CN109280077A - 一种鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽 - Google Patents

一种鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一组鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽，以及使用所述多肽通过质谱法鉴定阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的方法，所述的多肽组中的多肽具有特定的序列结构及特定m/z值(包括特定的母离子和一对子离子)，其序列如SEQ ID NO.1～54所示，所述肽段及其m/z为猪皮源胶特有，在驴皮源阿胶、牛皮源、马皮源、骡皮源熬制胶中未见存在。

Description

一种鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及一组鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽及其使用方法。
背景技术
阿胶为马科动物驴的皮，经煎煮、浓缩制成的固体胶，原产自山东省东阿县，至今已有近三千年历史。阿胶是传统的滋补上品、补血圣药，味甘平，入肺、肝、肾经，具有补血止血、滋阴润燥等功效，药食两用，长期服用可补血养血、美白养颜、抗衰老、抗疲劳、提高免疫力，适用人群广泛。李时珍著《本草纲目》载：“阿胶《本经》上品。弘景曰：‘出东阿，故名阿胶’”。阿胶是中药材中典型的最讲究“地道性”的药材，道地阿胶必汲取东阿之水，得传承人之奇秘技艺炼制而成。道地阿胶表面平整，无油气孔，质硬而脆，断面光亮细腻，碎片对光照视呈棕色半透明状，李时珍赞其"黄透如琥珀色，光黑如瑿漆”。
早在1996年就曾曝光过假阿胶事件。时隔多年之后，阿胶造假不仅没有得到遏制，而且越演越烈。这些不法企业利用牛皮、马皮、猪皮下脚料等劣质材料冒充驴皮制作伪劣阿胶，并以次充好向市场销售。
导致阿胶造假事件屡禁不止的一部分原因是缺少鉴定的技术支持，动物皮经过熬制溶解之后，破坏了本身的特性，很难鉴别出动物皮的来源。目前国家也没有有效鉴别阿胶成分的方法，只能靠从生产源头进行控制，以上情况导致了许多不法企业钻空子。
迫切需要一种高效准确鉴定阿胶及含阿胶制品真伪的方法。随着代谢组学技术的发展，利用肽组学直接鉴定动物源成分成为可能。
发明内容
本发明对驴皮阿胶和猪皮胶中的多肽进行了研究，并在牛皮胶、马皮胶、骡皮胶中进行了验证，建立了从多肽水平对阿胶及含阿胶制品中猪源性成分进行鉴别的技术，填补了国内外阿胶及含阿胶制品鉴别的空白。
本发明首先涉及一组用于单独或组合检测阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽，所述的含阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒，所述的多肽的序列为：
肽段1：SEQ ID NO.1：GGPGPAGPR；
肽段2：SEQ ID NO.2：GVVGLPGQRGER；
肽段3：SEQ ID NO.3：GEAGPAGPAGPAGPR；
肽段4：SEQ ID NO.4：GPSGPQGIR；
肽段5：SEQ ID NO.5：GEPGPAGLPGPPGER；
肽段6：SEQ ID NO.6：GLPGEFGLPGPAGPR；
肽段7：SEQ ID NO.7：EAVLGLWGK；
肽段8：SEQ ID NO.8：DGASGHPGPIGPPGPR；
肽段9：SEQ ID NO.9：GAPGPVGPAGPR；
肽段10：SEQ ID NO.10：GEPGPAGSVGPAGAVGPR；
肽段11：SEQ ID NO.11：GNSGEPGAPGSK；
肽段12：SEQ ID NO.12：GEMGPAGIPGAPGLMGAR；
肽段13：SEQ ID NO.13：GARGEPGPAGLPGPPGER；
肽段14：SEQ ID NO.14：EGPAGIPGIDGR；
肽段15：SEQ ID NO.15：GPVGPSGPPGKDGASGHPGPIGPPGPR；
肽段16：SEQ ID NO.16：GFPGSPGNVGPAGK；
肽段17：SEQ ID NO.17：QGPSGPSGER；
肽段18：SEQ ID NO.18：GFTGEFGIPGPAGPR；
肽段19：SEQ ID NO.19：GLHGEFGLPGPAGPR；
肽段20：SEQ ID NO.20：DGRTGQPGAVGPAGIR；
肽段21：SEQ ID NO.21：GETGPAGPAGAPGPAGSR；
肽段22：SEQ ID NO.22：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段23：SEQ ID NO.23：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段24：SEQ ID NO.24：GEPGPAGSHGPAGAVGPR；
肽段25：SEQ ID NO.25：GPNGEVGSAGPPGPPGLR；
肽段26：SEQ ID NO.26：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段27：SEQ ID NO.27：GEPGPTGVQGPPGPAGEEGKRGAR；
肽段28：SEQ ID NO.28：AGVMGPEGPRGATGPAGVR；
肽段29：SEQ ID NO.29：TGQPGAVGPAGIR；
肽段30：SEQ ID NO.30：GPPGPMGPPGLAGPPGESGR；
肽段31：SEQ ID NO.31：SGDRGETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段32：SEQ ID NO.32：DGLNGLPGPIGPPGPR；
肽段33：SEQ ID NO.33：DFPQALYGR；
肽段34：SEQ ID NO.34：GPAGPVGPVGAR；
肽段35：SEQ ID NO.35：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段36：SEQ ID NO.36：VIQLEAK；
肽段37：SEQ ID NO.37：VGGQAGAHGAEALER；
肽段38：SEQ ID NO.38：TGQPGAVGPAGIR；
肽段39：SEQ ID NO.39：TGETGASGPPGFAGEK；
肽段40：SEQ ID NO.40：GPTGPAGVR；
肽段41：SEQ ID NO.41：SVGPAGAVGPR；
肽段42：SEQ ID NO.42：GEPGNAGSVGPAGAVGPR；
肽段43：SEQ ID NO.43：GISGITGAR；
肽段44：SEQ ID NO.44：GPNGAVGPSGPR；
肽段45：SEQ ID NO.45：VDVLSQELAFLK；
肽段46：SEQ ID NO.46：EAVLGLWGK；
肽段47：SEQ ID NO.47：PDVQAAFQK；
肽段48：SEQ ID NO.48：VHLSAEEK；
肽段49：SEQ ID NO.49：VGGQAGAHGAEALER；
肽段50：SEQ ID NO.50：MLEEIMK；
肽段51：SEQ ID NO.51：VIQLEAK；
肽段52：SEQ ID NO.52：EDAVSAAFR；
肽段53：SEQ ID NO.53：MAPLGAEFR；
肽段54：SEQ ID NO.54：AAADIGADGIVVSNHGGR。
其m/z分别为：
肽段1：391.2；
肽段2：612.8；
肽段3：421.2；
肽段4：434.7；
肽段5：479.2；
肽段6：485.3；
肽段7：486.8；
肽段8：495.6；
肽段9：516.8；
肽段10：516.9；
肽段11：545.7；
肽段12：557.6；
肽段13：574.0；
肽段14：577.8；
肽段15：608.6；
肽段16：637.8；
肽段17：486.2；
肽段18：492.6；
肽段19：492.6；
肽段20：503.6；
肽段21：508.2；
肽段22：516.3；
肽段23：555.3；
肽段24：524.3；
肽段25：550.3；
肽段26：560.6；
肽段27：1145.6；
肽段28：579.6；
肽段29：590.8；
肽段30：613.6；
肽段31：654.7；
肽段32：773.9。
肽段33：533.8；
肽段34：400.7；
肽段35：523.6
肽段36：474.9；
肽段37：591.2；
肽段38：732.3；
肽段39：406.5；
肽段40：484.6；
肽段41：517.6；
肽段42：416.5；
肽段43：533.6；
肽段44：681.8；
肽段45：487.1；
肽段46：502.6；
肽段47：457.1；
肽段48：712.3；
肽段49：447.6；
肽段50：401.0；
肽段51：483.5；
肽段52：496.6；
肽段53：517.8；
肽段54：764.0。
54条多肽对应的母离子、部分子离子见下表1，
表1猪皮源性多肽序列及其对应的母离子、部分子离子
本发明所涉及前处理方法包括如下步骤：
(1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：
(2)通过质谱法检测待测样本的多肽成分，分析样本中的动物皮来源成分。
所述的质谱前处理步骤如下：
(1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1g～0.5g阿胶样品或1.0-2.0g阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；
(2)溶液过0.22μm滤膜；
(3)取10～20μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL～200μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。
本发明还涉及两种检测阿胶及含阿胶制品的质谱方法，所述的质谱法检测为，
采用AB SCIEX 5600质谱检测，
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
TOF扫描范围：100-3000Da，
正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。
采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测，
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
所述的分析样本中的猪皮源性成分为，将待测样品的质谱结果对比SEQ ID NO.1～54的各条特异性多肽的质谱谱图，出现SEQ ID NO.1～54的各条特异性多肽的质谱检测谱图时，即可判断该组织样本存在猪皮源性成分。
附图说明
图1，在驴皮阿胶中检测SEQ ID NO.1～54所示多肽的色谱特征图
图2，在猪皮胶中检测SEQ ID NO.1～54所示多肽的色谱特征图
图3，在牛皮胶中检测SEQ ID NO.1～54所示多肽的色谱特征图
图4，在马皮胶中检测SEQ ID NO.1～54所示多肽的色谱特征图
图5，在骡皮胶中检测SEQ ID NO.1～54所示多肽的色谱特征图
图6，猪皮胶代表性特征肽段在驴皮阿胶中质谱图
图7，猪皮胶代表性特征肽段在猪皮胶中质谱图
图8，猪皮胶代表性特征肽段在牛皮胶中质谱图
图9，猪皮胶代表性特征肽段在马皮胶中质谱图
图10，猪皮胶代表性特征肽段在骡皮胶中质谱图
图11，样品1中猪皮胶特征肽质谱图
图12，样品1中驴皮阿胶特征肽质谱图
图13，样品2中猪皮胶特征肽质谱图
图14，样品2中驴皮阿胶特征肽质谱图
图15，对照品中猪皮胶特征肽质谱图
图16，对照品中驴皮阿胶特征肽质谱图
具体实施方式
实施例1，筛选猪皮胶特异性多肽
通过质谱分析纯品猪皮胶样本和驴皮阿胶样本，利用ProteinPilot软件对质谱结果进行检索比对分析，从而确定最优选的猪皮胶专属特征多肽序列。
首先，对选取的纯品胶样本进行质谱分析，步骤包括：
(一)样本前处理步骤：
(1)称取0.1g～0.5g均质成粉末状态的纯品样品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；
(2)溶液过0.22μm滤膜；
(3)取10～20μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL～200μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。
(二)上机检测，
(1)采用AB SCIEX 5600质谱检测方法如下，
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
TOF扫描范围：100-3000Da，
正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。
(2)采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测方法如下，
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
其次，依据纯品胶样本的质谱结果，利用ProteinPilot软件对质谱结果进行检索比对分析，筛选得到在猪皮胶中确实存在的专属特征多肽组，组中的各条多肽序列信息如下：
肽段1：SEQ ID NO.1：GGPGPAGPR；
肽段2：SEQ ID NO.2：GVVGLPGQRGER；
肽段3：SEQ ID NO.3：GEAGPAGPAGPAGPR；
肽段4：SEQ ID NO.4：GPSGPQGIR；
肽段5：SEQ ID NO.5：GEPGPAGLPGPPGER；
肽段6：SEQ ID NO.6：GLPGEFGLPGPAGPR；
肽段7：SEQ ID NO.7：EAVLGLWGK；
肽段8：SEQ ID NO.8：DGASGHPGPIGPPGPR；
肽段9：SEQ ID NO.9：GAPGPVGPAGPR；
肽段10：SEQ ID NO.10：GEPGPAGSVGPAGAVGPR；
肽段11：SEQ ID NO.11：GNSGEPGAPGSK；
肽段12：SEQ ID NO.12：GEMGPAGIPGAPGLMGAR；
肽段13：SEQ ID NO.13：GARGEPGPAGLPGPPGER；
肽段14：SEQ ID NO.14：EGPAGIPGIDGR；
肽段15：SEQ ID NO.15：GPVGPSGPPGKDGASGHPGPIGPPGPR；
肽段16：SEQ ID NO.16：GFPGSPGNVGPAGK；
肽段17：SEQ ID NO.17：QGPSGPSGER；
肽段18：SEQ ID NO.18：GFTGEFGIPGPAGPR；
肽段19：SEQ ID NO.19：GLHGEFGLPGPAGPR；
肽段20：SEQ ID NO.20：DGRTGQPGAVGPAGIR；
肽段21：SEQ ID NO.21：GETGPAGPAGAPGPAGSR；
肽段22：SEQ ID NO.22：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段23：SEQ ID NO.23：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段24：SEQ ID NO.24：GEPGPAGSHGPAGAVGPR；
肽段25：SEQ ID NO.25：GPNGEVGSAGPPGPPGLR；
肽段26：SEQ ID NO.26：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段27：SEQ ID NO.27：GEPGPTGVQGPPGPAGEEGKRGAR；
肽段28：SEQ ID NO.28：AGVMGPEGPRGATGPAGVR；
肽段29：SEQ ID NO.29：TGQPGAVGPAGIR；
肽段30：SEQ ID NO.30：GPPGPMGPPGLAGPPGESGR；
肽段31：SEQ ID NO.31：SGDRGETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段32：SEQ ID NO.32：DGLNGLPGPIGPPGPR；
肽段33：SEQ ID NO.33：DFPQALYGR；
肽段34：SEQ ID NO.34：GPAGPVGPVGAR；
肽段35：SEQ ID NO.35：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段36：SEQ ID NO.36：VIQLEAK；
肽段37：SEQ ID NO.37：VGGQAGAHGAEALER；
肽段38：SEQ ID NO.38：TGQPGAVGPAGIR；
肽段39：SEQ ID NO.39：TGETGASGPPGFAGEK；
肽段40：SEQ ID NO.40：GPTGPAGVR；
肽段41：SEQ ID NO.41：SVGPAGAVGPR；
肽段42：SEQ ID NO.42：GEPGNAGSVGPAGAVGPR；
肽段43：SEQ ID NO.43：GISGITGAR；
肽段44：SEQ ID NO.44：GPNGAVGPSGPR；
肽段45：SEQ ID NO.45：VDVLSQELAFLK；
肽段46：SEQ ID NO.46：EAVLGLWGK；
肽段47：SEQ ID NO.47：PDVQAAFQK；
肽段48：SEQ ID NO.48：VHLSAEEK；
肽段49：SEQ ID NO.49：VGGQAGAHGAEALER；
肽段50：SEQ ID NO.50：MLEEIMK；
肽段51：SEQ ID NO.51：VIQLEAK；
肽段52：SEQ ID NO.52：EDAVSAAFR；
肽段53：SEQ ID NO.53：MAPLGAEFR；
肽段54：SEQ ID NO.54：AAADIGADGIVVSNHGGR。
上述54条多肽的m/z的数值如下：
肽段1：391.2；
肽段2：612.8；
肽段3：421.2；
肽段4：434.7；
肽段5：479.2；
肽段6：485.3；
肽段7：486.8；
肽段8：495.6；
肽段9：516.8；
肽段10：516.9；
肽段11：545.7；
肽段12：557.6；
肽段13：574.0；
肽段14：577.8；
肽段15：608.6；
肽段16：637.8；
肽段17：486.2；
肽段18：492.6；
肽段19：492.6；
肽段20：503.6；
肽段21：508.2；
肽段22：516.3；
肽段23：555.3；
肽段24：524.3；
肽段25：550.3；
肽段26：560.6；
肽段27：1145.6；
肽段28：579.6；
肽段29：590.8；
肽段30：613.6；
肽段31：654.7；
肽段32：773.9。
肽段33：533.8；
肽段34：400.7；
肽段35：523.6
肽段36：474.9；
肽段37：591.2；
肽段38：732.3；
肽段39：406.5；
肽段40：484.6；
肽段41：517.6；
肽段42：416.5；
肽段43：533.6；
肽段44：681.8；
肽段45：487.1；
肽段46：502.6；
肽段47：457.1；
肽段48：712.3；
肽段49：447.6；
肽段50：401.0；
肽段51：483.5；
肽段52：496.6；
肽段53：517.8；
肽段54：764.0。
最后，用相同的方法处理并检测驴皮阿胶样本、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶样本，质谱检测结果进行匹配，结果显示，SEQ ID NO.1～54所示的各条多肽样本，在驴皮阿胶、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶中不存在。
图1-5是在驴皮阿胶、猪皮胶、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶样本中检测上述多肽SEQ IDNO.1～54的色谱特征图，可见驴皮阿胶、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶样本谱图中未检出SEQ IDNO.1～54所述的色谱峰。
图6-10是猪皮胶代表性特征肽段之一(SEQ ID NO.12)分别在驴皮阿胶、猪皮胶、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶样本中的质谱图，可见猪皮胶代表性特征肽段在猪皮胶谱图中明显存在，在驴皮阿胶、牛皮胶、马皮胶、骡皮胶样本谱图中不存在。
实施例2，检测不特定阿胶样本，判断是否为猪皮胶冒充产品
对某市公安局送检的阿胶及含阿胶制品样本及市售阿胶产品进行质谱分析，确定是否为纯品驴皮阿胶。
对待测样品的处理和检测方法同实施例1中的处理和检测方法
步骤(一)样本前处理步骤：
(1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1的阿胶样品或称取2.0g阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10-30min使样品完全溶解，定容至50mL；
(2)溶液过0.22μm滤膜；
(3)取10μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。
步骤(二)上机检测，
采用AB SCIEX 5600质谱检测，
流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，
流速：0.25mL/min，
TOF扫描范围：350-1500Da，
正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。
采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测，
流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，
流速：0.3mL/min，
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
检测结果对比实施例1中的各条猪皮源特异性多肽的质谱谱图，出现实施例1所述质谱检测谱图时，即可判断该组织样本含有猪皮源性成分。
经检测：某市公安局送检的样品中，
样品1为仅检出猪皮源性成分，未检出驴皮源性成分：
选取实施例1中的两条猪皮胶特征多肽(SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.36)和已知的两条驴皮胶特征多肽作为参考，相同的检测条件下，样品1中仅检出选取的两条猪皮胶多肽的色谱峰(见图11)，未见驴皮胶特异性多肽色谱峰(见图12)；
样品2既检出驴皮源性成分也检出猪皮源性成分：
选取实施例1中的两条猪皮胶特征多肽(SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.36)和已知两条驴皮胶特征多肽作为参考，相同的检测条件下，样品2中既检出选取的两条猪皮胶特征多肽的色谱峰(见图13)，也可见驴皮胶特征多肽色谱峰(见图14)；
对照品仅检出驴皮源性成分，未检出猪皮源性成分：
选取实施例1中的两条猪皮胶特征多肽和已知两条驴皮胶特征多肽作为参考，相同的检测条件下，对照品东阿阿胶出产的桃花姬制品中未检出选取的两条猪皮胶特征多肽的色谱峰(见图15)，仅检出驴皮胶特征多肽色谱峰(见图16)。
最后需要说明的是，以上实施例仅用作帮助本领域技术人员理解本发明的实质，不用作的本发明保护范围的限定。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
<120> 一种鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽
<160> 54
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gly Gly Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5
<210> 2
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Gly Val Val Gly Leu Pro Gly Gln Arg Gly Glu Arg
1 5 10
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Gly Glu Ala Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Gly Pro Ser Gly Pro Gln Gly Ile Arg
1 5
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly Glu Arg
1 5 10 15
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Gly Leu Pro Gly Glu Phe Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Glu Ala Val Leu Gly Leu Trp Gly Lys
1 5
<210> 8
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Asp Gly Ala Ser Gly His Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Gly Ala Pro Gly Pro Val Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5 10
<210> 10
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Ser Val Gly Pro Ala Gly Ala Val Gly
1 5 10 15
Pro Arg
<210> 11
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Gly Asn Ser Gly Glu Pro Gly Ala Pro Gly Ser Lys
1 5 10
<210> 12
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Gly Glu Met Gly Pro Ala Gly Ile Pro Gly Ala Pro Gly Leu Met Gly
1 5 10 15
Ala Arg
<210> 13
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Gly Ala Arg Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Leu Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Glu Gly Pro Ala Gly Ile Pro Gly Ile Asp Gly Arg
1 5 10
<210> 15
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Gly Pro Val Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Lys Asp Gly Ala Ser Gly
1 5 10 15
His Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg
20 25
<210> 16
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Gly Phe Pro Gly Ser Pro Gly Asn Val Gly Pro Ala Gly Lys
1 5 10
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 17
Gln Gly Pro Ser Gly Pro Ser Gly Glu Arg
1 5 10
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 18
Gly Phe Thr Gly Glu Phe Gly Ile Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 19
Gly Leu His Gly Glu Phe Gly Leu Pro Gly Pro Ala Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 20
Asp Gly Arg Thr Gly Gln Pro Gly Ala Val Gly Pro Ala Gly Ile Arg
1 5 10 15
<210> 21
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 21
Gly Glu Thr Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Ala Pro Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Ser Arg
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 22
Gly Glu Thr Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Val Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Ala Arg
<210> 23
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 23
Gly Val Ala Gly Glu Pro Gly Arg Asn Gly Val Pro Gly Gly Pro Gly
1 5 10 15
Leu Arg
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 24
Gly Glu Pro Gly Pro Ala Gly Ser His Gly Pro Ala Gly Ala Val Gly
1 5 10 15
Pro Arg
<210> 25
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 25
Gly Pro Asn Gly Glu Val Gly Ser Ala Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Leu Arg
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 26
Gly Val Ala Gly Glu Pro Gly Arg Asn Gly Val Pro Gly Gly Pro Gly
1 5 10 15
Leu Arg
<210> 27
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 27
Gly Glu Pro Gly Pro Thr Gly Val Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Glu Glu Gly Lys Arg Gly Ala Arg
20
<210> 28
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 28
Ala Gly Val Met Gly Pro Glu Gly Pro Arg Gly Ala Thr Gly Pro Ala
1 5 10 15
Gly Val Arg
<210> 29
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 29
Thr Gly Gln Pro Gly Ala Val Gly Pro Ala Gly Ile Arg
1 5 10
<210> 30
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 30
Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly Leu Ala Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Gly Arg
20
<210> 31
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 31
Ser Gly Asp Arg Gly Glu Thr Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Val
1 5 10 15
Gly Pro Val Gly Ala Arg
20
<210> 32
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 32
Asp Gly Leu Asn Gly Leu Pro Gly Pro Ile Gly Pro Pro Gly Pro Arg
1 5 10 15
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 33
Asp Phe Pro Gln Ala Leu Tyr Gly Arg
1 5
<210> 34
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 34
Gly Pro Ala Gly Pro Val Gly Pro Val Gly Ala Arg
1 5 10
<210> 35
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 35
Gly Glu Thr Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Pro Val Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Ala Arg
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 36
Val Ile Gln Leu Glu Ala Lys
1 5
<210> 37
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 37
Val Gly Gly Gln Ala Gly Ala His Gly Ala Glu Ala Leu Glu Arg
1 5 10 15
<210> 38
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 38
Thr Gly Gln Pro Gly Ala Val Gly Pro Ala Gly Ile Arg
1 5 10
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 39
Thr Gly Glu Thr Gly Ala Ser Gly Pro Pro Gly Phe Ala Gly Glu Lys
1 5 10 15
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 40
Gly Pro Thr Gly Pro Ala Gly Val Arg
1 5
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 41
Ser Val Gly Pro Ala Gly Ala Val Gly Pro Arg
1 5 10
<210> 42
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 42
Gly Glu Pro Gly Asn Ala Gly Ser Val Gly Pro Ala Gly Ala Val Gly
1 5 10 15
Pro Arg
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 43
Gly Ile Ser Gly Ile Thr Gly Ala Arg
1 5
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 44
Gly Pro Asn Gly Ala Val Gly Pro Ser Gly Pro Arg
1 5 10
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 45
Val Asp Val Leu Ser Gln Glu Leu Ala Phe Leu Lys
1 5 10
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 46
Glu Ala Val Leu Gly Leu Trp Gly Lys
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 47
Pro Asp Val Gln Ala Ala Phe Gln Lys
1 5
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 48
Val His Leu Ser Ala Glu Glu Lys
1 5
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 49
Val Gly Gly Gln Ala Gly Ala His Gly Ala Glu Ala Leu Glu Arg
1 5 10 15
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 50
Met Leu Glu Glu Ile Met Lys
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 51
Val Ile Gln Leu Glu Ala Lys
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 52
Glu Asp Ala Val Ser Ala Ala Phe Arg
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 53
Met Ala Pro Leu Gly Ala Glu Phe Arg
1 5
<210> 54
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 54
Ala Ala Ala Asp Ile Gly Ala Asp Gly Ile Val Val Ser Asn His Gly
1 5 10 15
Gly Arg

Claims (7)

1.一组用于单独或任意组合检测阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽，所述的含阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒，所述的多肽的序列为：
肽段1：SEQ ID NO.1：GGPGPAGPR；
肽段2：SEQ ID NO.2：GVVGLPGQRGER；
肽段3：SEQ ID NO.3：GEAGPAGPAGPAGPR；
肽段4：SEQ ID NO.4：GPSGPQGIR；
肽段5：SEQ ID NO.5：GEPGPAGLPGPPGER；
肽段6：SEQ ID NO.6：GLPGEFGLPGPAGPR；
肽段7：SEQ ID NO.7：EAVLGLWGK；
肽段8：SEQ ID NO.8：DGASGHPGPIGPPGPR；
肽段9：SEQ ID NO.9：GAPGPVGPAGPR；
肽段10：SEQ ID NO.10：GEPGPAGSVGPAGAVGPR；
肽段11：SEQ ID NO.11：GNSGEPGAPGSK；
肽段12：SEQ ID NO.12：GEMGPAGIPGAPGLMGAR；
肽段13：SEQ ID NO.13：GARGEPGPAGLPGPPGER；
肽段14：SEQ ID NO.14：EGPAGIPGIDGR；
肽段15：SEQ ID NO.15：GPVGPSGPPGKDGASGHPGPIGPPGPR；
肽段16：SEQ ID NO.16：GFPGSPGNVGPAGK；
肽段17：SEQ ID NO.17：QGPSGPSGER；
肽段18：SEQ ID NO.18：GFTGEFGIPGPAGPR；
肽段19：SEQ ID NO.19：GLHGEFGLPGPAGPR；
肽段20：SEQ ID NO.20：DGRTGQPGAVGPAGIR；
肽段21：SEQ ID NO.21：GETGPAGPAGAPGPAGSR；
肽段22：SEQ ID NO.22：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段23：SEQ ID NO.23：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段24：SEQ ID NO.24：GEPGPAGSHGPAGAVGPR；
肽段25：SEQ ID NO.25：GPNGEVGSAGPPGPPGLR；
肽段26：SEQ ID NO.26：GVAGEPGRNGVPGGPGLR；
肽段27：SEQ ID NO.27：GEPGPTGVQGPPGPAGEEGKRGAR；
肽段28：SEQ ID NO.28：AGVMGPEGPRGATGPAGVR；
肽段29：SEQ ID NO.29：TGQPGAVGPAGIR；
肽段30：SEQ ID NO.30：GPPGPMGPPGLAGPPGESGR；
肽段31：SEQ ID NO.31：SGDRGETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段32：SEQ ID NO.32：DGLNGLPGPIGPPGPR；
肽段33：SEQ ID NO.33：DFPQALYGR；
肽段34：SEQ ID NO.34：GPAGPVGPVGAR；
肽段35：SEQ ID NO.35：GETGPAGPAGPVGPVGAR；
肽段36：SEQ ID NO.36：VIQLEAK；
肽段37：SEQ ID NO.37：VGGQAGAHGAEALER；
肽段38：SEQ ID NO.38：TGQPGAVGPAGIR；
肽段39：SEQ ID NO.39：TGETGASGPPGFAGEK；
肽段40：SEQ ID NO.40：GPTGPAGVR；
肽段41：SEQ ID NO.41：SVGPAGAVGPR；
肽段42：SEQ ID NO.42：GEPGNAGSVGPAGAVGPR；
肽段43：SEQ ID NO.43：GISGITGAR；
肽段44：SEQ ID NO.44：GPNGAVGPSGPR；
肽段45：SEQ ID NO.45：VDVLSQELAFLK；
肽段46：SEQ ID NO.46：EAVLGLWGK；
肽段47：SEQ ID NO.47：PDVQAAFQK；
肽段48：SEQ ID NO.48：VHLSAEEK；
肽段49：SEQ ID NO.49：VGGQAGAHGAEALER；
肽段50：SEQ ID NO.50：MLEEIMK；
肽段51：SEQ ID NO.51：VIQLEAK；
肽段52：SEQ ID NO.52：EDAVSAAFR；
肽段53：SEQ ID NO.53：MAPLGAEFR；
肽段54：SEQ ID NO.54：AAADIGADGIVVSNHGGR。
2.根据权利要求1所述多肽，其特征在于，所述多肽对应的m/z值及子离子分别为：
肽段1：391.2；
肽段2：612.8；
肽段3：421.2；
肽段4：434.7；
肽段5：479.2；
肽段6：485.3；
肽段7：486.8；
肽段8：495.6；
肽段9：516.8；
肽段10：516.9；
肽段11：545.7；
肽段12：557.6；
肽段13：574.0；
肽段14：577.8；
肽段15：608.6；
肽段16：637.8；
肽段17：486.2；
肽段18：492.6；
肽段19：492.6；
肽段20：503.6；
肽段21：508.2；
肽段22：516.3；
肽段23：555.3；
肽段24：524.3；
肽段25：550.3；
肽段26：560.6；
肽段27：1145.6；
肽段28：579.6；
肽段29：590.8；
肽段30：613.6；
肽段31：654.7；
肽段32：773.9。
肽段33：533.8；
肽段34：400.7；
肽段35：523.6
肽段36：474.9；
肽段37：591.2；
肽段38：732.3；
肽段39：406.5；
肽段40：484.6；
肽段41：517.6；
肽段42：416.5；
肽段43：533.6；
肽段44：681.8；
肽段45：487.1；
肽段46：502.6；
肽段47：457.1；
肽段48：712.3；
肽段49：447.6；
肽段50：401.0；
肽段51：483.5；
肽段52：496.6；
肽段53：517.8；
肽段54：764.0。
3.一种检测阿胶及含阿胶制品中是否含有猪皮源性成分的检测方法，所述方法包括如下步骤：
步骤(1)，对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：
步骤(2)，通过质谱法检测步骤(1)获得的多肽滤液，检测待测样本中是否含有权利要求1或2所述肽段的质谱峰。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液的步骤如下：
(1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1g～0.5g阿胶样品或1.0～2.0g含阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；
(2)溶液过0.22μm滤膜；
(3)取10～20μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到上述100μL～200μL滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。
5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)通过质谱法检验步骤(1)获得的多肽滤液的方法是下述方法A或方法B：
方法A：采用AB SCIEX5600质谱检测多肽滤液中是否含有权利要求1或2所述的肽段的质谱峰，
上机参数为：
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
TOF扫描范围：100-3000Da，
正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10；
方法B：采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测多肽滤液中是否含有权利要求1或2所述的肽段的质谱峰，
上机参数为：
流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，
流速：0.1～0.5mL/min，
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
6.使用权利要求1所述的各个多肽或其任意组合以检测目标阿胶及含阿胶制品样本中是否含有猪皮源性成分的检测方法，以及检测试剂盒的应用，所述方法包括：质谱法、高效液相色谱法等。
7.权利要求1所述的各个多肽或其任意组合在检测目标阿胶及含阿胶制品样本中是否含有猪皮源性成分中的应用，所述的含阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒。
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