CN109374806B - 一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种测定原料药中3‑氨基噻吩含量的方法，S1、取3‑氨基噻吩对照品，以体积比为1:9的乙腈‑1％甲酸水溶液为溶剂，配制适当浓度的3‑氨基噻吩溶液，作为对照品溶液；取原料药，以体积比为1:9的乙腈‑1％甲酸水溶液为溶剂，配制供试品溶液；S2、平行配制两份3‑氨基噻吩对照品溶液，经LC‑MS/MS法检测，分别获得对照品溶液中3‑氨基噻吩的峰面积；S3、取供试品溶液经LC‑MS/MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用外标法计算供试品溶液中3‑氨基噻吩的含量。本发明具有可用于原料药生产过程中质量控制，检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的优点。

Description

一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法
技术领域
本发明涉及一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法。
背景技术
3-氨基噻吩是一种潜在基因毒性的杂质，对人体具有危害性，由于3-氨基噻吩采用高效液相色谱法灵敏度不够，无法进行有效检测，目前并未有文献报道原料药中3-氨基噻吩的含量。
因此，急需一种可用于原料药生产过程中质量控制，检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法。
发明内容
为了解决现有原料药中3-氨基噻吩含量测定的问题，本发明的目的是提供一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法，具有检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的优点。
本发明提供了如下的技术方案：
一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法，包括如下步骤：
S1、取3-氨基噻吩对照品，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制适当浓度的3-氨基噻吩溶液，作为对照品溶液；取原料药，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制供试品溶液；
S2、平行配制两份3-氨基噻吩对照品溶液，经LC-MS/MS法检测，分别获得对照品溶液中3-氨基噻吩的峰面积；
S3、取供试品溶液经LC-MS/MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用外标法计算供试品溶液中3-氨基噻吩的含量。
优选的，所述步骤2和所述步骤3中LC-MS/MS法的色谱条件为：采用HSS T3色谱柱(2.1×100 mm，1.8μm)，柱温为25℃；进样量5μL；检测器为质谱检测器，离子源为ESI，正离子模式，离子对为100/66.9；采集时间为2.2分钟；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，流速为0.3 mL/min；梯度洗脱程序为：0～5 min，流动相B的体积百分数由5％至95％；5～5.1 min，流动相B的体积百分数由95％至5％； 5.1～7 min，流动相B的体积百分数为5％。
梯度洗脱程序
T/min 0.1％甲酸水 乙腈
0 95 5
5 10 90
5.1 95 5
7 95 5
本发明的有益效果是：
1、本发明采用的LC-MS/MS方法测定3-氨基噻吩含量，由于化合物3-氨基噻吩是原料药中的杂质，3-氨基噻吩液相灵敏度不够，因此选择采用LC-MS/MS法，可准确定位3-氨基噻吩，专属性强，灵敏度高、检测限低(0.02μg/mL)。
2、采用LC-MS/MS法，色谱时间短，不仅节省了检测时间而且大大减少了有机溶剂的使用，提高效率的同时减少了对环境的危害。
3、3-氨基噻吩极性大，采用HSS T3色谱柱，固定相是与100％水溶液流动相兼容的C18固定相，能保留和分离极性有机物，实现3-氨基噻吩与其他物质基线的分离。
4、在本发明提供的LC-MS/MS条件下，通过外标法测定供试品溶液中的3-氨基噻吩含量，操作简单，并且进行了方法学验证，实验结果表明本方法的检测方法专属性强、准确度好、精密度高、重复性好，符合药物的质量标准研究的技术要求。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明实施例1对照品溶液和供试品溶液色谱图；
图2是本发明实施例2线性范围考察的3-氨基噻吩标准曲线图；
图3是本发明实施例5专属性试验的专属性图谱。
具体实施方式
实施例1
一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法，包括如下步骤：
S1、取3-氨基噻吩对照品，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制适当浓度的3-氨基噻吩溶液，作为对照品溶液；取原料药，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制供试品溶液；
S2、平行配制两份3-氨基噻吩对照品溶液，经LC-MS/MS法检测，分别获得对照品溶液中3-氨基噻吩的峰面积；
S3、取供试品溶液经LC-MS/MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用外标法计算供试品溶液中3-氨基噻吩的含量。
具体的，S2步骤和S3步骤中LC-MS/MS法的色谱条件为：采用HSS T3色谱柱 (2.1×100mm，1.8μm)，柱温为25℃；进样量5μL；检测器为质谱检测器，离子源为ESI，正离子模式，离子对为100/66.9；采集时间为2.2分钟；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，流速为0.3mL/min；梯度洗脱程序为：0～5min，流动相B 的体积百分数由5％至95％；5～5.1min，流动相B的体积百分数由95％至5％；5.1～7min，流动相B的体积百分数为5％。
梯度洗脱程序的试验数据如表1所示。
表1梯度洗脱程序
T/min 0.1％甲酸水 乙腈
0 95 5
5 10 90
5.1 95 5
7 95 5
采用实施例1中提供的梯度洗脱程序，分别对对照品溶液和供试品溶液进行 LC-MS/MS分析，所得色谱图如图1所示，图中标号2是供试品溶液，标号4是对照品溶液，显示3-氨基噻吩的保留时间为1.27min。
实施例2
实施例1提供的测定方法的线性范围考察
精密称取2.817mg 3-氨基噻吩草酸盐至25mL容量瓶中，加乙腈溶解后，定容至刻度，摇匀，作为3-氨基噻吩贮备液A；精密移取1.8mL 3-氨基噻吩贮备液A到20mL容量瓶，加体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液稀释并定容，摇匀，作为3-氨基噻吩贮备液B；配制0.0507μg/mL，0.1267μg/mL，0.2535μg/mL，0.3042μg/mL，0.3802μg/mL 和0.5069μg/mL线性溶液，分别标记为L-LOQ，L-50％，L-100％，L-120％，L-150％，和L-200％。
按实施例1提供的测定方法，依次进样测定，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标(μg/mL)绘制标准曲线，其结果见表2，绘制的3-氨基噻吩标准曲线如图2所示。
表2 3-氨基噻吩标准曲线
Figure RE-GDA0001933710630000051
实施例3
实施例1提供的测定方法的加样回收试验
通过加样回收的方法，对实施1提供的测定方法的准确度进行分析，取原料药62.5mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，平行11份，取其中2份，测定样品中的3-氨基噻吩含量；取其中3份，分别加0.25mL 3-氨基噻吩贮备液B，加体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液定容和混匀，作为50％加标回收率溶液；取其中3份，分别加0.5mL 3-氨基噻吩贮备液B，加体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液定容和混匀，作为100％加标回收率溶液；取其中3份，分别加0.75mL 3-氨基噻吩贮备液B，加体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液定容和混匀，作为150％加标回收率溶液，按实施例1的LC-MS/MS法测定，结果见表3，结果显示，3-氨基噻吩回收率为81～100％，9针的回收率RSD为7％，表明实施例1提供的测定方法具有良好的准确度。
表3 3-氨基噻吩回收率结果
Figure RE-GDA0001933710630000061
实施例4
实施例1提供的测定方法的精密度试验
通过100％加样回收的方法，对实施例1提供的测定方法的精密度进行分析，取原料药62.5mg，精密称定，平行8份，取其中2份，测定样品中的3-氨基噻吩含量；取其中6份，分别加0.5mL 3-氨基噻吩贮备液B，加体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液定容和混匀，作为100％加标回收率溶液，按实施例1的LC-MS/MS法测定，结果见表 4，结果显示，3-氨基噻吩回收率为86～100％，6针回收率RSD为6％，表明实施例1 提供的测定方法具有良好的重复性。
表4重复性结果
序号 100％-1 100％-2 100％-3 100％-4 100％-5 100％-6 平均值 RSD
回收率 99％ 100％ 90％ 98％ 96％ 86％ 95％ 6％
实施例5
实施例1提供的测定方法的专属性试验
取体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液作为空白溶剂，实施例1中对照品溶液、供试品溶液和实施例3中的100％供试品加标溶液各5μL，分别注入LC-MS/MS，按本实施例1的LC-MS/MS法测定，记录色谱图，结果见图3，图中标号1为空白溶液，标号 2为实施例1中的供试品溶液，标号3为实施例3中的供试品加标溶液，标号4为实施例1中的对照品溶液，结果表明，空白溶剂和供试品溶液对3-氨基噻吩的测定无干扰。
实施例6
实施例1提供的测定方法的稳定性试验。
取实施例1中的对照品溶液和实施例3中的供试品加标溶液，在室温下放置，考察溶液稳定性，按实施例1的LC-MS/MS法，分别进样，记录3-氨基噻吩的峰面积，记算峰面积RSD，结果见表5和表6，结果表明18h内，对照品溶液的峰面积RSD为6％，在17h内，供试品加标溶液峰面积RSD为7％，说明实施例1提供的测定方法具有良好的稳定性。
表5对照品溶液稳定性结果
Figure RE-GDA0001933710630000071
表6供试品加标溶液稳定性结果
Figure RE-GDA0001933710630000072
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、取3-氨基噻吩对照品，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制适当浓度的3-氨基噻吩溶液，作为对照品溶液；取原料药，以体积比为1:9的乙腈-1％甲酸水溶液为溶剂，配制供试品溶液；
S2、平行配制两份3-氨基噻吩对照品溶液，经LC-MS/MS法检测，分别获得对照品溶液中3-氨基噻吩的峰面积；
S3、取供试品溶液经LC-MS/MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用外标法计算供试品溶液中3-氨基噻吩的含量；
所述步骤S2和所述步骤S3中LC-MS/MS法的色谱条件为：采用HSS T3色谱柱，柱温为25℃；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，流速为0.3mL/min；梯度洗脱程序为：0～5min，流动相B的体积百分数由5％至95％；5～5.1min，流动相B的体积百分数由95％至5％；5.1～7min，流动相B的体积百分数为5％。
2.根据权利要求1所述的一种测定原料药中3-氨基噻吩含量的方法，其特征在于，所述步骤S2和所述步骤S3中LC-MS/MS法的色谱条件为：进样量5μL；检测器为质谱检测器，离子源为ESI，正离子模式，离子对为100/66.9；采集时间为2.2分钟。
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