CN109355343A - 一种小分子金银花螯合肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及多肽技术领域，具体公开一种小分子金银花螯合肽的制备方法。所述制备方法，包括如下步骤：将金银花进行粉碎处理，加入纤维素酶进行酶解，提取得到提取液；加入β‑葡聚糖酶、沙棘蛋白酶，酶解处理，得到酶解液；经过滤、离心、纳滤处理，得到滤液，加入大豆肽，进行螯合反应，得到螯合液；经浓缩、喷雾干燥，得到螯合肽。本发明提供的小分子金银花螯合肽的制备方法，将金银花多肽和大豆肽与绿原酸等活性成分进行结合形成螯合肽，保留了金银花中绿原酸活性成分，并提高了金银花的利用度。所得到的小分子金银花螯合肽在消化道内稳定性好、无刺激、无毒害，更易于被人体消化吸收，吸收利用率高。

Description

一种小分子金银花螯合肽的制备方法
技术领域
本发明涉及多肽技术领域，尤其涉及一种小分子金银花螯合肽的制备方法。
背景技术
金银花在我国分布较广，药用历史悠久，是国家卫生部首批颁布的既是食品又是药品的60种中药之一。绿原酸是金银花中的主要活性成分，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径代谢产生的苯丙素类化合物。绿原酸具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、降血压、延缓衰老作用及兴奋中枢神经系统等多种药理作用，对大肠癌、肝癌和喉癌具有显著的抑制作用。绿原酸除可作医学用途外，还广泛用于食品保鲜剂、食品添加剂、植物生长激素及一些高级化妆品的添加剂等，是食品、药品、化妆品等工业的重要原料。
绿原酸提取方法主要包括水提法、醇提法、微波提取法、超声提取法等。所得到的提取液通常采用超滤法去除多糖、鞣质和蛋白等，最大限度地保留有效成分绿原酸。然而，由去除的多糖和蛋白质得到的低聚糖和小分子肽能完整地通过肠黏膜细胞进入体内循环，更容易吸收，单纯的提取绿原酸会造成金银花中的多糖和蛋白质等资源的浪费，使金银花的利用度降低。因此，开发一种既可以充分利用绿原酸，又可以提高金银花利用度的方法意义重大。
发明内容
针对现有金银花中提取绿原酸易造成资源浪费，且金银花的利用度低等问题，本发明提供一种小分子金银花螯合肽的制备方法。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种小分子金银花螯合肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将金银花进行粉碎处理，加入金银花重量5-7倍纯化水，升温至40-50℃，加入纤维素酶进行酶解处理3-4h，超声提取，得到提取液；
(2)将所述提取液升温至50-60℃，加入β-葡聚糖酶，进行酶解处理0.5h-1.0h，加入沙棘蛋白酶，酶解处理2.5-3.5h，升温对酶进行灭活处理，得到酶解液；
(3)将所述酶解液进行过滤、离心、纳滤处理，得到滤液，加入大豆肽，升温至45-50℃，进行螯合反应，得到螯合液；
(4)所述螯合液经浓缩、喷雾干燥，得到小分子金银花螯合肽。
进一步地，所述纤维素酶加入量为金银花重量的0.25％-0.3％，将结构致密的细胞壁中的纤维素水解成水溶性的糖类物质，有利于胞内物质绿原酸等的溶出，有助于提取，提高得率。
进一步地，所述超声提取温度为40-50℃，提取时间为0.5-1h，充分提取金银花中的绿原酸、多糖、蛋白质等组分。
进一步地，所述β-葡聚糖酶加入量为金银花重量的0.8％-1.0％，将提取物中的多糖转化为低聚糖，便于与多肽进行螯合，利于机体吸收，同时也为沙棘蛋白酶中的益生菌提供养分用于蛋白的发酵得到多肽。
进一步地，所述沙棘蛋白酶加入量为金银花重量的1.0％-1.5％，沙棘蛋白酶是沙棘全果原浆与复合24株益生菌和酶(酶菌共存菌种)发酵而成，沙棘蛋白酶酶解中药蛋白的同时，其中的益生菌可进行蛋白质发酵有助于得到多肽，酶菌共同作用将金银花中的蛋白质水解成小分子多肽，提高金银花利用度的同时，与大豆肽共同作用螯合金银花中的绿原酸等活性成分形成螯合肽。
进一步地，所述灭活处理温度为90-95℃，时间为10-15min。
进一步地，所述大豆肽加入量为金银花重量的15％-20％，大豆肽中肽含量≥88％，所含肽中，分子量≤1000道尔顿的多肽含量≥93％，只有短链的大豆多肽(3-10氨基酸残基)才具有特定的生物活性，大豆肽上的氨基酸残基可以形成非共价相互作用结合位点，与金银花中得到的多肽共同作用形成足够多的结合位域，以氢键(同时存在部分范德华力)为主要作用力与绿原酸(异绿原酸)相互结合形成配合物，并同时螯合金银花中的低聚糖及其他活性成分，得到螯合肽。
进一步地，所述纳滤处理中所用纳滤膜的孔径为1.0nm，除去离心液中的高价金属离子、大分子多肽及其他大颗粒杂质，提高产品纯度。
进一步地，所述螯合反应时间为30-45min，保证反应充分，得到螯合肽。
相对于现有技术，本发明提供的小分子金银花螯合肽的制备方法，以金银花为原料，先经纤维素酶酶解处理，再采用水提法提取，提高绿原酸得率的同时，充分提取金银花中的多糖及蛋白质成分，并经过酶解使多糖和蛋白质降解为低聚糖和小分子活性多肽，金银花多肽和大豆肽共同作用与绿原酸等活性成分进行结合形成螯合肽，最大限度保留了金银花中绿原酸活性成分，并提高了金银花的利用度。所得到的小分子金银花螯合肽在消化道内稳定性好、无刺激、无毒害，更易于被人体消化吸收，吸收利用率高。
本发明还提供了上述制备方法制备得到的小分子金银花螯合肽，以及其在制备生物饲料添加剂、食品、保健食品、药品中的应用。
本发明提供的小分子金银花螯合肽，生物活性高，无毒副作用，不会引起像蛋白质或高分子肽对人体造成的过敏反应，更易于被人体消化吸收，适合广泛的在制备生物饲料添加剂、食品、保健食品、药品等领域应用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种小分子金银花螯合肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将10kg金银花进行粉碎处理，加入60L纯化水，升温至45℃，加入25g纤维素酶进行酶解处理3.5h，45℃超声提取0.5h，得到提取液，其中，含有绿原酸(紫外-可见分光光度法)837g，蛋白质(考马斯亮蓝法)4.2g；
(2)将所述提取液升温至50℃，加入80gβ-葡聚糖酶，进行酶解处理1.0h，50℃保温，加入100g沙棘蛋白酶，酶解处理3.5h，升温至90℃对酶进行灭活处理15min，得到酶解液；
(3)将所述酶解液采用卧锣离心机进行过滤处理，滤液采用三相离心机进行离心脱脂，得到离心液，离心液采用孔径为1.0nm的纳滤膜进行纳滤处理，得到纳滤液，加入1500g大豆肽，升温至45℃，以45r/min搅拌，螯合反应45min，得到螯合液；
(4)所述螯合液经双效浓缩器浓缩后，进行喷雾干燥，得到小分子金银花螯合肽。
实施例2
一种小分子金银花螯合肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将10kg金银花进行粉碎处理，加入50L纯化水，升温至50℃，加入30g纤维素酶进行酶解处理4h，50℃超声提取0.5h，得到提取液，其中，含有绿原酸(紫外-可见分光光度法)845g，蛋白质(考马斯亮蓝法)4.1g；；
(2)将所述提取液升温至55℃，加入100gβ-葡聚糖酶，进行酶解处理0.5h，55℃保温，加入150g沙棘蛋白酶，酶解处理2.5h，升温至90℃对酶进行灭活处理12min，得到酶解液；
(3)将所述酶解液采用卧锣离心机进行过滤处理，滤液采用三相离心机进行离心脱脂，得到离心液，离心液采用孔径为1.0nm的纳滤膜进行纳滤处理，得到纳滤液，加入2000g大豆肽，升温至50℃，以40r/min搅拌，螯合反应40min，得到螯合液；
(4)所述螯合液经双效浓缩器浓缩后，进行喷雾干燥，得到小分子金银花螯合肽。
实施例3
一种小分子金银花螯合肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将10kg金银花进行粉碎处理，加入70L纯化水，升温至40℃，加入28g纤维素酶进行酶解处理3h，40℃超声提取1h，得到提取液，其中，含有绿原酸(紫外-可见分光光度法)840g，蛋白质(考马斯亮蓝法)4.5g；；
(2)将所述提取液升温至60℃，加入90gβ-葡聚糖酶，进行酶解处理0.8h，保温，加入120g沙棘蛋白酶，酶解处理3.0h，升温至95℃对酶进行灭活处理10min，得到酶解液；
(3)将所述酶解液采用卧锣离心机进行过滤处理，滤液采用三相离心机进行离心脱脂，得到离心液，离心液采用孔径为1.0nm的纳滤膜进行纳滤处理，得到纳滤液，加入1800g大豆肽，升温至50℃，以36r/min搅拌，螯合反应30min，得到螯合液；
(4)所述螯合液经双效浓缩器浓缩后，进行喷雾干燥，得到小分子金银花螯合肽。
本发明实施例提供的小分子金银花螯合肽的制备方法，能够增加提取液中绿原酸的得率，同时可以充分提取金银花中的蛋白质及多糖成分，提高金银花的利用度。
为了更好的说明本发明实施例提供的小分子金银花螯合肽的制备方法，下面将实施例1-3制备得到的小分子金银花螯合肽进行多肽与绿原酸结合率的测定。
对小分子金银花螯合肽进行绿原酸总含量、结合态绿原酸含量及结合率的检测。采用紫外-可见吸收光谱法测定小分子螯合肽中绿原酸总含量与结合态绿原酸含量并计算小分子螯合肽的结合率。结果如表1所示。
表1
由以上数据可得，本发明实施例提供的小分子金银花螯合肽，通过金银花多肽和大豆肽共同作用与绿原酸等活性成分进行结合形成螯合肽，结合率≥93％，最大限度保留了金银花中绿原酸活性成分，同时提高金银花中蛋白质多糖的利用率，所得到的小分子金银花螯合肽，易于被人体消化吸收，吸收利用率高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将金银花进行粉碎处理，加入金银花重量5-7倍纯化水，升温至40-50℃，加入纤维素酶进行酶解处理3-4h，超声提取，得到提取液；
(2)将所述提取液升温至50-60℃，加入β-葡聚糖酶，进行酶解处理0.5h-1.0h，加入沙棘蛋白酶，酶解处理2.5-3.5h，升温对酶进行灭活处理，得到酶解液；
(3)将所述酶解液进行过滤、离心、纳滤处理，得到滤液，加入大豆肽，升温至45-50℃，进行螯合反应，得到螯合液；
(4)所述螯合液经浓缩、喷雾干燥，得到小分子金银花螯合肽。
2.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述纤维素酶加入量为金银花重量的0.25％-0.3％。
3.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述超声提取温度为40-50℃，提取时间为0.5-1h。
4.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述β-葡聚糖酶加入量为金银花重量的0.8％-1.0％。
5.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述沙棘蛋白酶加入量为金银花重量的1.0％-1.5％。
6.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述灭活处理温度为90-95℃，时间为10-15min。
7.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于，所述大豆肽加入量为金银花重量的15％-20％。
8.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述纳滤处理中所用纳滤膜的孔径为1.0nm。
9.如权利要求1所述的小分子金银花螯合肽的制备方法，其特征在于：所述螯合反应时间为30-45min。
10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制备得到的小分子金银花螯合肽。
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