CN109374814A - 一种反相hplc法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，它包括以下步骤：（1）.色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：KromasiL ODS‑1柱；流动相：乙腈混合溶液，检测波长：260nm，理论板数按士的宁的峰计为5000，进样量10µL，（2）.对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品适量，加0.25mg•mL‑1二氯甲烷制成的溶液，摇匀，即得。有益效果在于：本发明对胃尔宁片中士的宁含量测定方法进行了研究，选择反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量，测定过程的稳定性好、测定数据的准确性高、数据重现性好。
Description
技术领域
本发明涉及士的宁含量测定方法技术领域，本发明涉及一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法。
背景技术
胃尔宁片是国药集团新疆制药有限公司的产品，是1996年卫生部批准的三类新药，由党参、天花粉、厚朴、法半夏、海螵蛸、木香、马钱子粉等中药饮片加工制成，质量标准为卫生部药品标准（试行）WS-370（Z-055）96，在胃尔宁片的试行标准中，胃尔宁片含量测定的方法采用正相HPLC的方法，样品的重现性不理想，不同厂家来源的色谱柱适用性差，测量数据的稳定性和准确性不高。
发明内容
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的：
一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，它包括以下步骤：
（1）.色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：KromasiL ODS-1柱；流动相：乙腈混合溶液，检测波长：260nm，理论板数按士的宁的峰计为5000，进样量10µL；
（2）.对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品适量，加0.25mg·mL-1二氯甲烷制成的溶液，摇匀，即得；
（3）.供试品溶液的制备：取胃尔宁20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，超声处理，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
（4）.阴性对照溶液的制备：除马钱子粉外，其他各药按胃尔宁片的处方投料，制得不含马钱子的阴性对照样品，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，超声处理，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
（5）.线性关系分析：分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6各7mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成系列浓度的对照品溶液，按规定方法测定，以测定峰面积积分值为纵坐标，对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，确定士的宁的含量范围，绘制峰面积与进样量的线性关系；
（6）.精密度试验：精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，记录各次峰面积；
（7）.重复性试验：取同一样品5份，分别按样品溶液制备方法制备，分别进样，测定士的宁得含量，取测量结果的平均值；
（8）.稳定性试验：按上述色谱条件，每隔2h以对照品溶液进样，共测定5次，记录各次峰面积；
（9）.回收率：精密称取已知含量的同批样品5份，每份约0.25g，置100mL锥形瓶中，精密加入20µg·mL-1士的宁对照品溶液1mL，按供试品制备方法制得溶液，按步骤（1）中的色谱条件，测定士的宁得含量，计算回收率；
（10）.专属性：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10µL，注入高效液相色谱仪，按步骤（1）中的色谱条件检测，绘制对照品、样品以及阴性对照品溶液的HPLC图谱；
（11）.样品的测定：取不同批号的6批样品，按样品溶液制备方法制备，按步骤（1）中的色谱条件测定6批样品中士的宁的含量。
进一步的，所述步骤（1）-步骤（11）中用到的设备为岛津LC--20AT高效液相色谱仪，试药为购自中国食品药品检定研究院的士的宁对照品和马钱子碱对照品，乙腈、甲醇为色谱纯，二氯甲烷、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、无水硫酸钠为分析纯，水为重蒸馏水。
进一步的，所述步骤（1）中乙腈混合溶液由0.01moL·L-1庚烷磺酸钠与0.02moL·L-1磷酸二氢钾按23：77混合，用10%磷酸调节pH值到2.8制得。
进一步的，所述步骤（3）中的二氯甲烷-浓氨试液的比例为9：1，超声处理的功率为500W，频率为50KHz，处理时间为1小时。
进一步的，所述步骤（4）中的二氯甲烷-浓氨试液的比例为9：1，超声处理的功率为500W，频率为50KHz，处理时间为1小时。
本发明的有益效果在于：
1、本发明对胃尔宁片中士的宁含量测定方法进行了研究，选择反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量，测定过程的稳定性好、测定数据的准确性高、数据重现性好；
2、本发明通过对胃尔宁片中士的宁含量测定时进行了回收率的测定，测定士的宁含量的同时计算士的宁的回收率，为后期士的宁的回收提供数据支持；
3、本发明通过对胃尔宁片中士的宁含量测定时进行了专属性的测定，绘制对照品、样品及阴性对照溶液的HPLC图谱，测量结果更加直观。
附图说明
图1是本发明所述一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法中对照品的HPLC色谱图；
图2是本发明所述一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法中样品的HPLC色谱图；
图3是本发明所述一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法中阴性对照品溶液的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的优选实施例进行详细说明：
实施例一
如图1-图3所示，本发明优选实施例一提供一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，它包括以下步骤：
（1）.色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：KromasiL ODS-1柱；流动相：0.01moL·L-1庚烷磺酸钠与0.02moL·L-1磷酸二氢钾按23：77混合，用10%磷酸调节pH值到2.8，得到乙腈混合溶液，检测波长：260nm，理论板数按士的宁的峰计为5000，进样量10µL；
（2）.对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品适量，加0.25mg·mL-1二氯甲烷制成的溶液，摇匀，即得；
（3）.供试品溶液的制备：取胃尔宁20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，二氯甲烷与浓氨的比例为9：1，采用功率500W，频率50KHz的超声处理1小时，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
（4）.阴性对照溶液的制备：除马钱子粉外，其他各药按胃尔宁片的处方投料，制得不含马钱子的阴性对照样品，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，二氯甲烷与浓氨的比例为9：1，采用功率500W，频率50KHz的超声处理1小时，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
（5）.线性关系分析：分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6各7mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成系列浓度的对照品溶液，按规定方法测定，以测定峰面积积分值为纵坐标，对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，确定士的宁的含量范围，绘制峰面积与进样量的线性关系；
（6）.精密度试验：精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，记录各次峰面积；
（7）.重复性试验：取同一样品5份，分别按样品溶液制备方法制备，分别进样，测定士的宁得含量，取测量结果的平均值；
（8）.稳定性试验：按上述色谱条件，每隔2h以对照品溶液进样，共测定5次，记录各次峰面积；
（9）.回收率：精密称取已知含量的同批样品5份，每份约0.25g，置100mL锥形瓶中，精密加入20µg·mL-1士的宁对照品溶液1mL，按供试品制备方法制得溶液，按步骤（1）中的色谱条件，测定士的宁得含量，计算回收率；
（10）.专属性：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10µL，注入高效液相色谱仪，按步骤（1）中的色谱条件检测，绘制对照品、样品以及阴性对照品溶液的HPLC图谱；
（11）.样品的测定：取不同批号的6批样品，按样品溶液制备方法制备，按步骤（1）中的色谱条件测定6批样品中士的宁的含量。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，其特征在于：它包括以下步骤：
色谱条件与系统适应性试验：色谱柱：KromasiL ODS-1柱；流动相：乙腈混合溶液，检测波长：260nm，理论板数按士的宁的峰计为5000，进样量10µL；
对照品溶液的制备：精密称取士的宁对照品适量，加0.25mg·mL-1二氯甲烷制成的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取胃尔宁20片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，超声处理，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
阴性对照溶液的制备：除马钱子粉外，其他各药按胃尔宁片的处方投料，制得不含马钱子的阴性对照样品，精密称定，研细，精密称取0.5g，加入二氯甲烷-浓氨试液50mL，超声处理，分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水，置水浴上浓缩至近干，加甲醇适量溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45µm微孔滤膜过滤，取滤液即得；
线性关系分析：分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5，6各7mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成系列浓度的对照品溶液，按规定方法测定，以测定峰面积积分值为纵坐标，对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，确定士的宁的含量范围，绘制峰面积与进样量的线性关系；
精密度试验：精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，记录各次峰面积；
重复性试验：取同一样品5份，分别按样品溶液制备方法制备，分别进样，测定士的宁得含量，取测量结果的平均值；
稳定性试验：按上述色谱条件，每隔2h以对照品溶液进样，共测定5次，记录各次峰面积；
回收率：精密称取已知含量的同批样品5份，每份约0.25g，置100mL锥形瓶中，精密加入20µg·mL-1士的宁对照品溶液1mL，按供试品制备方法制得溶液，按步骤（1）中的色谱条件，测定士的宁得含量，计算回收率；
专属性：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10µL，注入高效液相色谱仪，按步骤（1）中的色谱条件检测，绘制对照品、样品以及阴性对照品溶液的HPLC图谱；
样品的测定：取不同批号的6批样品，按样品溶液制备方法制备，按步骤（1）中的色谱条件测定6批样品中士的宁的含量。
2.根据权利要求1所述的一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，其特征在于：所述步骤（1）-步骤（11）中用到的设备为岛津LC--20AT高效液相色谱仪，试药为购自中国食品药品检定研究院的士的宁对照品和马钱子碱对照品，乙腈、甲醇为色谱纯，二氯甲烷、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、无水硫酸钠为分析纯，水为重蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，其特征在于：所述步骤（1）中乙腈混合溶液由0.01moL·L-1庚烷磺酸钠与0.02moL·L-1磷酸二氢钾按23：77混合，用10%磷酸调节pH值到2.8制得。
4.根据权利要求1所述的一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的二氯甲烷-浓氨试液的比例为9：1，超声处理的功率为500W，频率为50KHz，处理时间为1小时。
5.根据权利要求1所述的一种反相HPLC法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的二氯甲烷-浓氨试液的比例为9：1，超声处理的功率为500W，频率为50KHz，处理时间为1小时。
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