CN109406673A - 一种金水宝胶囊的指纹图谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种金水宝胶囊的指纹图谱检测方法,所述方法包括以下步骤步骤1,供试品溶液的制备:取金水宝胶囊加入甲醇,超声处理,加甲醇定容滤过,取续滤液至蒸发皿中,蒸发溶剂至干,残渣用水溶解,定容,滤过,续滤液为供试品溶液;步骤2,将供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定,记录色谱图;步骤3,将色谱图和标准指纹图谱对照,两者符合,为合格品。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂的检测方法,具体涉及一种金水宝胶囊的中药制剂指纹图谱检测方法。
背景技术
金水宝胶囊为纯发酵虫草菌粉(CS-4)直接填充,未添加任何辅料及防腐剂。具有:补益肺肾,秘精益气。用于肺肾两虚,精气不足,久咳虚喘,神疲乏力,不寐健忘,腰膝痠软,月经不调,阳痿早泄;慢性支气管炎、慢性肾功能不全、高脂血症、肝硬化见上述证候者,在临床上具有较好的疗效。
金水宝胶囊处方:发酵虫草菌粉(CS-4)330g。
制法:取发酵虫草菌粉(Cs-4),装入胶囊,制成1000粒,即得。
规格:每粒装0.33克。
金水宝胶囊标准在中国药典2015版一部中有质量控制方法,分别对发酵虫草菌粉进行性状、鉴别、检查和含量测定,此方法不能有效控制药品的批间差异。
本发明采用中药指纹图谱相似度评价系统对金水宝胶囊进行相似度评价,采用高效液相色谱法对金水宝胶囊进行指纹图谱进行测定。增加中药指纹图谱测定,能有效鉴别样品的真伪或产地,能够体现主要成分的特性,更好地控制金水宝胶囊批间的差异,保证药品的整体质量。
发明内容
本发明的金水宝胶囊指纹图谱检测方法,包括以下步骤:
步骤1,供试品溶液的制备:取金水宝胶囊内容物加入甲醇,超声处理,加甲醇定容滤过,取续滤液至蒸发皿中,蒸发溶剂至干,残渣用水溶解,定容,滤过,续滤液为供试品溶液;
步骤2,将供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定,记录色谱图;
步骤3,将所得色谱图和标准指纹图谱对照,两者符合,为合格品;
其中,色谱条件如下:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm;以甲醇为流动相A,以磷酸二氢钾溶液为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为260nm,理论板数按腺苷峰计算不低于5000,其中梯度洗脱流程如下:
优选的,所述的方法,包括以下步骤:
步骤1,供试品溶液的制备取金水宝胶囊内容物,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,得续滤液;
步骤2,精密吸取上步所得续滤液l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,
步骤3,将色谱图和标准指纹图谱对照,供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。
最优选的,本发明的金水宝胶囊指纹图谱检测方法,包括以下步骤:
步骤1,供试品溶液的制备取金水宝胶囊20粒,除去胶囊壳,精密称定,混匀,取约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率500W,频率40kHz)20分钟,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,得续滤液;
步骤2,精密吸取上步所得续滤液l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,
步骤3,将色谱图和标准指纹图谱对照,供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算,供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。
本发明进一步提供一种金水宝胶囊标准指纹图谱的建立方法,所述方法步骤如下:
步骤1,参照物溶液的制备取尿苷、鸟苷及腺苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml分别各含25μg的混合溶液,即得;
步骤2,供试品溶液的制备取金水宝胶囊内容物,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,取续滤液,即得;
步骤3,分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图;
其中,色谱条件如下:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm;以甲醇为流动相A,以磷酸二氢钾溶液为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为260nm,理论板数按腺苷峰计算不低于5000,其中梯度洗脱流程如下:
步骤4,对多批次合格金水宝胶囊样品进行上述色谱检测,所得色谱图经过计算机模拟软件综合,得到标准指纹图谱。
本发明的检测方法是经过试验筛选的得到的,下面以实验例对本发明进行进一步说明。
试验例
1、提取溶剂的选择:以药典方法的提取条件为参考,实验分别用50%、70%、100%甲醇为溶剂,分别精密加入50ml,结果表明提取效果70%甲醇提取充分,选择70%甲醇作为提取溶剂。见表1。
表1提取溶剂的选择
2、提取体积的选择:以药典方法的提取条件为参考,实验分别用70%甲醇为溶剂,分别精密加入25ml、50ml、100ml,结果表明提取效果20ml<50ml=100ml,考虑环保,减少甲醇的用量,选择70%甲醇50ml作为提取溶剂。见表2
表2提取体积的选择
3、超声时间的选择:以10、20、30分钟进行实验,结果表明提取效果10<20=30,因此选择20分钟作为超声时间。见表3。
表3超声条件的选择
4、对照图谱的建立:取金水宝胶囊10批样品按正文进行实验,记录色谱图,导入中药指纹图谱评价系统中,参照时间窗为0.1,以尿苷、鸟苷、腺苷参照物进行多点校正,进行全峰匹配,生成对照图谱,见图4。
5方法学验证
5.1专属性:取缺发酵虫草菌粉阴性样品、金水宝胶囊170610按照正文进行实验,结果表明阴性样品无干扰,专属性较好,见图1、图2、图3
5.2精密度:取170610样品按正文进行实验,分别称取6份,记录色谱图,并计算相似度,6次的均值为0.9718,且RSD为0.04%。表明精密度良好。见表4。
表4精密度实验
5.3稳定性实验:取5.2样品1,分别0、2、8、12、16、24小时注入液相,记录色谱图,并计算相似度,12小时内均值为0.986,且RSD为1.0%。16、24小时的相似度为0.725、0.573表明该供试品溶液12小时内较稳定,过了12小时后供试品溶液不稳定。见表5。
表5稳定性实验
5.4耐用性实验:取色谱柱welch(AQ-C18),phenomenex-C18Sepax HP-C18(PN103185-4625)进行实验,结果分离度、相似度均符合要求,说明耐用性良好。见表6。
表6耐用性实验
5.5小结:依据上述实验结果表明:该方法专属性、精密度、稳定性、耐用性良好,可有效控制药品的整体质量。
附图说明
图1空白指纹图谱
图2参照物指纹图谱
图3样品170610指纹图谱
图4对照指纹图谱:共有7个峰,峰1 峰2:尿嘧啶 峰3:鸟嘌呤 峰4:尿苷 峰5:腺嘌呤 峰6:鸟苷 峰7:腺苷
具体实施方式
实施例1金水宝胶囊指纹图谱的建立
处方:发酵虫草菌粉(CS-4)330g。
制法:取发酵虫草菌粉(Cs-4),装入胶囊,制成1000粒,即得。
质量控制方法:
【指纹图谱】照高效液色谱法(中国药典通则四部通则0512)
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm);以甲醇为流动相A,以0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为260nm。理论板数按腺苷峰计算应不低于5000。
参照物溶液的制备取尿苷、鸟苷及腺苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml分别各含25μg的混合溶液,即得。
供试品溶液的制备取内容物约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率500W,频率40kHz)20分钟,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,取续滤液,即得。
分别精密吸取参照物溶液与多批次供试品溶液各l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。
所得多批次合格样品的色谱图经过计算机模拟软件综合,得到标准的合格样品的高效液相色谱图,即指纹图谱。
实施例2
金水宝胶囊(批号151231)是否为合格样品的检测方法:
供试品溶液的制备取金水宝胶囊内容物约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率500W,频率40kHz)20分钟,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,取续滤液,即得。
精密吸取供试品溶液l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm);以甲醇为流动相A,以0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为260nm。理论板数按腺苷峰计算应不低于5000。
所得样品图谱与对照图谱导入中药相似度评价系统,计算相似度,结果为0.986。大于0.90,结果合格。
实施例3
金水宝胶囊(180516)是否为合格样品的检测方法:
供试品溶液的制备取内容物约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功率500W,频率40kHz)20分钟,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至50ml容量瓶中,滤过,取续滤液,即得。
精密吸取供试品溶液l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm);以甲醇为流动相A,以0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为260nm。理论板数按腺苷峰计算应不低于5000。
所得样品图谱与对照图谱导入中药相似度评价系统,计算相似度,结果为0.995。大于0.90,结果合格。
Claims (3)
1.一种金水宝胶囊的指纹图谱检测方法,其特征在于,包括以下步骤
步骤1,供试品溶液的制备:取金水宝胶囊内容物加入甲醇,超声处理,加甲醇定容滤过,取续滤液至蒸发皿中,蒸发溶剂至干,残渣用水溶解,定容,滤过,续滤液为供试品溶液;
步骤2,将供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定,记录色谱图;
步骤3,将所得色谱图和标准指纹图谱对照,两者符合,为合格品;
其中,色谱条件如下:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm;以甲醇为流动相A,以磷酸二氢钾溶液为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为260nm,理论板数按腺苷峰计算不低于5000,其中梯度洗脱流程如下:
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,供试品溶液的制备取金水宝胶囊内容物,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,得续滤液;
步骤2,精密吸取上步所得续滤液l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图,
步骤3,将色谱图和标准指纹图谱对照,供试品指纹图谱中应分别呈现与参照物色谱峰保留时间相同的色谱峰。
3.一种金水宝胶囊标准指纹图谱的建立方法,所述方法步骤如下:
步骤1,参照物溶液的制备取尿苷、鸟苷及腺苷对照品适量,精密称定,加水制成每1ml分别各含25μg的混合溶液,即得;
步骤2,供试品溶液的制备取金水宝胶囊内容物,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理,取出,放冷,再称定重量,加70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液25ml至蒸发皿中,回收溶剂至干,残渣用水溶解,定容至25ml容量瓶中,滤过,取续滤液,即得;
步骤3,分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各l0μl,注入液相色谱仪,测定,记录色谱图;
其中,色谱条件如下:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm;以甲醇为流动相A,以磷酸二氢钾溶液为流动相B,进行梯度洗脱;检测波长为260nm,理论板数按腺苷峰计算不低于5000,其中梯度洗脱流程如下:
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20190301 |