CN109187801B - 浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法 - Google Patents

浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物检测领域，涉及一种浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法，本发明所解决的技术问题为提供一种准确度高、精密度好、专属性强及稳定性较好的人工麝香含量的检测方法。本发明所述浓缩活心丸中人工麝香含量使用气相色谱法测定，色谱条件与方法为：采用聚乙二醇20000(PEG‑20M)毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟；先制备对照品溶液和供试品溶液，然后精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得。所述浓缩活心丸每1g含人工麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于1.0mg。本发明对有效的控制浓缩活心丸质量具有重要的指导意义。

Description

浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法
技术领域
本发明涉及属于药物检测领域，具体涉及一种浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法。
背景技术
麝香为中药材的一种，其药用来源为麝科动物，如林麝、马麝或原麝等成熟的雄体腺囊中的干燥分泌物。麝香性温、无毒、味苦。入心、脾、肝经，有开窍、辟秽、通络、散淤之功能。主治中风、痰厥、惊痫、中恶烦闷、心腹暴痛、跌打损伤、痈疽肿毒。麝香常常被用在医药中，量少而功效强，药物中麝香的含量对药物质量具有很大的影响；此外因麝香资源短缺，虽有人工麝香作为替代品，但其价格依旧昂贵，因此市场上假冒、伪劣情况很多，为保证药品质量，多以测定麝香的含量来控制天然麝香及含麝香的中成药质量。
麝香酮是天然麝香中的重要生理活性成分，人工麝香也是一样，可通过检测药物制剂中麝香酮的含量来控制含麝香药物的质量。
活心丸为2010年度国家药品标准提高品种，由广州悦康生物制药有限公司生产。现行标准收载于部颁标准中药成方制剂第十八册(标准文号：WS3-B-3452-98)。活心丸中除加入了少量的人工麝香外，还加入了灵芝、熊胆、体外培育牛黄、珍珠、人参、蟾酥、附子(黑顺片)、冰片、红花等多种药材，大大增加了人工麝香含量的分析难度，因此需要更好准确度、精密度、专属性及稳定性的人工麝香含量的检测方法对该品种的质量进行有效的控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法，解决现有含人工麝香的浓缩活心丸中因成分复杂、多样，且麝香含量低导致的麝香含量检测困难的问题，填补浓缩活心丸质量检测原标准中人工麝香含量检测方法的空白。
本发明提供的浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g，所述浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg，即得；步骤2、供试品溶液的制备：取所述浓缩活心丸研细，取0.2g，精密称定，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理提取20min后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；步骤3、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，即得，色谱柱温条件为：采用程序升温，初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。
进一步优化为，在步骤3中色谱条件为：采用日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱为弹性石英毛细管柱Agilent DB-WAX，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm。
有益效果：本发明提供的人工麝香含量检测方法在准确度试验中测得麝香酮平均回收率为97.3％，RSD为1.6％(n＝6)，说明所述检测方法准确度较好；精密度实验中测得麝香酮RSD为2.1％(n＝6)，说明所述检测方法重现性良好；缺人工麝香阴性对照样品无干扰，说明所述检测方法专属性强；线性关系考察试验结果，以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，麝香酮的线性回归方程为：y＝2152913.9229x+6405.4715，R＝0.9994，说明麝香酮在0.03086～0.18514mg的范围内，线性关系良好，所述检测方法能够准确测定麝香酮含量。本发明所述浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法填补了活心丸质量检测原标准(收载于部颁标准中药成方制剂第十八册文号：WS3-B-3452-98)中人工麝香含量测定的空白，不仅能够有效鉴别活心丸中微量成份人工麝香的有无，更可以准确有效的测定人工麝香的含量，对所述浓缩活心丸的质量检测和控制具有指导意义。
附图说明
图1是麝香气相色谱图(A麝香酮对照品；B样品；C缺人工麝香阴性对照样品)；
图2是麝香酮的线性关系图。
具体实施方式
(一)试验材料
(1)仪器：日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱：弹性石英毛细管柱Agilent DB-WAX，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm；天平：Sartorius CP224S电子天平、Sartorius CP225D电子天平。超声仪：Elmasonic S 300H超声波清洗器，功率350W，频率37kHz。
(2)试剂：无水乙醇为分析纯。
(3)对照品：麝香酮对照品，批号为110719-201215，含量为99.6％。购自中国药品生物制品检定研究院。
(4)供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸。由广州悦康生物制药有限公司提供。
(5)阴性样品：缺人工麝香阴性样品。由广州悦康生物制药有限公司制备提供。
(二)实施例
色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。本发明人在进行实验时将人工麝香与冰片(龙脑、异龙脑)含量检测一同进行，麝香酮对照品和龙脑对照品、异龙脑对照品一块配制成混合标准溶液，系统适用性的理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg溶液，即得。
供试品溶液的制备：分别取上述5批供试品，研细，各取约0.2g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W，频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得各样品中麝香酮含量，结果如表1。
表1供试品中麝香酮的含量测定结果
Figure GDA0003002999490000041
以下通过验证试验说明本发明所述检测方法的可行性。
(三)方法验证
1、准确度(加样回收率试验)
回收用对照品溶液的制备：精密称取麝香酮对照品0.02960g，置100ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含麝香酮0.296mg的溶液，作为回收用对照品溶液。
取批号为12080101，含麝香酮1.89mg/g的供试品研细，取6份，每份约0.1g，精密称定，精密加入对照品溶液1ml。按上述含量测定方法测定，计算麝香酮的回收率，结果见表2。
表2麝香酮准确度试验结果
Figure GDA0003002999490000051
结果：麝香酮的平均回收率为97.3％，RSD为1.6％(n＝6)，说明该方法的准确度较好。
2、精密度(重复性试验)
取批号为12080101的供试品，取6份，每份约0.1g，精密称定，按上述含量测定方法，测定供试品中麝香酮的含量，结果见表3。
表3重复性试验结果
Figure GDA0003002999490000052
结果：精密度考察：重复性麝香酮RSD(n＝6)为2.1％，说明本方法重现性良好。
3、专属性
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
阴性对照样品溶液的制备：取缺麝香的阴性对照样品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照样品溶液。
吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照样品溶液各1μl，注入气相色谱仪，结果表明麝香阴性对照样品无干扰，结果见图1。
4、麝香酮的线性关系
A
精密称取麝香酮对照品0.02960g，置100ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含麝香酮0.2960mg的溶液，作为麝香酮对照品溶液母液。
精密量取对照品溶液母液0.3ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含麝香酮0.00444mg的溶液，作为对照品溶液Ⅰ。
精密量取对照品溶液母液0.3ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含麝香酮0.00888mg的溶液，作为对照品溶液Ⅱ。
精密量取对照品溶液母液0.9ml，置25ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含麝香酮0.01066mg的溶液，作为对照品溶液Ⅲ。
精密量取对照品溶液母液1ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含麝香酮0.01480的溶液，作为对照品溶液Ⅳ。
精密量取对照品溶液母液1ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含麝香酮0.02960mg的溶液，作为对照品溶液Ⅴ。
分别精密吸取对照品溶液Ⅰ～Ⅴ各1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表4。以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，麝香酮的线性回归方程为：y＝2152913.9229x+6405.4715，R＝0.9994。结果表明：麝香酮在0.03086～0.18514mg的范围内，线性关系良好，见图2。
表4麝香酮线性关系考察结果
Figure GDA0003002999490000071
5、耐用性考察
①提取溶剂的考察
取批号为12080101的供试品，研细，称取3份，每份取约0.2g，精密称定，分别精密加入无水乙醇、乙酸乙酯和乙醚各20ml，称定重量，分别用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，用无水乙醇、乙酸乙酯和乙醚补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。
按上述检测方法测定麝香酮的含量，结果见表5。
表5不同提取溶剂考察的结果
Figure GDA0003002999490000072
结果表明：无水乙醇作为提取溶剂时，测得麝香酮含量结果最高，和冰片检测时使用无水乙醇的数据也是最高，故选择无水乙醇为提取溶剂。两者的提取均使用无水乙醇提取，这样两者的含量测定可以一块作，这也是该专利中一大亮点。
②取样量的考察
取批号为12080101的供试品，研细，称取3份，取样量分别为0.1g、0.2g、0.4g，精密称定，分别精密加入无水乙醇20ml，称定重量，用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，即得供试品溶液。
按上述检测方法测定麝香酮的含量，结果见表6。
表6不同取样量考察的结果
Figure GDA0003002999490000081
结果表明：取样量为0.2g和0.4g时，测得结果最高，且两种不同取样量对测得的结果没明显的差别。取样量为0.2g时，麝香酮的响应值较适宜，故选择0.2g为取样量。
③提取时间的考察
取批号为12080101的供试品，研细，取5份，每份取约0.2g，精密称定，分别精密加入无水乙醇20ml，称定重量，分别用功率350W、频率37kHz超声处理10min、20min、30min、40min、50min、60min，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，即得供试品溶液。
按上述检测方法测定麝香酮的含量，结果见表7。
表7提取时间考察的结果
Figure GDA0003002999490000091
结果表明：提取时间为20分钟时，测得三成份含量最高，因此选用提取时间为20分钟。
6、稳定性考察
取批号为12080101的供试品，按供试品制备方法制备供试品溶液，精密吸取1μl供试品溶液注入液相色谱仪，分别在0h、5h、10h、15h、20h、24h时测定其峰面积，结果见表8。
表8稳定性实验测定结果
Figure GDA0003002999490000092
结果表明供试品溶液在24小时稳定。
经上述方法学考察，确定以下为供试品的处理方法
取供试品，研细，取约0.2g，精密称定，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
7、限度的制订
由于未收集到对应批次的药材作转移率考察，仅对收集到的广州悦康生物制药有限公司提供的5批样品进行含量测定。现根据5批样品人工麝香中的麝香酮的平均测定结果为1.4mg/g，考虑到药材来源及大生产等因素影响，将平均值下浮30％，暂定所述浓缩活心丸含量测定的限度为每1g含人工麝香以麝香酮(C16H30O)计应不得少于1.0mg。
综上所述，本发明浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法具有准确度和重现性好、专属性强、稳定性佳的优点，能够有效的检测出浓缩活心丸中人工麝香的含量，为浓缩活心丸的质量控制提供重要保障。以上通过实例和数据考察试验对本发明浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法的具体内容进一步做了详细说明和方法验证，但不应将之理解为本发明仅限于实例，因为根据上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可做出其他多种形式的修改、替换和变更，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明。

Claims (1)

1.一种浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g, 附子9g，冰片1.2g, 红花2.0g; 其特征在于，所述浓缩活心丸中人工麝香含量的检测方法包括以下几个步骤:
步骤1、对照品溶液的制备:取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每lml含麝香酮0.01mg,即得;
步骤2、供试品溶液的制备:取所述浓缩活心丸研细，取0.2g，精密称定精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理提取20min后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得;
步骤3、分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，即得，采用日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器;色谱柱为弹性石英毛细管柱Agilent DB-WAX，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μ m ;色谱柱温条件为:采用程序升温，初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟；将人工麝香与冰片含量检测一同进行，麝香酮对照品和龙脑对照品、异龙脑对照品一块配制成混合标准溶液，系统适用性的理论板数按龙脑峰计算应不低于2000；
系统适用性试验：聚乙二醇20000，PEG-20M毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟；
阴性对照样品溶液的制备：取缺麝香的阴性对照样品，研细，取约0 .2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，用功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照样品溶液；
吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照样品溶液各1μl，注入气相色谱仪，结果表明麝香阴性对照样品无干扰。
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