CN109061010A - 浓缩活心丸中冰片含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物检测领域，公开一种浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，对浓缩活心丸的质量控制具有重要指导意义。所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法的具体步骤包括：1、取异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成对照品溶液；2、取供试品，研细，精密称定，加入无水乙醇，称定重量，超声处理，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，获得供试品溶液；3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定。所述浓缩活心丸每1g含冰片以异龙脑(C10H18O)与龙脑(C10H18O)的总量计，不得少于13.5mg。

Description

浓缩活心丸中冰片含量的检测方法

技术领域

本发明涉及属于药物检测领域，具体涉及一种浓缩活心丸中冰片含量的检测方法。

背景技术

冰片，又名片脑、桔片、艾片、龙脑香、梅花冰片、羯布罗香、梅花脑、冰片脑、梅冰等，是由菊科艾纳香茎叶或樟科植物龙脑樟枝叶经水蒸汽蒸馏并重结晶而得。亦有用松节油经一系列化学方法工艺而得。冰片有促进药物吸收、抗菌抗炎止痛、消肿止痛清热祛火的作用，可用于闭证神昏、用于目赤肿痛，喉痹口疮、用于疮疡肿痛，溃后不敛等。

冰片虽然药用价值极高，能治疗人类多种常见病，但它是一种有比较严重不良反应的药物，平时如果过量服用就会出现明显中毒症状，恶心呕吐和腹痛疼痛就是冰片中毒以后发生的常见反应，这也是人们服用冰片的重要副作用之一，另外它还能让人体出现气血亏损，身体虚弱等不良症状，会让人体健康水平下降。因此，在日常用药和临床用药需要严格控制冰片及其制成药的质量和服用剂量。

在浓缩活心丸的质量检测原标准(收载于部颁标准中药成方制剂第十八册，标准文号：WS₃-B-3452-98)中只有冰片的薄层色谱鉴别而没有冰片的含量鉴别，只能知道活心丸中是否含有冰片而不能得知冰片含量，无法全面控制活心丸质量，因此需要提供一种浓缩活心丸中冰片含量的检测方法。

发明内容

本发明要解决浓缩活心丸质量检测原有标准中没有对冰片进行定量测定，提出的一种浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，对浓缩活心丸的质量控制具有重要意义。

本发明提供的浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法包括以下几个步骤：步骤1、制备对照品溶液：取异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液；步骤2、制备供试品溶液：取供试品0.1g～0.4g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，超声处理10min～60min后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定。

进一步优选为，在步骤2中供试品取样量为0.2g；超声处理条件为功率350W，频率37kHz，处理时间为20min。

进一步优选为，在步骤3中色谱条件为：采用日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱为聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；

进一步优选为，在色谱条件中柱温条件为程序升温；初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。

进一步优选为，色谱系统适用性试验结果满足理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。

有益效果：本发明浓缩活心丸中冰片含量的检测方法在准确度试验中测得异龙脑平均加样回收率为100.3％，RSD为1.8％(n＝6)；龙脑平均加样回收率为98.7％，RSD为1.6％，不同成份的平均回收率在98.7～100.3％之间，说明所述检测方法的准确度较好；精密度实验中重复性龙脑RSD为2.2％(n＝6)、异龙脑RSD为2.0％(n＝6)，说明所述检测方法重现性良好；缺冰片阴性对照样品无干扰，说明所述检测方法专属性强；线性关系考察结果，以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，异龙脑的线性回归方程为：y＝2822181.6428x–7124.2833，R＝0.9990，说明异龙脑在0.02598～0.1559mg的范围内，线性关系良好；龙脑的线性回归方程为：y＝3128880.7300x–5144.7536，R＝0.9994说明龙脑在0.03086～0.18514mg的范围内，线性关系良好，表明所述检测方法能够准确测定异龙脑和龙脑含量。所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法填补了浓缩活心丸质量检测原标准中冰片含量检测的空白，不仅能够有效鉴别活心丸中微量成份冰片的有无，也能准确检测冰片的含量，使得对浓缩活心丸的质量控制更加全面、有效。

附图说明

图1是冰片气相色谱图(A异龙脑、龙脑；B样品；C缺冰片阴性对照样品)；

图2-1是异龙脑的线性关系图；

图2-2是龙脑的线性关系图。

具体实施方式

(一)试验材料

(1)仪器：日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱：弹性石英毛细管柱Agilent DB-WAX(柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm)；天平：Sartorius CP224S电子天平、Sartorius CP225D电子天平。超声仪：Elmasonic S 300H超声波清洗器(功率350W，频率37kHz)。

(2)试剂：无水乙醇为分析纯。

(3)对照品：龙脑对照品(批号为110881-201107，含量为99.3％)、异龙脑对照品(批号为：111512-200201；111512-200802，含量为97.5％)，均购自中国药品生物制品检定研究院。

(4)供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101由广州悦康生物制药有限公司提供。

(5)阴性样品：缺冰片阴性样品。由广州悦康生物制药有限公司制备提供。

(二)实施例

实施例1

色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。

取异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液；分别取上述5批供试品，研细，各取约0.2g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得各供试品中冰片含量，结果见表1。

表1各供试品中冰片的含量测定结果

(三)下面通过各考察试验说明所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法的可行性

1、准确度(加样回收率试验)考察

回收用对照品溶液的制备：精密称取质量分数为97.5％的异龙脑对照品0.01066g，置20ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含异龙脑0.5197mg的溶液，作为回收用对照品溶液Ⅰ；精密称取质量分数为99.3％的龙脑对照品0.01243g，置25ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含龙脑0.4937mg的溶液，作为回收用对照品溶液Ⅱ。

取含异龙脑9.78mg/g、龙脑16.54mg/g，批号为12080101的供试品，研细，取6份，每份约0.1g，精密称定，精密加入对照品溶液Ⅰ2ml、对照品溶液Ⅱ3ml。按上述含量检测方法测定异龙脑、龙脑含量，计算异龙脑、龙脑的回收率。结果异龙脑回收率为100.3％，RSD为1.8％(n＝6)，见表2-1；龙脑回收率为98.7％，RSD为1.6％，见表2-2。

本发明所述检测方法测得不同成份的平均回收率在98.7～100.3％之间，说明该方法的准确度较好。

表2-1异龙脑准确度试验结果

表2-2龙脑准确度试验结果

2、精密度(重复性试验)

取批号为12080101的供试品，取6份，每份约0.1g，精密称定，按上述含量检测方法，测定供试品中异龙脑、龙脑的含量，结果见表3。

表3重复性试验结果

结果：精密度考察：重复性异龙脑RSD(n＝6)为2.2％，龙脑RSD(n＝6)为2.0％，说明本方法重现性良好。

3、专属性

取缺冰片的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备缺冰片阴性对照样品溶液，吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照样品溶液各1μl，注进气相色谱仪，结果表明冰片阴性对照样品无干扰，结果见图1。

4、线性关系

①异龙脑的线性关系

精密称取异龙脑对照品0.01066g，以97.5％计，置20ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含异龙脑0.5197mg的溶液，作为异龙脑对照品溶液母液。

精密量取对照品溶液母液1ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含异龙脑0.02598mg的溶液，作为对照品溶液Ⅰ。

精密量取对照品溶液母液1ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含异龙脑0.05197mg的溶液，作为对照品溶液Ⅱ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置25ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含异龙脑0.06236mg的溶液，作为对照品溶液Ⅲ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含异龙脑0.07795的溶液，作为对照品溶液Ⅳ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含异龙脑0.1559mg的溶液，作为对照品溶液Ⅴ。

分别精密吸取对照品溶液Ⅰ～Ⅴ各1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表4-1。以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，异龙脑的线性回归方程为：y＝2822181.6428x–7124.2833，R＝0.9990。结果表明：异龙脑在0.02598～0.1559mg的范围内，线性关系良好，结果见图2-1。

表4-1异龙脑线性关系考察结果

②龙脑的线性关系

精密称取龙脑对照品0.01243g，以99.3％计，置20ml容量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含龙脑0.6172mg的溶液，作为龙脑对照品溶液母液。

精密量取对照品溶液母液1ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含龙脑0.03086mg的溶液，作为对照品溶液Ⅰ。

精密量取对照品溶液母液1ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含龙脑0.06171mg的溶液，作为对照品溶液Ⅱ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置25ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含龙脑0.07406mg的溶液，作为对照品溶液Ⅲ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置20ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含龙脑0.09257的溶液，作为对照品溶液Ⅳ。

精密量取对照品溶液母液3ml，置10ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含龙脑0.18514mg的溶液，作为对照品溶液Ⅴ。

分别精密吸取对照品溶液Ⅰ～Ⅴ各1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，结果见表4-2。以进样量(mg)(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，龙脑的线性回归方程为：y＝3128880.7300x–5144.7536，R＝0.9994。结果表明：龙脑在0.03086～0.18514mg的范围内，线性关系良好，结果见图2-2。

表4-2龙脑线性关系考察结果

5、耐用性考察

①提取溶剂的考察

取批号为12080101的供试品，称取3份，每份取约0.2g，精密称定，分别精密加入无水乙醇、乙酸乙酯和乙醚各20ml，称定重量，分别以功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，用无水乙醇、乙酸乙酯和乙醚补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

分别测定异龙脑、龙脑的含量，见表5。

表5不同提取溶剂考察的结果

结果表明：无水乙醇作为提取溶剂时，测得三成分含量结果最高，故选择无水乙醇为提取溶剂。

②取样量的考察

取批号为12080101的供试品，称取3份，取样量分别为0.1g、0.2g、0.4g，精密称定，分别精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，即得。

分别测定异龙脑、龙脑的含量，见表6。

表6不同取样量考察的结果

结果表明：取样量为0.2g和0.4g时，测得结果最高，且两种不同取样量对测得的结果没明显的差别。取样量为0.2g时，异龙脑、龙脑的响应值较适宜，故选择0.2g为取样量。

③提取时间的考察

取批号为12080101的供试品，取5份，每份取约0.2g，精密称定，分别精密加入无水乙醇20ml，称定重量，按表6的超声时间进行超声处理提取(功率350W，频率37kHz)，放冷，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，即得。

分别测定异龙脑、龙脑的含量，见表7。

表7提取时间考察的结果

结果表明：提取时间为20分钟时，测得三成份含量最高，因此选用提取时间为20分钟。

6、稳定性考察

取批号为12080101的供试品，按供试品制备方法制备供试品溶液，精密吸取1μl注入液相色谱仪，分别于0、5、10、15、20、24小时测定其峰面积，结果表明供试品溶液在24小时稳定，见表8。

表8稳定性实验测定结果

经上述方法学考察，确定以下为供试品的处理方法

取供试品约0.2g，精密称定，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

8、限度的制订

由于未收集到对应批次的药材作转移率考察，仅对收集到的广州悦康生物制药有限公司提供的5批样品进行含量测定。现根据5批样品冰片中的异龙脑和龙脑的总含量为19.3mg/g，考虑到药材来源及大生产等因素影响，将平均值下浮30％，暂定所述浓缩活心丸含量测定的限度为每1g含冰片以异龙脑(C10H18O)与龙脑(C10H18O)的总量计应不得少于13.5mg。

综上所述，本发明所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法具有准确度和重现性好、专属性强、稳定性佳的优点，能够有效的检测出浓缩活心丸中冰片的含量，为浓缩活心丸的质量控制提供重要保障。以上通过实例和数据考察试验对本发明所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法的具体内容进一步做了详细说明和方法验证，但不应将理解为本发明仅限于实例，因为根据上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可做出其他多种形式的修改、替换和变更，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明。

Claims (5)

1.一种浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；其特征在于，所述浓缩活心丸中冰片含量的检测方法包括以下几个步骤：

步骤1、制备对照品溶液：取异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液；

步骤2、制备供试品溶液：取供试品0.2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，超声处理20min后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液；

步骤3、精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定。

2.如权利要求1所述的浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，其特征在于，步骤2中超声处理条件:

为功率350W，频率37kHz，处理时间为20min。

3.如权利要求1所述的浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，其特征在于，步骤3中色谱条件为：

采用日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱为聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；。

4.如权利要求3所述的浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，其特征在于,色谱条件中柱温条件为:

程序升温；初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。

5.如权利要求1所述的浓缩活心丸中冰片含量的检测方法，其特征在于：色谱系统适用性试验结果满足理论板数按龙脑峰计算不低于2000。