CN109362487A - 一种糙皮侧耳培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种糙皮侧耳培养基及其制备方法，该发明将核桃青皮作为糙皮侧耳生长全部营养物的唯一提供者制备培养基，该培养基按如下重量份的原料制成：核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份，采用上述配比材料制备出的培养基，经过大量实验发现：该种培养基培养出的糙皮侧耳菌落直径相较于别的不只采用核桃青皮制作配比下的培养基，菌落直径大，最有利于菌种的生长。采用上述材料经过一系列步骤制得糙皮侧耳培养基后，在超净工作台接种，26℃下恒温培养即可。本发明中利用核桃青皮为主要原料的糙皮侧耳培养基培养效果优良，原料易得，且能够对核桃青皮资源进行有效利用，该种培养基合乎糙皮侧耳的生长规律，适合大力进行推广。

Description

一种糙皮侧耳培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及食用菌栽培领域，尤其涉及一种糙皮侧耳培养基及其制备方法。

背景技术

随着百姓生活水平的提升，膳食结构发生改变，餐桌也从原来的单一模式，变得越来越多元化。食用菌以其丰富的营养，独具一格的味道愈来愈受到大众的青睐。糙皮侧耳同其他菌类相比，价格便宜，受到人们大众的欢迎。糙皮侧耳已经成为食用菌中种植数量最多、从业人数最多、食用人数最广的品种之一，是我国市场消费量最大的菌类品种。其抗性很强，具有良好的适应性，种植不受时间限制，一年四季均可，且其生产管理也较一般菌类更为容易，具有良好的市场前景。

糙皮侧耳的生理糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus），又名平菇、粗皮侧耳、青蘑、侧耳，属于白蘑科侧耳属，子实体肥嫩，味道又鲜又美，是著名的食用菌之—。是一种较多野生于枯树干上的食用菌类，同时也是全球主要人工种植食用菌之一。糙皮侧耳营养价值高，含有钙、锌、铁等矿质元素和维生素等，除食用外还能作为药物，有追风散寒、舒筋活络、减少胆固醇、降低高血压、预防动脉硬化、治疗植物性神经系统机能紊乱和抗肿瘤功效，是一种药食同源的优良菌种。

核桃产于我国北部、西北、西南、中部、南部和东部，以及新疆南部。生长在高400-1800m的山坡和丘陵地区，我国平原及丘陵地带栽培较多，我国核桃的分布甚是广阔。现在，我国核桃种植面积接近 5547800万 hm2，产量近700000 吨，种植总面积和产量处于全球首位。以吕梁市为例，改革开放后，吕梁市核桃栽培面积增加到578.68 hm2以上。进入21世纪以来，核桃产业高速发展，核桃种植面积增长到 1386.32hm2以上，吕梁市 13 个县、区全都大面积栽培核桃。逐渐发展成吕梁山东部长 100 km、宽 20km，覆盖 28 个乡镇的693.68hm2核桃林带和西部丘陵山区长 200km、宽 20km，覆盖 74 个乡镇的1040hm2核桃林带。同时，建成高标准66.67 hm2的核桃精品园区40 个，6.67 hm2的核桃精品园区 318 个，有接近500个村实现了核桃林基本覆盖，吕梁核桃总面积第 1 次突破2080hm2，占到全省总面积的一半。如此大面积的核桃种植，给人们带来经济效益的同时，也给环境带来了巨大考验，据统计，98.9%的核桃青皮被人们随意丢弃，核桃青皮的回收利用迫在眉睫。

我国糙皮侧耳的栽培原料多为棉籽壳、木屑、稻草、玉米芯、甜菜渣等。进入2017年以来，我国各地棉籽壳价格为1880-2130元/吨不等，整体为上涨趋势：我国玉米芯的价格也达到650元/吨，玉米芯颗粒的价格在700元/吨以上，而木屑的价格维持在730元/吨左右，稻草的价格为420元/吨，甜菜渣的价格为1500元/吨。

整体来看，现有技术中糙皮侧耳栽培原料的价格整体呈不断上涨趋势。核桃青皮价格较其它栽培原料低廉，核桃青皮中含有多种抗肿瘤成分，在糙皮侧耳实际栽培原料的选取中更具价格优势，可以减少生产成本，一定程度上扩大收益。

为解决糙皮侧耳栽培原料的价格整体呈不断上涨趋势，且核桃资源丰富、对核桃青皮的资源大多随意丢弃而没有利用起来，以及糙皮侧耳需求量大等问题，急需一种将这种低价原料作为主要成分、并且生产成本低的糙皮侧耳培养基及其制备方法。

发明内容

本发明为了解决糙皮侧耳需求量大，需要生产成本低的糙皮侧耳培养基的问题，提供了一种糙皮侧耳培养基及其制备方法。

本发明是通过如下技术方案来实现的：一种糙皮侧耳培养基，包括如下重量份的原料制成：核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份。

本发明是将核桃青皮作为糙皮侧耳生长全部营养物的唯一提供者，制备培养基，该培养基按如下重量份的原料制成：核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份，即若核桃青皮粉末取5~10g，则琼脂粉取10~20g，蒸馏水取1000~2000g。采用上述配比材料制备出的培养基，经过大量实验发现：该种培养基培养出的糙皮侧耳菌落直径相较于别的不只采用核桃青皮制作配比下的培养基，菌落直径大，最有利于菌种的生长。

上述糙皮侧耳培养基的制备方法，包括如下步骤：

①菌种预处理：制备PDA固体培养基于培养皿和锥形瓶中，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；利用平板化线法接种糙皮侧耳菌种，将接种好的培养基放入培养箱中26℃下培养72小时，备用；

②核桃青皮阴干后粉碎，制得核桃青皮粉末；

③取琼脂粉，加入蒸馏水，加热至沸腾，加入核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，过程中pH自然；

④将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖上盖子，并用纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min；

⑤灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；

若无杂菌即得糙皮侧耳培养基。

本发明是将核桃青皮作为糙皮侧耳生长全部营养物的唯一提供者，制备培养基，采用上述步骤制得的糙皮侧耳培养基后，在超净工作台接种，取生长良好的培养物，在菌落边缘部位用消毒后的打孔器来打取一定直径的菌饼，接种于核桃青皮为唯一营养源的培养基中，26℃下恒温培养，观察并记录菌落直径，即观察糙皮侧耳的培养情况。

与现有技术相比较本发明的有益效果在于：本发明提供的采用核桃青皮作为唯一营养提供者制备而成的糙皮侧耳培养基，且按照核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份，该种配比下的培养基使糙皮侧耳可以有利生长，核桃青皮为糙皮侧耳的生长提供的营养物未缺少氮源和无机盐。本发明中利用核桃青皮为主要原料的糙皮侧耳培养基培养效果优良，原料易得，且能够对核桃青皮资源进行有效利用，该种培养基合乎糙皮侧耳的生长规律，适合大力进行推广。

附图说明

图1为本发明的实施例的流程图。

图2为添加了核桃青皮0.5-1.0g、琼脂1.0-2.0g的以核桃青皮为唯一营养源的糙皮侧耳培养基第5天时菌落生长情况。

图3为添加1.5-1.8g核桃青皮、2.0g琼脂、0.2-0.3g蛋白胨、0.08-0.1g磷酸二氢钾、0.05-0.08g硫酸镁的额外氮源、无机盐的糙皮侧耳培养基第5天时菌落生长情况。

图4为添加了10-15g核桃青皮、土豆煮汁、16-20.0g琼脂的糙皮侧耳培养基第5天时菌落生长情况。

图5为添加了10.0-15.0g核桃青皮、0.15-0.20g石膏、1.0-2.0g琼脂的糙皮侧耳培养基第5天时菌落生长情况。

具体实施方式

以下结合附图，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

一种糙皮侧耳培养基，包括如下重量份的原料制成：核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份。

上述糙皮侧耳培养基的制备方法，包括如下步骤：

①菌种预处理：制备PDA固体培养基于培养皿和锥形瓶中，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；利用平板化线法接种糙皮侧耳菌种，将接种好的培养基放入培养箱中26℃下培养72小时，备用；

②核桃青皮阴干后粉碎，制得核桃青皮粉末；

③取琼脂粉，加入蒸馏水，加热至沸腾，加入核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，过程中pH自然；

④将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖上盖子，并用纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min；

⑤灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；

若无杂菌即得糙皮侧耳培养基。

下面通过实施例对比进行说明。

步骤a，菌种预处理：

制备PDA固体培养基于培养皿和锥形瓶中，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用。利用平板化线法接种糙皮侧耳菌种，将接种好的培养基放入培养箱中26℃下培养72小时，备用。

步骤b，核桃青皮为唯一营养物的培养基的制备：

核桃青皮阴干后粉碎，制得核桃青皮粉末；称取琼脂粉1.0-2.0g，加100-200mL蒸馏水，加热至沸腾，加入0.5-1.0g核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，pH值自然。将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖盖，报纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用。同样方法步骤配制含有1.2-2.0g、2.5-3.5g核桃青皮粉末的培养基。在超净工作台接种，取生长良好的培养物，在菌落边缘部位用消毒过的打孔器打取直径8mm的菌饼，分别接种于含有不同浓度的核桃青皮为唯一营养源的培养基中，每个梯度接种5个，26℃下恒温培养，每天观察并记录菌落直径。

步骤c，添加氮源、无机盐的不同添加量核桃青皮的培养基的制备：

准确称取琼脂粉1.0-2.0g，加入0.2-0.3g蛋白胨、0.08-0.1g磷酸二氢钾、0.05-0.08g硫酸镁，作为培养基中添加的氮源和无机盐，加100-200mL蒸馏水，加热至沸腾，加入0.5-1.0g核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，pH值自然。将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖盖，报纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用。同样方法步骤配制含有1.5-1.8g、2.2-2.5g核桃青皮粉末的培养基。在超净工作台接种，取生长良好的培养物，在菌落边缘部位用消毒过的打孔器打取直径8mm的菌饼，分别接种于含有不同浓度的核桃青皮为唯一营养源的培养基中，每个梯度接种5个，26℃下恒温培养，每天观察并记录菌落直径。

步骤d，添加不同氮源及无机盐的核桃青皮培养基的制备：

将300g去皮马铃薯切成小块放入锅中，加1000mL蒸馏水，加热至沸腾，维持20-30min，用2层纱布趁热在烧杯上过滤，弃去滤渣，将滤液重新倒入清洗干净的锅中，加入10-15g核桃青皮粉末，16-20g琼脂粉，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，pH值自然。121℃、100KPa高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用。采用与步骤c中相同的方法配制含0.2-0.3g蛋白胨、0.05-0.1g磷酸二氢钾、0.05-0.08g硫酸镁、1.6-2.0g琼脂、1.0-1.5g核桃青皮粉末的培养基。在超净工作台接种，取生长良好的培养物，在菌落边缘部位用消毒过的打孔器打取直径8mm的菌饼，分别接种于含有不同浓度的核桃青皮为唯一营养源的培养基中，每个梯度接种5个，26℃下恒温培养，每天观察并记录菌落直径。

步骤e，不同石膏添加量的核桃青皮培养基的制备：

准确称取1.0-2.0g琼脂粉，加入0.07-0.10g石膏（60目）、加100-200mL蒸馏水，加热至沸腾，加入1.0-1.5g核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，pH值自然。将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖盖，报纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用。同样方法步骤配制含有0.15-0.20g、0.25-0.32g石膏的核桃青皮培养基。在超净工作台接种，取生长良好的培养物，在菌落边缘部位用消毒过的打孔器打取直径8mm的菌饼，分别接种于含有不同浓度的核桃青皮为唯一营养源的培养基中，每个梯度接种5个，26℃下恒温培养，每天观察并记录菌落直径。

步骤f，确定最优方案：

根据测量菌落直径的大小，利用直径数据分析，得出最利于糙皮侧耳生长的条件，从而筛选出最适宜糙皮侧耳菌种生长的培养基。

结果分析 ：

1. 核桃青皮为唯一营养物的培养基

以核桃青皮为糙皮侧耳生长全部营养物的唯一提供者时，菌丝颜色皆为浓白，菌丝较密，菌落直径如表1所示。当生长环境、时长一致的情况下，核桃青皮粉末添加量为0.5-1.0g，如图2所示，糙皮侧耳菌落的直径最大，该条件最有利于糙皮侧耳菌种生长，且随着核桃青皮添加量的增加，菌落直径越来越小，越不利于糙皮侧耳生长。

表1 核桃青皮为唯一营养物不同量下糙皮侧耳的菌落直径

2. 添加氮源、无机盐的不同添加量核桃青皮的培养基

在以核桃青皮为唯一营养物培养基的基础上，加入蛋白胨（0.2-0.3g）、磷酸二氢钾（0.08-0.1g）、硫酸镁（0.05-0.08g），提供额外的氮源和无机盐，设置的核桃青皮添加量梯度为0.5-1.0g、1.5-1.8g和2.2-2.5g，菌丝颜色皆为浓白，菌丝较密，菌落直径如表2所示。当生长环境、时长一致的情况下，核桃青皮添加量为1.5-1.8g时，如图3所示，菌落直径最大，最有利于糙皮侧耳菌种生长。

表2添加氮源、无机盐的不同添加量核桃青皮的糙皮侧耳的菌落直径

3. 添加氮源、无机盐的不同添加量核桃青皮的培养基

氮源一是添加的为土豆煮汁，氮源二是指添加的为蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁。两组菌丝颜色皆为浓白，菌丝较密，菌落直径如表3所示。当生长环境、时长一致的情况下，如图4所示，添加土豆煮汁的培养基中的菌落直径较大，且生长趋势较好。

表3 不同氮源下糙皮侧耳的菌落直径

4. 不同石膏添加量的核桃青皮培养基

在配制含有核桃青皮粉末1.0-1.5g，琼脂1.0-2.0g的培养基中，分别添加石膏量为0.07-0.10g、0.15-0.20g、0.25-0.32g。菌丝颜色皆为灰白，菌丝较稀疏，菌落直径如表4所示。当生长环境、时长一致的情况下，如图5所示，石膏添加量为0.15-0.20g时，菌落的直径最大，最有利于糙皮侧耳生长。

表4 不同石膏添加量下糙皮侧耳的菌落直径

5.将上述不同条件下培养的糙皮侧耳的菌落直径进行比较，选取第5天的数据进行多重比较分析，得到表5-表6。

表5 不同培养基成分第5天糙皮侧耳的菌落直径多重比较分析

表6 第5天菌落直径方差分析

配方一即培养基成分为核桃青皮0.5-1.0g、琼脂1.0-2.0g时，菌落的直径最大。在加入蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁的培养基中，菌种生长状况不如未加入该氮源和无机盐的培养基，这说明在加入核桃青皮后，再提供额外的氮源及无机盐并不能促进菌种的生长。当加入石膏后，菌落生长直径不如配方一菌落直径，菌丝颜色明显变成灰白色，且菌丝较稀疏。由方差分析可知，P<0.05，不同培养基配方下，菌落生长直径存在显著性差异；由多重比较可知，1和10菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；2和4、5、8、11菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；3和4、6菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；4和2、3、6、8菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；5和2、7、8、9、11菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；6和3、4菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；7和5、9、10、11菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；8和2、4、5菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；9和5、7、10菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；10和1、7、9、11菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异；11和2、5、7、8、9、10菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异。

结论：

本发明以核桃青皮为原料，采用不同梯度核桃青皮为糙皮侧耳生长全部营养物的唯一提供者对糙皮侧耳进行试培养，然后在不同梯度核桃青皮为唯一营养物培养基的基础上加入蛋白胨、磷酸二氢钾、硫酸镁，提供相同额外的氮源和无机盐对糙皮侧耳培养，接着进行不同氮源及无机盐对糙皮侧耳培养，最后添加不同量石膏对糙皮侧耳进行培养，通过测量培养基中菌落的直径，对实验结果进行分析比较，得出培养基成分为核桃青皮0.5-1.0g、琼脂1.0-2.0g时，菌落的直径最大，最有利于菌种生长。通过试验得到的菌丝颜色皆为浓白，菌丝较密，可以得出该培养基组分能的提供糙皮侧耳生长的必要营养物质，可以作为糙皮侧耳的培养基使用。通过实施例分析可表明，第1组和第10组菌落直径差异不显著，与其它存在显著性差异。本发明中利用核桃青皮为主要原料的糙皮侧耳培养基培养效果优良，原料易得，且能够对资源的有效利用，合乎糙皮侧耳的生长规律，适合大力进行推广。

Claims (2)

1.一种糙皮侧耳培养基，其特征在于：包括如下重量份的原料制成：

核桃青皮粉末5~10份，琼脂粉10~20份，蒸馏水1000~2000份。

2.权利要求1所述的糙皮侧耳培养基的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

①菌种预处理：制备PDA固体培养基于培养皿和锥形瓶中，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min，灭菌结束，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；利用平板化线法接种糙皮侧耳菌种，将接种好的培养基放入培养箱中26℃下培养72小时，备用；

②核桃青皮阴干后粉碎，制得核桃青皮粉末；

③取琼脂粉，加入蒸馏水，加热至沸腾，加入核桃青皮粉末，小火加热，同时玻璃棒不停搅拌，避免琼脂糊底，直到琼脂完全溶解，过程中pH自然；

④将煮沸的液体趁热倒入干净培养皿中，盖上盖子，并用纸包紧捆扎，于121℃、100KPa下高压蒸汽灭菌20min；

⑤灭菌结束后，待其冷却凝固后放入培养箱中26℃下试培养24小时，若有杂菌则弃用；

若无杂菌即得糙皮侧耳培养基。