CN109211895B - 一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，包括：(1)取待测样品，加入水和试剂A，振摇，离心或静置；(2)取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇，继续加入试剂D和试剂E，振摇，静置，观察静置分层后上层溶液的颜色，试剂A为盐酸溶液、硫酸溶液和冰乙酸中的一种或几种，试剂B为对硝基苯胺水溶液，试剂C为亚硝酸钠溶液和亚硝酸钾溶液中的一种或两种，试剂D为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的一种或几种，试剂E为正丁醇、氯仿、乙醚和石油醚中的一种或几种。本发明的检测方法更环保，更快速、准确，显色明显且灵敏度高，操作简便，无需任何大型仪器，适应性范围广。

Description

一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法
技术领域
本发明涉及药物检测技术领域，具体而言，涉及一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法。
背景技术
芬氟拉明别名氟苯丙胺、盐酸芬氟拉明、盐酸氟苯丙胺、安德力减肥丸或芬美啉片等，其分子式为C12H16F3N，分子量为231.25700，沸点：243.1°Cat，760mmHg。芬氟拉明为苯丙胺类食欲抑制药，具有较弱的兴奋中枢的作用，可使血压下降；亦能加强周围组织对葡萄糖的利用而降低血糖；还有降低胆固醇、三酰甘油及血浆总脂质的作用。临床上用于单纯性肥胖及伴有糖尿病、高血压、焦虑症和心血管疾病的肥胖患者；对治疗孤独症亦有一定疗效。
在市售的各类减肥保健品中有些含有非法添加的有害物质，其中以合成食欲抑制剂最为常见典型的食欲抑制剂主要包括芬氟拉明、苯丁胺、苄非他明、氯苯丁胺、氯苄苯丙胺、苯双甲吗啉、苯甲吗啉和安非泼拉酮等日本美国和中国都有因服用过量食欲抑制剂致死的报道。国家食品药品监督管理局发布了关于停止生产、销售和使用盐酸芬氟拉明原料药和制剂的通知(国食药监办【2009】19号)。通知中表示国家药品不良反应监测中心的监测数据表明，使用盐酸芬氟拉明可引起心脏瓣膜损害、肺动脉高压、心力衰竭、心动过速、心慌、胸闷、血尿、皮疹、恶心、头晕等严重不良反应。国家局组织专家对该品种进行了综合评价，认为：国内外监测和研究资料表明，该药品用于减肥风险大于利益。为保障公众用药安全，根据《药品管理法》和《药品管理法实施条例》，国家局决定停止盐酸芬氟拉明原料药和制剂在我国的生产、销售和使用，撤销其批准证明文件。已上市销售的药品由生产企业负责召回，在所在地药品监督管理部门监督下销毁或者处理。因此检测减肥保健品中的合成食欲抑制剂对维护消费者的切身利益，规范减肥保健品市场具有非常现实的意义。
目前，分析检测这类食欲抑制剂的方法以各种色谱技术为主要包括HPLC(APCI-MS)、LCMS/MS及GC/MS等。但这些方法检测的对象大都是尿样、血样或组织等生物样品及药物片剂，主要应用于法医、毒理、临床及制药等领域，对于基质复杂的保健品分析缺少一定的针对性。目前有用HPCE分析测定了中药中掺入的芬氟拉明等6种食欲抑制剂，但该法用SPE混合柱固相萃取，使用的洗脱液二氯甲烷毒性较大。
发明内容
有鉴于此，本发明提供的一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，更好的克服了上述现有技术存在的问题和缺陷，通过先采用水初步提取，加入试剂A构造酸性反应环境，然后加入试剂B及试剂C，利用亚硝酸离子在酸性介质中与对硝基苯胺发生重氮化反应，再加入适量的碱性试剂C中和过量的酸，调节适宜的pH环境，然后在该环境中使重氮对硝基苯胺可与目标物质芬氟拉明偶联，生成红色偶氮化合物，最后用试剂E进行萃取提取，然后振摇、静置，可以使得到的上层溶液颜色更易观察，根据经萃取后的上清溶液颜色即可判断样品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明，若上层溶液显红色，则判为阳性(不合格产品，非法添加了违禁药物芬氟拉明)，若为透明或其他现象判为阴性(合格产品)；该方法更环保，更快速、准确，显色明显且灵敏度高，操作简便，适应性范围广。
一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，包括以下步骤：
(1)取待测样品，加入水和试剂A，振摇，离心或静置；
(2)取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇，继续加入试剂D和试剂E，振摇，静置，观察静置分层后上层溶液的颜色；
其中，所述试剂A为盐酸溶液、硫酸溶液和冰乙酸中的一种或几种；
所述试剂B为对硝基苯胺水溶液；
所述试剂C为亚硝酸钠溶液和亚硝酸钾溶液中的一种或两种；
所述试剂D为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的一种或几种；
所述试剂E为正丁醇、氯仿、乙醚和石油醚中的一种或几种。
进一步地，步骤(1)中，每1.5～3g待测样品中加入2～4ml水和0.8～1.2ml试剂A。
进一步地，步骤(1)中，取待测样品，加入水和试剂A后，然后振摇20～40s，再在2500～6000rpm的转速下离心1～2min或静置30～60s。
进一步地，步骤(1)中，所述待测样品为硬胶囊内容物、软胶囊内容物、片剂、丸剂或散剂；所述水为纯净水、去离子水或蒸馏水。
进一步地，步骤(2)中，每2ml离心液或上层清液中加入0.8～1.2ml试剂B、1～1.5ml试剂C、0.8～1.2ml试剂D和1.6～2.4ml试剂E。
进一步地，步骤(2)中，取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇10～20s；然后继续加入试剂D和试剂E，振摇30～60s，再静置2～5min。
进一步地，所述试剂A为盐酸溶液。
进一步地，所述试剂C为亚硝酸钠溶液。
进一步地，所述试剂D为质量分数2.5％的氢氧化钠。
进一步地，所述试剂E为正丁醇。
与现有技术相比，本发明的一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法的有益效果是：
本发明的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的检测方法，先采用水初步提取，加入试剂A构造酸性反应环境，然后加入试剂B及试剂C，利用亚硝酸离子在酸性介质中与对硝基苯胺发生重氮化反应，再加入适量的碱性试剂C中和过量的酸，调节适宜的pH环境，然后在该环境中使重氮对硝基苯胺可与目标物质芬氟拉明偶联，生成红色偶氮化合物，最后用试剂E进行萃取提取，再振摇、静置，可以使得到的上层溶液颜色更易观察；根据上清溶液颜色即可判断样品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明，若上层溶液显红色，则判为阳性(不合格产品，非法添加了违禁药物芬氟拉明)，若为透明或其他现象判为阴性(合格产品，未添加违禁药物芬氟拉明)；该方法更环保，更快速、准确，显色明显且灵敏度高，操作简便，无需任何大型仪器，适应性范围广。
为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，作详细说明如下。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面结合实施例的方式对本发明的技术方案做详细说明，在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。
但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用之术语：
本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
连接词“由……组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由……组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～4”、“1～3”、“1～2”、“1～2和4～5”、“1～3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)。
本发明提供了一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，包括以下步骤：
(1)取待测样品，加入水和试剂A，振摇，离心或静置。
优选地，每1.5～3g待测样品中加入2～4ml水和0.8～1.2ml试剂A。
需要说明的是，上述当待测样品的取量为1.5～3g如1.5g、2g、2.5g或3g时，加入水的量为2～4ml如2ml、2.5ml、3ml、3.5ml或4ml等，加入试剂A的量为0.8～1.2ml如0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml或1.2ml。
优选地，取待测样品，加入水和试剂A后，然后振摇20～40s，再在2500～6000rpm的转速下离心1～2min如或静置30～60s。
上述，当振摇20～40s如20s、30s或40s后，可选择在2500～6000rpm如2500rpm、3000rpm、4000rpm、5000rpm或6000rpm的转速下离心1～2min如1min、1.5min或2min等；还可选择直接静置30～60s如30s、40s、50s或60s等。
优选地，上述待测样品可为硬胶囊内容物、软胶囊内容物、片剂、丸剂或散剂；当待测样品为片剂、丸剂或散剂时，需将其研磨成粉末状。上述水可采用纯净水、去离子水或蒸馏水。
上述试剂A为盐酸溶液、硫酸溶液和冰乙酸中的一种或几种。
优选地，上述试剂A采用盐酸溶液，更优为摩尔浓度为1mol/L的盐酸溶液。需要说明的是，当试剂A采用盐酸溶液时，更容易回收，且回收率最高，其回收率可达89％；当试剂A采用硫酸溶液时，其回收率为30％；当试剂A采用冰乙酸时，其回收率为76％；当试剂A采用盐酸溶液和硫酸溶液的混合物时，其回收率为35％；当试剂A采用盐酸和冰乙酸的混合物时，其回收率为80％；当试剂A采用硫酸溶液和冰乙酸的混合物时，其回收率为34％。
(2)取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇，继续加入试剂D和试剂E，振摇，静置，观察静置分层后上层溶液的颜色；若上层溶液显红色，则判为阳性(不合格产品，非法添加了违禁药物芬氟拉明)，若为透明或其他现象判为阴性(合格产品)。
优选地，每2ml离心液或上层清液中加入0.8～1.2ml试剂B、1～1.5ml试剂C、0.8～1.2ml试剂D和1.6～2.4ml试剂E。
需要说明的是，上述当步骤(1)得到的离心液或上层清液取量为2ml时，加入试剂B的量为0.8～1.2ml如0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml或1.2ml，加入试剂C的量为1～1.5ml如1ml、1.1ml、1.2ml、1.3ml、1.4ml或1.5ml,加入试剂D的量为0.8～1.2ml如0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml或1.2ml，加入试剂E的量为1.6～2.4ml如1.6ml、1.8ml、2.0ml、2.2ml或2.4ml。
优选地，取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇10～20s如10s、15s或20s；然后继续加入试剂D和试剂E，振摇30～60s如30s、40s、50s或60s等，再静置2～5min如2min、3min、4min或5min等。
需要说明的是，上述试剂B为对硝基苯胺水溶液；优选地，本发明试剂B采用质量分数为1％的硝基苯胺水溶液。
上述试剂C为亚硝酸钠溶液和亚硝酸钾溶液中的一种或两种。由于亚硝酸钠与亚硝酸钾均可提供反应需要的亚硝酸根离子，但亚硝酸钠更容易制备得到，且制备成本较亚硝酸钾更低。本发明的试剂C优选采用质量分数为1.5～2.5％的亚硝酸钠溶液。
上述试剂D为氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸钠溶液和碳酸钾溶液中的一种或几种。需要说明的是，在阴离子相同的情况下，阳离子与水分子的结合能，与电荷量成正比，与半径成反比，而Na+和K+相比，Na+更容易与水分子结合，导致影响称量的准确度，甚至变潮溶解而无法实验。本发明的试剂D优选为质量分数为2.5％的氢氧化钾溶液。
上述试剂E为正丁醇、氯仿、乙醚和石油醚中的一种或几种。本发明的试剂E优选采用正丁醇，正丁醇稳定，毒性小，同时交易获得，适合大量使用。
需要说明的是，本发明先采用水初步提取，加入试剂A构造酸性反应环境，然后加入试剂B及试剂C，利用亚硝酸离子在酸性介质中与对硝基苯胺发生重氮化反应；再加入适量的碱性试剂D中和过量的酸，调节适宜的pH环境，当待测样品中非法添加了违禁药物芬氟拉明，则在该环境中重氮对硝基苯胺能够与目标物质芬氟拉明偶联，生成红色偶氮化合物，若待测样品中未添加违禁药物芬氟拉明，则不会发生偶联反应，即不会有红色偶氮化合物产生；最后用试剂E进行萃取提取，再振摇、静置，可以使得到的上层溶液颜色更易观察。因此，根据上清溶液颜色即可判断样品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明，若上层溶液显红色，则判为阳性(不合格产品，非法添加了违禁药物芬氟拉明)，若上层溶液为透明或其他现象判为阴性(合格产品，未添加违禁药物芬氟拉明)。
本发明的方法更环保，更快速、准确，显色明显且灵敏度高，操作简便，无需任何大型仪器，适应性范围广。
为了便于理解本发明，下面结合实施例来进一步说明本发明的技术方案。申请人声明，本发明通过下述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于下述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明应依赖下述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
实施例1
对某市售硬胶囊保健品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明进行检测，具体方法如下：
(1)旋开胶囊保健品的胶囊壳，取1.5g粉末状内容物置于离心管内，加入2ml水和0.8ml摩尔浓度为1mol/L的盐酸溶液，然后振摇20s摇匀后，再在3000rpm的转速下离心2min，得到离心液。
(2)取2ml步骤(1)得到的离心液，加入0.8ml质量分数为1％的硝基苯胺水溶液和1ml硝酸钠溶液(将0.02g硝酸钠溶于1ml水中得到)，然后轻摇10s；继续加入0.9ml质量分数为2.5％的氢氧化钾溶液和1.6ml正丁醇，振摇30s，再静置3min使其分层，观察分层后上清溶液的颜色。
结论：经观察上清溶液的颜色显红色，则该市售硬胶囊保健品中添加了违禁药物芬氟拉明，即为不合格产品。
实施例2
对某市售软胶囊保健品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明进行检测，具体方法如下：
(1)用剪刀剪开该软胶囊壳，挤出液体状内容物2g置于离心管内，加入3ml水和1ml摩尔浓度为1mol/L的盐酸溶液，然后振摇30s摇匀后，再静置60s使药渣沉淀，得到上层清液。
(2)取2ml步骤(1)得到的上层清液，加入1ml质量分数为1％的硝基苯胺水溶液和1.2ml硝酸钠溶液(将0.02g硝酸钠溶于1ml水中得到)，然后轻摇15s；继续加入1ml质量分数为2.5％的氢氧化钾溶液和2ml正丁醇，振摇40s，再静置4min使其分层，观察分层后上清溶液的颜色。
结论：经观察上清溶液的颜色呈透明，则该市售硬胶囊保健品中并没有非法添加违禁药物芬氟拉明，即为合格产品。
实施例3
对某市售片状保健品中是否非法添加了违禁药物芬氟拉明进行检测，具体方法如下：
(3)将片状保健品研磨成粉末状，取2.5g粉末状内容物置于离心管内，加入4ml水和1.2ml摩尔浓度为1mol/L的盐酸溶液，然后振摇40s摇匀后，再在5000rpm的转速下离心1.5min，得到离心液。
(4)取2ml步骤(1)得到的离心液，加入1.2ml质量分数为1％的硝基苯胺水溶液和1.5ml硝酸钠溶液(将0.02g硝酸钠溶于1ml水中得到)，然后轻摇20s；继续加入1.2ml质量分数为2.5％的氢氧化钾溶液和2.4ml正丁醇，振摇60s，再静置5min使其分层，观察分层后上清溶液的颜色。
结论：经观察上清溶液的颜色显红色，则该市售片状保健品中非法添加了违禁药物芬氟拉明，即为不合格产品。
上述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明配方及制备工艺可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取待测样品，加入水和试剂A，振摇，离心或静置；
(2)取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇，继续加入试剂D和试剂E，振摇，静置，观察静置分层后上层溶液的颜色；
其中，所述试剂A为盐酸溶液、硫酸溶液和冰乙酸中的一种或几种；
所述试剂B为对硝基苯胺水溶液；
所述试剂C为亚硝酸钠溶液和亚硝酸钾溶液中的一种或两种；
所述试剂D为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的一种或几种；
所述试剂E为正丁醇、氯仿、乙醚和石油醚中的一种或几种；
所述上层溶液的颜色若显红色，则判为阳性，若为透明或其他现象判为阴性。
2.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：步骤(1)中，每1.5～3g待测样品中加入2～4ml水和0.8～1.2ml试剂A。
3.根据权利要求2所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：步骤(1)中，取待测样品，加入水和试剂A后，然后振摇20～40s，再在2500～6000rpm的转速下离心1～2min或静置30～60s。
4.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述待测样品为硬胶囊内容物、软胶囊内容物、片剂、丸剂或散剂；所述水为纯净水、去离子水或蒸馏水。
5.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：步骤(2)中，每2ml离心液或上层清液中加入0.8～1.2ml试剂B、1～1.5ml试剂C、0.8～1.2ml试剂D和1.6～2.4ml试剂E。
6.根据权利要求5所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：步骤(2)中，取离心液或静置后的上层清液，加入试剂B和试剂C，轻摇10～20s；然后继续加入试剂D和试剂E，振摇30～60s，再静置2～5min。
7.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：所述试剂A为盐酸溶液。
8.根据权利要求7所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：所述试剂C为亚硝酸钠溶液。
9.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：所述试剂D为质量分数2.5％的氢氧化钠。
10.根据权利要求1所述的保健食品中非法添加违禁药物芬氟拉明的快速检测方法，其特征在于：所述试剂E为正丁醇。
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CN102901780A (zh) * 2012-10-17 2013-01-30 湖南省食品药品检验研究院 一种在中药、保健食品或化妆品中同时检测七种非法添加减肥类化学成分的方法
CN104597165A (zh) * 2015-02-06 2015-05-06 山东省食品药品检验研究院 一种减肥类中成药和保健食品中非法添加物的Q-Orbitrap高分辨质谱检测方法
CN108061777A (zh) * 2017-11-27 2018-05-22 浙江公正检验中心有限公司 减肥类保健食品中34种非法添加药物残留量的检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Non-Patent Citations (1)

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Title
水中α-萘胺的重氮偶合分光光度测定法;史云峰 等;《环境与健康杂志》;20111031;第28卷(第10期);第912页 *

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