离，为微黄色固体(18mg，75％收率)。HRMS(ESI+)501.1566(M+H⁺)。

实施例3

5-叔丁基-3-[(2-氯苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由5-(叔丁基)-7-氯-3-(2-氯苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(CAS 1433362-85-6，57mg，0.17mmol，1.0当量)制备标题化合物并分离，为无色油状物(65mg，0.16mmol，96％收率)。HRMS(ESI+)397.1646(M+H⁺)。

实施例4

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)2，2，2-三氟-1-(邻甲苯基)乙酮O-甲苯磺酰基肟

在室温，将2，2，2-三氟-1-(邻甲苯基)乙酮肟(CAS 387-57-5，3.12g，15.3mmol，1.0当量)和DMAP(0.19g，1.53mmol，0.1当量)溶解在CH₂Cl₂(51mL)中。在10min内加入TsCl(3.51g，18.4mmol，1.2当量)(放热)并对其进行搅拌直至TLC指示起始物料完全消耗。加入水(100mL)并将混合物用CH₂Cl₂(3x 50mL)萃取。用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着在二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的30％CH₂Cl₂)，得到2，2，2-三氟-1-(邻甲苯基)乙酮O-甲苯磺酰基肟(5.24g，14.7mmol，96％收率)，为非对映体的混合物。HRMS(ESI+)358.0719(M+H⁺)。

b)3-(邻甲苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

将2，2，2-三氟-1-(邻甲苯基)乙酮O-甲苯磺酰基肟(2.89g，8.10mmol，1当量)溶解在Et₂O(22mL)中，冷却至-78℃并引入氨水(大约40mL)。将反应混合物回流5h(干冰冷凝器)，然后温热至室温。过滤(用Et₂O洗涤)，浓缩和进行二氧化硅上的急骤色谱(在戊烷中的10％Et₂O)，得到3-(邻甲苯基)-3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯(diaziridine)(858mg，4.24mmol，53％收率)，将其溶解在Et₂O(17mL)中并用Ag₂O(1.15g，4.96mmol，1.17当量)处理。用硅藻土过滤，浓缩和进行二氧化硅上的急骤色谱(100％戊烷)，得到3-(邻甲苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(786mg，3.93mmol，92％收率)，为淡黄色油状物。¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ＝7.62-7.56(m，1H)，7.40-7.30(m，1H)，7.30-7.21(m，2H)，2.61(s，3H)。

c)3-(2-(溴甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

将3-(邻甲苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(0.5g，2.5mmol，1.0当量)、NBS(1.1g，6.2mmol，2.5当量)和过氧化苯甲酰(30mg，0.13mmol，0.05当量)与CCl₄(25mL)合并并回流，直至TLC指示起始物料完全消耗。浓缩接着二氧化硅上的急骤色谱，得到3-(2-(溴甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(445mg，1.48mmol，59％收率)。¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ＝7.71-7.64(m，1H)，7.55-7.34(m，3H)，4.79(s，2H)。

d)5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

将5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(CAS1438465-59-8，42mg，0.15mmol，1.0当量)和3-(2-(溴甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(55mg，0.18mmol，1.2当量)溶解在DMF(0.7mL)中并加入DBU(29μL，0.19mmol，1.3当量)。将混合物在室温搅拌1h。加入EtOAc(50mL)并将混合物用5％LiCl水溶液(10mL)和盐水(10mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。二氧化硅上的急骤色谱，得到5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(24mg，0.05mmol，34％收率)，为无色油状物。HRMS(ESI+)481.1885(M+H⁺)。

实施例5

5-叔丁基-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)5-(叔丁基)-3-(2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮

将3-(2-溴苄基)-5-(叔丁基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(0.500g，1.38mmol，1.00当量，类似于3-(2-氯苄基)-5-(叔丁基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(CAS 1433362-83-4)制备)、Pd(PhCN)₂Cl₂(26mg，0.07mmol，0.05当量)和CuI(13mg，0.07mmol)加入至火焰干燥的烧瓶并将其抽真空/用N₂回填三次。然后加入无水甲苯(7.7mL)，接着加入PtBu₃(在甲苯中的1M，140μL，0.140mmol，0.1当量)。在加入二异丙基胺(0.295mL，2.07mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(290μL，2.07mmol，1.5当量)之后，将烧瓶盖上盖并加热至50℃过夜。将反应冷却至室温并用硅藻土过滤(用CH₂Cl₂洗涤)。将溶剂除去。剩余物通过二氧化硅上的急骤色谱(己烷/CH₂Cl₂/EtOAc 2∶2∶1)纯化，得到5-(叔丁基)-3-(2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(380mg，1.00mmol，73％收率)，为泡沫。LRMS(ESI+)380.9(M+H⁺)。

b)5-(叔丁基)-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮

将5-(叔丁基)-3-(2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5dd]嘧啶-7(4H)-酮(165mg，0.435mmol，1.00当量)溶解在MeOH(2.17mL)。加入K₂CO₃(300mg，2.17mmol，5.00当量)并将其在室温搅拌直至TLC指示起始物料完全消耗。在浓缩之后，将剩余物溶解在CH₂Cl₂(15mL)中。有机相用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。二氧化硅上的急骤色谱(在CH₂Cl₂中的30％EtOAc)，得到5-(叔丁基)-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(129mg，0.420mmol，97％收率)，为无色固体。LRMS(ESI+)308.2(M+H⁺)。

c)5-(叔丁基)-7-氯-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成3-((5-(叔丁基)-7-氯-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑所述的程序，由5-(叔丁基)-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(100mg，0.325mmol)制备标题化合物并分离，为无色固体(95mg，0.292mmol，90％收率)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝7.57-7.52(m，1H)，7.38-7.27(m，3H)，6.06(s，2H)，3.38(s，1H)，1.44(s，9H)。

d)5-叔丁基-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由5-(叔丁基)-7-氯-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(40mg，0.12mmol)、NEt₃(34μL，0.25mmol，2.0当量)和相应的胺盐(1.2当量)制备标题化合物并分离，为无色油状物(47mg，99％收率)。HRMS(ESI+)387.2036(M+H+)。

实施例6

3-[(2-氯苯基)甲基]-5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-[二氟(苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3-{[2-(三氟甲基)苯基]甲基}-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例2，步骤a-c)所述的程序，由5-氨基-1-(2-氯苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(CAS 93444-91-8)制备标题化合物并分离，为无色油状物。HRMS(ESI+)467.1301(M+H+)。

实施例7

5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)5-氨基-1-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺

以类似于在US专利2013/116236 A1中对于合成5-氨基-1-(2-氯苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(CAS 93444-91-8)所述的程序，由4-甲基-3-氯甲基-1，2，5-二唑(CAS62642-47-1，2.5g，16.2mmol)、NaN₃(1.1g，17.0mmol)和2-氰基乙酰胺(2.04g，24.4mmol)制备标题化合物并分离，为米色固体(2.2g，9.9mmol，61％收率)。

b)5-(二氟(苯基)甲基)-3-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮

将5-氨基-1-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(1.50g，6.72mmol，1.00当量)、2，2-二氟-2-苯乙腈(1.60g，10.5mmol，1.56当量)和K₂CO₃(4.64g，33.6mmol，5.00当量)与DMF(19.2ml)合并并加热至90℃过夜。将反应混合物冷却至室温并倒入冰水中。加入HCl水溶液(1M)直至pH＝3并将其用EtOAc(3x 100mL)萃取。合并的有机物用5％LiCl水溶液和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，留下褐色油状物。剩余物用2-PrOH研磨并过滤，得到淡黄色固体(1.45g)。将滤液浓缩并在二氧化硅上层析(CH₂Cl₂∶丙酮 9∶1+1％MeOH)。将含有产物的级分合并，浓缩并且剩余物再次用2-PrOH研磨，得到另一批的5-(二氟(苯基)甲基)-3-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(合并后1.72g，4.79mmol，71％收率)。HRMS(ESI+)360.1015(M+H⁺)。

c)3-((7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑

将5-(二氟(苯基)甲基)-3-((4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(112mg，0.237mmol，1.00当量)溶解在CH₂Cl₂(790μL)中并加入一滴DMF。逐滴加入草酰氯(42μL，0.474mmol，2.00当量)并将混合物加热至回流达1.5h。将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(30mL)稀释。有机相用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的20％EtOAc)，得到3-((7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑(80mg，0.21mmol，89％收率)，为无色固体。HRMS(ESI+)378.0677(M+H⁺)。

d)5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由3-((7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑(25mg，0.066mmol)制备标题化合物并分离，为无色油状物(25mg，0.057mmol，86％收率)。HRMS(ESI+)461.1365(M+H⁺)。

实施例8

5-叔丁基-3-({2-氯-4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮

将4-溴-2-氯-1-甲基苯(5.0g，24.3mmol，1.0当量)溶解在THF(50mL)并冷却至-78℃。逐滴加入BuLi(在己烷中的1.6M，17mL，27.2mmol，1.12当量)。在加入完成之后，将反应混合物搅拌30min，然后加入2，2，2-三氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4.0g，25.5mmol，1.05当量)。将冷却浴移除并将其搅拌20分钟。反应通过加入饱和NH₄Cl水溶液猝灭并用EtOAc萃取。合并的有机物用HCl水溶液(1M)和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在戊烷中的20％Et₂O)，得到1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮(5.17g，23.2mmol，95％收率)，为黄色油状物。¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ＝8.04(s，1H)，7.89-7.83(m，1H)，7.45-7.39(m，1H)，2.49(s，3H)。

b)1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮肟

将1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮(3.67g，16.5mmol，1.0当量)和羟胺盐酸盐(1.20g，17.3mmol，1.05当量)与EtOH(32mL)合并。加入吡啶(6.7mL，82mmol，5.0当量)并将混合物在70℃搅拌过夜。在冷却至室温之后，加入水(200mL)并将混合物用Et₂O萃取。合并的有机物用HCl(水溶液，0.5M)和盐水洗涤。有机相用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的10％EtOAc)，得到1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮肟(3.45g，14.5mmol，88％收率)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ＝9.24(s，1H)，7.58(s，1H)，7.35(app s，2H)，2.44(s，3H)。

c)3-(4-(溴甲基)-3-氯苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

以类似于对于合成3-(2-(溴甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(实施例4，步骤a-c)所述的程序，由1-(3-氯-4-甲基苯基)-2，2，2-三氟乙酮肟制备标题化合物并分离，为黄色油状物。¹H NMR(300MHz，氯仿-d)δ＝7.48(d，J＝8.2，1H)，7.23-7.18(m，1H)，7.09(d，J＝8.1，1H)，4.56(s，2H)。

d)5-叔丁基-3-({2-氯-4-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例4，步骤d)所述的程序，由5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(CAS1438465-59-8，54mg，0.19mmol，1.0当量)和3-(4-(溴甲基)-3-氯苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(66mg，0.21mmol，1.1当量)制备标题化合物并分离，为微黄色蜡状物(45mg，0.09mmol，46％收率)。HRMS(ESI+)515.1494(M+H⁺)。

实施例9

4-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

a)N-(2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)-4-(羟基甲基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

将3-(丁-3-炔基)-3-(2-氨基乙基)-3H-二氮杂环丙烯(CAS 1450752-97-2，96mg，0.70mmol，1.0当量)溶解在甲苯(2.3mL)中并冷却至0℃。缓慢加入AlMe₃(在甲苯中的2M，370μL，0.74mmol，1.06当量)。在0℃30min后，缓慢加入6H-呋喃并[3，4-c][1，2，5]二唑-4-酮(CAS 73314-58-6，106mg，0.84mmol，1.2当量)在甲苯(1mL)中的溶液。将冷却浴移除并将混合物在室温搅拌1h。形成沉淀，加入THF(1mL)并继续搅拌1h。通过加入Rochelle’s盐(2mL)和水(2mL)的饱和水溶液猝灭反应。加入EtOAc(5mL)并将反应混合物剧烈搅拌1h。用EtOAc(3x 5mL)萃取，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的25％EtOAc)，得到N-(2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)-4-(羟基甲基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺(171mg，0.65mmol，93％收率)，为微黄色油状物。HRMS(ESI+)264.1096(M+H⁺)。

b)甲磺酸(4-((2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)氨基甲酰基)-1，2，5-二唑-3-基)甲基酯

将N-(2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)-4-(羟基甲基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺(87mg，0.33mmol，1.0当量)和NEt₃(69μL，0.50mmol，1.5当量)溶解在CH₂Cl₂(1.1mL)中并冷却至0℃。加入MsCl(31μL，0.40mmol，1.2当量)。在30分钟之后，加入MeOH(0.1mL)和硅藻土并将溶剂除去。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的30％EtOAc至在己烷中的40％EtOAc)，得到甲磺酸(4-((2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)氨基甲酰基)-1，2，5-二唑-3-基)甲基酯(90mg，0.26mmol，80％收率)，为无色油状物。HRMS(ESI+)364.0692(M+H⁺)。

c)4-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

以类似于对于合成5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶所述的程序，由甲磺酸(4-((2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)氨基甲酰基)-1，2，5-二唑-3-基)甲基酯(45mg，0.13mmol，1.0当量)、NEt₃(37μL，0.26mmol，2.0当量)和5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(CAS 1438465-59-8，37mg，0.13mmol，1.0当量)制备标题化合物并分离，为无色油状物(13mg，0.025mmol，19％收率)。HRMS(ESI⁺)528.2387(M+H⁺)。

实施例10

4-({5-叔丁基-7-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基}甲基)-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

以类似于对于合成4-{[5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]甲基}-N-{2-[3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]乙基}-1，2，5-二唑-3-甲酰胺(实施例9，步骤c)所述的程序，由(3S)-1-(5-叔丁基-3H-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇(CAS 1433946-74-7，31mg，0.12mmol，1.0当量)、甲磺酸(4-((2-(3-(丁-3-炔-1-基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)乙基)氨基甲酰基)-1，2，5-二唑-3-基)甲基酯(40mg，0.12mmol，1.0当量)和NEt₃(33μL，0.23mmol，2.0当量)制备标题化合物并分离，为无色油状物(8mg，0.016mmol，13％收率)。HRMS(ESI+)508.2525(M+H⁺)。

实施例11

5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，6-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-6-基)三唑并[4，5-d]嘧啶

a)5-氨基-1-(2-乙炔基苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺

以类似于在US专利2013/116236 A1)中对于合成5-氨基-1-(2-氯苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(CAS 93444-91-8)所述的程序，由甲磺酸2-乙炔基苄基酯(2.20g，10.5mmol，1.00当量)、2-氰基乙酰胺(1.32g，15.7mmol，1.5当量)和叠氮化钠(714mg，11.0mmol，1.05当量)合成所述化合物并分离，为米色固体(1.81g，7.50mmol，72％)。HRMS(ESI+)264.0855(M+Na⁺)。

b)7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

将5-氨基-1-(2-乙炔基苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(482mg，2.00mmol，1.00当量)、2，2-二氟-2-苯乙腈(CAS 2002-72-4，487mg，3.18mol，1.59当量)和碳酸钾(1.38g，10.0mmol，5.00当量)与DMF(6.7mL)合并。将烧瓶密封并在90℃加热3h。在冷却至室温之后，加入1M HCl水溶液(25mL)。沉淀通过过滤分离并干燥(用甲苯共沸蒸馏)，得到粗制物料。将粗制物溶解在CH₂Cl₂(5mL)和甲苯(5mL)的混合物中。加入DMF(3滴)和草酰氯(350μL，4.00mmol，2.00当量)并将反应混合物加热至65℃。在通过TLC分析判断完全转化后，混合物用EtOAc(100mL)稀释并用饱和碳酸氢钠、5％LiCl水溶液和盐水洗涤。用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的5％EtOAc)，得到标题化合物(450mg，1.14mmol，57％)。

c)5-[二氟(苯基)甲基]-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，6-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-6-基)三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(2-乙炔基苯基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例5，步骤d)所述的程序，由7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-乙炔基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(50mg，0.13mmol)、NEt₃(26μL，0.25mmol，1.5当量)和相应的胺盐(1.5当量)制备标题化合物并分离，为无色泡沫(45mg，0.10mmol，78％收率)。HRMS(ESI+)479.1513(M+Na⁺)。

实施例12

5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶

a)2，6-二碘苄醇

将2，6-二碘苯甲酸(CAS 194084-84-9，2.13g，5.35mmol，1.00当量)悬浮在CH₂Cl₂(10.7mL)中。加入DMF(3滴)和草酰氯(0.52mL，5.9mmol，1.1当量)。当鼓泡结束时，将反应混合物加热至回流达30分钟(TLC指示起始物料完全消耗)。将其用CH₂Cl₂稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗制酰氯溶解在MeCN和THF的1∶1混合物(30mL)中。在室温将NaBH₄(405mg，10.7mmol，2.00当量)(放热)分几部分加入。在30min后，TLC指示酰氯完全转化。缓慢加入MeOH(5mL)并将所得混合物用水稀释。用EtOAc(3x100mL)萃取，用盐水(100mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的15％EtOAc至20％至50％)，得到标题化合物，为无色固体(1.55g，4.31mmol，80％)。HRMS(MALDI)382.8399(M+Na⁺)。

b)1，3-二碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯

将2，6-二碘苄醇(1.61g，4.47mmol，1.00当量)溶解在DMF中并冷却至0℃。加入NaH(在矿物油中的60％，215mg，5.37mmol，1.20当量)并将混合物搅拌20min。加入4-甲氧基苄氯(0.67mL，4.9mmol，1.1当量)并将冷却浴移除。在30min之后，反应通过加入饱和NH₄Cl水溶液(5mL)猝灭。混合物用EtOAc(3x 50mL)萃取。合并的有机物用5％LiCl水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的5％EtOAc)，得到标题化合物，为无色固体(1.9g，4.0mmol，88％)。HRMS(MALDI)479.9078(M⁺)。

c)2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮

将1，3-二碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯(1.9g，4.0mmol，1.0当量)溶解在THF(8mL)中并冷却至-30℃。加入iPrMgCl·LiCl(0.87M，5.0mL，4.35mmol，1.10当量)溶液并将所得的溶液搅拌2.5h，同时使温度升高至-20℃。加入N-甲氧基-N-甲基三氟乙酰胺(0.68g，4.4mmol，1.1当量)，将冷却浴移除并将反应搅拌过夜。加入饱和NH₄Cl水溶液并将其用EtOAc萃取。有机物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱，得到标题化合物，为无色油状物(1.04g，2.31mmol，58％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ7.95(dd，J＝7.9，1.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝7.6，1.0Hz，1H)，7.25(d，J＝8.1Hz，2H)，7.09(t，J＝7.8Hz，1H)，6.90(d，J＝8.7Hz，2H)，4.57(s，2H)，4.48(s，2H)，3.82(s，3H)。

c)2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮肟

将2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮(1.04g，2.31mmol，1.00当量)与EtOH(4.6mL)、羟胺盐酸盐(193mg，2.77mmol，1.20当量)和吡啶(0.28mL，3.5mmol，1.5当量)合并。将混合物在80℃加热直至TLC指示起始物料完全消耗。浓缩和进行二氧化硅上的急骤色谱，得到标题化合物(680mg，1.46mmol，63％)。

d)2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮O-甲苯磺酰基肟

将2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮肟(680mg，1.46mmol，1.00当量)溶解在CH₂Cl₂(3mL)中。加入TsCl(307mg，1.61mmol，1.10当量)和DMAP(18mg，0.15mmol，0.10当量)并将混合物在室温搅拌。当TLC指示起始物料完全消耗时，加入水。用CH₂Cl₂萃取，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着进行急骤色谱，得到标题化合物，为对映体的2∶1混合物(529mg，0.85mmol，58％)。

e)3-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

将2，2，2-三氟-1-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)乙酮O-甲苯磺酰基肟(529mg，0.85mmol，1.00当量)溶解在Et₂O(6mL)中并冷却至-78℃。然后引入氨水(大约6mL)并将反应混合物在回流下搅拌4h。将冷却浴移除并将挥发物除去。将剩余物悬浮在二乙醚中并过滤。将滤液浓缩。加入MeOH(10mL)并在减压下除去(2x)以除去剩余的氨。将剩余物溶解在MeOH(10mL)中并与NEt₃(0.6mL，4.3mmol，5.0当量)合并。混合物用碘在MeOH中的溶液滴定直至持续存在黄褐色。混合物用水(200mL)和饱和硫代硫酸钠水溶液(2mL)稀释。用EtOAc(3x 50mL)萃取，用盐水(50mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，接着进行二氧化硅上的急骤色谱，得到标题化合物，为浅黄色油状物(211mg，0.46mmol，54％)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ7.97(dt，J＝8.0，1.0Hz，1H)，7.65(d，J＝7.7Hz，1H)，7.44-7.37(m，2H)，7.06(td，J＝7.8，0.8Hz，1H)，6.93-6.88(m，2H)，4.89(s，2H)，4.68(s，2H)，3.82(d，J＝0.8Hz，3H)。

f)3-(2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

将3-(3-碘-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(196mg，0.424mmol，1.00当量)与DMF(1.4mL，通过冻融法脱气)，PdCl₂(PPh₃)₂(30mg，0.042mmol，0.10当量)、CuI(16mg，0.085mmol，0.20当量)和NEt₃(0.12mL，0.85mmol，2.0当量)合并。加入三甲基甲硅烷基乙炔(89μL，0.64mmol，1.5当量)并将混合物在室温搅拌20min。反应混合物用5％LiCl水溶液稀释并用二乙醚萃取。有机物用5％LiCl水溶液和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的2％EtOAc)，得到标题化合物，为黄色油状物(146mg，0.34mmol，80％)。HRMS(ESI⁺)450.1819(M+NH₄ ⁺)。

g)3-(3-乙炔基-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯

将3-(2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(146mg，0.338mmol，1.00当量)溶解在MeOH(1mL)中并加入K₂CO₃(52mg，0.38mmol，1.1当量)。在1.5h之后，加入饱和NH₄Cl水溶液并且混合物用Et₂O(3x30mL)萃取。有机物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的3％EtOAc)，得到标题化合物，为黄色油状物。HRMS(ESI⁺)383.0978(M+Na⁺)。

h)甲磺酸2-乙炔基-6-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苄基酯

在0℃，将3-(3-乙炔基-2-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)苯基)-3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯(318mg，0.883mmol，1.00当量)与CH₂Cl₂(8mL)和H₂O(0.8mL)合并。加入DDQ(301mg，1.32mmol，1.50当量)并对其进行搅拌直至TLC指示起始物料完全消耗。加入饱和碳酸氢钠水溶液并且混合物用CH₂Cl₂萃取。有机物用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。用二氧化硅塞过滤(在己烷中的20％EtOAc)，得到中间体苄醇和对甲氧基苯甲醛的混合物。将混合物溶解在CH₂Cl₂(8mL)中并冷却至0℃。加入NEt₃(0.18mL，1.3mmol，1.5当量)，接着加入MsCl(76μL，0.97mmol，1.1当量)。在20min之后，反应通过加入饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用CH₂Cl₂萃取，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的15％EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(244mg，0.767mmol，87％)。在静置后物料变为红色并且在冰箱中固化。HRMS(ESI⁺)341.0178(M+Na⁺)。

i)5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮

以类似于对于合成5-(二氟(苯基)甲基)-3-(2-(三氟甲基)苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮(实施例2，步骤b)所述的程序，由5-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺(CAS 133992-53-7，2.0g，8.1mmol，1.0当量)和2，2-二氟-2-苯乙腈制备标题化合物并分离，为无色固体(2.0g，5.2mmol，65％)。¹H NMR(400MHz，DMSO)δ13.57(s，1H)，7.75-7.66(m，2H)，7.64-7.53(m，3H)，7.27(d，J＝8.4Hz，2H)，6.88(d，J＝8.2Hz，2H)，5.64(s，2H)，3.72(s，3H)。

j)7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成3-((5-(叔丁基)-7-氯-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基)甲基)-4-甲基-1，2，5-二唑(实施例1，步骤a)所述的程序，由5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7(4H)-酮制备标题化合物并分离，为无色固体(1.21g，3.01mmol，93％)。HRMS(ESI⁺)402.0928(M+H⁺)。

k)5-(二氟(苯基)甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(622mg，1.55mmol，1.00当量)和3，3-二氟吡咯烷盐酸盐(244mg，1.70mmol，1.10当量)制备标题化合物并分离，为无色固体(600mg，1.27mmol，82％)。HRMS(ESI⁺)473.1707(M+H⁺)。

1)5-(二氟(苯基)甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶

将5-(二氟(苯基)甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(200mg.0.423mmol.1.00当量)与苯甲醚(1.40mL，12.8mmol，30.3当量)和三氟乙酸(6.5mL)合并并在65℃加热5h。在除去挥发物之后，将剩余物放入EtOAc(50mL)中并用NaOH水溶液(1M，3x 10mL)洗涤。水相用EtOAc(2x 20mL)反萃取。合并的有机物用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的50％EtOAc至100％)，得到被未确定副产物污染的产物。将固体用EtOH研磨并过滤，留下棕黄色固体。将洗涤液浓缩并且将剩余物用在己烷中的20％EtOAc研磨。将悬浮液过滤并将滤饼用相同溶剂混合物洗涤，得到另一批的产物(总计74mg，0.21mmol，50％)。HRMS(ESI⁺)353.1136(M+H⁺)。

m)5-[二氟(苯基)甲基]-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶

以类似于对于合成5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-({2-[3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基]苯基}甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例4，步骤d)所述的程序，由5-(二氟(苯基)甲基)-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(23mg，0.065mmol，1.00当量)和甲磺酸2-乙炔基-6-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苄基酯(27mg，0.085mmol，1.3当量)制备标题化合物并分离，为浅黄色油状物(11mg，0.019mmol，29％收率)。HRMS(ESI⁺)575.1537(M+H⁺)。

实施例13

5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶

将5-叔丁基-7-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(CAS1438465-59-8，23mg，0.072mmol，1.0当量)和甲磺酸2-乙炔基-6-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苄基酯(24mg，0.085mmol，1.2当量)溶解在DMF(0.5mL)中。加入三甲胺(20μL，0.15mmol，2.0当量)并将其在室温搅拌过夜。反应混合物用EtOAc(60mL)稀释，用5％LiCl水溶液(2x 20mL)和盐水(1x 20mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的5％EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(14mg，0.028mmol，38％)。HRMS(ESI⁺)505.1881(M+H⁺)。

实施例14

(3S)-1-[5-叔丁基-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇

将(3S)-1-(5-叔丁基-3H-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇(23mg，0.088mmol，1.20当量)和甲磺酸2-乙炔基-6-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苄基酯(23mg，0.072mmol，1.00当量)溶解在DMF(0.5mL)中。加入三乙胺(15μL，0.11mmol，1.5当量)并将其搅拌过夜。反应混合物用EtOAc(60mL)稀释，用5％LiCl水溶液(2x 20mL)和盐水(1x 20mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。粗品通过二氧化硅上的急骤色谱(在己烷中的30％EtOAc+5％AcOH)纯化。收集含产物的级分，用饱和NaHCO₃和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为无色油状物(8mg，0.017mmol，23％)。HRMS(ESI⁺)485.2018(M+H⁺)。

实施例15

(3S)-1-[5-[二氟(苯基)甲基]-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇

a)(S)-1-(5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇

以类似于对于合成5-叔丁基-3-[(4-甲基-1，2，5-二唑-3-基)甲基]-7-(1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯-5-基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(实施例1，步骤d)所述的程序，由7-氯-5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(272mg，0.677mmol，1.00当量)和(S)-吡咯烷-3-醇(65mg，0.75mmol，1.1当量)制备标题化合物并分离，为无色泡沫(291mg，0.643mmol，95％)。HRMS(ESI⁺)453.1850(M+H⁺)。

b)(S)-1-(5-(二氟(苯基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇

将(S)-1-(5-(二氟(苯基)甲基)-3-(4-甲氧基苄基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇(141mg，0.312mmol)溶解在三氟乙酸(4.38mL)中并加热至70℃达3h。LCMS指示产物形成和相应三氟乙酰基酯形成。在除去挥发物之后，将剩余物溶解在MeOH(3mL)和THF(3mL)中。加入K₂CO₃(215mg，1.59mmol，5.0当量)并将其搅拌30分钟。LCMS指示主要为所需产物和少量的起始物料的两种异构体，据推测是由于所需产物与作为烷基化剂的三氟乙酸苄酯的非选择性反应所致。反应混合物用稀HCl中和并浓缩。进行二氧化硅上的急骤色谱(在EtOAc中的5％MeOH至10％至30％)，得到无色固体(220mg)。将物料分配在EtOAc和饱和NaHCO₃之间。将水相除去。有机相用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为微黄色固体(69mg，0.21mmol，67％)。

c)(3S)-1-[5-[二氟(苯基)甲基]-3-[[2-乙炔基-6-[3-(三氟甲基)二氮杂环丙烯-3-基]苯基]甲基]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基]吡咯烷-3-醇

将(S)-1-(5-(二氟(苯基)甲基)-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)吡咯烷-3-醇(32mg，0.096mmol，1.0当量)和甲磺酸2-乙炔基-6-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苄基酯(31mg，0.097mmol，1.0当量)溶解在DMF(0.5mL)中。加入DIPEA(25μL，0.15mmol，1.5当量)并将混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，用5％LiCl水溶液(2x 20mL)和盐水(1x 20mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。制备型TLC(在己烷中的20％EtOAc+20％AcOH)得到标题化合物，为无色蜡状物(18mg，0.032mmol，34％)。HRMS(ESI⁺)555.1676(M+H⁺)。

实施例16

药理学试验

进行以下试验以确定式(I)的化合物的活性：

放射性配体结合测定

本发明化合物对大麻素受体的亲和性的确定分别使用建议量的表达人CNR1或CNR2受体的人胚胎肾(HEK)细胞的膜制品(PerkinElmer)，并且结合使用1.5或2.6nM[3H]-CP-55，940(Perkin Elmer)作为放射性配体。结合在总体积为0.2mL的结合缓冲液(对于CB1受体为50mM Tris，5mM MgCl₂、2.5mM EDTA，和0.5％(wt/vol)无脂肪酸BSA，pH 7.4，和对于CB2受体为50mM Tris，5mM MgCl₂、2.5mM EGTA，和0.1％(wt/vol)无脂肪酸BSA，pH 7.4)中进行，在30℃振荡1h。通过经涂布有0.5％聚乙烯亚胺的微过滤板(UniFilter GF/B过滤板；Packard)快速过滤将反应终止。对于Ki使用非线性回归分析(Activity Base，ID Business溶液，Limited)来分析结合的放射性，对于[³H]CP55，940的Kd值从饱和试验确定。式(I)化合物显示对于CB2受体的优异亲和性，并且亲和性低于10μM，更特别地为1nM至3μM并且最特别地为1nM至100nM。

在上述测定(Ki)中，根据式(I)的化合物具有的活性特别地为0.5nM至10μM，更特别地为0.5nM至3μM并且最特别地为0.5nM至100nM。

所有化合物都是CB2结合剂，其中Ki值低于3uM并且在相应的测定中相对于CB1至少9倍的选择性。

cAMP测定

将表达人CB1或CB2受体的CHO细胞在实验之前17-24小时以50.000个细胞/孔接种在具有透明平底的黑色96孔平板(Corning Costar#3904)中、在DMEM(InvitrogenNo.31331)中，补充1x HT，具有10％胎牛血清，并在湿润的培养箱中在5％CO₂和37℃下温育。将培养基用具有1mM IBMX的Krebs Ringer Bicarbonate缓冲液交换，并且在30℃温育30分钟。加入化合物至最终测定体积为100μL，并且在30℃温育30分钟。使用cAMP-Nano-TRF检测试剂盒(Roche Diagnostics)，通过加入50μL裂解试剂(Tris，NaCl，1.5％TritonX100，2.5％NP40，10％NaN₃)和50μL检测溶液(20μM mAb Alexa700-cAMP 1∶1，和48μM钌-2-AHA-cAMP)终止测定，并且室温振荡2h。通过装备有ND∶YAG激光器作为激发源的TRF读出器(Evotec Technologies GmbH)测量时间分辨能量转移。将平板测量两次，在355nm激发和分别在730(带宽30nm)或645nm(带宽75nm)以100ns的延迟和100ns的栅极(gate)发射，总暴露时间是10s。FRET信号的计算如下：FRET＝T730-Alexa730-P(T645-B645)，P＝Ru730-B730/Ru645-B645，其中T730是在730nM测量的测试孔，T645是在645nm测量的测试孔，B730和B645是分别在730nm和645nm的缓冲液对照。cAMP含量从跨度为从10μM至0.13nM cAMP的标准曲线的函数来测定。

使用Activity Base分析(ID Business溶液，Limited)测定EC₅₀值。从该测定产生的宽范围的大麻素激动剂的EC₅₀值与科学文献中公开的值吻合。

β-抑制蛋白易位测定-PathHunter^TM(DiscoveRx)

PathHunter^TM β-抑制蛋白CHO-K1 CNR1细胞系(目录号#93-0200C2)和β-抑制蛋白CHO-K1 CNR2细胞系(目录号#93-0706C2)购自DiscoveRx Corporation。将该细胞系遗传改造以表达融合至β-抑制蛋白的β-半乳糖苷酶EA片段和融合至靶受体的ProLink互补肽。PathHunter^TM蛋白质互补测定(DiscoveRx Corporation#93-0001)根据制造商协议进行。在20μL细胞铺板试剂2(Discoverx#93-0563R2A)中，在384孔板(Corning Costar#3707，白色，透明底部)中对测定板接种含有7500个(CNR1)和10000个(CNR2)细胞。在37℃(5％CO₂，95％相对湿度)温育过夜之后，加入5μL的试验化合物(1％终DMSO浓度)并在30℃继续温育90min。然后加入检测试剂(12μL)并在室温继续温育60min。然后利用Victor³V读数器(Perkin Elmer)分析这些板的化学发光信号。

实施例A

可以以常规方式制备含有下列成分的薄膜包衣片剂：

<u>成分</u>	<u>每片</u>
			核：
式(I)的化合物	10.0mg	200.0mg
			微晶纤维素	23.5mg	43.5mg
含水乳糖	60.0mg	70.0mg
			聚维酮(Povidone)K30	12.5mg	15.0mg
淀粉羟乙酸钠	12.5mg	17.0mg
			硬脂酸镁	1.5mg	4.5mg
(核重)	120.0mg	350.0mg
			薄膜包衣：
羟丙基甲基纤维素	3.5mg	7.0mg
			聚乙二醇6000	0.8mg	1.6mg
滑石	1.3mg	2.6mg
			氧化铁(黄)	0.8mg	1.6mg
二氧化钛	0.8mg	1.6mg

筛分活性成分，并将活性成分与微晶纤维素混和，并将混合物用聚乙烯吡咯烷酮的水溶液制粒。然后将颗粒与淀粉羟乙酸钠和硬脂酸镁混和并且压制，分别获得120或350mg的核。将所述核用上述薄膜包衣的水溶液/悬浮液包衣。

实施例B

可以以常规方式制备含有下列成分的胶囊：

<u>成分</u>	<u>每片</u>
		式(I)的化合物	25.0mg
乳糖	150.0mg
		玉米淀粉	20.0mg
滑石	5.0mg

筛分组分，并混合和填充到2号胶囊中。

实施例C

注射液可以具有下列组成：

式(I)的化合物	3.0mg
		聚乙二醇400	150.0mg
乙酸	适量加至pH 5.0
		注射液用水	加至1.0ml

将活性成分溶解在聚乙二醇400和注射用水(一部分)的混合物中。通过加入乙酸将pH调到5.0。加入余量的水将体积调到1.0ml。将溶液过滤，采用适当过量装入小瓶中并灭菌。

Claims

1.一种式(I)的化合物，

其中

R²和R³独立地选自氢、卤素和羟基；

R⁴是烷基或苯基卤代烷基；

或其药用盐或酯。

2.根据权利要求1的化合物，其中R¹是选自苯基或[1，2，5]二唑基的环，其中所述环被一个或两个独立地选自以下各项的取代基取代：烷基、卤代烷基、卤代烷基二氮杂环丙烯基、炔基、炔基二氮杂环丙烯基烷基氨基羰基和氰基。

3.根据权利要求1或2的化合物，其中R¹是甲基[1，2，5]二唑基、三氟甲基苯基、三氟甲基二氮杂环丙烯基苯基、乙炔基苯基、丁炔基二氮杂环丙烯基乙基氨基羰基[1，2，5]二唑基或(三氟甲基二氮杂环丙烯基)(氰基)苯基。

4.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R²是氢并且R³是羟基，或者R²和R³与它们所连接的碳原子一起形成二氮杂环丙烯基，或者R²和R³二者同时为氟。

5.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R⁴是叔丁基或苯基二氟甲基。

6.根据权利要求1至5任一项的化合物，所述化合物选自

7.根据权利要求1至6任一项的化合物，所述化合物选自

8.一种用于制备根据权利要求1至7任一项的化合物的方法，所述方法包括使式(A)的化合物

在式(B)的化合物和碱存在下反应，

其中R¹至R⁴如权利要求1至5中任一项所定义。

9.根据权利要求8的方法制造的根据权利要求1至7中任一项的化合物。

10.根据权利要求1至7中任一项的化合物，其用作治疗活性物质。

11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项的化合物和治疗惰性载体。

12.根据权利要求1至7中任一项的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应。

13.根据权利要求1至7中任一项的化合物，其用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应。

14.一种用于治疗或预防疼痛、神经性疼痛、动脉粥样硬化、老年性黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、青光眼、糖尿病、炎症、炎性肠病、缺血再灌注损伤、急性肝功能衰竭、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、系统性纤维化、急性同种异体移植排斥、慢性同种异体移植肾病、糖尿病性肾病、肾小球性肾病、心肌病、心力衰竭、心肌缺血/梗死、系统性硬化病、热伤、烧伤、增生性瘢痕、瘢痕瘤、牙龈炎发热、肝硬变或肿瘤、骨量调节、神经变性、卒中、暂时性局部缺血发作、葡萄膜炎、哮喘、骨质疏松、精神疾病、精神病、肿瘤、脑炎、疟疾、变态反应、免疫性病症、关节炎、胃肠道病症、类风湿性关节炎或变态反应的方法，所述方法包括将有效量的根据权利要求1至7中任一项的化合物对有需要的患者给药。

15.根据权利要求1至7中任一项的化合物用于对CB2受体进行检测或成像的用途。

16.如上文所述的发明。