CN110042106B - 佛甲草sljgr基因及其应用 - Google Patents

佛甲草sljgr基因及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110042106B
CN110042106B CN201810046379.8A CN201810046379A CN110042106B CN 110042106 B CN110042106 B CN 110042106B CN 201810046379 A CN201810046379 A CN 201810046379A CN 110042106 B CN110042106 B CN 110042106B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sljgr
gene
sedum lineare
seq
sedum
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201810046379.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110042106A (zh
Inventor
王洁华
李欣
杨少辉
李爽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University
Original Assignee
Tianjin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University filed Critical Tianjin University
Priority to CN201810046379.8A priority Critical patent/CN110042106B/zh
Publication of CN110042106A publication Critical patent/CN110042106A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110042106B publication Critical patent/CN110042106B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了佛甲草SLJGR基因及其应用，佛甲草SLJGR基因，是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；佛甲草SLJGR基因编码的蛋白质，是序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；含佛甲草SLJGR基因的重组载体，含有佛甲草SLJGR基因；含佛甲草SLJGR基因的宿主细胞，将含佛甲草SLJGR基因的重组载体导入到农杆菌菌株中，得到转化宿主细胞；实验证明，转染佛甲草SLJGR基因的拟南芥或烟草的耐盐功能得到了明显的提升。

Description

佛甲草SLJGR基因及其应用
技术领域
本发明属于遗传学和分子生物学领域，具体涉及佛甲草SLJGR基因及其应用。
背景技术
土壤盐碱化问题是解决全球粮食生产和环境问题主要决定因素之一，也是土地资源利用和开发最主要的障碍，因而盐碱土的改良成为了一项最紧迫的任务。目前利用盐生植物及耐盐作物等改良盐碱地国内外已经广泛应用，而开展生物排盐的研究为改良和开发利用盐碱地提供新的理念，其廉价、简单、有效和具有一定可行性等优点，也改善了土壤改良条件，提高水资源利用效率，维持农业可持续发展。本研究将佛甲草中SLJGR 基因分别转入拟南芥与烟草宿主体内，验证了SLJGR基因的耐盐性，开辟了培育耐盐物种的新途径，对修复生态环境和提高土地利用率具有重要战略意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种佛甲草SLJGR基因。
本发明的第二个目的是提供佛甲草SLJGR基因编码的蛋白质。
本发明的第三个目的是提供含有佛甲草SLJGR基因的重组载体。
本发明的第四个目的是提供含有上述重组载体的宿主细胞。
本发明的第五个目的是提供一种佛甲草SLJGR基因在提高植物耐盐的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
佛甲草SLJGR基因，是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
佛甲草SLJGR基因编码的蛋白质，是序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
含佛甲草SLJGR基因的重组载体，含有佛甲草SLJGR基因。
含佛甲草SLJGR基因的宿主细胞，将含佛甲草SLJGR基因的重组载体导入到农杆菌菌株中，得到转化宿主细胞。
实验证明，转染佛甲草SLJGR基因的拟南芥或烟草的耐盐功能得到了明显的提升。
本发明的优点：
实验证明，采用该基因转染的拟南芥和烟草表现出对盐胁迫的耐受力，说明本发明提供的耐盐基因SLJGR在改良作物耐盐能力方面起着重要的作用。
附图说明
图1是SLJGR基因克隆电泳示意图。
图2是SLJGR插入表达载体后示意图。
图3是pBI121_SLJGR转化拟南芥后，阳性转化子基因组PCR检测结果。
图4是pBI121_SLJGR转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR表达水平测定结果。
图5是SLJGR转基因拟南芥T3纯合体耐盐实验效果图片。
图6是pBI121_SLJGR转化烟草后，阳性转化子基因组PCR鉴定结果。
图7是pBI121_SLJGR转化烟草后，半定量PCR表达水平测定结果。
图8是SLJGR转基因烟草耐盐实验效果图片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
载体pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231
载体pBIl21购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心
实施例1
1.佛甲草(Sedum lineare Thunb,简称SlT)SLJGR基因的克隆
使用植物RNeasy Plant Mini Kit(Transgene Code#E101-0150rxns)提取经150mM NaCl水溶液处理的佛甲草(取自天津市滨海新区)中总RNA，并且利用EasyScriptFrist-Strand cDNA SynSgesis SuperMix(Transgene Code#AE301-03100rxns)反转录出cDNA。对cDNA进行高通量测序(诺禾致源公司进行高通量测序)获得SLJGR基因的 3’端序列，使用RACE技术(Takara-RACE kit)获得SLJGR基因的全长cDNA序列将扩增得到的SLJGR基因进行测序分析，得到完整的SLJGR基因，全长为987bp。将其连接到表达载体时，需分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游
5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQ ID No.3)，下游5'-
CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQ ID No.4)，以利于后期表达载体的构建。其具体步骤如下：
1).cDNA第一链的合成
用反转录试剂盒TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0，以总RNA为模板，Oligo (dT)为引物，在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA第一链，反转录体系如下：
Figure BDA0001551027640000031
反应条件：42℃30min，86℃5min。
2).佛甲草SLJGR基因反转录cDNA质量PCR扩增检测
引物为佛甲草Actin基因特异引物SEQ ID No.5:5'-GAACTTACTAGCCGACTG-3',
SEQ ID No.6：5'-CCTCAAGCCTTATACGCAA-3'，DNA模板为SLJGR的cDNA，通过 PCR扩增，来验证RNA及反转录获得的cDNA质量。
PCR反应体系如下：
Figure BDA0001551027640000032
反应程序：95℃5min；95℃30s，58℃30s，72℃1min，35cycles；72℃10min。 3).佛甲草SLJGR基因片段PCR扩增
利用Takara RACE kit扩增得到的SLJGR基因进行测序分析，得到完整的佛甲草SLJGR基因全长为987bp(SEQ ID No.1)。由佛甲草SLJGR基因编码的蛋白质，是SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。根据已知cDNA序列利用primer软件设计SLJGR基因上下游特异性引物:
SEQ ID No.7:5'-ATGTCTTCCGATCTCCAATTC-3'
SEQ ID No.8:5'-TTAATGCGATTGCGTACACGTC-3'，其PCR反应体系如下：
Figure BDA0001551027640000041
PCR反应程序为:95℃，3min；95℃，10s，58℃，20s，72℃，1min，35cycles； 72℃，10min；4℃，∞。
PCR反应结束后，取1μL PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量(见图1)，其余用作产物的纯化回收。
4).构建含有佛甲草SLJGR基因的克隆载体
构建含有佛甲草SLJGR基因的载体pJET1.2_SLJGR
利用Clone JET PCR Cloning Kit(pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR CloningKit#K1231) 将胶回收纯化后的佛甲草SLJGR基因目的片段重组到载体pJET1.2上，得到克隆载体 pJET1.2_SLJGR。
其反应程序如下：
Figure BDA0001551027640000042
Figure BDA0001551027640000051
重组反应：24℃,10min；冰上静止30min；42℃热激1min 30s；冰上静止2min 30 s；
转入感受态细胞DH5α，37℃，180rpm，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素Amp 100uM)固体培养基中，37℃恒温培养箱中过夜。
分别利用目的基因的上下游引物(SEQ ID No.7和SEQ ID No.8)对不同的单菌落进行菌落PCR验证，筛选阳性菌落并送去测序，得到含有克隆载体pJET1.2_SLJGR的宿主细胞。
注：pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231载体购于invitrogen；所用大肠杆菌为DH5α感受态细胞，TIANGEN，CB101-2。
5).构建含有佛甲草SLJGR基因的表达载体
构建含有佛甲草SLJGR基因的表达载体pBI121_SLJGR
构建表达载体时，需分别在特异性引物的5’端和3’添加pBI121重组位点，
SEQ ID No.3:5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3',
SEQ ID No.4:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'
得到：
SEQ ID No.9:5'-ACGGGGGACTCTAGAGGATCC ATGTCTTCCGATCTCCAATTC-3'
SEQ ID No.10:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC TTAATGCGATTGCGTACACGTC -3'
提取测序正确的pJET1.2-基因的质粒，作为模版，利用含有重组位点SEQ IDNo.9， SEQ ID No.10为引物进行PCR扩增，其反应体系如下。
Figure BDA0001551027640000052
PCR反应条件为:95℃，3min；95℃，10s，58℃，20s，72℃，1min，35cycles； 72℃，10min；4℃，∞。
PCR反应结束后，取1μL PCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量，其余用作产物的纯化回收。
提取pBI121质粒，其载体图谱(见图2)，对其进行双酶切线性化，程序如下：
Figure BDA0001551027640000061
反应程序：37℃，12h，82℃20min失活。
将基因和线性化pBI121质粒使用Clone Express Entry One Step Cloning Kit试剂盒进行重组构建，反应程序如下：
Figure BDA0001551027640000062
反应程序：37℃，30min；冰上5min；42℃热激1min 30s；冰上静止2min 30s；转入感受态细胞DH5α，37℃，180rpm，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素kan 50uM)固体培养基中，37℃过夜培养。
分别利用载体和目的片段的上下游引物(见SEQ ID No.9和SEQ ID No.10)对同一个菌落进行菌落PCR双重验证，筛选阳性菌落测序(见SEQ ID No.11)。从而获得含佛甲草耐盐基因SLJGR的表达载体pBI121_SLJGR。
注：本步骤使用Clon Express Entry One Step Cloning Kit购于vazyme，
6).含有佛甲草SLJGR基因的重组载体转化农杆菌感受态细胞
实验所用的农杆菌菌株为C58(购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，C58具有利福平抗性(Rif)，辅助质粒具有庆大霉素抗性(Gen)。
利用农杆菌电击转化法，将含有佛甲草SLJGR基因的大肠杆菌表达载体 pBI121_SLJGR转化到农杆菌株C58(pMP90)感受态细胞中，28℃，培养48h，菌落PCR 挑选阳性克隆菌落。
将其连接到表达载体时，需分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游
5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQ ID No.3)，下游5'-
CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQ ID No.4)，以利于后期表达载体的构建。
实施例2
1.侵染拟南芥
(1)侵染拟南芥。
侵染拟南芥的具体操作步骤：
①实施例1获得的阳性克隆菌落活化与扩大培养
活化：将保存-80℃的阳性克隆菌接种到YEB固体培养基上(添加抗生素Gen浓度为30mg/L、抗生素Rif浓度为25mg/L以及抗生素Sp浓度为50mg/L)并倒置于28℃恒温培养箱中培养48h左右至长出单菌落。
阳性克隆菌的扩大培养：挑取单克隆菌落于1mL YEB液体培养基中加入适量的抗生素(添加抗生素Gen浓度为30mg/L、抗生素Rift浓度为25mg/L以及抗生素Sp浓度为50mg/L)，置于摇床中培养至菌液浑浊后，取适量菌液接种到100mL EB液体培养基中进行培养，210rpm，28℃培养至OD600nm＝0.6。
②侵染转化
将菌液离心(3000rpm，25℃，10min)后弃上清，用体积两倍于所取菌液的质量浓度为5％的蔗糖水溶液重悬菌体(操作不宜剧烈以保证菌体活力)，使菌体散开，使得菌的OD600nm＝0.8。
选取培养3-4周的抽苔开花的野生型拟南芥(哥伦比亚型)，使整个花序浸泡在菌液中20s，取出拟南芥并将其横放在托盘中，并用塑料薄膜将其罩住，置于暗处处理12h，暗处理结束后将拟南芥竖直放置在培养架上，在温度22℃，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长发育，直到种子成熟。采集种子后放到37℃烘箱烘干 14d，以备后续实验使用。
(2)转基因拟南芥阳性转化子纯合体的筛选
将收取的T1代种子进行消毒，放置在冰箱4℃春化3d，然后在超净台上将转基因拟南芥种子均匀播种在含有50μg/mL卡那霉素的1/2MS固体筛选培养基上，在光强1900 Lux，光周期16h光照/8h黑暗，培养生长8-10d，叶子为深绿色即为转基因拟南芥的 T1代阳性转化子。当T1代阳性转化子植株长到3-4片真叶时，将其移植到土壤(德国进口泥炭土422#，购于Klasmann-Deilmann GmbH,德国，http://www.klasmann-deilmann.com) 中，在温度22℃，1900Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下继续生长14天，取其适量叶片提取DNA做阳性转化子的鉴定(见图3)，再通过半定量 PCR先对其转基因的表达水平进行鉴定(见图4)，选取表达量高的独立转化株系4号和低表达量的独立转化株系2号。在上述条件下继续生长，约一个半月后收集种子即为 T2代种子。重复上述步骤得到4号和2号的T3代纯合体种子。
(3)对转基因拟南芥进行盐胁迫处理
将4号T3代纯合体种子、2号T3代纯合体种子、野生拟南芥种子分别播种在1/2MS固体培养基上，置于无菌组培室培养6-8d，选取长势相同的幼苗移植在土壤中，在温度 22℃，1900Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长，随机分为三组平行实验，每组不同表达水平的植株各10株，均用含有盐的处理液(150mM NaCl水溶液)进行浇灌处理。4d浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理20d后植物照相(见图5)。
实施例3
1.侵染烟草
供阳性克隆菌侵染转化的烟草为NC89(6855-2×6772)组培苗。
(1)转化烟草的具体操作步骤：
①实施例1获得的阳性克隆菌落活化与扩大培养
活化：将保存-80℃的阳性克隆菌接种到YEB固体培养基上(添加抗生素Gen浓度为30mg/L、抗生素Rif浓度为25mg/L以及抗生素Sp浓度为50mg/L)并倒置于28℃恒温培养箱中培养48h左右至长出单菌落。
阳性克隆菌的扩大培养：挑取单克隆菌落于1mL YEB液体培养基中加入适量的抗生素(添加抗生素Gen浓度为30mg/L、抗生素Rif浓度为25mg/L以及抗生素Sp浓度为50mg/L)，置于摇床中培养至菌液浑浊后，取适量菌液接种到100mL EB液体培养基中进行培养，210rpm，28℃培养至OD600nm＝0.6。
②侵染转化
将菌液离心(3000rpm，25℃，10min)后弃以保证菌体上清，用体积两倍于所取菌液的质量浓度为5％的蔗糖水溶液重悬菌体(操作不宜剧烈活力)，使菌体散开，使得菌的OD600nm＝0.8。
选取生长30d状况良好的烟草组培苗，挑选厚实叶片，并将叶边缘修掉，将叶片修剪成1.5cm×1.5cm的外植体。将获取的外植体材料浸入含有侵染液(农杆菌菌体的5％的蔗糖水溶液)中，24℃条件下振荡培养12min。侵染后，用灭菌的滤纸将外植体表面的菌液吸干，并将其放在MS培养基上(MS盐4.4g，蔗糖30g，定容至1L，pH＝5.9，琼脂5g)，黑暗培养3d。将经过暗培养的外植体用灭过菌的ddH2O清洗3次，用滤纸吸干，将外植体放在分化培养基上(MS盐4.44g，蔗糖30g，生长素NAA 1.86mg，细胞分裂素2ip 1.02mg，卡那霉素500mg，头孢霉素375mg，琼脂5g，定容至1L，pH＝5.9) 进行分化培养，培养条件：光强为2000Lux的组培架上培养14d，光照/黑暗时间为16h/8 h。
(2)经过分化培养基，外植体长出较嫩的不定芽的时候，将不定芽切下，将根原基竖直插到生根培养基上，诱导生根。待生根完成后，对每一棵独立转化子进行鉴定(见图6)。
通过半定量PCR选取高表达水平的独立转化株系3号和低表达水平的独立转化株系 1号进行抗盐实验(见图7)。
(3)对转基因烟草进行盐胁迫处理
挑选生长8d的长势一致的野生型烟草、转基因低表达烟草、转基因高表达烟草移栽至土盆中，待土盆苗生长10d后，保留长势一致的幼苗，随机分成三组，每组不同表达水平的植株各10株，均用含有盐分的处理液(150mM NaCl水溶液水溶液)进行浇灌处理。 4d浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理30 d后观察植株并拍照(见图8)。
以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明/发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明/发明的保护范围。
序列表
<110> 天津大学
<120> 佛甲草SLJGR基因及其应用
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 987
<212> DNA
<213> 佛甲草（Sedum lineare Thunb.）
<400> 1
atgtcttccg atctccaatt ccgaggaaac aagcccaaaa acactagaat ccatcatcag 60
atcacgcatc tcactccgat tcctacacca cagccccccg aagattcaat tcaaaatgca 120
atccacgacc aaacccaaac gcttttcgat tctctcacct caccaaattt ttcacaccaa 180
agttcgcatt tttgtcccat aaattcccaa ttcaatcggt tggcgaagga ttgggtgcga 240
gtcatctcag atgttctttc ttccaagtta cgggcacgaa gggttgtttc cagggccgcc 300
atagtagaaa taagttcccc attccgtgtt agacaagctc ttgatgttat aacagttggt 360
attctcagcc aaggtggata tttcccttgc gctaaggctg ttgtcatcaa ctatttcaag 420
gttgcggaaa tagctggctt ttccaaatcc ttcctctgca aactgccctc ccatttgagt 480
cgaagtatgc tccccattat tggctctgtt cactacctcc ccaccccatt cgaccatcgt 540
agctctgtct gcgtgtgtga atatatccgt cggccagtag cctaccacgc tgtctccgaa 600
gctcatccac cagtttccca acttaggatc cttccatatg agaatggtga tgtcatactg 660
gttgccggag ataatgggag aaatggccgc accgatggcg atgcggctat tggtctgtat 720
aaagccgcag aggttgtaac atccagttgc ttggtaatca ctcgtccaat acgtgaaaag 780
tcttggcctg ctgtcaccat aaagctccgg actgacctga ctgccagccg gcctcaatgc 840
tgtgatccga cccgtcaaat gacccggata ggatccagat ctgtgacaag cactcattcc 900
cactttcatc caccgacggc tcccaaacgt ttgtcgcttt tgcaccgaac acctcttccg 960
acgatgacgt gtacgcaatc gcattaa 987
<210> 2
<211> 328
<212> PRT
<213> 佛甲草（Sedum lineare Thunb.）
<400> 2
MSSDLQFRGN KPKNTRIHHQ ITHLTPIPTP QPPEDSIQNA IHDQTQTLFD SLTSPNFSHQ 60
SSHFCPINSQ FNRLAKDWVR VISDVLSSKL RARRVVSRAA IVEISSPFRV RQALDVITVG 120
ILSQGGYFPC AKAVVINYFK VAEIAGFSKS FLCKLPSHLS RSMLPIIGSV HYLPTPFDHR 180
SSVCVCEYIR RPVAYHAVSE AHPPVSQLRI LPYENGDVIL VAGDNGRNGR TDGDAAIGLY 240
KAAEVVTSSC LVITRPIREK SWPAVTIKLR TDLTASRPQC CDPTRQMTRI GSRSVTSTHS 300
HFHPPTAPKR LSLLHRTPLP TMTCTQSH 328
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
acgggggact ctagaggatc c 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
cgatcgggga aattcgagct c 21
<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gaacttacta gccgactg 18
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cctcaagcct tatacgcaa 19
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atgtcttccg atctccaatt c 21
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ttaatgcgat tgcgtacacg tc 22
<210> 9
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
acgggggact ctagaggatc catgtcttcc gatctccaat tc 42
<210> 10
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
cgatcgggga aattcgagct cttaatgcga ttgcgtacac gtc 43
<210> 11
<211> 987
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
atgtcttccg atctccaatt ccgaggaaac aagcccaaaa acactagaat ccatcatcag 60
atcacgcatc tcactccgat tcctacacca cagccccccg aagattcaat tcaaaatgca 120
atccacgacc aaacccaaac gcttttcgat tctctcacct caccaaattt ttcacaccaa 180
agttcgcatt tttgtcccat aaattcccaa ttcaatcggt tggcgaagga ttgggtgcga 240
gtcatctcag atgttctttc ttccaagtta cgggcacgaa gggttgtttc cagggccgcc 300
atagtagaaa taagttcccc attccgtgtt agacaagctc ttgatgttat aacagttggt 360
attctcagcc aaggtggata tttcccttgc gctaaggctg ttgtcatcaa ctatttcaag 420
gttgcggaaa tagctggctt ttccaaatcc ttcctctgca aactgccctc ccatttgagt 480
cgaagtatgc tccccattat tggctctgtt cactacctcc ccaccccatt cgaccatcgt 540
agctctgtct gcgtgtgtga atatatccgt cggccagtag cctaccacgc tgtctccgaa 600
gctcatccac cagtttccca acttaggatc cttccatatg agaatggtga tgtcatactg 660
gttgccggag ataatgggag aaatggccgc accgatggcg atgcggctat tggtctgtat 720
aaagccgcag aggttgtaac atccagttgc ttggtaatca ctcgtccaat acgtgaaaag 780
tcttggcctg ctgtcaccat aaagctccgg actgacctga ctgccagccg gcctcaatgc 840
tgtgatccga cccgtcaaat gacccggata ggatccagat ctgtgacaag cactcattcc 900
cactttcatc caccgacggc tcccaaacgt ttgtcgcttt tgcaccgaac acctcttccg 960
acgatgacgt gtacgcaatc gcattaa 987

Claims (3)

1.佛甲草SLJGR基因，其特征是序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.权利要求1的佛甲草SLJGR基因编码的蛋白质，其特征在于所述蛋白质具有序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
3.含佛甲草SLJGR基因的重组载体，其特征在于含有权利要求1所述的佛甲草SLJGR基因。
CN201810046379.8A 2018-01-17 2018-01-17 佛甲草sljgr基因及其应用 Expired - Fee Related CN110042106B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810046379.8A CN110042106B (zh) 2018-01-17 2018-01-17 佛甲草sljgr基因及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810046379.8A CN110042106B (zh) 2018-01-17 2018-01-17 佛甲草sljgr基因及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110042106A CN110042106A (zh) 2019-07-23
CN110042106B true CN110042106B (zh) 2021-11-02

Family

ID=67273521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810046379.8A Expired - Fee Related CN110042106B (zh) 2018-01-17 2018-01-17 佛甲草sljgr基因及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110042106B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110643614A (zh) * 2019-09-01 2020-01-03 天津大学 佛甲草抗旱基因SlDREB及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1797901A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-20 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
CN101747419A (zh) * 2008-12-08 2010-06-23 中国科学院遗传与发育生物学研究所 耐盐相关蛋白及其编码基因与应用
CN105063086A (zh) * 2015-08-21 2015-11-18 中国科学院华南植物园 一种快速获得大量转基因佛甲草新品种的分子育种方法
CN108570471A (zh) * 2017-03-10 2018-09-25 天津大学 佛甲草耐盐基因sleipp及其应用
CN110669863A (zh) * 2019-10-30 2020-01-10 华中农业大学 柑橘线粒体InDel分子标记及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1797901A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-20 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
CN101747419A (zh) * 2008-12-08 2010-06-23 中国科学院遗传与发育生物学研究所 耐盐相关蛋白及其编码基因与应用
CN105063086A (zh) * 2015-08-21 2015-11-18 中国科学院华南植物园 一种快速获得大量转基因佛甲草新品种的分子育种方法
CN108570471A (zh) * 2017-03-10 2018-09-25 天津大学 佛甲草耐盐基因sleipp及其应用
CN110669863A (zh) * 2019-10-30 2020-01-10 华中农业大学 柑橘线粒体InDel分子标记及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"5种景天对盐胁迫的相应及外源ABA的缓解效应";王璟;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》;20140115(第1（2014）期);D048-210 *
"Functional and ecological significance of rDNA intergenic spacer variation in a clonal organism under divergent selection for production rate";Gorokhova, E等;《PROCEEDINGS OF THE ROYAL SOCIETY B-BIOLOGICAL SCIENCES》;20021122;第269卷(第1507期);第2373-2379页 *
"PREDICTED: Herrania umbratica uncharacterized LOC110415147 (LOC110415147), transcript variant X2, misc_RNA";NCBI;《GenBank Database》;20170609;Accession No.XR_002445079.1 *
"Transcriptome sequencing and functional analysis of Sedum lineare Thunb. upon salt stress";Song, YJ等;《MOLECULAR GENETICS AND GENOMICS》;20190618;第294卷(第6期);第1441-1453页 *
"佛甲草 SlCXE 和 SlCYP72A 基因的筛选及其耐盐功能的验证";杨晓沛;《万方》;20201105;第1-75页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110042106A (zh) 2019-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100510075C (zh) 一种柠条转录因子CkAREB及其在抗逆植物培育中的应用
CN104059937B (zh) 一个来源于苜蓿的蛋白质及其编码基因的新用途
CN115820670A (zh) NtTAS14-like1基因在调控烟草耐旱性中的应用
CN113388017B (zh) 一种耐旱蛋白及其编码基因在培育耐旱植物中的应用
CN103014035B (zh) 茎瘤芥抗逆基因及其植物表达载体和构建方法及应用
CN110042106B (zh) 佛甲草sljgr基因及其应用
CN110564736A (zh) 佛甲草耐盐基因SlWRKY及其应用
CN110607307A (zh) 佛甲草耐盐基因SlNAC及其应用
CN108570471A (zh) 佛甲草耐盐基因sleipp及其应用
CN108570469A (zh) 佛甲草耐盐基因sltats及其应用
CN109913466A (zh) 佛甲草耐Cd基因SlSERK3及其应用
CN106397556A (zh) 植物抗旱相关蛋白ZmNAC111及其编码基因与应用
CN109402139A (zh) 佛甲草耐盐基因sllazy1及其应用
CN110551733A (zh) 佛甲草耐盐基因SlR2R3-MYB及其应用
CN108752442B (zh) 彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用
CN1277928C (zh) 一种改良的农杆菌介导小麦苗端转化方法
CN112225790A (zh) 水稻抗盐胁迫相关基因onac103及编码蛋白与应用
CN104946663A (zh) 一种棉花抗旱基因GhSNAC1及其应用
CN110643615A (zh) 佛甲草抗旱基因SlATHB-7及其应用
CN115851821B (zh) Bbx16基因在提高植物盐耐受性中的应用
CN112813096B (zh) 一种毛竹幼胚离体再生及遗传转化的方法
CN110904110B (zh) 降低OsHAP3C基因表达在培育抽穗期推后、生育期延长水稻品种中的应用
CN112501185B (zh) 菠萝转录因子AcWRKY28在植物抗盐上的应用
CN110295192B (zh) 利用Gateway技术构建TYLCV和ToCV的双价RNAi表达载体及其应用
CN113621038B (zh) 提高盐胁迫下植物种子发芽率的寡肽及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20211102

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee