CN109354614B

CN109354614B - OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用

Info

Publication number: CN109354614B
Application number: CN201811452302.7A
Authority: CN
Inventors: 张执金; 赵辉; 李梓萱; 王亚云; 王娟; 张海文; 权瑞党; 黄荣峰
Original assignee: Biotechnology Research Institute of CAAS
Current assignee: Biotechnology Research Institute of CAAS
Priority date: 2018-11-30
Filing date: 2018-11-30
Publication date: 2020-12-01
Anticipated expiration: 2038-11-30
Also published as: CN109354614A

Abstract

本发明公开了OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用。本发明要求保护OsCSLD4蛋白的应用，为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)或(Ⅳ)：(Ⅰ)调控植物对盐胁迫的耐逆性；(Ⅱ)提高植物对盐胁迫的耐逆性；(Ⅲ)调控植物的脱落酸含量；(Ⅳ)提高植物的脱落酸含量。本发明还保护OsCSLD4基因在培育对盐胁迫的耐逆性增高的转基因植物中的应用。本发明还保护OsCSLD4基因在培育脱落酸含量增高的转基因植物中的应用。所述OsCSLD4蛋白为序列表的序列1所示的蛋白质。本发明对于培育耐逆植物具有重大的应用价值。

Description

OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用。

背景技术

干旱、高盐及低温等逆境胁迫是影响植物生长、发育的障碍因子。因此，了解植物对逆境条件的应答与信号传导机制，提高植物品种的抗逆性，成为植物遗传研究及植物品种改良的重要任务之一。

在逆境胁迫下植物体内会产生一系列应答反应，伴随着许多生理生化及发育上的变化。明确植物对逆境的反应机制，将为抗逆基因工程研究和应用提供科学论据。目前，植物抗逆性研究已逐渐深入到细胞、分子水平，并与遗传学和遗传工程研究相结合，探索用生物技术来改进植物生长特性，其目的是提高植物对逆境的适应能力。

在干旱、高盐和低温等环境胁迫的逆境条件下，植物能够在分子、细胞和整体水平上做出相应的调整，以最大程度上减少环境所造成的伤害并得以生存。许多基因受胁迫诱导表达，这些基因的产物不仅能够直接参与植物的胁迫应答，而且能够调节其它相关基因的表达或参与信号传导途径，从而使植物避免或减少伤害，增强对胁迫环境的抗性。

发明内容

本发明的目的是提供OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用。

本发明要求保护OsCSLD4蛋白的应用，为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)或(Ⅳ)：

(Ⅰ)调控植物对盐胁迫的耐逆性；

(Ⅱ)提高植物对盐胁迫的耐逆性；

(Ⅲ)调控植物的脱落酸含量；

(Ⅳ)提高植物的脱落酸含量。

本发明还保护OsCSLD4基因在培育对盐胁迫的耐逆性增高的转基因植物中的应用。

本发明还保护OsCSLD4基因在培育脱落酸含量增高的转基因植物中的应用。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：提高目的植物中OsCSLD4蛋白的活性和/或含量，从而提高植物对盐胁迫的耐逆性。

本发明还保护一种植物育种方法，包括如下步骤：提高目的植物中OsCSLD4蛋白的活性和/或含量，从而提高植物的脱落酸含量。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入OsCSLD4基因，得到与所述出发植物相比对盐胁迫的耐逆性增高的转基因植物。

本发明还保护一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入OsCSLD4基因，得到与所述出发植物相比脱落酸含量增高的转基因植物。

OsCSLD4蛋白具体来源于稻属亚洲栽培稻种kittake品种(Oryza sativaL.kittake)。

以上任一所述OsCSLD4蛋白为如下(a)或(b)或(c)或(d)或(e)：

(a)序列表的序列1所示的蛋白质；

(b)将序列1进行一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物对盐胁迫的耐逆性相关的由其衍生的蛋白质；

(c)来源于水稻且与(a)具有95％以上同一性且与植物对盐胁迫的耐逆性相关的蛋白质；

(d)将序列1进行一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物脱落酸含量相关的由其衍生的蛋白质；

(e)来源于水稻且与(a)具有95％以上同一性且与植物脱落酸含量相关的蛋白质。

以上任一所述OsCSLD4基因为编码所述OsCSLD4蛋白的基因。

以上任一所述OsCSLD4基因具体为如下(1)或(2)或(3)或(4)或(5)或(6)或(7)所述的DNA分子：

(1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(2)与(1)具有75％以上同一性且编码与植物对盐胁迫的耐逆性相关的蛋白的DNA分子；

(3)来源于水稻且与(1)具有90％以上同一性且编码与植物对盐胁迫的耐逆性相关的蛋白的DNA分子；

(4)在严格条件下与(1)杂交且编码植物与植物对盐胁迫的耐逆性相关的蛋白的DNA分子；

(5)与(1)具有75％以上同一性且编码与植物脱落酸含量相关的蛋白的DNA分子；

(6)来源于水稻且与(1)具有90％以上同一性且编码与植物脱落酸含量相关的蛋白的DNA分子；

(7)在严格条件下与(1)杂交且编码植物与植物脱落酸含量相关的蛋白的DNA分子。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物为禾本科植物。所述禾本科植物为水稻属植物。所述水稻属植物为水稻，例如水稻Kittake。

以上任一所述方法中，“在出发植物中导入OsCSLD4基因”是通过将重组表达载体导入出发植物实现的。所述重组表达载体为将所述OsCSLD4基因插入植物表达载体得到的可以表达所述OsCSLD4基因的质粒。所述重组表达载体具体可为：在pCAMBIA1307载体的多克隆位点(例如Xba I与BamH I酶切位点之间)插入序列表的序列2第1-3645位核苷酸所示双链DNA分子得到的重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4。

本发明的发明人发现，过表达OsCSLD4基因促使植物的脱落酸含量增加并且对盐胁迫的耐逆性增加。理论分析为OsCSLD4蛋白通过ABA信号通路响应水稻对盐胁迫的响应。OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中具有重要作用。本发明对于培育耐逆植物具有重大的应用价值。

附图说明

图1为重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4的元件示意图。

图2为转基因株系的植株叶片中OsCSLD4基因的相对表达水平。

图3为转基因株系的植株叶片中基因的相对表达水平。

图4为植株照片。

图5为存活率结果。

图6为ABA含量检测结果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。将序列表的序列1所示的蛋白质命名为OsCSLD4蛋白。水稻cDNA中，OsCSLD4蛋白的编码区如序列表的序列2所示，将其命名为OsCSLD4基因。

pCAMBIA1307载体，全称为pCAMBIA1307-myc植物过表达载体：上海吉然生物科技有限公司，产品目录号为JR13080311。农杆菌LBA4404：行知生物科技有限公司，产品目录号为AABV02-03。

实施例1、转基因植物的获得

一、重组质粒的构建

1、提取水稻Kittake的总RNA，然后反转录得到cDNA。

2、以步骤1得到的cDNA为模板，采用F1和R1组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

F1：5'-CATCTAGAATGTCGCGGCGGCTGTCGTT-3'；

R1：5'-GCGGATCCTGGGAAGCTGAATCCGCCGCC-3。

3、用限制性内切酶Xba I与BamH I双酶切步骤2得到的PCR扩增产物，回收酶切产物。

4、用限制性内切酶Xba I与BamH I双酶切pCAMBIA1307载体，回收载体骨架。

5、将步骤3得到的酶切产物和步骤4得到的载体骨架连接，得到重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4。根据测序结果，对重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4进行结构描述如下：在pCAMBIA1307载体的Xba I与BamH I酶切位点之间插入了序列表的序列2第1-3645位核苷酸所示的双链DNA分子。重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4的元件示意图见图1。

二、转基因OsCSLD4基因水稻的获得

1、将重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4导入农杆菌LBA4404，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农杆菌悬浮于液体ASAA培养基中，得到OD_600nm值＝0.3的菌液。

液体ASAA培养基：含2mg/L 2，4-D和100μM/L AS的液体NB培养基。

3、取水稻Kittake的种子，用75％乙醇灭菌，然后置于固体NB培养基平板上，28℃暗培养2周，然后将愈伤组织转移到新的固体NB培养基平板上28℃暗培养2周，然后将愈伤组织转移到新的固体NB培养基平板上28℃暗培养2周。

4、完成步骤3后，将愈伤组织中自然分散、颜色淡黄的胚性愈伤颗粒置于继代培养基平板上，28℃暗培养3天。

继代培养基：含2mg/L 2，4-D的固体NB培养基。

5、完成步骤4后，取愈伤组织，置于步骤2得到的菌液中浸泡10-20分钟，其间轻轻摇动。

6、完成步骤5后，取愈伤组织，用滤纸吸干表面菌液，然后置于共培养培养基平板上，21℃-22℃暗培养3天。

共培养培养基：含2mg/L 2,4-D和100μM AS的固体NB培养基。

7、完成步骤6后，取愈伤组织，置于筛选培养基平板上28℃暗培养2周，然后将愈伤组织转移到新的筛选培养基平板上28℃暗培养2周，然后将愈伤组织转移到新的筛选培养基平板上28℃暗培养2周。

筛选培养基:含2mg/L 2,4-D和50mg/L潮霉素的固体NB培养基。

8、完成步骤7后，取生长旺盛，呈乳白色或微黄色的新鲜愈伤组织，置于预分化培养基平板上，先28℃暗培养1周再28℃光照培养2周，然后转移到分化培养基平板上，28℃光照培养，得到分化苗。

预分化培养基：含5mg/L ABA和0.5mg/L NAA的固体NB培养基。

分化培养基：含0.5mg/L NAA和3mg/L 6-BA的固体NB培养基。

9、完成步骤8后，将长势好的分化成苗转移至装有固体MS培养基的三角瓶内，28℃光照培养1-2周后移栽至温室，持续培养至收获种子，即为T₁代种子。

10、将T₁代种子培育为植株，即为T₁代植株，T₁代植株自交，得到T₂代种子。

12、将T₂代种子培育为植株，即为T₂代植株，T₂代植株自交，得到T₃代种子。

13、将T₃代种子培育为植株，即为T₃代植株。

对于某一T₁代植株来说，如果满足如下两个条件，该T₁代植株即为单拷贝插入的转基因植株：①该T₁代植株具有潮霉素抗性；②该T₁代植株自交得到的T₂代植株中，潮霉素抗性植株与非潮霉素抗性植株的数量比基本符合3:1。

对于某一T₂代植株来说，如果满足如下三个条件，该T₂代植株及其自交后代为一个纯合的转基因株系：①该T₂代植株具有潮霉素抗性；②其T₁代植株为单拷贝插入的转基因植株；③其抽样检测的T₃代植株均具有潮霉素抗性。

三、PCR鉴定

随机从步骤三得到的纯合的转基因株系中取3个株系，OE1株系、OE2株系和OE3株系，对T₃代植株进行鉴定。将水稻Kittake作为转基因株系的野生型对照。

提取3周龄植株叶片的总RNA，反转录为cDNA,将cDNA作为模板，通过定量PCR鉴定OsCSLD4基因的表达水平。

PCR鉴定OsCSLD4基因的引物如下：

F2：5'-TACCCCTTCACCTCCGTGTT-3'；

R2：5'-CACCCAGAACTGCTCGTTGC-3'。

将水稻Kittake植株叶片中OsCSLD4基因的表达水平作为1,计算转基因株系的植株叶片中OsCSLD4基因的相对表达水平。

结果见图2。

四、转空载体水稻的获得

用pCAMBIA1307载体代替重组质粒pCAMBIA1307-OsCSLD4，按照步骤二操作，得到转空载体株系植株。

实施例2、转基因植株中相关基因表达情况的检测

供试植株：OE1株系的T₃代植株、OE2株系的T₃代植株和水稻Kittake植株(WT)。

提取供试植株(3周龄植株)叶片的总RNA，反转录为cDNA,将cDNA作为模板，通过定量PCR鉴定各个相关基因的表达水平。将水稻Kittake植株叶片中基因的表达水平作为1,计算转基因株系的植株叶片中该基因的相对表达水平。

用于鉴定NCED3基因的引物如下：

上游引物：5'-CGAGAACCGGTTCGTGGTGA-3'；

下游引物：5'-TCTCGAAGTATGTGTGCACTT-3'；

用于鉴定AAO1基因的引物如下：

上游引物：5'-TTCGCCATTTGTTCGTAA-3'；

下游引物：5'-CAGAGGAGGTTGCTCAAG-3'。

用于鉴定RAB21基因的引物如下：

上游引物：5'-CACACCACAGCAAGAGCTAAGTG-3'；

下游引物：5'-TGGTGCTCCATCCTGCTTAAG-3'。

用于鉴定RD22基因的引物如下：

上游引物：5'-GGAATGGATCATGGACGCC-3'；

下游引物：5'-GATGACGGAGCCCGGC-3'。

用于鉴定RAB16C基因的引物如下：

上游引物：5'-TTCCCGGCCAGCACTAAAT-3'；

下游引物：5'-AAACTGCACGTACATCACGACAT-3'。

用于鉴定RD29A基因的引物如下：

上游引物：5'-TGGATCAAACAGAGGAACCA-3'；

下游引物：5'-CATCTTAGTCGCACCATTCTCA-3'。

将水稻Kittake植株叶片中基因的表达水平作为1,计算转基因株系的植株叶片中基因的相对表达水平。

结果见图3。转基因植株叶片中的各个ABA合成相关基因的相对表达量均高于水稻Kittake植株叶片。结果表明，过表达OsCSLD4基因可以显著提高NCED3等水稻ABA合成相关基因表达，进而提高转基因水稻中ABA的含量，促进RD22和RAB16C等ABA诱导的水稻逆境应答关键基因的表达，提高水稻的耐逆性。结果表明，OsCSLD4基因对ABA应答的胁迫应答基因的表达有重要的调控作用。

实施例3、转基因植株盐胁迫耐性检测

供试植株：水稻Kittake植株(WT)、转空载体株系的T₃代植株、OE1株系的T₃代植株、OE2株系的T₃代植株和OE3株系的T₃代植株。

供试植株种植于装有培养土的培养钵中(培养钵底部有通孔)。

试验组：取种植有供试植株(两周龄植株)的培养钵，放置于装有150mM NaCl水溶液的容器中(溶液浸没培养钵土表面3-5cm)培养7天(此时为时间点1)，然后将培养钵放置于装有水的容器中(水浸没培养钵土表面3-5cm)培养3天(此时为时间点2)。对照组：取种植有供试植株(两周龄植株)的培养钵，放置于装有水的容器中(水浸没培养钵土表面3-5cm)培养10天。

进行三次重复试验，每次重复试验中每个株系设置50株植株。

植株照片见图4。图4A是对照组培养10天后的照片。图4B是试验组时间点1的照片。图4C是试验组时间点2的照片。对照组：各个株系植株的表型无显著差异。试验组：与水稻Kittake相比，转空载体植株的表型无显著差异；转基因植株的表型显著优于水稻Kittake。

试验组在时间点2统计存活率结果见图5。与水稻Kittake相比，转空载体植株的存活率基本一致。与水稻Kittake相比，转基因植株的存活率极其显著的提高。

结果表明，过表达OsCSLD4基因可以显著增加水稻的盐胁迫耐性。

实施例4、转基因植株中ABA含量检测

供试植株：水稻Kittake植株(WT)、转空载体株系的T₂代植株、OE1株系的T₂代植株、OE2株系的T₂代植株和OE3株系的T₂代植株。

1、取正常条件下培养的2周龄植株的叶片，用水冲洗干净，用吸水纸吸干多余水分，然后用液氮迅速冷冻，于-80℃保存。

2、取1g冷冻样本在液氮中充分研磨，然后用8ml 80％甲醇溶液溶解并于4℃浸提15小时，然后4℃、12000rpm离心10min，取上清。

3、取步骤2得到的上清，用滤纸过滤并收集滤液。

4、取步骤3得到的滤液，采用北京方程佰金科技有限公司ABA的ELISA检测试剂盒(货号FU-Q053)并按照说明书操作，检测脱落酸含量。

进行三次重复试验，每次重复试验中每个株系设置5株植株。

结果见图6。与水稻Kittake相比，转空载体植株的脱落酸含量基本一致。与水稻Kittake相比，转基因植株的脱落酸含量极其显著的提高。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院生物技术研究所

<120> OsCSLD4蛋白在提高植物盐胁迫耐性中的应用

<130> GNCYX182417

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1215

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 1

Met Ser Arg Arg Leu Ser Leu Pro Ala Gly Ala Pro Val Thr Val Ala

1 5 10 15

Val Ser Pro Val Arg Ser Pro Gly Gly Asp Ala Val Val Arg Arg Gly

20 25 30

Ser Gly Leu Thr Ser Pro Val Pro Arg His Ser Leu Gly Ser Ser Thr

35 40 45

Ala Thr Leu Gln Val Ser Pro Val Arg Arg Ser Gly Gly Ser Arg Tyr

50 55 60

Leu Gly Ala Ser Arg Asp Gly Gly Ala Asp Glu Ser Ala Glu Phe Val

65 70 75 80

His Tyr Thr Val His Ile Pro Pro Thr Pro Asp Arg Ala Thr Ala Ser

85 90 95

Val Ala Ser Glu Ala Glu Ala Ala Ala Glu Ala Glu Glu Val His Arg

100 105 110

Pro Gln Arg Ser Tyr Ile Ser Gly Thr Ile Phe Thr Gly Gly Leu Asn

115 120 125

Cys Ala Thr Arg Gly His Val Leu Asn Phe Ser Gly Glu Gly Gly Ala

130 135 140

Thr Ala Ala Ser Arg Ala Ala Ala Ser Gly Asn Met Ser Cys Lys Met

145 150 155 160

Arg Gly Cys Asp Met Pro Ala Phe Leu Asn Gly Gly Arg Pro Pro Cys

165 170 175

Asp Cys Gly Phe Met Ile Cys Lys Glu Cys Tyr Ala Glu Cys Ala Ala

180 185 190

Gly Asn Cys Pro Gly Cys Lys Glu Ala Phe Ser Ala Gly Ser Asp Thr

195 200 205

Asp Glu Ser Asp Ser Val Thr Asp Asp Asp Asp Asp Glu Ala Val Ser

210 215 220

Ser Ser Glu Glu Arg Asp Gln Leu Pro Leu Thr Ser Met Ala Arg Lys

225 230 235 240

Phe Ser Val Val His Ser Met Lys Val Pro Gly Ala Ala Ala Asn Gly

245 250 255

Asn Gly Lys Pro Ala Glu Phe Asp His Ala Arg Trp Leu Phe Glu Thr

260 265 270

Lys Gly Thr Tyr Gly Tyr Gly Asn Ala Leu Trp Pro Lys Asp Gly His

275 280 285

Ala His Ser Gly Ala Gly Phe Val Ala Ala Asp Glu Pro Pro Asn Phe

290 295 300

Gly Ala Arg Cys Arg Arg Pro Leu Thr Arg Lys Thr Ser Val Ser Gln

305 310 315 320

Ala Ile Leu Ser Pro Tyr Arg Leu Leu Ile Ala Ile Arg Leu Val Ala

325 330 335

Leu Gly Phe Phe Leu Ala Trp Arg Ile Arg His Pro Asn Pro Glu Ala

340 345 350

Val Trp Leu Trp Ala Met Ser Val Ala Cys Glu Val Trp Phe Ala Phe

355 360 365

Ser Trp Leu Leu Asp Ser Leu Pro Lys Leu Cys Pro Val His Arg Ala

370 375 380

Ala Asp Leu Ala Val Leu Ala Glu Arg Phe Glu Ser Pro Thr Ala Arg

385 390 395 400

Asn Pro Lys Gly Arg Ser Asp Leu Pro Gly Ile Asp Val Phe Val Thr

405 410 415

Ser Ala Asp Pro Glu Lys Glu Pro Pro Leu Val Thr Ala Asn Thr Ile

420 425 430

Leu Ser Ile Leu Ala Ala Asp Tyr Pro Val Glu Lys Leu Ala Cys Tyr

435 440 445

Leu Ser Asp Asp Gly Gly Ala Leu Leu Ser Phe Glu Ala Leu Ala Glu

450 455 460

Thr Ala Ser Phe Ala Arg Thr Trp Val Pro Phe Cys Arg Lys His Gly

465 470 475 480

Val Glu Pro Arg Cys Pro Glu Ala Tyr Phe Gly Gln Lys Arg Asp Phe

485 490 495

Leu Lys Asn Lys Val Arg Val Asp Phe Val Arg Glu Arg Arg Lys Val

500 505 510

Lys Arg Glu Tyr Asp Glu Phe Lys Val Arg Val Asn Ser Leu Pro Glu

515 520 525

Ala Ile Arg Arg Arg Ser Asp Ala Tyr Asn Ala Gly Glu Glu Leu Arg

530 535 540

Ala Arg Arg Arg Gln Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly

545 550 555 560

Asn Gly Glu Leu Gly Ala Ala Ala Val Glu Thr Ala Ala Val Lys Ala

565 570 575

Thr Trp Met Ser Asp Gly Ser His Trp Pro Gly Thr Trp Thr Cys Pro

580 585 590

Ala Ala Asp His Ala Arg Gly Asp His Ala Gly Ile Ile Gln Ala Met

595 600 605

Leu Ala Pro Pro Thr Ser Glu Pro Val Met Gly Gly Glu Ala Ala Glu

610 615 620

Cys Gly Gly Leu Ile Asp Thr Thr Gly Val Asp Val Arg Leu Pro Met

625 630 635 640

Leu Val Tyr Val Ser Arg Glu Lys Arg Pro Gly Tyr Asp His Asn Lys

645 650 655

Lys Ala Gly Ala Met Asn Ala Leu Val Arg Thr Ser Ala Ile Met Ser

660 665 670

Asn Gly Pro Phe Ile Leu Asn Leu Asp Cys Asp His Tyr Val His Asn

675 680 685

Ser Ser Ala Leu Arg Glu Gly Met Cys Phe Met Leu Asp Arg Gly Gly

690 695 700

Asp Arg Val Cys Phe Val Gln Phe Pro Gln Arg Phe Glu Gly Val Asp

705 710 715 720

Pro Ser Asp Arg Tyr Ala Asn His Asn Leu Val Phe Phe Asp Val Ser

725 730 735

Met Arg Ala Met Asp Gly Leu Gln Gly Pro Met Tyr Val Gly Thr Gly

740 745 750

Cys Val Phe Arg Arg Thr Ala Leu Tyr Gly Phe Ser Pro Pro Arg Ala

755 760 765

Thr Glu His His Gly Trp Leu Gly Arg Arg Lys Ile Lys Leu Phe Leu

770 775 780

Thr Lys Lys Lys Ser Met Gly Lys Lys Thr Asp Arg Ala Glu Asp Asp

785 790 795 800

Thr Glu Met Met Leu Pro Pro Ile Glu Asp Asp Asp Gly Gly Ala Asp

805 810 815

Ile Glu Ala Ser Ala Met Leu Pro Lys Arg Phe Gly Gly Ser Ala Thr

820 825 830

Phe Val Ala Ser Ile Pro Val Ala Glu Tyr Gln Gly Arg Leu Leu Gln

835 840 845

Asp Thr Pro Gly Cys His His Gly Arg Pro Ala Gly Ala Leu Ala Val

850 855 860

Pro Arg Glu Pro Leu Asp Ala Ala Thr Val Ala Glu Ala Ile Gly Val

865 870 875 880

Ile Ser Cys Phe Tyr Glu Glu Lys Thr Glu Trp Gly Arg Arg Ile Gly

885 890 895

Trp Ile Tyr Gly Ser Val Thr Glu Asp Val Val Thr Gly Tyr Arg Met

900 905 910

His Asn Arg Gly Trp Arg Ser Val Tyr Cys Val Thr Pro Arg Arg Asp

915 920 925

Ala Phe Arg Gly Thr Ala Pro Ile Asn Leu Thr Asp Arg Leu His Gln

930 935 940

Val Leu Arg Trp Ala Thr Gly Ser Val Glu Ile Phe Phe Ser Arg Asn

945 950 955 960

Asn Ala Leu Phe Ala Ser Pro Arg Met Lys Leu Leu Gln Arg Val Ala

965 970 975

Tyr Phe Asn Ala Gly Met Tyr Pro Phe Thr Ser Val Phe Leu Leu Ala

980 985 990

Tyr Cys Leu Leu Pro Ala Val Ser Leu Phe Ser Gly Lys Phe Ile Val

995 1000 1005

Gln Arg Leu Ser Ala Thr Phe Leu Ala Phe Leu Leu Val Ile Thr

1010 1015 1020

Leu Thr Leu Cys Leu Leu Ala Leu Leu Glu Ile Lys Trp Ser Gly

1025 1030 1035

Ile Thr Leu His Glu Trp Trp Arg Asn Glu Gln Phe Trp Val Ile

1040 1045 1050

Gly Gly Thr Ser Ala His Pro Ala Ala Val Leu Gln Gly Leu Leu

1055 1060 1065

Lys Val Ile Ala Gly Val Asp Ile Ser Phe Thr Leu Thr Ser Lys

1070 1075 1080

Pro Gly Asn Gly Gly Gly Asp Gly Gly Val Gly Gly Glu Gly Asn

1085 1090 1095

Asp Asp Glu Ala Phe Ala Glu Leu Tyr Glu Val Arg Trp Ser Tyr

1100 1105 1110

Leu Met Val Pro Pro Val Thr Ile Met Met Val Asn Ala Val Ala

1115 1120 1125

Ile Ala Val Ala Ala Ala Arg Thr Leu Tyr Ser Glu Phe Pro Gln

1130 1135 1140

Trp Ser Lys Leu Leu Gly Gly Ala Phe Phe Ser Phe Trp Val Leu

1145 1150 1155

Cys His Leu Tyr Pro Phe Ala Lys Gly Leu Leu Gly Arg Arg Gly

1160 1165 1170

Arg Val Pro Thr Ile Val Phe Val Trp Ser Gly Leu Ile Ser Met

1175 1180 1185

Ile Ile Ser Leu Leu Trp Val Tyr Ile Asn Pro Pro Ala Gly Ala

1190 1195 1200

Arg Glu Arg Ile Gly Gly Gly Gly Phe Ser Phe Pro

1205 1210 1215

<210> 2

<211> 3648

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 2

atgtcgcggc ggctgtcgtt gccggcgggg gcgccggtga cggtggcggt gtcgccggtg 60

cggagcccgg ggggtgacgc ggtggtgagg agggggagcg ggctgacgtc ccccgtgccg 120

aggcactcgc tcgggtcgtc caccgccacg ctgcaggtgt cgccggtgag gcggagcggc 180

gggagtaggt acctcggcgc gtcgagggat ggcggcgccg atgagagcgc cgagttcgtg 240

cactacaccg tgcacatccc gcccacgccc gaccgggcga cggcgtccgt ggcgagcgag 300

gcggaggcgg cggcggaggc cgaggaggtg caccggccgc agcggagcta catctccggg 360

acgatattca ccggggggct caactgcgcc acgcgcggcc acgtgctcaa cttctccggc 420

gagggcggcg ccaccgccgc ctccagggcg gcggcgtcgg ggaacatgtc gtgcaagatg 480

cgcgggtgcg acatgcccgc gttcctcaac ggcggccgcc cgccgtgcga ctgcgggttc 540

atgatctgca aggagtgcta cgcggagtgc gccgcgggca actgccccgg ttgcaaggag 600

gccttctccg cgggctccga caccgacgaa tccgactccg tcaccgacga cgacgacgac 660

gaggccgtct cctcctccga ggagagggac cagctgccgc tgacatccat ggcgaggaaa 720

ttttccgtgg tgcactccat gaaggtcccc ggcgccgccg ccaacggcaa cggcaagccg 780

gccgagttcg accacgcccg ctggctcttc gagaccaagg gcacctatgg ctacggcaac 840

gctctctggc ccaaggacgg ccacgcccat agcggcgccg gcttcgtcgc cgccgacgag 900

ccccccaact tcggtgcccg ctgccgccgc cccctcacca gaaaaaccag cgtctcccaa 960

gccattctca gcccctacag gttgttgatt gcgattcggc tggtggcgct ggggttcttc 1020

ctcgcgtgga ggattcggca tccgaatccg gaggcggtgt ggctgtgggc gatgtcggtg 1080

gcgtgcgagg tgtggttcgc cttctcatgg ctgctcgaca gcctccccaa gctctgcccc 1140

gtccaccgcg ccgccgacct cgccgtcctc gccgagcggt tcgagtcgcc gacggcgcgc 1200

aaccccaagg gccgctccga cctccccggg atcgacgtgt tcgtcaccag cgccgacccg 1260

gagaaggagc cgccgctggt caccgccaac accatcctct ccatcctcgc cgcggactac 1320

cccgtcgaga agctcgcttg ctacctctcc gacgacggcg gcgcgctgct gtcgttcgag 1380

gcgctcgccg agacggccag cttcgcgcgc acgtgggtgc cattctgccg caagcacggc 1440

gtcgagccgc ggtgccccga ggcgtatttc ggccagaaga gggacttcct caagaacaag 1500

gtgcgcgtcg acttcgtccg cgagaggcgg aaggtgaagc gcgagtacga cgagttcaag 1560

gtgcgggtga actcgctccc cgaggcgatc cggcggcgct ccgacgcgta caacgccggc 1620

gaggaactgc gcgccaggag gcggcagcag gaggaggccg ccgccgcggc tgccgccggc 1680

aacggcgagc ttggagcggc ggcggtcgag accgccgccg tgaaggccac gtggatgtcg 1740

gacggctcgc actggccggg gacgtggacg tgccccgcgg cggaccacgc ccgcggcgac 1800

cacgccggga tcatccaggc gatgctggcg ccgccgacct cggagccggt gatgggaggc 1860

gaggcggcgg agtgcggcgg gctgatcgac accacgggcg tggacgtccg cctcccgatg 1920

ctggtgtacg tgtcgcggga gaagcgcccg ggctacgatc acaacaagaa ggccggcgcc 1980

atgaacgcgc tggtgcggac gagcgccatc atgtcgaacg ggcccttcat cctcaacctc 2040

gactgcgacc actacgtgca caactcgtcg gcgctccggg aggggatgtg cttcatgctc 2100

gaccgcggcg gcgaccgcgt gtgcttcgtc cagttcccgc agcggttcga gggcgtcgac 2160

cccagcgacc ggtacgccaa ccacaacctc gtcttcttcg acgtgtccat gcgcgccatg 2220

gacgggcttc agggccccat gtacgtcggc accggctgcg tcttccgccg caccgcgctg 2280

tacggcttca gcccgccccg cgccaccgag caccatggct ggctcggccg caggaagatc 2340

aagctgttcc tcaccaagaa gaagagcatg ggcaagaaga cggacagggc cgaggacgac 2400

accgagatga tgctgccgcc gatcgaggac gacgacggcg gcgccgacat tgaggcctcg 2460

gctatgctac cgaagcggtt cggcgggtcg gcgacgttcg tggcgtcgat acccgtggcg 2520

gagtaccagg gtcggctgct gcaggacacc cccgggtgcc accacggccg ccctgcgggc 2580

gcgctcgctg tgccgcgcga gccgctcgac gcggcgacgg tggcggaggc catcggcgtg 2640

atctcctgct tctacgagga gaagacggag tgggggcggc gcatcgggtg gatctacggc 2700

tccgtcaccg aggacgtggt caccggctac cggatgcaca accgcgggtg gcgctccgtc 2760

tactgcgtga cgccgcggcg cgacgcgttc cgcggcacgg cgccgatcaa cctcaccgac 2820

cgcctccacc aggtgctccg gtgggcgacg ggctccgtcg agatcttctt ctcccgcaac 2880

aacgccctct tcgcctcgcc gcggatgaag ctgctgcagc gcgtcgccta cttcaacgcc 2940

gggatgtacc ccttcacctc cgtgttcctc ctcgcctact gcctcctccc ggccgtctcc 3000

ctcttctccg gcaagttcat cgtgcagcga ctcagcgcca ccttcctcgc cttcctcctc 3060

gtcatcaccc tcaccctctg cctcctcgcc ctgctcgaga tcaagtggtc cgggatcacg 3120

ctccacgagt ggtggcgcaa cgagcagttc tgggtgatcg gcggcaccag cgcgcacccg 3180

gccgccgtgc tgcagggcct actcaaggtg atcgccggcg tggacatctc cttcacgctg 3240

acctccaagc cggggaacgg cggcggcgat ggcggggtcg gcggcgaggg gaacgacgac 3300

gaggcgttcg cggagctgta cgaggtgagg tggagctacc tgatggtgcc gccggtgacg 3360

atcatgatgg tgaacgcggt ggcgatcgcg gtggcggcgg cgaggacgct gtacagcgag 3420

ttcccgcagt ggagcaagct gctcggcggc gccttcttca gcttctgggt gctgtgccac 3480

ctctacccgt tcgccaaggg cctcctcggc cgccgcggcc gcgtgcccac catcgtcttc 3540

gtctggtcgg gcctcatctc catgatcatc tccctcctct gggtctacat caacccgccc 3600

gccggcgccc gggagcgcat cggcggcggc ggattcagct tcccatag 3648

Claims

1.OsCSLD4蛋白的应用；

所述应用为通过提高OsCSLD4蛋白的活性和/或含量而提高植物的脱落酸含量进而提高植物对盐胁迫的耐逆性；

所述OsCSLD4蛋白为序列表的序列1所示的蛋白质；

所述植物为水稻属植物。

2.OsCSLD4基因在培育脱落酸含量提高进而对盐胁迫的耐逆性增高的转基因植物中的应用；所述OsCSLD4基因为编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；所述植物为水稻属植物。

3.一种制备转基因植物的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入OsCSLD4基因，得到与所述出发植物相比脱落酸含量增高进而对盐胁迫的耐逆性增高的转基因植物；所述OsCSLD4基因为编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；所述植物为水稻属植物。

4.一种植物育种方法，包括如下步骤：提高目的植物中权利要求1中所述的蛋白质的活性和/或含量，从而通过提高植物脱落酸含量提高植物对盐胁迫的耐逆性；所述植物为水稻属植物。