CN114159373B - 石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在护肤化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在护肤化妆品中的应用。该石斛来源外泌体样囊泡具有抗衰老、美白功效，且其效果远优于石斛提取物。本发明制备的石斛来源外泌体样囊泡可广泛应用于化妆品领域。其作为美白护肤品可降低β‑半乳糖苷酶活性、抑制弹性蛋白降解、改善皮肤皱纹、增强皮肤弹性。此外该外泌体还可以用于抑制酪氨酸的合成及活性，抑制黑色素在黑素细胞中的传达与转移，达到美白效果。
Description
技术领域
本发明属于精细化工领域，涉及一种石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在护肤化妆品中的应用，石斛来源外泌体样囊泡的制备及其在抗皮肤衰老、美白方面的应用。
背景技术
外泌体1983发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小较为均一，直径为40-100纳米，密度1.10-1.18g/ml的囊泡样小体。1987年正式被定名为exosome，最早被认为是细胞的废弃物。2013年，Song等人通过差速离心和蔗糖梯度离心相结合的方法首次从葡萄中分离、纯化出了大量50nm～300nm的囊泡状结构，并将这种由植物细胞分泌至胞外的类似于动物外泌体的囊泡称为外泌体样纳米颗粒(exosome-likenanoparticles，ELNs)，其与外泌体结构类似，ELNs里面包含了特异性蛋白、DNA和RNA等成分。
皮肤衰老是人体自发性衰老与外界影响的共同结果。皮肤衰老的特征是皱纹增多，皮肤弹性降低，具体原因是胶原蛋白减少与弹性蛋白减少。而胶原蛋白和弹性蛋白受胶原蛋白酶和弹性蛋白酶调控，胶原蛋白酶和弹性蛋白酶可降解皮肤内胶原蛋白和弹性蛋白，从而导致胶原蛋白与弹性蛋白减少，造成皮肤弹力降低、产生皱纹。
色素沉着往往伴随着皮肤衰老同时发生，酪氨酸酶活性对黑色素的生成起到主要作用。
科学家目前已经从生姜、葡萄柚、梨、柠檬等数十种果蔬中分离得到外泌体样囊泡，但对外泌体样囊泡用途知之甚少。
植物外泌体样囊泡与植物提取物存在明显差异，植物外泌体样囊泡是直径为20-500nm的具有一定刚性的微囊结构；此外，提取物只要包含某一单一类别成分，如石斛提取物主要成分为石斛多糖；外泌体样囊泡主要包含脂质、蛋白质和核酸等化学成分，其中脂质主要为磷脂酸(Phosphatidic acid，PA)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine，PE)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol，PI)、二半乳糖基二酰基甘油(Digalactosyldiacylglycerol，DGDG)和单半乳糖基二酰基甘油(Monogalactosyl diacylglycerol，MGDG)等。其中，PA是重要的脂质信号分子，能够通过不同的作用模式调节细胞进程，DGDG和MGDG是重要的糖脂，可以在冻融冻干过程中稳定囊泡结构。蛋白类成分主要为有调节糖脂代谢的蛋白质(包括肌动蛋白和各类酶在内的胞质蛋白)、GTPases(Guanosinetriphosphatases，Rab蛋白质家族)、与膜和囊泡相关的蛋白质(Endosomal sortingcomplex required for transport，ESCRT)相关蛋白CHMP1(CHromatin ModifyingProtein)、VAMP711(membrane protein 711)等。植物外泌体样囊泡中也含有大量的RNA，主要为miRNAs。囊泡中的miRNAs可以进入细胞或细菌内，靶向并调控动物细胞或细菌的基因表达，如大豆ELNs中的MIR-5781可以直接靶向在炎症反应中有重要作用的IL-17A。
对于石斛，尽管已经有报道石斛提取物具有抗衰老、美白功效，但并未有报道石斛来源外泌体样囊泡具有抗衰、美白功效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种石斛来源外泌体样囊泡的制备方法，并且其具有抗衰、美白效果，适用于化妆品领域，另外，其活性成分是石斛来源外泌体样囊泡，并不是石斛提取物。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：石斛来源外泌体样囊泡及其制备和在护肤化妆品中的应用。
本发明一方面提供了一种石斛来源外泌体样囊泡，通过以下方式制备得到：
1)将新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800-1600g条件下离心15-30min，收集第一上清液；
2)将步骤1中第一上清液在4℃，2500-4000g条件下离心15-30min，收集第二上清液。
3)将步骤2中第二上清液在4℃，8000-12000g条件下离心45-75min，收集第三上清液。
4)将步骤3中第三上清液在4℃，14000-16000g条件下离心60-120min，弃上清液，加入磷酸盐缓冲液即得所述石斛来源外泌体样囊泡溶液。
作为优选，所述新鲜石斛为新鲜石斛茎部。
作为优选，步骤4中所述磷酸盐缓冲液的加入量为残留物质量的9倍。
作为优选，所述石斛为以下石斛属植物：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛、小粉花石斛、鼓槌石斛、马鞭石斛、黄草石斛、环草石斛、蝴蝶石斛。
作为优选，所述石斛为以下石斛属植物：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛。
本发明还提供了一种石斛来源外泌体囊泡的制备方法，包括以下步骤：
1)将新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800-1600g条件下离心15-30min，收集第一上清液；
2)将步骤1中第一上清液在4℃，2500-4000g条件下离心15-30min，收集第二上清液。
3)将步骤2中第二上清液在4℃，8000-12000g条件下离心45-75min，收集第三上清液。
4)将步骤3中第三上清液在4℃，14000-16000g条件下离心60-120min，弃上清液，加入磷酸盐缓冲液即得所述石斛来源外泌体样囊泡溶液。
作为优选，所述新鲜石斛为新鲜石斛茎部；所述石斛为以下石斛属植物：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛。
作为优选，步骤4中所述磷酸盐缓冲液的加入量为残留物质量的9倍。
本发明还提供了一种石斛来源外泌体样囊泡在抗皮肤衰老、美白方面的应用。
作为优选，所述的应用是指应用于日化化妆品领域。
本发明的有益效果在于：
一方面，本发明公开了一种石斛来源外泌体样囊泡的制备方法，另一方面，本发明公开了按照该方法制备的石斛来源外泌体样囊泡在化妆品领域的有益效果。其作为美白护肤品，具有以下有益效果：1)抑制ROS的生成；2)降低β-半乳糖苷酶活性；3)促进胶原蛋白合成；4)抑制胶原蛋白降解；5)抑制弹性蛋白降解；6)促进透明质酸产生；7)改善皮肤皱纹；8)增强皮肤弹性。此外该化合物还具有一定的抑制作用，可以用于抑制：1)抑制酪氨酸的合成；2)抑制酪氨酸酶活性；3)抑制黑色素在黑素细胞中的传达；4)抑制黑色素在黑素细胞与角质细胞之间的转移；5)减少黑色素生成；6)促进皮肤表面角质细胞剥脱。
附图说明
图1为实验例1中石斛来源外泌体样囊泡对于β-半乳糖苷酶活性的影响；
图2为实验例2中石斛来源外泌体样囊泡对于I型胶原蛋白分泌的影响；
图3为实验例3中石斛来源外泌体样囊泡对于酪氨酸酶活性的影响；
图4为实验例4中抗衰紧致美白精华对皮肤弹性的影响；
图5为实验例4中抗衰紧致美白精华对皮肤皱纹的影响；
图6为实验例4中抗衰紧致美白精华黑色素的影响。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
对于本发明的目的，下面定义了以下术语。本文所用术语“约”指与参比品的数量、水平、数值、维度、大小或用量相比，差异可高达30％、20％或10％的数量、水平、数值、维度、大小或用量。
在全篇说明书和权利要求书中，除非另有要求，以下词语“包含”和其变体“含有”和“包括”应理解为意指包括所述的整体或步骤，或一组整体或步骤，但不排除任何其它整体或步骤，或其它一组整体或步骤。
根据本发明，术语“化妆品”是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。
本发明还提供了所述石斛来源外泌体样囊泡在抗衰老或美白化妆品中的应用，所述化妆品包括石斛来源外泌体样囊泡以及化妆品领域可接受的辅料。所述“化妆品领域可接受的辅料”可以选自：溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促滲剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。
在根据本发明的优选实施方式中，所述化妆品可以为香皂、洗面奶、沐浴露、柔肤水、护肤嗜喱、护肤乳液、护肤霜、精华液、眼霜、面膜、气雾或喷雾等形式。化妆品组合物的这些形式可通过本领域技术人员熟知的方法制备。
实施例1：差速离心法制备的不同石斛的石斛来源外泌体样囊泡含量测定
为方便理解，本发明对比了不同石斛来源外泌体样囊泡含量，制备原料为：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛、小粉花石斛、鼓槌石斛、马鞭石斛、黄草石斛、环草石斛，蝴蝶石斛，部位为新鲜茎。
1)依次将同等质量的上述9种新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液(PBS)，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800g条件下离心30min，收集上清液。
2)将步骤1中上清液在4℃，2500g条件下离心30min，收集上清液。
3)将步骤2中上清液在4℃，8000g条件下离心75min，收集上清液。
4)将步骤3中上清液在4℃，14000g条件下离心120min，弃上清，加入9倍质量的磷酸盐缓冲液(PBS)即得10％质量浓度的石斛来源外泌体样囊泡溶液。
5)浓度计算：分别取各组泌体样囊泡溶液100μl稀释于2ml PBS内，使用纳米颗粒跟踪分析仪(Nanosight)测算各组泌体样囊泡浓度，每个样品重复3次。
6)结果如表1所示，铁皮石斛来源的外泌体样囊泡含量最高(5.36±0.36)*108/ml，铁皮石斛，金钗石斛，细茎石斛来源的外泌体样囊泡超过5.0*108/ml，明显高于另外6种石斛来源的外泌体样囊泡含量(低于3.0*108/ml)。
实施例2：制备石斛来源外泌体样囊泡溶液
本发明提供一种活性成分为石斛来源外泌体样囊泡的制备方法，制备原料为：铁皮石斛(DENDROBIUM OFFICINALE)新鲜茎。
操作步骤：
1)新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液(PBS)，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，1200g条件下离心20min，收集上清液。
2)将步骤1中上清液在4℃，3500g条件下离心20min，收集上清液。
3)将步骤2中上清液在4℃，8000-12000g条件下离心60min，收集上清液。
4)将步骤3中上清液在4℃，15000g条件下离心90min，弃上清，加入9倍质量的磷酸盐缓冲液(PBS)即得10％质量浓度的石斛来源外泌体样囊泡溶液。
实施例3：制备石斛来源外泌体样囊泡溶液
本发明提供一种活性成分为石斛来源外泌体样囊泡的制备方法，制备原料为：金钗石斛(DENDROBIUM NOBILE)新鲜茎。
操作步骤：
7)新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液(PBS)，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800g条件下离心30min，收集上清液。
8)将步骤1中上清液在4℃，2500g条件下离心30min，收集上清液。
9)将步骤2中上清液在4℃，8000g条件下离心75min，收集上清液。
10)将步骤3中上清液在4℃，14000g条件下离心120min，弃上清，加入9倍质量的磷酸盐缓冲液(PBS)即得10％质量浓度的石斛来源外泌体样囊泡溶液。
实施例4：制备石斛来源外泌体样囊泡溶液
本发明提供一种活性成分为石斛来源外泌体样囊泡的制备方法，制备原料为：黄草石斛(DENDROBIUM CHRYSANTHUM)新鲜茎。
操作步骤：
1)新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液(PBS)，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，1600g条件下离心15min，收集上清液。
2)将步骤1中上清液在4℃，4000g条件下离心15min，收集上清液。
3)将步骤2中上清液在4℃，12000g条件下离心45min，收集上清液。
4)将步骤3中上清液在4℃，16000g条件下离心60min，弃上清，加入9倍质量的磷酸盐缓冲液(PBS)即得10％质量浓度的石斛来源外泌体样囊泡溶液。
实施例5：制备石斛提取物
作为对比，本发明同时采用了常规工艺制备了石斛提取物，制备原料为：铁皮石斛(DENDROBIUM OFFICINALE)干燥茎。
操作步骤：称取一定量铁皮石斛干燥茎粉末于烧瓶中，按照质量体积料液比1:30加入蒸馏水，90℃加热回流2h，取出静置至室温后进行离心，分离上清液，将上清液在低于65℃条件下进行真空减压浓缩，即可得到石斛提取物。
表1
| 石斛种类 | 浓度 |
| 铁皮石斛 | (5.36±0.36)*108/ml |
| 金钗石斛 | (5.29±0.42)*108/ml |
| 细茎石斛 | (5.23±0.25)*108/ml |
| 小粉花石斛 | (3.53±0.22)*108/ml |
| 鼓槌石斛 | (3.26±0.19)*108/ml |
| 马鞭石斛 | (3.16±0.27)*108/ml |
| 黄草石斛 | (3.08±0.39)*108/ml |
| 环草石斛 | (2.76±0.30)*108/ml |
| 蝴蝶石斛 | (2.46±0.33)*108/ml |
实验例1:成纤维细胞的β-半乳糖苷酶抑制试验
检测石斛来源外泌体样囊泡溶液(样品为实施例2制备的石斛来源外泌体样囊泡溶液)对人成纤维细胞的β-半乳糖苷酶活性影响，以评价其抗衰老功效。
细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒是一种基于衰老时衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase；SA-β-Gal)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。荧光越弱，β半乳糖苷酶的活性越弱。
具体的，在无菌操作台中将培养皿中生长至80～90％的人成纤维细胞HSF收集计数。根据计数结果，按照1.0～5.0×104cells/mL接种1ml至12孔细胞培养板中，每个浓度设三个平行，培养24h。空白孔加入100μL PBS，模型组孔中加入10μL H2O2和90μL PBS，样品孔加入10μL H2O2和90μL浓度为0.1％、0.5％、1％的样品(PBS稀释)，阳性对照加入实施例5制备的等体积的浓度为0.5％的石斛提取物(PBS稀释)，继续培养1H。检测方法按照β-半乳糖苷酶活性试剂盒的说明书操作。试验结果如图1所示。
由图1可知，本发明的石斛来源外泌体样囊泡溶液能有效地降低β-半乳糖苷酶活性，因而具有抗衰老的效果。且在0.5％同等浓度，石斛来源外泌体样囊泡对β-半乳糖苷酶活性抑制效果明显优于石斛提取物。
实验例2：人成纤维细胞的I型胶原蛋白促进试验
检测石斛来源外泌体样囊泡溶液(样品为实施例2制备的石斛来源外泌体样囊泡溶液)对人成纤维细胞的I型胶原蛋白的分泌影响，以评价其抗衰老功效。
I型胶原蛋白是主要存在于皮肤中，起到增加皮肤弹性和降低皮肤衰老的作用，它的多少和皮肤弹性成正相关。
具体的，在无菌操作台中将培养皿中生长至80～90％的人成纤维细胞HSF收集计数。根据计数结果，按照1.0～5.0×104cells/mL接种1ml至12孔细胞培养板中，空白孔加入100μL PBS，样品孔加入不同浓度的样品，每个浓度设三个平行，培养24h。将生长良好的细胞上清液收集在无菌管中，待测。检测方法按照I型胶原蛋白ELISA试剂盒的说明书操作。。
将EGF(人表皮生长因子)溶液、石斛来源外泌体样囊泡溶液按照下述方法配制，均用0.22μm滤膜过滤除菌，备用。
空白对照组：110μL PBS溶液；
EGF组：1μg/mL EGF添加10μL，PBS溶液添加100μL；
石斛提取物组：加入100μL浓度为0.5％的石斛提取物(PBS稀释，实施例5制备)。
样品组：石斛来源外泌体样囊泡溶液分别配制0.1％(v/v)、0.05％(v/v)、0.01％(v/v)浓度分别添加100μL(PBS稀释)，试验结果如图2所示。
由图2可知，实验浓度范围内具有促进I型胶原蛋白分泌的效果，0.01％，0.05％,0.1％的石斛来源外泌体样囊泡溶液的加入可以使I型胶原蛋白分泌增加11.2％，18.3％，35.2％。
本试验结果表明本发明的石斛来源外泌体样囊泡溶液能有效地促进I型胶原蛋白的生成，增加皮肤弹性，因而具有抗衰老的效果。此外，相对于阳性对照0.5％石斛提取物，石斛来源外泌体样囊泡对I型胶原蛋白促进作用明显高于石斛提取物。
实验例3:酪氨酸酶抑制试验
检测石斛来源外泌体样囊泡溶液对酪氨酸酶活性抑制(样品为实施例2制备的石斛来源外泌体样囊泡溶液)，以评价其美白功效。
酪氨酸酶是肌肤黑色素形成的首要限速酶，它的活性与皮肤黑色素合成量相关。
具体的，吸取0.03m1的L-酪氨酸溶液和0.2mL磷酸盐缓冲液于96孔酶标板中，再分别加入取样品0.02m1(质量浓度为0.01％，0.05％，0.1％，0.2％，0.4％，PBS稀释),阴性对照组以0.02m1的纯水代替样品，阳性对照加入等体积浓度为0.5％的石斛提取物(PBS稀释，实施例5制备)，摇匀。同时设置颜色清除组以扣除样品本身颜色的影响，冰水浴10min。样品孔和对照孔分别加入0.01m1的洋蘑菇酪氨酸酶溶液，空白孔加入0.01mL的纯水，37℃水浴20min。最后再冰水浴10min。以不加酪氨酸酶的孔为空白调零，用酶标仪在470nm处测定吸光度值。
酪氨酸酶抑制率＝[(A-B)/A]×100％，A为阴性对照的吸光度值，B为实验组或阳性对照的吸光度值。
抑制试验结果如图3所示。
由图3可知，本发明石斛来源外泌体样囊泡溶液能有效地抑制酪氨酸酶的活性，抑制黑色素形成，因而具有美白皮肤的效果。且同等浓度下，石斛来源外泌体样囊泡对酪氨酸酶活性抑制效果显著高于石斛提取物。
实验例4：
1)抗衰紧致美白精华组成
本发明还制备了包含上述实施例2中石斛来源外泌体样囊泡溶液的抗衰紧致美白精华，具体成分如表2所示。
表2抗衰紧致美白精华组成
制备方法：首先，在70-75℃纯水中加入保湿剂搅拌均匀，加入增稠剂搅拌均匀，降温至40-45℃，加入增溶剂，降温至30-35℃。投入制备例1得到的石斛来源外泌体样囊泡溶液。
2)试验方法
招募60名面部有明显细纹、皮肤松弛、肤色偏黑的40-55岁女性志愿者，双盲试验(两组，各30名)，一组使用不含石斛来源外泌体样囊泡溶液基质精华，一组使用含有石斛来源外泌体样囊泡溶液的抗衰紧致美白精华。每天早晚各一次，记录志愿者使用前(T0)，使用第14天(T14)，使用第30天(T30)皮肤弹性、皱纹数据。
3)改善皮肤弹性功效评价
Cutometer测试法：是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定测试探头内，皮肤被吸进测试探头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头内包括光的发射器和接收器，光的比率(发射光和接收光之比)同被吸入皮肤的深度成正比，然后通过MPA软件分析来确定皮肤的弹性性能。
用Cutometer测试使用产品前后皮肤弹性，用R2值表征(R2:无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比，比值越接近1，说明皮肤弹性越好)。
如图4所示，与空白基质相比，抗衰紧致美白精华可有效提升皮肤弹性。
4)改善皮肤皱纹功效评价
Antera 3D皱纹模式测量固定眼部区域皱纹面积(mm2)。
结果如图5所示，其结果说明皱纹得到改善。
5)减少面部黑色素生成评价
基于光谱吸收的原理(RGB)，通过Mexameter(CK,Germermy)测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素的含量。仪器探头的发射器发出波长分别为568nm、660nm、和880nm三种波长的光照射在皮肤表面，接受器测得皮肤反射的光。由于发射光的量是一定的，因此就可以测出被皮肤吸收的光的量，测出皮肤黑色素的含量。仪器的测量范围是0～999，测量数值越高，说明皮肤中黑色素含量越高。
如图6所示，与空白基质相比，抗衰紧致美白精华可有效减少皮肤表面黑色素。
本申请说明书中未作详细描述的内容属于本领域技术人员的公知常识。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内，本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。
还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的商品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种商品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系统中还存在另外的相同要素。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围。
Claims (4)
1.一种石斛来源外泌体样囊泡，其特征在于，通过以下方式制备得到：
1)将新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800-1600g条件下离心15-30min，收集第一上清液；
2)将步骤1中第一上清液在4℃，2500-4000g条件下离心15-30min，收集第二上清液；
3)将步骤2中第二上清液在4℃，8000-12000g条件下离心45-75min，收集第三上清液；
4)将步骤3中第三上清液在4℃，14000-16000g条件下离心60-120min，弃上清液，加入磷酸盐缓冲液即得所述石斛来源外泌体样囊泡溶液；所述新鲜石斛为新鲜石斛茎部；
步骤4)中所述磷酸盐缓冲液的加入量为残留物质量的9倍；
所述石斛为以下石斛属植物：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛。
2.一种石斛来源外泌体囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将新鲜石斛清水洗净，切段，置于粉碎器具中，加入同等质量磷酸盐缓冲液，粉碎榨汁，过滤，收集滤汁；将滤汁在4℃，800-1600g条件下离心15-30min，收集第一上清液；
2)将步骤1中第一上清液在4℃，2500-4000g条件下离心15-30min，收集第二上清液；
3)将步骤2中第二上清液在4℃，8000-12000g条件下离心45-75min，收集第三上清液；
4)将步骤3中第三上清液在4℃，14000-16000g条件下离心60-120min，弃上清液，加入磷酸盐缓冲液即得所述石斛来源外泌体样囊泡溶液；步骤4)中所述磷酸盐缓冲液的加入量为残留物质量的9倍；
所述新鲜石斛为新鲜石斛茎部；所述石斛为以下石斛属植物：铁皮石斛、金钗石斛、细茎石斛。
3.一种根据权利要求1所述的石斛来源外泌体样囊泡在制备抗皮肤衰老、美白护肤品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是指应用于日化化妆品领域。
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