CN109349104B - 从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入6～10g的琼脂、25～35g的蔗糖、0.1～0.5mg的植物生长调节剂；并调节pH值至5.8～6.0。本发明克服了现有技术以多年生带腋芽茎段为外植体诱导的无菌瓶苗经继代转接培养后出现的长势下滑而不利于后期生根的难题。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法。
背景技术
红腺忍冬(Lonicera hypoglauca Miq)为忍冬科忍冬属(Lonicera)植物，是山银花(我国名贵中药材之一)的三种来源之一，具有清热解毒、疏散风热的功效。由于红腺忍冬的药用价值、保健价值及经济价值均极高，近年来，随着社会经济发展等方面的深入、人们生活质量的提高以及需求面的扩大，红腺忍冬已经被广泛地应用于食品、饮料、保健品、化妆品及兽医用等领域；同时红腺忍冬抗逆性强，可以绿化、美化自然环境——例如防止水土流失、改善石漠化地区的自然生态环境，因此被普遍地应用于生态环境保护方面。综上多种缘由，目前社会对红腺忍冬的需求量急剧扩张，导致红腺忍冬市场已经供不应求。
在实现红腺忍冬规模化生产的社会大背景下，就如何提高红腺忍冬生产效率的研究仍十分有限，例如关于将红腺忍冬直接从外植体诱导组培生根苗以提高生产效率的研究，目前还尚未有报道。本发明能够成功将此物种外植体直接诱导成优质组培生根苗，为其在优良种质保存、快速繁育及在研究、生产中的应用拓展了新的技术参考来源。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，克服了现有技术以多年生带腋芽茎段为外植体诱导的无菌瓶苗经继代转接培养后出现的长势下滑(如叶片细小、节间短等)而不利于后期生根的难题。
为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入6～10g的琼脂、25～35g的蔗糖、0.1～0.5mg的植物生长调节剂，并调节pH值至5.8～6.0。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述植物生长调节剂为NAA。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体是指从红腺忍冬植株幼苗下胚轴以上部分的枝叶上切取2.5cm～4.0cm长的顶芽，或2.5cm～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段；所述红腺忍冬植株幼苗为苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的种子实生苗。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体灭菌的方法为：将所述外植体先用体积分数为75％酒精浸泡25～35s，取出洗净，再于质量分数为0.1％的HgCl2溶液中浸泡1～7min。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，在培养室中的培养条件为：温度为22～28℃，相对湿度为50～75％，光照时间为12h/d，光照强度为2 000～3 000lx。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体接种于生根诱导培养基中的具体方法为：将外植体的旧切口斜剪切除，使新切口的切面成为一个斜面，以增加新切口的表面积，进而提高生根几率，然后以外植体芽端朝上、外植体新切口朝下的方式，将外植体新切口表面全部插入生根诱导培养基中，同时将碰触培养基的叶片部分剪除，以减少污染几率。
优选的是，所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，置于HgCl2溶液中浸泡时还加入0.2～0.3ml的吐温-20。
本发明至少包括以下有益效果：
1、本发明提供了一种从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，克服了现有技术以多年生带腋芽茎段为外植体诱导的无菌瓶苗经继代转接后出现的长势下滑(如叶片细小、节间短等)而不利于后期生根的难题。
2、本发明能利用生长健壮的苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的红腺忍冬实生苗下胚轴以上部分的枝叶，直接进行生根诱导培养，操作简单方便，平均生根率高；第一代组培生根苗培养至第10d便可生根；培养至第30d时，平均生根率为33.33％；培养至第60d时，平均生根率为49.02％；至第三代组培生根苗，培养至第60d时，平均生根率高达100％。
3、本发明缩减了现有技术中从外植体获得红腺忍冬组培生根苗的步骤；现有技术以带腋芽茎段为外植体诱导的不定芽，经继代增殖培养之后，再进行生根壮苗培养获得无菌组培生根苗；本发明跨越外植体不定芽诱导及继代增殖阶段，而直接对外植体进行生根诱导培养，缩短了培育组培生根苗的时间，提高了培育组培生根苗的效率。
4、本发明提供的组培苗的生根效果各项指标表现较佳、植株整体长势优良，平均根条数、平均根长及整体植株长势等质量效果均较佳，降低了培育组培生根苗的时间及人财物力等各类相关成本，为红腺忍冬优良种质保存、快繁及在研究生产中的应用提供了新的技术参考。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，直接接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入5g的琼脂、25g的蔗糖、0.1mg的植物生长调节剂，并调节pH值至5.8～6.0。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述植物生长调节剂为NAA。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体是指从红腺忍冬植株幼苗下胚轴以上部分的枝叶上切取2.5～4.0cm长的顶芽，或2.5～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段；所述红腺忍冬植株幼苗为苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的种子实生苗。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体灭菌的方法为：将所述外植体先用体积分数为75％酒精浸泡25s，取出洗净，再于质量分数为0.1％的HgCl2溶液中浸泡1min。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，在培养室中的培养条件为：温度为22℃，相对湿度为50％，光照时间为12h/d，光照强度为2 000～3 000lx。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，置于HgCl2溶液中浸泡时还加入0.2ml的吐温-20。
实施例2
从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，直接接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入6g的琼脂、30g的蔗糖、0.2mg的植物生长调节剂，并调节pH值至5.8～6.0。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述植物生长调节剂为NAA。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体是指从红腺忍冬植株幼苗下胚轴以上部分的枝叶上切取2.5～4.0cm长的顶芽，或2.5～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段；所述红腺忍冬植株幼苗为苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的种子实生苗。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体灭菌的方法为：将所述外植体先用体积分数为75％酒精浸泡30s，取出洗净，再于质量分数为0.1％的HgCl2溶液中浸泡5min。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，在培养室中的培养条件为：温度为25℃，相对湿度为60％，光照时间为12h/d，光照强度为2 000～3 000lx。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，置于HgCl2溶液中浸泡时还加入0.2ml的吐温-20。
实施例3
从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，直接接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入10g的琼脂、35g的蔗糖、0.5mg的植物生长调节剂，并调节pH值至5.8～6.0。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述植物生长调节剂为NAA。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体是指从红腺忍冬植株幼苗下胚轴以上部分的枝叶上切取2.5～4.0cm长的顶芽，或2.5～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段；所述红腺忍冬植株幼苗为苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的种子实生苗。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体灭菌的方法为：将所述外植体先用体积分数为75％酒精浸泡30s，取出洗净，再于质量分数为0.1％的HgCl2溶液中浸泡7min。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，所述外植体接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，在培养室中的培养条件为：温度为28℃，相对湿度为75％，光照时间为12h/d，光照强度为2 000～3 000lx。
所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法中，置于HgCl2溶液中浸泡时还加入0.3ml的吐温-20。
对比例1
同实施例2，不同在于，所述植物生长调节剂更换为IAA。
对比例2
同实施例2，不同在于，所述植物生长调节剂更换为IBA。
对比例3
同实施例2，但是所述外植体获取方法为：取栽种于野外的红腺忍冬成熟植株未木质化带腋芽茎段，依次浸泡于体积分数为75％的酒精中30s、质量分数为0.1％的HgCl2溶液中8min进行消毒灭菌后，经无菌诱导培养得到初代诱导苗，待该初代诱导苗的腋芽长至2.5cm～4.0cm时，取此诱导苗植株上2.5～4.0cm长的顶芽，或2.5～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段，即得外植体。
实验1、不同外植体来源对红腺忍冬第一代组培苗生根效果的影响
分别按照实施例2、对比例3中的方法，将红腺忍冬外植体灭菌后，接种于生根诱导培养基中培养60d以上，分别测试第30d、60d的生根指标等相关数据统计，结果见表1。
表1不同外植体来源对红腺忍冬第一代组培苗生根效果的影响
由表1可知，实施例2的生根效果明显优于对比例3；实施例2中采用的是本发明的方法培育红腺忍冬组培生根苗，对比例3采用的是现有技术中的方法来培育红腺忍冬组培生根苗。因此，本发明的方法对于培育红腺忍冬组培生根苗要明显优于现有技术。
实验2、培养代数对红腺忍冬组培苗生根效果的影响
按照实施例2的方法将红腺忍冬外植体接种于生根诱导培养基中培养60d以上，作为第一代组培苗；然后将第一代组培苗作为外植体接种于生根诱导培养基中继续培养60d以上，作为第二代组培苗；然后再将第二代组培苗作为外植体接种于生根诱导培养基中继续培养60d以上，作为第三代组培苗。并分别测试每代培养过程中第30d、60d的生根指标等相关数据并统计，结果如表2所示。
表2培养代数对红腺忍冬组培苗生根效果的影响
由表2可知，不同代数对红腺忍冬种子实生苗生根各项指标的影响程度均不同，从第一代到第三代，随着培养代数的增加，生根率逐代提高，第三代生根诱导培养至第30d时，生根率为83.33％，培养至第60d时，生根率高达100％；其次，根的各项生长指标也逐渐优化，从第二代60d开始，根颜色随着根龄依次呈米白色-淡绿色-绿色递进变化,培养至第三代时，第30d的根即可长至绿色；再次，第三代的平均根条数、根长势、植株整体长势也远远优于前面两代，所以第三代为进行生根诱导培养的较佳代数选择。
实验3、不同植物生长调节剂对红腺忍冬组培苗第二代生根效果的影响
分别按照实施例2、对比例1、对比例2的方法将红腺忍冬外植体接种于生根诱导培养基中培养60d以上，作为第一代组培苗；然后分别将第一代组培苗作为外植体接种于生根诱导培养基中继续培养60d以上，作为第二代组培苗。并分别测试每代培养过程中第30d、60d的生根指标等相关数据统计，结果如表3所示。
表3不同植物生长调节剂对红腺忍冬第二代组培苗生根效果的影响
由表3可知，不同种类生长素对红腺忍冬实生组培苗第二代生根诱导效果的影响程度均不同，NAA及IAA的诱导生根率差别不大，培养30d时生根率均达到70％以上，培养60d时生根率均达80％以上，均优于IBA；就根长势、整体植株长势及侧根情况而言，则为NAA优于IAA。综上所述，NAA为诱导红腺忍冬生根的较佳生长素种类选择。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (4)
1.从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：将红腺忍冬外植体灭菌后，接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，即得红腺忍冬组培生根苗；所述生根诱导培养基的配制方法为：在每L的1/2MS培养基中加入5～10g的琼脂、25～35g的蔗糖、0.1～0.5mg的植物生长调节剂，并调节pH值至5.8～6.0；
所述外植体是指从红腺忍冬植株幼苗下胚轴以上部分的枝叶上切取2.5～4.0cm长的顶芽，或2.5～4.0cm长、带2～3个节并保留节处叶片的茎段；所述红腺忍冬植株幼苗为苗龄≤4个月、具有4～6片真叶时的种子实生苗；
所述植物生长调节剂为NAA。
2.如权利要求1所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，其特征在于，所述外植体灭菌的方法为：将所述外植体先用体积分数为75％酒精浸泡25～35s，取出洗净，再于质量分数为0.1％的HgCl2溶液中浸泡1～7min。
3.如权利要求1所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，其特征在于，所述外植体接种于生根诱导培养基中，置于培养室中培养，在培养室中的培养条件为：温度为22～28℃，相对湿度为50～75％，光照时间为12h/d，光照强度为2 000～3 000lx。
4.如权利要求2所述的从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法，其特征在于，置于HgCl2溶液中浸泡时还加入0.2～0.3ml的吐温-20。
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| CN201811173422.3A Active CN109349104B (zh) | 2018-10-09 | 2018-10-09 | 从外植体快速获得红腺忍冬组培生根苗的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109349104B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010161995A (ja) * | 2009-01-19 | 2010-07-29 | Tajima Ryokka Kk | 立壁状植栽装置とこれを用いた壁面緑化構造 |
| CN105340750A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-02-24 | 山东中医药大学 | 忍冬组培苗培养基及忍冬组培快繁方法 |
| CN105454046A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-04-06 | 北华大学 | 一种早花忍冬的离体快繁方法 |
| CN106978440A (zh) * | 2017-04-18 | 2017-07-25 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种外源基因导入红腺忍冬的方法 |
-
2018
- 2018-10-09 CN CN201811173422.3A patent/CN109349104B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010161995A (ja) * | 2009-01-19 | 2010-07-29 | Tajima Ryokka Kk | 立壁状植栽装置とこれを用いた壁面緑化構造 |
| CN105340750A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-02-24 | 山东中医药大学 | 忍冬组培苗培养基及忍冬组培快繁方法 |
| CN105454046A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-04-06 | 北华大学 | 一种早花忍冬的离体快繁方法 |
| CN106978440A (zh) * | 2017-04-18 | 2017-07-25 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种外源基因导入红腺忍冬的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Propagation of three Blue Honeysuckle (Lonicera caerulea L.) cultivars in in vitro culture;Ines Mihaljevic et al.;《POMOLOGIA CROATICA》;20191231;第23卷;第41-48页 * |
| 红腺忍冬的扦插繁殖体系研究;陈少容 等;《中国农学通报》;20131231;第29卷(第22期);第135-141页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109349104A (zh) | 2019-02-19 |
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Legal Events
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Application publication date: 20190219 Assignee: Pubei County Hongwei Nut Planting Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI BOTANICAL GARDEN OF MEDICINAL PLANTS Contract record no.: X2023980046052 Denomination of invention: A Method for Quickly Obtaining Rooting Seedlings of Red Gland Lonicera japonica from Explants Granted publication date: 20210706 License type: Common License Record date: 20231108 |