CN108570469A

CN108570469A - 佛甲草耐盐基因sltats及其应用

Info

Publication number: CN108570469A
Application number: CN201710141663.9A
Authority: CN
Inventors: 王洁华; 杨晓沛; 杨少辉; 宋英今
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2017-03-10
Filing date: 2017-03-10
Publication date: 2018-09-25

Abstract

本发明公开了佛甲草耐盐基因SLTATS及其应用，佛甲草耐盐基因SLTATS是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，实验证明，佛甲草耐盐基因SLTATS增强拟南芥或杨树耐盐性能。能使包括拟南芥、杨树在内的宿主植物具有较好的抗盐能力。

Description

佛甲草耐盐基因SLTATS及其应用

技术领域

本发明涉及一种佛甲草(Sedum lineare Thunb)耐盐基因及其应用，属于分子生物学和生物技术领域。

背景技术

由于气候变化和全球人口不断增长，土地盐碱化与水土流失和大气污染一样，已成为日益严重的环境问题之一。抑制并改良盐碱地的一条重要途径便是恢复植被，提高植被覆盖率，从而减少地表蒸发，增加土壤有机质含量。因此，了解植物耐盐的生理基础和植物抗盐的途径，认识盐分胁迫的信号传递机制，弄清耐盐基因的功能与作用，探讨耐盐植物选育研究的进展，对于进一步推动耐盐植物选育研究，加快盐碱地植被恢复具有重要意义。近些年，随着生物工程的应用和发展，研究者开始利用分子遗传学等生物手段研究相关的环境问题，具有独特、方便而具体的效果。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种佛甲草耐盐基因。

本发明的第二个目的是提供含有佛甲草耐盐基因的克隆载体。

本发明的第三个目的是提供含有上述克隆载体的宿主细胞。

本发明的第四个目的是提供含有佛甲草耐盐基因的表达载体。

本发明的第五个目的是提供含有上述表达载体的宿主细胞。

本发明的第六个目的是提供佛甲草耐盐基因增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。

本发明的技术方案概述如下：

佛甲草耐盐基因SLTATS，是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

含佛甲草耐盐基因SLTATS的克隆载体pJET1.2_SLTATS。

含有克隆载体pJET1.2_SLTATS的宿主细胞。

含佛甲草耐盐基因SLTATS的表达载体pBI121_SLTATS。

含有表达载体pB121_SLTATS的宿主细胞。

佛甲草耐盐基因SLTATS增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。

本发明的优点：

实验证明，佛甲草耐盐基因SLTATS增强拟南芥或杨树耐盐性能。能使包括拟南芥、杨树在内的宿主植物具有较好的抗盐能力。

附图说明

图1为SLTATS基因克隆电泳示意图。

图2为SLTATS插入表达载体后示意图。

图3为pBI121_SLTATS转化拟南芥后，转化子基因组PCR筛选结果。

图4为pBI121_SLTATS转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR测定表达水平结果。

图5为SLTATS转基因拟南芥T3纯合体抗盐实验效果照片。

图6为SLTATS转基因杨树抗盐实验效果照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

载体pJET1.2 pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231

载体pBIl21购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/

实施例1

1.佛甲草(Sedum lineare Thunb,简称Sl)SLTATS基因的克隆

从150mM NaCl水溶液处理的佛甲草(取自天津市滨海新区)中，使用植物RNeasyPlant Mini Kit(Transgene Code#E101-0150rxns)提取总RNA，并且利用EasyScriptFrist-Strand cDNA SynSgesis SuperMix(Transgene Code#AE301-03100rxns)反转录出cDNA。对cDNA进行高通量测序(诺禾致源公司进行高通量测序)获得SLTATS基因的3’端序列，使用RACE技术(Takara-RACE kit)获得SLTATS基因的全长cDNA序列将扩增得到的SLTATS基因进行测序分析，得到完整的SLTATS基因全长为1410bp。构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQ IDNo.3)，下游5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQ ID No.4)，以利于后期表达载体的构建。

其具体步骤如下：

1).cDNA第一链的合成

用反转录试剂盒TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0，以总RNA为模板，Oligo(dT)为引物，在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA第一链，反转录体系如下：

反应条件：42℃60min，99℃5min。

2).佛甲草SLTATS基因反转录质量PCR扩增检测

用佛甲草Actin基因特异引物SEQ ID No.5:5'-GAACTTACTAGCCGACTG-3',SEQ IDNo.6：5'-CCTCAAGCCTTATACGCAA-3'，PCR扩增，以验证反转录反应及RNA质量。PCR反应体系如下：

反应条件：94℃3min；94℃30s，40℃30s，72℃50s，35cycles；72℃5min。

3).佛甲草SLTATS基因片段PCR扩增

利用Takara RACE kit扩增得到的SLTATS基因进行测序分析，得到完整的佛甲草SLTATS基因全长为1410bp(SEQ ID No.1)。由佛甲草SLTATS基因编码的蛋白质，是SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。根据已知cDNA序列利用primer软件设计SLTATS基因上下游引物:SEQ ID No.7:5'-CGACCGTAACATGTGTCATTTG-3'，SEQ ID No.8:5'-CGGGCCTATCCGCAACGAATTTA-3'，其PCR反应程序如下：

PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量(见图1)，其余用作产物的纯化回收。

4).构建含有佛甲草SLTATS基因的克隆载体

构建含有佛甲草SLTATS基因的载体pJET1.2_SLTATS

胶回收纯化后的佛甲草SLTATS基因目的片段利用Clone JET PCR Cloning Kit(pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231)重组到载体pJET1.2上，得到载体pJET1.2_SLTATS。

其反应程序如下：

反应条件24℃,10min冰上静止30min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，转入感受态细胞DH5α，37℃，180r，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素Amp100uM)固体培养基中，37℃过夜培养。

分别利用目的片段的上下游引物(SEQ ID No.7和SEQ ID No.8)对不同的菌落进行菌落PCR验证，筛选阳性菌落测序，得到含有克隆载体pJET1.2_SLTATS的宿主细胞。

注：pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231载体购于invitrogen；所用大肠杆菌为DH5α感受态细胞，TIANGEN，CB101-2。

5).构建含有佛甲草SLTATS基因的表达载体

构建含有佛甲草SLTATS基因的表达载体pBI121_SLTATS

构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端和3’添加pBI121重组位点，

SEQ ID No.3:5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3',

SEQ ID No.4:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'

得到：

SEQ ID No.9:5'-ACGGGGGACTCTAGAGGATCCCGACCGTAACATGTGTCATTTG-3'

SEQ ID No.10:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTCCGGGCCTATCCGCAACGAATTTA-3'

提取测序正确的pJET1.2-基因的质粒，作为模版，利用含有重组位点SEQ IDNo.9，SEQ ID No.10为引物进行PCR扩增，其反应程序如下

PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量，其余用作产物的纯化回收。

提取pBI121质粒，其载体图谱(见图2)，对其进行双酶切线性化，程序如下：

反应条件：37℃，12h之后80℃20min失活。

将基因和线性化的pBI121质粒使用Clon Express Entry One Step Cloning Kit试剂盒进行重组构建，反应程序如下：

反应程序：37℃，30min，冰上5min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，转入感受态细胞DH5α，37℃，180r，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素kan 50uM)固体培养基中，37℃过夜培养。

分别利用载体和目的片段的上下游引物(见SEQ ID No.9和SEQ ID No.10)对同一个菌落进行菌落PCR双重验证，筛选阳性菌落测序(见SEQ ID No.11)。

注：本步骤使用Clon Express Entry One Step Cloning Kit购于vazyme，

6).含有佛甲草SLTATS基因的重组载体转化农杆菌感受态细胞

实验所用的农杆菌菌株为C58(购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/)，C58具有利福平抗性(Rif)，辅助质粒具有庆大霉素抗性(Gen)。

利用电击农杆菌转化法，将含有佛甲草SLTATS基因的大肠杆菌表达载体pBI121_SLTATS转化到农杆菌株C58(pMP90)感受态细胞中，28℃，培养36h，菌落PCR挑选阳性克隆菌落。

实施例2

1.转化拟南芥

(1)转化拟南芥。

转化拟南芥的具体操作步骤：

①实施例1获得的阳性克隆菌落活化与扩大培养

活化：挑保存的阳性克隆菌落置于3mLYEB液体培养基中(添加Gen、Rift、Sp抗生素，使浓度分别为30mg/L,、25mg/L、50mg/L)培养15小时左右(至OD600＝0.8左右)，180rpm，28℃。

阳性克隆菌的扩大培养：新鲜的10ml的YEB液体培养基中加入适量的抗生素(Gen、Rift、Sp抗生素，浓度分别为30mg/L、25mg/L、50mg/L)，然后接种适量阳性克隆菌液到YEB液体培养基中进行培养，180rpm，在28℃培养至OD600＝0.6。

②转化

将菌液离心(3000rpm，15℃,10min)后弃上清，用体积两倍于所取菌液的质量浓度为5％的蔗糖水溶液重悬菌体(缓慢操作以保证菌体活力)，使菌体散开，调OD600＝0.8。

选取培养3-4周抽苔5-7cm的野生型拟南芥，倒置于装有转化液的容器中，使整个花序浸泡在菌液中15秒，取出拟南芥横躺在托盘中，用塑料薄膜罩住保湿，并暗处理12h，使拟南芥直立在温度25℃，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长，直到种子成熟。种子采集后放到37℃烘箱烘干两周，以备后续试验使用。

(2)转基因拟南芥阳性转化子纯合体的筛选

将收取的T1代种子经过消毒以后，放置在冰箱4℃三天，然后在超净台上将转基因拟南芥种子均匀播种在含有50μg/ml卡那霉素的1/2MS固体筛选培养基上，在1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，生长8-10天，叶子为深绿色即为转基因拟南芥的T1代阳性转化子。当T1代阳性转化子植株长到3-4片真叶时，将其移植到土壤(购于EPAGMA,荷兰，http://www.epagma.eu/)中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下继续生长14天，先作阳性转化子的鉴定(见图3)，再通过半定量PCR先对其转基因的表达水平进行鉴定(见图4)，选取表达水平高的独立转化株系9号和表达水平低的独立转化株系2号。在上述条件下继续生长，约一个半月后收集种子即为T2代转化种子。重复上述步骤得到9号和2号的T3代纯合体种子。

(3)对转基因拟南芥进行盐胁迫处理

将9号T3代纯合体种子、2号T3代纯合体种子、野生拟南芥种子分别种植在土壤中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长21天，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分为三组平行实验，每组不同类型的植株各7株，均用盐分处理液(150mM NaCl水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理15天后植物照相(见图5)。

实施例3

1.转化杨树

供阳性克隆菌转化的杨树为欧洲山杨×银白杨(Populustremula×P.albaINRAclone N7171-B4，以下简称717杨树)组培苗。

(1)将717杨树腋芽或顶芽置于基本培养基上继代繁殖，培养6周获得组培苗；切取所述组培苗1cm不带腋芽的茎段，划伤口后于24℃黑暗条件下预培养3天；

(2)将选取的实施例1获得的阳性克隆菌菌液(OD600＝0.8)在室温、4000rpm离心10min，弃去上清液，将沉淀用等体积的M液(M液：MS盐4.4g，蔗糖30g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，乙酰丁香酮As19.86mg，定容至1L，pH＝5.7)重悬，24℃，100rpm活化1h得到侵染液；按40个，25mL的比例将步骤(1)预培养的茎段放入所述侵染液中，24℃条件下100rpm侵染1h。经过共培养(M1固体培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，琼脂7.2g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，乙酰丁香酮As19.86mg，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，暗条件下共培养36小时)、延迟选择(CIM延迟选择培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，头孢霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：800Lux弱光下培养8天，光照/黑暗为16h/8h)、诱导不定芽(SIM筛选培养基中：MS盐4.4g，蔗糖30g，细胞分裂素TDZ0.05mg，头孢霉素500mg，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux，光照/黑暗为16h/8h)、伸长培养(SEM筛选培养基：MS盐4.4g，蔗糖30g，细胞分裂素2ip1.02mg，头孢霉素500mg，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux光照，光照/黑暗为16h/8h，培养4周)、诱导生根(RM培养基的组成为：MS盐2.2g，蔗糖30g，头孢霉素500mg，，卡那霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7；培养条件：26℃，2000Lux光照，光照/黑暗为16h/8h)多步后，待再生杨树生长正常后，对每一棵独立转化子进行阳性鉴定。

通过半定量PCR选取表达水平高的独立转化株系和表达水平低的独立转化株系进行抗盐实验。

(3)将717杨树进行盐处理

将生长2个月的长势均匀的转基因高表达杨树、低表达转基因杨树、野生型717杨树移栽至土盆中，待土盆苗生长30d后，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分成三组，每组不同类型的植株各7株，用盐分处理液(150mM NaCl水溶液水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理30天后观察植株并照相(见图6)。

SEQUENCE LISTING

<110> 天津大学

<120> 佛甲草耐盐基因SLTATS及其应用

<130>

<160> 11

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1410

<212> DNA

<213> Sedum lineare Thunb

<400> 1

atgcctcctc cggcaaccac tacaaacggg gatagtattg cccccatttg tgcagcttta 60

gttgcgcaac ccaatgcagc atttctaacc acggttggaa acaactccgt tgtgttaata 120

aataacaagt tattattccc tgccattccg aatattccca acactccaca aactaatctt 180

gctgccttta gaccttcatt atcgccgctg agaaaagatc cgatcaaaca gaagacaccg 240

ctgaaccaca ttgtggatat agctaatggt tttcttccaa atttgctgag caagattgca 300

gtgagtgtgt atgctggtaa ttcagctact gcattcagaa taacgcttag gtatagattt 360

gttccgagat tgactacgtt caggcttagg ccgtattata ctacagagca aagtaggttt 420

atcgccacag ccagaaacag acgaacccgg atcattggcg atttaatgac ttcaaagatt 480

gatgttgaat atgcctctgt atcaccatcc gcgagtttct gtgaaacttg ggaatccgaa 540

aagtttgatt ttttaccaga tgcagcactt ttcttatcat ctttattatc caatgccagc 600

caaacattat tcggcaaata ttttccattg accctcgcaa tattacgcat aacctccatt 660

gcttcattaa ccctccctcg aaccaaaaac catcgtggtg attcggataa aaaggggatc 720

actagaagca caaacaaaat tgatggcacg gacgaggcaa catatagttc acgccattgt 780

gggaagagat tagaaacagc tgcacaaagt gcaataccag aagagaaaaa gaagaatgtg 840

gacatgccag cagatcctcg cttggatgga ccgataggct ctgttgccag aacattagca 900

caaagaccaa taccaccagt gctgaatccc gtaaggaagc ggagaagaac atacacgtta 960

aagtttgggg agaaggctgt cagtattccg aagatggcgc tgaggatgca tacgatggtt 1020

agagagcctt ttcggcctaa aaacgagtct gaaaggagac caaatgtccc tgcaccaatc 1080

aagcagccac cgaagaaaat ggcttgtacg agtccaattt tatacttttg tccagaaaca 1140

agtccccatt ccttagccgt cgactgccca acgccaccaa cccaatcatc ggtcggttcc 1200

ctatccgcaa atatcataac catagtatta aacgcttcta gagcccacgc taagctcgtt 1260

aatacgaatt gccggatttg ccatctccct aattcgccgc aatgtcttgt taacatctcg 1320

tctataccta ttttgacctt gttcgtatcg ttatcgtcgt gcttgagaag aggcgacgac 1380

agcccgcccg ctatttcttc cgccatctga 1410

<210> 2

<211> 469

<212> PRT

<213> Sedum lineare Thunb

<400> 2

Met Pro Pro Pro Ala Thr Thr Thr Asn Gly Asp Ser Ile Ala Pro Ile

1 5 10 15

Cys Ala Ala Leu Val Ala Gln Pro Asn Ala Ala Phe Leu Thr Thr Val

20 25 30

Gly Asn Asn Ser Val Val Leu Ile Asn Asn Lys Leu Leu Phe Pro Ala

35 40 45

Ile Pro Asn Ile Pro Asn Thr Pro Gln Thr Asn Leu Ala Ala Phe Arg

50 55 60

Pro Ser Leu Ser Pro Leu Arg Lys Asp Pro Ile Lys Gln Lys Thr Pro

65 70 75 80

Leu Asn His Ile Val Asp Ile Ala Asn Gly Phe Leu Pro Asn Leu Leu

85 90 95

Ser Lys Ile Ala Val Ser Val Tyr Ala Gly Asn Ser Ala Thr Ala Phe

100 105 110

Arg Ile Thr Leu Arg Tyr Arg Phe Val Pro Arg Leu Thr Thr Phe Arg

115 120 125

Leu Arg Pro Tyr Tyr Thr Thr Glu Gln Ser Arg Phe Ile Ala Thr Ala

130 135 140

Arg Asn Arg Arg Thr Arg Ile Ile Gly Asp Leu Met Thr Ser Lys Ile

145 150 155 160

Asp Val Glu Tyr Ala Ser Val Ser Pro Ser Ala Ser Phe Cys Glu Thr

165 170 175

Trp Glu Ser Glu Lys Phe Asp Phe Leu Pro Asp Ala Ala Leu Phe Leu

180 185 190

Ser Ser Leu Leu Ser Asn Ala Ser Gln Thr Leu Phe Gly Lys Tyr Phe

195 200 205

Pro Leu Thr Leu Ala Ile Leu Arg Ile Thr Ser Ile Ala Ser Leu Thr

210 215 220

Leu Pro Arg Thr Lys Asn His Arg Gly Asp Ser Asp Lys Lys Gly Ile

225 230 235 240

Thr Arg Ser Thr Asn Lys Ile Asp Gly Thr Asp Glu Ala Thr Tyr Ser

245 250 255

Ser Arg His Cys Gly Lys Arg Leu Glu Thr Ala Ala Gln Ser Ala Ile

260 265 270

Pro Glu Glu Lys Lys Lys Asn Val Asp Met Pro Ala Asp Pro Arg Leu

275 280 285

Asp Gly Pro Ile Gly Ser Val Ala Arg Thr Leu Ala Gln Arg Pro Ile

290 295 300

Pro Pro Val Leu Asn Pro Val Arg Lys Arg Arg Arg Thr Tyr Thr Leu

305 310 315 320

Lys Phe Gly Glu Lys Ala Val Ser Ile Pro Lys Met Ala Leu Arg Met

325 330 335

His Thr Met Val Arg Glu Pro Phe Arg Pro Lys Asn Glu Ser Glu Arg

340 345 350

Arg Pro Asn Val Pro Ala Pro Ile Lys Gln Pro Pro Lys Lys Met Ala

355 360 365

Cys Thr Ser Pro Ile Leu Tyr Phe Cys Pro Glu Thr Ser Pro His Ser

370 375 380

Leu Ala Val Asp Cys Pro Thr Pro Pro Thr Gln Ser Ser Val Gly Ser

385 390 395 400

Leu Ser Ala Asn Ile Ile Thr Ile Val Leu Asn Ala Ser Arg Ala His

405 410 415

Ala Lys Leu Val Asn Thr Asn Cys Arg Ile Cys His Leu Pro Asn Ser

420 425 430

Pro Gln Cys Leu Val Asn Ile Ser Ser Ile Pro Ile Leu Thr Leu Phe

435 440 445

Val Ser Leu Ser Ser Cys Leu Arg Arg Gly Asp Asp Ser Pro Pro Ala

450 455 460

Ile Ser Ser Ala Ile

465

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

acgggggact ctagaggatc c 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

cgatcgggga aattcgagct c 21

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

gaacttacta gccgactg 18

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 6

cctcaagcct tatacgcaa 19

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 7

cgaccgtaac atgtgtcatt tg 22

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 8

cgggcctatc cgcaacgaat tta 23

<210> 9

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 9

acgggggact ctagaggatc ccgaccgtaa catgtgtcat ttg 43

<210> 10

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 10

cgatcgggga aattcgagct ccgggcctat ccgcaacgaa ttta 44

<210> 11

<211> 1410

<212> DNA

<213> Sedum lineare Thunb

<400> 11

atgcctcctc cggcaaccac tacaaacggg gatagtattg cccccatttg tgcagcttta 60

gttgcgcaac ccaatgcagc atttctaacc acggttggaa acaactccgt tgtgttaata 120

aataacaagt tattattccc tgccattccg aatattccca acactccaca aactaatctt 180

gctgccttta gaccttcatt atcgccgctg agaaaagatc cgatcaaaca gaagacaccg 240

ctgaaccaca ttgtggatat agctaatggt tttcttccaa atttgctgag caagattgca 300

gtgagtgtgt atgctggtaa ttcagctact gcattcagaa taacgcttag gtatagattt 360

gttccgagat tgactacgtt caggcttagg ccgtattata ctacagagca aagtaggttt 420

atcgccacag ccagaaacag acgaacccgg atcattggcg atttaatgac ttcaaagatt 480

gatgttgaat atgcctctgt atcaccatcc gcgagtttct gtgaaacttg ggaatccgaa 540

aagtttgatt ttttaccaga tgcagcactt ttcttatcat ctttattatc caatgccagc 600

caaacattat tcggcaaata ttttccattg accctcgcaa tattacgcat aacctccatt 660

gcttcattaa ccctccctcg aaccaaaaac catcgtggtg attcggataa aaaggggatc 720

actagaagca caaacaaaat tgatggcacg gacgaggcaa catatagttc acgccattgt 780

gggaagagat tagaaacagc tgcacaaagt gcaataccag aagagaaaaa gaagaatgtg 840

gacatgccag cagatcctcg cttggatgga ccgataggct ctgttgccag aacattagca 900

caaagaccaa taccaccagt gctgaatccc gtaaggaagc ggagaagaac atacacgtta 960

aagtttgggg agaaggctgt cagtattccg aagatggcgc tgaggatgca tacgatggtt 1020

agagagcctt ttcggcctaa aaacgagtct gaaaggagac caaatgtccc tgcaccaatc 1080

aagcagccac cgaagaaaat ggcttgtacg agtccaattt tatacttttg tccagaaaca 1140

agtccccatt ccttagccgt cgactgccca acgccaccaa cccaatcatc ggtcggttcc 1200

ctatccgcaa atatcataac catagtatta aacgcttcta gagcccacgc taagctcgtt 1260

aatacgaatt gccggatttg ccatctccct aattcgccgc aatgtcttgt taacatctcg 1320

tctataccta ttttgacctt gttcgtatcg ttatcgtcgt gcttgagaag aggcgacgac 1380

agcccgcccg ctatttcttc cgccatctga 1410

Claims

1.佛甲草耐盐基因SLTATS，其特征是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.含权利要求1的一种佛甲草耐盐基因SLTATS的克隆载体pJET1.2_SLTATS。

3.含有克隆载体pJET1.2_SLTATS的宿主细胞。

4.含权利要求1的一种佛甲草耐盐基因SLTATS的表达载体pBI121_SLTATS。

5.含有表达载体pB121_SLTATS的宿主细胞。

6.佛甲草耐盐基因SLTATS增强拟南芥或杨树耐盐性能的用途。