CN109270258A - 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医用监测装置技术领域，尤其涉及一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法。本发明柴胡皂苷D检测试纸制备方法，能够制备得到一种能够有效检测柴胡皂苷D的测试试纸，能够准确迅速的对柴胡皂苷D的存在及其含量进行显示，在柴胡品质检测以及柴胡存在甄别等用途中提供有效的检测手段，该检测试纸制备方便，检测结果准确，特别是在中药等复合药物中化合物含量种类多，相似结构物质含量大的情况下能够有效避免其他化合物的影响，正确反映柴胡皂苷D的存在状态，具有良好的市场应用前景。

Description

一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法
技术领域
本发明属于医用监测装置技术领域，尤其涉及一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法。
背景技术
柴胡皂苷D是指中药柴胡的有效药效成分，柴胡作为中药等药系内重要的药物之一，是市场上重要的需求品，随着医用超乎需求量的不断增大，人们开始大量培育种植柴胡以满足市场需求，但市场上众多的柴胡品质参差不齐。而单依靠外观以及气味等常规判断方法并不能有效甄别柴胡的实际药用品质，导致采购获得的柴胡产品不能实现预期的治疗效果，因此有必要对柴胡品质质量进行分析，提供一种能够有效检测柴胡药用品质的方法。
发明内容
本发明创造的目的在于，提供一种能够有效检测柴胡皂苷D、为柴胡实际药效品质提供参考标准的检测方法，本方法制作了一种柴胡皂苷D检测试纸，能够便捷有效的检测柴胡有效成分的存在，为柴胡的分辨以及质量分析提供途径。
为实现上述目的，本发明的一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，包括如下步骤：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
具体而言，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净。
具体而言，在步骤2中，最佳PH值是指，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h后溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值；其中最佳PH值范围在7‐11内；
最低表计量是指，在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h后溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量，其中，最低标计量范围在0.2‐0.3mg/单位体积。
其有益效果在于：
本发明柴胡皂苷D检测试纸制备方法，能够制备得到一种能够有效检测柴胡皂苷D的测试试纸，能够准确迅速的对柴胡皂苷D的存在及其含量进行显示，在柴胡品质检测以及柴胡存在甄别等用途中提供有效的检测手段，该检测试纸制备方便，检测结果准确，特别是在中药等复合药物中化合物含量种类多，相似结构物质含量大的情况下能够有效避免其他化合物的影响，正确反映柴胡皂苷D的存在状态，具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
本发明的一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其基本步骤包括：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
其中，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净；
在步骤2中，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h，则溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值就是最佳PH值，最佳PH值范围在7‐11内；在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h，则溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量就是最低标计量，最低标计量范围在0.2‐0.3mg/ml。
对上述试纸进行柴胡皂苷D结构类似物的特异性测试，利用柴胡皂苷B1、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷A等柴胡皂苷D的结构类似物进行对比检测，经过试纸检测后其试纸均统一表现为阴性，继续使用黄岑苷、葛根素等结构不相似的医用化合物进行检测，其试纸也均未阴性，进一步采用多种中药以及化合物进行特异性测试后，仅在柴胡颗粒中含有柴胡皂苷D的情况下，试纸显示为阳性，具有良好的特异性。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明创造的技术方案，而非对本发明创造保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明创造作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明创造的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明创造技术方案的实质和范围。

Claims (3)

1.一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1、制备经过酸洗或者表面钝化处理的玻璃容器作为实验用具；取120单位体积的三蒸水加热至沸腾，并依次加入0.5单位体积4％氯金酸溶液和5单位体积1％柠檬酸钠溶液，持续加热混合溶液直至溶液变为透明的酒红色且不再变化后保持温度10分钟，冷却后装入玻璃容器制备胶体金溶液；
步骤2、在10单位体积的上述胶体金溶液中加入0.1mol/L的碳酸钾溶液调整PH值至最佳PH值，缓慢加入最低标计量的柴胡皂苷D单克隆抗体，在室温下振摇30分钟后加入10％的牛血清白蛋白溶液直至牛血清白蛋白的浓度为1％，继续振摇20分钟后在室温下静置10分钟，加入10％的聚乙二醇溶液直至聚乙二醇浓度为1％后室温静置25分钟；
步骤3、在4℃下，将上述溶液下以2000r/分钟转速离心20分钟去除沉淀物质，使用10000r/分钟转速离心25分钟后去除上清液加入胶体金悬液制得金标抗体溶液；
步骤4、将金标抗体溶液稀释后在结合垫上进行测试，确定抗体释放率最高、线路清晰且无干扰的稀释倍数；以该稀释倍数的金标抗体溶液为基准对不同的T/C线浓度进行测试，选择显色清洗无干扰的T/C线浓度作为基准；
步骤5、将硝酸纤维素膜贴在底板上，硝酸纤维素膜下端与底板吸水末端间距不小于1.5厘米，在硝酸纤维素膜上端和底板间插入结合垫，结合垫下端与硝酸纤维素膜的叠合长度为0.1厘米，在结合垫上端与地板之间插入样品垫，样品垫下端与结合垫的叠合长度为2mm。
2.根据权利要求1所述一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，在步骤1中，酸洗是指将玻璃容器在由重铬酸钾、蒸馏水、浓硫酸配置的酸洗溶液内浸泡后足够时间后彻底清洗，酸洗溶液的配置方法是在40单位体积的蒸馏水以及360单位体积的浓硫酸混合液中加入7.5单位体积的重铬酸钾混合均匀；表面钝化处理的方法是将玻璃容器放入5％二氯化甲烷的氯仿溶液中浸泡足够时间后用蒸馏水冲洗干净。
3.根据权利要求1所述一种柴胡皂苷D检测试纸制备方法，其特征在于，在步骤2中，最佳PH值是指，在混合溶液1单位体积中加入牛血清白蛋白溶液静置5分钟，再加入0.1单位体积10％氯化钠溶液静置2h后溶液颜色持续保持红色且碳酸钾加入量最少时的PH值；其中最佳PH值范围在7-11内；
最低表计量是指，在0.2单位体积的最佳PH值的混合溶液内加入柴胡皂苷D单克隆抗体混合均匀，再加入0.2单位体积的10％氯化钠静置2h后溶液颜色持续保持红色且柴胡皂苷D单克隆抗体加入量最少时的标量，其中，最低标计量范围在0.2-0.3mg/ml。
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