CN109913466A

CN109913466A - 佛甲草耐Cd基因SlSERK3及其应用

Info

Publication number: CN109913466A
Application number: CN201910183811.2A
Authority: CN
Inventors: 杨少辉; 白婧平; 岳靖; 杨合宇; 王洁华
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2019-03-12
Filing date: 2019-03-12
Publication date: 2019-06-21

Abstract

本发明公开了佛甲草耐Cd基因SlSERK3及其应用，佛甲草耐Cd基因SlSERK3，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，实验证明，采用该基因转染的拟南芥和烟草表现出对重金属Cd的耐受力，说明本发明提供的耐Cd基因SlSERK3在改良作物耐Cd能力方面起着重要的作用。

Description

佛甲草耐Cd基因SlSERK3及其应用

技术领域

本发明涉及一种佛甲草(Sedum lineare)耐Cd基因SlSERK3及其应用，属于分子生物学和生物技术领域。

背景技术

土壤重金属污染是世界性的环境污染问题并严重危害公共健康。由于土壤重金属污染具有隐蔽性、长期性、不可逆转和难处理等特点，使得重金属污染土地治理成为了研究的热点与难点。植物吸收修复是土壤重金属污染修复的有效途径。佛甲草可以作为重金属污染修复的潜在植物，而有关佛甲草重金属吸收积累特征、胁迫响应及解毒机制仍不清楚，并且对土壤重金属Cd污染修复还不理想。因此，亟需一种有效对土壤重金属Cd的污染修复的植物，这对修复生态环境和提高土地利用率具有重要战略意义。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种佛甲草耐Cd基因SlSERK3。

本发明的第二个目的是提供含佛甲草耐Cd基因SlSERK3的克隆载体pJET1.2_SlSERK3。

本发明的第三个目的是提供含佛甲草耐Cd基因SlSERK3的表达载体pBI121_SlSERK3。

本发明的第四个目的是提供含有表达载体pBI121_SlSERK3的宿主细胞。

本发明的第五个目的是提供佛甲草耐Cd基因SlSERK3增强拟南芥或烟草对重金属Cd的耐受性的应用。

本发明的技术方案概述如下：

佛甲草耐Cd基因SlSERK3，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

含佛甲草耐Cd基因SlSERK3的克隆载体pJET1.2_SlSERK3。

含佛甲草耐Cd基因SlSERK3的表达载体pBI121_SlSERK3。

含有表达载体pBI121_SlSERK3的宿主细胞。

佛甲草耐Cd基因SlSERK3增强拟南芥或烟草对重金属Cd耐受性的应用。

本发明的优点：

实验证明，采用该基因转染的拟南芥和烟草表现出对重金属Cd的耐受力，说明本发明提供的耐Cd基因SlSERK3在改良作物耐Cd能力方面起着重要的作用。

附图说明

图1为佛甲草耐Cd基因SlSERK3克隆电泳示意图。

图2为佛甲草耐Cd基因SlSERK3插入表达载体后示意图。

图3为pBI121_SlSERK3转化拟南芥后，转化子基因组PCR筛选结果。

图4为pBI121_SlSERK3转化拟南芥后，T3纯合体半定量PCR测定表达水平结果。

图5为佛甲草耐Cd基因SlSERK3转基因拟南芥T3纯合体抗重金属Cd的实验效果照片。

图6为佛甲草耐Cd基因SlSERK3转基因烟草抗重金属Cd的实验效果照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件以及手册中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

载体pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231

载体pBIl21购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/

实施例1

1.佛甲草(Sedum lineare,简称Sl)SlSERK3基因的克隆

从25mM CdCl₂水溶液处理的佛甲草(取自天津市滨海新区)中，使用植物RNeasyPlant Mini Kit(Transgene Code#E101-0150rxns)提取总RNA，并且利用EasyScriptFrist-Strand cDNA SynSgesisSuperMix(Transgene Code#AE301-03100rxns)反转录出cDNA。对cDNA进行高通量测序(诺禾致源公司进行高通量测序)获得SlSERK3基因的3’端序列，使用RACE技术(Takara-RACE kit)获得SlSERK3基因的全长cDNA序列将扩增得到的SlSERK3基因进行测序分析，得到完整的SlSERK3基因全长为1311bp。构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端添加pBI121重组位点，上游5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3'(SEQID No.3)，下游5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'(SEQ ID No.4)，以利于后期表达载体的构建。

其具体步骤如下：

1).cDNA第一链的合成

用反转录试剂盒TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0，以总RNA为模板，Oligo(dT)为引物，在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA第一链，反转录体系如下：

反应条件：42℃60min，99℃5min。

2).佛甲草SlSERK3基因反转录质量PCR扩增检测

用佛甲草Actin基因特异引物SEQ ID No.5:5'-GAACTTACTAGCCGACTG-3',SEQ IDNo.6：

5'-CCTCAAGCCTTATACGCAA-3'，PCR扩增，以验证反转录反应及RNA质量。

PCR反应体系如下：

反应条件：94℃3min；94℃30s，40℃30s，72℃50s，35cycles；72℃5min。

3).佛甲草SlSERK3基因片段PCR扩增

利用Takara RACE kit扩增得到的SlSERK3基因进行测序分析，得到完整的佛甲草SlSERK3基因全长为1311bp(SEQ ID No.1)。由佛甲草SlSERK3基因编码的蛋白质，是SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。根据已知cDNA序列利用primer软件设计SlSERK3基因上下游引物:

SEQ ID No.7:5'-CAGAGAATAACAAGACGACGAAGA-3'，

SEQ ID No.8:5'-TTGATCGGAGAAGTTCTTATGGATG-3'，其PCR反应程序如下：

PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量(见图1)，其余用作产物的纯化回收。

4).构建含有佛甲草SlSERK3基因的克隆载体

构建含有佛甲草SlSERK3基因的载体pJET1.2_SlSERK3

胶回收纯化后的佛甲草SlSERK3基因目的片段利用Clone JET PCR Cloning Kit

(pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231)重组到载体pJET1.2上，得到载体pJET1.2_SlSERK3。

其反应程序如下：

反应条件24℃,10min冰上静止30min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，

转入感受态细胞DH5α，37℃，180rpm，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素Amp100uM)固体培养基中，37℃过夜培养。

分别利用目的片段的上下游引物(SEQ ID No.7和SEQ ID No.8)对不同的菌落进行菌落PCR验证，筛选阳性菌落测序，得到含有克隆载体pJET1.2_SlSERK3的宿主细胞。

注：pJET1.2:Thermo,Clone JET PCR Cloning Kit#K1231载体购于invitrogen；所用大肠杆菌为DH5α感受态细胞，TIANGEN，CB101-2。

5).构建含有佛甲草SlSERK3基因的表达载体

构建含有佛甲草SlSERK3基因的表达载体pBI121_SlSERK3

构建超表达载体时，则分别在特异性引物的5’端和3’添加pBI121重组位点，

SEQ ID No.3:5'–ACGGGGGACTCTAGAGGATCC-3',

SEQ ID No.4:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTC-3'

得到：

SEQ ID No.9:5'-ACGGGGGACTCTAGAGGATCCCAGAGAATAACAAGACGACGAAGA-3'

SEQ ID No.10:5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTCTTGATCGGAGAAGTTCTTATGGATG-3'提取测序正确的pJET1.2-基因的质粒，作为模版，利用含有重组位点SEQ ID No.9，SEQ IDNo.10为引物进行PCR扩增，其反应程序如下

PCR反应结束后，取1μLPCR产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，检测PCR产物的质量，其余用作产物的纯化回收。

提取pBI121质粒，其载体图谱(见图2)，对其进行双酶切线性化，程序如下：

反应条件：37℃，12h，80℃20min失活。

将基因和线性化的pBI121质粒使用Clone Express Entry One Step CloningKit试剂盒进行重组构建，反应程序如下：

反应程序：37℃，30min，冰上5min，42℃热激1min30s冰上静止2min30s，转入感受态细胞DH5α，37℃，180r，45min，此程序结束后将菌液涂到LB(添加抗生素kan 50uM)固体培养基中，37℃过夜培养。

分别利用载体和目的片段的上下游引物(见SEQ ID No.9和SEQ ID No.10)对同一个菌落进行菌落PCR双重验证，筛选阳性菌落测序(见SEQ ID No.11)。

注：本步骤使用Clon Express Entry One Step Cloning Kit购于vazyme，

6).含有佛甲草SlSERK3基因的重组载体转化农杆菌感受态细胞

实验所用的农杆菌菌株为C58(购于中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，http://biovector.blog.163.com/)，C58具有利福平抗性(Rif)，辅助质粒具有庆大霉素抗性(Gen)。

利用电击农杆菌转化法，将含有佛甲草SlSERK3基因的大肠杆菌表达载体pBI121_SlSERK3转化到农杆菌株C58(pMP90)感受态细胞中，28℃，培养36h，菌落PCR挑选阳性克隆菌落。

实施例2

1.转化拟南芥

(1)转化拟南芥。

转化拟南芥的具体操作步骤：

①实施例1获得的阳性克隆菌落活化与扩大培养

活化：挑保存的阳性克隆菌落置于3mLYEB液体培养基中(添加Gen、Rift、Sp抗生素，使浓度分别为30mg/L,、25mg/L、50mg/L)培养15小时左右(至OD600＝0.8左右)，180rpm，28℃。

阳性克隆菌的扩大培养：新鲜的10ml的YEB液体培养基中加入适量的抗生素(Gen、Rift、Sp抗生素，浓度分别为30mg/L、25mg/L、50mg/L)，然后接种适量阳性克隆菌液到YEB液体培养基中进行培养，180rpm，在28℃培养至OD600＝0.6。

②转化

将菌液离心(3000rpm，15℃,10min)后弃上清，用体积两倍于所取菌液的质量浓度为5％的蔗糖水溶液重悬菌体(缓慢操作以保证菌体活力)，使菌体散开，调OD600＝0.8。

选取培养3-4周抽苔5-7cm的野生型拟南芥，倒置于装有转化液的容器中，使整个花序浸泡在菌液中15秒，取出拟南芥横躺在托盘中，用塑料薄膜罩住保湿，并暗处理12h，使拟南芥直立在温度25℃，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长，直到种子成熟。种子采集后放到37℃烘箱烘干两周，以备后续试验使用。

(2)转基因拟南芥阳性转化子纯合体的筛选

将收取的T1代种子经过消毒以后，放置在冰箱4℃三天，然后在超净台上将转基因拟南芥种子均匀播种在含有50μg/mL卡那霉素的1/2MS固体筛选培养基上，在1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，生长8-10天，叶子为深绿色即为转基因拟南芥的T1代阳性转化子。当T1代阳性转化子植株长到3-4片真叶时，将其移植到土壤ts1876(购于EPAGMA,荷兰，http://www.epagma.eu/)中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下继续生长14天，先作阳性转化子的鉴定(见图3)，再通过半定量PCR先对其转基因的表达水平进行鉴定(见图4)，选取表达水平高的独立转化株系7号和表达水平低的独立转化株系3号。在上述条件下继续生长，约一个半月后收集种子即为T2代转化种子。重复上述步骤得到7号和3号的T3代纯合体种子。

(3)对转基因拟南芥进行重金属Cd处理

将7号T3代纯合体种子、3号T3代纯合体种子、野生拟南芥种子分别种植在土壤中，在温度25℃，1800Lux，光周期16h光照/8h黑暗，相对湿度为70％的培养条件下生长21天，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分为三组平行实验，每组不同类型的植株各7株，均用重金属Cd处理液(25mM CdCl₂水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理15天后植物照相(见图5)。

实施例3

1.转化烟草

供阳性克隆菌转化的烟草为NC89(6855-2×6772)(购于天津市烟草专卖局)组培苗。

(1)选取生长30天状况良好的烟草组培苗，挑选厚实叶片，减去叶边缘，把叶生剪成1cm×1cm的外植体碎生。将选取的实施例1获得的阳性克隆菌菌液(OD600＝0.8)将剪好的叶生材料放到农杆菌的液体培养基上，24℃条件下震荡培养10min。侵染后，将外植体吸干后放在MS培养基上(MS盐4.4g，蔗糖30g，定容至1L，pH＝5.7，琼脂7.2g)，黑暗培养3天。将经过暗培养的外植体用灭过菌的蒸馏水清洗2-3次，用滤纸吸干后，外植体放在选择培养基上(MS盐4.4g，蔗糖30g，生长素NAA1.86mg，细胞分裂素2ip1.02mg，卡那霉素500mg，头孢霉素500mg，琼脂7.2g，定容至1L，pH＝5.7)；培养条件：2000Lux光下培养14天，光照/黑暗为16h/8h).

(2)经过选择培养基，外植体长出小苗子的时候，将整棵小苗子切下，将根原基竖直插到培养基中MS培养基上，诱导生根。待生根完成后，对每一棵独立转化子进行阳性鉴定。

通过半定量PCR选取表达水平高的独立转化株系和表达水平低的独立转化株系进行抗盐实验。

(3)将烟草进行重金属Cd处理

将生长7天的长势均匀的转基因高表达烟草、低表达转基因烟草、野生型烟草移栽至土盆中，待土盆苗生长5天后，每种植物保留21株长势一致的幼苗，随机分成三组，每组不同类型的植株各7株，用重金属Cd处理液(25mM CdCl₂水溶液)进行浇灌处理。3天浇一次，每次浇灌量为土壤质量的0.5倍，以保持盆中处理液浓度的恒定，共处理50天后观察植株并照相(见图6)。

序列表

<110> 天津大学

<120> 佛甲草耐Cd基因SlSERK3及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1311

<212> DNA

<213> 佛甲草(Sedum lineare Thunb)

<400> 1

atgagacaat tattaagagt atcattttgc ttggtcatct tttattttat gatgttttta 60

gtttgcagtt cactcataca ctatatcccc ttttgttttg ttcagtacac ttgcatgttc 120

tatctagtct catgttgtgt cctcttcttt tccaacttct ctaacatcat catctcacta 180

ctgatacttg tcctttttct tcacaggata tattcttgct ctaaatggaa gttcttcatc 240

aacaattccc tggaattact ccaaatgtta atgtggaatt tccacaagag gaacttagta 300

gtccaaagtc agtttcagct tcgtcttctg aattctcatt tgcctgtact gtgccaccaa 360

atgcaccatc tctatccggg tcgccttatg atttatctcc agctgatgat atcttcttct 420

atggacattt acttccattg catctctttc cgcaagttac tgtctcgccg cggagttcta 480

ctaattcata tgacagcttt acactccctg gagctgagtt tatgcaaagt catcactcac 540

ctttgcttga agctgctgaa cctacaagac tgccaaaatc aaaatcttat ggattttaaa 600

aaagatggag aagagtgtct gaaacaagaa aatcggacga aacagagaat aacaagacga 660

cgaagaagaa tgagaaagtc ggatttgaat aaaccagatt acttaaaagg tatgcaagac 720

atgaaaggcc attttcggtt ttcacagaag ctagaagaag caagaaaatc aatcagttta 780

agccacaacc catttcatat tcaggcgttt aaagtgtttc gggcgaaaca agaagcgaaa 840

aggcgaagag gcgaatactc atcagctccg gcatctctaa gaacttctcc gatcaatagt 900

aggattttta aacaacggtt taaagtgtgc cttctccagt tgctgatagc acaatggaag 960

atttacaatc tgctattcaa gctgctattg ctcattgcaa gaactcatct atatccactg 1020

atggacttca aaagctgtaa atttatatct catcgccgac cgccaccggc cggatttaaa 1080

aaggtaatga atgtgttcta ttttcatata catatagtat ttacaaatct tatgtatgaa 1140

gctaaaatcc ggaaaaaact gaaatgctcg tcatttcgct ttaaatactt ttattctccg 1200

gccaatacat cgagtataga ttgtaaagtc cgacggggag ttcggtttaa tcgtaatgat 1260

tgccgtgcaa aaaaacatca tatgttatac tttgttatct cattaaatta a 1311

<210> 2

<211> 436

<212> PRT

<213> 佛甲草(Sedum lineare Thunb)

<400> 2

Met Arg Gln Leu Leu Arg Val Ser Phe Cys Leu Val Ile Phe Tyr Phe

1 5 10 15

Met Met Phe Leu Val Cys Ser Ser Leu Ile His Tyr Ile Pro Phe Cys

20 25 30

Phe Val Gln Tyr Thr Cys Met Phe Tyr Leu Val Ser Cys Cys Val Leu

35 40 45

Phe Phe Ser Asn Phe Ser Asn Ile Ile Ile Ser Leu Leu Ile Leu Val

50 55 60

Leu Phe Leu His Arg Ile Tyr Ser Cys Ser Lys Trp Lys Phe Phe Ile

65 70 75 80

Asn Asn Ser Leu Glu Leu Leu Gln Met Leu Met Trp Asn Phe His Lys

85 90 95

Arg Asn Leu Val Val Gln Ser Gln Phe Gln Leu Arg Leu Leu Asn Ser

100 105 110

His Leu Pro Val Leu Cys His Gln Met His His Leu Tyr Pro Gly Arg

115 120 125

Leu Met Ile Tyr Leu Gln Leu Met Ile Ser Ser Ser Met Asp Ile Tyr

130 135 140

Phe His Cys Ile Ser Phe Arg Lys Leu Leu Ser Arg Arg Gly Val Leu

145 150 155 160

Leu Ile His Met Thr Ala Leu His Ser Leu Glu Leu Ser Leu Cys Lys

165 170 175

Val Ile Thr His Leu Cys Leu Lys Leu Leu Asn Leu Gln Asp Cys Gln

180 185 190

Asn Gln Asn Leu Met Asp Phe Lys Lys Asp Gly Glu Glu Cys Leu Lys

195 200 205

Gln Glu Asn Arg Thr Lys Gln Arg Ile Thr Arg Arg Arg Arg Arg Met

210 215 220

Arg Lys Ser Asp Leu Asn Lys Pro Asp Tyr Leu Lys Gly Met Gln Asp

225 230 235 240

Met Lys Gly His Phe Arg Phe Ser Gln Lys Leu Glu Glu Ala Arg Lys

245 250 255

Ser Ile Ser Leu Ser His Asn Pro Phe His Ile Gln Ala Phe Lys Val

260 265 270

Phe Arg Ala Lys Gln Glu Ala Lys Arg Arg Arg Gly Glu Tyr Ser Ser

275 280 285

Ala Pro Ala Ser Leu Arg Thr Ser Pro Ile Asn Ser Arg Ile Phe Lys

290 295 300

Gln Arg Phe Lys Val Cys Leu Leu Gln Leu Leu Ile Ala Gln Trp Lys

305 310 315 320

Ile Tyr Asn Leu Leu Phe Lys Leu Leu Leu Leu Ile Ala Arg Thr His

325 330 335

Leu Tyr Pro Leu Met Asp Phe Lys Ser Cys Lys Phe Ile Ser His Arg

340 345 350

Arg Pro Pro Pro Ala Gly Phe Lys Lys Val Met Asn Val Phe Tyr Phe

355 360 365

His Ile His Ile Val Phe Thr Asn Leu Met Tyr Glu Ala Lys Ile Arg

370 375 380

Lys Lys Leu Lys Cys Ser Ser Phe Arg Phe Lys Tyr Phe Tyr Ser Pro

385 390 395 400

Ala Asn Thr Ser Ser Ile Asp Cys Lys Val Arg Arg Gly Val Arg Phe

405 410 415

Asn Arg Asn Asp Cys Arg Ala Lys Lys His His Met Leu Tyr Phe Val

420 425 430

Ile Ser Leu Asn

435

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

acgggggact ctagaggatc c 21

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

cgatcgggga aattcgagct c 21

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gaacttacta gccgactg 18

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cctcaagcct tatacgcaa 19

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cagagaataa caagacgacg aaga 24

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ttgatcggag aagttcttat ggatg 25

<210> 9

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acgggggact ctagaggatc ccagagaata acaagacgac gaaga 45

<210> 10

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cgatcgggga aattcgagct cttgatcgga gaagttctta tggatg 46

<210> 11

<211> 1311

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

atgagacaat tattaagagt atcattttgc ttggtcatct tttattttat gatgttttta 60

gtttgcagtt cactcataca ctatatcccc ttttgttttg ttcagtacac ttgcatgttc 120

tatctagtct catgttgtgt cctcttcttt tccaacttct ctaacatcat catctcacta 180

ctgatacttg tcctttttct tcacaggata tattcttgct ctaaatggaa gttcttcatc 240

aacaattccc tggaattact ccaaatgtta atgtggaatt tccacaagag gaacttagta 300

gtccaaagtc agtttcagct tcgtcttctg aattctcatt tgcctgtact gtgccaccaa 360

atgcaccatc tctatccggg tcgccttatg atttatctcc agctgatgat atcttcttct 420

atggacattt acttccattg catctctttc cgcaagttac tgtctcgccg cggagttcta 480

ctaattcata tgacagcttt acactccctg gagctgagtt tatgcaaagt catcactcac 540

ctttgcttga agctgctgaa cctacaagac tgccaaaatc aaaatcttat ggattttaaa 600

aaagatggag aagagtgtct gaaacaagaa aatcggacga aacagagaat aacaagacga 660

cgaagaagaa tgagaaagtc ggatttgaat aaaccagatt acttaaaagg tatgcaagac 720

atgaaaggcc attttcggtt ttcacagaag ctagaagaag caagaaaatc aatcagttta 780

agccacaacc catttcatat tcaggcgttt aaagtgtttc gggcgaaaca agaagcgaaa 840

aggcgaagag gcgaatactc atcagctccg gcatctctaa gaacttctcc gatcaatagt 900

aggattttta aacaacggtt taaagtgtgc cttctccagt tgctgatagc acaatggaag 960

atttacaatc tgctattcaa gctgctattg ctcattgcaa gaactcatct atatccactg 1020

atggacttca aaagctgtaa atttatatct catcgccgac cgccaccggc cggatttaaa 1080

aaggtaatga atgtgttcta ttttcatata catatagtat ttacaaatct tatgtatgaa 1140

gctaaaatcc ggaaaaaact gaaatgctcg tcatttcgct ttaaatactt ttattctccg 1200

gccaatacat cgagtataga ttgtaaagtc cgacggggag ttcggtttaa tcgtaatgat 1260

tgccgtgcaa aaaaacatca tatgttatac tttgttatct cattaaatta a 1311

Claims

1.佛甲草耐Cd基因SlSERK3，其特征是所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含权利要求1的佛甲草耐Cd基因SlSERK3的克隆载体pJET1.2_SlSERK3。

3.含权利要求1的佛甲草耐Cd基因SlSERK3的表达载体pBI121_SlSERK3。

4.含有所述表达载体pBI121_SlSERK3的宿主细胞。

5.佛甲草耐Cd基因SlSERK3增强拟南芥或烟草对重金属Cd耐受性的应用。