CN109270258A - 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法 - Google Patents

一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109270258A
CN109270258A CN201811290569.0A CN201811290569A CN109270258A CN 109270258 A CN109270258 A CN 109270258A CN 201811290569 A CN201811290569 A CN 201811290569A CN 109270258 A CN109270258 A CN 109270258A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
saikosaponin
minutes
added
test paper
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811290569.0A
Other languages
English (en)
Inventor
李光灿
张东芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Lynda Medical Technology Co Ltd
Original Assignee
Wuhan Lynda Medical Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Lynda Medical Technology Co Ltd filed Critical Wuhan Lynda Medical Technology Co Ltd
Priority to CN201811290569.0A priority Critical patent/CN109270258A/zh
Publication of CN109270258A publication Critical patent/CN109270258A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N2021/7756—Sensor type
    • G01N2021/7759—Dipstick; Test strip

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明属于医用监测装置技术领域，尤其涉及一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法。本发明柴胡皂苷D检测试纸制备方法，能够制备得到一种能够有效检测柴胡皂苷D的测试试纸，能够准确迅速的对柴胡皂苷D的存在及其含量进行显示，在柴胡品质检测以及柴胡存在甄别等用途中提供有效的检测手段，该检测试纸制备方便，检测结果准确，特别是在中药等复合药物中化合物含量种类多，相似结构物质含量大的情况下能够有效避免其他化合物的影响，正确反映柴胡皂苷D的存在状态，具有良好的市场应用前景。

Description

一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法
技术领域
本发明属于医用监测装置技术领域，尤其涉及一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法。
背景技术
柴胡皂苷D是指中药柴胡的有效药效成分，柴胡作为中药等药系内重要的药物之一，是市场上重要的需求品，随着医用超乎需求量的不断增大，人们开始大量培育种植柴胡以满足市场需求，但市场上众多的柴胡品质参差不齐。而单依靠外观以及气味等常规判断方法并不能有效甄别柴胡的实际药用品质，导致采购获得的柴胡产品不能实现预期的治疗效果，因此有必要对柴胡品质质量进行分析，提供一种能够有效检测柴胡药用品质的方法。
发明内容
本发明创造的目的在于，提供一种能够有效检测柴胡皂苷D、为柴胡实际药效品质提供参考标准的检测方法，本方法制作了一种柴胡皂苷D检测试纸，能够便捷有效的检测柴胡有效成分的存在，为柴胡的分辨以及质量分析提供途径。
为实现上述目的，本发明的一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
具体而言，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净。
具体而言，在步骤2中，最佳PH值是指，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h后溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值；其中最佳PH值范围在7‐11内；
最低表计量是指，在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h后溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量，其中，最低标计量范围在0.2‐0.3mg/单位体积。
其有益效果在于：
本发明柴胡皂苷D检测试纸制备方法，能够制备得到一种能够有效检测柴胡皂苷D的测试试纸，能够准确迅速的对柴胡皂苷D的存在及其含量进行显示，在柴胡品质检测以及柴胡存在甄别等用途中提供有效的检测手段，该检测试纸制备方便，检测结果准确，特别是在中药等复合药物中化合物含量种类多，相似结构物质含量大的情况下能够有效避免其他化合物的影响，正确反映柴胡皂苷D的存在状态，具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
本发明的一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其基本步骤包括：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
其中，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净；
在步骤2中，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h，则溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值就是最佳PH值，最佳PH值范围在7‐11内；在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h，则溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量就是最低标计量，最低标计量范围在0.2‐0.3mg/ml。
对上述试纸进行柴胡皂苷D结构类似物的特异性测试，利用柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷A等柴胡皂苷D的结构类似物进行对比检测，经过试纸检测后其试纸均统一表现为阴性，继续使用黄岑苷、葛根素等结构不相似的医用化合物进行检测，其试纸也均未阴性，进一步采用多种中药以及化合物进行特异性测试后，仅在柴胡颗粒中含有柴胡皂苷D的情况下，试纸显示为阳性，具有良好的特异性。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明创造的技术方案，而非对本发明创造保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明创造作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明创造的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明创造技术方案的实质和范围。

Claims (3)

1.一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
2.根据权利要求1所述一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净。
3.根据权利要求1所述一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，在步骤2中，最佳PH值是指，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h后溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值；其中最佳PH值范围在7-11内；
最低表计量是指，在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h后溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量，其中，最低标计量范围在0.2-0.3mg/ml。
CN201811290569.0A 2018-10-31 2018-10-31 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法 Pending CN109270258A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811290569.0A CN109270258A (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811290569.0A CN109270258A (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109270258A true CN109270258A (zh) 2019-01-25

Family

ID=65191531

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811290569.0A Pending CN109270258A (zh) 2018-10-31 2018-10-31 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109270258A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101458254A (zh) * 2008-12-03 2009-06-17 周炬华 一种盐酸克伦特罗检测试纸及其检测方法
CN101487843A (zh) * 2009-03-06 2009-07-22 关一夫 快速尿液hiv检测诊断试纸条及其制备方法和使用方法
CN101539578A (zh) * 2009-02-17 2009-09-23 李红玉 一种检测三聚氰胺含量的胶体金试纸条
CN104267109A (zh) * 2014-07-31 2015-01-07 甘肃中天药业有限责任公司 一种柴胡药材的检测方法
CN104459118A (zh) * 2014-12-31 2015-03-25 浙江理工大学 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法
CN106568965A (zh) * 2016-10-14 2017-04-19 广州安诺食品科学技术有限公司 金胺o胶体金检测卡及其制备方法
CN108196054A (zh) * 2017-07-27 2018-06-22 数字本草中医药检测有限公司 一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101458254A (zh) * 2008-12-03 2009-06-17 周炬华 一种盐酸克伦特罗检测试纸及其检测方法
CN101539578A (zh) * 2009-02-17 2009-09-23 李红玉 一种检测三聚氰胺含量的胶体金试纸条
CN101487843A (zh) * 2009-03-06 2009-07-22 关一夫 快速尿液hiv检测诊断试纸条及其制备方法和使用方法
CN104267109A (zh) * 2014-07-31 2015-01-07 甘肃中天药业有限责任公司 一种柴胡药材的检测方法
CN104459118A (zh) * 2014-12-31 2015-03-25 浙江理工大学 一种古代丝织品双抗夹心法检测试纸的制备方法
CN106568965A (zh) * 2016-10-14 2017-04-19 广州安诺食品科学技术有限公司 金胺o胶体金检测卡及其制备方法
CN108196054A (zh) * 2017-07-27 2018-06-22 数字本草中医药检测有限公司 一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MORINAGA,O等: "Visual detection of saikosaponins by on-membrane immunoassay and estimation of traditional Chinese medicines containing Bupleuri radix", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
ZHANG,Y等: "A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d", 《MOLECULES》 *
张越: "基于免疫层析技术的中药活性成分体内外快速检测方法的研究", 《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
秦高凤: "柴胡皂苷D人工抗原的合成及单克隆抗体的制备", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102901819A (zh) 苯乙醇胺a的免疫胶体金检测卡及其制备方法
CN103901216B (zh) 人h-fabp胶体金检测试纸及其制备方法
CN103575893A (zh) 一种快速检测贝类毒素的方法
CN202814980U (zh) 基于上转换荧光纳米颗粒标记的定量检测克伦特罗的免疫层析试纸条
CN103820394A (zh) 抗吗啡单克隆抗体、产生该抗体的细胞株、吗啡检测试剂盒及其制作方法
CN106546750A (zh) 一种微量白蛋白快速定量检测试纸条的制备及检测方法
CN106138541A (zh) 一种产地鲜制清半夏加工工艺
CN206725442U (zh) 一种用于同时检测cle、rac和sbl的纸芯片
CN108196054A (zh) 一种检测甘草酸的试纸条及其制备方法和应用
CN108732347A (zh) 一种检测唾液中hcv抗体的检测试剂盒及其制备方法
CN105044365A (zh) 检测恩诺沙星残留的时间分辨荧光免疫分析试纸的制备方法
CN109270258A (zh) 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法
CN107942052B (zh) 一种检测β-兴奋剂类药物的胶体金试剂盒及其制备方法
CN101980021A (zh) 一种快速检测西布曲明及其衍生物的胶体金层析试纸条及制备方法
CN106896094A (zh) 一种同时检测cle、rac和sbl的方法及其专用纸芯片
CN102539768A (zh) EB 病毒 Zta IgA 抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法
CN101487843A (zh) 快速尿液hiv检测诊断试纸条及其制备方法和使用方法
CN103364546B (zh) 一种检测呋喃唑酮代谢物的试剂盒及方法
CN107422086A (zh) 小鼠口干程度的检测方法及其应用
CN104897908A (zh) 检测盐酸克伦特罗胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
CN209198474U (zh) 一种ABO和RhD血型定型的微柱凝集检测卡
CN204203238U (zh) 一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒
CN202735352U (zh) 一种检测人心力衰竭新型标志物st2的快速诊断试剂盒
CN105758977A (zh) 一种检测黑枸杞果或黑枸杞果提取物品质的方法
CN205333654U (zh) 基于生物标志物的肾损伤早期检测试纸条

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190125

RJ01 Rejection of invention patent application after publication