CN109402135A - 佛甲草耐盐基因slbhlh及其应用 - Google Patents

佛甲草耐盐基因slbhlh及其应用 Download PDF

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CN109402135A CN201710711866.7A CN201710711866A CN109402135A CN 109402135 A CN109402135 A CN 109402135A CN 201710711866 A CN201710711866 A CN 201710711866A CN 109402135 A CN109402135 A CN 109402135A
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slbhlh
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sedum lineare
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resistant gene
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王洁华
王彩丽
杨晓沛
杨少辉
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Tianjin University
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
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Abstract

本发明公开了佛甲草耐盐基因SLBHLH及其应用，佛甲草耐盐基因SLBHLH，是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，实验证明，佛甲草耐盐基因SLBHLH增强拟南芥或杨树耐盐性能。

Description

佛甲草耐盐基因SLBHLH及其应用
技术领域
本发明涉及一种佛甲草(Sedum lineare Thunb,简称SlT)耐盐基因及其应用，属于分子生物学和生物技术领域。
背景技术
土壤的盐碱胁迫是降低农作物产量的主要环境因素之一。因此，研究和培育耐盐碱植物，对综合开发利用盐渍土壤、提高农作物产量意义重大。目前，世界上有4亿-9亿hm2的土地受盐渍化的影响，我国就有2600万hm2，其中耕地约600万hm2，土地盐渍化已成为影响作物生长发育及高产优质的一个重要因素。随着工业的不断发展，世界范围内可耕地数量日益减少，同时土地盐渍化不断加剧，因此，研究和培育耐盐碱植物，对综合开发利用盐渍土壤意义重大。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种佛甲草耐盐基因SLBHLH。
本发明的第二个目的是提供含有佛甲草耐盐基因SLBHLH的克隆载体。
本发明的第三个目的是提供含有上述克隆载体的宿主细胞。
本发明的第四个目的是提供含有佛甲草耐盐基因SLBHLH的表达载体。
本发明的第五个目的是提供含有上述表达载体的宿主细胞。
本发明的第六个目的是提供佛甲草耐盐基因SLBHLH增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。
本发明的技术方案概述如下：
佛甲草耐盐基因SLBHLH，是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
含佛甲草耐盐基因SLBHLH的克隆载体pJET1.2_SLBHLH。
含有克隆载体pJET1.2_SLBHLH的宿主细胞。
含佛甲草耐盐基因SLBHLH的表达载体pBI121_SLBHLH。
含有表达载体pBI121_SLBHLH的宿主细胞。
佛甲草耐盐基因SLBHLH增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。
本发明的优点：
实验证明，佛甲草耐盐基因SLBHLH增强拟南芥或杨树耐盐性能。
附图说明
图1为SLBHLH基因克隆电泳示意图。
图2为SLBHLH插入表达载体后示意图。
图3为pBI121_SLBHLH转化拟南芥后，转化子基因组PCR筛选结果。
图4为pBI121_SLBHLH转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR测定表达水平结果。
图5为SLBHLH转基因拟南芥T3纯合体抗盐实验效果照片。
图6为pBI121_SLBHLH转化杨树后，转化子基因组PCR筛选结果。
图7为pBI121_SLBHLH转化杨树后，半定量PCR测定表达水平结果。
图8为SLBHLH转基因杨树抗盐实验效果照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
载体pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231
载体pBIl21购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/
实施例1
1.佛甲草(Sedum lineare Thunb,简称SlT)SLBHLH基因的克隆
从150mM NaCl水溶液处理的佛甲草(取自天津市滨海新区)中，使用植物RNeasyPlant Mini Kit(Transgene Code#E101-0150rxns)提取总RNA，并且利用EasyScriptFrist-Strand cDNA SynSgesis SuperMix(Transgene Code#AE301-03100rxns)反转录出cDNA。对cDNA进行高通量测序(诺禾致源公司进行高通量测序)获得SLBHLH基因的3’端序列，使用RACE技术(Takara-RACE kit)获得SLBHLH基因的全长cDNA序列将扩增得到的SLBHLH基因进行测序分析，得到完整的SLBHLH基因全长为1011bp。构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQ IDNo.3)，下游5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQ ID No.4)，以利于后期表达载体的构建。其具体步骤如下：
1).cDNA第一链的合成
用反转录试剂盒TaKaRaRNAPCR Kit(AMV)Ver.3.0，以总RNA为模板，Oligo(dT)为引物，在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA第一链，反转录体系如下：
反应条件：42℃60min，99℃5min。
2).佛甲草SLBHLH基因反转录质量PCR扩增检测
用佛甲草Actin基因特异引物SEQ ID No.5:5'-GAACTTACTAGCCGACTG-3',SEQ IDNo.6：5'-CCTCAAGCCTTATACGCAA-3'，PCR扩增，以验证反转录反应及RNA质量。PCR反应体系如下：
反应条件：94℃3min；94℃30s，40℃30s，72℃50s，35cycles；72℃5min。
3).佛甲草SLBHLH基因片段PCR扩增
利用Takara RACE kit扩增得到的SLBHLH基因进行测序分析，得到完整的佛甲草SLBHLH基因全长为1011bp(SEQ ID No.1)。由佛甲草SLBHLH基因编码的蛋白质，是SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。根据已知cDNA序列利用primer软件设计SLBHLH基因上下游引物:
SEQ ID No.7:5'-ATGGCAATGGAAGCACTTCC-3'，
SEQ ID No.8:5'-TTAGGTACATACATCACACATGG-3'，其PCR反应体系如下：
PCR反应条件为:95℃，5min；95℃，30s，58℃，30s，72℃，90s，35cycles；72℃，10min；4℃，∞。
PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量(见图1)，其余用作产物的纯化回收。
4).构建含有佛甲草SLBHLH基因的克隆载体
构建含有佛甲草SLBHLH基因的载体pJET1.2_SLBHLH
胶回收纯化后的佛甲草SLBHLH基因目的片段利用Clone JET PCR Cloning Kit
(pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231)重组到载体pJET1.2上，得到载体pJET1.2_SLBHLH。
其反应程序如下：
反应条件24℃,10min冰上静止30min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，转入感受态细胞DH5α，37℃，180rpm，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素Amp100uM)固体培养基中，37℃过夜培养。
分别利用目的片段的上下游引物(SEQ ID No.7和SEQ ID No.8)对不同的菌落进行菌落PCR验证，筛选阳性菌落测序，得到含有克隆载体pJET1.2_SLBHLH的宿主细胞。
注：pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231载体购于invitrogen；所用大肠杆菌为DH5α感受态细胞，TIANGEN，CB101-2。
5).构建含有佛甲草SLBHLH基因的表达载体
构建含有佛甲草SLBHLH基因的表达载体pBI121_SLBHLH
构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端和3’添加pBI121重组位点，
SEQ ID No.3:5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3',
SEQ ID No.4:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'
得到：
SEQ ID No.9:5'-ACGGGGGACTCTAGAGGATCCATGGCAATGGAAGCACTTCC-3'
SEQ ID No.10:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC TTAGGTACATACATCACACATGG-3'
提取测序正确的pJET1.2-基因的质粒，作为模版，利用含有重组位点SEQ IDNo.9，SEQ ID No.10为引物进行PCR扩增，其反应体系如下。
PCR反应条件为:95℃，5min；95℃，30s，58℃，30s，72℃，90s，35cycles；72℃，10min；4℃，∞。
PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量，其余用作产物的纯化回收。
提取pBI121质粒，其载体图谱(见图2)，对其进行双酶切线性化，程序如下：
反应条件：37℃，12h，80℃20min失活。
将基因和线性化的pBI121质粒使用Clone Express Entry One Step CloningKit试剂盒进行重组构建，反应程序如下：
反应程序：37℃，30min，冰上5min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，转入感受态细胞DH5α，37℃，180r，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素kan 50uM)固体培养基中，37℃过夜培养。
分别利用载体和目的片段的上下游引物(见SEQ ID No.9和SEQ ID No.10)对同一个菌落进行菌落PCR双重验证，筛选阳性菌落测序(见SEQ ID No.11)。从而获得含佛甲草耐盐基因SLBHLH的表达载体pBI121_SLBHLH。
注：本步骤使用Clon Express Entry One Step Cloning Kit购于vazyme，
6).含有佛甲草SLBHLH基因的重组载体转化农杆菌感受态细胞
实验所用的农杆菌菌株为C58(购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/)，C58具有利福平抗性(Rif)，辅助质粒具有庆大霉素抗性(Gen)。
利用电击农杆菌转化法，将含有佛甲草SLBHLH基因的大肠杆菌表达载体pBI121_SLBHLH转化到农杆菌株C58(pMP90)感受态细胞中，28℃，培养36h，菌落PCR挑选阳性克隆菌落。
实施例2
1.转化拟南芥
(1)转化拟南芥。
转化拟南芥的具体操作步骤：
①实施例1获得的阳性克隆菌落活化与扩大培养
活化：挑保存的阳性克隆菌落置于3mLYEB液体培养基中(添加抗生素Gen使浓度为30mg/L、添加抗生素Rift使浓度为25mg/L以及添加抗生素Sp使浓度为50mg/L)培养15小时左右(至OD600＝0.8左右)，180rpm，28℃。
阳性克隆菌的扩大培养：新鲜的10mL的YEB液体培养基中加入适量的抗生素(添加抗生素Gen浓度为30mg/L、抗生素Rift浓度为25mg/L以及抗生素Sp浓度为50mg/L)，然后接种适量阳性克隆菌液到YEB液体培养基中进行培养，180rpm，在28℃培养至OD600＝0.6。
②转化
将菌液离心(3000rpm，15℃,10min)后弃上清，用体积两倍于所取菌液的质量浓度为5％的蔗糖水溶液重悬菌体(缓慢操作以保证菌体活力)，使菌体散开，调OD600＝0.8。
选取培养3-4周抽苔5-7cm的野生型拟南芥，倒置于装有转化液的容器中，使整个花序浸泡在菌液中15秒，取出拟南芥横躺在托盘中，用塑料薄膜罩住保湿，并暗处理12h，使拟南芥直立在温度25℃，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长，直到种子成熟。种子采集后放到37℃烘箱烘干两周，以备后续试验使用。
(2)转基因拟南芥阳性转化子纯合体的筛选
将收取的T1代种子经过消毒以后，放置在冰箱4℃三天，然后在超净台上将转基因拟南芥种子均匀播种在含有50μg/mL卡那霉素的1/2MS固体筛选培养基上，在1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，生长8-10天，叶子为深绿色即为转基因拟南芥的T1代阳性转化子。当T1代阳性转化子植株长到3-4片真叶时，将其移植到土壤(德国进口泥炭土422#，购于Klasmann-Deilmann GmbH,德国，http://www.klasmann-deilmann.com)中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下继续生长14天，先作阳性转化子的鉴定(见图3)，再通过半定量PCR先对其转基因的表达水平进行鉴定(见图4)，选取高表达的独立转化株系4号和低表达的独立转化株系5号。在上述条件下继续生长，约一个半月后收集种子即为T2代转化种子。重复上述步骤得到4号和5号的T3代纯合体种子。
(3)对转基因拟南芥进行盐胁迫处理
将4号T3代纯合体种子、5号T3代纯合体种子、野生拟南芥种子分别种植在土壤中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长21天，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分为三组平行实验，每组不同类型的植株各7株，均用盐分处理液(150mM NaCl水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理15天后植物照相(见图5)。
实施例3
1.转化杨树
供阳性克隆菌转化的杨树为欧洲山杨×银白杨(Populustremula×P.albaINRAclone N7171-B4，以下简称717杨树)组培苗。
(1)将717杨树腋芽或顶芽置于基本培养基上继代繁殖，培养6周获得组培苗；切取所述组培苗1cm不带腋芽的茎段，划伤口后于24℃黑暗条件下预培养3天；
(2)将选取的实施例1获得的阳性克隆菌菌液(OD600＝0.8)在室温、4000rpm离心10min，弃去上清液，将沉淀用等体积的M液(M液：MS盐4.4g，蔗糖30g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，乙酰丁香酮As19.86mg，定容至1L，pH＝5.7)重悬，24℃，100rpm活化1h得到侵染液；按40个，25mL的比例将步骤(1)预培养的茎段放入所述侵染液中，24℃条件下100rpm侵染1h。经过共培养(M1固体培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，琼脂7.2g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，乙酰丁香酮As19.86mg，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，暗条件下共培养36小时)、延迟选择(CIM延迟选择培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，头孢霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：800Lux弱光下培养8天，光照/黑暗为16h/8h)、诱导不定芽(SIM筛选培养基中：MS盐4.4g，蔗糖30g，细胞分裂素TDZ0.05mg，头孢霉素500mg，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux，光照/黑暗为16h/8h)、伸长培养(SEM筛选培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，细胞分裂素2ip1.02mg，头孢霉素500mg，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux光照，光照/黑暗为16h/8h，培养4周)、诱导生根(RM培养基的组成为：MS盐2.2g，蔗糖30g，头孢霉素500mg，，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux光照，光照/黑暗为16h/8h)多步后，待再生杨树生长正常后，对每一棵独立转化子进行阳性鉴定。(见图6)
通过半定量PCR选取高表达的独立转化株系1号和低表达的独立转化株系3号进行抗盐实验。(见图7)
(3)将717杨树进行盐处理
将生长2个月的长势均匀的1号转基因高表达杨树、3号转基因低表达杨树、野生型717杨树移栽至土盆中，待土盆苗生长30d后，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分成三组，每组不同类型的植株各7株，用盐分处理液(150mM NaCl水溶液水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理30天后观察植株并照相(见图8)。
SEQUENCE LISTING
<110> 天津大学
<120> 佛甲草耐盐基因SLBHLH及其应用
<130>
<160> 11
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1011
<212> DNA
<213> Sedum lineare Thunb
<400> 1
atggcaatgg aagcacttcc ttcaaatgat tttcttaact tcctcatcta tgatacctta 60
tcagcaaatc ccatttgtaa tagcagcttc cctcattttg gctcctcatc ttccgatacc 120
gctaacactt tagcttacat cggtcaagtt gataatgacc taaaattgcc tccagaagtt 180
aatactgaaa ttgcgcgagg cggcggtggt ggtcgtggcg gaataaagaa actaaacttg 240
ggagtgcaag gagtttgtaa tggtggaaag aagaagagga ggaaaagagc tagagtttgc 300
aaaaacaaag aagaagctga gacacaaagg atgacacaca ttgtagtaga gagaaaccgt 360
cgaaaacaaa tgaatgaaca tctctctgtc ctacgctctc taatgccgcc atcttacgct 420
caaaggggtg atcaagcttc tatagtagga ggtgctattg agtttgtaaa ggaacttgaa 480
cacattgttc aatctcttga agcacaaaag tatcagctat cgacgcaatc gatggattca 540
tctcgtcatc aaggactatc agatgccaac acaaccacct tgacatcatc aatcccctct 600
acaccatttt cacaattctt cacttaccca cagtatgtat ggtcccataa cctatctaat 660
gatcagtaca caacttctac caaagcttcc atagctgata tagaggtcac tctcattgaa 720
actcatgcta acatcaagat cctctcaaaa agaagcccaa aacagcctta tagaattgtc 780
ttcagctttc aagcagttca tctaaccata cttcacctta acatcactac catggattca 840
attgtcttct actccattag tgctaaggtt gaagaagggt gcccactgag ctcagtagat 900
gacatagcag gagcagttca tcacatgcta agaattattg agcaagaaga agaagaacaa 960
aaagaagatg ctgatgtggc tgttgctacc atgtgtgatg tatgtaccta a 1011
<210> 2
<211> 336
<212> PRT
<213> Sedum lineare Thunb
<400> 2
Met Ala Met Glu Ala Leu Pro Ser Asn Asp Phe Leu Asn Phe Leu Ile
1 5 10 15
Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Asn Pro Ile Cys Asn Ser Ser Phe Pro His
20 25 30
Phe Gly Ser Ser Ser Ser Asp Thr Ala Asn Thr Leu Ala Tyr Ile Gly
35 40 45
Gln Val Asp Asn Asp Leu Lys Leu Pro Pro Glu Val Asn Thr Glu Ile
50 55 60
Ala Arg Gly Gly Gly Gly Gly Arg Gly Gly Ile Lys Lys Leu Asn Leu
65 70 75 80
Gly Val Gln Gly Val Cys Asn Gly Gly Lys Lys Lys Arg Arg Lys Arg
85 90 95
Ala Arg Val Cys Lys Asn Lys Glu Glu Ala Glu Thr Gln Arg Met Thr
100 105 110
His Ile Val Val Glu Arg Asn Arg Arg Lys Gln Met Asn Glu His Leu
115 120 125
Ser Val Leu Arg Ser Leu Met Pro Pro Ser Tyr Ala Gln Arg Gly Asp
130 135 140
Gln Ala Ser Ile Val Gly Gly Ala Ile Glu Phe Val Lys Glu Leu Glu
145 150 155 160
His Ile Val Gln Ser Leu Glu Ala Gln Lys Tyr Gln Leu Ser Thr Gln
165 170 175
Ser Met Asp Ser Ser Arg His Gln Gly Leu Ser Asp Ala Asn Thr Thr
180 185 190
Thr Leu Thr Ser Ser Ile Pro Ser Thr Pro Phe Ser Gln Phe Phe Thr
195 200 205
Tyr Pro Gln Tyr Val Trp Ser His Asn Leu Ser Asn Asp Gln Tyr Thr
210 215 220
Thr Ser Thr Lys Ala Ser Ile Ala Asp Ile Glu Val Thr Leu Ile Glu
225 230 235 240
Thr His Ala Asn Ile Lys Ile Leu Ser Lys Arg Ser Pro Lys Gln Pro
245 250 255
Tyr Arg Ile Val Phe Ser Phe Gln Ala Val His Leu Thr Ile Leu His
260 265 270
Leu Asn Ile Thr Thr Met Asp Ser Ile Val Phe Tyr Ser Ile Ser Ala
275 280 285
Lys Val Glu Glu Gly Cys Pro Leu Ser Ser Val Asp Asp Ile Ala Gly
290 295 300
Ala Val His His Met Leu Arg Ile Ile Glu Gln Glu Glu Glu Glu Gln
305 310 315 320
Lys Glu Asp Ala Asp Val Ala Val Ala Thr Met Cys Asp Val Cys Thr
325 330 335
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
acgggggact ctagaggatc c 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
cgatcgggga aattcgagct c 21
<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
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<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
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<400> 7
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<212> DNA
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<213> 人工合成
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acgggggact ctagaggatc catggcaatg gaagcacttc c 41
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<211> 44
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 10
cgatcgggga aattcgagct cttaggtaca tacatcacac atgg 44
<210> 11
<211> 1011
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 11
atggcaatgg aagcacttcc ttcaaatgat tttcttaact tcctcatcta tgatacctta 60
tcagcaaatc ccatttgtaa tagcagcttc cctcattttg gctcctcatc ttccgatacc 120
gctaacactt tagcttacat cggtcaagtt gataatgacc taaaattgcc tccagaagtt 180
aatactgaaa ttgcgcgagg cggcggtggt ggtcgtggcg gaataaagaa actaaacttg 240
ggagtgcaag gagtttgtaa tggtggaaag aagaagagga ggaaaagagc tagagtttgc 300
aaaaacaaag aagaagctga gacacaaagg atgacacaca ttgtagtaga gagaaaccgt 360
cgaaaacaaa tgaatgaaca tctctctgtc ctacgctctc taatgccgcc atcttacgct 420
caaaggggtg atcaagcttc tatagtagga ggtgctattg agtttgtaaa ggaacttgaa 480
cacattgttc aatctcttga agcacaaaag tatcagctat cgacgcaatc gatggattca 540
tctcgtcatc aaggactatc agatgccaac acaaccacct tgacatcatc aatcccctct 600
acaccatttt cacaattctt cacttaccca cagtatgtat ggtcccataa cctatctaat 660
gatcagtaca caacttctac caaagcttcc atagctgata tagaggtcac tctcattgaa 720
actcatgcta acatcaagat cctctcaaaa agaagcccaa aacagcctta tagaattgtc 780
ttcagctttc aagcagttca tctaaccata cttcacctta acatcactac catggattca 840
attgtcttct actccattag tgctaaggtt gaagaagggt gcccactgag ctcagtagat 900
gacatagcag gagcagttca tcacatgcta agaattattg agcaagaaga agaagaacaa 960
aaagaagatg ctgatgtggc tgttgctacc atgtgtgatg tatgtaccta a 1011

Claims (6)

1.佛甲草耐盐基因SLBHLH，其特征是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.含权利要求1的一种佛甲草耐盐基因SLBHLH的克隆载体pJET1.2_SLBHLH。
3.含有克隆载体pJET1.2_SLBHLH的宿主细胞。
4.含权利要求1的一种佛甲草耐盐基因SLBHLH的表达载体pBI121_SLBHLH。
5.含有表达载体pBI121_SLBHLH的宿主细胞。
6.佛甲草耐盐基因SLBHLH增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。
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