CN109310885A - NaPi2b靶向抗体-药物缀合物及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了特异性结合SLC34A2的胞外区的NaPi2b靶向抗体‑药物缀合物（例如NaPi2b靶向抗体‑聚合物‑药物缀合物），和在多种治疗性、诊断性和预防性指征中使用此类缀合物的方法。

Description

NaPi2b靶向抗体-药物缀合物及其使用方法
相关申请
本申请根据35 USC § 119(e)要求于2016年3月15日提交的美国临时申请号62/308,567；于2016年4月15日提交的美国临时申请号62/323,068和于2016年9月2日提交的美国临时申请号62/383,324的优先权和权益。这些申请中的每一个的内容通过引用整体并入本文。
发明领域
本公开一般涉及特异性结合SLC34A2的胞外区的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(例如NaPi2b靶向抗体-聚合物-药物缀合物)，以及使用这些缀合物作为治疗剂和/或诊断剂的方法。
背景
NaPi2b (SLC34A2, NaPillb, Npt2)是一种多次跨膜、钠依赖性磷酸转运蛋白(Xu等人，Genomics 62: 281-284(1999))，通常在哺乳动物小肠的刷状缘膜上表达并参与跨细胞无机磷酸盐(Pi)的吸收，有助于维持体内磷酸盐的稳态。已经在肝脏，乳腺、唾液腺的上皮细胞的顶端表面以及在肺，睾丸，唾液腺，甲状腺，小肠和子宫中检测到NaPi2b在蛋白水平的表达。NaPi2b中的突变与肺泡和睾丸小结石症的临床症状有关。NaPi2b在非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非粘液性卵巢癌和乳头状甲状腺癌中高表达。61％的NSCLC和92％的卵巢癌样本中存在NaPi2b阳性组织免疫反应性。
卵巢癌是最常见的妇产科恶性肿瘤之一，也是女性癌症死亡的第五大常见原因。高死亡率部分源于卵巢癌的诊断常在晚期，且死亡率约为发病率的65％。卵巢的上皮肿瘤占所有卵巢肿瘤的58％和卵巢恶性肿瘤的90％以上。瘤消除手术和铂基组合化疗(包括紫杉烷类)是目前的治疗方式；然而，具有复发性上皮性卵巢癌的大多数患者最终死于该病。在卵巢癌中需要新的治疗方式，包括靶向治疗，例如用单克隆抗体的免疫疗法或基于癌症疫苗的方法。
NSCLC是除小细胞肺癌(SCLC)之外的任何类型的上皮肺癌。NSCLC约占所有肺癌的85％。作为一类，与小细胞癌相比，NSCLC对化疗相对不敏感。在可能的情况下，它们主要通过具有治愈意图的手术切除来进行治疗，尽管越来越多地在术前(新辅助化疗)和术后(辅助化疗)使用化疗。在转移性或非手术性背景中，使用化疗和/或免疫疗法，尽管此阶段的疾病在很大程度上是无法治愈的，并且存活时间仍然很短。在NSCLC中需要新的治疗方式，包括靶向治疗，例如用单克隆抗体的免疫疗法或基于癌症疫苗的方法。
因此，存在对于靶向NaPi2b的生物活性的疗法的需求。
概要
本公开提供了NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(例如NaPi2b靶向抗体-聚合物-药物缀合物)，其是可生物降解的、生物相容的并且表现出高药物载量以及与SLC34A2的胞外区的特异性结合。本文提供的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(例如，NaPi2b靶向抗体-聚合物-药物缀合物)包括特异性识别NaPi2b的抗体，NaPi2b也称为钠依赖性磷酸盐转运蛋白2B。本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物中使用的抗体可以或可能还包括能够并且可用于调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b的至少一种生物活性的那些抗体。本文公开的抗体还包括结合可溶性NaPi2b的抗体。
在一些实施方案中，本文公开的NaPi2b靶向抗体可以与药剂连接以形成缀合物。在一些实施方案中，所述药剂是治疗剂。在一些实施方案中，所述药剂是抗肿瘤剂。在一些实施方案中，所述药剂是毒素或其片段。在一些实施方案中，所述药剂是(a)澳瑞他汀化合物，(b)卡里奇霉素化合物；(c)倍癌霉素化合物；(d) SN38，(e)吡咯并苯并二氮杂卓；(f)长春花化合物；(g)微管蛋白抑制剂(tubuiysin)化合物；(h)非天然喜树碱化合物；(i)美登木素化合物；(j) DNA结合药物；(k)激酶抑制剂；(l)MEK抑制剂；(m)KSP抑制剂；(n)拓扑异构酶抑制剂；(o) DNA-烷化药物；(p)RNA聚合酶抑制剂；或其类似物。在一些实施方案中，所述药剂通过接头与NaPi2b靶向抗体缀合。在一些实施方案中，接头是可切割的接头。在一些实施方案中，接头是不可切割的接头。在一些实施方案中，药剂是本文所述的任何毒素。
在一个方面，本文所述的NaPi2b靶向抗体缀合物包括分离的NaPi2b靶向抗体，其直接或间接连接至一种或多种治疗剂或诊断剂(“D”)。在一些实施方案中，NaPi2b靶向抗体缀合物还包括与抗体连接的一个或多个聚合物支架，其中一个或多个D中的每一个通过一个或多个聚合物支架独立地连接至抗体。
在一些实施方案中，与分离的NaPi2b-靶向抗体连接的一个或多个聚合物支架中的每一个独立地包含聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-甲缩醛)(PHF)，例如具有范围为约2 kDa至约40 kDa的分子量的PHF。
在一些实施方案中，一个或多个聚合物支架中的每一个独立地为式(Ic)：
其中：
LD1是含羰基的部分；
中的的每次出现独立地是含有可生物降解键的第一接头，因此当键断裂时，D以用于其预期治疗作用的活性形式释放；并且中的LD1和D之间的表示D与LD1的直接或间接连接；
的每次出现独立地是尚未与分离的抗体连接的第二接头，其中LP2是含有待与分离的抗体的官能团形成共价键的官能团的部分，并且LD1和LP2之间的表示LP2与LD1的直接或间接连接，并且第二接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
的每次出现独立地是第三接头，其将每个携带D的聚合物支架连接到分离的抗体，其中连接到LP2的末端表示在LP2的官能团与分离的抗体的官能团之间形成共价键后，LP2与分离的抗体的直接或间接连接；并且第三接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3是0到约18的整数，
m4是1至约10的整数；
m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约15到约300；和
与分离的抗体连接的LP2的总数为10或更少。
本文描述的缀合物可包括一个或多个以下特征：
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体具有40kDa或更高的分子量(例如，60kDa或更高，80kDa或更高，100kDa或更高，120kDa或更高，140kDa或更高，160kDa或更高，180kDa或更高，或200kDa或更高，或约40-200kDa，40-180kDa，40-140kDa，60-200kDa，60-180kDa，60-140kDa，80-200kDa，80-180kDa，80-140kDa，100-200kDa，100-180kDa，100-140kDa或140-150kDa)。在一些实施方案中，作为非限制性实例，本公开的分离的NaPi2b靶向抗体或任何抗体包括本文所述的XMT 1535抗体和10H1.11.4B抗体。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体特异性结合人NaPi2b的表位。在一些实施方案中，分离的抗体特异性结合人NaPi2b的细胞外结构域上的表位。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体是本文所述的XMT 1535抗体和/或10H1.11.4B抗体，以及其生物仿制药。或者，单克隆抗体是结合相同表位和/或交叉阻断本公开抗体或其生物仿制药的抗体。这些抗体在本文中分别称为“NaPi2b抗体”或“NaPi2b靶向抗体”。NaPi2b抗体包括完全人单克隆抗体，以及人源化单克隆抗体和嵌合抗体。这些抗体显示对人NaPi2b的特异性，并且它们可以或可能调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰至少一种NaPi2b活性。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体是单克隆抗体。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体是兔，小鼠，嵌合，人源化或完全人单克隆抗体。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体是IgG同种型。在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体是IgG1同种型。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：可变重链互补决定区1 (CDRH1)，其包含与氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO：5)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；可变重链互补决定区2 (CDRH2)，其包含与氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和可变重链互补决定区3 (CDRH3)，其包含与氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO：7)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：可变轻链互补决定区1 (CDRL1)，其包含与氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；可变轻链互补决定区2 (CDRL2)，其包含与氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和可变轻链互补决定区3(CDRL3)，其包含与氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：CDRH1，其包含与氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRH2，其包含与氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRH3，其包含与氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRL1，其包含与氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRL2，其包含与氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和CDRL3，其包含与氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列GYTFTGYNIH(SEQ ID NO：5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG(SEQ ID NO：6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；和包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ IDNO：7)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO：8)的可变轻链互补决定区1 (CDRL1)；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO：9)的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO：10)的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列GYTFTGYNIH(SEQ ID NO：5)的CDRH1；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO：6)的CDRH2；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO：7)的可变CDRH3；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN(SEQ ID NO：8)的CDRL1；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO：9)的CDRL2；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO：10)的CDRL3。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括可变重链(VH)区，其包含与SEQ IDNO：3的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括可变轻链(VL)区，其包含与SEQID NO：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：VH区，其包含与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列，和VL区，其包含与SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括可变重链(VH)区，其包含SEQ IDNO：3的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的抗体-药物缀合物中使用的，其本文公开的抗体-药物缀合物中使用的抗体包括含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的可变轻链(VL)区。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的VL区。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的重链。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的重链和含有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：可变重链互补决定区1 (CDRH1)，其包含与氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO: 18)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；可变重链互补决定区2 (CDRH2)，其包含与氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO: 19)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和可变重链互补决定区3 (CDRH3)，其包含与氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO: 20)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：可变轻链互补决定区1 (CDRL1)，其包含与氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO:21)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；可变轻链互补决定区2 (CDRL2)，其包含与氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO: 22)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和可变轻链互补决定区3 (CDRL3)，其包含与氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO: 23)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：CDRH1，其包含与氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO: 18)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRH2，其包含与氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO:19)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRH3，其包含与氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO: 20)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRL1，其包含与氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 21)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；CDRL2，其包含与氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO: 22)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列；和CDRL3，其包含与氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO: 23)具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列GFSFSDFAMS(SEQ ID NO：18)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG(SEQ ID NO：19)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；和包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF(SEQ ID NO：20)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO：21)的可变轻链互补决定区1(CDRL1)；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含氨基酸序列GFSFSDFAMS(SEQ ID NO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO：21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的CDRL2和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括可变重链(VH)区，其包含与SEQ IDNO：16的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括可变轻链(VL)区，其包含与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：VH区，其包含与SEQ ID NO：16的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列，和VL区，其包含与SEQ ID NO：17的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的可变重链(VH)区。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的可变轻链(VL)区。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH区和含有SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VL区。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括：包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的重链。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括包含与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括包含与SEQ ID NO：14的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的重链和包含与SEQ ID NO：15的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高同一性的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的重链。例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体包括含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的轻链。
例如，在式(Ic)中，分离的NaPi2b靶向抗体是分离的抗体，其与分离的抗体竞争与人NaPi2b的特异性结合，所述分离的抗体包括：(i)包含氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ IDNO：5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ IDNO：6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO：7)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO：8)的可变轻链互补决定区1 (CDRL1)；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO：9)的可变轻链互补决定区2(CDRL2)；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO：10)的可变轻链互补决定区3(CDRL3)，或(ii)包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ IDNO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3。
例如，在式(Ic)中，m1是1至约120的整数(例如，约1-90)和/或m3是1至约10的整数(例如，约1-8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有范围为约6kDa至约20kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约45至约150)时，m2是2至约20的整数，m3是0至约9的整数，m4是1至约10的整数，和/或m1是1至约75的整数(例如，m1是约4-45)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有范围为约8kDa至约15kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约60至约110)时，m2是2至约15的整数，m3是0至约7的整数，m4是1至约10的整数，和/或m1是1至约55的整数(例如，m1是约4-30)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有范围为约2kDa至约20kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约15至约150)时，m2是1至约20的整数，m3是0至约10的整数(例如，m3范围为0至约9)，m4是1至约8的整数，和/或m1是1至约70的整数，并且连接至分离的抗体的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有范围为约3kDa至约15kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约20至约110)时，m2是2至约15的整数，m3是0至约8的整数(例如，m3范围为0至约7)，m4是1至约8的整数，和/或m1是2至约50的整数，并且连接至分离的抗体的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有范围为约5kDa至约10kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约40至约75)时，m2是约2至约10的整数(例如m2是约3-10)，m3是0至约5的整数(例如，m3范围为0至约4)，m4是1至约8的整数(例如，m4范围为1至约5)，和/或m1是约2至约35的整数(例如，m1为约5-35)，并且连接至分离的抗体的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，D的每次出现独立地是治疗剂，例如具有≤ 5 kDa的分子量。
例如，D的每次出现独立地是诊断剂或标记。
例如，D的一些出现独立地是治疗剂(例如，具有≤ 5kDa的分子量)，并且D的其他出现是诊断剂或标记。
例如，D的每次出现独立地是抗癌药物，例如，选自长春花生物碱、澳瑞他汀、微管蛋白抑制剂、倍癌霉素、非天然喜树碱化合物、美登木素、卡里奇霉素化合物、拓扑异构酶抑制剂、吡咯并苯并二氮杂卓、DNA结合药物、DNA烷化药物、RNA聚合酶抑制剂、激酶抑制剂、MEK抑制剂、KSP抑制剂及其类似物。
例如，澳瑞他汀化合物的每次出现是澳瑞他汀、多拉司他汀(例如，多拉司他汀10或多拉司他汀15)、单甲基澳瑞他汀E (MMAE)、单甲基澳瑞他汀F (MMAF)、澳瑞他汀F羟丙基酰胺(AF HPA)、单甲基澳瑞他汀F羟丙基酰胺(AF HPA)或澳瑞他汀F苯二胺(AFP)。
例如，倍癌霉素或其类似物的每次出现是倍癌霉素A、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、CC-1065、阿多来新、比折来新或卡折来新。
例如，喜树碱化合物的每次出现是喜树碱、CPT-11 (伊立替康)、SN-38或拓扑替康。
例如，吡咯并苯并二氮杂卓的每次出现是吡咯并苯并二氮杂卓单体、对称的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体或不对称的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体。
例如，当未与分离的抗体连接时，每个独立地包含末端基团Wp，其中每个Wp独立地为：
其中R1K是离去基团(例如，卤化物或RC(O)O-，其中R是氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分)，R1A是硫保护基团，并且环A是环烷基或杂环烷基，且R1J是氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分。
例如，每个R1A独立地是、、或，其中r为1或2且Rs1、Rs2和Rs3的每一个为氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分。
例如，待与分离的抗体的官能团(例如抗体的氨基酸残基上的官能团或反应性部分，例如，抗体的半胱氨酸残基或赖氨酸残基上的官能团)形成共价键的LP2的官能团，选自：
–SRp、-S-S-LG、和卤素，其中LG是离去基团，Rp是H或硫保护基团，并且Xa和Xb中的一个是H，另一个是水可溶性马来酰亚胺阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键。例如，待形成共价键的LP2的官能团是没有与分离的抗体的官能团反应的官能团，例如，作为LP2的官能团的，其中Xa和Xb之一是H且另一个是水溶性马来酰亚胺阻断部分，或Xa和Xb。
例如，LD1包含—X-(CH2)v-C(=O)—，且X直接连接到的羰基，其中X是CH2、O或NH，并且v是1-6的整数。
例如，的每次出现独立地为—C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)-NH-(CH2)u-NH-C(=O)-(CH2)w-(OCH2)x-NHC(=O)-(CH2)y—M，其中X为CH2、O或NH，v、u、w、x和y中的每一个独立地是1至6的整数，并且M是，其中Xa和Xb之一是H且另一个是水溶性马来酰亚胺阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键。
例如，v、u、w、x和y中的每一个是2。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约25：1、24：1、23：1、22：1、21：1、20：1、19：1、18：1、17：1、16：1、15：1、14：1、13：1、12：1、11：1、10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约20：1、15：1、10：1、5：1、2：1或1：1。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约16：1、15：1、14：1、13：1、12：1、11：1或10：1。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约15：1、14：1、13：1、12：1或11：1。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约15：1、14：1、13：1或12：1。
例如，D与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为约6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
例如，一个或多个携带D的聚合物支架中的每一个独立地具有式(Id)：
其中：
m3a是0到约17的整数，
m3b是1至约8的整数，并且
末端表示一个或多个聚合物支架与分离的NaPi2b靶向抗体的直接连接，所述分离的NaPi2b靶向抗体具有40kDa或更高的分子量和(i)含有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQID NO: 5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；含有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQID NO: 6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；含有氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO:7)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)；含有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补决定区1 (CDRL1)；含有氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；和含有氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)；或(ii)包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ IDNO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO：21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体具有40kDa或更高的分子量，并且包括(i)包含氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO：5)的CDRH1；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO：6)的CDRH2；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO：7)的CDRH3；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO：8)的CDRL1；包含氨基酸序列YTSSLYS(SEQ ID NO：9)的CDRL2；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO：10)的CDRL3。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体具有40kDa或更高的分子量，并且包括包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ IDNO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO：21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3。
式(Id)的支架可包括一个或多个以下特征：
m3a和m3b的总和在1到18之间。
当式(Id)中的PHF具有范围为约2kDa至约40kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约300，m1是1至约140的整数，m2是1至约40的整数，m3a是0至约17的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约18，并且PHF和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为10或更少。
当式(Id)中的PHF具有范围为约2kDa至约20kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约150，m1是1至约70的整数，m2是1至约20的整数，m3a是0至约9的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约10，并且PHF和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为2至约8的整数。
当式(Id)中的PHF具有范围为约3kDa至约15kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约20至约110，m1是2至约50的整数，m2是2至约15的整数，m3a是0至约7的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约8；并且PHF和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
当式(Id)中的PHF具有范围为约5kDa至约10kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1是约2至约35的整数，m2是约2至约10的整数，m3a是0至约4的整数，m3b是1至约5的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约5；并且PHF和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例为2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
在某些实施方案中，澳瑞他汀 F羟丙基酰胺(“AF HPA”)和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约30:1、29:1、28:1、27:1、26:1、25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6：1。
在某些实施方案中，AF HPA和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6：1。
在其他实施方案中，AF HPA和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6:1。
在一些实施方案中，AF HPA和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约16：1、15：1、14：1、13：1、12：1、11：1或10：1。
在一些实施方案中，AF HPA和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约15：1、14：1、13：1、12：1或11：1。
在一些实施方案中，AF HPA和分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约15：1、14：1、13：1或12：1。
在某些实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
在某些实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可为约8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
在其他实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可以是约6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
在其他实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可为约6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
在其他实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可为约6：1、5：1、4：1或3：1。
在一些实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可为约5：1、4：1或3：1。
在一些实施方案中，PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例可为约4：1、3：1或2：1。
水溶性马来酰亚胺阻断部分(例如Xa或Xb)是在马来酰亚胺基团与如下式(II)的含巯基化合物反应后，可共价连接到两个烯烃碳原子之一的部分：
R90-(CH2)d-SH (II)
其中：
R90是NHR91、OH、COOR93、CH (NHR91)COOR93或取代的苯基；
R93是氢或C1-4烷基；
R91是氢、CH3或CH3CO和
d是从1-3的整数。
在一个实施方案中，式(II)的水溶性马来酰亚胺基阻断化合物可以是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸甲酯、N-甲基半胱氨酸、2-巯基乙醇、3-巯基丙酸、2-巯基乙酸、巯基甲醇(即，HOCH2SH)、其中苯基被一个或多个亲水取代基取代的苄基硫醇、或3-氨基丙烷-1-硫醇。苯基上的一个或多个亲水取代基包括OH、SH、甲氧基、乙氧基、COOH、CHO、COC1-4烷基、NH2、F、氰基、SO3H、PO3H等。
在另一方面，水溶性马来酰亚胺基阻断基团是-S-(CH2)d-R90，其中
R90是OH、COOH或CH (NHR91)COOR93；
R93是氢或CH3；
R91是氢或CH3CO；和
d是1或2。
在另一个实施方案中，水溶性马来酰亚胺基阻断基团是-S-CH2-CH (NH2)COOH。
在某些实施方案中，本文所述的缀合物包含一个或多个携带D的PHF，其各自独立地为式(If)，其中PHF具有范围在约2kDa至约40kDa的分子量：
其中：
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2 是1至约40的整数，
m3a是0至约17的整数，
m3b是1至约8的整数；
m3a和m3b的总和范围为1至约18；
m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约300；
末端表示一个或多个PHF聚合物支架与特异性结合SLC34A2的分离的抗体的连接，其中所述特异性结合SLC34A2的分离的抗体是包含以下的分离的抗体：(i)含有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；含有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；含有氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)；含有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补决定区1 (CDRL1)；含有氨基酸序列YTSSLYS(SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；和含有氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ IDNO: 10)的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)；或(ii)包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ IDNO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQID NO：21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO：22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3；和
PHF与抗体之间的比例为10或更小。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体特异性结合SLC34A2，并包括：(i)包含氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO：5)的CDRH1；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG(SEQ ID NO：6)的CDRH2；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO：7)的CDRH3；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO：8)的CDRL1；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO：9)的CDRL2；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO：10)的CDRL3。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体特异性结合SLC34A2，并包括：包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO：18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG(SEQ ID NO：19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO：20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO：21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQID NO：22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO：23)的CDRL3。
式(If)的支架可包括一个或多个以下特征：
当式(If)中的PHF具有范围为约2kDa至约20kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约150，m1是1至约70的整数，m2是1至约20的整数，m3a是0至约9的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约10，并且PHF和抗体之间的比例为2至约8的整数。
当式(If)中的PHF具有范围为约3kDa至约15kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约20至约110，m1是2至约50的整数，m2是2至约15的整数，m3a是0至约7的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约8；并且PHF和抗体之间的比例为2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
当式(If)中的PHF具有范围为约5kDa至约10kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1是约2至约35的整数，m2是约2至约10的整数，m3a是0至约4的整数，m3b是1至约5的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约5；并且PHF和抗体之间的比例为2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
在某些实施方案中，澳瑞他汀F羟丙基酰胺(“AF HPA”)与抗体之间的比例可为约30:1、29:1、28:1、27:1、26:1、25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6:1。
在某些实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6:1。
在其他实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6:1。
在一些实施方案中，AF HPA与抗体之间的比例可为约16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1或10:1。
在一些实施方案中，AF与抗体之间的比例可为约15:1、14:1、13:1、12:1或11:1。
在一些实施方案中，AF HPA与抗体之间的比例可为约15:1、14:1、13:1或12:1。
在某些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可以是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1。
在某些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1或2:1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6:1、5:1、4:1、3:1或2:1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6:1、5:1、4:1或3:1。
在一些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约5:1、4:1或3:1。
在一些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约4:1、3:1或2:1。
本公开的另一方面的特征在于制备本文所述的缀合物的方法。该方法包括使分离的抗体与式(Ia)的携带D的聚合物支架反应，从而形成缀合物：
其中：
LD1是含羰基的部分；
中的的每次出现独立地是第一接头，所述第一接头含有可生物降解的键，从而使得当键断裂时，D以用于其预期治疗作用的活性形式释放；并且LD1和D之间的中的表示D与LD1的直接或间接连接；的每次出现独立地是尚未与分离的抗体连接的第二接头，其中LP2是含有待与分离的抗体的官能团形成共价键的官能团的部分，并且LD1和LP2之间的表示LP2与LD1的直接或间接连接，并且第二接头的每次出现与第一接头的每次出现不同：
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3是1至约18的整数，并且
m、m1、m2和m3的总和范围为约15至约300。
在本文公开的聚合物支架的式中，聚缩醛单元之间的断开或间隙表明单元可以以任何顺序彼此连接。换言之，含有例如D、LP2的附加基团和分离的抗体可以沿着聚合物主链随机分布。
本公开还提供了通过向其中需要此类治疗或预防的对象施用本文公开的缀合物来治疗，预防，延迟与异常NaPi2b表达、功能和/或活化相关的一种或多种病理的症状的进展或以其他方式改善所述症状，或者减轻与这些病理相关的症状的方法。待治疗的对象是例如人。缀合物以足以治疗，预防或减轻与病理相关的症状的量施用。
本公开还提供了通过向其中需要此类治疗或预防的对象施用本文公开的缀合物来治疗，预防，延迟与NaPi2b表达、功能和/或活化相关的一种或多种病理的症状的进展或以其他方式改善所述症状，或者减轻与这些病理相关的症状的方法。待治疗的对象是例如人。缀合物以足以治疗，预防或减轻与病理相关的症状的量施用。
使用本文公开的缀合物治疗和/或预防的病理包括例如癌症。在一些实施方案中，本文公开的缀合物可用于治疗，预防，延迟表达NaPi2b的癌症的进展或以其他方式改善所述癌症。例如，本文公开的缀合物可用于治疗，预防，延缓选自以下的癌症的进展或以其他方式改善以下癌症的症状：卵巢癌(例如上皮卵巢癌)、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)如非鳞状NSCLC、乳腺癌、肾癌和唾液管癌。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物可用于治疗，预防，延迟卵巢癌的进展或以其他方式改善卵巢癌的症状。在一些实施方案中，卵巢癌是上皮卵巢癌。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物可用于治疗，预防，延迟NSCLC症状的进展或以其他方式改善NSCLC的症状。在一些实施方案中，NSCLC是非鳞状NSCLC。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物可用于治疗，预防，延迟卵巢癌的进展或以其他方式改善卵巢癌的症状。在一些实施方案中，卵巢癌是上皮卵巢癌。
本公开还提供了在用本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物治疗前，通过鉴定对象的NaPi2b评分来鉴定或以其他方式细化(例如，分层)适合于治疗性施用本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物的患者群体的试剂盒和/或方法。在一些实施方案中，对象被鉴定为对NaPi2b表达具有1+或2+或3+的评分。在一些实施方案中，测试细胞群来源于来自活检样品的新鲜未冷冻组织。在一些实施方案中，测试细胞群来源于原发性或转移性位点。在一些实施方案中，测试细胞群来源于来自活检或手术样品的冷冻组织或腹水或胸水。在一些实施方案中，测试细胞群体来源于来自活检或手术样品的固定组织(例如，福尔马林固定)。
IHC测试测量癌组织样品(例如卵巢癌组织样品或肺癌样品)中细胞表面上NaPi2b受体蛋白的量，并将细胞表面NaPi2b受体的检测水平分配为NaPi2b评分0、1+、2+或3+。
在一些实施方案中，对象对化疗包括标准的一线化学治疗剂是难治性的。
在一些实施方案中，对象患有铂抗性卵巢癌。
在一些实施方案中，对象患有铂敏感性卵巢癌。
在一些实施方案中，对象患有铂难治性卵巢癌。
在一些实施方案中，对象患有晚期卵巢癌并且尚未接受任何用于治疗癌症(例如，卵巢癌)的先前疗法。在一些实施方案中，对象患有晚期卵巢癌并且尚未接受任何用于治疗癌症(例如卵巢癌)的先前化学疗法。
本文提供的方法和用途的任何实施方案中使用的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物可以在疾病的任何阶段施用。例如，这种NaPi2b靶向抗体-药物缀合物可以施用于患有从早期到转移的任何阶段的癌症的患者。
在一些实施方案中，本公开的NaPi2b靶向的抗体-药物缀合物可以单独施用或与疗法中的其他组合物组合施用。例如，本公开的缀合物可以与至少一种另外的治疗剂和/或佐剂共同施用。在某些实施方案中，另外的治疗剂是小分子抑制剂、另一种基于抗体的疗法、基于多肽或肽的疗法、基于核酸的疗法和/或其他生物制剂。另外的治疗剂可以与用于形成缀合物的“D”相同或不同。
在某些实施方案中，另外的治疗剂是细胞毒性剂、化学治疗剂、生长抑制剂、血管生成抑制剂、PARP (聚(ADP)-核糖聚合酶)抑制剂、烷化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、任何其他核酸损伤剂或免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，用于治疗癌症的治疗剂包括但不限于铂化合物(例如，顺铂或卡铂)；紫杉烷(例如紫杉醇或多西他赛)；拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康或拓扑替康)；蒽环类(例如多柔比星(ADRIAMYCIN®)或脂质体多柔比星(DOXIL®))；抗代谢物(例如吉西他滨、培美曲塞)；环磷酰胺；长春瑞滨(NAVELBINE®)；六甲蜜胺；异环磷酰胺；依托泊苷；血管生成抑制剂(例如贝伐单抗(Avastin®))，沙利度胺，TNP-470，血小板因子4，干扰素或内皮抑素)；PARP抑制剂(例如，奥拉帕尼(Lynparza™))；免疫检查点抑制剂，如例如靶向PD-1或PD-L的单克隆抗体((例如，派姆单抗(Keytruda®)，阿特朱单抗(MPDL3280A)或纳武单抗(Opdivo®))或CTLA -4(例如，伊匹单抗(Yervoy®))，激酶抑制剂(例如，索拉非尼或厄洛替尼)，ALK抑制剂(例如克唑替尼(Xalkori)，色瑞替尼(Zykadia)，艾乐替尼(Alecensa)，dalantercept (ACE-041)，布吉替尼(AP26113)，恩曲替尼(NMS-E628)，PF-06463922 TSR-011，CEP-37440和X-396)，蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米或卡非佐米)，免疫调节剂(例如来那度胺或IL-2)，放射剂和/或其生物仿制药和/或其组合。其他合适的药剂包括本领域技术人员认为是标准护理的药剂和/或本领域技术人员熟知的化学治疗剂。
在一些实施方案中，适用于本公开的组合和方法的免疫检查点抑制剂是单克隆抗体、人源化抗体、完全人抗体、融合蛋白或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制检查点蛋白，其包括CTLA-4、PDLl、PDL2、PDl、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、A2aR、B-7家族配体、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS (诱导型T细胞共刺激分子)、LAIR1、LIGHT、MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、OX-40、SLAM、TIGHT、VTCN1或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂与检查点蛋白的配体相互作用，所述检查点蛋白包括CTLA-4、PDLl、PDL2、PDl、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、A2aR、a B-7家族配体、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS (诱导型T细胞共刺激分子)、LAIR1、LIGHT、MARCO (具有胶原结构的巨噬细胞受体)、OX-40、SLAM、TIGHT、VTCN1或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制包括CTLA-4、PDL1、PD1或其组合的检查点蛋白。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括派姆单抗(MK-3475)、纳武单抗(BMS-936558)、皮地利珠单抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1 105、度伐鲁单抗(MEDI4736)、MPDL3280A、BMS-936559、IPH2101、TSR-042、TSR-022、伊匹单抗、利丽单抗(lirilumab)、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、曲美木单抗或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括纳武单抗(BMS-936558)、伊匹单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、曲美木单抗、度伐鲁单抗、阿维鲁单抗或其组合。
在一些实施方案中，将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂配制成单一治疗组合物，并同时施用NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂。或者，将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂彼此分开，例如，各自配制成单独的治疗组合物，并且同时施用NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂，或者将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂在治疗方案期间的不同时间施用。例如，在施用另外的药剂之前施用NaPi2b靶向抗体-药物缀合物，在施用另外的药剂之后施用NaPi2b靶向抗体-药物缀合物，或将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和另外的药剂以交替方式施用。如本文所述，NaPi2b靶向抗体-药物缀合物抗体和另外的药剂以单剂量或多剂量施用。
在一些实施方案中，将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂配制在相同的制剂中。
在一些实施方案中，将NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂配制在单独的制剂中。
在一些实施方案中，包含本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合可用于治疗，预防，延迟卵巢癌的进展或以其他方式改善卵巢癌的症状。在一些实施方案中，卵巢癌是上皮卵巢癌。
在一些实施方案中，包含本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的组合可用于治疗，预防，延迟NSCLC的进展或以其他方式改善NSCLC的症状。在一些实施方案中，NSCLC是非鳞状NSCLC。
还公开了包含NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的试剂盒。试剂盒组分可以包装在一起或分开到两个或更多个容器中。在一些实施方案中，容器可以是包含适合于重构的组合物的无菌、冻干制剂的小瓶。试剂盒还可以含有一种或多种适于重构和/或稀释其他试剂的缓冲液。可以使用的其他容器包括但不限于小袋、托盘、盒、管等。试剂盒组分可以在容器内无菌包装和保持。可以包括的另一个组件是针对将试剂盒用于其用途的人员的说明书。
根据本公开的药物组合物可包括本文公开的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和合适的载体。这些药物组合物可以包括在试剂盒中，如例如诊断试剂盒。
本领域技术人员将理解，本文公开的抗体具有多种用途。例如，本文公开的蛋白用作治疗剂。本文公开的抗体还用作诊断试剂盒中的试剂或用作诊断工具，或者这些抗体可用于竞争试验以生成治疗试剂。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有如本公开所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。在本说明书中，除非上下文另有明确规定，否则单数形式也包括复数形式。下文描述了合适的方法和材料，但与本文描述的那些类似或等同的方法和材料也可用于本发明的实践或测试。在冲突的情况下，以本说明书包括定义为准。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而不旨在是限制性的。
从以下详细描述和权利要求中，本发明的其他特征和优点将显而易见。
附图说明
图1显示了XMT-1535；实施例3A，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4A ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))；实施例2C ((10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))和实施例1B, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效，如在OVCAR3小鼠肿瘤异种移植模型中测量的。
图2显示了实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))和实施例1C，XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDaPHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效，如在OVCAR3小鼠肿瘤异种移植模型中测量的。
图3显示了实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))和实施例1C，XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDaPHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效，如在KRAS突变体患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的。
图4显示了实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))和实施例1C，XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDaPHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效，如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的。
图5显示了如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的，实施例1C，XMT1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效。
图6A和6B分别显示了在食蟹猴中以1.25 mg/kg (1074 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量)、2.5 mg/kg (2147 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量)或5 mg/kg (或4294 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量)作为单一IV输注施用实施例1C后的总抗体和总药物的血浆药代动力学。
图7显示了实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))和实施例1C，XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDaPHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效，如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的。
图8显示了如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的，实施例1C，XMT1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效。
图9显示了如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的，实施例1C，XMT1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效。
图10显示了如在患者衍生的非小细胞肺癌异种移植模型中测量的，实施例1C，XMT1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的抗肿瘤功效。
详述
本公开提供了NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(例如NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物)，其是可生物降解的、生物相容的并且表现出高药物负荷以及特异性结合SLC34A2的胞外区。本文提供的NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(例如NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物)包括特异性识别NaPi2b(也称为钠依赖性磷酸盐转运蛋白2B)的抗体。本文公开的缀合物中使用的NaPi2h抗体能够并且可用于调节，例如阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b的至少一种生物活性。本文公开的抗体还包括结合可溶性NaPi2b的抗体。
本文提供的NaPi2b抗体-药物缀合物包括以≤1 μM，例如≤ 100 nM，优选≤ 10nM，且更优选≤ 1 nM的平衡解离常数(Kd或KD)与NaPi2b表位结合的抗体。例如，本文公开的抗体-药物缀合物中使用的NaPi2b抗体表现出≤ 1 nM至约1pM的Kd。
本文提供的NaPi2b抗体-药物缀合物可包括用于调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b的功能活性的抗体。NaPi2b的功能活性包括例如参与跨细胞无机磷酸盐(Pi)吸收，从而有助于维持体内磷酸盐稳态。例如，NaPi2b抗体通过部分或完全调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰跨细胞无机磷酸盐吸收来完全或部分抑制NaPi2b功能活性。使用任何本领域公认的检测跨细胞无机磷酸盐吸收活性的方法评估跨细胞无机磷酸盐吸收活性，所述方法包括但不限于在存在和不存在本文公开的抗NaPi2b抗体的情况下检测跨细胞无机磷酸盐吸收水平。
本文公开的抗体-药物缀合物中使用的NaPi2b抗体可以是这样的抗体，相比于不存在与本文所述的NaPi2b抗体结合的情况下的NaPi2b功能活性的水平，当存在NaPi2b抗体的情况下的NaPi2b功能活性水平降低至少95％，例如96％、97％、98％、99％或100%时，所述抗体被认为完全调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b功能活性。相比于不存在与本文所述的NaPi2b抗体结合的情况下的NaPi2b活性的水平，当存在NaPi2b抗体的情况下的NaPi2b活性水平降低少于95％，例如10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或90%时，所述NaPi2b抗体被认为部分调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b功能活性。
除非另外定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数形式，且复数术语应包括单数形式。通常，与本文所述的细胞和组织培养、分子生物学和蛋白以及寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交相关使用的术语及其技术是本领域公知和常用的那些。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质转染)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书进行或如本领域通常完成的或如本文所述进行。前述技术和程序通常根据本领域熟知的常规方法进行，并且如在本说明书通篇引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述来进行。参见例如Sambrook等人。Molecular Cloning：A LaboratoryManual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及药用和药物化学相关使用的术语和实验室程序及技术是本领域公知和常用的那些。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
如根据本公开所使用的，除非另有说明，否则以下术语应理解为具有以下含义：
如本文所用，术语“NaPi2b”(也称为钠依赖性磷酸盐转运蛋白2B、SLC34A2、NaPiIIb、Npt2、Na(+)依赖性磷酸盐共转运蛋白2B；钠/磷酸盐共转运蛋白2B；Na(+)/Pi 共转运蛋白2B；NaPi3b；溶质载体家族34成员2)，当在本文中使用时，是指人NaPi2b(例如，GenBank登录号O95436.3)并且包括由细胞(包括肿瘤细胞)天然表达或在转染有NaPi2b基因的细胞上表达的NaPi2b的任何变体、同种型和物种同源物。这些术语是同义的且可以互换使用。
如本文所用，术语“NaPi2b抗体”或“抗NaPi2b抗体”是与抗原NaPi2b特异性结合的抗体。
当在本文中在两种或更多种抗体的背景下使用时，术语“与……竞争”或“与……交叉竞争”表示两种或更多种抗体竞争结合NaPi2b，例如，在任何本领域公认的测定中竞争NaPi2b结合。如果如使用任何本领域公认的测定法测定的，抗体与一种或多种其他抗体竞争25％或更多(其中25％-74％代表“部分阻断”和75％-100％表示“完全阻断”)，则抗体“阻断”或“交叉阻断”一种或多种其他抗体与NaPi2b结合。对于一些抗体对，任何本领域公认的测定中的竞争或阻断仅在将一种抗体包被在板上而将另一种抗体用于竞争时才观察到，且反之不是如此。除非上下文另外定义或否定，否则本文使用的术语“与……竞争”、“与……交叉竞争”、“阻断”或“交叉阻断”也旨在涵盖这样的抗体对。
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即含有特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“与……免疫反应”或“针对”是指抗体与所需抗原的一个或多个抗原决定簇反应，并且不与其他多肽反应或以低得多的亲和力结合(Kd > 10-6)。抗体包括但不限于多克隆、单克隆和嵌合抗体。
已知基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应子功能的恒定区。通常，从人获得的抗体分子涉及类别IgG、IgM、IgA、IgE和IgD中的任一者，其由于分子中存在的重链的性质而彼此不同。某些类别也具有亚类，例如IgG1、IgG2等。此外，在人中，轻链可以是κ链或λ链。
如本文所用，术语“单克隆抗体”(mAb)或“单克隆抗体组合物”是指仅含有一种分子种类的抗体分子的抗体分子群，所述抗体分子由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成。特别地，单克隆抗体的互补决定区(CDR)在群体的所有分子中是相同的。单克隆抗体(mAb)含有能够与抗原的特定表位发生免疫反应的抗原结合位点，所述抗原结合位点的特征在于对其具有独特的结合亲和力。
通常，从人类获得的抗体分子涉及IgG、IgM、IgA、IgE和IgD的任何类别，它们通过分子中存在的重链的性质彼此不同。某些类别也具有亚类，例如IgG 1，IgG2等。此外，在人中，轻链可以是κ链或λ链。
术语“抗原结合位点”或“结合部分”是指参与抗原结合的免疫球蛋白分子的部分。抗原结合位点由重(“H”)和轻(“L”)链的N-末端可变区(“V”)的氨基酸残基形成。重链和轻链的V区内的三个高度不同的区段被称为“高变区”，插入于更保守的称为“框架区域”或“FR”的侧翼区段之间。因此，术语“FR”是指天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间和与其邻近的氨基酸序列。在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此设置以形成抗原结合表面。抗原结合表面与结合的抗原的三维表面互补，并且每条重链和轻链的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”。每个结构域的氨基酸分配符合Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest的定义(NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md. (1987和1991))或Chothia & Lesk J. Mol.Biol. 196:901-917 (1987), Chothia 等人 Nature 342:878-883 (1989)。
如本文所用，术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白或其片段或T-细胞受体的任何蛋白决定簇。术语“表位”包括能够特异性结合免疫球蛋白或T细胞受体的任何蛋白决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面分组组成，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。当解离常数≤ 1 µM；例如≤ 100 nM，优选≤ 10 nM且更优选≤ 1 nM时，称抗体特异性结合抗原。
如本文所用，术语“免疫结合”和“免疫结合特性”是指在免疫球蛋白分子和所述免疫球蛋白对其是特异性的抗原之间发生的非共价相互作用的类型。免疫结合相互作用的强度或亲和力可以用相互作用的解离常数(Kd)表示，其中较小的Kd表示较大的亲和力。可以使用本领域熟知的方法定量所选多肽的免疫结合特性。一种这样的方法需要测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速率，其中这些速率取决于复合物配偶体的浓度、相互作用的亲和力和几何参数，它们同等地影响两个方向的速率。因此，“结合速率常数”(Kon)和”解离速率常数“(Kon)都可以通过计算浓度和实际的缔合和解离速率来确定。(参见Nature 361：186-87(1993))。Koff /Kon的比例使得能够取消与亲和力无关的所有参数，并且等于解离常数Kd。(通常参见，Davies 等人 (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473)。当平衡解离常数(Kd或KD)≤1 μM，优选≤ 100 nM，更优选≤ 10 nM且最优选≤ 100 pM至约1pM时，如通过诸如放射性配体结合测定或本领域技术人员已知的类似测定所测量的，本公开的抗体被称为特异性结合NaPi2b。
本文所用的术语“分离的多核苷酸”应指基因组、cDNA或合成来源的多核苷酸或其的一些组合，由于其来源，“分离的多核苷酸”(1)与其中在自然界中发现“分离的多核苷酸”的多核苷酸的全部或部分不缔合，(2)与其在自然界中不与之连接的多核苷酸可操作地连接，或(3)不作为在自然界中较大序列的一部分存在。根据本公开的多核苷酸包括编码SEQID NO：1、3、14和16中所示的重链免疫球蛋白分子及其部分的核酸分子，以及编码SEQ IDNOs: 2、4、15和17中所示的轻链免疫球蛋白分子及其部分的核酸分子。
本文提及的术语“分离的蛋白”是指cDNA、重组RNA或合成来源的蛋白或其一些组合，由于其来源或衍生来源，“分离的蛋白”(1)不与在自然界中发现的蛋白缔合，(2)不含来自相同来源的其他蛋白，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。
术语“多肽”在本文中用作通用术语，指多肽序列的天然蛋白、片段或类似物。因此，天然蛋白片段和类似物是多肽属的种。根据本发明的多肽包括SEQ ID NO：1、3、14和16中所示的重链免疫球蛋白分子及其部分，和SEQ ID NOs: 2、4、15和17中所示的轻链免疫球蛋白分子及其部分，以及由包含重链免疫球蛋白分子和轻链免疫球蛋白分子(例如κ轻链免疫球蛋白分子，反之亦然)的组合形成的抗体分子，以及其片段和类似物。
如本文使用的应用于客体的术语“天然存在的”是指所述客体可以存在于自然界中的事实。例如，存在于可分离自天然来源的生物(包括病毒)中且没有在实验室中或以其他方式被人有意地修饰的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
如本文所用的术语“可操作地连接”是指如此描述的组分的位置处于允许它们以其预期方式起作用的关系中。与编码序列“可操作地连接”的控制序列以这样的方式连接，使得在与控制序列相容的条件下实现编码序列的表达。
如本文所用的术语“控制序列”是指实现与它们连接的编码序列的表达和加工所必需的多核苷酸序列。这些控制序列的性质根据原核生物中的宿主生物而不同，这种控制序列通常包括真核生物中的启动子、核糖体结合位点和转录终止序列，通常，这种控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”旨在至少包括其存在对于表达和加工必不可少的所有组分，并且还可以包括其存在是有利的其他组分，例如前导序列和融合配偶体序列。本文提及的术语“多核苷酸”是指长度为至少10个碱基的核苷酸的聚合硼，其为核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或任一类型核苷酸的修饰形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。
本文提及的术语“寡核苷酸”包括通过天然存在的和非天然存在的寡核苷酸连接而连接在一起的天然存在的和修饰的核苷酸。寡核苷酸是通常包含200个碱基或更少的长度的多核苷酸子集。优选地，寡核苷酸长度为10至60个碱基，最优选长度为12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个碱基。寡核苷酸通常是单链的，例如用于探针，尽管寡核苷酸可以是双链的，例如用于构建基因突变体。本文公开的寡核苷酸是有义或反义寡核苷酸。
本文提及的术语“天然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。本文提及的术语“修饰的核苷酸”包括具有修饰或取代的糖基的核苷酸等。本文提及的“寡核苷酸连接”包括寡核苷酸连接，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、苯胺磷酸酯(phosphoranilidate)、氨基磷酸酯等。参见例如LaPlanche等人Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec 等人 J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984), Stein 等人 Nucl.Acids Res. 16:3209 (1988), Zon 等人 Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon等人 Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F.Eckstein, 编辑, Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec 等人 美国专利号5,151,510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)。如果需要，寡核苷酸可包括用于检测的标记。
以下术语用于描述两个或更多个多核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系：“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“基本同一性”。“参考序列“是用作序列比较基础的确定序列，参考序列可以是较大序列的子集，例如，作为序列表中给出的全长cDNA或基因序列的片段，或者可以包含完整的cDNA或基因序列。通常，参考序列长度为至少18个核苷酸或6个氨基酸，通常长度为至少24个核苷酸或8个氨基酸，并且通常长度为至少48个核苷酸或16个氨基酸。由于两个多核苷酸或氨基酸序列可以各自(1)包含两个分子之间相似的序列(即，完整多核苷酸或氨基酸序列的一部分)，并且(2)可以进一步包含在两个多核苷酸或氨基酸序列之间相异的序列，在两个(或更多个)分子之间的序列比较通常通过在“比较窗口”上比较两个分子的序列来进行，以鉴定和比较序列相似性的局部区域。如本文所用，“比较窗口”是指至少18个连续核苷酸位置或6个氨基酸的概念性区段，其中多核苷酸序列或氨基酸序列可与至少18个连续核苷酸或6个氨基酸序列的参考序列进行比较，且其中比较窗口中多核苷酸序列的部分可以包含与参考序列(其不包含添加或缺失)相比20％或更少的添加、缺失、取代等(即，缺口)，用于两个序列的最佳比对。用于对齐比较窗口的序列的最佳比对可以通过Smith和Waterman Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)的局部同源性算法，通过Needleman和Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)的同源性比对算法，通过寻找Pearson和Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)的相似性方法搜索，通过这些算法(在Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0,(Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.)、Geneworks或MacVector软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)的计算机化实现或通过检视来进行，并且选择由各种方法产生的最佳比对(即，导致在比较窗口上的最高同源性百分比)。
术语“序列同一性”是指两个多核苷酸或氨基酸序列在比较窗口上是相同的(即，在核苷酸比核苷酸或残基比残基的基础上)。术语“序列同一性百分比”通过如下计算：比较比较窗口上的两个最佳比对序列，确定相同核酸碱基(例如A，T，C，G，U或I)或残基在两条序列中存在的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数(即窗口大小)，并将结果乘以100以得到序列同一性的百分比。如本文所用的术语“基本同一性”表示多核苷酸或氨基酸序列的特征，其中多核苷酸或氨基酸包含这样的序列，其在至少18个核苷酸(6个氨基酸)位置的比较窗口上、经常地在至少24-48个核苷酸(8-16个氨基酸)位置的窗口上，与参考序列相比时，具有至少85％序列同一性，优选至少90至95％序列同一性，更通常至少99％的序列同一性，其中通过在比较窗口上将参考序列与可包括总共20％或更少的参考序列的缺失或添加的序列进行比较来计算序列同一性的百分比。参考序列可以是较大序列的子集。
如本文所用，二十种常规氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology - ASynthesis (第二版, E.S. Golub和D.R. Green, 编辑, Sinauer Associates,Sunderland7 Mass. (1991))。二十种常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)、非天然氨基酸如α-, α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸和其他非常规氨基酸也可以是本公开的多肽的合适的组分。非常规氨基酸的实例包括：4羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N,N,N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ-N-甲基精氨酸、和其他类似的氨基酸和亚氨基酸(例如，4-羟基脯氨酸)。在本文使用的多肽符号中，根据标准用法和惯例，左手方向是氨基末端方向，且右手方向是羧基末端方向。
类似地，除非另有说明，否则单链多核苷酸序列的左手末端是5'末端，双链多核苷酸序列的左手方向称为5'方向。新生RNA转录物的5'至3'添加方向称为转录方向，DNA链上与RNA具有相同序列且在RNA转录物5'端的5'的序列区域被称为作为“上游序列”，DNA链上具有与RNA相同序列并且在RNA转录物的3'端的3'的序列区域被称为“下游序列”。
当应用于多肽时，术语“基本同一性”是指两个肽序列，在最佳比对时，例如通过程序GAP或BESTFIT使用默认空位权重，具有至少80％的序列同一性，优选至少90％的序列同一性，更优选至少95％的序列同一性，且最优选至少99％的序列同一性。
优选地，不相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。
保守氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的可互换性。例如，一组具有脂肪族侧链的氨基酸是甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂肪族羟基侧链的氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰胺侧链的氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳香族侧链的氨基酸是苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；一组具有碱性侧链的氨基酸是赖氨酸，精氨酸和组氨酸；且一组具有含硫侧链的氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，赖氨酸-精氨酸，丙氨酸-缬氨酸，谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
如本文所讨论的，预期抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的微小变化被本公开所涵盖，条件是氨基酸序列的变化保持至少75％，更优选至少80％、90％、95％，且最优选99％。特别地，预期保守氨基酸替换。保守替换是在与其侧链相关的氨基酸家族中发生的那些。遗传编码的氨基酸一般分为以下家族：(1)酸性氨基酸是天冬氨酸，谷氨酸；(2)碱性氨基酸有赖氨酸，精氨酸，组氨酸；(3)非极性氨基酸是丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸，色氨酸，和(4)不带电荷的极性氨基酸是甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，半胱氨酸，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸。亲水性氨基酸包括精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，谷氨酰胺，谷氨酸，组氨酸，赖氨酸，丝氨酸和苏氨酸。疏水性氨基酸包括丙氨酸，半胱氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，色氨酸，酪氨酸和缬氨酸。其他家族的氨基酸包括(i)丝氨酸和苏氨酸，它们是脂族-羟基家族；(ii)天冬酰胺和谷氨酰胺，它们是含有酰胺的家族，(iii)丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸，它们是脂肪家族；和(iv)苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸，它们是芳香家族。例如，可以合理地预期用异亮氨酸或缬氨酸单独替换亮氨酸，用谷氨酸单独替换天冬氨酸，用丝氨酸单独替换苏氨酸，或用结构相关的氨基酸类似替换氨基酸将不会对所得分子的结合或性质产生主要影响，特别是如果替换不涉及框架位点内的氨基酸。通过测定多肽衍生物的比活性，可以容易地确定氨基酸变化是否产生功能性肽。本文详细描述了测定。本领域普通技术人员可以容易地制备抗体或免疫球蛋白分子的类似物。类似物的优选氨基-和羧基-末端出现在功能域的边界附近。可以通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库进行比较来鉴定结构域和功能域。优选地，将计算机化的比较方法用于鉴定在已知结构和/或功能的其他蛋白中发生的序列基序或预测的蛋白构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法是已知的。Bowie 等人Science 253:164 (1991)。因此，前述实施例证明，本领域技术人员可以识别可用于根据本公开定义结构域和功能域的序列基序和结构构象。
优选的氨基酸取代是这样的取代，其：(1)降低对蛋白水解的易感性，(2)降低对氧化的易感性，(3)改变对形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)赋予或改变这些类似物的其他物理化学或功能特性。类似物可包括除天然存在的肽序列之外的序列的各种突变蛋白。例如，可以在天然存在的序列中(优选在形成细胞间接触的结构域外的多肽部分中)进行单个或多个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代不应该显著改变亲本序列的结构特征(例如，替换氨基酸不应该试图破坏在亲本序列中存在的螺旋，或破坏表征亲本序列的其他类型的二级结构)。本领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H.Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C.Branden and J. Tooze, 编辑, Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); 和Thornton et at. Nature 354:105 (1991)。
术语“试剂”在本文中用于表示化合物、化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制成的提取物。
如本文所用，术语“标记”或“标记的”是指掺入可检测标记，例如通过掺入放射性标记的氨基酸或附着于生物素基部分的多肽，所述生物素基部分可以通过标记的抗生物素蛋白(例如含有可通过光学或量热法检测的荧光标记物或酶活性的链霉抗生物素蛋白)来检测。在某些情况下，标签或标记物也可以是治疗性的。标记多肽和糖蛋白的各种方法是本领域已知的并且可以使用。多肽标记的实例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)，荧光标记(例如，FITC、罗丹明，镧系荧光粉)，酶标记(例如，辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)，化学发光，生物素基团，被第二报道分子识别的预定的多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列，第二抗体的结合位点，金属结合结构域，表位标签)。在一些实施方案中，标记通过各种长度的间隔臂连接以减少潜在的空间位阻。如本文所用的术语“药剂或药物”是指当适当地施用于患者时能够诱导所需治疗效果的化合物或组合物。
本文的其他化学术语根据本领域的常规用法使用，例如The McGraw-HillDictionary of Chemical Terms (Parker, S., 编辑, McGraw-Hill, San Francisco(1985))所示例。
如本文所用，“基本上纯的”是指目标种类是存在的主要种类(即，以摩尔计，它比组合物中的任何其他单独种类更丰富)，并且优选地，基本上纯化的部分是其中物体的组合物，其中目标种类占存在的所有大分子种类的至少约50％(以摩尔计)。
通常，基本上纯的组合物将占组合物中存在的所有大分子种类的大于约80％，更优选大于约85％、90％、95%和99％。最优选地，将目标种类纯化至基本同质性 (通过常规检测方法在组合物中不能检测到污染种类)，其中组合物基本上由单一大分子种类组成。
除非在本文中另有说明或与上下文明显矛盾，否则在以下说明书和权利要求中使用冠词“一个/种(a/an)”和“所述”将被理解为涵盖单数和复数两者。术语“包含”、“具有”、“具有化学式“中的“具有”、”包括“和”含有“应理解为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)，除非另有说明。例如，某一式的聚合物支架包括式中所示的所有单体单元，并且还可包括式中未显示的其他单体单元。另外，无论何时在实施方案中使用“包含”或另一个开放式术语，应当理解，可以使用由中间术语“基本上由……组成”或封闭式术语“由……组成”来更狭义地要求保护相同的实施方案。
当与数值结合使用时，术语“约”、“近似地”或“近似”表示包括值的集合或范围。例如，“约X”包括X的±20％、±10％、±5％、±2％、±1％、±0.5％、±0.2％或±0.1％的值的范围，其中X是数值。在一个实施方案中，术语“约”是指比指定值多或少5％的值的范围。在另一个实施方案中，术语“约”是指比指定值多或少2％的值的范围。在另一个实施方案中，术语“约”是指比指定值多或少1％的值的范围。
除非本文另有说明，否则对数值范围的记载仅旨在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的速写方法，并且每个单独的值被并入本说明书中，如同在本文中单独引用的那样。除非另有说明，否则本文使用的范围包括范围的两个限值。例如，表达“x是1到6之间的整数”和“x是1至6的整数”都表示“x是1、2、3、4、5或6”，即术语“在X和Y之间“和“从X到Y的范围”包括X和Y以及它们之间的整数。
除非本文另有说明或上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以任何合适的顺序进行。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地说明本公开，并且不应被解释为对权利要求的范围的限制，除非另有明确说明。说明书中的任何语言都不应被解释为表明任何未声明的要素对于要求保护的内容是必不可少的。
如本文所用的“生物相容的”旨在描述在与体液或活细胞或组织接触时发挥最小破坏性或宿主反应作用的化合物。因此，如本文所用，生物相容性基团是指脂族、环烷基、杂脂族、杂环烷基、芳基或杂芳基部分，其属于如上文和本文所定义的术语生物相容的的定义。如本文所用，术语“生物相容性”还意指化合物表现出与识别蛋白(例如天然存在的抗体，细胞蛋白，细胞和生物系统的其他组分)的最小相互作用，除非这种相互作用是具体期望的。因此，具体旨在引起上述最小相互作用的物质和官能团，例如药物和前药，被认为是生物相容的。优选地(除了旨在具有细胞毒性的化合物，例如抗肿瘤剂)，如果化合物在体外以与预期的全身性体内浓度相似的浓度添加到正常细胞中，导致在相当于化合物体内半衰期(例如，50％的体内施用的化合物被消除/清除所需的时间段)的时间内小于或等于1％的细胞死亡，以及它们在体内的施用诱导最小和医学上可接受的炎症、异物反应、免疫毒性、化学毒性和/或其他此类副作用，则所述化合物是“生物相容的”。在上述句子中，术语“正常细胞”是指不旨在被测试化合物破坏或以其他方式显著影响的细胞。
“可生物降解的”：如本文所用，“可生物降解的”聚合物是对体内生物处理敏感的聚合物。如本文所用，“可生物降解的”化合物或部分是当被细胞摄取时可被溶酶体或其他化学机器分解或通过水解成细胞可重复使用或处置的组分而对细胞没有显著毒性作用的那些化合物或部分。如本文所用的术语“可生物裂解的”具有与“可生物降解的”相同的含义。降解片段优选诱导很少或没有器官或细胞过载或体内由这种过载或其他不利影响引起的病理过程。生物降解过程的实例包括酶促和非酶促水解、氧化和还原。本文期望的用于非酶促水解可生物降解的蛋白-聚合物-药物缀合物(或其组分，例如，可生物降解的聚合物载体和载体与抗体或药物分子之间的接头)的合适条件，例如，包括将生物可降解的缀合物在溶酶体细胞内隔室的温度和pH下暴露在水中。一些蛋白-聚合物-药物缀合物(或其组分，例如，可生物降解的聚合物载体和载体与抗体或药物分子之间的接头)的生物降解也可以在细胞外增强，例如，在动物体的低pH区域中，例如，发炎区域，在活化的巨噬细胞或释放降解促进因子的其他细胞附近。在某些优选的实施方案中，聚合物载体在pH～7.5下的有效尺寸在1至7天内不会可检测地变化，并且保持在原始聚合物尺寸的50％内持续至少数周。另一方面，在pH～5下，聚合物载体优选在1至5天内可检测地降解，并在两周至几个月的时间范围内完全转化为低分子量片段。此类测试中的聚合物完整性可以例如通过尺寸排阻HPLC测量。虽然在某些情况下更快的降解可能是优选的，但通常更期望的是聚合物在细胞中降解的速率不超过细胞对聚合物片段的代谢或排泄速率。在优选的实施方案中，聚合物和聚合物生物降解副产物是生物相容的。
“马来酰亚胺基阻断化合物”：如本文所用，是指可以与马来酰亚胺反应以将其转化为琥珀酰亚胺的化合物，且“马来酰亚胺阻断部分”是指在转化时与琥珀酰亚胺连接的化学部分。在某些实施方案中，马来酰亚胺基阻断化合物是具有末端巯基用于与马来酰亚胺反应的化合物。在一个实施方案中，马来酰亚胺基阻断化合物是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸甲酯、N-甲基半胱氨酸、2-巯基乙醇、3-巯基丙酸、2-巯基乙酸、巯基甲醇(即HOCH2SH)、苄基硫醇(其中苯基被一个或多个亲水取代基取代)、或3-氨基丙烷-1-硫醇。
“亲水性”：术语“亲水性”，因为它涉及例如在聚合物单体单元上或在马来酰亚胺基阻断部分上的取代基，以使它们亲水或水溶性，因此与本领域中该术语的通常含义没有基本上不同，并且表示含有可电离、极性或可极化原子或者可以以其他方式被水分子溶剂化的的化学部分。因此，如本文所用，亲水基团是指脂族、环烷基、杂脂族、杂环烷基、芳基或杂芳基部分，其落入如上定义的术语亲水的定义内。适合的特定亲水性有机部分的实例包括但不限于包含约1至12个原子范围内的原子链的脂族或杂脂族基团，羟基，羟烷基，胺，羧基，酰胺，羧酸酯，硫酯，醛，硝基，异硝基，亚硝基，羟胺，巯基烷基，杂环，氨基甲酸酯，羧酸及其盐，磺酸及其盐，磺酸酯，磷酸及其盐，磷酸酯，聚乙二醇醚，多胺， 聚羧酸酯，聚酯和聚硫酯。在某些实施方案中，亲水取代基包含羧基(COOH)，醛基(CHO)，酮基(COC1-4烷基)，羟甲基(CH2OH)或二醇(例如，CHOH-CH2OH或CH-(CH2OH)2)，NH2，F，氰基，SO3H，PO3H等。
术语“亲水性”由于其与本文公开的聚合物有关，因此通常与本领域中该术语的用法没有不同，并且表示包含如上定义的亲水性官能团的聚合物。在优选的实施方案中，亲水性聚合物是水溶性聚合物。聚合物的亲水性可以通过测定水合能直接测量，或通过两个液相之间的研究确定，或通过具有已知疏水性的固相上的色谱法测定，例如C4或C18。
“聚合物载体”：如本文所用，术语聚合物载体是指聚合物或改性聚合物，其适合于用指定的接头和/或一个或多个具有指定接头的PBRM共价连接至一个或多个药物分子，或者可以被用指定的接头和/或一个或多个具有指定接头的PBRM共价连接至一个或多个药物分子。
“生理条件”：如本文所用，短语“生理条件”涉及活组织的细胞外液中可能遇到的化学(例如，pH，离子强度)和生物化学(例如，酶浓度)条件的范围。对于大多数正常组织，生理pH范围为约7.0至7.4。循环血浆和正常间质液代表正常生理状况的典型例子。
“药物”：如本文所用，术语“药物”是指在施用给有此需要的对象后具有生物活性并提供所需生理作用的化合物(例如活性药物成分)。
“抗血管生成剂”或“血管生成抑制剂”是指小分子量物质、多核苷酸、多肽、分离的蛋白、重组蛋白、抗体或其缀合物或融合蛋白，其直接或间接地抑制血管生成、血管发生或不希望的血管通透性。血管生成抑制剂包括结合和阻断血管生成因子或其受体的血管生成活性的那些试剂。例如，抗血管生成剂是血管生成剂的抗体或其他拮抗剂，包括但不限于VEGF-A或VEGF-A受体(例如，KDR受体或Flt-1受体)的抗体、VEGF-trap、抗PDGFR抑制剂如Gleevec™(甲磺酸伊马替尼)。抗血管生成剂还包括天然血管生成抑制剂，例如血管抑制素，内皮抑素等。
“细胞毒性的”：如本文所用，术语“细胞毒性的”是指对细胞或选定的细胞群(例如癌细胞)有毒。毒性作用可能导致细胞死亡和/或溶解。在某些情况下，毒性作用可能是对细胞的亚致死破坏作用，例如减缓或阻止细胞生长。为了实现细胞毒性作用，药物或前药可以选自DNA损伤剂、微管破坏剂或细胞毒性蛋白或多肽等。
“细胞抑制的”：如本文所用，术语“细胞抑制的”是指抑制或停止细胞生长和/或增殖的药物或其他化合物。
“小分子”：如本文所用，术语“小分子”是指分子，无论是天然存在的还是人工产生的(例如，通过化学合成)，其具有相对低的分子量。优选的小分子具有生物活性，因为它们在动物，优选哺乳动物，更优选人中产生局部或全身作用。在某些优选的实施方案中，小分子是药物，且小分子称为“药物分子”或“药物”或“治疗剂”。在某些实施方案中，药物分子具有小于或等于约5kDa的MW。在其他实施方案中，药物分子具有小于或等于约1.5kDa的MW。在实施方案中，药物分子选自长春花生物碱、澳瑞他汀、倍癌霉素、微管蛋白抑制剂、非天然喜树碱化合物、拓扑异构酶抑制剂、DNA结合药物、激酶抑制剂、MEK抑制剂、KSP抑制剂、卡里奇霉素、SN38、吡咯并苯并二氮杂卓及其类似物。优选但非必要地，药物是已被适当的政府机构或机关(例如FDA)认为安全有效使用的药物。例如，FDA在21 C.F.R. §§ 330.5, 331至361和440至460下列出的人用药物；FDA在21 C.F.R. §§ 500至589下列出的兽医用药物(其通过引用并入本文)，都被认为适合与本发明的亲水性聚合物一起使用。
如本文所用的“药物衍生物”或“经修饰的药物”等是指包含旨在通过本文公开的缀合物递送的药物分子和能够将药物分子连接至聚合物载体的官能团的化合物。
如本文所用的“活性形式”是指在体内或体外表现出预期药效的化合物形式。特别地，当旨在通过本文公开的缀合物递送的药物分子从缀合物释放时，活性形式可以是药物本身或其衍生物，其表现出预期的治疗性质。从缀合物中释放药物可以通过切割将载体连接到聚合物载体上的接头的可生物降解的键来实现。因此，活性药物衍生物可包含接头部分。
“PHF”是指聚(1-羟甲基乙烯羟甲基-甲缩醛)。
如本文所用，术语“聚合物单元”、“单体单元”、“单体”、“单体单元”、“单元”均指聚合物中的可重复结构单元。
如本文所用，除非另有说明，否则聚合物或聚合物载体/支架或聚合物缀合物的“分子量”或“MW”是指未改性聚合物的重均分子量。
如本文所用，“免疫检查点抑制剂(Immune checkpoint inhibitor)”或“免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibiting agent)”或“免疫检查点阻断剂”或“免疫检查点调节剂”是指结合抑制性免疫检查点蛋白并阻断其活性从而使免疫系统能够识别肿瘤细胞并允许持续的免疫疗法反应的试剂。抑制可以是竞争性的或非竞争性的抑制，所述非竞争性的抑制可以是空间的或者变构的。在免疫检查点蛋白是免疫刺激蛋白的情况下，免疫检查点抑制剂起促进免疫刺激蛋白的活性的作用，例如通过结合和激活刺激性免疫检查点蛋白或通过通过干扰例如通过结合或失活刺激性免疫检查点蛋白的抑制剂来抑制。免疫检查点抑制剂的实例是抗免疫检查点蛋白抗体。
如本文所用的“免疫检查点”是指免疫系统的抑制途径，其负责维持自身耐受性并调节外周组织中生理免疫应答的持续时间和幅度，以使附带组织损伤最小化。免疫检查点由免疫检查点蛋白调节。
如本文所用的“免疫检查点蛋白”是指蛋白，通常是调节或调整免疫应答程度的受体(例如CTLA4或PD-1)或配体(例如PD-L1)。免疫检查点蛋白可以是抑制性的或刺激性的。具体地，免疫检查点蛋白对免疫应答的激活具有抑制作用。因此，抑制性免疫检查点蛋白的抑制起作用以刺激或激活免疫应答，例如T细胞活化和增殖。
如本文所用的免疫检查点抑制剂的“靶标”是免疫检查点抑制剂或免疫检查点抑制剂与其结合以阻断活性的免疫检查点蛋白。通常，免疫检查点抑制剂特异性结合靶标。例如，称为伊匹单抗的示例性抗-CTLA4抗体的靶标是CTLA4。
如本文所用的“组合疗法”是指其中给予对象两种或更多种治疗剂，例如至少两种或至少三种治疗剂，用于治疗单一疾病的治疗。出于本文的目的，组合疗法包括用NaPi2b靶向抗体-药物缀合物和免疫检查点抑制剂的疗法。
如本文所用，“共同施用(co-administration)”、“共同施用(co-administering)”或“共同施用的”是指至少两种不同的治疗剂在足够接近的时间内施用。这种施用可以以任何顺序进行，包括同时施用，以及间隔几秒高至几天的时间间隔顺序。这种施用还可包括一种药剂和/或独立地另一种药剂的超过一次的施用。药剂的施用可以是相同或不同的途径。
如本文所用，“抗-CTLA4抗体”是指特异性结合细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白44(CTLA4)或其可溶性片段并阻断配体与CTLA4结合从而导致CTLA4的竞争性抑制和抑制CTLA4介导的T细胞活化抑制的任何抗体。因此，抗CTLA4抗体是CTLA4抑制剂。本文提及的抗CTLA4抗体包括全长抗体及其衍生物，例如特异性结合CTLA4的其抗原结合片段。示例性的抗-CTLA4抗体包括但不限于伊匹单抗或曲美木单抗，或其衍生物或抗原结合片段。
如本文所用，“细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4”(CTLA4；也称为CD152)抗原是指免疫球蛋白超家族的抑制性受体，其被配体诸如CD80(也称为B7-1)和CD86(也称为B7-2)的结合。CTLA4包括人和非人蛋白。具体地，CTLA4抗原包括人CTLA4，其具有SEQ ID NO：10中所示的氨基酸序列(参见例如GenBank登录号AAL07473.1)。
如本文所用，“抗PD-1抗体”是指特异性结合程序性细胞死亡蛋白1 (PD-1)或其可溶性片段并阻断配体与PD-1结合的从而导致竞争性抑制PD-1和抑制PD-1介导的T细胞活化抑制的任何抗体。因此，抗PD-1抗体是PD-1抑制剂。本文提及的抗PD-1抗体包括全长抗体及其衍生物，例如与PD-1特异性结合的抗原结合片段。示例性的抗PD-1抗体包括但不限于纳武单抗、MK-3475、皮地利珠单抗或其衍生物或抗原结合片段。
如本文所用，“程序性细胞死亡蛋白1”(PD-1)抗原是指抑制性受体，其是1型膜蛋白并且由配体诸如PD-L1和PD-L2 (其是B7家族的成员)结合。PD-1包括人和非人蛋白。具体地，PD-1抗原包括人PD-1，其具有SEQ ID NO：299所示的氨基酸序列(参见例如UniProt登录号Q15116.3)。如本文所用，抗PD-L1抗体指特异性结合程序性死亡配体1 (PD-L1)或其可溶性片段并阻断配体与PD-1结合从而产生竞争性抑制PD-1和抑制PD-1介导的T细胞活性抑制的抗体。因此，抗PD-L1抗体是PD-1抑制剂。本文提及的抗PD-L1抗体包括全长抗体及其衍生物，例如其特异性结合PD-L1的抗原结合片段。示例性抗PD-L1抗体包括但不限于BMS-936559、MPDL3280A，MEDI4736或其衍生物或抗原结合片段。
如本文所用，“给药方案”或“剂量方案”是指施用的药剂(例如，含有NaPi2b靶向抗体-药物缀合物的组合物)的量和施用频率。给药方案是待治疗的疾病或病况的函数，因此可以变化。
如本文所用，施用的“频率”是指连续施用治疗之间的时间。例如，频率可以是天、周或月。例如，频率可以是每周一次以上，例如，一周两次，一周三次，一周四次，一周五次，一周六次或每天。频率也可以是一周，两周，三周或四周。具体频率是所治疗的具体疾病或病况的函数。通常，频率超过每周一次，且通常每周两次。
如本文所用，“施用周期”是指经连续施用重复的酶和/或第二种药剂的给药方案的重复时间表。例如，示例性给药周期是28天周期，且每周施用两次，持续三周，然后是一周的停止给药。
如本文所用，当提及基于对象的mg/kg的剂量时，平均人类对象被认为具有约70kg-75kg例如70kg的质量和体表面积(BSA)为1.73 m。如本文所用，通过治疗(例如通过施用药物组合物或其他治疗剂)改善具体疾病或病症的症状是指病况的症状或不良反应的任何减轻(无论是永久的还是暂时的、持续的或短暂的)，例如，减少与NaPi2b靶向抗体-药物缀合物相关或施用其时发生的不良反应。
如本文所用，“治疗(treating或treat)”描述了为了对抗疾病、病况或病症而对患者的管理和护理，并且包括施用本公开的缀合物或其药物组合物以减轻疾病、病况或病症的症状或并发症，或以消除疾病、病况或病症。
如本文所用，“预防(prevention或prophylaxis)”是指降低发生疾病或病框的风险，或减少或消除疾病、病况或病症的症状或并发症的发作。
术语“有效量”或“足够量”，因为它是指活性剂，因此是指引发所需生物反应所必需的量。如本文所用，“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指至少足以产生可检测治疗效果的药剂、化合物、材料或含有化合物的组合物的量或数量。可以通过本领域已知的任何测定方法检测该效果。对象的精确有效量取决于对象的体重、大小和健康；病况的性质和程度；和选择用于施用的治疗剂。
“对象”包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如人、灵长类动物、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，哺乳动物是人。
如本文所用，“单位剂型(unit dose form或unit dosage form)”是指适用于人和动物对象并且如本领域已知的那样单独包装的物理上离散的单位。
如本文所用，单一剂量制剂是指作为单剂量的制剂。
如本文所用，“试剂盒”是指组分的组合，例如本文的组合物和用于目的(包括但不限于重构，活化)的另一物品和用于递送、施用、诊断和评估生物活性或特性的仪器/装置的组合。试剂盒任选地包括使用说明。
本公开旨在包括本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但质量数不同的那些原子。作为一般实例而非限制，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括C-13和-14。
本公开旨在包括该化合物的所有异构体，其涉及并包括光学异构体和互变异构体，其中光学异构体包括对映异构体和非对映异构体、手性异构体和非手性异构体，并且光学异构体包括分离的光学异构体以及包括外消旋和非外消旋混合物的光学异构体的混合物，其中异构体可以是分离的形式或处于与一种或多种其它异构体的混合物中。
NaPi2b抗体
本文公开的抗体-药物缀合物包括特异性识别NaPi2b并具有抑制NaPi2b活性的能力的单克隆抗体。
本文公开的抗体-药物缀合物中使用的示例性抗体包括，例如，本文中称为XMT1535抗体和/或10H1.11.4B抗体的抗体。这些抗体显示出对人NaPi2b的特异性，并且它们已显示在体外抑制NaPi2b的功能活性。
本文所述的每一NaPi2b单克隆抗体包括重链(HC)、重链可变区(VH)、轻链(LC)和轻链可变区(VL)，如下文呈现的氨基酸和相应的核酸序列中所示。每种抗体的可变重链区和可变轻链区在下面的氨基酸序列中加阴影。重链和轻链的互补决定区(CDR)在下面呈现的氨基酸序列中加下划线。包含XMT 1535抗体的互补决定区(CDR)的氨基酸如E.A. Kabat等人定义(参见Kabat, E.A等人，Sequences of Protein of immunological interest,Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US GovernmentPrinting Office (1991))并公开在美国专利8,603,474中，并且包含10H1.11.4B抗体的CDR的氨基酸如美国专利号8,535,675中所定义。
> XMT 1535重链氨基酸序列(重链可变区(SEQ ID NO：3)+ IgG1重链恒定区(SEQID NO：11))
> XMT 1535轻链氨基酸序列(轻链可变区(SEQ ID NO：4)+轻链恒定区(SEQ ID NO：12))
> 10H1.11.4B重链氨基酸序列(重链可变区(SEQ ID NO：16)+ IgG1重链恒定区(SEQID NO：13))
> 10H1.11.4B轻链氨基酸序列(轻链可变区(SEQ ID NO：17)+轻链恒定区(SEQ ID NO：12))
本公开还包括与如本文所述的抗体结合相同表位或与其交叉竞争结合相同表位的抗体。例如，本文公开的抗体特异性结合NaPi2b，其中抗体结合包含人NaPi2b上的一个或多个氨基酸残基的表位(例如，GenBank登录号O95436.3)。
本文公开的抗体特异性结合包含以下氨基酸序列的全长人NaPi2b上的表位：
本文公开的抗体特异性结合人NaPi2b的细胞外结构域(ECO)上的表位。
本领域技术人员将认识到，可以在不进行过度实验的情况下确定单克隆抗体是否具有与本文公开的单克隆抗体(例如，XMT 1535、10H1.11.4B)相同的特异性，这通过确定前者是否阻止后者与天然结合配偶体或已知与NaPi2b相关的其他分子的结合。如果测试的单克隆抗体与本文公开的单克隆抗体竞争，如通过由本文公开的单克隆抗体的结合降低所示，则两种单克隆抗体结合相同或紧密相关的表位。
确定单克隆抗体是否具有本文公开的单克隆抗体的特异性的另一种方法是将本文公开的单克隆抗体与可溶性NaPi2b(所述单克隆抗体通常与其反应)预孵育，然后加入待测单克隆抗体以确定是否被测试的单克隆抗体在结合NaPi2b的能力方面受到抑制。如果被测试的单克隆抗体被抑制，那么，在所有可能性中，它具有与本文公开的单克隆抗体相同或功能等同的表位特异性。
筛选本文公开的单克隆抗体也可以例如通过测量NaPi2b介导的活性，并确定测试单克隆抗体是否能够调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b活性来进行。
例如，使用本领域内已知的可用于产生针对NaPi2b、或针对其衍生物、片段、类似物、同源物或直系同源物的单克隆抗体的各种方法产生NaPi2b抗体。(参见，例如，Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, 和 Lane D, 1988, Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY，通过引用并入本文)。完全人抗体是其中轻链和重链的整个序列包括CDR来自人基因的抗体分子。此类抗体在本文中称为“人抗体”或“完全人抗体”。例如，使用下文提供的实施例中描述的程序制备人单克隆抗体。也可以使用三源杂交瘤；人B细胞杂交瘤技术(参见Kozbor, 等人, 1983 Immunol Today 4:72)；以及用于产生人单克隆抗体的EBV杂交瘤技术(参见Cole, 等人, 1985于:Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., 第77-96页)制备人单克隆抗体。可以使用人单克隆抗体，并且其可以通过使用人杂交瘤(参见Cote, 等人,1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030)或通过用EB病毒体外转化人B细胞(参见Cole, 等人, 1985 于: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss,Inc., 第77-96页)来产生。
通过众所周知的技术纯化抗体，例如使用蛋白A或蛋白G的亲和层析，其主要提供免疫血清的IgG级分。随后或可选地，可以将作为所寻求的免疫球蛋白靶标的特异性抗原或其表位固定在柱上以通过免疫亲和层析纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化例如由D.Wilkinson (The Scientist, 由The Scientist, Inc.出版, Philadelphia PA, Vol.14, No. 8 (April 17, 2000), 第25-28页)所讨论。
调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b活性的单克隆抗体例如通过用膜结合的和/或可溶性NaPi2b(诸如例如鼠、大鼠或人NaPi2b)或其免疫原性片段、衍生物或变体免疫动物而产生。或者，用含有编码NaPi2b的核酸分子的载体转染的细胞(使得NaPi2b表达并与转染细胞的表面结合)免疫动物。或者，通过筛选含有结合NaPi2b的抗体或抗原结合域序列的文库来获得抗体。该文库例如在噬菌体中作为与噬菌体外壳蛋白蛋白或肽融合物制备，所述噬菌体外壳蛋白在组装的噬菌体颗粒和噬菌体颗粒中包含的编码DNA序列的表面上表达(即“噬菌体展示的文库”)。然后筛选由骨髓瘤/ B细胞融合物产生的杂交瘤与NaPi2b的反应性。另外，抗体通过选自如例如以下中所述的酵母抗体展示文库和酵母文库呈递系统并且任选地在其中优化：Blaise L, Wehnert A, Steukers MP, vanden Beucken T, Hoogenboom HR, Hufton SE. Construction and diversification ofyeast cell surface displayed libraries by yeast mating: application to theaffinity maturation of Fab antibody fragments. Gene. 2004 Nov 24;342 (2):211-8; Boder ET, Wittrup KD. Yeast surface display for screening combinatorialpolypeptide libraries. Nat Biotechnol. 1997 Jun;15(6):553-7; Kuroda K, UedaM. Cell surface engineering of yeast for applications in white biotechnology.Biotechnol Lett. 2011 Jan;33 (1):1-9. doi: 10.1007/s10529-010-0403-9. Review;Lauer TM, Agrawal NJ, Chennamsetty N, Egodage K, Helk B, Trout BL.Developability index: a rapid in silico tool for the screening of antibodyaggregation propensity. J Pharm Sci. 2012 Jan;101 (1):102-15; Orcutt K.D. 和Wittrup K.D. (2010), 207-233 doi: 10.1007/978-3-642-01144-3_15; Rakestraw JA,Aird D, Aha PM, Baynes BM, Lipovsek D. Secretion-and-capture cell-surfacedisplay for selection of target-binding proteins. Protein Eng Des Sel. 2011Jun;24(6):525-30; US 8,258,082; US 6,300,064; US 6,696,248; US 6,165,718; US6,500,644; US 6,291,158; US 6,291,159; US 6,096,551; US 6,368,805; US 6,500,644。示例性酵母文库呈递系统描述于例如WO2008118476; WO2009/036379;WO2010105256；和WO2012009568。在某些实施方案中，设计此类酵母抗体展示文库或酵母文库呈递系统以模拟或反映人免疫前抗体全部组分的多样性特征。在某些实施方案中，此类酵母抗体展示文库多样性或酵母文库呈递系统多样性在计算机中产生。在某些实施方案中，此类酵母抗体展示文库或酵母文库呈递系统包含酵母属酵母细胞，例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞。在某些实施方案中，此类酵母抗体展示文库或酵母文库呈递系统包含毕赤酵母细胞。
例如，使用杂交瘤方法制备单克隆抗体，例如Kohler和Milstein, Nature, 256:495 (1975)所描述的那些。在杂交瘤方法，将小鼠、仓鼠或其它合适的宿主动物通常用免疫剂免疫以引发淋巴细胞，所述淋巴细胞产生或能够产生特异性结合所述免疫剂的抗体。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。
免疫剂将通常包括蛋白抗原、其片段或其融合蛋白。通常，如果需要人源细胞，则使用外周血淋巴细胞，或者如果需要非人哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，以形成杂交瘤细胞(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press,(1986) 第59-103页)。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿动物、牛和人来源的骨髓瘤细胞。通常，使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，所述培养基优选含有一种或多种抑制未融合的永生化细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常包括次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(“HAT培养基”)，这些物质阻止HGPRT-缺陷细胞的生长。
优选的永生化细胞系是这样的细胞系，其有效融合，通过选择的抗体产生细胞支持抗体的稳定高水平表达，并且对诸如HAT培养基的培养基敏感。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其可以例如从Salk Institute Cell Distribution Center, SanDiego, California and the American Type Culture Collection, Manassas,Virginia获得。还描述了人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系用于产生单克隆抗体。(参见Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur 等人, Monoclonal AntibodyProduction Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York,(1987)，第51-63页))。
然后可以测定其中培养杂交瘤细胞的培养基中针对抗原的单克隆抗体的存在。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定法测定，例如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)。此类技术和测定在本领域中是已知的。单克隆抗体的结合亲和力可以例如通过Munson和Pollard, Anal.Biochem., 107:220 (1980)的斯卡查德分析来确定。此外，在单克隆抗体的治疗应用中，重要的是鉴定对靶抗原具有高度特异性和高结合亲和力的抗体。
在鉴定出所需的杂交瘤细胞后，可以通过有限稀释程序亚克隆所述克隆并通过标准方法培养。(参见Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,Academic Press, (1986) 第59-103页). 用于此目的的合适培养基包括例如Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在体内作为哺乳动物的腹水生长。
由亚克隆分泌的单克隆抗体可以通过常规免疫球蛋白纯化程序从培养基或腹水中分离或纯化，所述纯化程序例如蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析。
单克隆抗体也可以通过重组DNA方法制备，例如美国专利No.4,816,567中描述的那些。编码本文公开的单克隆抗体的DNA可以使用常规程序容易地分离和测序(例如，通过使用能够特异性结合编码鼠抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。本文公开的杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将其转染入宿主细胞，如猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或不以其他方式产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞，以获得重组宿主细胞中单克隆抗体的合成。DNA也可以被修饰，例如，通过用人重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源鼠序列(参见美国专利号4,816,567；Morrison, Nature368, 812-13 (1994))或通过共价连接免疫球蛋白编码序列至非免疫球蛋白多肽编码序列的全部或部分。这种非免疫球蛋白多肽可以取代本文公开的抗体的恒定结构域，或者可以取代本文公开的抗体的一个抗原结合位点的可变结构域，以产生嵌合二价抗体。
本文公开的单克隆抗体包括完全人抗体或人源化抗体。这些抗体适合于对人施用而不会引起人对所施用的免疫球蛋白的免疫应答。
例如，使用下文提供的实施例中描述的程序产生人源化或完全人NaPi2b抗体。
在其他替代方法中，开发NaPi2b抗体，例如，使用用仅含有人序列的抗体的噬菌体展示方法。这些方法在本领域中是公知的，例如，在WO92/01047和美国专利号No.6,521,404中，其通过引用并入本文。在该方法中，使用天然或重组来源的NaPi2b筛选携带轻链和重链的随机对的噬菌体组合文库。在另一种方法中，NaPi2b抗体可以通过一种方法产生，其中该方法的至少一个步骤包括用人NaPi2b蛋白免疫转基因非人动物。在该方法中，该异种非人动物的一些内源性重链和/或κ轻链基因座已被失效，并且不能进行响应抗原而产生编码免疫球蛋白的基因所需的重排。此外，至少一个人重链基因座和至少一个人轻链基因座已稳定地转染到动物体内。因此，响应于施用的抗原，人基因座重排以提供编码对抗原具有免疫特异性的人可变区的基因。因此，在免疫后，XenoMouse产生分泌完全人免疫球蛋白的B细胞。
本领域众所周知用于产生异种非人动物的各种技术。例如，参见美国专利号6,075,181和6,150,584，其全部内容通过引用并入本文。该一般策略与1994年发表的第一批XenoMouse™品系的产生有关。参见Green等人Nature Genetics 7:13-21 (1994)，其全部内容其通过引用并入本文。还参见美国专利号6,162,963、6, 150,584、6, 114,598、6,075,181和5,939,598和日本专利号3 068 180 B2、3 068 506 B2和3 068 507 B2和欧洲专利号EP 0 463 151 B1和国际专利申请号WO 94/02602、WO 96/34096、WO 98/24893、WO 00/76310及相关同族成员。
在一种替代方法中，其他人利用“小基因座”方法，其中通过包含来自Ig基因座的片段(单个基因)来模拟外源Ig基因座。因此，将一个或多个VH基因、一个或多个DH基因、一个或多个JH基因、μ恒定区和第二恒定区(优选γ恒定区)形成在用于插入动物的构建体中。参见例如美国专利号5,545,806; 5,545,807; 5,591,669; 5,612,205;5,625,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,643,763; 5,661,016; 5,721,367; 5,770,429; 5,789,215; 5,789,650; 5,814,318; 5,877; 397; 5,874,299; 6,023,010；和6,255,458；和欧洲专利号0 546 073 B1；和国际专利申请号WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884和相关的同族成员。
还已经证明了从小鼠中产生人抗体，其中通过微细胞融合，大段染色体或整个染色体被引入。参见欧洲专利申请号773 288和843 961。
人抗小鼠抗体(HAMA)反应已使该行业制备嵌合或其他人源化抗体。虽然嵌合抗体具有人恒定区和免疫可变区，但预期将观察到某些人抗-嵌合抗体(HACA)反应，特别是在抗体的慢性或多剂量使用中。因此，期望提供针对NaPi2b的完全人抗体，以便削弱或以其他方式减轻HAMA或HACA反应的关注和/或影响。
具有降低的免疫原性的抗体的产生也通过使用合适的文库的人源化、嵌合化和展示技术来实现。应当理解，可以使用本领域熟知的技术将鼠抗体或来自其他物种的抗体人源化或灵长类化。参见例如Winter和Harris Immunol Today 14:43 46(1993)和Wright等人Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)。可以通过重组DNA技术工程改造目标抗体，以用相应的人序列取代CH1、CH2、CH3、铰链结构域和/或框架结构域(参见WO92102190和美国专利号5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,792; 5,714,350；和5,777,085)。此外，Ig cDNA用于构建嵌合免疫球蛋白基因的用途是本领域已知的(Liu等人，P.N.A.S. 84:3439 (1987)和J. Immunol. 139:3521 (1987))。从产生抗体的杂交瘤或其他细胞中分离mRNA并用于产生cDNA。可以使用特异性引物通过聚合酶链反应扩增目的cDNA(美国专利号4,683,195和4,683,202)。或者，制备并筛选文库以分离目的序列。然后将编码抗体可变区的DNA序列与人恒定区序列融合。人恒定区基因的序列可以在Kabat等人(1991) Sequences of Proteins of immunological Interest, N.I.H. 出版号91-3242中找到。人C区基因可从已知克隆中容易地获得。同种型的选择将由期望的效应子功能指导，例如补体固定或抗体依赖性细胞毒性中的活性。优选的同种型是IgG1、IgG3和IgG4。可以使用人轻链恒定区κ或λ中的任一个。然后通过常规方法表达嵌合的人源化抗体。
此外，可以使用本领域熟知的技术通过展示类型技术产生人抗体或来自其他物种的抗体，所述展示类型技术包括但不限于噬菌体展示、逆转录病毒展示、核糖体展示和其他技术，并且所得分子可以进行额外的成熟，例如亲和力成熟，因为这种技术是本领域熟知的。Wright等人Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992), Hanes和PlückthunPNAS USA 94:4937-4942 (1997) (核糖体展示), Parmley 和Smith Gene 73:305-318(1988) (噬菌体展示), Scott, TIBS, vol. 17:241-245 (1992), Cwirla 等人 PNASUSA 87:6378-6382 (1990), Russel 等人 Nucl. Acids Research 21:1081-1085(1993), Hoganboom 等人 Immunol. Reviews 130:43-68 (1992), Chiswell和McCafferty TIBTECH; 10:80-8A (1992)，和美国专利号5,733,743。如果利用展示技术产生非人的抗体，则可以如上所述将这些抗体人源化。
使用这些技术，可以针对表达NaPi2b的细胞、可溶形式的NaPi2b、其表位或肽以及对其表达文库产生抗体(参见例如美国专利号5,703,057)，其随后可以如上所述针对本文所述的活性进行筛选。
本文公开的NaPi2b抗体可以通过含有编码上述单链抗体的DNA区段的载体来表达。
这些可包括载体、脂质体、裸DNA、佐剂辅助DNA、基因枪、导管等。载体包括如WO93/64701中所述的化学缀合物，其具有靶向部分(例如，细胞表面受体的配体)和核酸结合部分(例如，聚赖氨酸)，病毒载体(例如DNA或RNA病毒载体)，融合蛋白，例如PCT/US 95/02140 (WO 95/22618)中所述的，其是含有靶部分(例如，对靶细胞特异的抗体)和核酸结合部分(例如，鱼精蛋白)的融合蛋白，质粒，噬菌体等。载体可以是染色体的、非染色体的或合成的。
优选的载体包括病毒载体、融合蛋白和化学缀合物。逆转录病毒载体包括莫洛尼鼠白血病病毒。DNA病毒载体是优选的。这些载体包括痘病毒载体，例如正痘病毒或禽痘病毒载体，疱疹病毒载体例如I型单纯疱疹病毒(HSV)载体(参见Geller, A. I. 等人, J.Neurochem, 64:487 (1995); Lim, F., 等人, in DNA Cloning: Mammalian Systems,D. Glover, 编辑 (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995); Geller, A. I. 等人, Proc Natl. Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993); Geller, A. I., 等人, ProcNatl. Acad. Sci USA 87:1149 (1990)，腺病毒载体(参见LeGal LaSalle 等人,Science, 259:988 (1993); Davidson, 等人, Nat. Genet 3:219 (1993); Yang, 等人,J. Virol. 69:2004 (1995) and Adeno-associated Virus Vectors (参见Kaplitt, M.G. 等人, Nat. Genet. 8:148 (1994)。
痘病毒载体将基因导入细胞质中。正痘病毒载体仅导致核酸的短期表达。腺病毒载体、腺相关病毒载体和单纯疱疹病毒(HSV)载体优选用于将核酸导入神经细胞。腺病毒载体导致比腺相关病毒(约4个月)更短期的表达(约2个月)，而腺相关病毒反过来短于HSV载体。选择的特定载体将取决于靶细胞和所治疗的病况。导入可以通过标准技术，例如感染、转染、转导或转化。基因转移模式的实例包括例如裸DNA、CaPO4沉淀、DEAE葡聚糖、电穿孔、原生质体融合、脂质转染、细胞显微注射和病毒载体。
载体可用于基本上靶向任何期望的靶细胞。例如，立体定位注射可用于将载体(例如，腺病毒、HSV)引导至所需位置。另外，可以使用微泵输注系统(例如SynchroMed输注系统)通过脑室内(icv)输注来递送颗粒。基于整体流动的方法(称为对流)也被证明在将大分子递送到脑的扩展区域方面是有效的，并且可以用于将载体递送至靶细胞。(参见Bobo等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2076-2080 (1994); Morrison 等人, Am. J.Physiol. 266:292-305 (1994))。可以使用的其他方法包括导管、静脉内、肠胃外、腹膜内和皮下注射，以及口服或其他已知的施用途径。
这些载体可用于表达可以多种方式使用的大量抗体。例如，检测样品中NaPi2b的存在。该抗体也可用于试图结合并破坏NaPi2b相关的信号传导。
NaPi2b靶向抗体缀合物：
本公开还涉及免疫缀合物，其包含与细胞毒性剂(例如毒素)(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性缀合物)缀合的抗体。
可以使用的酶活性毒素及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒素A链、蒴莲素A链、α-八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、香石竹毒蛋白、美洲商陆(Phytolacca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(moniordica charantia)抑制蛋白、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(saponaria officinalis)抑制蛋白、白树毒素、mitogellin、局限曲霉素、酚霉素、伊诺霉素和单端孢霉烯毒素。有多种放射性核素可用于生产放射性缀合抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。
使用多种双功能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二巯基)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(如己二酸二甲酯HCL)、活性酯(如辛二酸二琥珀酰亚胺酯)、醛(如戊二醛)、双叠氮基化合物(如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮基衍生物(如双-(对-重氮基苯甲酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(如甲代亚苯基2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)来制备抗体和细胞毒性剂的缀合物。例如，可以如Vitetta等人，Science 238: 1098 (1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14-标记的1-异硫氰酸基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。(参见WO94 / 11026)。
本领域普通技术人员将认识到，多种可能的部分可以与本文公开的所得抗体偶联。(例如，参见“Conjugate Vaccines”, Contributions to Microbiology andImmunology, J. M. Cruse和R. E. Lewis, Jr (编辑), Carger Press, New York,(1989)，其全部内容通过引用并入本文)。
偶联可以通过任何将结合两个分子的化学反应来完成，只要抗体和其他部分保留它们各自的活性即可。该连接可包括许多化学机制，例如共价结合、亲和结合、插入、配位结合和络合。然而，优选的结合是共价结合。共价结合可以通过现有侧链的直接缩合或通过掺入外部桥连分子来实现。许多二价或多价连接剂可用于将蛋白分子(例如本公开的抗体)偶联至其他分子。例如，代表性的偶联剂可包括有机化合物，例如硫酯、碳二亚胺、琥珀酰亚胺酯、二异氰酸酯、戊二醛、重氮苯和六亚甲基二胺。该列表并非旨在穷举本领域已知的各类偶联剂，而是更常见的偶联剂的示例(参见Killen和Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen 等人, Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 以及Vitetta 等人, Science 238:1098 (1987)。
优选的接头描述于文献中。(参见，例如，Ramakrishnan, S. 等人, Cancer Res.44:201-208 (1984)描述了MBS (M-马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)的用途)。还参见美国专利号5,030,719，其描述了通过寡肽接头与抗体偶联的卤代乙酰肼衍生物的用途。特别优选的接头包括：(i)EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐：(ii)SMPT (4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)-甲苯(PierceChem. Co., Cat. (21558G)；(iii)SPDP(琥珀酰亚胺基-6 [3-(2-吡啶基二硫代))丙酰胺基]己酸酯(Pierce Chem. Co., Cat.# 21651G)；(iv)磺基-LC-SPDP(硫代琥珀酰亚胺基6[3-(2-吡啶基二硫代)-丙酰胺]己酸酯(Pierce Chem. Co. Cat.# 2165-G)；(v)缀合至EDC的磺基-NHS (N-羟基磺基琥珀酰亚胺：Pierce Chem. Co., Cat.# 24510)。
上述接头含有具有不同属性的组分，因此导致具有不同物理化学性质的缀合物。例如，烷基羧酸盐的磺基-NHS酯比芳族羧酸盐的磺基-NHS酯更稳定。含有NHS-酯的接头比磺基-NHS酯类溶解性差。此外，接头SMPT含有空间位阻二硫键，并且可以形成具有增加的稳定性的缀合物。二硫键通常不如其它键那样稳定，因为二硫键在体外被切割，导致可用的缀合物较少。特别是磺基-NHS可以增强碳二亚胺偶联的稳定性。当与磺基-NHS共同使用时，碳二亚胺偶联(例如EDC)形成比单独的碳二亚胺偶联反应更耐水解的酯。
在一个方面，本文所述的缀合物包括直接或间接地连接至一个或多个独立地包含聚(1-羟甲基乙烯基羟甲基-甲缩醛)(PHF)的具有范围为约2kDa至约40kDa的分子量的一个或多个携带D的聚合物支架的分离的NaPi2b靶向抗体，所述抗体特异性结合SLC34A2的胞外区，其中所述一个或多个携带D的聚合物支架中的每一个独立地具有式(Ic)：
其中：
D的每次出现独立地是治疗或诊断剂；
LD1是含羰基的部分；
中的每次出现独立地是含有可生物降解键的第一接头，使得当键断裂时，D以活性形式释放以用于其预期的治疗效果；且LD1和D之间的中的表示D与LD1的直接或间接连接；
的每次出现独立地为尚未与Napi2b抗体连接的第二接头，其中LP2是含有已与分离的抗体的官能团形成共价键的官能团的部分，并且LD1 和 LP2之间的表示LP2至LD1的直接或间接连接，且第二接头的每次出现与第一接头的每次出现不同；
的每次出现独立地是第三接头，其将每个携带D的聚合物支架连接至分离的抗体，其中与LP2连接的末端表示在LP2的官能团与分离的抗体的官能团之间形成共价键后，LP2与分离的抗体的直接或间接连接；并且第三接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3是0到约18的整数，
m4是1至约10的整数；
m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约15至约300；并且，与分离的抗体连接的LP2的总数为10或更小。
缀合物可包括一个或多个下列特征。
例如，在式(Ic)中，m1是1至约120的整数(例如，约1-90)和/或m3是1至约10的整数(例如，约1-8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有约6kDa至约20kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约45至约150)时，m2是2至约20的整数，m3是0至约9的整数，m4是1至约10的整数，和/或m1是1至约75的整数(例如，m1是约4-45) 。
例如，当式(Ic)中的PHF具有约8kDa至约15kDa的分子量(即m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约60至约110)时，m2是2至约15的整数，m3是0至约7的整数，m4是1至约10的整数，和/或m1是1至约55的整数(例如，m1约为4- 30)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有约2kDa至约20kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约5至约150)时，m2是1至约20的整数，m3是0至约10的整数(例如，m3范围为0至约9)，m4是1至约8的整数，和/或m1是1至约70的整数，并且与分离的抗体连接的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有约3kDa至约15kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约在20至约110)时，m2是2至约15的整数，m3是0至约8的整数(例如，m3范围为0至约7)，m4是1至约8的整数，和/或m1是2到约50的整数，并且与分离的抗体连接的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，当式(Ic)中的PHF具有约5kDa至约10kDa的分子量(即，m、m1、m2、m3和m4的总和范围为约40至约75)时，m2为约2至约10的整数(例如，m2约为3-10)，m3是0至约5的整数(例如，m3范围为0至约4)，m4是1至约8的整数(例如，m4范围为1到约5)，和/或m1是约2至约35的整数(例如，m1为约5-35)，并且与分离的抗体连接的LP2的总数范围为约2至约8 (例如，约2、3、4、5、6、7或8)。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa的分子量时，(例如，约6-20kDa或约8-15kDa，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20，或约2-15或约3-10或约2-10)。该支架可用于例如缀合具有分子量为40kDa或更高(例如，60kDa或更高；80kDa或更高；100kDa或更高；120kDa或更高；140kDa或更高；160kDa或更高，180 kDa或更高，或200 kDa或更高，或约40-200 kDa、40-180 kDa、40-140 kDa、60-200 kDa、60-180 kDa、60-140 kDa、80 -200kDa、80-180kDa、80-140kDa、100-200kDa、100-180kDa、100-140kDa或140-150kDa)的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1：1至约1:10、约1：1至约1：9、约1：1至约1：8、约1：1至约1：7、约1：1至约1：6、约1：1至约1：5、约1：1至约1：4、约1：1至约1：3、约1：1至约1：2、约1：2至约1：4、约1：2至约1：3、约1：3至约1：4、或约1：1至约1：5。
例如，当PHF具有2kDa至40kDa的分子量时，(例如，约6-20kDa或约8-15kDa，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20，或约2-15或约3-10或约2-10)。该支架可用于例如缀合具有分子量为140kDa至180kDa或140kDa至150kDa的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1：1至约1：10、约1：1至约1：9、约1：1至约1：8、约1：1至约1：7、约1：1至约1：6、约1：1至约1：5、约1：1至约1：4、约1：1至约1：3、约1：1至约1：2、约1：2至约1：4、约1：2至约1：3、约1：3至约1：4、或约1：3至约1：5。
该分子量范围内的NaPi-2b抗体包括但不限于例如全长抗体，例如IgG、IgM。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa的分子量时，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20或约2-15或约3-10或约2-10)。该支架可用于例如缀合具有分子量为60kDa至120kDa的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1：1至约1：10、约1：1至约1：9、约1：1至约1：8、约1：1至约1：7、约1：1至约1：6、约1：1至约1：5、约1：1至约1：4、约1：1至约1：3、约1：1至约1：2、约1：2至约1：4、约1：2至约1：3、约1：3至约1：4、或约1：3至约1：5。
在某些实施方案中，D是治疗剂。在某些实施方案中，治疗剂是具有≤约5kDa、≤约4kDa、≤约3kDa、≤约1.5kDa或≤约1kDa的分子量的小分子。
在某些实施方案中，治疗剂具有约小于1 nM的IC50。
在另一个实施方案中，治疗剂具有约大于1nM的IC50，例如，治疗剂具有约1至50nM的IC50。
一些具有大于约1nM的IC50的治疗剂(例如，“效力较低的药物”)不适于使用本领域公认的缀合技术与抗体缀合。不希望受理论束缚，这种治疗剂具有不足以使用常规技术用于靶向抗体-药物缀合物的效力，因为使用本领域公认的技术无法在不导致缀合物减弱的药代动力学和生理化学特性的情况下将药物的足够拷贝(即，多于8个)缀合。然而，使用本文所述的缀合策略可以实现足够高的这些较低效力药物载荷，从而实现治疗剂的高载荷，同时保持所需的药代动力学和生理化学性质。因此，本公开还涉及抗体-聚合物-药物缀合物，其包含分离的抗体、PHF和至少八个治疗剂部分，其中D是澳瑞他汀、多拉司他汀(例如，多拉司他汀10或多拉司他汀15)、单甲基澳瑞他汀E (MMAE)、单甲基澳瑞他汀F (MMAF)、澳瑞他汀 F 、AF HPA、单甲基AF HPA、苯二胺(AFP)。
例如，倍癌霉素或其类似物是倍癌霉素 A、倍癌霉素B1、倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、CC-1065、阿多来新、比折来新或卡折来新。
D的其他实例包括在例如美国专利号8,815,226；和美国申请公开号2015-0104407中描述的那些，其各自内容以其整体并入本文。
在一些实施方案中，可以与抗体缀合的携带D的聚合物支架的数量受游离半胱氨酸残基数量的限制。在一些实施方案中，通过本文描述的方法将游离半胱氨酸残基引入抗体氨基酸序列中。本文公开的示例性缀合物可包括具有1、2、3或4个工程化的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon, R. 等人 (2012) Methods in Enzym. 502:123-138)。在一些实施方案中，一种或多种游离半胱氨酸残基已经存在于抗体中，而不使用工程化，在这种情况下，现有的游离半胱氨酸残基可用于将抗体与携带D的聚合物支架缀合。在一些实施方案中，在缀合抗体之前将抗体暴露于还原条件，以产生一个或多个游离半胱氨酸残基。
在某些实施方案中，已与分离的抗体的官能团(例如，抗体的氨基酸残基上的官能团或反应性部分，例如，抗体的半胱氨酸残基或赖氨酸残基上的官能团)形成共价键的LP2的官能团选自–SRp、-S-S-LG、和卤素，其中LG是离去基团，Rp是H或硫保护基团，且Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键。例如，已形成共价键的LP2的官能团是不与分离的抗体的官能团反应的官能团，例如，作为LP2的官能团的，其中Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb。
在某些实施方案中，在本文所述的缀合物中，式(Ic)的携带D的聚合物支架具有式(Ie)：
其中，
PHF具有范围为约2kDa至约40kDa的分子量；
D的每次出现独立地是分子量 ≤ 5kDa的治疗剂，且D与羰基之间的表示D与羰基的直接或间接连接，
X是CH2、O或NH；
Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键，m1是1至约140的整数，
m7是1到约40的整数，且m1和m7的总和为约2到约180，
m是1到约300的整数，
m3a是0至约17的整数，
m3b是1至约8的整数，且m3a和m3b的总和为1至18，且m、m1、m7、m3a和m3b的总和范围为约15至约300。
在某些实施方案中，在本文所述的缀合物中，式(Ie)的携带D的聚合物支架具有式(Id)：
其中：
Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键；
m3a是0到约17的整数，
m3b是1至约8的整数，并且m3a和m3b的总和为1-18，并且
m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约300。
例如，m2与m3b之间的比例大于1：1且小于或等于10: 1。
例如，m2与m3b之间的比例为约9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
例如，m2与m3b之间的比例为2：1至8：1。
例如，m2与m3b之间的比例为约8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
例如，m2与m3b之间的比例为2：1至4：1。
例如，m2与m3b之间的比例为约4：1、3：1或2：1。
例如，m2与m3b之间的比例为约3：1和5：1。
例如，m2与m3b之间的比例为约3：1、4：1或5：1。
例如，当式(Id)中的PHF具有范围为约2kDa至约20kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约150，m1为1至约70的整数，m2是1至约20的整数，m3a是0至约9的整数，m3b是1至约8的整数，并且PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例是2至约8的整数。
例如，当式(Id)中的PHF具有范围为约3kDa至约15kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约20至约110，m1为2到约50的整数，m2是2到约15的整数，m3a是0到约7的整数，m3b是1到约8的整数，并且PHF和分离的NaPi2b-靶向抗体之间的比例是从2到约8的整数(例如，2至约6的整数或2至约4的整数)。
例如，当式(Id)中的PHF具有约5kDa至约10kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1是约2至约35的整数，m2是约2至约10的整数，m3a是0至约4的整数，m3b是1至约5的整数，并且PHF与分离的NaPi2b靶向抗体之间的比例是2至约8的整数(例如，2至约6的整数或2至约4的整数)。
例如，水溶性马来酰亚胺基阻断基团是在马来酰亚胺基与式(II)的含巯基化合物反应时可以共价连接到两个烯烃碳原子之一的部分：
R90-(CH2)d-SH (II)
其中：
R90是NHR91、OH、COOR93、CH (NHR91)COOR93或取代的苯基；
R93是氢或C1-4烷基；
R91是氢、CH3或CH3CO和
d是1至3的整数。
例如，式(II)的水溶性马来酰亚胺基阻断化合物可以是半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸甲酯、N-甲基半胱氨酸、2-巯基乙醇、3-巯基丙酸、2-巯基乙酸、巯基甲醇(即，HOCH2SH)，其中苯基被一个或多个亲水取代基取代的苄基硫醇，或3-氨基丙烷-1-硫醇。苯基上的一个或多个亲水取代基包括OH、SH、甲氧基、乙氧基、COOH、CHO、COC1-4烷基、NH2、F、氰基、SO3H、PO3H等。
例如，水溶性马来酰亚胺基阻断基团是-S-(CH2)d-R90，其中R90是OH、COOH或CH(NHR91)COOR93；
R93是氢或CH3；
R91是氢或CH3CO；和
d是1或2。
例如，水溶性马来酰亚胺基阻断基团是-S-CH2-CH (NH2)COOH。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa (例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的分子量时，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20或约2-15或约3-10或约2-10)。该支架可用于例如缀合具有40kDa或更高的分子量(例如，60kDa或更高；80kDa或更高，或100kDa或更高；120kDa或更高；140kDa或更高；160kDa或更高，180kDa或更高，或200kDa或更高，或约40-200kDa，40-180kDa，40-140kDa，60-200kDa，60-180kDa，60-140kDa， 80-200kDa，80-180kDa，80-140kDa，100-200kDa，100-180kDa，100-140kDa或140-150kDa)的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1:1至约1:10、约1:1至约1:9、约1:1至约1:8、约1:1至约1:7、约1:1至约1:6、约1:1至约1:5、约1:1至约1:4、约1:1至约1:3、约1:1至约1:2、约1:2至约1:8、约1:2至约1:6、约1:2至约1:5、约1:2至约1:4、约1:2至约1:3、约1:3至约1:4或约1:3至约1:5。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa (例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的分子量时，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20或约2-15或约3-10或约2-10)。该支架可用于例如缀合具有140kDa至180kDa或140kDa至150kDa的分子量的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1:1至约1:10、约1:1至约1:9、约1:1至约1:8、约1:1至约1:7、约1:1至约1:6、约1:1至约1:5、约1:1至约1:4、约1:1至约1:3、约1:1至约1:2、约1:2至约1:8、约1:2至约1:6、约1:2至约1:5、约1:2至约1:4、约1:2至约1:3、约1:3至约1:4或约1:3至约1:5。
该分子量范围内的分离的抗体包括但不限于例如全长抗体，例如IgG、IgM。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa (例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的分子量时，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20或约2-15或约3-10或2-10)。该支架可用于例如缀合具有60kDa至120kDa的分子量的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1:1至约1:10、约1:1至约1:9、约1:1至约1:8、约1:1至约1:7、约1:1至约1:6、约1:1至约1:5、约1:1至约1:4、约1:1至约1:3、约1:1至约1:2、约1:2至约1:8、约1:2至约1:6、约1:2至约1:5、约1:2至约1:4、约1:2至约1:3、约1:3至约1:4或约1:3至约1:5。
例如，当PHF具有范围为2kDa至40kDa (例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的分子量时，每PHF的药物数(例如，m2)是1至约40的整数(例如，约1-20或约2-15或约3-10或2-10)。该支架可用于例如缀合具有40kDa至80kDa的分子量的分离的抗体。在该实施方案中，分离的抗体与PHF的比例为约1:1至约1:10、约1:1至约1:9、约1:1至约1:8、约1:1至约1:7、约1:1至约1:6、约1:1至约1:5、约1:1至约1:4、约1:1至约1:3、约1:1至约1:2、约1:2至约1:8、约1:2至约1:6、约1:2至约1:5、约1:2至约1:4、约1:2至约1:3、约1:3至约1:4或约1:3至约1:5。
在某些实施方案中，在本文所述的缀合物中，式(Ie)的携带D的聚合物支架具有式(If)，其中所述聚合物是具有范围为约2kDa至约40kDa的分子量的PHF：
其中：
m是1到约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1到约40的整数，
m3a是0到约17的整数，
m3b是1至约8的整数；
m3a和m3b的总和范围从1到约18，
m、m1、m2、m3a和m3b的总和为约15至约300；
末端表示一个或多个聚合物支架与分离的抗体的连接，所述分离的抗体特异性结合SLC34A2的胞外区(i)包含氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)的可变重链互补决定区3(CDRH3)；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补决定区1(CDRL1)；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补决定区2 (CDRL2)；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)的可变轻链互补决定区3 (CDRL3)，或(ii)包含氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO: 18)的CDRH1；包含氨基酸序列ATIGRVAFHTYYPDSMKG (SEQ ID NO: 19)的CDRH2；包含氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ IDNO: 20)的CDRH3；包含氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 21)的CDRL1；包含氨基酸序列RVSNRFS (SEQ ID NO: 22)的CDRL2；和包含氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO:23)的CDRL3；和
PHF与抗体的比例为10或更小。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体特异性结合SLC34A2，并包含：(i)包含氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的CDRH1；包含氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG(SEQ ID NO: 6)的CDRH2；包含氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)的CDRH3；包含氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的CDRL1；包含氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的CDRL2；和包含氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)的CDRL3。
在一些实施方案中，分离的NaPi2b靶向抗体特异性结合SLC34A2，并包含：含有氨基酸序列GFSFSDFAMS (SEQ ID NO: 18)的CDRH1；含有氨基酸序列 ATIGRVAFHTYYPDSMKG(SEQ ID NO: 19)的CDRH2；含有氨基酸序列ARHRGFDVGHFDF (SEQ ID NO: 20)的CDRH3；含有氨基酸序列RSSETLVHSSGNTYLE (SEQ ID NO: 21)的CDRL1；含有氨基酸序列RVSNRFS(SEQ ID NO: 22)的CDRL2；和含有氨基酸序列FQGSFNPLT (SEQ ID NO: 23)的CDRL3。
式(If)的支架可包括一个或多个以下特征：
当式(If)中的PHF具有范围为约2kDa至约20kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约150，m1是1 至约70的整数，m2是1至约20的整数，m3a是0至约9的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约10，并且PHF和抗体之间的比例是2至约8的整数。
当式(If)中的PHF具有范围为约3kDa至约15kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约20至约110，m1是2至约50的整数，m2是2至约15的整数，m3a是0至约7的整数，m3b是1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约8；并且PHF和抗体之间的比例是2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
当式(If)中的PHF具有范围为约5kDa至约10kDa的分子量时，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1是2至约35的整数，m2是2至约10的整数，m3a是0至约4的整数，m3b是1至约5的整数，m3a和m3b的总和范围是1至约5，并且PHF和抗体之间的比例是2至约8的整数(例如，约2至约6或约2至约4)。
在某些实施方案中，澳瑞他汀类F羟丙基酰胺(“AF HPA”)与抗体之间的比例可为约30:1、29:1、28:1、27:1、26:1、25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6:1。
在某些实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6：1。
在其他实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1或6：1。
在一些实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1或10：1。
在一些实施方案中，AF与抗体之间的比例可为约15:1、14:1、13:1、12:1或11：1。
在一些实施方案中，AF HPA和抗体之间的比例可以是约15：1、14：1、13：1或12：1。
在某些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可以是约10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
在某些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6：1、5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6：1、5：1、4：1、3：1或2：1。
在其他实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约6：1、5：1、4：1或3：1。
在一些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约5：1、4：1或3：1。
在一些实施方案中，PHF与抗体之间的比例可为约4：1、3：1或2：1。
抗体-聚合物偶联物缀合物的其他实施方案是描述于，例如，美国专利号8,815,226；和美国申请公开号2015-0104407中的那些，其各自全部内容以其整体并入本文。
本公开还涉及如此修饰使得其可以直接缀合至不存在聚合物载体的抗体的药物衍生物，以及其药物-抗体缀合物。
在一些实施方案中，NaPi2b靶向抗体药物缀合物包括与药物部分缀合即共价连接的抗体。在一些实施方案中，抗体通过接头(例如非聚合接头)共价连接至药物部分。
NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(ADC)的“D”(例如，药物部分)可包括具有如本文所定义的细胞毒性或细胞抑制作用的任何化合物、部分或基团。在某些实施方案中，NaPi2b靶向抗体-药物缀合物(ADC)包含靶向肿瘤细胞的NaPi2b靶向抗体(Ab)、D(例如，药物部分)和连接Ab至D的接头部分(L)。在一些实施方案中，抗体通过一个或多个氨基酸残基(例如赖氨酸和/或半胱氨酸)与接头部分(L)连接。
在某些实施方案中，ADC具有式(Ig)：
Ab-(L-D)p
(Ig),
其中p为1至约20。
在一些实施方案中，可以与抗体缀合的药物部分的数量受游离半胱氨酸残基数量的限制。在一些实施方案中，通过本文描述的方法将游离半胱氨酸残基引入抗体氨基酸序列中。式Ig的示例性ADC包括但不限于具有1、2、3或4个工程化的半胱氨酸氨基酸的抗体(Lyon, R. 等人 (2012) Methods in Enzym. 502:123-138)。在一些实施方案中，一种或多种游离半胱氨酸残基已经存在于抗体中，且不使用工程化，在这种情况下，现有的游离半胱氨酸残基可用于将抗体与药物缀合。在一些实施方案中，在缀合抗体之前将抗体暴露于还原条件，以产生一个或多个游离半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，“接头”(L)是双功能或多功能部分，其可用于将一个或多个D(例如，药物部分)连接至抗体(Ab)以形成式Ig的抗体-药物缀合物(ADC)。在一些实施方案中，可以使用具有反应性官能度用于共价连接至药物和抗体的接头来制备抗体-药物缀合物(ADC)。例如，在一些实施方案中，抗体(Ab)的半胱氨酸巯基可以与接头的反应性官能团或药物-接头中间体形成键以制备ADC。
在一个方面，接头具有能够与抗体上存在的游离半胱氨酸反应以形成共价键的官能度。非限制性示例性的这种反应性官能度包括马来酰亚胺、卤代乙酰胺、α-卤代乙酰基、活化酯如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酸酐、酰基氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。参见，例如，Klussman, 等人 (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773的第766页的缀合方法，和本文的实施例。
在一些实施方案中，接头具有能够与抗体上存在的亲电子基团反应的官能度。示例性的这种亲电子基团包括但不限于醛和酮羰基。在一些实施方案中，接头的反应性官能度的杂原子可以与抗体上的亲电子基团反应并与抗体单元形成共价键。非限制性示例性的这种反应性官能度包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸盐和芳基酰肼。
接头可包含一个或多个接头组分。示例性接头组分包括6-马来酰亚胺基己酰基(“MC”)、马来酰亚胺丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄氧基羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯(“SPP”)和4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1羧酸酯( “MCC”)。各种接头组分是本领域已知的，其中一些在下面描述。
接头可以是“可切割的接头”，促进药物的释放。非限制性示例性的可切割接头包括酸不稳定接头(例如，包含腙)、蛋白酶敏感的(例如、肽酶敏感的)接头、光不稳定的接头或含二硫化物的接头(Chari 等人, Cancer Research 52:127-131 (1992)；美国专利号5,208,020)。
在某些实施方案中，接头具有下式(IIg)：
-Aa-Ww—Yy
(IIg)
其中：
A是“担架单元”，且a是0到1的整数；
W是“氨基酸单元”，且w是0-12的整数，
Y是“间隔区单元”，且y是0、1或2的整数。包含式(IIg)的接头的ADC具有式I(A): Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p，其中Ab、D和p如上文对式(Ig)所定义。这种接头的示例性实施方案描述于美国专利号7,498,298，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，接头组件包含“担架单元”(A)，其将抗体与另一个接头组分或药物部分连接。非限制性示例性“担架单元”如下所示(其中波浪线表示与抗体、药物或其他接头组分共价连接的位点)：
或
。
在一些实施方案中，接头组分包含“氨基酸单元”(W)。在一些这样的实施方案中，氨基酸单元允许通过蛋白酶切割接头，从而促进药物在暴露于细胞内蛋白酶(例如溶酶体酶)时从免疫缀合物释放(Doronina等人 (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784)。示例性氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。示例性的二肽包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)，丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys)；苯丙氨酸-高赖氨酸(phe-homolys)；和N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。示例性的三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可包含天然存在的氨基酸残基和/或次要氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物，例如瓜氨酸。可以设计和优化氨基酸单元以用于特定酶的酶促切割，例如肿瘤相关蛋白酶，组织蛋白酶B、C和D，或纤溶酶蛋白酶。
通常，肽型接头可以通过在两个或更多个氨基酸和/或肽片段之间形成肽键来制备。例如，可以根据液相合成方法(例如，E. Schrider和K. Lubke (1965) “ThePeptides”, 第1卷, 第76-136页, Academic Press)制备这种肽键。
在一些实施方案中，接头组分包含“间隔区”单元，其直接或通过担架单元和/或氨基酸单元将抗体与药物部分连接。间隔区单元可以是“自我消化的(self-immolative)”或“非自我消化的(non-self-immolative)”。“非自我消化的”间隔区单元是其中部分或全部间隔区单元在ADC裂解时保持与药物部分结合的间隔区单元。非自我消化的间隔区单元的实例包括但不限于，甘氨酸间隔区单元和甘氨酸-甘氨酸间隔区单元。在一些实施方案中，通过肿瘤细胞相关蛋白酶酶促切割含有甘氨酸-甘氨酸间隔区单元的ADC导致甘氨酸-甘氨酸-药物部分从ADC的其余部分释放。在一些这样的实施方案中，甘氨酸-甘氨酸-药物部分在肿瘤细胞中经历水解步骤，从而从药物部分切割出甘氨酸-甘氨酸间隔区单元。
“自我消化的”间隔区单元允许释放药物部分。在某些实施方案中，接头的间隔区单元包含对氨基苄基单元。在一些这样的实施方案中，对氨基苯甲醇通过酰胺键与氨基酸单元连接，并且在苯甲醇和药物之间形成氨基甲酸酯、氨基甲酸甲酯或碳酸酯 (Hamann 等人 (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103)。在一些实施方案中，间隔区单元包含对氨基苄氧基羰基(PAB)。在一些实施方案中，包含自我消化的接头的ADC具有以下结构：
其中：Q是 -C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、卤素、硝基或氰基；
n6是0到4的整数；
Xa可以是一个或多个额外的间隔区单元或可能不存在；和
p为1至约20的整数。
在一些实施方案中，p为1至10、1至7、1至5或1至4的整数，非限制性的Xa间隔区单元包括：
和
其中R101和R102独立地选自H和C1-C6烷基。在一些实施方案中，R101和R102各自为-CH3。
自我消化间隔区的其他实例包括但不限于与PAB基团电子相似的芳族化合物，例如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(美国专利号7,375,078；Hay等人(1999) Bioorg. Med.Chem. Lett. 9:2237)和邻氨基苄基乙酸酯或对氨基苄基乙酸酯。在一些实施方案中，可以使用在酰胺键水解时进行环化的间隔区，例如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等人 (1995) Chemistry Biology 2:223)、适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环系统(Storm等人(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等人(1990) J. Org. Chem. 55:5867)。药物与甘氨酸残基的α-碳的连接是可用于ADC的自我消化的间隔区的另一个实例(Kingsbury等人 (1984) J. Med. Chem. 27:1447)。
在一些实施方案中，接头L可以是树状接头，用于通过支化、多功能接头部分将多于一种药物部分共价连接至抗体(Sun等(2002)Bioorganic＆Medicinal ChemistryLetters 12：2213-2215；Sun等人(2003)Bioorganic＆Medicinal Chemistry 1：1761-1768)。树状接头可以增加药物与抗体的摩尔比，即负载，这与ADC的效力有关。因此，当抗体仅携带一个反应性半胱氨酸巯基基团时，可通过树状接头连接多个药物部分。
以下针对式(Ig)的ADC显示非限制性示例性接头：
其中R101和R102独立地选自H和C1-C6烷基；
n5是0到12的整数。
在一些实施方案中，n是2至10的整数。在一些实施方案中，n是4至8的整数。
在一些实施方案中，R101和R102各自为-CH3。
进一步的非限制性示例ADC包括以下结构：
其中Xa是:
或
Y是:
或
每个R103独立地为H或C1-C6烷基；和n7是1到12的整数。
在一些实施方案中，接头被调节溶解度和/或反应性的基团取代。作为非限制性实例，带电荷的取代基如磺酸根(-SO3 -)或铵可以增加接头试剂的水溶性并促进接头试剂与抗体和/或药物部分的偶联反应，或促进Ab-L(抗体-接头中间体)与D的偶联反应，或D-L(药物-接头中间体)与Ab的偶联反应，这取决于用于制备ADC的合成途径。在一些实施方案中，接头的一部分与抗体偶联，并且接头的一部分偶联至药物，然后Ab-(接头部分)a与药物-(接头部分)b偶联，以形成式Ig的ADC。
本文公开的化合物明确考虑但不限于用以下接头试剂制备的ADC：双马来酰亚胺基三氧乙烯乙二醇(BMPEO)、N-(β-马来酰亚胺基丙基氧基)-N-羟基琥珀酰亚胺酯(BMPS)、N-(ε-马来酰亚胺己酰基氧基)琥珀酰亚胺酯(EMCS)、N-[γ-马来酰亚胺基丁酰基氧基]琥珀酰亚胺酯( GMBS)、1,6-己烷-双-乙烯砜(HBVS)、琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧基-(6-酰胺基己酸酯)(LC-SMCC)、间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、4-(4-N-马来酰亚胺基苯基)丁酸酰肼(MPBH)、琥珀酰亚胺基3-(溴乙酰基)丙酸酯(SBAP)、琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)、琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、琥珀酰亚胺基4-(对马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(SMPB)、琥珀酰亚胺基-6-[(β-马来酰亚胺基丙酰胺基)己酸酯](SMPH)、亚氨基硫烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和琥珀酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯(SVSB)，并且包括双马来酰亚胺试剂：二硫代双马来酰亚胺乙烷(DTME)、1,4- 双马来酰亚胺丁烷(BMB)、1,4-双马来酰亚胺-2,3-二羟基丁烷(BMDB)、双马来酰亚胺己烷(BMH)、双马来酰亚胺乙烷(BMOE)、BM(PEG)2 (如下所示)和BM(PEG)3 (如下所示)；以下的双功能衍生物：亚氨酸酯(如己二亚氨盐酸二甲酯)、活性酯类(如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双-(对叠氮苯甲酰基)己二胺)、双-重氮衍生物(例如双-(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些实施方案中，双马来酰亚胺试剂允许抗体中半胱氨酸的巯基基团连接至含巯基的药物部分、接头或接头-药物中间体。与巯基基团反应的其他官能团包括但不限于碘乙酰胺，溴乙酰胺，乙烯基吡啶，二硫化物，吡啶基二硫化物，异氰酸酯和异硫氰酸酯。
某些有用的接头试剂可以从各种商业来源获得，例如Pierce Biotechnology,Inc. (Rockford, Ill.)、Molecular Biosciences Inc.(Boulder, Colo.)，或根据本领域描述的程序合成；例如，于Toki等人(2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872; Dubowchik,等人 (1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60; Walker, M. A. (1995) J. Org.Chem. 60:5352-5355; Frisch 等人 (1996) Bioconjugate Chem. 7:180-186; U.S.Pat. No. 6,214,345; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577;WO 03/043583和WO 04/032828。
碳-14-标记的1-异硫氰酸基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见，例如，WO 94/11026。
制备聚合物NaPi2b靶向抗体缀合物的方法：
在某些实施方案中，缀合物以几个步骤形成。这些步骤包括(1)将聚合物改型，使得其含有可与药物或其衍生物的官能团反应的官能团；(2)使改性聚合物与药物或其衍生物反应，使药物与聚合物连接；(3)将聚合物-药物缀合物改性，使得聚合物含有能与分离NaPi2b靶向抗体或其衍生物的官能团反应的官能团；和(4)使改性的聚合物-药物缀合物与NaPi2b靶向抗体反应，形成本文公开的缀合物。如果步骤(1)制备的改性聚合物含有可与抗体的官能团反应的官能团，则可省略步骤(3)。
在另一个实施方案中，缀合物以几个步骤形成：(1)将聚合物改性，使得其含有可与第一药物或其衍生物的官能团反应的官能团；(2)使改性聚合物与第一药物或其衍生物反应，使得第一药物与聚合物连接；(3)将聚合物-药物缀合物改性，使得其含有不同的官能团，该官能团可与第二药物或其衍生物的官能团反应，(4)使改性的聚合物-药物缀合物与第二药物或其衍生物反应，使得第二药物与聚合物-药物缀合物相连；(5)将含有2种不同药物的聚合物-药物缀合物改性，使得聚合物含有可与NaPi2b靶向抗体的官能团反应的官能团；和(6)使步骤(5)的改性的聚合物-药物缀合物与分离的NaPi2b-靶向抗体或其衍生物反应以形成本文公开的缀合物。如果2种不同的分离的NaPi2b-靶向抗体或其衍生物需要缀合以形成包含两种不同药物和两种不同抗体的聚合物-药物缀合物，则可以重复步骤(5)和(6)。
在仍另一个实施方案中，缀合物以几个步骤形成。这些步骤包括(1)将聚合物改性，使得其含有可与药物或其衍生物的官能团反应的官能团；(2)进一步将聚合物改性，使得其还含有能与NaPi2b靶向抗体的官能团反应的官能团；(3)使改性聚合物与药物或其衍生物反应，使药物与聚合物连接；和(4)使改性的聚合物-药物缀合物与NaPi2b靶向抗体反应，以形成本文公开的缀合物。步骤(1)和(2)的顺序或步骤(3)和(4)的顺序可以颠倒。如果改性聚合物含有可与药物或其衍生物的官能团和NaPi2b靶向抗体的官能团两者都反应的官能团，则可省略步骤(1)或(2)。
在另一个实施方案中，缀合物通过几个步骤形成：(1)将聚合物改性，使得其含有可与第一药物或其衍生物的官能团反应的官能团；(2)进一步将聚合物改性，使得其含有可与NaPi2b靶向抗体的官能团反应的官能团；(3)使改性聚合物与第一药物或其衍生物反应，使得第一药物与聚合物连接；(4)将聚合物-药物偶联物改性，使得其含有不同的官能团，该官能团可与第二药物或其衍生物的官能团反应；(5)使改性的聚合物-药物缀合物与第二种药物或其衍生物反应，使得第二药物与聚合物-药物结合物相连；(6)使含有2种不同药物的改性聚合物-药物缀合物反应，使得聚合物与分离的NaPi2b-靶向抗体或其衍生物一起形成本文公开的缀合物。如果2种不同的分离的抗体或其衍生物需要缀合以形成包含两种不同药物和两种不同抗体的聚合物-药物缀合物，则可以重复步骤(6)。步骤(4)可以在步骤(1)之后进行，使得改性聚合物含有两种不同的官能团，它们可以与两种不同的药物或其衍生物反应。在该实施方案中，在改性聚合物与两种不同药物(步骤(3)和步骤(5))或抗体(步骤(6))反应之前，可以进一步改性含有可与两种不同药物或其衍生物反应的两种不同官能团的改性聚合物，使其含有可与抗体的官能团反应的官能团。
在某些示例性实施方案中，本文公开的缀合物可用于生物医学应用，例如药物递送和组织工程，并且聚合物载体是生物相容和可生物降解的。在某些实施方案中，载体是可溶性聚合物、纳米颗粒、凝胶、脂质体、胶束、缝合线、植入物等。在某些实施方案中，术语“可溶性聚合物”包括可生物降解的生物相容聚合物，例如聚(例如，亲水性聚缩醛或聚缩酮)。在某些其他实施方案中，载体是完全合成的、半合成的或天然存在的聚合物。在某些其他实施方案中，载体是亲水的。用于制备本文公开的缀合物的合适的聚合物载体的实例描述于美国专利号8,815,226中，其内容通过引用以其整体并入本文。
在一个实施方案中，聚合物载体包含式(IV)的单元：
其中X'表示聚合物主链的羟基的取代基。如式(IV)和本文所述的其他式所示，每个聚缩醛单元具有与单元的甘油部分连接的单个羟基和与该单元的乙醇醛部分连接的X'基团。这仅是为了方便，并且应当理解具有式(IV)的单元和本文所述的其他式的聚合物可以包含以下的随机分布：具有连接到单元的乙醇醛部分的X'基团(或另一取代基，例如包含马来酰亚胺末端的接头)的单元和具有连接到单元的甘油部分的单个X'基团(或另一个取代基，例如包含马来酰亚胺末端的接头)的单元以及具有两个X'基团(其中一个连接到乙醇醛部分，且另一个连接到单元的甘油部分)(或其他取代基，例如包含马来酰亚胺末端的接头)的单元。
在一个实施方案中，适用于实施本发明的可生物降解的生物相容聚合物具有约2至约40kDa、约6至约20kDa、或约8至约15kDa的分子量。例如，用于本文公开的聚合物支架或缀合物的可生物降解的生物相容聚合物是具有约2至约40kDa (例如，约2-20kDa、3-15kDa或5-10kDa)的分子量的PHF。
制备适于与改性剂缀合的聚合物载体(例如，生物相容、可生物降解的聚合物载体)的方法是本领域已知的。例如，合成指导可见于美国专利号5,811,510；5,863,990；5,958,398；7,838,619；7,790,150和8,685,383。本领域技术人员将知道如何调整这些方法以制备用于实施本公开的聚合物载体。
在一个实施方案中，形成本公开的可生物降解的生物相容性多元醛(polyal)缀合物的方法包括将合适的多糖与有效量的二醇特异性氧化剂组合以形成醛中间体的方法。然后可将醛中间体(其为多元醛本身)还原成相应的多元醇，琥珀酰化，并与一种或多种合适的改性剂偶联以形成包含含琥珀酰胺连接的可生物降解的生物相容性多元醛缀合物。
在另一个优选的实施方案中，用于本公开的完全合成的可生物降解的生物相容性聚合物可以通过使合适的引发剂与合适的前体化合物反应来制备。
例如，完全合成的多元醛可以通过乙烯基醚与受保护的取代二醇的缩合来制备。可以使用其他方法，例如循环开放聚合，其中方法效力可取决于保护基团的取代度和膨松度(bulkiness)。
本领域普通技术人员将理解，可以优化溶剂系统、催化剂和其他因素以获得高分子量产物。
在某些实施方案中，载体是PHF。
在实施方案中，聚合物载体是具有≤1.5，例如<1.4、<1.3、<1.2或<1.1的多分散指数(PDI)的PHF。
例如，为了缀合具有40kDa至200kDa的分子量的分离的NaPi2b靶向抗体，支架的聚合物载体是聚缩醛，例如具有分子量(即，未改性的PHF的MW)范围从约2kDa到约40kDa(例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的PHF。
例如，为了缀合具有40kDa至80kDa的分子量的抗体，本文公开的支架的聚合物载体是聚缩醛，例如，具有分子量(即，未改性的PHF的MW)范围为约2kDa至约40kDa(例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的PHF。例如PHF具有约5kDa、6kDa、7kDa、8kDa、9kDa、10kDa、11kDa、12kDa、13kDa、14kDa或15kDa的分子量。
例如，为了缀合具有60kDa至120kDa的分子量的抗体，本文公开的支架的聚合物载体是聚缩醛，例如，具有分子量(即，未改性的PHF的MW)范围为约2kDa至约40kDa(例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的PHF。例如，PHF具有约5kDa、6kDa、7kDa、8kDa、9kDa、10kDa、11kDa、12kDa、13kDa、14kDa或15kDa的分子量。
例如，为了缀合具有140kDa至180kDa或140kDa至150kDa的分子量的抗体，本文公开的支架的聚合物载体是聚缩醛，例如具有分子量(即，未改性的PHF的MW)范围为约2kDa至约40kDa(例如，约2-20kDa，或约3-15kDa，或约5-10kDa)的PHF。例如，PHF具有约5kDa、6kDa、7kDa、8kDa、9kDa、10kDa、11kDa、12kDa、13kDa、14kDa或15kDa的分子量。
该分子量范围内的其抗体包括但不限于，例如，全长抗体，例如IgG，IgM。
可以制备本文公开的可生物降解的生物相容性缀合物以满足生物降解性和亲水性的所需要求。例如，在生理条件下，可以达到生物降解性和稳定性之间的平衡。例如，众所周知，分子量超过一定阈值(通常高于40-100 kDa，取决于分子的物理形状)的分子不会通过肾脏排泄，因为小分子通过肾脏排泄，并且可以从体内仅通过细胞摄取和细胞内区室(最显著的是溶酶体)的降解来清除。该观察例证了如何通过调节它们在一般生理条件(pH =7.5±0.5)和在溶酶体pH (pH接近5)下的稳定性来设计功能稳定但可生物降解的材料。例如，已知缩醛和缩酮基团的水解由酸催化，因此多元醛通常在酸性溶酶体环境中比例如在血浆中更不稳定。技术人员可以设计一种测试来比较聚合物降解概况，例如在pH = 5和pH= 7.5下在37℃下在水性介质中，从而确定正常生理环境中和被细胞摄取后的“消化性”溶酶体区室中的聚合物稳定性的预期平衡。此类测试中的聚合物完整性可以例如通过尺寸排阻HPLC测量。本领域技术人员可以选择其他合适的方法来研究本文公开的降解的缀合物的各种片段。
在许多情况下，优选在pH = 7.5时，聚合物的有效尺寸将在1至7天内不会可检测地改变，并且持续至少数周保持在初始的50％以内。另一方面，在ρΗ= 5时，聚合物应优选在1至5天内可检测地降解，并在两周至几个月的时间范围内完全转化为低分子量片段。虽然在某些情况下更快的降解可能是优选的，但通常可能更希望聚合物在细胞中降解的速率不超过细胞对聚合物片段的代谢或排泄速率。因此，在某些实施方案中，预期本公开的缀合物是可生物降解的，特别是在被细胞摄取时，并且相对于生物系统是相对“惰性的”。载体降解产物优选不带电荷，并且不会显著改变环境的pH。提出丰富的醇基团可以通过细胞受体，特别是吞噬细胞，提供低比例的聚合物识别。本公开的聚合物主链通常含有很少(如果有的话)抗原决定簇(特征，例如，对于一些多糖和多肽)，并且通常不包含能够参与体内的“钥匙和锁(key-and-lock)”类型相互作用的刚性结构，除非后者是期望的。因此，预测本文公开的可溶的、交联的且固体的缀合物具有低毒性和生物粘附性，这使得它们适用于几种生物医学应用。
在本公开的某些实施方案中，可生物降解的生物相容性缀合物可以形成线性或分支结构。例如，本公开的可生物降解的生物相容性多元醛缀合物可以是手性的(光学活性的)。任选地，本公开的可生物降解的生物相容性多元醛缀合物可以是手性偏向一边的(scalemic)。
在某些实施方案中，本文公开的缀合物是水溶性的。在某些实施方案中，本文公开的缀合物是水不溶性的。在某些实施方案中，本发明的缀合物是固体形式。在某些实施方案中，本文公开的缀合物是胶体。在某些实施方案中，本文公开的缀合物是颗粒形式。在某些实施方案中，本文公开的缀合物是凝胶形式。
下面的方案1显示了制备本文公开的聚合物药物支架的合成方案。在一个实施方案中，缀合物以几个步骤形成：(1)将聚合物PHF改性为含有COOH 部分(例如, –C(O)-X-(CH2)2-COOH)；(2)然后进一步改性聚合物，使得其含有可与PBRM的官能团反应的马来酰亚胺部分(如EG2-MI)；(3)将含有两个不同官能团的改性聚合物与药物或其衍生物(例如AF-HPA-Ala)的官能团反应以形成聚合物-药物缀合物；(4)将PBRM的二硫键还原；(5)然后将还原的PBRM与聚合物-药物缀合物反应以形成蛋白-聚合物-药物缀合物；和(6)将剩余的马来酰亚胺部分任选地与马来酰亚胺基阻断化合物(例如半胱氨酸)反应。
在另一个实施方案中，步骤(2)和(3)的顺序可以颠倒，如下面方案1中的右侧路线所示。
方案1
。
在仍又一个实施方案中，上述步骤(2)和(3)同时进行，如以下方案2中所示。
方案2
NaPi2b靶向抗体-药物缀合物的使用
应当理解，根据本公开的治疗实体的施用将与合适的载体、赋形剂和掺入制剂中以提供改善的转移、递送、耐受性等的其他试剂一起施用。在所有药物化学家已知的处方集中可以找到许多合适的制剂：Remington's Pharmaceutical Sciences (第15版, MackPublishing Company, Easton, PA (1975))，特别是其中的Blaug，Seymour的第87章。这些制剂包括例如粉末、糊剂、软膏、凝胶、蜡、油、脂质、含有脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(例如Lipofectin™)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳液、乳液碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有碳蜡的半固体混合物。任何前述混合物可适用于根据本发明的治疗和疗法，条件是制剂中的活性成分不被制剂失活，并且制剂与施用途径是生理上是相容的并且可耐受的。另见Baldrick P. “Pharmaceutical excipient development:the need for preclinical guidance.” Regul. Toxicol Pharmacol. 32 (2):210-8(2000), Wang W. “Lyophilization and development of solid proteinpharmaceuticals.” Int. J. Pharm. 203 (1-2):1-60 (2000), Charman WN “Lipids,lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.” J PharmSci. 89(8):967-78 (2000), Powell 等人 “Compendium of excipients forparenteral formulations” PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)及其中引关于制剂化学家熟知的制剂、赋形剂和载体的其他信息的引用。
在一个实施方案中，本文公开的NaPi2b抗体缀合物可用作治疗剂。这些药剂通常用于诊断，预后，监测，治疗，减轻，预防和/或延迟与例如对象中异常NaPi2b活性和/或表达相关的疾病或病理的进展。通过使用标准方法鉴定对象，例如患有与异常NaPi2b活性和/或表达相关的疾病或病症(例如癌症)(或处于发展其的风险中)的人类患者来进行治疗方案。将NaPi2b抗体缀合物制剂，优选对其靶抗原具有高特异性和高亲和力的缀合物制剂，施用于对象，并且由于其与靶标的结合将通常具有作用。施用缀合物可以消除或抑制或干扰靶标的信号传导功能。缀合物的施用可以消除或抑制或干扰靶标与其天然结合的内源配体的结合。例如，缀合物可以与靶标结合并调节，阻断，抑制，减少，拮抗，中和或以其他方式干扰NaPi2b活性和/或表达。
与异常NaPi2b活性和/或表达相关的疾病或病症包括但不限于癌症。目标癌症可以是卵巢癌，例如上皮性卵巢癌，甲状腺癌，结肠直肠癌，肺癌，非小细胞肺癌(NSCLC)，例如非鳞状NSCLC，乳腺癌，肾癌和唾管癌。
另一方面，疾病或病症是选自以下的癌症：非小细胞肺癌(NSCLC)如非鳞状NSCLC和卵巢癌如上皮性卵巢癌。通常，减轻或治疗疾病或病症涉及减轻与疾病或病症相关的一种或多种症状或医学问题。例如，在癌症的情况下，治疗有效量的缀合物或其药物组合物可以实现以下一种或组合：减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在某种程度上减少和/或停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一些实施方案中，本文公开的组合物可用于预防对象中疾病或病症的发作或复发。
本文公开的治疗有效量的NaPi2b抗体缀合物通常涉及实现治疗目标所需的量。如上所述，这可以是抗体与其靶抗原之间的结合相互作用，在某些情况下，其会干扰靶行使功能。需要待施用的量还取决于抗体对其特异性抗原的结合亲和力，并且还取决于施用的抗体从其施用至的其他对象的自由体积中消耗的速率。利用本文公开的缀合物的剂量方案也根据多种其他因素选择，包括患者的类型、物种、年龄、体重、性别和医学状况；待治疗病况的严重程度；施用途径；患者的肾和肝功能；和使用的特定共轭物。普通医生或兽医可以容易地确定和开具预防、对抗或阻止病况进展所需的缀合物的有效量。作为非限制性实例，本文公开的NaPi2b抗体缀合物的治疗有效剂量的常见范围可以是约0.1mg/kg体重至约50mg/kg体重，约0.1mg/kg体重至约100mg/kg体重或约0.1mg/kg体重至约150mg/kg体重。本文公开的范围表示为基于对象体重施用的量，并且本领域技术人员可以容易地将其表示为对象每个体表面积施用的量。例如，对于成年人，1mg/kg体重相当于约37 mg/m2，对于人类儿童1mg/kg体重相当于约 25 mg/m2。
常见的给药频率范围可以是，例如，每天两次至每月一次(例如，每天一次，每周一次；每隔一周一次；每3周一次或每月一次)。例如，本文公开的XMT 1535或10H1.11.4B的缀合物可以以以下剂量施用：(例如，作为每周一次剂量，每两周一次剂量，每三周一次剂量或每月一次剂量)约0.1mg/kg至约20mg/kG (例如，0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.67mg/kg、0.8 mg/kg、1 mg/kg、1.25 mg/kg、1.67 mg/kg、2 mg/kg、2.5 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、6 mg/kg、7 mg/kg、8 mg/kg、9 mg/kg、10 mg/kg、11 mg/kg、12 mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、或20mg/kg)。例如，本文公开的XMT 1535或10H1.11.4B的缀合物可以以以下剂量施用：(例如，作为每周一次剂量，每两周一次剂量，每三周一次剂量或每月一次剂量)约0.1mg/kg至约20mg /kG (例如，0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、0.67 mg/kg、0.8 mg/kg、1 mg/kg、1.25 mg/kg、1.67 mg/kg、2 mg/kg、2.5 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、5 mg/kg、6 mg/kg、7 mg/kg、8 mg/kg、9 mg/kg、10 mg/kg、11 mg/kg、12mg/kg、13 mg/kg、14 mg/kg、15 mg/kg、16 mg/kg、17 mg/kg、18 mg/kg、19mg/kg或20 mg/kg)用于治疗表达NaPi2b的卵巢癌或表达NaPi2b的NSCLC癌症。
与用于诊断或治疗特定NaPi2b相关病症的任何已知方法相关联地确定治疗的有效性。缓解NaPi2b相关病症的一种或多种症状表明该抗体赋予临床益处。
筛选具有所需特异性的抗体的方法包括但不限于酶联免疫吸附测定(ELISA)和本领域已知的其他免疫介导技术。
NaPi2b靶向抗体-药物偶联物的治疗施用和制剂
本文公开的缀合物(在本文中也称为“活性化合物”)可以掺入适于施用的药物组合物中。例如，在Remington’s Pharmaceutical Sciences: The Science And Practice OfPharmacy 第19版 (Alfonso R. Gennaro, 等人, 编辑) Mack Pub. Co., Easton, Pa.:1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, AndTrends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; 和Peptide AndProtein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M.Dekker, New York中提供了制备这种组合物所涉及的原理和考虑因素，以及组分选择的指导。
此类组合物通常包含抗体和/或其缀合物和药学上可接受的载体。
如本文所用，短语“药学上可接受的”是指那些在合理的医学判断范围内适合用于与人和动物组织接触而不具有过多的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症且与合理的利益/风险比相称的化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。合适的载体描述于最新版本的Remington's Pharmaceutical Sciences，其为该领域的标准参考文献，通过引用并入本文。这些载体或稀释剂的优选实例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体如固定油。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则考虑在组合物中使用它们。
用于体内施用的制剂必须是无菌的。这可以通过经无菌过滤膜过滤而容易地完成。
配制本文公开的药物组合物以与其预期的施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外施用，例如静脉内、皮内、皮下、口服(例如吸入)、透皮(即局部)、透粘膜和直肠施用。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水，盐水溶液，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐，以及调节渗透压的试剂，如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱调节pH，例如盐酸或氢氧化钠。肠胃外制剂可以封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
在一个实施方案中，药物组合物是散装或为单位剂型。单位剂型是多种形式中的任何一种，包括例如胶囊、IV袋、片剂、气溶胶吸入器的单个泵或小瓶上。单位剂量组合物中活性成分(例如，本文公开的缀合物)的量是有效量，并且根据所涉及的具体治疗而变化。本领域技术人员将理解，有时需要根据患者的年龄和病况对剂量进行常规变化。剂量还取决于施用途径。
适于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(其中是水溶性的)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应该是易于注射的程度的流体。它必须在制造和储存条件下稳定，并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，以及它们的合适混合物。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣，通过在分散的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，可以防止微生物的作用。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇、氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物与上面列举的成分中的一种或组合(如果需要)一起掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需成分。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以封装在明胶胶囊中或压制成片剂。为了口服治疗施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂掺合并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。口服组合物也可以使用流体载体制备用作漱口水，其中流体载体中的化合物口服应用并漱口并吐出或咽下。可以包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有下列任何成分或类似性质的化合物：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，崩解剂如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂，如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味剂。
对于吸入施用，将化合物以气溶胶喷雾的形式从含有合适的推进剂(例如二氧化碳之类的气体)的加压容器或分配器、或喷雾器中递送。
全身施用也可以通过透粘膜或透皮方式进行。对于透粘膜或透皮施用，在制剂中使用适合于待渗透的屏障的渗透剂。这些渗透剂通常是本领域已知的，并且包括例如用于经粘膜施用，去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。透粘膜施用可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于透皮施用，将活性化合物配制成本领域公知的软膏、药膏、凝胶或乳膏。
该化合物还可以以栓剂(例如，用常规的栓剂基质如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠剂用于直肠递送的形式制备。
在一个实施方案中，活性化合物与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，例如持续释放/控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这种制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。
例如，活性成分可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如，羟基甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊分别在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或在大乳液中。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质是成型制品的形式，例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)，或聚(乙烯醇))，聚乳酸(美国专利号3,773,919)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，例如LUPRON DEPOT TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然诸如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸的聚合物能够释放分子超过100天，但某些水凝胶释放蛋白更短的时段。
该材料也可以从Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals, Inc商业获得。脂质体悬浮液(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)，并且还可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利号4,522,811中所述。
以剂量单位形式配制口服或肠胃外组合物以便于施用和剂量均匀性是特别有利的。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗对象的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有预定量的活性化合物，其经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。本文公开的剂量单位形式的规格取决于并直接依赖于活性化合物的独特特征和要实现的具体治疗效果，以及配制这种活性化合物用于治疗个体的本领域在中固有的局限性。
药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、包装或分配器中。
该制剂还可含有如所治疗的具体适应症所必需的一种以上的活性化合物，优选具有互补活性但不会相互产生不利影响的那些活性化合物。可选地或另外，组合物可包含增强其功能的药剂，例如细胞毒剂、细胞因子、化学治疗剂或生长抑制剂。这些分子合适地以对预期目的有效的量存在于组合中。
在一个实施方案中，活性化合物组合疗法施用，即与其他药剂(例如治疗剂)组合，其可用于治疗病理状况或病症，例如各种形式的癌症、自身免疫病症和炎性疾病。在该上下文中，术语“组合”是指基本上同时(同时地或依次地)给予药剂。如果依次给予，在第二种化合物施用开始时，两种化合物中的第一种优选在治疗部位仍可以有效浓度检测到。
例如，组合疗法可以包括一种或多种本文公开的缀合物，其与一种或多种另外的抗体(例如NaPi2b抗体，其可以与用于形成缀合物的抗体相同或是不同的抗体)共同配制和/或与其共同施用。
例如，组合疗法可包括一种或多种治疗剂和/或佐剂。在某些实施方案中，另外的治疗剂是小分子抑制剂，另一种基于抗体的疗法、基于多肽或肽的疗法、基于核酸的疗法和/或其他生物制剂。
在某些实施方案中，另外的治疗剂是细胞毒性剂、化学治疗剂、生长抑制剂、血管生成抑制剂、PARP (聚(ADP)-核糖聚合酶)抑制剂、烷化剂、抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、任何其他核酸损伤剂或免疫检查点抑制剂。在一个实施方案中，用于治疗癌症的治疗剂包括但不限于：铂化合物(例如顺铂或卡铂)；紫杉烷(例如紫杉醇或多西他赛)；拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康或拓扑替康)；蒽环类抗生素(例如多柔比星(ADRIAMYCIN®)或脂质体多柔比星(DOXIL®))；抗代谢物(例如，吉西他滨，培美曲塞)；环磷酰胺；长春瑞滨(NAVELBINE®)；六甲密胺；异环磷酰胺；依托泊苷；血管生成抑制剂(例如贝伐单抗(Avastin®))，沙利度胺，TNP-470，血小板因子4，干扰素或内皮抑素)；PARP抑制剂(例如，Olaparib (Lynparza™))；免疫检查点抑制剂，例如靶向PD-1或PD-L的单克隆抗体((派姆单抗(Keytruda®)，阿特朱单抗(MPDL3280A)或纳武单抗(Opdivo®))或CTA-4 (伊匹单抗(Yervoy®)，激酶抑制剂(如索拉非尼或厄洛替尼)，蛋白酶体抑制剂(如硼替佐米或卡非佐米)，免疫调节剂(如来那度胺或IL-2)，放射剂，ALK抑制剂(如克唑替尼(Xalkori), 色瑞替尼(Zykadia)、艾乐替尼(Alecensa)、dalantercept (ACE-041)、布格替尼 (AP26113)、恩曲替尼 (NMS-E628)、PF-06463922 TSR-011、CEP-37440和X-396)和/或其生物仿制药和/或其组合。其他合适的药剂包括本领域技术人员认为是标准治疗的药剂和/或本领域技术人员熟知的化学治疗剂。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的单克隆抗体。在其他实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的人或人源化抗体。在一个实施方案中，抗-CTLA-4抗体阻断CTLA-4与抗原呈递细胞上表达的CD80(B7-1)和/或CD86(B7-2)的结合。抗CTLA-4的示例性抗体包括但不限于Bristol Meyers Squibb的抗-CTLA-4抗体伊匹单抗(也称为Yervoy®, MDX-010, BMS-734016和MDX-101)；抗-CTLA4抗体，来自Millipore的克隆9H10；Pfizer的曲美木单抗(CP-675,206，ticilimumab)；和来自Abeam的抗CTLA4抗体克隆BNI3。
在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是在以下任何专利公开中公开的抗-CTLA-4抗体(通过引用并入本文)：WO 2001014424; WO 2004035607; US2005/0201994; EP 1212422B1; WO2003086459; WO2012120125; WO2000037504; WO2009100140; W0200609649;WO2005092380; WO2007123737; WO2006029219; WO20100979597; W0200612168和WO1997020574。另外的CTLA-4抗体描述于：美国专利号5,811,097, 5,855,887, 6,051,227和6,984,720；PCT公开号WO 01/14424和WO 00/37504；和美国公开号2002/0039581和2002/086014；和/或美国专利号5,977,318、6,682,736、7, 109,003和7,132,281，其通过引用并入本文)。在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是例如以下公开的那些：WO 98/42752；美国专利号6,682,736和6,207,156；Hurwitz等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998); Camacho 等人, J. Clin. Oncol., 22 (145): Abstract No.2505 (2004) (抗体CP-675206); Mokyr 等人, Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)(通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是如WO 1996040915中公开的CTLA-4配体。
在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是CTLA-4表达的核酸抑制剂。例如，抗-CTLA4RNAi分子可以采用Mello和Fire在PCT公开号WO 1999/032619和WO 2001/029058；美国公开号2003/0051263、2003/0055020、2003/0056235、2004/265839、2005/0100913、2006/0024798、2008/0050342、2008/0081373、2008/0248576和2008/055443; 和/或美国专利号6,506,559、7,282,564、7,538,095、和7,560,438(通过引用并入本文)中描述的分子的形式。在一些情况下，抗-CTLA4 RNAi分子采用Tuschl在欧洲专利号EP 1309726(通过引用并入本文)中描述的双链RNAi分子的形式。在一些情况下，抗-CTLA4 RNAi分子采用Tuschl在美国专利号7,056,704和7,078,196(通过引用并入本文)中描述的双链RNAi分子的形式。在一些实施方案中，CTLA4抑制剂是PCT公开号WO2004081021中描述的适体。
另外，本公开的抗CTLA4 RNAi分子可以采用Crooke在美国专利号5,898,031、6,107,094、7,432,249和7,432,250以及欧洲申请号EP 0928290(通过引用并入本文)中描述的RNA分子形式。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的单克隆抗体。在其他或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的人或人源化抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白(例如PD-L1)的表达或活性。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂减少PD-1和PD-L1之间的相互作用。示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例如，抗PD-L1抗体)、RNAi分子(例如，抗-PD-L1RNAi)、反义分子(例如抗PD-L1反义RNA)、显性失活蛋白(例如显性失活PD-L1蛋白)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫抗体和Ig融合蛋白。示例性的抗PD-L1抗体包括克隆EH12。针对PD-L1的示例性抗体包括：Genentech的MPDL3280A(RG7446)；来自BioXcell的抗小鼠PD-L1抗体克隆10F.9G2 (Cat＃BE0101)；来自Bristol-Meyer's Squibb的抗PD-L1单克隆抗体MDX-1105(BMS-936559)和BMS-935559；MSB0010718C；小鼠抗PD-L1克隆29E.2A3；和AstraZeneca的MEDI4736。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是在以下任何专利公开中公开的抗PD-L1抗体(通过引用并入本文)：WO2013079174; CN101104640;WO2010036959; WO2013056716; WO2007005874; WO2010089411; WO2010077634;WO2004004771; WO2006133396; W0201309906; US 20140294898; WO2013181634或WO2012145493。
在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是PD-L1表达的核酸抑制剂。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂公开于以下专利公开之一(通过引用并入本文)：WO2011127180或WO2011000841。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是雷帕霉素。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L2的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的单克隆抗体。在其他或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的人或人源化抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂降低一种或多种免疫检查点蛋白(例如PD-L2)的表达或活性。在其他实施方案中，免疫检查点抑制剂减少PD-1和PD-L2之间的相互作用。示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例如，抗PD-L2抗体)、RNAi分子(例如，抗PD-L2 RNAi)、反义分子(例如，抗PD-L2反义RNA)、显性失活蛋白(例如，显性失活的PD-L2蛋白)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫抗体和Ig融合蛋白。
在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是GlaxoSmithKline的AMP-224 (Amplimmune)。在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是rHIgM12B7。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的单克隆抗体。在其他实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的人或人源化抗体。例如，美国专利号7,029,674; 6,808,710或美国专利申请号20050250106和20050159351中公开的PD-1生物活性抑制剂(或其配体)可用于本文提供的组合中。针对PD-1的示例性抗体包括：来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆J43 (Cat＃BEQG33-2)；来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆RMP1-14(Cat＃BE0146)；小鼠抗PD-1抗体克隆EH12；Merck的M-3475抗小鼠PD-1抗体(Keytruda®，派姆单抗，lambrolizumab，h409Al 1)；和AnaptysBio的抗PD-1抗体，称为ANB011；抗体MDX-1 106(ONO-4538)；Bristol-Myers Squibb的人IgG4单克隆抗体纳武单抗(Opdivo®，BMS-936558，MDX1106)；AstraZeneca的AMP-514和AMP-224；和Pidiiizumab(CT-011或hBAT-1)，CureTech Ltd.。
由Goldberg等人，Blood 1 10(1): 186-192 (2007), Thompson 等人, Clin.Cancer Res. 13 (6): 1757-1761 (2007), 和Korman 等人, 国际申请号PCT/JP2006/309606 (公开号WO 2006/121168 A1)描述了另外的示例性抗PD-1抗体，其各自通过引用明确并入本文。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是在任何以下专利公开(通过引用并入本文)中公开的抗PD-1抗体：W0014557; WO2011110604; WO2008156712; US2012023752;WO2011110621; WO2004072286; WO2004056875; WO20100036959; WO2010029434;W0201213548; WO2002078731; WO2012145493; WO2010089411; WO2001014557;WO2013022091; WO2013019906; WO2003011911; US20140294898和WQ2Q10001617。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是如WO200914335中所公开的PD-1结合蛋白(通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是PD-1的拟肽抑制剂，如WO2013132317 (通过引用并入本文)中所公开的。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗小鼠PD-1mAb：克隆J43，BioXCell (WestLebanon, N.H.)。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是PD-L1蛋白、PD-L2蛋白或片段，以及在临床研究中测试的用于治疗某些恶性肿瘤的抗体MDX-1 106(ONO-4538)(Brahmer 等人, J ClinOncol. 2010 28(19): 3167-75, Epub 2010 Jun. 1)。如上所述，技术人员可以基于PD-1和PD-L1/PD-L2之间相互作用的已知结构域容易地鉴定和制备其他阻断抗体。例如，对应于PD-1或PD-L1/PD-L2的IgV区域(或该区域的一部分)的肽可以用作抗原以使用本领域熟知的方法开发阻断抗体。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是ID01的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对IDOL的小分子。针对IDO1的示例性小分子包括：Incyte的INCB024360、NSC-721782 (也称为1-甲基-D-色氨酸)和Bristol Meyers Squibb的F001287。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3 (CD223)的抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的单克隆抗体。在其他或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的人或人源化抗体。在另外的实施方案中，针对LAG3的抗体阻断LAG3与主要组织相容性复合物(MHC)II类分子的相互作用。针对LAG3的示例性抗体包括：来自eBioscience的抗-Lag-3抗体克隆eBioC9B7W (C9B7W)；来自Lifespan Biosciences的抗Lag3抗体LS-B2237；来自Immutep的IMP321 (ImmuFact)；抗Lag3抗体BMS-986016；和LAG-3嵌合抗体A9H12。在一些实施方案中，抗LAG3抗体是在任何以下专利公开(通过引用并入本文)中公开的抗LAG3抗体：WO2010019570；WO2008132601；或WO2004078928。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的抗体(也称为HAVCR2)。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的单克隆抗体。在其他或另外的实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的人或人源化抗体。在另外的实施方案中，针对TIM3的抗体阻断TIM3与半乳凝素-9(Gal 9)的相互作用。在一些实施方案中，抗TIM3抗体是在任何以下专利公开(通过引用并入本文)中公开的抗TIM3抗体：WO2013006490；W0201155607；WO2011159877；或W0200117057。在另一个实施方案中，TIM3抑制剂是WO2009052623中公开的TIM3抑制剂。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对B7-H3的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是MGA271。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对MR的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是利丽单抗(IPH2101)。在一些实施方案中，针对MR的抗体阻断KIR与HLA的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD137的抗体(也称为4-lBB或TNFRSF9)。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是乌瑞鲁单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)、PF-05082566(抗-4-1BB，PF-2566，Pfizer)或XmAb-5592 (Xencor)。在一个实施方案中，抗CD137抗体是美国公开申请号US 2005/0095244中公开的抗体；已公布的美国专利号7,288,638中公开的抗体(例如20H4.9-IgG4 [1007或BMS-663513]或20H4.9-IgG1[BMS-663031])；已公布的美国专利号6,887,673中公开的抗体 [4E9或BMS-554271]；已公布的美国专利号7,214,493中公开的抗体；在已公布的美国专利号6,303,121中公开的抗体，在已公布的美国专利号6,569,997中公开的抗体；在已公布的美国专利号6,905,685中公开的抗体；在已公布的美国专利号6,355,476中公开的抗体；在已公布的美国专利号6,362,325中公开的抗体 [1D8或BMS-469492; 3H3或BMS-469497;或3E1]；在已公布的美国专利号6,974,863中公开的抗体(例如53A2)，或在已公布的美国专利号6,210,669中公开的抗体(例如1D8、3B8或3E1)。在进一步的实施方案中，免疫检查点抑制剂是WO 2014036412中公开的抑制剂。在另一个实施方案中，针对CD137的抗体阻断CD137与CD137L的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PS的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是巴维昔单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD52的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是阿仑单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD30的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是brentuximab vedotin。在另一个实施方案中，针对CD30的抗体阻断CD30与CD30L的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD33的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是吉妥珠单抗奥佐米星。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD20的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是奥法木单抗。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是利妥昔单抗。在另一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是托西莫单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD27 (也称为TNFRSF7)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是CDX-1127 (Celldex Therapeutics)。在另一个实施方案中，针对CD27的抗体阻断CD27与CD70的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对OX40 (也称为TNFRSF4或CD134)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗OX40小鼠IgG。在另一个实施方案中，针对0x40的抗体阻断OX40与OX40L的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是TRX518 (GITR, Inc.)。在另一个实施方案中，针对GITR的抗体阻断GITR与GITRL的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对诱导型T细胞COS刺激剂(ICOS，也称为CD278)的抗体。在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是MEDI570 (Medlmmune，LLC)或AMG557(Amgen)。在另一个实施方案中，针对ICOS的抗体阻断ICOS与ICOSL和/或B7-H2的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对BTLA (CD272)、CD160、2B4、LAIR1、TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM的抑制剂。如本文其他地方所述，免疫检查点抑制剂可以是与免疫检查点分子结合的一种或多种结合蛋白、抗体(或其片段或变体)，下调免疫检查点分子表达的核酸，或与免疫检查点分子结合的任何其他分子(即小有机分子、肽模拟物、适体等)。在一些情况中，BTLA(CD272)的抑制剂是HVEM。在一些情况中，CD160的抑制剂是HVEM。在一些情况中，2B4的抑制剂是CD48。在一些情况中，L AIR1的抑制剂是胶原蛋白。在一些情况中，TIGHT的抑制剂是CD112、CD113或CD155。在一些情况中，CD28的抑制剂是CD80或CD86。在一些情况中，LIGHT的抑制剂是HVEM。在一些情况中，DR3的抑制剂是TL1A。在一些情况中，CD226的抑制剂是CD155或CD112。在一些情况中，CD2的抑制剂是CD48或CD58。在一些情况中，SLAM是自我抑制的且SLAM的抑制剂是SLAM。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制检查点蛋白，其包括但不限于CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原4，也称为CD152)，PD-L1 (程序性细胞死亡配体1，也称为CD274)，PDL2 (程序性细胞死亡蛋白2)，PD-1 (程序性细胞死亡蛋白1，也称为CD279)，B-7家族配体(B7-H1、B7-H3、B7-H4) BTLA (B和T)淋巴细胞弱化子，也称为CD272)，HVEM，TIM3 (T细胞膜蛋白3)，GAL9，LAG-3 (淋巴细胞激活基因-3；CD223)，VISTA，KIR(杀伤免疫球蛋白受体)，2B4 (也称为CD244)，CD160，CGEN-15049，CHK1 (检查点激酶1)，CHK2 (检查点激酶2)，A2aR(腺苷A2a受体)，CD2， CD27，CD28，CD30，CD40，CD70，CD80，CD86，CD137，CD226，CD276，DR3，GITR，HAVCR2，HVEM，IDO1 (吲哚胺2,3-双加氧酶1)，IDO2 (吲哚胺2,3-双加氧酶2)，ICOS(诱导型T细胞共刺激分子)，LAIR1，LIGHT (也称为TNFSF14，TNF家族成员)，MARCO (具有胶原结构的巨噬细胞受体)，OX40 (也称为肿瘤坏死因子受体超家族，成员4，TNFRSF4和CD134)及其配体OX40L (CD252)，SLAM，TIGHT，VTCN1或其组合。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂与检查点蛋白的配体相互作用，所述检查点蛋白包括：CTLA-4、PDLl、PDL2、PDl、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、A2aR、a B-7家族配体、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1、IDO2、ICOS (诱导型T细胞共刺激分子)、LAIR1、LIGHT、MARCO (具有胶原结构的巨噬细胞受体)、OX-40、SLAM、TIGHT、VTCN1或其组合。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制包括CTLA-4、PDL1、PD1或其组合的检查点蛋白。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制包括CTLA-4和PD1或其组合的检查点蛋白。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括派姆单抗(MK-3475)、纳武单抗(BMS-936558)、皮地利珠单抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1 105、度伐鲁单抗(MEDI4736)、MPDL3280A、BMS-936559、IPH2101、TSR-042、TSR-022、伊匹单抗、利丽单抗、阿特朱单抗、阿维单抗、曲美木单抗或其组合。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是纳武单抗(BMS-936558)、伊匹单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、曲美木单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗或其组合。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂是派姆单抗。
诊断和预防制剂
本文公开的NaPi2b抗体缀合物用于诊断和预防制剂。在一个实施方案中，将本文公开的NaPi2b抗体缀合物施用于处于发展一种或多种上述疾病(例如但不限于癌症)的风险中的患者。可以使用基因型、血清学或生物化学标记来确定患者或器官对一种或多种上述适应症的倾向。
在本公开的另一个实施方案中，将本文公开的NaPi2b抗体缀合物施用于被诊断患有与一种或多种前述疾病(例如但不限于癌症)相关的临床适应症的人类个体。在诊断时，施用本文公开的NaPi2b抗体缀合物以减轻或逆转与一种或多种前述疾病相关的临床适应症的作用。
在本公开的另一个实施方案中，用于鉴定适合用本文公开的缀合物治疗的卵巢癌患者的方法包括测量从所述患者获得的肿瘤样品中的某些特征的状态，并基于在肿瘤样品中某些特征的状态鉴定患者的治疗。
在本公开的另一个实施方案中，用于鉴定适合用本文公开的缀合物治疗的NSCLC患者的方法包括测量从患者获得的肿瘤样品中的某些特征的状态，并基于肿瘤样品中某些特征的状态鉴定患者的治疗。
本文公开的抗体还可用于检测患者样品中的NaPi2b，因此可用作诊断剂。例如，本文公开的NaPi2b抗体用于体外测定，例如ELISA，以检测患者样品中的NaPi2b水平。
在一个实施方案中，将本文公开的NaPi2b抗体固定在固体支持物(例如微量滴定板的孔)上。固定化抗体用作可存在于测试样品中的任何NaPi2b的捕获抗体。在使固定的抗体与患者样品接触之前，冲洗固体支持物并用阻断剂如乳蛋白或白蛋白处理以防止分析物的非特异性吸附。
随后用怀疑含有抗原的测试样品或含有标准量抗原的溶液处理孔。这样的样品例如是来自怀疑具有被认为是病理学诊断的循环抗原水平的对象的血清样品。在冲洗掉测试样品或标准品后，用可检测标记的第二抗体处理固体支持物。标记的第二抗体用作检测抗体。测量可检测标记的水平，并通过与从标准样品开发的标准曲线比较来确定测试样品中NaPi2b抗原的浓度。
应当理解，基于在体外诊断测定中使用本文公开的NaPi2b抗体获得的结果，可以基于NaPi2b抗原的表达水平在对象中分期疾病。对于给定的疾病，血液样品取自被诊断为处于疾病进展的各个阶段的对象，和/或在疾病的治疗性治疗的各个时间点。使用为每个进展或治疗阶段提供统计学显著结果的样品群，指定可被认为是每个阶段特征的一系列抗原浓度。
本文引用的所有出版物和专利文献均通过引用并入本文，如同每个这样的出版物或文献被具体和单独地指出通过引用并入本文。出版物和专利文献的引用并非旨在承认任何为相关的现有技术，也不构成对其内容或日期的任何承认。现在已经通过书面描述描述了本公开，本领域技术人员将认识到，本公开可以在各种实施方案中实践，并且前文描述和以下的实施例是出于说明的目的而非限制随后的权利要求。
实施例
以下工作实施例说明了接头、药物分子和PBRM，以及制备它们的方法。这些不旨在限制，并且本领域技术人员将容易理解可以使用其他试剂或方法。
缩写
以下缩写用于以下反应方案和合成实施例中。此列表无意成为本申请中所用的缩写的全包列表，因为有机合成领域的技术人员容易理解的其他标准缩写也可用于合成方案和实施例中。
AF-HPA 澳瑞他汀 F-羟丙基酰胺
FBS 胎牛血清
MMAE 单甲基澳瑞他汀E
NaPi2b II型磷酸钠共转运蛋白
NSCLC 非小细胞肺癌。
一般信息
通过Kabat编号方案鉴定CDR。
将肿瘤生长抑制(％TGI)定义为治疗组和对照组之间中值肿瘤体积(MTV)的百分比差异。
根据研究期间观察到的肿瘤大小的消退响应的发生率和幅度来确定治疗效果。治疗可能导致动物中肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR响应中，在研究过程中三次连续测量的肿瘤体积为其第1天体积的50％或更少，并且对于这三次测量中的一次或多次测量，肿瘤体积等于或大于13.5mm3。在CR响应中，在研究过程中连续三次测量的肿瘤体积小于13.5mm3。在研究结束时具有CR响应的动物被额外分类为无肿瘤存活者(TFS)。监测动物的消退响应。
以类似于美国专利8,685,383，实施例48中所述的方式制备AF-HPA。
使用来自美国专利8,603,474B2的SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39产生抗NaPi2b抗体(XMT-1535)。
使用来自美国专利8,535,675B2的SEQ ID NO：80和SEQ ID NO：81产生抗NaPi2b抗体(10H1.11.4B)。
在Phenomenex Gemini 5 µm 110 Å, 250 x 10 mm, 5 micron，半制备柱上进行HPLC纯化。
在Tosoh Biosciences TSK gel G4000柱(7.8mm×30cm，10μm)或Superose 12柱(GE Healthcare)上进行SEC。
在ProPac WCX-10(94mm×250mm)柱(ThermoFisher)上进行WCX。
尽可能利用分光光度法确定缀合物的药物含量，否则进行LC/MS或1H-NMR以定量测定药物含量。
在280nm利用分光光度法或通过ELISA测定蛋白-聚合物-药物缀合物的蛋白含量。
通过SEC用多糖或蛋白分子量标准测定聚合物缀合物的分子量(报道为表观重均分子量或峰值分子量)。更具体地，对于聚合物或聚合物-药物缀合物，使用多糖分子量标准，并且对于蛋白-药物-聚合物缀合物，使用蛋白标准。除非特别指出，报道的聚合物载体分子量是PHF的重均分子量；并且聚合物-药物缀合物分子量和蛋白-聚合物-药物缀合物是峰值分子量。NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物具有约170kDa至约250kDa的峰值分子量。合成/测量的聚合物和聚合物缀合物通常具有≤1.5的多分散性。
通过(Prep-WCX HPLC)，将NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物与残留的未反应的药物-聚合物缀合物分离。如果需要，通过尺寸排阻色谱法进行另外的纯化以除去任何聚集的NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物。通常，NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物通常含有如通过SEC测定的< 5% (w/w)聚集级分；如通过RP-HPLC或LC-MS/MS 测定的<0.5% (w/w，例如<0.1% w/w)游离(未缀合的)药物；如通过RP-HPLC测定的<1% (w/w)的游离的聚合物-药物缀合物和如通过HIC-HPLC和/或WCX HPLC测定的<2% (w/w，例如<1% w/w)的未缀合的NaPi2b。使用文献中描述的方法制备还原或部分还原的抗体，参见，例如，Francisco等，Blood 102(4): 1458-1465 (2003)。通过LC-MS/MS测定总药物(缀合和未缀合的)浓度。
为了测定NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物的药代动力学，开发了测定以测量NaPi2b抗体-PHF-AF-HPA缀合物(即缀合的AF-HPA)的血浆浓度和释放的未缀合的AF-HPA和AF (游离药物)的浓度。为了测定游离药物的血浆浓度，用乙腈处理酸化的血浆样品以沉淀血浆蛋白和抗体药物缀合物，并通过LC-MS/MS分析含有乙腈的上清液的游离药物。为了测定缀合的AF-HPA的浓度，将酸化的血浆样品进行碱性水解，然后酸化并用乙腈进行蛋白沉淀。通过LC-MS/MS分析含有释放的AF-HPA和AF的乙腈上清液。血浆中游离药物和缀合的AF-HPA的标准曲线分别在1至3,000ng/mL和10至20,000ng/mL的浓度范围内是线性的。通过ELISA测定总NaPi2b浓度。
通用程序
通用程序A. 聚合物与接头或药物的缀合
通常，聚合物(PHF-BA或PHF-GA)与含胺的接头(如，例如EG2-马来酰亚胺)或含胺接头药物(如，例如AF-HPA-Ala，HPA-Ala)的缀合在活化剂(如，例如EDC·HCl)存在下，在水性或10-90％有机/水性溶剂混合物中进行。典型的有机溶剂包括但不限于与水混溶的溶剂，如，例如DMSO、DMF、DMA、NMP、丙二醇和ACN。为了加速偶联，加入共活化剂，如，例如NHS。首先将聚合物与含氨基化合物混合，然后加入共活化剂(NHS)，且然后加入活化剂(EDC.HCl)。反应在0-10℃，pH4.5-7.5下在环境温度下进行1小时至24小时。通过渗滤或通过SEC纯化得到的聚合物缀合产物。将产物浓缩至2-50mg/mL，将pH调节至4.5至6.5以确保药物-聚合物接头稳定性，并将缀合物冷冻储存在-20至-80℃直至进一步使用。
聚合物与含胺接头或药物的缀合可以以任何顺序或同时进行。
通用程序B. 蛋白(NaPi2b抗体)的部分选择性还原
在与聚合物-药物缀合物缀合之前，相关NaPi2b抗体中的链间二硫基或未配对的二硫化物的部分选择性还原通过使用还原剂，如，例如TCEP、DTT或β-巯基乙醇来实现。当用过量的还原剂进行还原时，在缀合之前通过渗滤或SEC除去还原剂。NaPi2b二硫基转化为反应性巯基的程度取决于NaPi2b的化学计量、还原剂、pH、温度和/或反应持续时间。当PBRM中的一些但不是所有二硫基被还原时，还原的PBRM是部分还原的NaPi2b。
通用程序C. 部分还原的NaPi2b-靶向抗体与聚合物药物缀合物的缀合
部分还原的NaPi2b靶向抗体与聚合物-药物缀合物的缀合在中性或微碱性条件(pH6.5-8.5)，抗体浓度为1-10mg/mL并且聚合物-药物缀合物浓度为0.5- 10 mg/mL下进行。聚合物-药物缀合物通常以相对于所需的蛋白-聚合物-药物缀合物化学计量1-5倍过量使用。当抗体与聚合物-药物缀合物的马来酰亚胺基团缀合时，任选通过加入水溶性马来酰亚胺基阻断化合物，如，例如N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸甲酯、N-甲基半胱氨酸、2-巯基乙醇、3-巯基丙酸、2-巯基乙酸、巯基甲醇(即HOCH2SH)、苄基硫醇等终止缀合。
所得到的NaPi2b靶向抗体-聚合物-药物缀合物通常通过渗滤纯化以除去任何未缀合的聚合物-药物缀合物、未缀合的药物和小分子杂质。或者或另外，适当的色谱分离方法，如，例如，尺寸排阻色谱、疏水相互作用色谱、离子色谱，如，例如WCX色谱；反相色谱、羟基磷灰石色谱法、亲和色谱法或其组合可用于纯化NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物。通常将所得纯化的NaPi2b-聚合物-药物缀合物配制在pH 5.0-6.5的缓冲液中。
实施例1：XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的合成
使用美国申请公开US-2015-0104407-A1中描述的方法制备XMT-1535-(EG2-MI-(10kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物。表I给出了抗体-聚合物-药物缀合物的详细情况。
表I
实施例号 DAR (药物：抗体比)
1A 约8:1-约12:1
1B 约10:1-约14:1
1C 约11:1-约15:1
XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物具有约180kDa至约250kDa的峰值分子量。合成/测量的聚合物和聚合物缀合物通常具有≤1.5的多分散性。聚合物-药物缀合物(即，与抗体连接的载药聚合物链)含有约25％mol至约35％mol的β-丙氨酸，约7.0％mol至约10％mol AF-HPA-Ala和约1.5％ mol至约4％mol EG2-MI。
实施例2：(10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的合成
使用美国申请公开US-2015-0104407-A1中描述的方法制备(10H11.1.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物(非结合对照)。表II给出了抗体-聚合物药物缀合物的详细情况。
表II
实施例号 DAR (药物：抗体比)
2A 约10:1-约14:1
2B 约14:1-约19:1
2C 约9:1-约13:1
(10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物具有约170kDa至约230kDa的峰值分子量。合成/测量的聚合物和聚合物缀合物通常具有≤1.5的多分散性。聚合物-药物缀合物(即，与抗体连接的载药聚合物链)含有约25％mol至约35％mol的β-丙氨酸，约7％mol至约10％mol AF-HPA-Ala和约1.5％mol至约4％mol EG2-MI。
实施例3：利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的合成
使用美国申请公开US-2015-0104407-A1中描述的方法制备利妥昔单抗-(EG2-MI-(10kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物(非结合对照)。表III给出了抗体-聚合物-药物缀合物的详细情况。
表III
实施例号 DAR (药物：抗体比)
3A 约15:1-约21:1
3B 约14:1-约19:1
利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物具有约170kDa至约230kDa的峰值分子量。合成/测量的聚合物和聚合物缀合物通常具有≤1.5的多分散性。聚合物-药物缀合物(即，与抗体连接的载药聚合物链)含有约25％mol至约35％mol的β-丙氨酸，约7％mol至约10％mol AF-HP A-Ala和约1.5％mol至约4％mol EG2-MI。
实施例4：(10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE)的合成
使用Doronina等，Nature biotechnology, 21: 778-784 (2003)中描述的方法制备(10H1.11.4B)-(马来酰亚胺-VC-PABA-MMAE)缀合物。表IV给出了抗体-药物缀合物的详细情况。
表IV
实施例号 DAR (药物：抗体比)
4A 4:1
4B 3:1
实施例5：NaPi2b-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物的细胞毒性测定
使用Cell Titer-Glo (Promega Corp)，在肿瘤细胞系中体外评估实施例1A, XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例2C, (10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) ；实施例3A, 利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))和AF-HPA或实施例1C, XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例2C, (10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) ；实施例3B, 利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；和AF-HPA的抗增殖特性。在含有20％FBS的RPMI培养基中培养OVCAR3 (卵巢腺癌细胞系，未扩增，ATCC, Cat.# HTB-161)。在含有终浓度为1.5g/L碳酸氢钠的MCDB 105培养基和含有终浓度为2.2g/L碳酸氢钠和15％FBS的培养基 199的1：1混合物中培养TOV-21 G (人卵巢腺癌细胞系，未扩增，ATCC, Cat.#CRL-11730)。在含有10％FBS的RPMI培养基中培养IGROV1 (卵巢腺癌细胞系，未扩增)。在含有10％FBS的RPMI培养基中培养HCC-4006 (人肺癌细胞系，未扩增，ATCC, Cat.# ATCC®CRL-2871™)。
对于细胞毒性测定，将细胞以每孔5000个细胞的密度接种在96孔板中，并在37℃，5％CO2存在下温育过夜过程中，允许其附着。然后用含有一系列缀合物实施例1A、2C、3A或AF-HPA (100nM至0.1pM)或实施例1C、2C、3B或AF-HPA (100nM至0.1pM)的新鲜培养基替换培养基并将细胞在5％CO2存在下于37℃温育72小时或6天。如试剂盒说明书中所述，使用CellTiter-Glo®发光细胞活力测定(Promega, Madison, WI)测量细胞存活。将细胞活力相对于未处理的对照标准化，并以百分比表示。绘制值并使用GraphPad Prism软件(SanDiego，CA)使用4参数，可变斜率，剂量响应曲线拟合算法计算IC50值。表VA和VB给出了缀合物和AF-HPA的细胞毒性的说明性结果。
表VA
肿瘤细胞系 NaPi2b 受体数量/细胞 实施例1A (nM) 实施例2C (nM) 实施例3A (nM) AF-HPA<sup>1</sup> (nM)
OVCAR-3 ~32,000 0.002 0.014 0.26 4.18
IGROV1 ~35,000 ~5.0 10.62 53.04 28.61
TOV-21G ~10,000 0.04 2.03 2.76 2.07
HCC-4006 ~52,000 0.13 2.96 1.83 0.68
表VB
肿瘤细胞系 NaPi2b 受体数量/细胞 实施例1C (nM) 实施例2C (nM) 实施例3B (nM) AF-HPA<sup>1</sup> (nM)
OVCAR-3 ~32,000 0.01 0.11 1.13 1.34
IGROV1 ~35,000 0.38 2.73 37.3 25.94
TOV-21G ~10,000 6.68 41.54 39.68 12.70
HCC-4006 ~52,000 0.35 3.17 5.29 7.83
1 =有效载荷当量。
如表VA和VB中所示，在所有测试的细胞系中，XMT-1535抗体-聚合物-药物缀合物比(10H1.11,4B)抗体-聚合物-药物缀合物或利妥昔单抗抗体-聚合物-药物缀合物更有效。
实施例6. 施用NaPi2b抗体-聚合物-药物缀合物的肿瘤生长响应
雌性CB-17 SCID小鼠皮下植入OVCAR-3 (每组n=10)或非小细胞肺癌肿瘤片段(每组n= 10)。在第1天或如所示，将测试化合物或媒介物以单剂量IV给药。使用数字卡尺在图1至3中所示的时间测量肿瘤大小。计算肿瘤体积并用于测定肿瘤生长的延迟。当肿瘤达到1000mm3的大小时，处死小鼠。将肿瘤体积报道为每组的均值±SEM。
图1提供了第一天各自以3 mg/kg (0.21 mg/kg澳瑞他汀有效载荷当量剂量)作为单剂量IV施用媒介物；XMT-1535；实施例3A, 利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4A ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE)) ；实施例2C (10H1.11.4B)-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))或实施例1B, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDaPHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，皮下植入OVCAR-3肿瘤片段(每组n = T0)的小鼠中肿瘤响应的结果。媒介物，XMT-1535；缀合物实施例3A和实施例4A均显示肿瘤体积增加，没有一种治疗显示任何部分消退。缀合物实施例2C和实施例1B各自显示肿瘤体积减小。缀合物实施例2C具有单一的部分消退响应，而缀合物实施例1B具有70％的消退，其由4个部分消退和3个完全消退组成。终点时间中位数(TTE)为57天，对应于118％肿瘤生长延迟(TGD)(30.9天)。在第23天，肿瘤生长抑制(TGI)结果为95％。它在统计学上不同于对照(P &lt;0.001，Mann-Whitney检验)，并且高于60％潜在治疗活性阈值。
图2提供了IV施用媒介物；实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))(以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周)；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE)) (以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周)；实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) (第一天以3 mg/kg作为单剂量给药，或以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周)；或在第一天以5 mg/kg (0.36 mg/kg澳瑞他汀有效载荷当量剂量)作为单剂量IV施用实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，皮下植入OVCAR-3肿瘤片段(每组n = 10)的小鼠中肿瘤响应的结果。媒介物和缀合物实施例3B和实施例4B均显示肿瘤体积增加，没有一种治疗显示任何部分消退。对于缀合物实施例4B，第22天的肿瘤生长抑制(TGI)在统计学上与对照不同(P &lt;0.001，Mann-Whitney检验)，并且为63％-略高于60％潜在治疗活性阈值。在所有治疗剂量下，缀合物实施例1B在该研究中最具活性，产生80-100％的消退响应。对于该缀合物，第22天TGI结果与对照在统计学上不同(P&lt;0.001，Mann-Whitney检验)，并且为96-97％。
图3提供了各自以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))；或实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植物KRAS突变体非小细胞肺癌模型(CTG-0860)(每组n = 10)中肿瘤响应的结果。媒介物；缀合物实施例3B和实施例4B各自显示肿瘤体积增加。第17天肿瘤体积的比较显示实施例1C的肿瘤体积显著低于媒介物对照组的肿瘤体积(p≤ 0.05)。从第0天至第17天的数据分析显示实施例1C 3mg/kg组与媒介物对照组相比，具有显著较小的肿瘤体积(p≤ 0.01)。实施例1C 3mg/kg组中有2个PR。在研究期间，任何组中都没有死亡。
图4提供了各自以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；实施例3B，利妥昔单抗-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))；实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))，或在第一天以5 mg/kg作为单剂量IV施用实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(CTG-0852)(每组n = 8)中肿瘤响应的结果。从第0天到第62天的数据分析显示，与媒介物对照组相比，所有组都具有显著较小的肿瘤体积(p ≤ 0.01或p ≤0.0001)。实施例4B 3mg/kg组中有3个PR。实施例1C 5mg/kg组中有7个PR，且实施例1C 3mg/kg组中有5个PR，1个CR和2个TFS。实施例3B 3mg/kg组中没有PR，CR或TFS。在研究期间，任何组中都没有死亡。
图5提供了以3 mg/kg或6 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；和实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(ST1906，BRAF K601E突变)(每组n = 6)中肿瘤响应的结果。媒介物显示肿瘤体积增加，而缀合物实施例1C显示强大的抗肿瘤活性。在用缀合物实施例1C治疗后第60天，六个中的六个均表现出TFS。
图7提供了各自以3 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；实施例3B, 利妥昔单抗- (EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala))) ；实施例4B ((10H1.11.4B)-(MC-VC-PABA-MMAE))；或实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))，或以5 mg/kg作为单剂量IV施用实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(CTG-0178)(每组n = 8)中肿瘤响应的结果。媒介物；缀合物实施例3B和实施例4B各自显示肿瘤体积增加。与媒介物对照组相比，3mg/kg和5mg/kg的缀合物实施例1C显著降低肿瘤生长(p≤0.05)。在研究期间，任何组中都没有死亡。
图8提供了以3 mg/kg或6 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；和实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(ST1437，EGFR野生型，Alk野生型突变)(每组n = 6)中肿瘤响应的结果。媒介物显示肿瘤体积增加，而缀合物实施例1C显示抗肿瘤活性。在用缀合物实施例1C治疗后第60天，六个中的一个表现出TFS。
图9提供以3 mg/kg或6 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；和实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(ST742，EMLK-Alk易位)(每组n = 6)中的肿瘤响应的结果。媒介物显示肿瘤体积增加，而缀合物实施例1C显示抗肿瘤活性。在用缀合物实施例1C治疗后第60天，六个中的五个表现出TFS。
图10提供以3 mg/kg或6 mg/kg，每周一次给药，进行3周IV施用媒介物；和实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))后，患者来源的异种移植非小细胞肺癌模型(ST1243，EGFR扩增，KIT扩增，CDKN2A缺失)(每组n = 6)中肿瘤响应的结果。媒介物显示肿瘤体积增加，而缀合物实施例1C显示抗肿瘤活性。
实施例7：使用流式细胞术对XMT-1535和NaPi2b-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))缀合物的细胞结合亲和力
通过流式细胞术，评估实施例1C, XMT 1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))和抗NaPi2B抗体XMT 1535与抗原表达细胞的细胞表面结合。使TOV-21G或OVCAR3细胞在培养基中生长过夜至约90％汇合培养物，然后通过用胰蛋白酶-EDTA (Gibco-ThermoFisher Scientific, USA)处理，将其从平板表面释放。将脱离的细胞用含有6％山羊血清的冰冷培养基洗涤一次，并重悬于相同的培养基中。以50,000个/孔，将细胞等分到V-底96孔板中，并与100μl具有6％山羊血清的培养基(MCDB105 (1.5g/ L碳酸氢钠)和培养基 199(2.2g/L碳酸氢钠加15％FBS的1：1混合物)中的一系列测试物浓度(0.23-500nM)在冰上温育3小时。然后将细胞用冰冷的PBS洗涤一次，并在含有2％山羊血清和6μL/ml的二级荧光标记抗体，Alexa Fluor® 647-标记的山羊抗人IgG (Life Technologies, Cat# A-21445)的150μl 培养基中，在冰上重悬1小时。用冰冷的PBS洗涤细胞一次，并悬浮于含1％多聚甲醛的150μl冰冷PBS中。通过在MACSQuant流式细胞仪(Miltenyi Biotec, BergischGladbach, Germany)上，对每个处理运行5000个细胞，来测定每个细胞结合的荧光量。绘制每个处理的中值荧光值，并使用GraphPad Prism软件通过使用一个位点特异性结合模型的非线性回归计算每个测试物品的结合常数KD。
表VI
。
如表VI中所示，裸抗体XMT-1535和XMT-1535-抗体-聚合物-药物缀合物对测试的细胞系具有相似的结合亲和力。
实施例8：非人灵长类动物毒性和PK研究
利用实施例1C，XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))在食蟹猴中进行单剂量毒性研究。以0 mg/kg (组1), 1.25 mg/kg (1074 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量；组2), 2.5 mg/kg (2147 μg/m2 澳瑞他汀有效载荷当量；组3)或5 mg/kg (或4294 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量；组4)作为单次iv输注，向2只动物/性别的组施用。在第-7天，第3天，第8天，第15天和第22天，从所有组中收集血液用于血液学，凝血和血清化学分析。还在给药前，IV输注结束后10分钟，1小时，6小时，24小时，48小时，72小时，96小时和168小时，和第15天和第22天收集血液样品，用于PK测定。
当施用高达5mg/kg (即，4294 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量)时，缀合物实施例1C在食蟹猴中耐受良好，其中没有观察到靶标介导的毒性和有限的不利发现。没有骨髓毒性的证据。第2，3和4组没有濒死情况。在下表VII中显示测试物品相关的发现。
表VII
*在终末期和恢复期尸检中，在所有测试物品处理的动物中均观察到偶发有丝分裂象的最小Kupffer细胞过度增大(非不利发现)。
在所有组中，一只动物在终末期尸检时受到涉及胃肠道的不利变化的影响。恢复动物在肝脏(第2至4组)，脾脏(第3组和第4组)和肺(第4组)中具有测试物品相关的发现(每个组织中有一个)，但这些都不被认为是不利的。存在嗜中性粒细胞计数的瞬时增加和单核细胞增多，连同球蛋白浓度的增加，白蛋白水平的降低和白蛋白与球蛋白比例的降低。此外，观察到升高的肌酸激酶(CK)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。所检测到的改变无一持续通过恢复期。没有骨髓抑制，也没有嗜中性粒细胞减少症。此外，在尸检时，没有测试物品的总体发现或相关的体重减轻。基于功效和该非人灵长类动物毒理学研究，缀合物实施例1C，XMT-1535-(EG2-MI-(10 kDa PHF-BA-(AF-HPA-Ala)))的治疗指数为约6。
通过LC-MS/MS分析血液样品以测定总AF-HPA的浓度，并通过ELISA测定每个时间点的总抗体浓度。图6A和6B分别显示了在食蟹猴中以1.25 mg/kg (1074 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量；组2)，2.5 mg/kg (2147 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量；组3)或5 mg/kg (或4294 μg/m2澳瑞他汀有效载荷当量；组4)施用单剂量的缀合物实施例1C后，总抗体和总药物的血浆药代动力学。表VIII给出了总抗体和总AF-HPA的计算的AUC0至504 hr和半衰期。未检测到游离药物(即未结合的AF和未结合的AF-HPA)(LC MS/MS方法的LLOQ为1 ng/mL)。
表VIII
。
XMT-1535-聚合物-药物缀合物具有~9天的半衰期和~1.4 mg·hr/mL/mg/kg 的AUC0-504 hr。总AF-HPA具有~5天的半衰期和~157 µg·hr/mL/mg/kg的AUC0-504 hr。缀合物在血浆中表现出良好的稳定性，且几乎没有或没有检测到游离药物。
其他实施方案
虽然已经结合本发明的详细描述描述了本发明，但是前面的描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。

Claims (35)

1.缀合物，其包含特异性结合SLC34A2的胞外区的分离的抗体和与所述分离的抗体连接的一个或多个携带D的聚合物支架，其中所述一个或多个携带D的聚合物支架中的每一个独立地具有式(Ic)：
其中：
所述支架包含具有范围为约2 kDa至约40 kDa的分子量的聚(1-羟甲基亚乙基羟甲基-甲缩醛) (PHF)；
D的每次出现独立地为具有≤ 5 kDa的分子量的治疗剂；
LD1为含羰基部分：
中的的每次出现独立地为含有可生物降解键的第一接头，使得当所述键断裂时，D以用于其预期治疗作用的活性形式释放；并且LD1和D之间的中的表示D与LD1的直接或间接连接；
的每次出现独立地是尚未与分离的抗体连接的第二接头，其中LP2是含有待与所述分离的抗体的官能团形成共价键的官能团的部分，并且LD1和LP2之间的表示LP2与LD1的直接或间接连接，并且第二接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
的每次出现独立地是第三接头，其将每个携带D的聚合物支架连接到所述分离的抗体，其中连接到LP2的末端表示在LP2的官能团与所述分离的抗体的官能团之间形成共价键后，LP2与所述分离的抗体的直接或间接连接；并且所述第三接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3是0至约18的整数，
m4是1至约10的整数；
m、m1、m2、m3和m4的总和范围为15至300；和
与所述分离的抗体连接的LP2的总数为10或更少。
2.权利要求1的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体包含含有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的可变重链互补性决定区1 (CDRH1)、含有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)的可变重链互补性决定区2 (CDRH2)、含有氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)的可变重链互补性决定区3 (CDRH3)、含有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补性决定区1 (CDRL1)、含有氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补性决定区2 (CDRL2)、含有氨基酸序列QQYSKLPLT(SEQ ID NO: 10)的可变轻链互补性决定区3 (CDRL3)。
3.权利要求1或2的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体包含含有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的重链可变序列和含有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的轻链可变序列。
4.权利要求1-3中任一项的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体包含含有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链。
5.权利要求1-4中任一项的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体是单克隆抗体。
6.权利要求1-5中任一项的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体是兔、小鼠、嵌合、人源化的或完全人的单克隆抗体。
7.权利要求1-6中任一项的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体是IgG同种型。
8.权利要求1-7中任一项的缀合物，其中特异性结合SLC34A2的胞外区的所述分离的抗体是IgG1同种型。
9.权利要求1-8中任一项的缀合物，其中所述分离的抗体与包含以下的分离的抗体竞争特异性结合人NaPi2b：含有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQ ID NO: 5)的可变重链互补性决定区1 (CDRH1)、含有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQ ID NO: 6)的可变重链互补性决定区2 (CDRH2)、含有氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO: 7)的可变重链互补性决定区3 (CDRH3)、含有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补性决定区1(CDRL1)、含有氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补性决定区2 (CDRL2)、含有氨基酸序列QQYSKLPLT (SEQ ID NO: 10)的可变轻链互补性决定区3 (CDRL3)。
10.权利要求1-8中任一项的缀合物，其中所述分离的抗体与包含含有SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的重链可变序列和含有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的轻链可变序列的分离的抗体，或者与包含含有SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的轻链的分离的抗体竞争特异性结合人NaPi2b。
11.权利要求1-10中任一项的缀合物，其中m、m1、m2、m3和m4的总和范围为15-150，m1是1-70的整数，m2是1-20的整数，m3是0-10的整数，且PHF具有范围为约2 kDa至约20 kDa的分子量。
12.权利要求1-11中任一项的缀合物，其中m、m1、m2、m3和m4的总和范围为20-110，m1是2-50的整数，m2是2-15的整数，m3是0-8的整数；且PHF具有范围为约3 kDa至约15 kDa的分子量。
13.权利要求1-12中任一项的缀合物，其中m、m1、m2、m3和m4的总和范围为40-75，m1是2-35的整数，m2是2-10的整数，m3是0-5的整数；且PHF具有范围为约5 kDa至约10 kDa的分子量。
14.权利要求1-13中任一项的缀合物，其中LP2的官能团选自–SRp、-S-S-LG、和卤素，其中LG是离去基团，Rp是H或硫保护基团，且Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键。
15.权利要求1-14中任一项的缀合物，其中LD1包含—X-(CH2)v-C(=O)—，且X与的羰基直接连接，其中X是CH2、O或NH，且v是1-6的整数。
16.权利要求1-15中任一项的缀合物，其中的每次出现独立地为 —C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)-NH-(CH2)u-NHC(=O)-(CH2)w-(OCH2)x-NHC(=O)-(CH2)y—M，其中X为CH2、O或NH，v、u、w、x和y中的每一个独立地为1-6的整数，且M为，其中Xa和Xb之一是H，且另一者是水溶性马来酰亚胺基阻断部分，或Xa和Xb以及它们所连接的碳原子一起用于碳-碳双键。
17.权利要求1-16中任一项的缀合物，其中v、u、w、x和y中的每一个为2。
18.权利要求1-17中任一项的缀合物，其中D的每次出现独立地选自长春花生物碱、澳瑞他汀、微管蛋白抑制剂、倍癌霉素、卡里奇霉素、拓扑异构酶I抑制剂、PI3激酶抑制剂、MEK抑制剂、KSP抑制剂、吡咯并苯并二氮杂卓、非天然喜树碱化合物、美登木素、DNA结合药物、DNA烷化药物、RNA聚合酶抑制剂、及其类似物。
19.权利要求1-18中任一项的缀合物，其中所述一个或多个携带D的聚合物支架中的每一个独立地具有式(Id)：
其中：
m3a是0至约17的整数，
m3b是1至约8的整数，和
所述末端表示所述一个或多个聚合物支架与所述分离的抗体的直接连接。
20.权利要求1的缀合物，其中所述一个或多个携带D的聚合物支架中的每一个独立地具有式(If)：
其中：
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3a是0至约17的整数，
m3b是1至约8的整数；
m3a和m3b的总和范围为1至约18；和
m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为15至约300；
所述末端表示一个或多个聚合物支架与特异性结合SLC34A2的所述分离的抗体的连接，其中特异性结合SLC34A2的所述分离的抗体是包含以下的分离的抗体：含有氨基酸序列SASQDIGNFLN (SEQ ID NO: 8)的可变轻链互补性决定区1 (CDRL1)；含有氨基酸序列YTSSLYS (SEQ ID NO: 9)的可变轻链互补性决定区2 (CDRL2)；含有氨基酸序列QQYSKLPLT(SEQ ID NO: 10)的可变轻链互补性决定区3 (CDRL3)；含有氨基酸序列GYTFTGYNIH (SEQID NO: 5)的可变重链互补决定区1 (CDRH1)；含有氨基酸序列AIYPGNGDTSYKQKFRG (SEQID NO: 6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；和含有氨基酸序列GETARATFAY (SEQ ID NO:7)的可变重链互补决定区3 (CDRH3)；和
所述PHF与所述抗体之间的比例为10或更小。
21.权利要求20的缀合物，其中式(If)中的PHF具有范围为约2 kDa至约20 kDa的分子量，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约15至约150，m1为1至约70的整数，m2为1至约20的整数，m3a为0至约9的整数，m3b为1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围为1至约10，且所述PHF与特异性结合SLC34A2 的所述分离的抗体之间的比例为2至约8的整数。
22.权利要求20或21的缀合物，其中式(If)中的PHF具有范围为约3 kDa至约15 kDa的分子量，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约20至约110，m1为2至约50的整数，m2为2至约15的整数，m3a为0至约7的整数，m3b为1至约8的整数，m3a和m3b的总和范围为1至约8，且所述PHF与特异性结合SLC34A2 的所述分离的抗体之间的比例为2至约8的整数。
23.权利要求20-22中任一项的缀合物，其中式(If)中的PHF具有范围为约5 kDa至约10kDa的分子量，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1为约2至约35的整数，m2为约2至约10的整数，m3a为0至约4的整数，m3b为1至约5的整数，m3a和m3b的总和范围为1至约5，且所述PHF与特异性结合SLC34A2 的所述分离的抗体之间的比例为2至约8的整数。
24.权利要求20-23中任一项的缀合物，其中式(If)中的PHF具有范围为约5 kDa至约10kDa的分子量，m、m1、m2、m3a和m3b的总和范围为约40至约75，m1为约2至约35的整数，m2为约2至约10的整数，m3a为0至约4的整数，m3b为1至约5的整数，m3a和m3b的总和范围为1至约5，且所述PHF与特异性结合SLC34A2 的所述分离的抗体之间的比例为2至约6的整数。
25.药物组合物，其包含权利要求1-24中任一项的缀合物和药学上可接受的载体。
26.制备根据权利要求1的缀合物的方法，其包括使特异性结合SLC34A2的分离的抗体与式(Ia)的携带D的聚合物支架反应，从而使得形成所述缀合物：
其中：
LD1为含羰基部分：
中的的每次出现独立地为含有可生物降解键的第一接头，使得当所述键断裂时，D以用于其预期治疗作用的活性形式释放；LD1和D之间的中的表示D与LD1的直接或间接连接；
的每次出现独立地是尚未与分离的抗体连接的第二接头，其中LP2是含有待与所述分离的抗体的官能团形成共价键的官能团的部分，并且LD1和LP2之间的表示LP2与LD1的直接或间接连接，并且第二接头的每次出现都与第一接头的每次出现不同；
m是1至约300的整数，
m1是1至约140的整数，
m2是1至约40的整数，
m3是1至约18的整数，和
m、m1、m2和m3的总和范围为15至约300。
27.减轻有此需要的对象中的癌症的症状的方法，所述方法包括以足以减轻所述癌症的症状的量向所述对象施用根据权利要求1-24中任一项的缀合物。
28.权利要求27的方法，其中所述对象是人。
29.权利要求27或28的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、甲状腺癌、结肠直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、乳腺癌、肾癌和唾管癌。
30.权利要求27-29中任一项的方法，其中所述癌症选自非小细胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌。
31.权利要求30的方法，其中所述非小细胞肺癌为非鳞状非小细胞肺癌。
32.权利要求30的方法，其中所述卵巢癌是上皮卵巢癌。
33.权利要求27-32中任一项的方法，其还包括向所述对象施用治疗剂。
34.权利要求27-33中任一项的方法，其中所述对象患有选自复发性卵巢癌、铂敏感性卵巢癌、铂难治性卵巢癌和铂抗性卵巢癌的一种或多种卵巢癌。
35.权利要求27-33中任一项的方法，其中所述对象患有晚期卵巢癌并且尚未接受任何用于治疗癌症的先前化学疗法。
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