CN109330930A - 一种金滑菇萃取物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种金滑菇萃取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及化妆品领域，提供一种保湿抗皱的金滑菇萃取物及其制备方法。金滑菇萃取物的主要成分为金滑菇多醣，分子量为4～20kDa。通过脱脂、热水超声萃取以及分级醇沉纯化，可以提高多醣的提取率，并且得到分子量较小的金滑菇多醣，使之易于被人体吸收，并且具有保湿抗皱的功效，将其应用于化妆品原物料中，可使产品达到较佳保湿及抗皱功能。

Description

一种金滑菇萃取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及具有一种金滑菇萃取物及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤组织的衰老及厚度会随着年龄增加而有明显改变。当皮下脂肪减少，弹力纤维与胶原蛋白纤维会发生变化而使皮肤渐渐失去弹性和张力，更进一步导致皮肤松弛与皱纹产生。因此现在很多化妆品都会添加具有保湿及抗皱成分。
近年来研究发现，天然菇蕈类所萃取之多醣体影响之生理活性有调节免疫机能、抗老化、抗炎症、抗氧化、抗肿瘤活性、抗病毒、清除自由基等功效。其中以多体醣中所分离出来的β-葡聚醣已被证实可以促进皮肤中胶原蛋白和弹性蛋白增加，具有良好保湿及抗皱功效(Du,B et al.,2014)。进而增强皮肤弹性并减少皮肤细纹的产生，让肌肤恢复细致、弹性及柔嫩。可应用于化妆品原物料配方中，以增加化妆品之产品功能性及价值性，例如保湿和抗皱等功能。
金滑菇(Flammulina velutipes)又名绒柄金钱菇，子实体为金黄色菌柄，且绒毛较多，富含有多种活性物质，如膳食纤维、多醣、胺基酸等，具有很高的营养价值。由于金滑菇子实体菇体黏滑，可萃取出大量透明黄色、无味具黏滑性的金滑菇多醣体萃取物。活性物质也较金针菇多，包含多醣体和胺基酸成分约为金针菇的1.5～2倍，其中金滑菇含有独特的β-1,3-D-葡聚醣。临床实验证明，将β-1,3-D-葡聚醣使用在皮肤上，能增加皮肤的弹性并形成较厚实的真皮层，对于老化或已经形成皱纹的皮肤，供应越多的表皮成长因子，就愈能增加胶原蛋白和弹性蛋白的产生，进而改善皮肤的外观，并让小细纹和皱纹消失。然而，目前未有金滑菇对于保湿和抗皱相关的研究及应用。
多醣的萃取方法，大多将菇蕈类之菌丝体进行液态发酵培养或直接采用子实体，以热水萃取法、酶萃取或酸碱萃取法等进行萃取，进一步再藉由有机溶剂，如酒精等，进行沉淀以得到多醣。此传统方式所萃取出来之多醣分子质量较大，约为100k道耳顿(Dalton,Da)至1000k道耳顿之间，人体皮肤较无法轻易吸收，如应用于添加在化妆品配方中，可能无法使其化妆品达到较佳保湿和抗皱之功效。因此，本发明人有鉴于此，根据先前技术所具有之不足处，乃亟思加以改良，提供具有一种保湿抗皱的金滑菇萃取物及其制备方法，可将该萃取物应用于护肤保养品如面膜、化妆水、精华液等，开发更多的功效护肤品，以提供消费者更多元的选择。
发明内容
本发明涉及化妆品领域，具体涉及具有一种保湿抗皱的金滑菇萃取物及其制备方法，其制备过程简单方便且多醣损失率少，可快速纯化分离具有专一功效性之小分子量多醣萃取物。此方法将金滑菇子实体利用热水萃取经超音波辅助，再藉由酒精分级沉淀原理可做为高与低分子量之区分，以不同酒精浓度制备分级流程可制备成具有良好保湿抗皱效用的化妆品，具体可制成面膜、化妆水、精华液、修复霜等产品；本发明的有益效果：有效地提高皮肤弹性、推迟皮肤衰老，使皮肤不易干燥产生皱纹，改善皮肤，提高皮肤的光亮度。
一种金滑菇萃取物，其主要成分为金滑菇多醣，所述的金滑菇多醣分子量为4～20kDa。并且，其中β-1,3-D-葡聚醣含量为12％～15％。
上述金滑菇萃取物的制备方法包括以下步骤：
(1)脱脂：金滑菇子实体粉末经过醇溶液脱脂处理，脱去脂类和有色物质和小分子物质；
(2)提取：经过脱脂处理的金滑菇子实体粉末用热水超声萃取，离心后取上清液；
(3)第一次醇沉：步骤(2)获取的上清液减压浓缩加入醇，至混合液中醇的体积浓度为35％～45％，醇沉并离心分离；
(4)第二次醇沉：取步骤(3)上清液，减压浓缩后加入醇，至混合液中醇的体积浓度为55％～65％，醇沉并离心分离；
(5)第三次醇沉：取步骤(4)上清液，减压浓缩后加入醇，至混合液中醇的体积浓度为75％～85％，醇沉并离心分离，取沉淀与步骤(3)和(4)离心分离所获得的沉淀合并。
优选的，步骤(1)中，用75％～85％醇溶液，在65～75℃下反应6～8小时脱脂。
优选的，所述的醇溶液为甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇或叔丁醇中的任一种。
步骤(3)～(5)中醇沉的条件为：加入醇溶液搅拌，并0～10℃下搅拌沉淀12～72小时。优选的，加入4～15倍醇溶液进行醇沉。
更优选的，步骤(3)的混合液中，醇浓度为40％，步骤(4)的醇溶液浓度为60％，步骤(5)醇溶液浓度为80％。
步骤(2)中，热水超声萃取的方法为：经过脱脂处理的金滑菇子实体粉末在70～90℃下用热水超声萃取提取1～5次，合并提取液；超声萃取的条件为：频率40～80KHz，每次10～60分钟。
上述金滑菇萃取物具有良好的吸湿、保水能力，并且具有清除自由基和抗氧化能力，对胶原蛋白酶和弹性蛋白酶有良好的抑制作用，同时不影响细胞的生长，有良好的保湿抗皱效果，可用于制备护肤品或化妆品。
护肤品或化妆品包括单不限于面膜、化妆水、精华液、修复霜、乳液等。
所述金滑菇萃取物作为护肤品或化妆品中保湿和/或抗皱的活性成分。
所述金滑菇萃取物作为清除自由基、抗氧化、吸湿、保水、抑制弹性蛋白酶或者抑制胶原蛋白酶的活性成分。
一种保湿抗皱的护肤品或化妆品，含有上述的金滑菇萃取物，其中金滑菇多醣的分子量为4-20KD。
本发明的有益效果在于：通过改进提取方法，将金滑菇子实体去脂后，用热水进行超声提取，可得到含较多的多醣萃取液，再以不同酒精浓度进行分级沉降进行纯化将金滑菇多醣进行分离可得不同分子量、β-1,3-D-葡聚醣含量及官能基之键结，得到的萃取物多醣分子量在4-20kDa，其中β-1,3-D-葡聚醣含量超过12％。制备过程简单方便且多醣损失率少，可快速纯化分离具有专一功效性之小分子量多醣萃取物。
这种金滑菇萃取物可以有效地提高皮肤弹性、推迟皮肤衰老，使皮肤不易干燥产生皱纹，改善皮肤，提高皮肤的光亮度。
本发明解决了金滑菇所萃取出之多醣分子质量较大不易被人体吸收的问题，并获得更多β-1,3-D-葡聚醣含量，使之可以应用于化妆品，解决现有的金滑菇粗多醣无法使产品达到较佳保湿及抗皱功能之问题。
附图说明
图1为实施例2金滑菇多醣、金滑菇粗多醣吸湿能力测定结果
图2为实施例3金滑菇多醣、金滑菇粗多醣保水能力测定结果
图3为实施例4金滑菇多醣、金滑菇粗多醣清除过氧化氢能力的测定结果。
图4为实施例5金滑菇多醣、金滑菇粗多醣抑制L929细胞的测定结果。
图5为实施例6金滑菇多醣、金滑菇粗多醣抑制胶原蛋白酶能力的测定结果。
图6为实施例7金滑菇多醣、金滑菇粗多醣抑制弹性蛋白酶能力的测定结果。
具体实施方式
实施例1
(1)脱脂：取金滑菇子实体冷冻干燥至含水量低于5％，粉碎后取100g与1000mL80％(体积浓度)乙醇溶液混合，65～75℃回流6小时脱脂，去除脂类、低聚糖色素和小分子物质，过滤取固体；
(2)提取：脱脂后的金滑菇子实体粉末干燥后，加入2000mL 80℃热水，60KHz超声萃取150分钟，取上清液，残渣继续用热水超声萃取；共提取三次，合并上清液。
(3)第一次醇沉：上清液减压浓缩至1L，缓慢加入醇类溶液至40％(体积浓度)，搅拌使之沉淀产生絮状物，在4℃下搅拌48小时使多醣完全析出，4000rpm条件下离心30min，取固体冷冻干燥，得到40％浓度乙醇下的金滑菇多醣；
(4)第二次醇沉：上清液继续减压浓缩至1L，缓慢加入醇类溶液至60％(体积浓度)，搅拌使之沉淀产生絮状物，在4℃下搅拌48小时使多醣完全析出，4000rpm条件下离心30min，取固体冷冻干燥，得到60％浓度乙醇下的金滑菇多醣；
(5)第三次醇沉：上清液继续减压浓缩至1L，缓慢加入醇类溶液至80％(体积浓度)，搅拌使之沉淀产生絮状物，在4℃下搅拌48小时使多醣完全析出，4000rpm条件下离心30min，取固体冷冻干燥，得到80％浓度乙醇下的金滑菇多醣。
合并步骤(3)～(5)的沉淀，收率约4～6克。经过分析，其主要成分为多糖，分子量4～20kDa，β-1,3-D-葡聚醣含量13％～14％。
实施例2
另外取金滑菇子实体，用传统的热水萃取法，70～80℃下按1g：10mL的比例用热水提取12小时，浓缩后再用4倍体积95％乙醇进行醇沉，获得金滑菇粗多醣，其分子量在200～1000kDa，作为对照组。
取上述金滑菇粗多醣和实施例1的金滑菇多醣0.1～0.5克粉末，以30％甘油水溶液为阳性对照，检测其吸湿能力。
实验方法：分别取0.1～0.5克的样品粉末放置在锡箔纸上，置于康威氏皿内室之小圆碟中并秤重，在外室加上加入3ml标准饱和溶液，于康威氏皿盖子边缘涂抹凡士林使之成为密闭空间，放入30℃烘箱中4、24、48、72、96小时，取出小圆碟秤重，依下列公式计算在不同湿度下之吸湿率。
吸湿能力(％)＝[(Wt–Wo)/Ws]×100％
Wo：样品皿和样品总重(g)。
Wt：24小时后取出之样品皿和样品总重(g)。
Ws：样品原始重量(g)。
结果如图1。在相对湿度环境下放置24小时后，40～80％金滑菇多醣具有介于30％～40％之吸湿能力，显著高于阳性对照组和金滑菇粗多醣对照组；金滑菇粗多醣的吸湿能力低于阳性对照组。
实施例3
实施例1的金滑菇多醣和对照组金滑菇粗多醣分别配制成1wt％溶液，以1％甘油溶液为阳性对照，在相对湿度环境下，测试其不同时间的保水能力。
试验方法：样品溶液放入直径3cm的秤量瓶中，将样品溶液置于30℃含有硅胶(silica gel)干燥箱，在不同时间点测量样品(0、4、24、48、72、96小时)。
保水能力(％)＝Ht/H0×100,
H0：样品放置干燥箱前之水重
Ht：样品放置干燥箱后之水重
结果如图2所示，在相对湿度环境下放置24小时后，金滑菇多醣(4-20kDa)具有介于70％～80％之保水能力，显著高于阳性对照组和金滑菇粗多醣对照组。
实施例4
实施例1的金滑菇多醣和对照组金滑菇粗多醣分别配制成不同浓度的溶液，以BHA为阳性对照，测试其清除过氧化氢的能力。
实验方法:取1mL不同浓度(0～2mg/mL)的样品溶液于试管中，分别加入4mM过氧化氢溶液，混合物在30℃条件下反应10min，以吸收波长230nm做检测，皆以3次重复的平均值来计算。
过氧化氢清除率(％)＝1-[(As–A1)/A0]×100％
A0:为空白对照组的吸亮度
AS:为样品的吸亮度
A1:为样品干扰实验组(以水代替过氧化氢)的吸亮度
结果如图3所示相同浓度下，金滑菇多醣(4-20kDa)清除过氧化氢的能力显著高于阳性对照组和金滑菇粗多醣对照组，说明其具有良好的清除自由基、抗氧化效果；金滑菇粗多醣清除过氧化氢能力最低。
随着金滑菇多醣样品(4-20kDa)浓度增加，过氧化清除除能力更佳。
实施例5
实施例1的金滑菇多醣和对照组金滑菇粗多醣分别配制成不同浓度的溶液，测试其对细胞的毒性(对L929细胞的抑制)。
实验方法:分别添加不同浓度(0～500μg/mL)的样品溶液的细胞培养液培养L929细胞48小时后，观察细胞存活率之结果，以未添加任何金滑菇多醣萃取液(0μg/mL)之组别作为对照组。如图4所示，不同浓度之金滑菇多醣萃取液皆不会影响细胞生长，此本发明4-20kDa的金滑菇多醣并不会对细胞造成毒害，显示其对于化妆品保养品之应用开发应无安全上之疑虑。
实施例6
实施例1的金滑菇多醣和对照组金滑菇粗多醣分别配制成不同浓度的溶液，用于测定其抑制胶原蛋白酶活性的能力。
实验方法:分别添加不同浓度(0～1.0mg/mL)的样品溶液之40～80％金滑菇多醣与金滑菇粗多醣，在96孔盘中与胶原蛋白受质溶液混合。将稀释的胶原蛋白酶加入各孔中于37℃下反应30分钟。测量荧光最大值为495nm，发射最大值为515nm，每个测定采三重复进行。
胶原蛋白酶抑制率(％)＝(1-Cabs-Dabs/Aabs-Babs)×100
A:有胶原蛋白酶，无样品
B:无胶原蛋白酶，有样品
C:有胶原蛋白酶，无样品
D:无胶原蛋白酶，有样品
结果如图5所示，金滑菇多醣(4-20kDa)对胶原蛋白酶的抑制能力显著高于金滑菇粗多醣；随着金滑菇多醣样品浓度增加，胶原蛋白酶抑制活性能力更佳。
实施例7
实施例1的金滑菇多醣和对照组金滑菇粗多醣分别配制成不同浓度的溶液，用于测定其抑制弹性蛋白酶活性的能力。
实验方法:分别添加不同浓度(0～1.0mg/mL)的样品溶液之40～80％金滑菇多醣与金滑菇粗多醣于96孔盘中，在依序加入弹力受质溶液及弹力蛋白酶。混合均匀后，静至于室温20分钟，通过405nm处的吸亮度测量，每个测定采三重复进行。
弹性蛋白酶抑制率(％)＝(1-Cabs-Dabs/Aabs-Babs)×100
A:有弹性蛋白酶，无样品
B:无弹性蛋白酶，有样品
C:有弹性蛋白酶，无样品
D:无弹性蛋白酶，有样品
结果如图6所示，金滑菇多醣(4-20kDa)对弹性蛋白酶的抑制能力显著高于金滑菇粗多醣；并且随着金滑菇多醣样品浓度增加，弹性蛋白酶抑制活性能力更佳。

Claims (10)

1.一种金滑菇萃取物，其特征在于，主要成分为金滑菇多醣，所述的金滑菇多醣分子量为4～20kDa。
2.权利要求1所述金滑菇萃取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)脱脂：金滑菇子实体粉末经过醇溶液脱脂处理，脱去脂类和有色物质和小分子物质；
(2)提取：经过脱脂处理的金滑菇子实体粉末用热水超声萃取，离心后取上清液；
(3)第一次醇沉：步骤(2)获取的上清液减压浓缩加入醇至混合液中醇的体积浓度为35％～45％，醇沉并离心分离；
(4)第二次醇沉：取步骤(3)上清液，减压浓缩后加入醇，至混合液中醇的体积浓度为55％～65％，醇沉并离心分离；
(5)第三次醇沉：取步骤(4)上清液，减压浓缩后加入醇，至混合液中醇的体积浓度为75％～85％，醇沉并离心分离，取沉淀与步骤(3)和(4)离心分离所获得的沉淀合并。
3.根据权利要求2所述金滑菇萃取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，用75％～85％醇溶液，在65～75℃下反应6～8小时脱脂。
4.根据权利要求2所述金滑菇萃取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)的醇溶液浓度为40％，步骤(4)的醇溶液浓度为60％，步骤(5)醇溶液浓度为80％。
5.根据权利要求2所述金滑菇萃取物的制备方法，其特征在于，所述的醇溶液为甲醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇或叔丁醇中的任一种；步骤(3)～(5)中醇沉的条件为：加入醇溶液搅拌，并0～10℃下搅拌沉淀12～72小时。
6.根据权利要求2所述金滑菇萃取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，热水超声萃取的方法为：经过脱脂处理的金滑菇子实体粉末在70～90℃下用热水超声萃取提取1～5次，合并提取液；超声萃取的条件为：频率40～80KHz，每次10～60分钟。
7.权利要求1所述的金滑菇萃取物在制备护肤品或化妆品方面的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述金滑菇萃取物作为护肤品或化妆品中保湿和/或抗皱的活性成分。
9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述金滑菇萃取物作为清除自由基、抗氧化、吸湿、保水、抑制弹性蛋白酶或者抑制胶原蛋白酶的活性成分。
10.一种保湿抗皱的护肤品或化妆品，其特征在于，含有权利要求1所述的金滑菇萃取物。
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