CN106568965A - 金胺o胶体金检测卡及其制备方法 - Google Patents

金胺o胶体金检测卡及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106568965A
CN106568965A CN201610898635.7A CN201610898635A CN106568965A CN 106568965 A CN106568965 A CN 106568965A CN 201610898635 A CN201610898635 A CN 201610898635A CN 106568965 A CN106568965 A CN 106568965A
Authority
CN
China
Prior art keywords
auramine
paper
gold
solution
colloidal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610898635.7A
Other languages
English (en)
Inventor
杨鹏博
马丽
张陇清
杨松林
王军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Annuo Food Science And Technology Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Annuo Food Science And Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Annuo Food Science And Technology Co Ltd filed Critical Guangzhou Annuo Food Science And Technology Co Ltd
Priority to CN201610898635.7A priority Critical patent/CN106568965A/zh
Publication of CN106568965A publication Critical patent/CN106568965A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

本发明提供了一种金胺O胶体金检测卡，主要用于快速检测中药材、中药饮片及食品中是否非法添加金胺O成分，该检测卡包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有金胺O‑牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗兔IgG的质控线。本发明具有特异性强、灵敏性高、操作简单方便等有益效果，使用所需环境温度为4‑35℃，适合于个人及工厂、食品卫生质检部门、海关等中药材、中药饮片及食品进行金胺O成分的快速检测。

Description

金胺O胶体金检测卡及其制备方法
技术领域
本发明属于中药材及中药饮片安全检测领域，涉及中药材及中药饮片中非法添加物的检测方法，特别是一种金胺O胶体金检测卡及其制备方法。
背景技术
金胺O，又称盐基淡黄、金丝雀黄、奥黄、碱性槐黄等，为化工色素，被国际癌症研究所(IARC)列为人类致癌化合物，主要用于醋纤、棉织品的染色，和纸张、皮革、油漆等的着色。金胺O对人体具有一定毒性作用，对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，长期过量食用，将对人体肾脏、肝脏造成损害甚至致癌，卫生部早于2008年将其列为非食用物质。
中药养生是近些年的热门话题，然中药材质量实在令人担忧，采用化工染料对中药材染色的问题更是屡见不鲜，其中金胺O主要用于黄色药材的染色，曾发现被用于劣质黄柏、蒲黄、延胡索等中药材、中药饮片的非法染色。病人在不知情的情况下长期使用，容易引起暂时性或持久性的病理状态，甚至危及生命，故在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。
目前对于中药材中非法添加金胺O的检测，主要采用薄层色谱法(TLC法)、高效液相色谱法(HPLC法)、高效液相色谱串联紫外检测(HPLC-PAD法)、高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)二级质谱对样品进行确认。高效液相色谱及液质联用色谱等方法是最先进的现代分析手段，能够很好的分离检测金胺O，并且达到一个很低的检测限，灵敏度非常高。采用标准品对照法，可以非常精确的检测出样本中金胺O的含量。
另外，市面上还未发现有金胺O的快检试剂盒，若采用上述实验方法，操作过程都比较复杂，实验时间长、实验成本高，且并不适用于现场检测
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种金胺O胶体金检测卡及其制备方法，主要用于快速检测中药材、中药饮片及食品中是否非法添加金胺O成分。
本发明采用的技术方案如下：一种金胺O胶体金检测卡，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有金胺O-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗兔IgG的质控线。
较优的，所述免疫胶体金纸片中胶体金的颗粒大小为35nm，形状为圆形。
较优的，所述胶体金由两步还原法制备获得，其具体的步骤为：
a)第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.01％的HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入1％柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)水溶液2.00ml，用频率在20-30kHz的超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得16nm左右粒径的胶体金原溶液；
b)第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置在4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl4水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的1％HAuCl4水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl4的摩尔比为27～28∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl4的重量比为1∶1.8～2.0，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得35nm左右粒径的胶体金溶液；
两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸或三蒸去离子水。
最优的，步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/秒。
最优的，步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为3％，PVP的浓度为0.137-0.139％。
步骤b)中，搅拌反应约为60分钟。
采用上述方法制得的胶体金清亮透明，粒径尺寸均一，无凝集颗粒，基本未发现非球形粒子。
较优的，所述免疫胶体金纸片为经过预处理的玻璃纤维纸，所述预处理的预处理液包括0.3～0.4v％Tween-20，6～10w/v％蛋白质、蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽或双糖、多糖，溶剂为水。
本发明的另一目的是提供一种金胺O胶体金检测卡的制备方法，其包括以下步骤：
1)两步还原法制备胶体金；
2)用步骤1)制备的胶体金标记抗金胺O单克隆抗体，获得胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，即所需免疫胶体金；
3)免疫胶体金纸片的制备：预处理玻璃纤维纸；稀释步骤2)获得的胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，得到免疫胶体金溶液；用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸，获得免疫胶体金纸片；
4)将金胺O-牛血清白蛋白复合物和羊抗兔IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线(T线)和质控线(C线)的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；
5)将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得试剂条；
6)最后将试剂条装入塑料盒，即获得金胺O胶体金检测卡。
其中，较优的，步骤2)中，胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体的比例为：向胶体金中按照18-25μg抗体/(ml胶体金)的比例加入抗金胺O单克隆抗体，制备得到免疫胶体金(抗金胺O单克隆抗体-胶体金)。
较优的，步骤b中，每28-35ml预处理液浸泡玻璃纤维纸261mm×220mm×0.5mm，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂玻璃纤维纸，每261mm×220mm×0.5mm玻璃纤维纸上喷涂18-25ml免疫胶体金溶液，干燥，制得免疫胶体金纸片。
较优的，步骤4)中，喷在硝酸纤维素膜质控线(C线)上的羊抗兔IgG的浓度为0.4～0.6mg/ml，喷在硝酸纤维素膜检测线(T线)上的金胺O-牛血清白蛋白复合物浓度为0.3～0.5mg/ml。
较优的，每1m长硝酸纤维素膜分别包被有1ml的羊抗兔IgG和金胺O-牛血清白蛋白复合物溶液，检测线和质控线的间距为5.0mm。
本发明的采用了两步还原法，使得到的胶体金分子呈大小均一的35nm球形颗粒，由于胶体金颗粒大小适中、整体均一，使其与单克隆抗体的结合效率更高、效果更稳定。
本发明金胺O胶体金检测卡的工作原理为：利用高度特异的抗体-抗原特异性结合反应及免疫膜层析技术，通过免疫竞争抑制法来定性检测中药材、中药饮片及食品中出现的金胺O成分。
试剂卡内的检测试剂条是实现金胺O检测的关键，在试剂条检测线(T线)包被了金胺O-牛血清白蛋白复合物；在试剂条的免疫胶体金纸片上固定有胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，当样品提取液从加样孔加入，渗透到试剂条的加样垫上，被检样本首先与玻璃纤维膜上的胶体金标记的金胺O单克隆抗体结合，并通过毛细作用继续层析至免疫硝酸纤维素膜，顺序通过免疫硝酸纤维素膜上喷点了金胺O-牛血清白蛋白复合物的检测线和喷点了羊抗兔IgG的质控线。如果样品提取液中含有金胺O，它们将与金胺O-牛血清白蛋白复合物竞争胶体金-抗金胺O抗体上有限的抗原结合位点，当金胺O浓度达到产品设计的阈值浓度以上时，它们将占据抗金胺O单克隆抗体上全部的抗原结合位点，这样就阻止了胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体和检测线的金胺O-牛血清白蛋白复合物结合，检测线不能捕获到胶体金颗粒而无红色色带出现，检测结果呈阳性。如果样品提取液中没有金胺O或金胺O的浓度低于阈值浓度，则抗金胺O单克隆抗体-胶体金随同样品提取液运行至检测线，检测线捕获到胶体金颗粒而呈现红色色带，检测结果呈阴性。
在试剂条上的质控线(C线)包被有羊抗兔IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控线的出现与金胺O的存在无关。质控线色带的出现表明：①样品加入量充足②样品在纸条上运行正常。
本发明检测卡样品处理方法是：向待测中药材、中药饮片或食品中加入适量溶剂(包括水、乙醇等)进行提取，使金胺O尽可能多的溶到溶剂中。该溶剂可以是水、乙醇、甲醇或其他溶剂中的一种或几种，其中优选为纯净水，所述溶剂的体积可优选所取中药材量的0.5～2倍，这样可以将中药材中的金胺O充分提取，又不用将金胺O的含量稀释太多以降低检出效果。
胶体金试纸条的使用方法：
1.将检测卡放置在水平台面上。
2.用加样吸管吸取样品提取液，然后滴5滴(约120ul)样品提取液到检测卡的加样孔中，每检测一份不同的样品注意要使用不同的吸管。
3.观察结果：在滴加样品后5-10分钟判读结果。
检测结果的判断方法：
阴性：在结果观察窗口内出现两条色带，即检测线(T线)和质控线(C线)位置各出现一条红色线条，表示样品中无金胺O存在。
阳性：只在结果观察窗口的质控线(C线)位置出现一条红色线条，检测线(T线)未出现任何线条，表示样品中有金胺O存在。
无效：质控线(C线)不出现。任何情况下，C线均应形成，表示加样和操作正确。C线未出现表明测试结果是不确定的，应重做。
本发明具有特异性强、灵敏性高、操作简单方便等有益效果，使用所需环境温度为4-35℃，适合于个人及工厂、食品卫生质检部门、海关等中药材、中药饮片及食品进行金胺O成分的快速检测。
附图说明
图1为本发明所述金胺O胶体金检测卡的结构示意图。
图中：1.滤样纸、2.免疫胶体金纸片、3.检测线、4.质控线、5.免疫硝酸纤维素膜、6.吸水纸。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明的范围。
一种金胺O胶体金检测卡，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸1、免疫胶体金纸片2、免疫硝酸纤维素膜5和吸水纸6；所述滤样纸1、免疫胶体金纸片2、免疫硝酸纤维素膜5和吸水纸6依次首尾衔接并固定于所述衬底上；所述免疫胶体金纸片2上包被有胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜5上设有包被有金胺O-牛血清白蛋白复合物的检测线3和包被有羊抗兔IgG的质控线4。
所述免疫胶体金纸片2中胶体金的颗粒大小为35nm，形状为圆形。
以下为金胺O胶体金检测卡制备的具体实施例：
实施例1：金胺O胶体金检测卡的制备；
1.胶体金的制备：两步还原法制备胶体金；
a.第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.01％的HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸25分钟，之后边搅拌边加入1％柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)水溶液2.00ml，超声振荡(频率为25kHz)3分钟后冷却至室温，即制得16nm左右粒径的胶体金原溶液；
b.第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液30ml放置于4.0℃水浴中保持温度恒定，随后加入预冷为4.0℃的1％HAuCl4水溶液60ml，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的3％抗坏血酸与0.139％PVP(聚乙烯吡咯烷酮)的混合水溶液，滴加速度为1-2滴/秒，搅拌至反应完全，约60分钟左右，溶液呈透明的酒红色，制得35nm左右粒径的胶体金溶液；
两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸或三蒸去离子水。
2.免疫胶体金的制备
2.1将抗金胺O单克隆抗体用0.1M pH 7.5的磷酸盐缓冲液稀释至浓度为1.0mg/ml的抗体溶液。
2.2取1000ml的胶体金溶液，往里加入1/10倍胶体金体积的0.1M pH 7.5磷酸盐缓冲液混合3分钟。在快速搅拌下，再缓缓将稀释的抗金胺O单克隆抗体溶液20ml加入其中。室温反应5分钟并不时缓缓搅拌。
2.3反应结束后，在上述反应液中快速加入20ml的10wt％的牛血清白蛋白(BSA)溶液，室温反应5分钟并不时缓缓搅拌。
2.4将制备好的免疫胶体金8000转/min离心20分钟，保留沉淀，并收集上清10000转/min离心30分钟，弃上清。收集两次离心沉淀用含有0.1wt％BSA的硼酸缓冲液复溶到OD540在13。
3.免疫胶体金纸制备
3.1预处理液的制备：准确称取3ml Tween-20，80g可溶性淀粉，加纯化水定容至1000ml。
3.2喷金缓冲液的制备：取800ml纯化水，往里加入100ml 1.0M Tris液，用盐酸调节pH至7.5。准确称取3.0g聚乙二醇20000、2.0g牛血清白蛋白，3.0g脱脂牛奶，4.0g酪蛋白溶液和0.6g叠氮化钠加入溶液中，充分溶解，混合均匀，加纯化水至总体积1000ml。
3.3用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，至溶液OD540值为2.0，获得免疫胶体金溶液。
3.4用预处理液浸泡玻璃纤维纸，每28ml预处理液浸泡玻璃纤维纸261mm×220mm×0.5mm，浸泡30min后，37℃下干燥；再用免疫胶体金溶液喷涂玻璃纤维纸，每261mm×220mm×0.5mm玻璃纤维纸上喷涂20ml免疫胶体金溶液，干燥，制得免疫胶体金纸片。
4.免疫硝酸纤维素膜的制备
4.1将羊抗兔IgG用磷酸盐缓冲液稀释成0.6mg/ml，制得质控线(C线)溶液。
4.2将金胺O-牛血清白蛋白复合物用磷酸盐缓冲液稀释至蛋白浓度为0.4mg/ml，制得检测线(T线)溶液。
4.3用点膜机喷点C、T线溶液，制得免疫硝酸纤维素膜。每1m长硝酸纤维素膜分别包被有1ml的C线和T线溶液，检测线和质控线的间距为5.0mm。
5.将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁成宽度为4mm的试剂条(如图1所示)。
6.将检测试剂条装入塑料盒内即得检测试剂盒。
本发明设计的金胺O胶体金检测卡的阈值为0.1μg/ml。
实施例2：金胺O胶体金检测卡的灵敏度实验；
1.检测方法：
(1)取实施例1制备的金胺O胶体金检测卡，将检测卡放置在水平台面上。
(2)用加样吸管吸取样品，然后滴5滴(约120ul)样品到检测卡的加样孔中。每检测一份不同的样品使用不同的吸管。
(3)观察结果：在滴加样品后5-10分钟判读结果。
2.检测样品：
配置金胺O浓度为0μg/ml，0.01μg/ml，0.05μg/ml，0.1μg/ml，0.2μg/ml，0.5μg/ml的质控参考品作为样品，每个浓度重复3次。
3.检测结果：
浓度为0μg/ml，0.01μg/ml，0.05μg/ml的样本均显示阴性，0.1μg/ml，0.2μg/ml，0.5μg/ml的样本均显示阳性。本发明检测卡的检测灵敏度为0.1μg/ml，该金胺O胶体金检测卡灵敏度符合检测要求。
实施例3：金胺O胶体金检测卡的特异性实验；
1.检测方法：
(1)取实施例1制得的金胺O胶体金检测卡，将检测卡放置在水平台面上。
(2)用加样吸管吸取用于检测交叉反应实验的检测样品，然后滴5滴(约120ul)样品到检测卡的加样孔中。每检测一份不同的样品使用不同的吸管。
(3)观察结果：在滴加样品后5-10分钟判读结果。
2.检测样品：
用不同浓度的碱性橙、碱性橙II、酸性橙I、酸性橙II、柠檬黄、日落黄等对本发明的检测卡进行检测，观察是否发生交叉反应。
3.检测结果：
结果证实，本发明的检测卡对金胺O的检测不会受到碱性橙、碱性橙II、酸性橙I、酸性橙II、柠檬黄、日落黄等的干扰，即本发明的金胺O胶体金检测卡在一定浓度下，不会与类似效果的染料产生交叉反应，特异性良好。
实施例4：金胺O胶体金检测卡的重复性和稳定性实验；
一、检测卡的批内和批间重复性实验；
1.实验方法：
将同批和不同批次的金胺O胶体金检测卡分别检测0.05、0.1、0.2、0.5μg/ml标准品，每个浓度重复3次，观察检测卡的重复性。
2.实验结果：经验证，金胺O胶体金检测卡的批内和批间重复性为100％，假阳性率和假阴性率均为0。
二、检测卡的稳定性实验；
1.实验目的：
将金胺O胶体金检测卡密封保存，并存放于4℃及室温(25℃左右)下，观察不同存放温度对检测卡稳定性的影响。
2.实验方法：
保存于4℃的检测卡每10天取出4份次，分别检测0.05、0.1、0.2、0.5μg/ml浓度的标准品；保存于室温(25℃)的检测卡每周取出4份次，分别检测0.05、0.1、0.2、0.5μg/ml浓度的标准品。
3.实验结果：
经验证，试剂条在4℃下可保存18个月，在室温下可保存12个月，在可保存的期限内，检测卡均可达到0.1μg/ml的检测灵敏度。

Claims (10)

1.一种金胺O胶体金检测卡，其特征在于：包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有金胺O-牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗兔IgG的质控线。
2.根据权利要求1所述的金胺O胶体金检测卡，其特征在于：所述免疫胶体金纸片中胶体金的颗粒大小为35nm，形状为圆形。
3.根据权利要求2所述的金胺O胶体金检测卡，其特征在于：所述金胺O胶体金检测卡是经过预处理液预处理的玻璃纤维纸，所述预处理液包括0.3～0.4v％Tween-20，6～10w/v％蛋白质、蛋白质片段、合成多肽、半合成多肽或双糖、多糖，溶剂为水。
4.如权利要求1-3任一权利要求所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，包括以下步骤：
1)两步还原法制备胶体金；
所述两步还原法为：
a.第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.01％的HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸20-30分钟，之后边搅拌边加入1％柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)水溶液2.00ml，用频率在20-30kHz的超声振荡2-3分钟后冷却至室温，即制得16nm左右粒径的胶体金原溶液；
b.第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置于4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl4水溶液体积比1∶1.9～2.0加入4.0℃的1％HAuCl4水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl4的摩尔比为27～28∶1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl4的重量比为1∶1.8～2.0，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得35nm左右粒径的胶体金溶液；
2)用步骤1)制备的胶体金标记抗金胺O单克隆抗体，获得胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体；
3)免疫胶体金纸片的制备：预处理玻璃纤维纸；稀释步骤2)获得的胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，OD540值为2.0的免疫胶体金溶液；用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸，获得免疫胶体金纸片；
4)将金胺O-牛血清白蛋白复合物和羊抗兔IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；
5)将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得试剂条；
6)将试剂条装入塑料盒，即获得金胺O胶体金检测卡。
5.根据权利要求4所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：所述两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸或三蒸去离子水。
6.根据权利要求4所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：所述两步还原法中步骤b)中，抗坏血酸与PVP的混合水溶液的滴加速度为1-2滴/秒。
7.根据权利要求4所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：所述两步还原法中步骤b)中，所述抗坏血酸与PVP的混合水溶液中，抗坏血酸的浓度为3％，PVP的浓度为0.137-0.139％，并且搅拌反应为60分钟。
8.根据权利要求4所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中免疫胶体金纸片的制备为：
a.用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗金胺O单克隆抗体，获得OD540值为2.0的免疫胶体金溶液；
b.用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得免疫胶体金纸片。
9.根据权利要求8所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤a中的喷金缓冲液配方如下：8～12％1.0m Tris液，0.2～0.4％聚乙二醇20000，0.15～0.25％牛血清白蛋白，0.1～0.3％脱脂牛奶，0.35～0.40％酪蛋白，和0.02～0.08％叠氮化钠，用盐酸调节pH至7.5±0.05，余量为水。
10.根据权利要求8所述的金胺O胶体金检测卡的制备方法，其特征在于：所述步骤b中每28-35ml预处理液浸泡玻璃纤维纸261mm×220mm×0.5mm，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂玻璃纤维纸，每261mm×220mm×0.5mm玻璃纤维纸上喷涂18-25ml免疫胶体金溶液，干燥，制得免疫胶体金纸片。
CN201610898635.7A 2016-10-14 2016-10-14 金胺o胶体金检测卡及其制备方法 Pending CN106568965A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610898635.7A CN106568965A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 金胺o胶体金检测卡及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610898635.7A CN106568965A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 金胺o胶体金检测卡及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106568965A true CN106568965A (zh) 2017-04-19

Family

ID=58531962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610898635.7A Pending CN106568965A (zh) 2016-10-14 2016-10-14 金胺o胶体金检测卡及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106568965A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109142735A (zh) * 2018-11-15 2019-01-04 广州智汇生物科技有限公司 一种检测金刚烷胺类药物的试纸条、制备方法及其应用
CN109142736A (zh) * 2018-11-15 2019-01-04 广州智汇生物科技有限公司 一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用
CN109270258A (zh) * 2018-10-31 2019-01-25 武汉利恩达医疗科技有限公司 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法
CN112578112A (zh) * 2020-09-22 2021-03-30 苏州市药品检验检测研究中心 一种808猩红胶体金检测卡及其制备方法
CN112578113A (zh) * 2020-09-22 2021-03-30 苏州市药品检验检测研究中心 一种松香酸胶体金检测卡及其制作方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1274423A (zh) * 1997-10-07 2000-11-22 Ucb生物制品股份有限公司 检测液体奶制品中待分析物的试验装置
CN101261271A (zh) * 2008-04-17 2008-09-10 武汉工业学院 苏丹红i免疫层析试纸检测方法
CN102162814A (zh) * 2011-05-30 2011-08-24 无锡安迪生物工程有限公司 一种酸性橙ⅱ快速检测卡及其检测方法
CN102590520A (zh) * 2012-02-27 2012-07-18 上海凯创生物技术有限公司 Eddp胶体金检测试剂盒及其制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1274423A (zh) * 1997-10-07 2000-11-22 Ucb生物制品股份有限公司 检测液体奶制品中待分析物的试验装置
CN101261271A (zh) * 2008-04-17 2008-09-10 武汉工业学院 苏丹红i免疫层析试纸检测方法
CN102162814A (zh) * 2011-05-30 2011-08-24 无锡安迪生物工程有限公司 一种酸性橙ⅱ快速检测卡及其检测方法
CN102590520A (zh) * 2012-02-27 2012-07-18 上海凯创生物技术有限公司 Eddp胶体金检测试剂盒及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
朱文钏 等: "免疫胶体金技术的应用及展望", 《生物技术通报》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109270258A (zh) * 2018-10-31 2019-01-25 武汉利恩达医疗科技有限公司 一种柴胡皂苷d检测试纸制备方法
CN109142735A (zh) * 2018-11-15 2019-01-04 广州智汇生物科技有限公司 一种检测金刚烷胺类药物的试纸条、制备方法及其应用
CN109142736A (zh) * 2018-11-15 2019-01-04 广州智汇生物科技有限公司 一种检测喹诺酮类药物的试纸条、制备方法及其应用
CN112578112A (zh) * 2020-09-22 2021-03-30 苏州市药品检验检测研究中心 一种808猩红胶体金检测卡及其制备方法
CN112578113A (zh) * 2020-09-22 2021-03-30 苏州市药品检验检测研究中心 一种松香酸胶体金检测卡及其制作方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106568965A (zh) 金胺o胶体金检测卡及其制备方法
TWI521206B (zh) Organic colored microparticles, including their diagnostic kit and in vitro diagnostic methods
Breiter et al. Evaluation of column extraction: a new procedure for the analysis of drugs in body fluids
CN104062440B (zh) 一种快速检测维生素d的试纸条
CN107884567A (zh) 一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒
CN107991487A (zh) 一种检测喹诺酮类抗生素的荧光微球免疫试纸卡、制备及检测方法
CN105424939B (zh) 一种检测多菌灵的试纸条及其制备方法和应用
CN101881769A (zh) 检测虾过敏原的免疫胶体金层析试纸条及其制备方法
CN103954764B (zh) 快速定量检测玉米赤霉烯酮的方法
CN101236201A (zh) 一种提高以胶体金属或乳胶颗粒作为标记物的检测试剂灵敏度的方法
CN106198837A (zh) 老年咳喘片的质量检测方法
CN108507854A (zh) 一种测定贝类样品中多组分农兽药残留量的前处理方法
CN103941000A (zh) 一种检测磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的试纸条及方法
CN105403707B (zh) 一种检测靶物质的信号放大方法及使用该方法的免疫层析试纸和装置
CN105486854A (zh) 一种信号放大方法及相关装置
CN102590520B (zh) Eddp胶体金检测试剂盒及其制备方法
CN107727787B (zh) 一种鉴别雪胆品种的薄层色谱鉴别方法
CN107505419A (zh) 一种用于富集、净化、检测afb1的修饰反蛋白石光子晶体微球及其制备方法和应用
CN109142735A (zh) 一种检测金刚烷胺类药物的试纸条、制备方法及其应用
CN204044161U (zh) 一种快速检测粮油中脱氧雪腐镰刀烯醇胶体金试剂板
CN104090107A (zh) 磺胺类药物的快速筛查方法
CN113030474A (zh) 一种检测金橙ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用
CN108802378A (zh) 一种试纸条的质控线包被溶液以及用此溶液制备的试纸条
CN103512979A (zh) 一种药物组合物坐珠达西的检测方法
CN102507940A (zh) 化妆品中氯霉素的快速检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170419