CN102998412A - 一种伤科接骨外用制剂的检测方法 - Google Patents
一种伤科接骨外用制剂的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102998412A CN102998412A CN2012105558547A CN201210555854A CN102998412A CN 102998412 A CN102998412 A CN 102998412A CN 2012105558547 A CN2012105558547 A CN 2012105558547A CN 201210555854 A CN201210555854 A CN 201210555854A CN 102998412 A CN102998412 A CN 102998412A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- need testing
- reference substance
- preparation
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种伤科接骨外用制剂的检测方法。所述伤科接骨外用制剂是由十二味药材制备而成，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，该清膏、冰片、朱砂以及药学上可接受的辅料相混合。本发明是采用现代先进提取浓缩技术生产而成，有效的保留了药材中的活性物质和药材的有效成分，大大提高了生药成分的溶出度，同时提高了生物利用度，有效提高了治疗效果。同时，克服了现有技术的不足，直接透皮吸收，起效迅速，稳定性良好，便于使用、携带和保存；本发明的工艺简单易行，原料及辅料来源稳定，易于产业化。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种外用伤科接骨的提取物、及其制备方法，和一种伤科接骨的外用制剂、及其用途和检测方法。
背景技术
中国发明专利CN100361667C、发明名称为“一种治疗伤科疾病的药物及其制备方法”公开了一种治疗伤科疾病的药物，该药物是用于治疗跌打损伤、闪腰岔气、伤筋动骨、瘀血肿痛、损伤红肿等症的药物，其临床治疗效果较好。上述专利公开了一种制备药物的方法，第一种制备方法为：将除朱砂和冰片外的药材粉碎，过100-250目筛，将朱砂制成朱砂极细粉，将冰片研细，都兑入过筛后的上述药材药粉中混合均匀。第二种制备方法为：将除红花、朱砂和冰片外的原料药粉碎，过100-250目筛，将红花加水煎煮两次，合并煎液，并浓缩至清膏；然后将红花清膏与上述原料粉碎物混合；但是，该药物的剂型仅公开了口服用制剂，剂型单一，不能满足不同患者的需求。
发明内容
本发明人研制了一种外用伤科接骨的提取物、及其制备方法、外用制剂及其检测方法，成功地克服了现有技术中的不足。
本发明的目的是提供一种外用伤科接骨的提取物。
本发明的另一个目的是提供上述外用伤科接骨提取物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种伤科接骨的外用制剂。
本发明的第四个目的是提供一种伤科接骨外用制剂的制备方法及其用途。
本发明的第五个目的是提供上述伤科接骨外用制剂的检测方法。
具体地说，本发明提供了一种外用伤科接骨的提取物，它是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
作为一种优选的实施方案，本发明提供了一种外用伤科接骨的提取物，它是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
作为一种优选的实施方案，本发明提供了一种外用伤科接骨的提取物，它是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
作为一种优选的实施方案，本发明提供了一种外用伤科接骨的提取物，它是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
作为一种优选的实施方案，本发明提供了一种外用伤科接骨的提取物，它是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，其中，所述用乙醇提取是指用55-95体积%的乙醇提取一至四次；优选地，用60-90体积%的乙醇提取，更优选地用60或80体积%的乙醇提取；优选地，乙醇提取的次数为三次；
用乙醇提取的时间为1至9小时/次，更优选地，1.5小时/次；
乙醇的用量为粗粉与马钱子粉混合物的6至12倍（重量比）/次，优选地，为6-10倍/次，更优选地，8-10倍/次。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，作为一种优选的实施方案，其中，所述用乙醇提取是指用60体积%乙醇提取三次，第一次加8-12倍量（优选10倍）60%体积乙醇提取1-3小时（优选1.5小时），第二次加6-10倍量（优选8倍量）60体积%乙醇提取1-3小时（优选1.5小时），第三次加6-10倍量（优选8倍量）60体积%乙醇提取1.5小时。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，其中，在乙醇提取后可进一步地包括滤过，任选地合并滤液，回收乙醇，药液浓缩成清膏。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，其中，在乙醇提取后，药液浓缩成的清膏相对密度为：1.00-1.40（35℃-45℃)。
第二方面，本发明提供了外用伤科接骨提取物的制备方法，包括
优选地，
或
或
或
以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，与冰片、朱砂混合。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物制备方法中，其中，所述用乙醇提取是指用55-95体积%的乙醇提取一至四次；优选地，用60-90体积%的乙醇提取，更优选地用60或80体积%的乙醇提取；优选地，乙醇提取的次数为三次；
用乙醇提取的时间为1至9小时/次，更优选地，1.5小时/次；
乙醇的用量为粗粉与马钱子粉混合物的6至12倍（重量比）/次，优选地，为6-10倍/次，更优选地，8-10倍/次。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物制备方法中，作为一种优选的实施方案，其中，所述用乙醇提取是指用60体积%乙醇提取三次，第一次加8-12倍量（优选10倍）60%体积乙醇提取1-3小时（优选1.5小时），第二次加6-10倍量（优选8倍量）60体积%乙醇提取1-3小时（优选1.5小时），第三次加6-10倍量（优选8倍量）60体积%乙醇提取1.5小时。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，其中，在乙醇提取后可进一步地包括滤过，任选地合并滤液，回收乙醇，药液浓缩成清膏。
在本发明提供的外用伤科接骨提取物中，其中，在乙醇提取后，药液浓缩成的清膏相对密度为：1.00-1.40（35℃-45℃)。
第三方面，本发明提供了一种伤科接骨外用制剂，它是由上述外用伤科接骨提取物与药学上可接受的辅料制备而成。
本发明提供的伤科接骨外用制剂，可制成凝胶剂、喷雾剂、气雾剂、膏药、贴膏剂、软膏剂或涂膜剂，特别优选地制成凝胶剂。
在本发明提供的伤科接骨外用制剂中，所述药学上可接受的辅料可选用，例如Raymond C.Rowe等主编的“Handbook of PharmaceuticalExcipients”（第五版，2006年），所列举的。
更具体地说，本发明提供的伤科接骨外用制剂制成凝胶剂时，所述药学上可接受的辅料为卡波姆940、三乙醇胺、95体积%乙醇、甘油、氮酮、羟苯乙酯以及纯化水。
更具体地说，本发明提供的伤科接骨外用制剂制成涂膜剂时，所述药学上可接受的辅料为乙醇、聚乙烯醇和甘油。
更具体地说，本发明提供的伤科接骨外用制剂制成软膏剂时，所述药学上可接受的辅料为甘油、硬脂酸、三乙醇胺、液体石蜡、石蜡、羟苯乙酯和纯化水。
更具体地说，本发明提供的伤科接骨外用制剂制成贴膏剂时，所述药学上可接受的辅料为橡胶、氧化锌等。
第四方面，本发明提供了上述伤科接骨外用制剂的用途，在制备治疗伤科疾病的药物组合物中的应用。上述伤科接骨外用制剂具有活血化瘀，消肿止痛，舒筋壮骨的功效。可用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症；或者对骨折患者需经复位后配合使用。本发明提供的上述伤科接骨外用制剂为外用，涂于患处。
此外，本发明提供的上述伤科接骨外用制剂的制备方法，包括将所述清膏、冰片、朱砂与药学上可接受的辅料相混合。
第五方面，本发明提供了上述伤科接骨外用制剂的检测方法，包括如下项目：
性状、鉴别、检查和含量测定。
优选地，本发明提供的上述伤科接骨外用制剂的检测方法，其中，所述的性状为：内容物为红色胶状半固体，气微腥。
所述的鉴别为：
（1）取本品，置显微镜下观察；不规则颗粒细小，暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色；
（2）取本品约10g，加95%乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，溶液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次5ml，水液弃去；取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（3）取本品约10g，加乙醚50ml，密塞，超声处理15min，滤过，乙醚液50℃水浴挥散至近干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照药材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛浓硫酸溶液。在105℃加热至斑点显色清晰。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（4）取本品约10g，加乙醇50ml，密塞，超声处理20分钟，放冷，滤过，溶液蒸干。残渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，转移至分液漏斗中，以浓氨试液调pH 9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml。合并三氯甲烷液，水浴挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（3：6：0.6：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
所述的检查为：
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录IX B电感耦合等离子体质谱法）测定，汞不得过百分之一点五，铅不得过百万分之十（优选地不超过百万分之五）；镉不得过百万分之五（优选地不超过百万分之三）；砷不得过百万分之五（优选地不超过百万分之二）；铜不得过百万分之二十（优选地不超过百万分之十）。
所述的含量测定为：
1.马钱子粉照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21：79）为流动相，检测波长为254nm，理论塔板数按士的宁色谱峰计算，不得低于4000，优选地，不得低于5000。
对照品溶液制备取士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.004mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200w，频率60KHz；或者，功率250w，频率40KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
2.三七照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-水（21：79）为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按人参皂苷Rg1色谱峰计算，不得低于10000。
对照品溶液制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200w，频率60KHz；或者，功率250w，频率40KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
3.朱砂
取本品约5g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加硫酸40ml，硝酸钾6g，加热微沸30分钟，使成无色透明溶液，放冷，加水50ml，滴加1％高锰酸钾溶液至显粉红色以2min内不消失为度，再滴2％硫酸亚铁溶液至红色消失，用硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)滴定。每1mL硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)相当于5.815mg硫化汞。
作为一种优选的实施方案，本发明伤科接骨外用制剂为凝胶剂时，其的检测方法进一步地包括：
pH值取本品10g，加10倍水溶解，照pH值测定法(中国药典2010年版一部附录VII G)操作，本品pH应在6.5-7.5之间；
粒度取本品适量，置于载玻片上，涂成薄层，覆以盖玻片，共涂3片，照粒度测定法(中国药典2010年版一部附录XI B第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子；
其他本品应符合凝胶剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版一部附录I Q）。本发明提供的外用伤科接骨提取物、外用伤科接骨提取物制备方法、伤科接骨外用制剂及其制备方法，是以伤科接骨片原药物全粉压片的配方为基础，采用现代先进提取浓缩技术生产而成，有效的保留了药材中的活性物质和药材的有效成分，大大提高了生药成分的溶出度，同时提高了生物利用度，有效提高了治疗效果。同时克服了原有药物的不足，直接透皮吸收，起效迅速，稳定性良好，便于使用、携带和保存；本发明的工艺简单易行，原料及辅料来源稳定，易于产业化。
附图说明
图1-A表示的是骨折家兔桡骨X线检查结果，治疗21天：模型对照组骨折线趋于模糊，但仍然可见，几乎无骨痂生长；伤科接骨凝胶剂低、高剂量组、伤科接骨片组及活血接骨散组均有少量骨痂生长，骨折线模糊。
图1-B表示的是骨折家兔桡骨X线检查结果，治疗42天：模型组骨折线模糊，有骨痂生长，而伤科接骨凝胶剂低剂量组骨痂密度较淡，边缘不整齐，高剂量组、伤科接骨片及活血接骨散组骨折断端界限几乎消失，骨痂填充缺损区域，密度接近正常骨组织密度。
图2表示的是治疗42天后组织学检查结果：模型对照组骨小梁生长缓慢，密度较低，缺损区域空隙较大，伤科接骨凝胶剂高剂量组骨小梁连成片状骨板，愈合良好，新生骨痂密度显著高于模型对照组，与伤科接骨片和活血接骨散组无明显差异。（×20）
具体实施方式
实施例1
药物涂膜剂的制备：
（1）称取下述重量配比的原料药：
（2）以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合。
（3）用60%乙醇煎煮3次，第一次加10倍量乙醇煎煮2小时，第二次加8倍量乙醇煎煮1小时，第三次加8倍量乙醇煎煮1小时。
（4）煎液滤过，滤液合并，煎液浓缩至相对密度为1.00-1.40（35℃-45℃）。
（5）加适量乙醇，放置过夜，滤过，滤液备用。
(6)取聚乙烯醇适量，加60%乙醇使溶解，加入上述备用滤液，再加冰片及朱砂和甘油50g，搅拌，加60%乙醇调整总量至1000ml，即得。
实施例2
软膏剂的制备：
（1）称取下述重量配比的原料药：
（2）以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合。
（3）用80%乙醇煎煮3次，第一次加12倍量80%乙醇煎煮1.5小时，第二次加10倍量乙醇煎煮1小时，第三次加10倍量乙醇煎煮1小时。
（4）煎液滤过，滤液合并，煎液浓缩至相对密度为1.00-1.40（35℃-45℃）。
（5）滤液中加入冰片、朱砂，混匀。
（6）将上述（5）中的滤液加入到软膏基质拌均匀，制成1000g，即得。
注：软膏基质的制备：取甘油80g，硬脂酸120g，三乙醇胺30g，液体石蜡180g，石蜡80g，羟苯乙酯1.5g，蒸馏水加至1000g，置于一容器中，加热至85-90℃，待完全溶化，停止加热，搅拌至冷却，即得。
实施例3
贴膏剂的制备：
（1）称取下述重量配比的原料药：
（2）以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合。
（3）用60%乙醇提取三次，第一次加10倍量乙醇提取2小时，第二次加8倍量乙醇提取1小时，第三次加8倍量乙醇提取1小时。
（4）滤过，合并滤液，回收乙醇，药液浓缩成相对密度为1.00-1.40（35℃-45℃）的清膏。
（5），将上述清膏中加入冰片、朱砂极细粉混匀，另加由橡胶、氧化锌等制成基质，制成涂料。进行涂膏，盖衬，切片，即得。
实施例4
凝胶剂的制备
制法
（a）以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成最粗粉。药材最粗粉与马钱子粉合并，用60%乙醇提取三次，第一次加10倍量60%乙醇提取1.5小时，第二次加8倍量60%乙醇提取1.5小时，第三次加8倍量60%乙醇提取1.5小时。滤过，合并滤液，回收乙醇，药液浓缩至约130ml。
（b）取卡波姆15g，加30倍量纯化水，浸泡48小时，使充分溶胀。取三乙醇胺22.5g，用5倍量纯化水溶解，搅拌下加入，使形成凝胶。
（c）取上述清膏，加入乙醇150ml、甘油50g、氮酮20g、羟苯乙酯1g、冰片，搅拌使溶解，加入朱砂，搅拌均匀后立即加入（b）中，加纯化水适量至规定量，搅拌均匀，即得。
实施例5
凝胶剂的制备
制法
（a）以上十二味，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成最粗粉。药材最粗粉与马钱子粉合并，用60%乙醇提取三次，第一次加10倍量60%乙醇提取1.5小时，第二次加8倍量60%乙醇提取1.5小时，第三次加8倍量60%乙醇提取1.5小时。滤过，合并滤液，回收乙醇，药液浓缩至约130ml。
（b）取卡波姆12g，加30倍量纯化水，浸泡48小时，使充分溶胀。取三乙醇胺18g，用5倍量纯化水溶解，搅拌下加入，使形成凝胶。
（c）取上述清膏，加入乙醇150ml、甘油50g、氮酮20g、羟苯乙酯1g、冰片，搅拌使溶解，加入朱砂，搅拌均匀后立即加入（b）中，加纯化水适量至规定量，搅拌均匀，即得。
实施例6实施例4得到的凝胶剂的检测方法
【性状】内容物为红色胶状半固体，气微腥。
【鉴别】
（1）取本品，置显微镜下观察：不规则颗粒细小，暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色。
（2）取本品约10g，加95%乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，溶液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次5ml，水液弃去。取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（3）取本品约10g，加乙醚50ml，密塞，超声处理15min，滤过，乙醚液50°C水浴挥散至近干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照药材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛浓硫酸溶液。在105°C加热至斑点显色清晰。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（4）取本品约10g，加乙醇50ml，密塞，超声处理20分钟，放冷，滤过，溶液蒸干。残渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，转移至分液漏斗中，以浓氨试液调pH9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml。合并三氯甲烷液，水浴挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（3：6：0.6:0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
【检查】
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录IX B电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过百万分之五；镉不得过百万分之三；砷不得过百万分之二；铜不得过百万分之十。
pH值取本品10g，加10倍水溶解，照pH值测定法(中国药典2010年版一部附录VII G)操作，本品pH应在6.5-7.5之间。
粒度取本品适量，置于载玻片上，涂成薄层，覆以盖玻片，共涂3片，照粒度测定法(中国药典2010年版一部附录XI B第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
【含量测定】
1.马钱子粉照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21：79）为流动相，检测波长为254nm，理论塔板数按士的宁色谱峰计算，不得低于4000。
对照品溶液制备取士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.004mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200w，频率60KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
本品每1g含马钱子以士的宁（C 21H22N2 O2）计算，应为0.128～0.192mg。
2.三七照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-水（21：79）为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按人参皂苷Rg1色谱峰计算，不得低于10000。
对照品溶液制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200w，频率60KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
本品每1g含三七以人参皂苷Rg1（C 42H72O14）计算，应为0.128～0.192mg。
3.朱砂
取本品约5g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加硫酸40ml，硝酸钾6g，加热微沸30分钟，使成无色透明溶液，放冷，加水50ml，滴加1％高锰酸钾溶液至显粉红色以2min内不消失为度，再滴2％硫酸亚铁溶液至红色消失，用硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)滴定。每1mL硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)相当于5.815mg硫化汞。
本品每1g含朱砂以硫化汞（HgS）计算，应为0.128～0.192mg。
实施例7实施例5得到的凝胶剂的检测方法
【性状】内容物为红色胶状半固体，气微腥。
【鉴别】
（1）取本品，置显微镜下观察：不规则颗粒细小，暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色。
（2）取本品约10g，加95%乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，溶液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次5ml，水液弃去。取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（3）取本品约10g，加乙醚50ml，密塞，超声处理15min，滤过，乙醚液50℃水浴挥散至近干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照药材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛浓硫酸溶液。在105℃加热至斑点显色清晰。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
（4）取本品约10g，加乙醇50ml，密塞，超声处理20分钟，放冷，滤过，溶液蒸干。残渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，转移至分液漏斗中，以浓氨试液调pH 9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml。合并三氯甲烷液，水浴挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（3：6：0.6：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
【检查】
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录IX B电感耦合等离子体质谱法）测定，汞不得过百分之一点五，铅不得过百万分之十；镉不得过百万分之五；砷不得过百万分之五；铜不得过百万分之二十。
pH值取本品10g，加10倍水溶解，照pH值测定法(中国药典2010年版一部附录VII G)操作，本品pH应在6.5-7.5之间。
粒度取本品适量，置于载玻片上，涂成薄层，覆以盖玻片，共涂3片，照粒度测定法(中国药典2010年版一部附录XI B第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
【含量测定】
1.马钱子粉照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21：79）为流动相，检测波长为254nm，理论塔板数按士的宁色谱峰计算，不得低于5000。
对照品溶液制备取士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.004mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
本品每1g含马钱子粉以士的宁（C 21H22N2 O2）计算，应为0.02～0.20mg。
2.三七照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-水（21：79）为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按人参皂苷Rg1色谱峰计算，不得低于10000。
对照品溶液制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液。
供试品溶液制备取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率200w，频率60KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。
本品每1g含三七量以人参皂苷Rg1（C42H72O14）计算，应为1.17~2.20mg。
3.朱砂
取本品约5g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加硫酸40ml，硝酸钾6g，加热微沸30分钟，使成无色透明溶液，放冷，加水50ml，滴加1％高锰酸钾溶液至显粉红色以2min内不消失为度，再滴2％硫酸亚铁溶液至红色消失，用硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)滴定。每1mL硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)相当于5.815mg硫化汞。
本品每1g含朱砂量以硫化汞（HgS）计算，应为7.0～13.0mg。
药效学研究
1.实验材料与动物
1.1药物伤科接骨凝胶剂（实施例4制得的产品），由辽宁中医药大学药剂教研室提供；活血接骨散，山东百草药业有限公司生产，国药准字Z21021461；伤科接骨片，大连美罗中药厂，国药准字Z21021461。
1.2动物新西兰家兔，2±0.5kg，雌雄各半，由大连医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(辽)2008-0002。
1.3仪器与试剂X线摄影系统（岛津604-8511）；组织切片机（Leica,GermanySM2000R）；电子万能材料试验机（电子万能材料试验机型号:TS9-TH5000-50KN）；光学显微镜（Olympus,Japan）；5804R高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；UV-1800紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；碱性磷酸酶试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。
2.骨折动物模型制备与给药
2.1骨折动物模型制备：健康的日本大耳白兔90只,造模前饲养一周以适应饲养环境。随机取出12只作为空白对照组，其余家兔用于制备骨折模型。以10％乌拉坦（5ml/kg）腹腔注射麻醉，手术部位用8％硫化钠脱毛，温水洗净，75％乙醇消毒，用手术刀片在右前肢做一纵切口，逐层切开皮下组织，暴露肌肉，钝性分离肌肉组织，在桡骨中下1/3旋前圆肌止点处用钢锯锯出一段骨缺损，宽3mm，深度暴露骨髓并以骨髓出血为度，保留尺骨完整，缝合皮肤，75％乙醇清洗创面，纱布缠绕，橡皮膏固定。术后肌肉注射青霉素，40万U/只，每天1次，连续3天以防止感染。
2.2分组、给药：术后观察3天，再将骨折家兔随机分为6组（12只/组）：模型对照组，伤科接骨凝胶剂低、中、高剂量组(0.25g·kg-1、0.5g·kg-1、1g·kg-1，外敷)，伤科接骨片组（0.12g·kg-1，口服），活血接骨散组（0.5g·kg-1，白酒调匀外敷）。术后第四天开始给药，各组外用剂按上述剂量均匀涂抹在手术部位大约4cm2的区域，纱布固定，每日换药1次；伤科接骨片组将药片磨成细粉，按上述剂量拌入饲料中，每日定时定量喂给饲料。各组连续给药42天。另取12只正常健康家兔作为空白对照组，不予任何处理。
3.检测指标与方法
分别于给药治疗后21、42天，每组各取出6只家兔，以空气栓塞法处死，取出桡骨，剔去筋膜肌肉等组织，保留尺骨及两端关节完整，不破坏骨痂，清水洗净，进行以下检测。
3.1 X线检查分别于治疗21、42天后取出挠骨标本作X线检查，通过X光片观察骨痂形成、骨折端边缘、骨折线、骨痂密度与骨皮质等，依据上海骨伤科研究所制定的骨折X线评分标准，对每个标本进行结果评分。
3.2生物力学检查分别将上述拍摄过X线的桡骨标本放置于万能材料试验机上，保持桡骨弯曲方向一致，压头加载速度1mm·min-1，跨距为2cm，检测破断载荷，根据应力应变公式计算相应的应力指标。
3.3组织学检察分别于给药治疗21、42天后取出桡骨，弃除全部软组织，将挠骨组织用低速锯纵形劈开，一分为二，一半在10%中性福尔马林溶液中固定，常规脱钙，石蜡包埋，切片，H.E.染色，光学显微镜检察、摄片，依据Zhukauskas组织学分级标准，以骨痂形成量为分析指标，对每个标本进行组织学评分。
3.4骨折家兔血清碱性磷酸酶（ALP）含量测定各组家兔分别于治疗14、21、28天后心脏采血2ml，2000r·min-1离心10min，取上层血清，-80℃冰箱中保存备用，待第28天最后一次采血得血清后一起检测，按试剂盒说明书处理血清，用紫外可见分光光度计测得吸光值，计算血清中碱性磷酸酶（ALP）含量。
3.5统计学处理结果以均值±标准差
表示，采用SPSS15.0软件完成统计处理，各组间比较采用t检验分析。
4.结果
4.1 X线检查结果X线摄片显示21天时模型组骨缺损部位骨折线清晰可见，只有极少量骨痂生长；伤科接骨凝胶剂高、中、低三个剂量组骨折线均已模糊，骨影加重，明显可见骨痂生长；在42天时，模型组骨折线虽已模糊，但仍可见，而伤科接骨凝胶剂三个剂量组骨折线完全模糊，界限消失，骨痂生长迅速，几乎填满骨缺损区域，新生骨痂与周围骨密质相连，且密度接近骨密质，其中尤以高剂量组作用最明显。评分结果显示高剂量伤科接骨凝胶剂组分值最高，与模型组比较差异显著（P<0.01），与伤科接骨片和活血接骨散组比较，虽略有增高，但无显著性差异（P>0.05），说明高剂量伤科接骨凝胶剂能显著提高骨痂形成质量，此作用与伤科接骨片和活血接骨散比较无显著差异。见图1、表1。
表1.家兔桡骨X线评分结果
注：*P＜0.05,**P＜0.01,与模型对照组比较。
4.2生物力学检测结果21、42天时模型对照组家兔桡骨的破断载荷显著小于空白对照组（P<0.01），说明模型制备成功；而伤科接骨凝胶剂组均高于模型对照组，尤以高剂量组最为显著（P<0.05），说明高剂量伤科接骨凝胶剂能改善新生骨的生物力学性能，提高新骨的形成质量，此作用效果与伤科接骨片和活血接骨散无显著差异，见表2。
表2伤科接骨凝胶剂对家兔桡骨生物力学的影响
注：#P＜0.05，##P＜0.01，与空白对照组比较；*P＜0.05，与模型对照组比较。
4.3组织学检查结果治疗21天后骨折组织HE染色结果显示，模型组骨缺损区域出现少量软骨基质，可见大量软骨细胞，伤科接骨凝胶剂高剂量组软骨基本消失，成骨细胞数量增多，大量软骨已经矿化，形成骨小梁；42天HE染色结果显示，模型组虽然出现骨小梁，但是仍有较大缺损区，与原有皮质骨之间仍存在空隙，且骨小梁密度较低；高剂量伤科接骨凝胶剂组骨小梁弥合成片层状骨板，新生骨痂已经填满缺损区域，且密度接近原有皮质骨密度，表明新生骨组织质量良好，与伤科接骨片和活血接骨散组无明显差异。评分结果显示，伤科接骨凝胶剂高剂量组与模型组比较差异显著（P<0.01），与伤科接骨片和活血接骨散组比较无显著性差异，提示高剂量伤科接骨凝胶剂可以加快软骨骨化，促进骨小梁形成并连成片状骨板，且形成过程与质量与伤科接骨片和活血接骨散无显著差异。见图2、表3。
表3.骨折家兔桡骨组织学评分结果
注：*P＜0.05,**P＜0.01，与模型对照组比较
4.4对骨折家兔血清中碱性磷酸酶（ALP）含量的影响治疗14、21、28天后模型对照组血清ALP含量显著高于空白对照组（P<0.01），而伤科接骨凝胶剂三个剂量组在21、28天时都能提高血清ALP水平，且随用药时间延长升高作用逐渐增强，与模型组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)，而与伤科接骨片组和活血接骨散组比较无显著差异(P>0.05)。说明高剂量伤科接骨凝胶剂可以提高血清中碱性磷酸酶含量，从而促进磷酸钙盐沉积于骨折部位，加速骨折愈合。见表4。
表4.复方接骨凝胶剂对血清碱性磷酸酶（ALP）的影响
注：#P＜0.05，##P＜0.01，与空白对照组比较；*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照组比较。
5.结论
1.X线检查结果说明本发明伤科接骨凝胶剂可以加快骨痂生长，提高骨痂形成质量。
2.生物力学检测结果说明伤科接骨凝胶剂可以提高骨的生物力学性能，提高新骨形成质量。
3.组织学检查结果说明伤科接骨凝胶剂可以加快软骨骨化及骨小梁的生成。
4.碱性磷酸酶检查结果说明伤科接骨凝胶剂可以提高血清碱性磷酸酶含量，从而加速骨折愈合。
Claims (10)
1.一种伤科接骨的外用制剂的检测方法，所述外用制剂是由下述重量配比的药材制备的：
其中，以上十二味药材，除冰片、马钱子粉外，朱砂水飞成极细粉，其余药材粉碎成粗粉，与马钱子粉混合，用乙醇提取并浓缩成清膏，然后，将该清膏、冰片、朱砂与药学上可接受的辅料制备成外用制剂；
所述的检测方法包括如下项目：性状、鉴别和含量测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述外用制剂是由下述重量配比的药材制备的：
3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述外用制剂是由下述重量配比的药材制备的：
4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述外用制剂是由下述重量配比的药材制备的：
5.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述外用制剂是由下述重量配比的药材制备的：
6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述的鉴别为：
（1）取所述外用制剂，置显微镜下观察；不规则颗粒细小，暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色；
（2）取所述外用制剂约10g，加95%乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，溶液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次5ml，水液弃去；取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视;供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点;
（3）取所述外用制剂约10g，加乙醚50ml，密塞，超声处理15min，滤过，乙醚液50℃水浴挥散至近干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液;另取冰片对照药材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛浓硫酸溶液；在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点;
（4）取所述外用制剂约10g，加乙醇50ml，密塞，超声处理20分钟，放冷，滤过，溶液蒸干；残渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，转移至分液漏斗中，以浓氨试液调pH 9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml；合并三氯甲烷液，水浴挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（3：6：0.6：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
7.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述的检查为重金属及有害元素的检查，照中国药典附录IX B电感耦合等离子体质谱法测定铅、镉、砷、汞、铜测定法。
8.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述含量测定为应用中国药典2010年版一部附录VI D高效液相色谱法进行测定。
9.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的检测方法，其中，所述外用制剂为凝胶剂。
10.根据权利要求9所述的检测方法，包括：
【性状】内容物为红色胶状半固体，气微腥；
【鉴别】
（1）取所述凝胶剂，置显微镜下观察：不规则颗粒细小，暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色；
（2）取所述凝胶剂约10g，加95%乙醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，溶液蒸干，残渣加水10ml微热使溶解，转移至分液漏斗中，加水饱和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次5ml，水液弃去；取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
（3）取所述凝胶剂约10g，加乙醚50ml，密塞，超声处理15min，滤过，乙醚液50℃水浴挥散至近干，残渣加醋酸乙酯1ml溶解，作为供试品溶液；另取冰片对照药材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛浓硫酸溶液；在105℃加热至斑点显色清晰；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
（4）取所述凝胶剂约10g，加乙醇50ml，密塞，超声处理20分钟，放冷，滤过，溶液蒸干；残渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，转移至分液漏斗中，以浓氨试液调pH 9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml；合并三氯甲烷液，水浴挥去三氯甲烷，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液；另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液10μl与对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（3：6：0.6：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
【检查】
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录IX B电感耦合等离子体质谱法）测定，汞不得过百分之一点五，铅不得过百万分之十；镉不得过百万分之五；砷不得过百万分之五；铜不得过百万分之二十；
pH值取所述凝胶剂10g，加10倍水溶解，照pH值测定法(中国药典2010年版一部附录VII G)操作，所述凝胶剂pH应在6.5-7.5之间；
粒度取所述凝胶剂适量，置于载玻片上，涂成薄层，覆以盖玻片，共涂3片，照粒度测定法(中国药典2010年版一部附录XI B第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子；
其他所述凝胶剂应符合凝胶剂项下有关的各项规定（中国药典2010年版一部附录IQ）；
【含量测定】
1.马钱子粉照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21：79）为流动相，检测波长为254nm，理论塔板数按士的宁色谱峰计算，不得低于5000；
对照品溶液制备取士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.004mg的溶液；
供试品溶液制备取所述凝胶剂约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取续滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得；
2.三七照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱温室温，以乙腈-水（21：79）为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按人参皂苷Rg1色谱峰计算，不得低于10000；
对照品溶液制备取人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液；
供试品溶液制备取所述凝胶剂约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，充分振摇，滤过，取滤液5ml，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，滤液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得；
3.朱砂
取所述凝胶剂约5g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加硫酸40ml，硝酸钾6g，加热微沸30分钟，使成无色透明溶液，放冷，加水50ml，滴加1％高锰酸钾溶液至显粉红色以2min内不消失为度，再滴2％硫酸亚铁溶液至红色消失，用硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)滴定；每1mL硫氰酸铵滴定液(0.05mol／L)相当于5.815mg硫化汞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210555854.7A CN102998412B (zh) | 2011-12-27 | 2012-12-19 | 一种伤科接骨外用制剂的检测方法 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110445430.0 | 2011-12-27 | ||
| CN201110445430 | 2011-12-27 | ||
| CN2011104454300 | 2011-12-27 | ||
| CN201210555854.7A CN102998412B (zh) | 2011-12-27 | 2012-12-19 | 一种伤科接骨外用制剂的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102998412A true CN102998412A (zh) | 2013-03-27 |
| CN102998412B CN102998412B (zh) | 2015-06-17 |
Family
ID=47927251
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210555854.7A Expired - Fee Related CN102998412B (zh) | 2011-12-27 | 2012-12-19 | 一种伤科接骨外用制剂的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102998412B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107064402A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-08-18 | 江西药都仁和制药有限公司 | 一种益气养血、补肾壮阳的药物制剂的检测方法 |
| CN109374814A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-02-22 | 国药集团新疆制药有限公司 | 一种反相hplc法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法 |
| CN109932469A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-06-25 | 安徽中医药大学第一附属医院 | 一种痔瘘洗剂中冰片的鉴别方法 |
| CN109932470A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-06-25 | 安徽中医药大学第一附属医院 | 一种甘草中药制剂薄层色谱鉴别中硅胶g板的碱化方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1850161A (zh) * | 2006-01-17 | 2006-10-25 | 承德颈复康药业集团有限公司 | 一种治疗疼痛的药物组合物及其制备方法 |
| CN100361667C (zh) * | 2005-07-08 | 2008-01-16 | 大连美罗中药厂有限公司 | 一种治疗伤科疾病的药物及其制备方法 |
| CN101278976B (zh) * | 2008-05-30 | 2010-10-20 | 大连美罗中药厂有限公司 | 一种伤科接骨药物的检测方法 |
| CN101904897A (zh) * | 2010-07-30 | 2010-12-08 | 广州白云山和记黄埔中药有限公司 | 一种复方丹参片的检测方法 |
| CN102091297A (zh) * | 2011-01-26 | 2011-06-15 | 湖南康尔佳药业有限公司 | 一种肝保健药品的质量控制方法 |
-
2012
- 2012-12-19 CN CN201210555854.7A patent/CN102998412B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100361667C (zh) * | 2005-07-08 | 2008-01-16 | 大连美罗中药厂有限公司 | 一种治疗伤科疾病的药物及其制备方法 |
| CN1850161A (zh) * | 2006-01-17 | 2006-10-25 | 承德颈复康药业集团有限公司 | 一种治疗疼痛的药物组合物及其制备方法 |
| CN101278976B (zh) * | 2008-05-30 | 2010-10-20 | 大连美罗中药厂有限公司 | 一种伤科接骨药物的检测方法 |
| CN101904897A (zh) * | 2010-07-30 | 2010-12-08 | 广州白云山和记黄埔中药有限公司 | 一种复方丹参片的检测方法 |
| CN102091297A (zh) * | 2011-01-26 | 2011-06-15 | 湖南康尔佳药业有限公司 | 一种肝保健药品的质量控制方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 国家药典委员会: "中华人民共和国药典2010年版1部", 《中华人民共和国药典2010年版1部》 * |
| 黄可儿 等: "反相高效液相法测定通痹灵片中马钱子碱、士的宁的含量", 《广州中医药大学学报》 * |
| 黄巧英: "对《中国药典》载桂林西瓜霜鉴别方法的探讨", 《海峡药学》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107064402A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-08-18 | 江西药都仁和制药有限公司 | 一种益气养血、补肾壮阳的药物制剂的检测方法 |
| CN107064402B (zh) * | 2017-06-08 | 2019-06-11 | 江西药都仁和制药有限公司 | 一种益气养血、补肾壮阳的药物制剂的检测方法 |
| CN109374814A (zh) * | 2018-12-03 | 2019-02-22 | 国药集团新疆制药有限公司 | 一种反相hplc法测定胃尔宁片中士的宁的含量的方法 |
| CN109932469A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-06-25 | 安徽中医药大学第一附属医院 | 一种痔瘘洗剂中冰片的鉴别方法 |
| CN109932470A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-06-25 | 安徽中医药大学第一附属医院 | 一种甘草中药制剂薄层色谱鉴别中硅胶g板的碱化方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102998412B (zh) | 2015-06-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102998412B (zh) | 一种伤科接骨外用制剂的检测方法 | |
| CN104306959A (zh) | 一种治疗骨质疏松的药物组合物及其制备方法 | |
| CN102397328B (zh) | 一种用于治疗骨折的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| CN1316990C (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN104547288B (zh) | 具有清除自由基祛红肿功效的外用中药组合物、制剂及其制备方法 | |
| CN110638848A (zh) | 一种基于透皮吸收技术提取木芙蓉叶有效成分的方法 | |
| CN102641278A (zh) | 银杏酚酸在治疗关节炎中的用途 | |
| CN101152391A (zh) | 一种用于治疗跌打损伤的药物制剂及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN103566282B (zh) | 一种抗肿瘤作用中药组合物及制备方法 | |
| CN102058747B (zh) | 一种超微粉碎法制备展筋活血散的工艺 | |
| CN101843812B (zh) | 一种接骨七厘组合物及其制备方法 | |
| CN1966064A (zh) | 一种伤湿祛痛软膏及其制备方法 | |
| CN102429958A (zh) | 一种外用伤科接骨的提取物及其制备方法 | |
| CN106727892A (zh) | 一种复方红豆杉制剂及其制备方法 | |
| CN114832055A (zh) | 一种控制癌性疼痛的药物的制备方法及其应用 | |
| CN1723959A (zh) | 一种治疗骨折及软组织损伤药物的制备方法 | |
| CN102512499A (zh) | 一种伤科接骨外用制剂及其制备方法 | |
| CN106377583B (zh) | 一种甘肃道地药材铁棒锤的炮制工艺及其质量检测方法 | |
| CN113730379B (zh) | 一种含白花丹提取物的巴布剂及其制备方法 | |
| CN103110787B (zh) | 复方伤复宁膏及其制备方法 | |
| CN102846678A (zh) | 银杏酚酸在减肥中的用途 | |
| CN106539868A (zh) | 一种治疗骨质疏松的药物组合物及其制备方法 | |
| CN102406785B (zh) | 骨愈灵片剂药物组合物及制备方法 | |
| CN1951428A (zh) | 一种治疗伤科疾病的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 | |
| CN108465000A (zh) | 治疗眼部麦粒肿霰粒肿、全身浅表组织和关节炎症的组合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150617 Termination date: 20211219 |