CN109311871B

CN109311871B - 作为bcl-2抑制剂的n-(苯基磺酰基)苯甲酰胺及相关化合物

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Publication number: CN109311871B
Application number: CN201780035965.6A
Authority: CN
Inventors: S·王; J·陈
Original assignee: University of Michigan
Current assignee: University of Michigan
Priority date: 2016-08-05
Filing date: 2017-08-04
Publication date: 2020-02-28
Anticipated expiration: 2037-08-04
Also published as: LT3494115T; IL264059A; EP3494115A1; US20190315739A1; KR20210107170A; DK3494115T3; JP2019527705A; CN109311871A; AU2017305508A1; RU2020114660A3; IL264059B; NZ750100A; US20210002277A1; CN110483501A; JP6651180B2; AU2021202113A1; PH12019500231A1; WO2018027097A1; CA3031419A1; RS61821B1

Abstract

本公开提供了具有式I‑A的化合物：及其药学上可接受的盐和溶剂化物，其中A、X¹、X²、X³、R^1a、R^1b、E和

如说明书中所述。本公开还提供了式I‑A的化合物，其用于治疗对Bc1‑2蛋白抑制有反应的疾病、障碍或病症，例如癌症。

Description

作为BCL-2抑制剂的N-(苯基磺酰基)苯甲酰胺及相关化合物

发明背景

发明领域

本公开提供了Bcl-2蛋白抑制剂和治疗疾病、障碍或病症的治疗方法，其中Bcl-2蛋白的抑制提供了益处。

背景

细胞凋亡是程序性细胞死亡的过程，是组织稳态的必需生物学过程。在哺乳动物中，它已被证明可以调节早期胚胎发育。在生命的晚期，细胞死亡是一种默认机制，通过该机制除去潜在危险细胞，例如携带癌症缺陷的细胞。已知几种凋亡途径。最重要的凋亡途径之一涉及Bcl-2蛋白家族，其是细胞凋亡的线粒体(也称为“内在”)途径的关键调节剂。参见Danial和 Korsmeyer，Cell 776：205-219(2004)。结构同源结构域BH1、BH2、BH3 和BH4是Bcl-2家族蛋白的特征。Bcl-2蛋白质家族可以进一步分为三个亚族，这取决于每种蛋白质含有多少同源结构域及其生物活性，即它是否具有促凋亡或抗细胞凋亡功能。

Bcl-2蛋白的第一亚组含有具有全部四个同源结构域的蛋白质，即 BH1、BH2、BH3和BH4。它们的一般作用是抗细胞凋亡，即保护细胞免于开始细胞死亡过程。诸如Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xL、Mcl-1和Bfl-1/Al的蛋白质是该第一亚组的成员。属于Bcl-2蛋白的第二亚组的蛋白质含有三个同源结构域BH1、BH2和BH3，并具有促凋亡作用。第二个亚组的两个主要代表性蛋白质是Bax和Bak。Bcl-2蛋白的第三个亚组由仅含有BH3结构域的蛋白质组成，该亚组的成员通常被称为“仅BH3蛋白质”。它们对细胞的生物学作用是促细胞凋亡的。Bim、Bid、Bad、Bik、Noxa、Hrk、 Bmf和Puma是第三个蛋白质亚家族的例子。Bcl-2家族蛋白调节细胞死亡的确切机制尚不完全清楚。在Bcl-2家族蛋白调节细胞死亡的一种推定中，仅BH3蛋白进一步分类为“活化剂”，例如Bim和Bid，或“敏化剂”，例如 Bad、Bik、Noxa、Hrk、Bmf和Puma，蛋白质取决于它们的调节功能。

组织稳态的关键之一是实现细胞中Bcl-2蛋白的三个亚组之间相互作用的平衡。研究已经阐明了Bcl-2家族蛋白的促凋亡和抗凋亡亚组相互作用以允许细胞经历程序性细胞死亡的机制。在细胞中接收细胞内或细胞外信号后，发生仅BH3蛋白的翻译后或转录激活。仅BH3蛋白是凋亡级联的主要诱导物，其包括作为一步，在细胞中线粒体膜上的促凋亡蛋白Bax 和Bak的活化。激活已经锚定在线粒体膜上或迁移到该膜上的Bax和/或 Bak后，Bax和/或Bak寡聚化导致线粒体外膜透化(MOMP)，细胞色素C 的释放和下游激活效应子半胱天冬酶，最终导致细胞凋亡。一些研究人员假设某些仅含BH3的蛋白质，例如Puma、Bim、Bid，是“活化剂”，因为这些蛋白质直接参与促凋亡蛋白Bax和Bak以启动MOMP，而其他仅含BH3的蛋白质，例如Bad、Bik和Noxa是“致敏剂”并通过结合抗凋亡蛋白(例如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1)间接诱导Bax和Bak寡聚化，并取代和“释放”“激活剂”仅BH3蛋白质，其随后结合并激活促凋亡蛋白质，例如Bax、Bak，以诱导细胞死亡。其他研究表明，抗凋亡蛋白直接与Bax 和Bak接触，所有仅BH3蛋白通过与抗凋亡蛋白结合调节这种相互作用，如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1，这导致了Bax和Bak的释放。参见Adams 和Cory，Oncogene 26：1324-1337(2007)和Willis等，Science 375： 856-859(2007)。虽然抗凋亡和促凋亡Bcl-2家族蛋白调节细胞凋亡的确切相互作用仍在研究中，但有大量科学证据表明抑制仅BH3蛋白与抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白质结合的化合物促进细胞凋亡。

失调的凋亡途径涉及许多重要疾病的病理学，例如神经变性病症(上调的细胞凋亡)，例如阿尔茨海默氏病；和增殖性疾病(下调的细胞凋亡)，例如癌症、自身免疫疾病和促血栓形成病症。

下调的细胞凋亡(更具体地，Bcl-2蛋白质家族)可能参与癌性恶性肿瘤的发作。研究表明，例如，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL在许多癌细胞类型中过表达。参见Zhang，Nature Reviews Drug Discovery 1：101(2002)； Kirkin等，Biochimica et BiophysicaActa 1644：229-249(2004)；和 Amundson等，Cancer Research 60：6101-6110(2000)。这种失调的作用是改变细胞的存活，否则细胞会在正常条件下发生细胞凋亡。与不受调节的增殖相关的这些缺陷的重复被认为是癌症进化的起点。此外，研究表明，仅BH3的蛋白质在患病动物中表达时可以作为肿瘤抑制因子。

这些发现使得用于靶向癌症的药物发现成为可能的新策略。如果能够模拟仅BH3蛋白效应的小分子能够进入细胞并克服抗凋亡蛋白的过度表达，那么就有可能重置凋亡过程。该策略可以具有以下优点：它可以减轻耐药性问题，这通常是细胞凋亡失调(异常存活)的结果。已经综述了在癌症中靶向Bcl-2和BC1-XL以恢复癌细胞敏感性和克服癌细胞对细胞凋亡的抗性的治疗策略。参见Adams等，Science 281：1322(1998)和Reed，Adv.Pharmacol.41：501(1997)；Reed等，J.Cell Biochem。60:23(1996)。

血小板还含有必需的凋亡机制，例如Bax、Bak、Bcl-xL、Bcl-2、细胞色素c、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3和APAF-1，通过内在的凋亡途径执行程序性细胞死亡。尽管循环血小板生成是正常的生理过程，但是由于血小板的过量或不期望的活化而引起或加剧了许多疾病。这表明能够抑制血小板中抗凋亡蛋白和减少哺乳动物中血小板数量的治疗剂可用于治疗促血栓形成病症和以血小板过量或不希望的活化为特征的疾病。

小分子仅BH3蛋白质模拟物如ABT-737和ABT-263与抗凋亡Bcl-2 蛋白的一部分强烈结合，包括Bcl-2、Bcl-w和Bcl-xL，并且与Mcl-1和 Al弱结合。这些小分子在动物研究中进行了测试，并在某些异种移植模型中作为单一试剂证明了细胞毒活性，并且当组合使用时增强了许多化学治疗剂对其他异种移植模型的作用。参见Tse，C.等，Cancer Res 68：3421-3428(2008)和van Delft，M.F。等，Cancer Cell 70：389-399(2006)。这些体内研究表明抗凋亡Bcl-2家族蛋白抑制剂用于治疗涉及失调的细胞凋亡途径的疾病的潜在用途。ABT-199(Venetoclax)是一种有效的Bcl-2抑制剂，已被美国食品和药物管理局批准用于治疗慢性淋巴细胞白血病。参见Cang等，Journal of Hematology&Oncology 8：129(2015)和Souers 等，Nature Medicine 79：202-208(2013)。

抗凋亡Bcl-2家族蛋白成员的天然表达水平在不同细胞类型中不同。例如，在年轻血小板中，Bcl-xL蛋白高度表达并在调节血小板的细胞死亡 (寿命)中起重要作用。此外，在某些癌细胞类型中，癌细胞的存活归因于由一种或多种抗凋亡Bcl-2蛋白家族成员的过表达引起的凋亡途径的失调。鉴于Bcl-2蛋白家族在调节癌细胞和正常细胞(即非癌细胞)细胞凋亡中的重要作用，以及Bcl-2家族蛋白表达的公认的细胞间类型可变性，因此有利于具有小分子抑制剂，其选择性地靶向并优选结合一种类型或一部分抗凋亡Bcl-2蛋白，例如，与在某种癌症类型中过表达的抗凋亡Bcl-2家族成员结合。这样的选择性化合物还可以在临床环境中赋予某些优点，例如，通过提供选择给药方案的灵活性，在正常细胞中降低的靶向毒性作用等，例如在Bcl-2缺陷小鼠中观察到淋巴细胞减少。见Nakayama，K。等。PNAS 97：3700-3704(1994)。

始终需要小分子，其选择性地抑制一种类型或一组Bcl-2蛋白的活性，用于治疗过度增殖性疾病，例如癌症。

发明概述

在一个方面，本公开提供由以下式IA或I-VIII中的任一个表示的化合物，以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，例如其水合物，在本文中统称为“本公开的化合物”。

在另一个方面，本公开提供了药物组合物，其包含本公开的化合物和一种或多种药学上可接受的载体。

在另一方面，本公开提供了抑制在受试者例如人中Bcl-2蛋白，例如 Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xL、Mcl-1和Bfl-1/Al，或其任何组合的方法，包含向受试者施用有效量的至少一种本公开化合物。

在另一个方面，本公开提供了用于治疗或预防疾病、障碍或病症的方法，例如过度增殖性疾病，例如癌症，例如小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤 (NHL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴(或淋巴细胞)白血病(CLL)或急性淋巴细胞白血病(ALL)，包含在对Bcl-2蛋白(例如Bcl-2和/或Bcl-xL)的抑制有响应的受试者中对于该受试者施用治疗有效量的本公开化合物。

在另一方面，本公开提供了化合物作为一种或多种Bcl-2蛋白例如 Bcl-2和/或Bcl-xL的抑制剂的用途。

在另一方面，本公开提供了本公开的化合物作为Bcl-2的抑制剂的用途。

在另一方面，本公开提供了本公开的化合物作为Bcl-xL的抑制剂的用途。

在另一个方面，本公开提供了用于治疗响应于抑制Bcl-2蛋白(例如 Bcl-2和/或Bcl-xL)的疾病、障碍或病症的药物组合物，其中所述药物组合物包含治疗有效量的本公开化合物任选地与一种或多种药学上可接受的载体的混合物。

另一方面，本公开提供了本公开的化合物，其用于治疗或预防受试者例如人的疾病、障碍或病症，例如过度增殖性疾病，例如癌症。

在另一方面，本公开提供了本公开的化合物，其用于制备药物，所述药物用于治疗受试者例如人的疾病、障碍或病症，例如过度增殖性疾病，例如癌症。

在另一个方面，本公开提供了包含本公开化合物的药盒。

在另一个方面，本公开提供了药盒，其包含本公开的化合物和可用于治疗关注的疾病、障碍或病症的第二种治疗剂，以及包含用于指导治疗疾病、障碍或病症的包装说明书。

在另一个方面，本公开内容提供了组合物，该组合物包含：(a)本公开的化合物；(b)第二种治疗活性剂；和(c)任选的赋形剂和/或药学上可接受的载体。

本公开另外的实施方案和优点部分在如下描述中举出，并且从本说明书中浏览，或者可以通过实施本公开知晓。本公开的实施方案和优点通过在待批权利要求中特别指出的要素和组合认识到和获得。

应当理解，上述概括和如下详细描述仅为示例性的和解释性的，并且不限制请求保护的本发明。

附图详述

图1是显示在施用本公开化合物和ABT-199后从小鼠获得的RS4；11 异种移植肿瘤组织中的PARP、裂解的半胱天冬酶-3和Bcl-2的表达的示例(蛋白质印迹分析)。

图2是显示在施用本公开化合物后从小鼠获得的RS4；11异种移植肿瘤组织中的PARP和半胱天冬酶-3的表达的示例(蛋白质印迹分析)。

图3是显示Cpd No.6在RS4；11白血病异种移植模型的抗肿瘤活性的线图。

图4是显示在RS4；11白血病异种移植模型中施用Cpd No.6后小鼠体重的线图。

发明详述

本公开的化合物抑制Bcl-2蛋白，例如Bcl-2和/或Bcl-xL。鉴于该性质，本公开化合物可用于治疗或预防疾病、障碍或病症，例如对受试者中 Bcl-2蛋白的抑制有响应的过度增殖性疾病，例如癌症。对Bcl-2蛋白的抑制有响应的癌症包括但不限于小细胞肺癌、NHL、AML、CLL和ALL。

在一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：

A选自：

E是碳原子且

是双键；或

E是-C(H)-且

是单键；或

E是氮原子且

是单键；

X¹、X²和X³各自独立地选自-CR⁸＝和-N＝；

R^1a和R^1b与它们所连接的碳原子一起形成3-、4-或5-元任选取代的环烷基；或

R^1a和R^1b与它们所连接的碳原子一起形成4-或5-元任选取代的杂环；

R²选自-NO₂、-SO₂CH₃和-SO₂CF₃；

R^2a选自氢和卤素；

R³选自氢、-CN、-C≡CH和-N(R^4a)(R^4b)；

R^4a选自任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_3-6环烷基、杂环基、杂烷基、 (环烷基)烷基和(杂环)烷基；

R^4b选自氢和C_1-4烷基；

R⁵选自任选取代的C_1-6烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基； R^6a、R^6c、R^6e、R^6f和R^6g各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_3-6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；

R^6b和R^6d各自独立地选自氢、C_1-4烷基和卤素；

R⁷选自任选取代的C_1-6烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；且

R⁸选自氢和卤素。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A的化合物，其中： A选自A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8和A-9；

R^4a选自任选取代的C_1-6烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环) 烷基；且

R^6a、R^6c、R^6e、R^6f和R^6g各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、杂环基、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基。

在另一个实施方案中，本公开的化合物是具有式I的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：

E是碳原子且

是双键；或

E是-C(H)-且

是单键；或

E是氮原子且

是单键；

R²选自-NO₂、-SO₂CH₃和-SO₂CF₃；

R³选自氢、-CN、-C≡CH和-N(R^4a)(R^4b)；

R^4a选自任选取代的C_1-6烷基、杂环基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；且 R^4b选自氢和C_1-4烷基。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式II的化合物

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y选自-CH₂-和-O-，R²和R^4a如式I所定义。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式III的化合物：

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式IV的化合物：

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式V的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y选自-CH₂-和-O-，且A、X¹、 X²和X³的如式I-A所定义。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式VI的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y选自-CH₂-和-O-，且A如式I-A 所定义。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-1。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-2。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-3。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-4。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-5。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-6。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-7。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-8。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-9。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VI的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中A是A-10。

在另一个实施方案中，本公开的化合物是具有式VII的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y选自-CH₂-和-O-，且X¹、X²、 X³、R²和R^4a如式I-A中所定义。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹、X²和X³各自为-CH＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹是-CF＝，并且X²和X³各自是-CH＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹和X³各自为-CH＝，且 X²为-CF＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹和X²各自为-CH＝，且 X³为-CF＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹是-N＝，并且X²和X³各自是-CH＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹和X³各自为-CH＝，且 X²为-N＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A、V或VII的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中X¹和X²各自为-CH＝，且 X³为-N＝。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式II-VII中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y是-O-。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式II-VII中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Y是-CH₂-。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-A或I-VII中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R²是-NO₂。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式I-IV中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R^4a选自：

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式IA或V-VII中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R^4a、R⁵、R^6a和R⁷各自独立地选自：

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式VIII的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R^2a是氢或氟，且R^4a如式I-A所定义。

在另一个实施方案中，本公开化合物是具有式VIII的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中R^4a选自：

在另一个实施方案中，本公开化合物是选自表1化合物的一种或多种的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

表1

在另一个实施方案中，本公开的化合物选自表1-A化合物的一种或多种或其药学上可接受的盐或溶剂化物的化合物。

表1-A

在另一个实施方案中，本公开的化合物是表1-B的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

表1-B

在另一个实施方案中，本公开化合物是选自表1-C化合物的一种或多种或其药学上可接受的盐或溶剂化物的化合物。

表1-C

在另一个实施方案中，本公开的化合物选自：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施方案中，本公开的化合物选自：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施方案中，本公开的化合物是：

或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

在另一个实施方案中，本公开提供了药物组合物，其包含本公开化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物和药学上可接受的载体。

定义

在本公开中，术语“卤素”本身或作为另一基团的一部分使用是指-Cl、 -F、-Br或-I。

在本公开中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“硝基”是指-NO₂。

在本公开中，术语“氰基”本身或作为另一基团的一部分使用是指-CN。

在本公开中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“羟基”是指-OH。

在本公开中，术语“氨基”本身或作为另一基团的一部分使用是指 -NH₂。

在本公开中，术语“烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指含有一至十二个碳原子的未取代的直链或支链脂族烃，即C_1-12烷基，或指的碳原子数，例如，诸如甲基的C₁烷基，诸如乙基的C₂烷基，诸如丙基或异丙基的C₃烷基，诸如甲基、乙基、丙基或异丙基的C_1-3烷基等。在一个实施方案中，烷基是直链C_1-6基。在另一个实施方案中，烷基是支链C_3-6烷基。在另一个实施方案中，烷基是直链C_1-4烷基。在另一个实施方案中，烷基是支链C_3-4烷基。在另一个实施方案中，烷基是直链或支链C_3-4烷基。在另一个实施方案中，烷基部分或完全被氘化，即烷基的一个或多个氢原子被氘原子取代。非限制性的示例性C_1-12烷基包括甲基、-CD₃、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。非限制性的示例性C_1-4烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。非限制性示例性C_1-4基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基。

在本公开中，术语“任选取代的烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指未取代的烷基或被一个、两个或三个取代基取代的烷基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基和任选取代的芳基。在一个实施方案中，任选取代的烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的烷基被一个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的烷基是未取代的。非限制性的任选取代的烷基包括-CH₂Ph、-CH₂CH₂NO₂、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂OCH₃和 -CH₂CH₂F。

在本公开中，术语“环烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指未取代的饱和或部分不饱和的，例如含有一个或两个双键的环状脂族烃，含有一至三个具有三至十二个碳原子的环，即C_3-12环烷基，或指定的碳原子数。在一个实施方案中，环烷基具有两个环。在一个实施方案中，环烷基具有一个环。在另一个实施方案中，环烷基是C_3-8环烷基。在另一个实施方案中，环烷基是C_3-6环烷基。在另一个实施方案中，环烷基是C₃-5环烷基。术语“环烷基”意指包括其中-CH₂-被-C(＝O)-替换的基团。非限制性示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、十氢化萘、金刚烷基、环己烯基、环戊烯基、环戊酮、螺[3.3]庚烷和双环[3.3]壬烷。

在本公开中，术语“任选取代的环烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指未取代的或被一个、两个或三个取代基取代的环烷基，所述取代基独立地选自：卤素、硝基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环基。在一个实施方案中，任选取代的环烷基被两个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的环烷基被一个取代基取代。在另一个实施方案中，任选取代的环烷基是未取代的。

在本公开中，术语“卤代烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。在一个实施方案中，烷基被一个、两个或三个氟和/或氯原子取代。在另一个实施方案中，卤代烷基是C_1-4卤代烷基。非限制性示例性卤代烷基包括氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基和三氯甲基。

在本公开中，术语“烷氧基”本身或作为另一基团的一部分使用是指与末端氧原子连接的任选取代的烷基。在一个实施方案中，烷氧基是与末端氧原子连接的C_1-6烷基。在另一个实施方案中，烷氧基是与末端氧原子连接的C_1-4烷基。非限制性示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。

在本公开中，术语“芳基”本身或作为另一基团的一部分使用是指具有 6至14个碳原子的未取代的单环或双环芳族环系，即C_6-14芳基。非限制性示例性芳基包括苯基(缩写为“Ph”)、萘基、菲基、蒽基、茚基、甘菊环基、联苯、亚联苯基和芴基。在一个实施方案中，芳基是苯基或萘基。

在本公开中，本文所用的术语“任选取代的芳基”本身或作为另一基团的一部分是指未取代的芳基或被1-5个取代基取代的芳基，所述取代基独立地选自卤素、硝基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环基。在一个实施方案中，任选取代的芳基是任选取代的苯基。在另一实施方案中，任选取代的苯基具有一个取代基。在另一个实施方案中，任选取代的苯基是未取代的。非限制性的示例性取代芳基包括2-甲基苯基、2-甲氧基苯基、2-氟苯基和4-氯苯基。

在本公开中，术语“杂环基”本身或作为另一基团的一部分使用是指未取代的饱和和部分不饱和的，例如含有一个或两个双键，含有一个、两个或三个环的环状基团具有3至14个环成员，即3至14元杂环，其中一个环的至少一个碳原子被杂原子取代。术语“杂环基”意指包括环状脲基，例如咪唑烷基-2-酮，环状酰胺基团，例如β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺和 ε-内酰胺，和环状氨基甲酸酯基团，例如噁唑烷基-2-酮。在一个实施方案中，杂环基是含有一个环和一个或两个氧和/或氮原子的4-、5-、6-、7-或 8-元环状基团。在一个实施方案中，杂环基是含有一个环和一个或两个氮原子的5-或6-元环状基团。在一个实施方案中，杂环基是含有两个环和一个或两个氮原子的8-、9-、10-、11-或12-元环状基团。在一个实施方案中，杂环基是含有一个环和一个氧原子的4-或5-元环状基团。杂环基可任选地通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。非限制性示例性杂环基包括1,4- 二噁烷、2-氧代吡咯烷-3-基、2-咪唑烷酮、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(降托烷)、6-氮杂螺[2.5]辛烷、6-氮杂螺[3.4] 辛烷、二氢吲哚基、二氢吲哚-2-酮和1,3-二氢-2H-苯并[d]咪唑-2-酮。

在本公开中，本文所用的术语“任选取代的杂环基”本身或另一基团的一部分是指未取代的或被一个、两个或三个取代基取代的杂环，所述取代基独立地选自：卤素、硝基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、卤代烷基和杂环基。非限制性的任选取代的杂环基包括：

在本公开中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷基氨基”是指-NHR¹⁰，其中R¹⁰是C_1-6烷基。在一个实施方案中，R¹⁰是C_1-4烷基。非限制性的示例性烷基氨基包括-N(H)CH₃和-N(H)CH₂CH₃。

在本公开中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“二烷基氨基”是指-NR^11aR^11b，其中R^11a和R^11b各自独立地为C_1-6烷基。在一个实施方案中，R^11a和R^11b各自独立地为C_1-4烷基。非限制性示例性二烷基氨基包括-N(CH₃)₂和-N(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂。

在本公开中，术语“(环烷基)烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指被一个任选取代的环烷基取代的烷基。在一个实施方案中，(环烷基) 烷基是被一个任选取代的C_3-6环烷基取代的C_1-4烷基。在一个实施方案中，任选取代的环烷基被杂环基取代。非限制性示例性(环烷基)烷基包括：

在本公开中，术语“(杂环)烷基”本身或作为另一基团的一部分使用是指被一个任选取代的杂环基取代的烷基。在一个实施方案中，(杂环)烷基是被一个任选取代的4-至6-元杂环基取代的C_1-4烷基。杂环基可以通过碳或氮原子与烷基连接。非限制性示例性(杂环)烷基包括：

在本公开中，本身或另一基团的一部分使用的术语“杂烷基”是指含有 6至12个链原子的未取代的直链或支链脂族烃，即6至12元杂烷基。或者指定的链原子数，其中至少两个-CH₂-基团独立地被-O-，-N(H)-或-S-替换。-O-、-N(H)-或-S-可以独立地位于脂族烃链的任何内部位置，只要每个 -O-、N(H)-或-S-基团被至少两个-CH₂-基团分离即可。在一个实施方案中，两个-CH₂-基团被两个-O-基团替换。在另一个实施方案中，三个-CH₂-基团被三个-O-基团替换。非限制性示例性杂烷基包括 -CH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₂N(H)CH₃和 -CH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₂CH₂OCH₃。

本公开内容包括通过使一个或多个原子被具有不同原子质量或质量数的原子替换而被同位素标记(即，放射性标记)的任何本公开化合物。可以掺入所公开的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如²H(或氘(D))、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、 ³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶C，分别地，例如为³H、¹¹C和¹⁴C。在一个实施方案中，提供了一种组合物，其中本公开化合物内的基本上所有原子被具有不同原子质量或质量数的原子替换。在另一个实施方案中，提供了一种组合物，其中在本公开的化合物内的位置处的一部分原子被替换，即，本公开的化合物在具有不同原子质量或质量数的原子的位置富集。同位素标记的本公开化合物可通过本领域已知的方法制备。

本公开的化合物可含有一个或多个不对称中心，因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式。本公开意在包括使用所有这些可能的形式，包括外消旋和拆分形式，以及它们的混合物。鉴于本公开内容，可以根据本领域已知的方法分离单独的立体异构体，例如对映异构体。当本文所述的化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，否则它们包括E和Z几何异构体。所有互变异构体也旨在包括在本公开内容中。

如本文所用，术语“立体异构体”或“立体异构形式”是单个分子的所有异构体的通用术语，所述异构体仅在其原子的取向上不同。它包括具有一个以上手性中心的化合物的对映体和异构体，所述手性中心彼此不为镜像 (非对映异构体)。

术语“手性中心”和“不对称碳原子”是指连接4个不同基团的碳原子。

术语“对映异构体”和“对映异构体”是指不能在其镜像上叠加并因此具有光学活性的分子，其中对映异构体在一个方向上旋转偏振光平面并且其镜像化合物以相反方向围绕偏振光平面旋转。

术语“外消旋”是指等份的对映体的混合物，并且该混合物是光学无活性的。

术语“绝对构型”是指手性分子实体(或基团)的原子的空间排列及其立体化学描述，例如R或S。

本说明书中使用的立体化学术语和惯例旨在与Pure&Appl，Chem 68： 2193(1996)中描述的那些一致，另有说明的除外。

术语“对映体过量”或“ee”是指一种对映体与另一种对映体相比存在多少的量度。对于R和S对映体的混合物，对映体过量百分比定义为|R-S |*100，其中R和S是混合物中对映体的相应摩尔或重量分数，使得R+S＝ 1。使用手性物质的旋光度知识，对映体过量百分比定义为 ([a]_obs/[a]_max)*100，其中[α]_obs是对映体混合物的旋光度，[α]_max可以是纯对映体的旋光度。使用各种分析技术可以确定对映体过量，包括NMR光谱、手性柱色谱或光学偏振测定。

术语“对映体纯的”或“对映纯的”是指手性物质的样品，其所有分子(在检测限内)具有相同的手性感。在一个实施方案中，具有一个或多个手性中心的本公开化合物是对映体纯的。

术语“对映体富集的”或“对映体富集的”是指手性物质的样品，其对映体过量大于50％，例如，约60％或更多，约70％或更多，约80％或更多，约90％或更多，约95％或更多，约98％或更多，或约99％或更多。富含对映异构体的化合物可以是对映体纯的。在一个实施方案中，具有一个或多个手性中心的本公开化合物是对映体富集的。

术语“一”和“一个”是指一个或多个。

如本文所用，术语“约”包括所述数字±10％。因此，“约10”表示9至 11。

本公开包括制备和使用本公开的化合物的盐，包括无毒的药学上可接受的盐。药学上可接受的加成盐的实例包括无机和有机酸加成盐和碱性盐。药学上可接受的盐包括但不限于金属盐，例如钠盐、钾盐、铯盐等；碱土金属，如钙盐、镁盐等；有机胺盐如三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己胺盐、N,N'-二苄基乙二胺盐等；无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；有机酸盐如柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、甲酸盐等；磺酸盐如甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等；和氨基酸盐，如精氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等。如本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指在目标患者(例如哺乳动物，例如人)中生理学上耐受的本公开化合物的任何盐，例如通过与酸或碱反应获得的盐。

酸加成盐可以通过混合本公开特定化合物溶液与药学上可接受的无毒性酸形成，如盐酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸、二氯乙酸等。碱性盐可以通过将本公开化合物的溶液与药学上可接受的性碱如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胆碱、碳酸钠等的溶液混合来形成。

本公开内容涵盖本公开化合物的溶剂化物的制备和用途。溶剂化物通常不会显着改变化合物的生理活性或毒性，因此可以起药理学等价物的作用。如本文所用的术语“溶剂化物”是本公开化合物与溶剂分子(例如，非溶剂化物、单溶剂化物或半溶剂化物)的组合，物理缔合和/或溶剂化，其中溶剂分子与化合物的比例为本公开分别为约2：1，约1：1或约1：2。这种物理缔合涉及不同程度的离子和共价键，包括氢键。在某些情况下，可以分离溶剂化物，例如当一种或多种溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时。因此，“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。本公开的化合物可以作为溶剂化形式与药学上可接受的溶剂(例如水、甲醇、乙醇等)一起存在，并且本公开内容旨在包括本公开化合物的溶剂化和非溶剂化形式。

在一个实施方案中，溶剂化物是水合物。“水合物”涉及溶剂化物的特定亚组，其中溶剂分子是水。溶剂化物通常可以起药理学等价物的作用。溶剂化物的制备在本领域中是已知的。参见，例如，M.Caira等， J.Pharmaceut.Sci，93(3)：601-611(2004)，其描述了氟康唑与乙酸乙酯和水的溶剂化物的制备。E.C.van Tonder等人，AAPS Pharm.Sci.Tech.，5(1)： Article 12(2004)和A.L.Bingham等人，Chem.Commun.603-604(2001)描述了溶剂化物、半溶剂化物、水合物等的类似制备。制备溶剂化物的典型的非限制性方法包括将本公开的化合物在高于20℃至约25℃的温度下溶解在所需的溶剂(有机物、水或其混合物)中，然后冷却溶液。以足以形成晶体的速率，并通过已知方法分离晶体，例如过滤。诸如红外光谱的分析技术可用于确认溶剂化物晶体中溶剂的存在。

本公开的化合物是Bcl-2蛋白的抑制剂，例如Bcl-2和/或BC1-X_L，因此可以治疗或预防由Bcl-2蛋白介导的许多疾病、病症或障碍。通过将这些化合物给受试者施用。因此，本公开内容一般涉及治疗或预防对患有 Bcl-2蛋白，例如Bcl-2和/或BC1-X_L的Bcl-2蛋白的抑制有响应的动物、或患有该疾病、病症或障碍的风险的动物的疾病、病症或障碍的方法，本发明的方法包括给动物施用有效量的一种或多种本公开的化合物。

本公开内容还涉及抑制有此需要的动物(例如人)中Bcl-2蛋白的方法，该方包含给动物施用治疗有效量的至少一种本公开化合物。

本公开内容还涉及抑制有此需要的动物(例如人)中Bcl-2的方法，该方法包含给动物施用治疗有效量的至少一种本公开化合物。

本公开内容还涉及在有此需要的动物(例如人)中抑制BC1-X_L的方法，该方法包含给动物施用治疗有效量的至少一种本公开化合物。

如本文所用，术语“治疗”、“治疗”、“治疗”等是指消除、减轻或改善疾病或病症，和/或与其相关的症状。尽管不排除，但治疗疾病或病症不需要完全消除与其相关的疾病、病症或症状。术语“治疗”和同义词考虑将治疗有效量的本公开化合物施用于需要这种治疗的受试者。可以对症治疗，例如，抑制症状。它可以在短时间内实现，在中期内定向，或者可以是长期治疗，例如在维持治疗的背景下。

如本文所用，术语“预防”、“预防”和“预防”是指预防疾病或病症和/ 或其伴随症状发作或阻止受试者获得疾病的方法。如本文所用，“预防”，“预防”和“预防”还包括延迟疾病发作和/或其伴随症状并降低受试者获得疾病的风险。术语“预防”、“预防”和“预防”可以包括“预防性治疗”，其是指在受试者中降低重建疾病或病症或先前控制的疾病或病症的复发的可能性。没有，但有风险或易于重新发展疾病或病症或疾病或病症的复发。

如本文所用的术语“治疗有效量”或“有效剂量”是指当通过本公开的方法施用时，有效递送活性成分的活性成分的量是足够的，以有效递送用于治疗有此需要的个体感兴趣的病症或疾病的活性成分。在癌症或其它增殖病症的情况下，治疗有效量的药物可以减少(即，在某种程度上延迟并且优选地停止)不需要的细胞增殖；减少癌细胞数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在某种程度上延迟并优选阻止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在某种程度上延迟并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；调节靶细胞中的蛋白质甲基化；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在施用的化合物或组合物阻止生长和/或杀死现有癌细胞的程度上，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。

术语“容器”意指任何容器和封闭物，因此适合于储存、运输、分配和/ 或处理药物产品。

术语“插入物”是指伴随药物产品的信息，其提供如何施用产品的描述，以及允许医师、药剂师和患者做出关于使用产品的知情决定所需的安全性和功效数据。包装说明书通常被认为是药品的“标签”。

在本公开中，术语“Bcl-2蛋白”或“Bcl-2蛋白家族”是指以下蛋白质中的任何一种或多种：Bax、Bak、Bid、Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1、Bcl-w、Bfl-1/Al、 Bim、Puma、Bad、Bik/Blk、Noxa、Bmf、Hrk/DP5和Beclin-1。参见 Cold Spring Harb Perspect Biol 2013；5:a008714。

术语“疾病”或“病症”或“障碍”表示通常被视为病理状况或功能的紊乱和/或异常，并且可以以特定体征、症状/或异常功能形式表现出来。本公开的化合物抑制Bcl-2蛋白，例如Bcl-2和/或Bcl-xL，并且可以用于治疗或预防疾病、病症或障碍，例如过度增殖性疾病，其中Bcl-2蛋白的抑制提供了有益性。

术语“过度增殖性疾病”是指动物中局部增殖细胞群不受正常生长的通常限制所控制的任何病症。在一个实施方案中，过度增殖性疾病是癌症。

在一些实施方案中，本公开的化合物可用于治疗“Bcl-2蛋白介导的障碍”，例如Bcl-2介导的障碍和/或Bcl-xL介导的障碍。Bcl-2蛋白介导的障碍是已知Bcl-2蛋白起作用的任何病理状况。在一个实施方案中，Bcl-2介导的障碍是过度增殖性疾病。在一个实施方案中，Bcl-2介导的障碍是癌症。

在一个实施方案中，本公开化合物具有Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀小于约 10μM。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约5μM的Bcl-2 和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约1μM 的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.5μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.1μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.05μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.025μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.010μM的Bcl-2 和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约 0.005μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.0025μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。在另一个实施方案中，本公开的化合物具有小于约0.001μM的Bcl-2和/或Bcl-xL IC₅₀。

在一个实施方案中，本公开内容提供了治疗或预防受试者例如人的过度增殖性疾病的方法，其包含施用治疗有效量的本公开化合物。

在另一个实施方案中，本公开内容提供了治疗或预防受试者中的癌症的方法，包含施用治疗有效量的本公开化合物。虽然不限于特定机制，但在一些实施方案中，本公开化合物可通过抑制Bcl-2蛋白(例如Bcl-2和/或 Bcl-xL)来治疗或预防癌症。可治疗的癌症的实例包括但不限于表2癌症的任何一种或多种。

表2

在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肾癌、肝癌、头颈癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、食道癌或前列腺癌。

在另一个实施方案中，癌症是血液恶性肿瘤，如急性骨髓性白血病 (AML)、B和T急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、或套细胞淋巴瘤(MCL)。

在另一个实施方案中，癌症是食道鳞状细胞癌(ESCC)、膀胱癌或宫颈癌。

在另一个实施方案中，癌症是白血病，例如选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病和混合谱系白血病(MLL)的白血病。在另一个实施方案中，癌症是NUT-中线癌。在另一个实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌(SCLC)。在另一个实施方案中，癌症是神经母细胞瘤。在另一个实施方案中，癌症是伯基特氏淋巴瘤。在另一个实施方案中，癌症是宫颈癌。在另一个实施方案中，癌症是食道癌。在另一个实施方案中，癌症是卵巢癌。在另一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在另一个实施方案中，癌症是前列腺癌。在另一个实施方案中，癌症是乳腺癌。

在另一个实施方案中，癌症是肾上腺皮质癌、膀胱尿路上皮癌、乳腺浸润癌、结肠直肠腺癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、胰腺癌、前列腺腺癌、肾透明细胞癌、皮肤黑色素瘤、胃腺癌、子宫癌肉瘤或子宫内膜癌。

在另一个实施方案中，本公开内容提供了通过给需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的本公开化合物来调节癌症(例如上述癌症)中的体内基因表达、细胞增殖、细胞分化和/或细胞凋亡的治疗方法。

本公开的化合物可以以原料化学品的形式施用于受试者，而不存在任何其它组分。本公开化合物还可以作为含有与一种或多种适合的药学上可接受的载体组合的化合物的药物组合物的一部分施用于受试者。此类载体可选自药学上可接受的赋形剂和助剂。术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的载体”包括任何标准药物载体、溶剂、表面活性剂或载体。适合的药学上可接受的载体包括含水载体和非水载体。标准药物载体及其制剂描述于Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.， Easton，PA，第19版。1995年。

本公开范围内的药物组合物包括其中本公开化合物与一种或多种药学上可接受的载体组合的所有组合物。在一个实施方案中，本公开化合物以有效实现其预期治疗目的的量存在于组合物中。虽然个体需求可以变化，但确定每种化合物的有效量的最佳范围在本领域技术范围内。典型地，本发明的化合物可以以每kg哺乳动物体重约0.0025至约1500mg的剂量口服施用于哺乳动物，例如人，或等量的药学上可接受的盐或溶剂化物。每天治疗特定障碍。给哺乳动物施用的本发明化合物的有用口服剂量为每kg 哺乳动物体重约0.0025至约50mg，或等量的其药学上可接受的盐或溶剂化物。对于肌内注射，剂量典型地约为口服剂量的一半。

单位口服剂量可包含约0.01mg至约1g的口服剂量的本公开化合物，例如，约0.01mg至约500mg，约0.01mg至约250mg，约0.01mg至约100mg， 0.01mg至约50mg，例如，约0.1mg至约10mg的化合物。单位剂量可以每天施用一次或多次，例如，作为一种或多种片剂或胶囊，每种含有约 0.01mg至约1g化合物，或等量的其药学上可接受的盐或溶剂化物。

本公开的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可以施用于可能经历本公开化合物的有益效果的任何患者或受试者。这些患者或受试者中最重要的是哺乳动物，例如人和伴侣动物，但是本公开内容并非旨在如此限制。在一个实施方案中，患者或受试者是人。

本公开的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可以通过实现其预期目的的任何方式施用。例如，施用可以通过口服、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、透皮、鼻内、经粘膜、直肠、阴道内或口腔途径，或通过吸入施用。施用剂量和施用途径将根据特定受试者的情况而变化，并考虑诸如年龄、性别、健康和接受者体重、待治疗的病症或障碍，同时治疗的种类等因素，如果有的话，治疗的频率，以及所需效果的性质。

在一个实施方案中，本发明的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可以口服施用。在另一个实施方案中，本公开的药物组合物可以口服施用并配制成片剂、糖衣丸、胶囊或口服液体制剂。在一个实施方案中，口服制剂包含挤出的多颗粒，其包含本公开的化合物。

或者，本公开的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可以直肠施用，并配制成栓剂。

或者，本公开的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可通过注射施用。

或者，本发明的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可以透皮施用。

或者，本公开的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可通过吸入或通过鼻内或经粘膜施用。

或者，本发明的化合物或包含本公开化合物的药物组合物可通过阴道内途径施用。

本公开的药物组合物可含有约0.01至99％重量的本公开化合物，例如约0.25至75％重量的本公开化合物，例如，约1％、约5％、约10％、约 15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％重量的本公开化合物。

本公开的药物组合物以本身公知的方式制备，例如，通过常规的混合、制粒、制糖衣、溶解、挤出或冻干方法。因此，口服使用的药物组合物可以通过将活性化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物并加工颗粒混合物，在需要或必要时加入适合的助剂，得到片剂或糖衣丸核心来获得。

适合的赋形剂包括填充剂，例如糖类(例如，乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇)，纤维素制品，磷酸钙(例如，磷酸三钙或磷酸氢钙)，以及粘合剂，例如淀粉糊(使用)例如，玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉或马铃薯淀粉)，明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入一种或多种崩解剂，例如上述淀粉以及羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂或海藻酸或其盐，如海藻酸钠。

助剂通常是流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)和聚乙二醇。锭芯具有适合的抗胃液的涂层。为此目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可以使用适合的纤维素制品如乙酰纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的溶液。可以将染料或色素添加到片剂或糖衣丸包衣中，例如，用于鉴定或表征活性化合物剂量的组合。

可口服使用的其它药物制剂的实例包括由明胶制成的推入式胶囊，或由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。推入式胶囊可含有颗粒形式的化合物，其可与填充剂(例如乳糖)，粘合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)和任选的稳定剂或挤出的多颗粒混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或悬浮在适合的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。此外，可以添加稳定剂。

用于直肠施用的可能的药物制剂包括例如栓剂，其由一种或多种活性化合物与栓剂基质的组合组成。适合的栓剂基质包括天然和合成的甘油三酯，以及石蜡烃等。还可以使用明胶直肠胶囊，其由活性化合物与基质材料的组合组成，例如液体甘油三酯、聚乙二醇或链烷烃。

用于肠胃外施用的适合制剂包括水溶形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性盐、碱性溶液或酸性溶液。或者，可以将活性化合物的悬浮液制备成油性悬浮液。适合的亲脂性溶剂或用于例如悬浮液的载体可包括脂肪油(例如芝麻油)、合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯)、甘油三酯或聚乙二醇例如聚乙二醇-400(PEG-400)。含水悬浮液可含有一种或多种物质以增加悬浮液的粘度，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。悬浮液可任选含有稳定剂。

在另一个实施方案中，本公开提供了包含本公开化合物(或包含本公开化合物的药物组合物)的药盒以便于其用于实施本发明方法的方式包装。在一个实施方案中，所述药盒包括包装在容器(例如密封的瓶子或容器)中的本公开化合物(或包含本公开化合物的药物组合物)，其中标签贴在容器上或包含在药盒中，描述了使用化合物或组合物来实施本公开的方法。在一个实施方案中，化合物或组合物以单位剂型包装。该药盒还可包括适于根据预期施用途径施用组合物的装置。

在另一个实施方案中，本公开的化合物与第二种治疗剂一起施用于受试者。第二种治疗剂不同于本发明的化合物。本发明的化合物和第二种治疗剂可以同时或相继施用以达到所需效果。此外，本公开化合物和第二种治疗剂可以由单一组合物或两种单独的组合物施用。

第二种治疗剂以提供其所需的治疗效果的量施用。每种第二种治疗剂的有效剂量范围是本领域已知的，并且第二种治疗剂在这样确定的范围内施用于有需要的个体。

本公开的化合物和第二种治疗剂可以作为单一单位剂量一起施用或作为多单位剂量单独施用，其中本公开的化合物在第二种治疗剂之前施用，或反之亦然。可以施用一种或多种剂量的本公开化合物和/或一种或多种剂量的第二种治疗剂。因此，本公开化合物可以与一种或多种第二种治疗剂联合使用，例如但不限于抗癌剂。

在一些实施方案中，第二种治疗剂是表观遗传药物。如本文所用，术语“表观遗传药物”是指靶向表观遗传调节剂的治疗剂。表观遗传调节剂的实例包括组蛋白赖氨酸甲基转移酶、组蛋白精氨酸甲基转移酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白脱乙酰酶、组蛋白乙酰化酶和DNA甲基转移酶。组蛋白脱乙酰酶抑制剂包括但不限于伏立诺他。

在另一个实施方案中，化学治疗剂或其它抗增殖剂可与本公开化合物组合以治疗增殖性疾病和癌症。可以与本公开化合物组合使用的治疗和抗癌剂的实例包括手术，放射疗法(例如，γ射线、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距离放射疗法和全身放射性同位素)，内分泌疗法，生物反应调节剂(例如，干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子(TNF)、高温和冷冻疗法、减轻任何不良反应的药物(例如止吐药)和任何其它批准的化学治疗药物。

抗增殖化合物的实例包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素；抗雄激素；促性腺激素激动剂；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性剂；烷化剂；类维生素A，类胡萝卜素或生育酚；环加氧酶抑制剂； MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗代谢物；铂族化合物；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；二膦酸盐；抗增殖抗体；乙酰肝素酶抑制剂；Ras致癌异构体的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液系统恶性肿瘤的化合物；Flt-3抑制剂；Hsp90抑制剂；驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；MEK 抑制剂；抗肿瘤抗生素；亚硝基脲；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物，靶向/降低蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物，或任何其它抗血管生成化合物。

非限制性示例性芳香酶抑制剂包括但不限于类固醇，例如阿西那、依西美坦和福美坦，以及非类固醇，例如氨基乙酰亚胺、roglethimide、吡啶葡聚糖酰亚胺、曲洛司坦、睾内酯、ketkononazole、伏氯唑、法罗唑、阿那曲唑和来曲唑。

非限制性抗雌激素包括但不限于他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和雷洛昔芬盐酸盐。抗雄激素包括但不是比卡鲁胺。戈那瑞林激动剂包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸性瑞林。

示例性拓扑异构酶I抑制剂包括但不限于拓泊替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物 PNU-166148。拓扑异构酶II抑制剂包括但不限于蒽环类药物，例如多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫霉素；蒽醌类，如米托蒽醌和洛索蒽醌；和podophillotoxines，如依托泊苷和替尼泊苷。

微管活性剂包括微管稳定化，微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷，例如紫杉醇和多西紫杉醇；长春花生物碱，如长春碱、硫酸长春碱、长春新碱、硫酸长春新碱和长春瑞滨；淅皮海绵内酯；秋水仙碱和埃博霉素及其衍生物。

示例性非限制性烷化剂包括环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑和亚硝基脲、例如卡莫司汀和洛莫司汀。

示例性非限制性环加氧酶抑制剂包括Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2- 芳基氨基苯乙酸和衍生物，例如塞来考昔、罗非考昔、艾托考昔、伐地考昔，或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，如罗美昔布。

示例性非限制性基质金属蛋白酶抑制剂(“MMP抑制剂”)包括胶原肽模拟物和非肽模拟物抑制剂、四环素衍生物、巴马司他、马立马司他、普啉司他、metastat、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B和 AAJ996。

示例性非限制性mTOR抑制剂包括抑制哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，例如西罗莫司、依维莫司、CCI-779 和ABT578。

示例性非限制性抗代谢物包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、吉西他滨，DNA去甲基化化合物，例如5-氮杂胞苷和地西他滨、甲氨蝶呤和依达曲沙，和叶酸拮抗剂，例如培美曲塞。

示例性非限制性铂化合物包括卡铂、顺铂、顺铂和奥沙利铂。

示例性非限制性甲硫氨酸氨肽酶抑制剂包括苯甲酰胺或其衍生物和 PPI-2458。

示例性的非限制性二膦酸盐包括依地酸、氯膦酸、替罗膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。

示例性非限制性抗增殖抗体包括曲妥珠单抗、曲妥珠单抗-DM1、西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、PR064553和2C4。术语“抗体”意指包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性即可。

示例性非限制性乙酰肝素酶抑制剂包括靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物，例如PI-88和OGT2115。

如本文所用，术语“Ras致癌同种型的抑制剂”，例如H-Ras、K-Ras 或N-Ras是指靶向、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物，例如法呢基转移酶抑制剂，例如L-744832、DK8G557、替比法尼和氯那法尼。

示例性非限制性端粒酶抑制剂包括靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物，例如抑制端粒酶受体的化合物，例如端粒抑素。

示例性非限制性蛋白酶体抑制剂包括靶向、降低或抑制蛋白酶体活性的化合物，包括但不限于硼替佐米。

本文所用的短语“用于治疗血液恶性肿瘤的化合物”包括FMS样酪氨酸激酶抑制剂，它是靶向、降低或抑制FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)活性的化合物；干扰素，1-β-D-阿拉伯呋喃基胞嘧啶(ara-c)和硫酸氢盐；和 ALK抑制剂，它们是靶向、减少或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。

示例性非限制性Flt-3抑制剂包括PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。

示例性非限制性HSP90抑制剂包括靶向、降低或抑制HSP90的内在 ATP酶活性的化合物；或通过遍在蛋白蛋白酶体途径降解、靶向、降低或抑制HSP90客户蛋白。靶向、降低或抑制HSP90的内在ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，例如17- 烯丙基氨基,17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)、格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。

本文使用的短语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物；或蛋白质或脂质磷酸酶活性；或任何其它抗血管生成化合物”包括蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，例如a)靶向、降低或抑制血小板衍生生长因子受体(PDGFR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向、降低或抑制成纤维细胞生长因子受体(FGFR)活性的化合物；c)靶向、降低或抑制胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)活性的化合物，例如靶向、降低或抑制IGF-IR活性的化合物；d)靶向、降低或抑制Trk受体酪氨酸激酶家族或肝配蛋白B4抑制剂活性的化合物；e)靶向、降低或抑制Axl受体酪氨酸激酶家族活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受体酪氨酸激酶活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受体酪氨酸激酶如伊马替尼活性的化合物；h)靶向、降低或抑制c-Kit受体酪氨酸激酶如伊马替尼活性的化合物；i)靶向、降低或抑制c-Abl家族成员，其基因融合产物(例如Bcr-Abl激酶)和突变体(例如 N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物)活性的化合物，例如伊马替尼或尼罗替尼； PD180970；AG957；NSC 680410；PD173955；或达沙替尼；j)靶向、降低或抑制蛋白激酶C(PKC)和Raf家族丝氨酸/苏氨酸激酶成员的活性的化合物，MEK、SRC、JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt和Ras的成员/MAPK 家族成员，和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)的成员，例如美国专利No.5,093,330中公开的星形孢菌素衍生物，例如米哚妥林。其它化合物的实例包括UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福辛；伊莫福新；RO318220和RO 320432；GO 6976；Isis 3521； LY333531/LY379196；异喹啉化合物；法呢基转移酶抑制剂；PD 184352 或QAN697，或AT7519；k)靶向、降低或抑制蛋白酪氨酸激酶活性的化合物，例如甲磺酸伊马替尼或酪氨酸磷酸化抑制剂，例如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG 99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555；AG 494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和adaphostin(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410、adaphostin)；1)靶向、降低或抑制受体酪氨酸激酶(EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4作为同源或异源二聚体)及其突变体的表皮生长因子家族活性的化合物，例如CP 358774、ZD 1839、ZM 105180；曲妥珠单抗、西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、抗体E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3和E7.6.3，和7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；和 m)靶向、降低或抑制c-Met受体活性的化合物。

靶向、降低或抑制蛋白质或脂质磷酸酶活性的示例性化合物包括磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，例如冈田酸或其衍生物。

其它抗血管生成化合物包括具有与蛋白质或脂质激酶抑制无关的其它活性机制的化合物，例如沙利度胺和TNP-470。

另外的非限制性示例性化疗化合物，其中一种或多种可与本公开化合物组合使用，包括：柔红霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂、PKC412、6-巯基嘌呤(6-MP)、磷酸氟达拉滨、奥曲肽、SOM230、FTY720、6-硫鸟嘌呤、克拉屈滨、6-巯基嘌呤、喷司他丁、羟基脲、2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物、l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)2,3-二氮杂萘或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸盐、血管抑制素、内皮抑素、邻氨基苯甲酸酰胺、ZD4190、 ZD6474、SU5416、SU6668、贝伐单抗、rhuMAb、rhuFab、macugon； FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgG1抗体、RPI 4610、贝伐单抗、卟菲尔钠、阿奈可他、曲安奈德、氢化可的松、11-a-epihydrocotisol、可托多松、17a-羟孕酮、皮质酮、脱氧皮质酮、睾酮、雌酮、地塞米松、氟轻松、植物生物碱、激素化合物和/或拮抗剂、生物反应调节剂，如淋巴因子或干扰素、反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物、shRNA和siRNA。

第二种治疗剂的其它实例，其中一种或多种本公开的化合物也可以组合，包括但不限于：阿尔茨海默病的治疗，例如多奈哌齐和卡巴拉汀；治疗帕金森病，如L-DOPA/卡比多巴、恩他卡朋、罗吡尼洛、普拉克索、溴隐亭、培高利特、三己二烯和金刚烷胺；用于治疗多发性硬化症(MS)的药物，例如β干扰素(例如AVONEX和REBIF)、醋酸格拉替雷和米托蒽醌；治疗哮喘，如沙丁胺醇和孟鲁司特；治疗精神分裂症的药物，如再普乐、维思通、思瑞康和氟哌啶醇；抗炎剂，如皮质类固醇，TNF阻滞剂，IL-1 RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调节剂，包括免疫抑制剂，如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥药、离子通道阻滞剂、利鲁唑或抗帕金森病药；治疗心血管疾病的药物，如β-受体阻滞剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻滞剂或他汀类药物；治疗肝脏疾病的药物，如皮质类固醇、考来烯胺、干扰素和抗病毒剂；用于治疗血液障碍的药物，例如皮质类固醇、抗白血病药或生长因子；或用于治疗免疫缺陷病症的药物，例如丙种球蛋白。

如本领域所述制备和施用上述第二治疗活性剂，其中一种或多种可与本公开化合物组合使用。

化合物的通用合成

考虑到本公开内容，或使用以下通用方案中所示的说明性方法，使用本领域技术人员已知的方法制备本公开化合物。在通用方案中，R²和R^4a如结合式I所定义，并且Y如结合式II所定义。

通用方案1

在通用方案1中，化合物A在碱(例如三乙胺)存在下与R^4aNH₂反应，得到化合物B。

通用方案2

在通用方案2中，使4-溴-2-氟苯甲酸甲酯与化合物C反应，得到化合物D，化合物D的酯水解得到化合物E。化合物E与来自通用方案1的化合物B偶合得到化合物F。

通用方案3

在通用方案3中，化合物G被转化为化合物H。

通用方案4

在通用方案4中，使来自通用方案3的化合物H与4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶反应，得到化合物I。化合物I与来自通用方案2的化合物F偶联，得到具有式IV的化合物。

通用方案5

在通用方案5中，使来自通用方案3的化合物H与Boc-保护的哌啶反应，得到化合物J，除去Boc基团，得到化合物K。使化合物K与2-((1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸甲酯反应，得到化合物L，水解化合物L的酯，得到化合物M。将化合物M与来自通用方案1的化合物B 偶联，得到式II化合物。

实施例

实施例1

合成中间体

中间体1：1-环丁亚基丙-2-酮的合成

向环丁酮(5.0g，71.4mmol)的甲苯(200ml)溶液中加入1-(三苯基亚正膦基)-2-丙酮(22.7g，71.4mmol)，将混合物回流过夜。减压除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/己烷1/10-1/5)，得到1-环丁亚基丙-2-酮 (5.0g)，为黄色油状物。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ5.95-5.93(m,1H), 3.19-3.13(m,2H),2.91-2.84(m,2H),2.21(s,3H),2.21-2.11(m,2H)。

中间体2：螺[3.5]壬烷-6,8-二酮的合成

向1-环丁亚基丙-2-酮(23.1g，0.21mol)和丙二酸甲酯(30.3g，0.23mol) 的甲醇(150ml)溶液中加入甲醇钠(41.4g，30％甲醇溶液)。将混合物在N₂下加热回流4小时并浓缩。将所得残余物在2N氢氧化钾(200ml)中于70℃ 水解4小时。用乙酸乙酯(100ml)萃取混合物，然后用1N盐酸盐滴定至pH 3-5。将所得溶液加热至70℃，保持5小时，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥并浓缩，得到螺[3.5]壬烷-6,8-二酮(19.8g， 62.3％)，为黄色固体。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。¹H NMR (400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),5.17(s,1H),2.50-2.35(m,4H),1.92 -1.79(m,2H),1.79-1.72(m,4H)。

中间体3：8-异丁氧基螺[3.5]壬-7-烯-6-酮的合成

向螺[3.5]壬烷-6,8-二酮(19.8g，0.13mol)在甲苯(150ml)中的溶液中加入 4-甲苯磺酸(248mg，0.0013mol)和异丁醇(14.5g，0.2mol)。将混合物加热至回流并通过共沸蒸馏除去水。真空除去溶剂，通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯 /石油醚1/10-1/3)纯化残余物，得到8-异丁氧基螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(25.0g， 92.7％)，为浅黄色油状物。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ5.31(s,1H),3.59 (d,J＝6.8Hz,2H),2.51(s,2H),2.45(s,2H),2.12-1.96(m,1H),1.93-1.83 (m,6H),0.99(d,J＝6.8Hz,6H)。

中间体4：螺[3.5]壬-7-烯-6-酮的合成

在室温下向8-异丁氧基螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(25.0g，0.12mol)的甲苯 (100ml)溶液中滴加

(40ml，70％甲苯溶液，0.18mol)。将混合物加热至45℃，保持4小时，然后用1N盐酸盐淬灭。过滤混合物，浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/10)纯化，得到螺[3.5]壬-7-烯-6-酮 (9.0g，55％)，为淡黄色油状物。

中间体5：螺[3.5]壬-6-酮的合成

将螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(9.0g)在1atm H₂下氢化，用在甲醇(80ml)中的 10％Pd/C(1.0g)催化5.5小时。过滤除去Pd/C，浓缩滤液，得到螺[3.5]壬-6- 酮(8.8g，96.4％)，为无色油状物，将其不经进一步纯化直接用于下一步。 ¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ2.38(s,2H),2.23-2.20(m,2H),1.89-1.75 (m,10H)。

中间体6：6-氧代螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯的合成

在室温下向氢化钠(5.1g，0.13mol)的四氢呋喃(150ml)中的悬浮液中加入碳酸甲酯(28.7g，0.32mol)，然后加入螺[3.5]壬烷-6-酮的四氢呋喃(30ml) 溶液。将混合物回流2小时。通过饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到6-氧代螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(4.0g，32％)，为浅黄色油状物。

中间体7：6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯的合成

向6-氧代螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(4.0g，0.02mol)的四氢呋喃(25ml)溶液中加入碳酸钾(5.6g，0.04mol)和N,N-双(三氟甲基磺酰基)苯胺(7.9g， 0.022mol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用水稀释，并用乙酸乙酯(100ml×3) 萃取。将合并的有机层用饱和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/50-1/10)纯化得到的残余物，得到6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(5.0g，76％)，为浅黄色油状物。中间体8：6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯的合成

将6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(5.0g，0.015mol)、4-氯苯基硼酸(2.58g，0.017mol)、CsF(4.63g，0.03mol)和 Pd(PPh₃)₄(173mg，0.15mol)在1,2-二甲氧基-乙烷(30ml)和甲醇(15ml)中的混合物在N₂下加热至70℃并保持2小时。减压除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/10)纯化，得到6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7- 甲酸甲酯(4.0g，92％)，为无色油状物。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ7.30 (d,J＝8.5Hz,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),3.48(s,3H),2.50-2.44(m,2H), 2.43(t,J＝2.3(2.3或6.3？)Hz,2H),2.02-1.80(m,6H),1.74(t,J＝6.3Hz, 2H)。

中间体9：(6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇的合成

向6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(4.0g，0.014mol)在四氢呋喃(20ml)中的溶液中加入LiBH₄(910mg，0.042mol)的四氢呋喃(10ml)溶液。将混合物在室温下搅拌过夜，用1N盐酸水溶液淬灭，并用乙酸乙酯 (100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/10-1/3)纯化得到的残余物，得到(6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇(3.0g，81.7％)，为白色固体。¹H NMR(400 MHz,CDC1₃)δ7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),3.93(d,J ＝4.2Hz,2H),2.37-2.26(m,2H),2.01-1.77(m,8H),1.74(t,J＝6.3Hz, 2H)。

中间体10：7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯的合成

向(6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇(3.5g，0.013mol)和三甲胺 (2.7g，0.026mol)在二氯甲烷(20ml)的溶液中滴加甲磺酰氯(3.0g，0.026mol)。将混合物在室温下搅拌5小时。减压除去溶剂，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯(2.75g，75.5％)，为黄色油状物。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝ 8.5Hz,2H),3.93(s,2H),2.34-2.25(m,4H),1.97-1.78(m,6H),1.74(t,J＝ 6.3Hz,2H)。

中间体11：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸乙酯的合成

将1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-醇(2.2g)、2,4-二氟苯甲酸乙酯(1.96g)和二甘醇二甲醚(20mL)中的K₃PO₄(2.14g)的混合物在 115℃下搅拌1小时。将反应冷却，用乙酸乙酯(100mL)稀释，并用水、盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/己烷1/3)纯化残余物，得到 2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸乙酯(1.9g)。为白色固体。 ¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ10.13-10.08(m,1H),8.23(d,J＝2.6Hz,1H),7.98(dd,J＝8.8,6.6Hz,1H),7.67(d,J＝2.6Hz,1H),7.44(dd,J＝3.5, 2.5Hz,1H),6.84(ddd,J＝8.8,7.6,2.4Hz,1H),6.55(dd,J＝10.3,2.4Hz, 1H),6.52(dd,J＝3.5,2.0Hz,1H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),1.36(t,J＝7.1 Hz,3H)。

中间体12：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸甲酯的合成

将1-(三异丙基甲硅烷基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-醇(1.91g)、4-溴-2- 氟苯甲酸甲酯(1.70g)和K₃PO₄(1.86g)在二甘醇二甲醚(20mL)中的混合物在 115℃下搅拌1小时。将反应冷却，用乙酸乙酯(100mL)稀释，并用水、盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/己烷1/3)纯化残余物，得到 2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸甲酯(1.8g)。为白色固体。 ¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.28(s，1H)，8.18(d，J＝2.5Hz，1H)，7.79(d， J＝8.4Hz，1H)，7.62(d，J＝2.5Hz)1H)，7.40-6.96(m，2H)，6.96(d，J＝1.Hz， 1H)，6.51-6.48(m，1H)，3.89(s，3H)。

中间体13：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸的合成

向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸甲酯(300mg，0.867mmol)的二噁烷(10mL)溶液中加入1N NaOH(2.2mL，2.2mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物用1N HCl酸化，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用无水MgSO₄干燥。减压蒸发，得到粗2-((1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸，为无色油状物。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体14：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((3-硝基-4-(((四氢 -2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酸(100mg，0.3mmol) 在DCM(10mL)中的溶液中加入3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基) 苯磺酰胺(95mg，0.3mmol)、DMAP(55mg，0.45mmol)和EDCI(115mg， 0.6mmol)，将混合物在室温下搅拌24小时。减压除去溶剂，通过硅胶色谱 (DCM/MeOH 95/5)纯化残余物，得到2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺，为黄色油状物(80mg)。MS m/z 630[M+H]⁺。

中间体15：(S)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酰胺的合成

使用类似于对中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法(DCM/MeOH 95/5)纯化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(s,1H), 8.59-8.52(m,2H),8.05(d,J＝2.6Hz,1H),7.85(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H), 7.66(d,J＝2.6Hz,1H),7.59-7.49(m,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.34 (dd,J＝8.2,1.8Hz,1H),7.12(d,J＝9.2Hz,1H),6.88(d,J＝1.8Hz,1H), 6.50-6.40(m,1H),3.83-3.37(m,2H),3.72-3.56(m,2H),3.56-3.42(m, 2H),3.37-3.01(m,3H)。

中间体16：(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-)吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酰胺的合成

中间体17：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((3-硝基-4-(((1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于对中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法(DCM/MeOH 95/5)纯化。MS m/z 685[M+H]⁺。

中间体18：2-((lH-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((4-(((4-吗啉代环己基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法 (DCM/MeOH95/5)纯化。MS m/z 713[M+H]⁺。

中间体19：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((3-硝基-4-(((1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于对中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法(DCM/MeOH 95/5)纯化。MS m/z 713[M+H]⁺。

中间体20：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((3-硝基-4-(((四氢 -2H-吡喃-3-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法 (DCM/MeOH95/5)纯化。MS m/z 630[M+H]⁺。

中间体21：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴-N-((4-(((1-甲基哌啶-4-基)甲基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于对中间体14所述的方法制备标题化合物，并通过硅胶色谱法(DCM/MeOH 95/5)纯化。MS m/z 643[M+H]⁺。

中间体23：叔丁基-4-(3-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(乙氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸酯的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-氟苯甲酸乙酯(2.1g， 7mmol)、N-Boc-哌嗪(2.61g，0.014mol)和磷酸氢二钾(2.44g，0.014mol)在二甲亚砜中的混合物加热至135℃过夜。将水加入到反应混合物中，并将混合物用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到叔丁基-4-(3-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(乙氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸酯(2.4g，73％)，为白色固体。¹H NMR (400MHz,CDC1₃)δ9.42(br s,1H),8.20(d,J＝2.5Hz,1H),7.95(d,J＝ 8.9Hz,1H),7.53(d,J＝2.5Hz,1H),7.37(dd,J＝3.5,2.5Hz,1H),6.66(dd, J＝8.9,2.5Hz,1H),6.46(dd,J＝3.5,2.0Hz,1H),6.36(d,J＝2.5Hz,1H), 4.28(q,J＝7.1Hz,2H),3.55-3.50(m,4H),3.21-3.17(m,4H),1.47(s,9H), 1.26(t,J＝7.1Hz,3H)。

中间体24：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯的合成

将三氟乙酸(6ml)加入到4-(3-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(乙氧基羰基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.1g))在二氯甲烷(10ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌3小时。减压除去溶剂，直接使用粗2-((1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯(2.5g)在下一步中而无需进一步纯化。

中间体25：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5] 壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯的合成

向7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯(851mg，3mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液中加入碳酸钾(1.26g，9mmol)、碘化钾(100mg， 0.6mmol)和2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯 (1.53g，3.3mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，浓缩并通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/5-1/1)纯化，得到2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5- 基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯(1.3g，71％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ9.98(s,1H),8.20 (d,J＝2.6Hz,1H),7.91(d,J＝9.0Hz,1H),7.51(d,J＝2.6Hz,1H),7.38(t, J＝3.5Hz,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,2H),6.97(d,J＝8.3Hz,2H),6.62(dd,J ＝9.0,2.5Hz,1H),6.45(dd,J＝3.5,2.0Hz,1H),6.32(d,J＝2.5Hz,1H), 4.26(q,J＝7.1Hz,2H),3.20-3.12(m,4H),2.77(s,2H),2.31-2.17(m,8H), 1.98-1.72(m,6H),1.68(t,J＝6.3Hz,2H),1.25(t,J＝7.1Hz,3H)。

中间体26：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯(1.3g，2.1mmol)和2N氢氧化钾 (12ml，0.042mol)的二噁烷(15ml)溶液加热至60℃过夜。将混合物用1N盐酸水溶液中和至pH 7并用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(1.1g， 88.7％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ10.34(s,1H),8.19(d, J＝2.6Hz,1H),8.02(d,J＝9.0Hz,1H),7.63(d,J＝2.6Hz,1H),7.38-7.34 (m,1H),7.27(d,J＝8.3Hz,2H),6.96(d,J＝8.3Hz,2H),6.63(dd,J＝9.0, 2.4Hz,1H),6.44(dd,J＝3.5,1.5Hz,1H),6.22(d,J＝2.4Hz,1H),3.81(s, 2H),3.17-3.10(m,4H),2.80(s,2H),2.30-2.20(m,6H),1.98-1.72(m,6H), 1.67(t,J＝6.3Hz,2H)。

中间体27：1-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙-2-酮的合成

向氧杂环丁烷-3-酮(20.6g，0.28mol)的DCM(300mL)溶液中加入1-(三苯基亚正膦基)丙-2-酮(98.6g，0.31mol)。将混合物在室温下搅拌过夜。减压除去DCM直至沉淀出固体。过滤除去固体，浓缩滤液，用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/乙酸乙酯1/5-1/3)纯化，得到1-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙-2-酮 (23.3g，74.3％)，为黄色油状物。

中间体28：2-氧杂螺[3.5]壬烷-6,8-二酮的合成

向1-(氧杂环丁烷-3-亚基)丙-2-酮(23.3g，0.21mol)和丙二酸甲酯(30.2g，0.23mol)的甲醇(150mL)溶液中加入甲醇钠(41.3g，30％MeOH溶液)。将混合物在N₂下加热至回流1小时。减压除去溶剂，得到6-羟基-8-氧代-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-5-甲酸甲酯，其不经纯化直接用于下一步骤。向KOH水溶液(2mol/L，200ml)中加入6-羟基-8-氧代-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-5-甲酸甲酯。在室温下搅拌30分钟后，用乙酸乙酯(150ml×3)萃取水溶液。用1N盐酸盐将水层调节至pH3-5并在50℃下加热4小时。减压除去水，残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到2-氧杂螺[3.5]壬烷-6,8-二酮(2.5g，77.0％)，为浅黄色固体。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体29：8-异丁氧基-2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮的合成

向2-氧杂螺[3.5]壬烷-6,8-二酮(25g，0.16mol)在甲苯(150ml)中的溶液中加入TsOH(238mg，0.0016mol)和异丁醇(18g，0.24mol)。在室温下搅拌 1小时后完成反应。减压除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/ 石油醚1/5-1/3)，得到8-异丁氧基-2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(6g，43％)，为浅黄色油状物。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ5.34(s,1H),4.47(d,J＝ 6.1Hz,2H),4.45(d,J＝6.1Hz,2H),3.60(d,J＝6.8Hz 2H),2.80(s,2H),2.68(s,2H),2.09-2.01(m,1H),0.98(d,J＝6.8Hz,6H)。

中间体30：2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮的合成

向8-异丁氧基-2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(14.7g，0.07mol)的甲苯(100ml) 溶液中滴加入

(40.4g，70％在甲苯中)。将混合物加热至45℃并保持2小时，并用1N HCl溶液淬灭。将混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚/10-1/5)纯化，得到2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(8.8g，91％)，为无色油状物。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体31：2-氧杂螺[3.5]壬-6-酮的合成

向2-氧杂螺[3.5]壬-7-烯-6-酮(8.8g)的四氢呋喃(80ml)溶液中加入 Pd/C(1g)。将混合物在室温下在1atm H₂下氢化2小时。反应完成后，过滤除去Pd/C，浓缩溶液，得到2-氧杂螺[3.5]壬-6-酮(8.0g，89.6％)，为无色油状物。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体32：6-氧代-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯的合成

向氢化钠(4.6g，0.11mol)的四氢呋喃(150ml)悬浮液中在N₂下逐滴加入碳酸甲酯(25.7g，0.28mol)。滴加完成后，将混合物加热至回流。然后加入 2-氧杂螺[3.5]壬-6-酮(11.2g，0.057mol)的四氢呋喃(30ml)溶液。将反应加热回流2小时，用饱和氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在减压下浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到6-氧代-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(4.5g，69％)，为无色油状物。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体33：6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯的合成

向6-氧代-2-氧杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸甲酯(4.5g，加入0.02mol)和碳酸钾(6.3g，0.046mol)在DMF(30ml)中的混悬液中加入N,N-双(三氟甲基磺酰基) 苯胺(8.9g，0.025mol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用水稀释，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/10-1/3)纯化残余物，得到6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(6.6g，86 ％)，为浅黄色油状物。该产物无需进一步纯化直接用于下一步。

中间体34：6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯的合成

向6-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(6.6 g，0.02mol)在1,2-二甲氧基-乙烷(30ml)和甲醇(10ml)的溶液中加入4-氯- 苯基硼酸(3.13g，0.02mol)、CsF(6.08g，0.04mol)和Pd(PPh₃)₄(231mg， 0.2mmol)并将混合物在N₂下加热至70℃保持30分钟。减压除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚1/5-1/3)，得到6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(5.1g，87.3％)，为浅黄色固体。¹H NMR(400 MHz,CDC1₃)7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.07(d,J＝8.4Hz,2H),4.54(d, J＝5.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.6Hz,2H),3.48(s,3H),2.74-2.70(m,2H), 2.55-2.50(m,2H),2.04(t,J＝6.4Hz,2H)。

中间体35：(6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇的合成

在室温下向6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-甲酸甲酯(2.1g，0.0072mol)在四氢呋喃(20ml)溶液中滴加LiBH₄(475mg，0.022mol))的四氢呋喃(10ml)溶液。将混合物在室温下搅拌4小时，用1N HCl溶液淬灭，并用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/5-1/1)纯化残余物，得到 (6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇(1.5g，78.9％)，为白色固体。 ¹H NMR(400MHz,CDC1₃)7.34(d,J＝8.4Hz,2H),7.07(d,2H,J＝8.4Hz), 4.54(d,2H,J＝6.0Hz),4.46(d,2H,J＝5.6Hz),3.93(s,2H),2.62(s,2H), 2.40-2.33(m,2H),2.03(t,2H,J＝6.4Hz)。

中间体36：7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯的合成

向(6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲醇(1.5g，5.7mmol)和三乙胺(836mg，8.6mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中加入甲磺酰氯(980mg， 8.6mmol)，并将该混合物在室温下搅拌3.5小时。减压除去溶剂，通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6- 烯(1.4g，87.0％)，为白色固体。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)7.35(d,2H, J＝8.4Hz),7.16(d,2H,J＝8.4Hz),4.53(d,2H,J＝6.0Hz),4.45(d,2H,J＝5.6Hz),3.86(s,2H),2.64(s,2H),2.40-2.33(m,2H),2.03(t,2H, J＝6.4Hz)。

中间体37：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯的合成

向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯 (382mg，0.82mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯(200mg，0.75mmol)、碳酸钾(310mg，2.25mmol)、 DIPEA(290mg，2.25mmol)和碘化钾(24.9mg，0.15mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，浓缩并通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/石油醚1/5-1/1)纯化，得到2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-乙基-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯(370mg，80.6％)，为白色固体。MS m/z 613[M+H]⁺。

中间体38：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸的合成

在60℃下向2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸乙酯(370mg， 0.6mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液中加入2N氢氧化钾(6ml，12mmol)，将该混合物在60℃搅拌过夜。将溶液用1N盐酸中和至pH 7并用乙酸乙酯 (100ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩，得到 2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(1.1g，88.7％)，为白色固体。MS m/z585 [M+H]⁺。

中间体55：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5] 壬-6-烯-7-基)甲基)哌啶-4-基)苯甲酸甲酯的合成

向7-(氯甲基)-6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯(850mg，3.04mmol)在N,N- 二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液中加入碳酸钾(1.26g，2.2mmol)、碘化钾 (100mg，0.61mmol)和2-(2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(哌啶-4-基) 苯甲酸甲酯(1.0g，3.34mmol)，在室温下将混合物搅拌过夜。然后将混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化所得残余物，得到2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌啶-4-基)苯甲酸甲酯(1.0g，55.2％)，为浅黄色固体。¹H NMR(400MHz,CDC1₃)δ9.39(br s,1H), 8.19(d,J＝2.6Hz,1H),7.87(d,J＝8.1Hz,1H),7.57(d,J＝2.6Hz,1H), 7.39(dd,J＝3.5,2.5Hz,1H),7.30-7.23(m,2H),7.04-6.93(m,3H),6.72 (d,J＝1.6Hz,1H),6.49(dd,J＝3.5,2.0Hz,1H),3.87(s,3H),2.81-2.75(m, 2H),2.73-2.71(m,2H),2.28(s,2H),2.25-2.15(m,2H),1.98-1.76(m,6H), 1.75-1.51(m,9H)。

实施例2

(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺的合成

向(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-溴苯甲酰胺在1,2-二甲氧基-乙烷(10ml)和水(1ml)中的溶液中加入1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶、 Pd(dppf)Cl₂和K₂CO₃，并将混合物在80℃下搅拌12小时。将反应冷却至室温并用水稀释。将混合物用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，经无水MgSO₄干燥，并浓缩。通过C18反相制备型HPLC纯化残余物，得到(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5- 基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4- 基)苯甲酰胺。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.97 (d,J＝2.6Hz,1H),7.88(dd,J＝9.3,2.3Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,1H), 7.50(d,J＝2.6Hz,1H),7.46(d,J＝3.5Hz,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H), 7.16(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.94(d,J＝9.3Hz, 1H),6.85(d,J＝1.7Hz,1H),6.41(d,J＝3.5Hz,1H),5.94-5.90(m,1H), 3.95-3.40(m,14H),3.15-3.03(m,1H),2.68-2.45(m,2H),2.43(s,2H),2.30- 2.20(m,2H),2.03-1.77(m,8H)。

实施例3

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺

使用类似于实施例2所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.99(d,J＝2.5Hz,1H),7.90(dd,J＝9.2, 2.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.57(d,J＝2.5Hz,1H),7.48(d,J＝3.5 Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.20-7.10(m,3H),6.96(d,J＝9.2Hz, 1H),6.82(d,J＝1.6Hz,1H),6.44(d,J＝3.5Hz,1H),5.93-5.86(m,1H), 4.53(d,J＝5.9Hz,2H),4.49(d,J＝5.9Hz,2H),4.00-3.90(m,2H),3.77-3.33(m,7H),3.26(d,J＝7.0Hz,2H),3.15-3.00(m,1H),2.70-2.65(m, 2H),2.63-2.25(m,4H),2.07(t,J＝6.3Hz,2H),2.00-1.85(m,1H),1.75- 1.65(m,2H),1.46-1.30(m,2H)。

实施例4

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7- 基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例2所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.71(t,J＝1.9Hz,1H),8.00-7.95(m,1H),7.90(dd,J＝9.3,1.9 Hz,1H),7.63(dd,J＝8.1,1.4Hz,1H),7.56-7.50(m,1H),7.46(dd,J＝3.5, 1.4Hz,1H),7.33-7.26(m,2H),7.18-7.06(m,3H),6.96(dd,J＝9.3,1.4Hz, 1H),6.81(s,1H),6.43(dd,J＝3.5,1.5Hz,1H),5.93-5.86(m,1H), 4.00-3.94(m,2H),3.83-3.36(m,7H),3.26(d,J＝7.0Hz,2H),3.10-3.04 (m,1H),2.67-2.40(m,4H),2.30-2.24(m,2H),2.02-1.77(m,9H),1.74- 1.67(m,2H),1.45-1.30(m,2H)。

实施例5

(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例1所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.99(d,J＝2.5Hz,1H),7.89(dd,J＝9.2, 2.3Hz,1H),7.65(d,J＝8.2Ηz,ΙΗ),7.54(d,J＝2.5Hz,1H),7.48(d,J＝3.4 Ηz,ΙΗ),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.21-7.16(m,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H), 6.95(d,J＝9.3Hz,1H),6.86(d,J＝1.6Hz,1H),6.43(d,J＝3.5Hz,1H), 5.94-5.90(m,1H),4.60-4.43(m,4H),3.95-3.40(m,14H),3.15-3.00(m, 1H),2.80-2.60(m,4H),2.38-2.25(m,2H),2.08(t,J＝6.3Hz,2H)。

实施例6

(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(290mg，0.5mmol)、(R)-4-(((1,4- 二噁烷-2-基)甲基)氨基-3-硝基苯磺酰胺(236mg，0.75mmol)、EDCI(191mg， 1mmol)、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(591mg，0.75mmol)的二氯甲烷(15ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱纯化，得到(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7- 基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(150mg，34.1％)，为黄色固体。¹H NMR(400 MHz,甲醇-d₄)δ8.67(d,J＝2.3Hz,1H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.85(dd, J＝9.3,2.3Hz,1H),7.64(d,J＝8.8Hz,1H),7.52(d,J＝2.3Hz,1H),7.45(d, J＝3.5Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),6.95(d,J ＝9.3Hz,1H),6.76(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.41(d,J＝3.5Hz,1H),6.34(d, J＝2.4Hz,1H),4.54(d,J＝5.9Hz,2H),4.48(d,J＝5.9Hz,2H),3.93-3.35 (m,19H)，2.70-2.65(m,2H),2.33(s,2H),2.08(t,J＝6.3Hz,2H)。

实施例7

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基) 苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(250mg，0.43mmol)、3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯磺酰胺(202mg，0.64mmol)、EDCI(164mg， 0.86mmol)、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(78mg，0.64mmol)的二氯甲烷(10ml) 中的混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩。通过硅胶柱纯化得到的残余物，得到2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)-2-氧杂螺[3.5] 壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺(150mg，39.6％)，为黄色固体。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.70(d,J＝2.3Hz,1H),8.01(d,J＝2.6Hz,1H),7.87(dd,J＝9.2, 2.3Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),7.56(d,J＝2.6Hz,1H),7.47(d,J＝3.5 Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz, 1H),6.76(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.43(d,J＝3.5Hz,1H),6.32(d,J＝2.4 Hz,1H),4.54(d,J＝5.9Hz,2H),4.48(d,J＝5.9Hz,2H),4.03-3.94(m, 2H),3.67(s,2H),3.55-3.27(m,12H),2.69(s,2H),2.35-2.25(m,2H),2.08 (t,J＝6.3Hz,2H),2.05-1.93(m,1H),1.76-1.69(m,2H),1.45-1.35(m,2H)。

实施例8

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7- 基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酸(1.75g，3mmol)、3-硝基-4-(((四氢-2H- 吡喃-4-基)甲基)氨基)苯磺酰胺(1.43g，4.5mmol)、EDCI(1.15g，6mmol)和 4-(N,N-甲氨基)吡啶(550mg，4.5mmol)和二氯甲烷(40ml)的混合物在室温下反应过夜，然后加水。水层用二氯甲烷萃取，合并的有机层用盐水洗涤，浓缩并通过硅胶柱纯化，得到2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基 -4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺(1.7g，64.4％)，为黄色固体。¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.70(d,J＝2.3Hz,1H),8.01 (d,J＝2.7Hz,1H),7.87(d,J＝9.2,2.3Hz,1H),7.66(d,J＝8.9Hz,1H), 7.55(d,J＝2.7Hz,1H),7.47(d,J＝3.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H), 7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝9.2Hz,1H),6.77(dd,J＝8.9,2.4Hz, 1H),6.44(d,J＝3.4Hz,1H),6.34(d,J＝2.4Hz,1H),4.02-3.94(m,3H), 3.66(s,3H),3.49-3.38(m,2H),3.41-3.25(m,7H),2.42(s,3H),2.26(s, 3H),2.00-1.67(m,4H),1.45-1.38(m,2H)。

实施例9

(R)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例8所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.66(d,J＝2.4Hz,1H),7.99(d,J＝2.4Hz,1H),7.84(dd,J＝9.2, 2.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.51(d,J＝2.4Hz,2H),7.45(d,J＝3.3 Hz,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.94(d,J＝9.2Hz, 1H),6.76(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.40(d,J＝3.3Hz,1H),6.36(d,J＝2.3 Hz,1H),3.87(dd,J＝11.8,4.2Hz,3H),3.83-3.70(m,3H),3.67(s,2H), 3.62(dd,J＝11.7,2.9Hz,1H),3.51-3.41(m,2H),3.40-3.35(m,1H),3.29 (dq,J＝3.2,1.6Hz,1H),2.41(s,2H),2.26(s,2H),2.00-1.77(m,6H)。

实施例10

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7- 基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例8所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ11.70(s,1H),9.47(s,1H),8.62(d,J＝2.2Hz,1H),8.44(d,J＝ 8.3Hz,1H),8.27(d,J＝7.9Hz,1H),8.02-7.97(m,1H),7.84-7.75(m,1H), 7.56-7.43(m,3H),7.40(d,J＝8.3Hz,2H),7.11(d,J＝8.3Hz,2H),6.72(d, J＝8.9Hz,1H),6.40-6.35(m,1H),6.30(s,1H),3.80-3.65(m,2H),3.55(s, 2H),3.28-2.95(m,4H),2.82-2.65(m,2H),2.31(s,2H),2.22-2.15(m,2H), 1.93-1.60(m,8H)。

实施例11

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7- 基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-(甲基氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例8所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.78(d,J＝2.3Hz,1H),8.05(d,J＝2.6Hz,1H),7.96(dd,J＝9.2, 2.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,1H),7.61(d,J＝2.6Hz,1H),7.46(d,J＝3.5 Hz,1H),7.34(d,J＝8.4Hz,2H),7.01(d,J＝8.4Hz,2H),6.90(d,J＝9.2Hz, 1H),6.68(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),6.46(d,J＝3.5Hz,1H),6.18(d,J＝2.4 Hz,1H),3.60(s,2H),3.50-3.12(m,8H),3.06(s,3H),2.38(s,2H),2.30-2.16 (m,2H),1.97-1.73(m,8H)。

实施例12

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7– 基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-(二甲基氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

使用类似于实施例8所述的方法制备标题化合物。¹H NMR(400MHz, 甲醇-d₄)δ8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.08(d,J＝2.5Hz,1H),7.91(dd,J＝9.4, 2.3Hz,1H),7.81(d,J＝8.9Hz,1H),7.68(d,J＝2.3Hz,1H),7.48(d,J＝3.5 Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),7.04(d,J＝9.4Hz,1H),7.01(d,J＝8.0Hz, 2H),6.71-6.63(m,1H),6.51(d,J＝3.5Hz,1H),6.15(d,J＝1.9Hz,1H), 3.59(s,2H),3.52-3.20(m,8H),2.98(s,6H),2.38(s,2H),2.25-2.17(m,2H), 1.96-1.72(m,8H)。

实施例13

2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7– 基)甲基)哌啶-4-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺的合成

将2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌啶-4-基)苯甲酸(200mg，0.34mmol)、3-硝基-4-(((四氢 -2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯磺酰胺(162mg，0.52mmol)、EDCI(130mg， 0.68mmol)、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶(63.4mg，0.52mmol)在二氯甲烷(15ml) 中的混合物在室温下搅拌过夜，然后通过硅胶柱色谱法纯化得到2-((1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(1-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基) 哌啶-4-基)-N-((3-硝基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯基)磺酰基)苯甲酰胺(170mg，57.3％)，为黄色固体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.94(s,1H),11.64(s,1H),8.50-8.42(m,2H),7.97(d,J＝2.6Hz,1H),7.76 (dd,J＝9.2,2.2Hz,1H),7.52-7.36(m,5H),7.11(d,J＝7.9Hz,2H),6.99 (d,J＝9.2Hz,1H),6.91-6.86(m,1H),6.55(s,1H),6.37(s,1H),3.89-3.79 (m,2H)，3.35-2.90(m,10H),2.32-2.10(m,5H),1.95-1.15(m,17H)。

实施例14

使用实施例1-13中描述的方法制备以下本公开化合物：

化合物编号40：(S)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-氟-5-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯烷)[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.49-8.46(m,1H),7.99(d,J＝2.6Hz, 1H),7.70(dd,J＝13.6,2.3Hz,1H),7.66(d,J＝8.8Hz,1H),7.49(d,J＝2.6Hz, 1H),7.45(d,J＝3.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.5Hz,2H),7.10(d,J＝8.5Hz,2H), 6.79(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.41-6.37(m,2H),3.83-2.70(m,19H),2.42(s, 2H),2.30-2.22(m,2H),2.00-1.78(m,8H)。

化合物编号44：(S)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-2-氟-5-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.75(d,J＝7.5Hz,1H),8.08-8.02(m, 1H),7.68(d,J＝2.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(d,J＝3.4Hz,1H), 7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.80-6.72(m,2H),6.50(d, J＝3.4Hz,1H),6.29(d,J＝2.2Hz,1H),3.90-2.70(m,19H),2.41(s,2H), 2.32-2.20(m,2H),2.00-1.78(m,8H)。

化合物编号45：(S)-N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-2-氟-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬 -6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺

MS m/z＝900[M+H]。

化合物编号46：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((2-甲基-7-硝基-2H-吲唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.80(d,J＝1.6Hz,1H),8.73(d,J＝1.6 Hz,1H),8.69(s,1H),7.92(d,J＝2.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.9Hz,1H),7.44(d, J＝2.6Hz,1H),7.39(d,J＝3.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.09(d,J＝8.5 Hz,2H),6.75(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.34(d,J＝2.3Hz,1H),6.32(d,J＝3.4 Hz,1H),4.35(s,3H),3.3.67-2.70(m,8H),3.66(s,2H),2.41(s,2H), 2.32-2.22(m,2H),2.02-1.75(m,8H)。

化合物编号47：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((7-硝基-1H-苯并[d]咪唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.70(d,J＝1.3Hz,1H),8.64(d,J＝1.3 Hz,1H),8.57(s,1H),7.93(d,J＝1.9Hz,1H),7.59(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(d, J＝2.5Hz,1H),7.40(d,J＝3.4Hz,1H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.08(d,J＝8.4 Hz,2H),6.74(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.35(d,J＝2.2Hz,1H),6.33(d,J＝3.4 Hz,1H),3.72-2.72(m,8H),2.40(s,2H),2.34-2.20(m,2H),2.00-1.77(m, 8H)。

化合物编号48：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((7-硝基-2-(四氢-2H-吡喃-4- 基)-2H-吲唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.87(d,J＝1.6Hz,1H),8.84(s,1H), 8.75(d,J＝1.6Hz,1H),7.96(d,J＝2.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(d, J＝2.6Hz,1H),7.41(d,J＝3.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.5Hz,2H),7.09(d,J＝8.5 Hz,2H),6.75(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.35(d,J＝3.4Hz,1H),6.31(d,J＝2.3 Hz,1H)，4.20-4.14(m,2H),3.75-2.70(m,13H),2.41(s,2H),2.32-1.76(m, 14H)。

化合物编号49：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲基-7-硝基-1H-吲唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.71(d,J＝1.5Hz,1H),8.63(d,J＝1.5

Hz,1H),8.33(s,1H),7.95(d,J＝2.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(d, J＝2.5Hz,1H),7.42(d,J＝3.4Hz,1H),7.37(d,J＝8.3Hz,2H),7.09(d,J＝8.3 Hz,2H),6.76(dd,J＝8.9,1.7Hz,1H),6.36(d,J＝3.4Hz,1H),6.34(d,J＝1.7 Hz,1H),4.20(s,3H),3.75-2.70(m,8H),3.70(s,2H),2.41(s,2H),2.30-2.23 (m,2H),2.00-1.76(m,8H)。

化合物编号50：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((7-硝基-2H-吲唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.82(s,2H),8.41(s,1H),7.93(d, J＝2.5Hz,1H),7.64(d,J＝9.0Hz,1H),7.44(d,J＝2.5Hz,1H),7.40-7.34(m, 3H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),6.76(dd,J＝9.0,2.3Hz,1H),6.36(d,J＝2.3Hz, 1H),6.29(d,J＝3.4Hz,1H),3.70-2.70(m,8H),3.66(s,2H),2.41(s,2H), 2.30-2.20(m,2H),2.02-1.77(m,8H)。

化合物编号51：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((4-硝基-2H-吲唑-6-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ9.19(s,1H),8.84(s,1H),8.73(d,J＝1.2 Hz,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.65(d,J＝2.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz, 1H),7.43-7.37(m,3H),7.12(d,J＝8.4Hz,2H),6.81(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H), 6.41(d,J＝3.4Hz,1H),6.39(d,J＝2.1Hz,1H),3.71-2.70(m,8H),3.69(s, 2H),2.43(s,2H),2.30-2.24(m,2H),2.02-1.76(m,8H)。

化合物编号52：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲基-4-硝基-1H-苯并[d]咪唑-6- 基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.66(d,J＝1.6Hz,1H),8.60(s,1H), 8.54(d,J＝1.6Hz,1H),7.91(d,J＝2.6Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(d, J＝8.5Hz,2H),7.35(d,J＝2.6Hz,1H),7.33(d,J＝3.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5 Hz,2H),6.77(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.37(d,J＝2.3Hz,1H),6.27(d,J＝3.5 Hz,1H),4.01(s,3H),3.70-2.70(m,8H),3.66(s,2H),2.42(s,2H),2.32-2.23 (m,2H),2.03-1.80(m,8H)。

化合物编号53：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((7-硝基-2-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.67(d,J＝1.5Hz,1H),8.56(d,J＝1.5 Hz,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,1H),7.48(d,J＝2.5Hz, 1H),7.41(d,J＝3.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.5Hz,2H),7.09(d,J＝8.5Hz,2H), 6.74(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.34(d,J＝3.4Hz,1H),6.30(d,J＝2.3Hz,1H), 4.00-3.85(m,2H),3.70-2.70(m,10H),3.65(s,2H),2.98(d,J＝7.3Hz,2H), 2.41(s,2H),2.35-2.20(m,3H),2.02-1.40(m,12H)。

化合物编号54：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-4-硝基-2H-吲唑-6-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.85(s,1H),8.70(s,1H),8.53(d,J＝1.2 Hz,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.65(d,J＝8.9Hz,1H),7.43(d,J＝2.5Hz, 1H),7.42-7.35(m,3H),7.10(d,J＝8.4Hz,2H),6.79(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H), 6.39(d,J＝2.3Hz,1H),6.30(d,J＝3.4Hz,1H),4.80(t,J＝5.0,2H),4.09(t, J＝5.0Hz,2H),3.70-3.65(m,4H),3.64-2.70(m,10H),3.29(s,3H),2.42(s, 2H),2.30-2.25(m,2H),2.02-1.76(m,8H)。

化合物编号55：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((2-(2-甲氧基乙基)-4-硝基-2H-吲唑 -6-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.80(d,J＝0.8Hz,1H),8.74-8.72(m, 1H),8.54(d,J＝1.3Hz,1H),7.93(d,J＝2.5Hz,1H),7.65(d,J＝8.9Hz,1H), 7.42(d,J＝2.5Hz,1H),7.40-7.35(m,3H),7.10(d,J＝8.5Hz,2H),6.78(dd, J＝8.9,2.4Hz,1H),6.36(d,J＝2.4Hz,1H),6.30(d,J＝3.4Hz,1H),4.79(t, J＝5.0Hz,2H),3.99(t,J＝5.0Hz,2H),3.70-2.70(m,8H),3.67(s,2H),3.38(s, 3H),2.42(s,2H),2.32-2.25(m,2H),2.02-1.76(m,8H)。

化合物编号25：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-((5-硝基-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-1H-吡咯-3-基)磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ8.04(d,J＝2.5Hz,1H),7.72-7.68(m, 2H),7.61(d,J＝2.5Hz,1H),7.48(d,J＝3.5Hz,1H),7.45(d,J＝2.2Hz,1H), 7.39(d,J＝8.5Hz,2H),7.11(d,J＝8.5Hz,2H),6.80(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H), 6.47(d,J＝3.5Hz,1H),6.37(d,J＝2.3Hz,1H),4.27(d,J＝7.2Hz,2H), 3.85-2.70(m,12H),3.66(s,2H),2.42(s,2H),2.35-2.25(m,2H),2.03-1.77 (m,9H),1.48-1.26(m,4H)。

化合物编号56：2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)-N-(萘-2-基磺酰基)苯甲酰胺

¹H NMR(400MHz,甲醇-d₄+CDCl₃)δ8.61(s,1H),8.07(d,J＝2.5 Hz,1H),7.92-7.70(m,4H),7.78(d,J＝9.0Hz,1H),7.68-7.57(m,3H),7.47(d, J＝3.5Hz,1H),7,32(d,J＝8.4Hz,2H),6.98((d,J＝8.4Hz,2H),6.62(dd, J＝9.0,2.3Hz,1H),6.48(d,J＝3.5Hz,1H),6.13(d,J＝2.3Hz,1H),3.57(s, 2H),3.56-2.71(m,8H),2.36(s,2H),2.24-2.14(m,2H),1.96-1.71(m,8H)。

实施例15

Bcl-2和Bcl-xL抑制：荧光素标记的BIM(81-106)、BAK(72-87)和 BID(79-99)肽，命名为Flu-BIM、Flu-BAK和Flu-BID分别用作Bcl-2、 Bcl-xL和Mcl-1的FP测定中的荧光探针。通过监测由固定浓度的荧光探针和浓度逐渐增加至全饱和的蛋白质组成的混合物的总荧光偏振值， Flu-BIM对Bcl-2、Flu-BAK对Bcl-xL和Flu-BID对Mcl-1的Kd值确定分别为0.55±0.15、4.4±0.8和6.9±0.9nM。使用Infinite M-1000读板仪(Tecan U.S.，ResearchTriangle Park，NC)在Microfluor 196孔、黑色圆底板 (Thermo Scientific)中测量荧光偏振值。向每个孔中加入1nM Flu-BIM，或 2nM Flu-BAK或2nM Flu-BID和增加浓度的Bcl-2、或Bcl-xL或Mcl-1 至测定缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.5，100μg/ml牛γ-球蛋白，0.02％叠氮化钠，Invitrogen，含有0.01％Triton X-100和4％DMSO)中的125μl终体积。将板混合并在室温下温育1小时，同时轻轻摇动以确保平衡。以485nm 的激发波长和530nm的发射波长测量以毫微极化单位(mP)的极化值。然后通过使用Graphpad Prism 5.0软件(GraphpadSoftware，San Diego，CA) 拟合S形剂量依赖性FP增加作为蛋白质浓度的函数来计算平衡解离常数 (Kd)。

从竞争性结合实验确定本公开内容的代表性化合物对Bcl-2、Bcl-xL 和Bcl-1的Ki值，其中将抑制剂的连续稀释液加入到96孔板中，每孔含有固定浓度的荧光探针和蛋白质。将5μl经测试的在DMSO中的抑制剂和 120μl预温育的蛋白质/探针复合物在测定缓冲液中的混合物加入测定板中，并在室温下温和振荡温育2小时。Bcl-2测定的蛋白质和探针的最终浓度为1.5nM和1nM，Bcl-xL测定的最终浓度为10nM和2nM，Mcl-1测定的最终浓度分别为20nM和2nM。仅含有蛋白质/探针复合物的阴性对照 (相当于0％抑制)和仅含有游离探针的阳性对照(相当于100％抑制)包括在每个测定板中。如上所述测量FP值。通过竞争曲线的非线性回归拟合确定IC₅₀值。基于测量的IC₅₀值，探针对蛋白质的Kd值和蛋白质和探针在竞争性测定中的浓度，使用Nikolovska-Coleska等，Analytical Biochemistry 332：261-73(2004)中描述的等式计算竞争性抑制剂的Ki值。还使用Huang， Journal ofBiomolecular Screening 8：34-38(2003)的等式计算Ki值。

表4中提供了本公开的代表性化合物对Bcl-2、Bcl-xL和Mcl-1的抑制活性。

表4

实施例16

RS4；11抑制

RS4；11细胞获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。将它们在解冻新鲜小瓶后三个月内使用。将细胞维持在推荐的含有10％FBS的培养基中， 37℃和5％CO₂的气氛下。

使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定法(Dojindo，Rockville，MD)根据制造商的说明书测定本公开的代表性化合物对细胞活力的影响。将 200μLRS4；11的培养基中的细胞悬浮液(10000个细胞/孔)接种到96孔板中并培养过夜。将每种测试化合物在培养基中连续稀释，并将20μL化合物稀释液加入到细胞板的相应孔中。加入测试化合物后，将细胞在37℃， 5％CO₂气氛中温育4天。在4天结束时，将10μLCCK-8溶液加入板的每个孔中并温育1-4小时。在微板分光光度计(Epoch2，BioTek)上在450nm 处读板。将读数对媒介物细胞校准，并使用GraphPad Prism 5软件通过非线性回归分析计算IC₅₀。

表5中提供了本公开的代表性化合物对RS4；11细胞系的抑制活性。表5

实施例17

Molml3抑制

Molml3细胞获自Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZeUkulturenGmbH(DSMZ)。它们在解冻新鲜小瓶后三个月内使用。将细胞维持在推荐的含有10％FBS的培养基中，在37℃和5％CO₂的气氛下。

使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定法(Dojindo，Rockville，MD)根据制造商的说明书测定本公开的代表性化合物对细胞活力的影响。将200μL 培养基中的Molml3细胞悬浮液(10000个细胞/孔)接种到96孔板中并培养过夜。将每种测试化合物在培养基中连续稀释，并将20μL化合物稀释液加入到细胞板的相应孔中。加入测试化合物后，将细胞在37℃，5％CO₂气氛中培养4天。在4天结束时，将10μLCCK-8溶液加入板的每个孔中并温育1-4小时。在微板分光光度计(Epoch2，BioTek)上在450nm处读板。将读数对媒介物细胞校准，并使用GraphPad Prism 5软件通过非线性回归分析计算IC₅₀。

表6中提供了本公开的代表性化合物对Molml3细胞系的抑制活性。

表6

实施例18

RS4；11异种移植物模型

通过蛋白质印迹分析检测来自以25mg/kg口服的本公开化合物或 ABT-199处理的小鼠获得的RS4；11异种移植肿瘤组织PARP，(Cell Signaling Technology(CST)，#9523)半胱天冬酶-3(CST，#9661)和 Bcl-2(CST，#4223)的表达。GAPDH用作加载对照。结果如图1和图2 所示。

还在RS4；11白血病异种移植物模型中研究了化合物编号6(化合物6) 的抗肿瘤活性。将人RS4；11肿瘤细胞注射到裸鼠中，并在第11天开始治疗，此时肿瘤大小达到约100mm³。通过口服强饲法以指定的剂量和时间表施用化合物编号6。化合物编号6抑制肿瘤生长(图3)并且不会导致小鼠体重减轻(图4)。

实施例19

药代动力学

以2mg/kg的IV剂量和20mg/kg的口服剂量评价ABT-199和本公开代表性的化合物在大鼠中的药代动力学。结果如表3所示。

实施例20

MV4；11抑制

表7中提供了本公开的代表性化合物对MV4；11细胞系的抑制活性。

表7

现在已经充分描述了本发明，本领域普通技术人员将理解，可以在宽范围和等效的条件、制剂和其它参数范围内进行，而不影响本发明的范围或任何实施例。

考虑到本文公开的本发明的说明书和实践，本发明的其它实施方案对于本领域技术人员而言是显而易见的。说明书和实施例仅被认为是示例性的，本发明的真实范围和精神由所附权利要求指示。

本文引用的所有专利和出版物均通过引用整体并入本文作为参考。

Claims

1.化合物，或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

2.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其为：

3.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其为

4.权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，其为

5.药物组合物，其包含权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。

6.权利要求5的药物组合物，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

7.权利要求5的药物组合物，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

8.权利要求5的药物组合物，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐。

9.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的应用，所述癌症选自急性单核细胞白血病、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、混合谱系白血病、NUT-中线癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、神经母细胞瘤、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、食道癌、卵巢癌、结肠直肠癌、前列腺癌和乳腺癌。