CN102552368B

CN102552368B - 一种无糖银杏口服液及其制备方法和检测方法

Info

Publication number: CN102552368B
Application number: CN201010617659.3A
Authority: CN
Inventors: 王建国; 陈法贵; 徐丽君
Original assignee: Zhejiang Dade Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Zhejiang Dade Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2010-12-31
Filing date: 2010-12-31
Publication date: 2014-03-26
Anticipated expiration: 2030-12-31
Also published as: CN102552368A

Abstract

本发明公开了一种无糖银杏口服液及其制备方法和检测方法，按照重量份计算，它是由白果仁450～500份、蔊菜700～750份、甜菊素1.5～2份、山梨酸0.8～1.2份、杏仁香精适量和薄荷脑适量制成的。与现有技术相比，本发明无糖制剂具有生物利用度高，稳定性好的优点，解除了糖尿病患者用药的局限性，扩大了适用人群；在治疗急慢性支气管炎、久咳气喘、排痰不爽等方面疗效确切；且本制剂不含任何致瘾成分，无毒副作用，口感好，见效快，服用方便。此外本发明检测方法精密度高，重现性好，测量结果准确，可有效确保该制剂的临床疗效。

Description

一种无糖银杏口服液及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种无糖银杏口服液及其制备方法和检测方法，属于中药技术领域。

背景技术

咳嗽是呼吸系统疾病的主要症状，如咳嗽无痰或痰量很少为干咳，常见于急性咽喉炎、支气管炎的初期；急性骤然发生的咳嗽，多见于支气管内异物；长期慢性咳嗽，多见于慢性支气管炎、肺结核等。咳嗽可使气管病变扩散到邻近的小支气管，使病情加重。另外，持久剧烈的咳嗽会影响休息，还易消耗体力，并可引起肺泡壁弹性组织的破坏，诱发肺气肿。据《本草纲目》记载：“银杏，甘苦、平、涩，入肺经，宋初始著名，其气薄味厚，性涩而收，益肺气，定喘嗽”。蔊菜性凉、味辛，具清热解毒、止咳、祛痰、抗菌及利尿、活血之功效，据《本草纲目》记载：“蔊菜，利胸膈，豁冷痰”，民间常用于治疗风寒感冒、肺热咳嗽、咽喉肿痛等症。近年来医学研究发现蔊菜中含有一种蔊菜素，对治疗慢性支气管炎疗效显著，其祛痰、止咳、平喘作用十分明显。

虽然之前已有将银杏与蔊菜配伍来制备治疗支气管炎、哮喘等药物的相关报道，但对其组方用量、制备工艺的技术研究都不够成熟，尚未制得效果良好的药物产品。而且，也没有针对该药物制定相应的质量检测方法，无法确保药物的质量和疗效。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种无糖银杏口服液及其制备方法和检测方法。本发明经科学组方和工艺精制而成的无糖型口服液具有良好的镇咳、化痰、定喘之功效，且无毒副作用，口感好，见效快，服用方便，适于糖尿病患者；本发明还研制了科学合理的检测方法，可有效地控制和提高产品质量。

本发明是这样构成的：一种无糖银杏口服液，按照重量份计算，它是由白果仁450～500份、蔊菜700～750份、甜菊素1.5～2份、山梨酸0.8～1.2份、杏仁香精适量和薄荷脑适量制成的。

优选的无糖银杏口服液是由白果仁476.2g、蔊菜714.3g、甜菊素1.8g、杏仁香精0.1mL、薄荷脑0.03g和山梨酸1g制成的。

前述无糖银杏口服液的制备方法为：先将白果仁打碎，照流浸膏剂及浸膏剂项下的渗漉法，用7倍量60％乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇并浓缩成55～65℃相对密度为1.02～1.07的清膏，静置，分层，过滤，滤液备用；蔊菜分别加10倍量、8倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成55～65℃相对密度为1.17～1.22的清膏，冷后加乙醇等量混匀，放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成55～65℃相对密度为1.17～1.22的清膏，与白果仁提取液合并，混匀，静置3天，滤过；取甜菊素和山梨酸加入该滤液，搅匀，加水至1000mL，调节pH值至5.0～6.0，搅匀，加热至微沸，保温1小时，冷却后加入溶于乙醇中的薄荷脑和杏仁香精，冷藏，滤过，灌装，灭菌，即得。

前述无糖银杏口服液的检测方法包括性状、检查、鉴别和含量测定项目；其中鉴别是对蔊菜的薄层色谱鉴别，蔊菜的鉴别方法是以蔊菜对照药材为对照，以醋酸乙酯∶环己烷＝2∶1为展开剂的薄层色谱鉴别方法；含量测定为对银杏内酯B的含量测定，银杏内酯B的含量测定方法是以银杏内酯B对照品为对照，以水∶甲醇∶四氢呋喃＝65∶24∶11为流动相的高效液相色谱法。

具体的鉴别方法为：取本口服液制剂10mL，加氯化钠2g，搅拌使溶解，用氯仿提取二次，每次25mL，氯仿液合并，在70℃水浴上蒸干，加乙酸乙酯1mL使溶解，滤过，制成滤液，作为供试品溶液；另取蔊菜对照药材3g，加水煎煮二次，每次30分钟，趁热滤过，滤液合并，浓缩至10mL，放冷，照前述供试品溶液制备方法，从“用氯仿提取二次”起，制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶环己烷＝2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液与9％三氯化铁乙醇溶液体积比为5∶1的混合液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

具体的含量测定方法为：

照中国药典附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水∶甲醇∶四氢呋喃＝65∶24∶11为流动相，用蒸发光散射检测器检测；理论板数按银杏内酯B峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取银杏内酯B对照品适量，加甲醇制成每1mL含80μg、800μg两种浓度的溶液，即得；

供试品溶液的制备取装量差异项下的本口服液制剂适量，精密移取50mL，加2％盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次，合并提取液，用5％醋酸钠溶液40mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20mL洗涤；合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20mL，合并水洗液，用醋酸乙酯20mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯B的含量，即得；

本制剂每1mL含萜类内酯以银杏内酯B C₂₀H₂₄O₁₀的含量计，不得少于15μg。

具体地说，所述检测方法包括以下项目：

性状：本制剂为浅棕色至棕褐色的液体；气香，味甜；

检查：照中国药典一部附录VII A检测，相对密度为1.02～1.06；其它各项应符合中国药典一部附录I J项下有关的规定；

鉴别：取本口服液制剂10mL，加氯化钠2g，搅拌使溶解，用氯仿提取二次，每次25mL，氯仿液合并，在70℃水浴上蒸干，加乙酸乙酯1mL使溶解，滤过，制成滤液，作为供试品溶液；另取蔊菜对照药材3g，加水煎煮二次，每次30分钟，趁热滤过，滤液合并，浓缩至10mL，放冷，照前述供试品溶液制备方法，从“用氯仿提取二次”起，制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶环己烷＝2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液与9％三氯化铁乙醇溶液体积比为5∶1的混合液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照中国药典附录VI D高效液相色谱法测定：

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯B的含量，即得；本制剂每1mL含萜类内酯以银杏内酯B C₂₀H₂₄O₁₀的含量计，不得少于15μg。

本发明组方中银杏具有降痰、清毒之功能，可以调节呼吸器官，对于结核杆菌等有较强的抑制作用，因此，可用于治疗肺结核、支气管炎等疾病；蔊菜有效成分为蔊菜素，有解表健胃、止咳化痰的作用。二者配伍，具有良好的镇咳、化痰、定喘之功效，用于急慢性支气管炎，排痰不爽，久咳气喘等症。

申请人进行了一系列实验来选择本发明制剂的制备工艺和检测方法，以保证其科学、合理、可行，并具有良好的疗效。

一、制备工艺研究

1、矫味剂的选择

银杏口服液处方由白果仁、蔊菜二味中药组成，若以蔗糖作为矫味剂，则限制了糖尿病患者的使用，因此本发明选用无热量甜味剂-甜菊素。

按处方量(白果仁476.2g、蔊菜714.3g)称取药材，制成的药液分别加甜菊素1.4g、1.6g、1.8g、2.0g、2.2g进行工艺试验，经反复多次、多人口感试验结果表明，单个处方中加1.8g甜菊素制得的样品口感良好，最为理想。

2、白果仁渗漉工艺研究

白果仁渗漉工艺照流浸膏及浸膏剂项下的渗漉法(《中国药典》2000年版一部附录IO)用60％乙醇作溶剂，以每1kg白果仁2～3mL/min速度进行渗漉，以渗漉液浓缩后的浸膏(相对密度1.05，65℃)的出膏率为考察指标，考察渗漉溶剂用量对渗漉工序结果的影响，试验结果见下表1。

表1白果仁渗漉工艺试验结果(一个处方量)

以上结果表明，三次渗漉提取各项指标基本相差不大，根据流浸膏常规渗漉方法，选择溶剂用量为白果仁药材的7倍量。

3、蔊菜提取工艺研究

试验目的：考察提取工序加水量的多少对提取液浓缩后浸膏(相对密度1.2±0.02，65℃)出膏率(醇沉后)及浸膏中蔊菜定性鉴别的影响，并考虑一般药材提取过程中，第一次加水量大于第二次提取加水量的原则，分别采用不同的加水量进行提取试验，比较出膏率的大小及对定性鉴别的影响，试验结果见表2。

表2蔊菜提取工艺研究试验结果

以上结果表明，①、②提取方案出膏率基本相差不大，而③号提取方法出膏率则明显偏低，由于蔊菜为草类药材，体积较为膨松，结合常规提取加水方法，选择加水量为第一次10倍量，第二次8倍量。

4、三批中试产品的技术数据

结论：本制剂三批中试产品试制结果表明，其工艺合理、稳定，成品收得率较高，所得成品经质量检验，结果表明均符合规定。

二、检测方法研究

1、指标成分的选择

本组方中有白果仁和蔊菜两味原料药，相对来说，白果仁的相关研究较少，根据银杏类制剂的相关报道，初步选择了测定萜类内酯成分，包括银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯，作为含量测定的指标成分；蔊菜则作为定性鉴别成分。

2、测定方法的选择

银杏内酯的含量测定以前曾经用示差折光检测器，而目前普遍采用蒸发光散射检测器法测定萜类内酯的含量，具有方法稳定、灵敏度高、重现性好的特点。

3、萜类内酯含量测定方法研究

3.1仪器与试剂

仪器：岛津LC-10AT高效液相色谱仪，美国Alltech2000蒸发激光散射检测器(ELSD)，Ultimate C₁₈柱4.6×250mm。

试剂：四氢呋喃(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，正丙醇(色谱纯)，重蒸水(自制)，其它均为分析纯。

3.2色谱条件

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Ultimate C₁₈柱4.6×250mm。

流动相：水∶甲醇∶四氢呋喃(65∶24∶11)。

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

漂移管温度：105℃。

气体流速：2.8L/min。

进样量：20μl。

系统适用性：理论塔板数按银杏内酯B峰计算应不低于3000。

3.3色谱条件的选择

色谱条件1：根据相关文献，初步选择以下条件：

流动相：水∶正丙醇∶四氢呋喃(84∶1∶15)。

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

漂移管温度：110℃。

气体流速：3.0L/min。

进样量：20μl。

结果：柱压过高，超过300kgf，不适合长时间分析；四个萜类内酯峰基本分开，但保留时间太长，最后一个内酯峰需要到60分钟才出完，并且峰型较差，基本上舍弃。

色谱条件2：根据银杏叶制剂的相关文献，选择如下条件：

流动相：水∶甲醇∶四氢呋喃(65∶25∶10)。

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

漂移管温度：105℃。

气体流速：2.8L/min。

进样量：20μl。

结果：四个萜类内酯成分的对照品分离较好，但银杏口服液样品中银杏内酯B、银杏内酯C和周围杂质峰的分离度只有1.1左右，达不到分离要求。

色谱条件3：根据相关报道，四氢呋喃对物质的出峰有很大影响，因此拟调节四氢呋喃的比例，选择如下条件：

流动相：水∶甲醇∶四氢呋喃(65∶23∶12)。

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

漂移管温度：105℃。

气体流速：2.8L/min。

进样量：20μl。

结果：银杏内酯B完全包在杂质峰里面，无法正常分离。

色谱条件4：继续调节四氢呋喃的比例，选择如下条件：

流动相：水∶甲醇∶四氢呋喃(65∶24∶11)

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

漂移管温度：105℃。

气体流速：2.8L/min。

进样量：20μl。

结果：银杏内酯B、银杏内酯C和周围杂质峰的分离较好，并且25分钟左右全部出完峰，基线较为稳定。

通过比较，选择条件4，即流动相：水∶甲醇∶四氢呋喃(65∶24∶11)，流速：1.0mL/min，柱温30℃，漂移管温度：105℃，气体流速：2.8L/min，进样量：20μl，作为含量测定条件。但在考察阴性样品的时候，发现在银杏内酯C相同保留时间下有峰，存在干扰，因此最后选择银杏内酯B作为最终的指标成分。并且银杏内酯B的保留时间为20min左右，理论塔板数大于6000，分离度均大于1.5，可以作为银杏口服液中萜类内酯的含量测定指标。

3.4供试品溶液的制备

取装量差异项下的本口服液制剂适量，精密移取50mL，加2％盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(40mL、30mL、30mL、30mL)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液40mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20mL洗涤。合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20mL，合并水洗液，用醋酸乙酯20mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

参照2005版药典银杏叶制剂项下的供试品溶液的制备方法，采用醋酸乙酯萃取，由于本口服液为白果仁的复方制剂，含量偏小，因此选用50mL的取样量，并对盐酸加入的量和醋酸乙酯的提取次数进行了考察，结果如下：

(1)盐酸量的考察由于盐酸在此过程中有保护内酯和除杂的作用，对其加入的量进行了比较，加2％盐酸溶液2滴比加2％盐酸溶液4滴制成的样品溶液进样后杂质多且分离度不好。故选用加2％盐酸溶液4滴。

(2)醋酸乙酯提取次数考察由于萃取大多是接近等量萃取比较完全，因此萃取的溶剂量选择是40mL、30mL、30mL、30mL。在其他条件一样的情况下，分别对提取次数(3、4、5)进行考察。结果三次损失比较大，四次，五次相差不大，考虑到成本等因素选用提取四次。

提取量(mL)	40，30，30	40，30，30，30	40，30，30，30，30
				含量(μg/mL)	20.7	25.7	25.4

(3)醋酸钠溶液在此过程起洗涤过量酸的作用，水起洗涤残留的盐的作用，以保护柱子，对含量没有影响，因此没有对其考察。

3.5阴性对照试验

按处方比例制取阴性样品，精密量取50mL，照供试品溶液的制备方法操作，制备阴性样品溶液。按3.2项下色谱条件进行含量测定，银杏内酯B的含量测定无干扰，专属性强。

3.6线性与范围

精密称取银杏内酯B对照品8.00mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

精密吸取上述对照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、5mL分别至5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μL注入液相色谱仪，测定，以峰面积(S)的自然对数为纵坐标，浓度(C)的自然对数为横坐标，线性回归，得回归方程，见下表：

Y：样品峰面积X：溶液浓度(μg/mL)

结果表明：银杏内酯B浓度范围在80μg/mL～800μg/mL之间峰面积的自然对数与浓度的自然对数线性关系良好(见附图1)。

3.7精密度试验

取800μg/mL银杏内酯B对照品溶液，按3.2项下色谱条件测定6次，测定银杏内酯B的峰面积。结果见下表：

精密度试验结果

3.8重复性试验

取050501批样品适量，各精密量取50mL，按3.4项下供试品溶液的制备方法制备6份样品溶液，按3.2项下的色谱条件测定。结果见下表：

银杏内酯B重复性试验结果

3.9样品溶液稳定性试验

取050501批样品适量，精密量取50mL，照含量测定项下的方法测定，结果表明在12小时之内被测样品溶液基本稳定。结果见下表：

样品溶液稳定性考察表

3.10加样回收率试验

精密称取银杏内酯B对照品适量，加甲醇制成每1mL含680μg/mL的对照品溶液，备用。

精密量取050501批样品6份各25mL，各精密加入上述对照品溶液1mL，按3.4项下供试品溶液的制备方法制备，按3.2项下的色谱条件测定，计算回收率。结果见下表：

银杏内酯B加样回收率试验表

3.11含量测定

供试品溶液的制备取装量差异项下的本制剂适量，精密移取50mL，加2％盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(40mL、30mL、30mL、30mL)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液40mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20mL洗涤；合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20mL，合并水洗液，用醋酸乙酯20mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的制备精密称取银杏内酯B对照品适量，加甲醇制成每1mL含80μg、800μg两种浓度的溶液，即得。

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液及供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算银杏内酯B的含量(以每1mL所含银杏内酯B含量计)。

七批样品含量测定的结果见下表：

七批样品含量测定结果

3.12送检样品的含量测定

供试品溶液的制备取装量差异项下的样品适量，精密移取50mL，加2％盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(40mL、30mL、30mL、30mL)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液40mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20mL洗涤；合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20mL，合并水洗液，用醋酸乙酯20mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的制备精密称取银杏内酯B对照品适量，加甲醇制成每1mL含160μg、800μg两种浓度的溶液，即得。

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算银杏内酯B的含量(以每1mL所含银杏内酯B含量计)。

取3批样品，按上述测定法测定其银杏内酯B的含量，结果见下表：

结果：经对同一生产工艺的十批产品进行含量测定，结果表明：银杏口服液中银杏内酯B含量为19.8μg/mL～31.4μg/mL。考虑到工业化大生产的特点，将含量的最低限下浮20％，即本制剂每1mL含白果仁以银杏内酯B计不得少于15μg。

4、蔊菜薄层色谱鉴别方法研究

蔊菜中所含主要成分为蔊菜素，目前技术上尚不能提取高纯度的蔊菜素，市场上无高纯度的蔊菜素对照品供应，因此选择以蔊菜对照药材为对照，采用薄层色谱法鉴别本制剂中所含的蔊菜。

4.1供试品溶液的制备

4.2点样量选择

点样量	色谱效果
		2μL	主斑点颜色浅，不易辨认
5μL	主斑点清晰
		10μL	斑点过大，略有拖尾现象

4.3展开剂的选择

展开剂	色谱效果
		醋酸乙酯-环己烷(2∶1)	R_f值适宜
氯仿-丙酮(15∶1)	R_f值较大，分离效果不好
		醋酸乙酯-氯仿-甲醇(4∶4∶3)	斑点略有扩散
氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶6∶1)	斑点分离效果不佳

与现有技术相比，本发明无糖制剂具有生物利用度高，稳定性好的优点，解除了糖尿病患者用药的局限性，扩大了适用人群；在治疗急慢性支气管炎、久咳气喘、排痰不爽等方面疗效确切；且本制剂不含任何致瘾成分，无毒副作用，口感好，见效快，服用方便。此外本发明检测方法精密度高，重现性好，测量结果准确，可有效确保该制剂的临床疗效。

附图说明

图1是银杏内酯B的标准曲线图。

具体实施方式

本发明的实施例1：无糖银杏口服液的制备：

取白果仁476.2g、蔊菜714.3g、甜菊素1.8g、杏仁香精0.1mL、薄荷脑0.03g和山梨酸1g。先将白果仁打碎，照流浸膏剂及浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2005年版一部附录I O)，用7倍量60％乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇并浓缩成相对密度为1.02～1.07(55～65℃)的清膏，静置，分层，过滤，滤液备用；蔊菜分别加10倍量、8倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.17～1.22(55～65℃)的清膏，冷后加乙醇等量混匀，放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成相对密度为1.17～1.22(55～65℃)的清膏，与白果仁提取液合并，混匀，静置3天，滤过；取甜菊素和山梨酸加入该滤液，搅匀，加水至1000mL，调节pH值至5.0～6.0，搅匀，加热至微沸，保温约1小时，冷却后加入薄荷脑(溶解于适量乙醇中)和杏仁香精，冷藏，滤过，灌装，灭菌，即得。本制剂口服，每次10mL，每天4次。

本发明的实施例2：无糖银杏口服液的制备：

取白果仁500g、蔊菜750g、甜菊素2g、杏仁香精0.12mL、薄荷脑0.04g和山梨酸1.2g。先将白果仁打碎，照流浸膏剂及浸膏剂项下的渗漉法(中国药典2005年版一部附录I O)，用60％乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇并浓缩成相对密度为1.05(55～65℃)的清膏，静置，分层，过滤，滤液备用；蔊菜分别加10倍量、8倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.20(55～65℃)的清膏，冷后加乙醇等量混匀，放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成相对密度为1.20(55～65℃)的清膏，与白果仁提取液合并，混匀，静置3天，滤过；取甜菊素和山梨酸加入该滤液，搅匀，加水至1000mL，调节pH值至5.5，搅匀，加热至微沸，保温1小时，冷却后加入薄荷脑(溶解于适量乙醇中)和杏仁香精，冷藏，滤过，灌装，灭菌，即得。本制剂口服，每次15mL，每天3次。

本发明的实施例3：无糖银杏口服液的检测方法包括以下项目：

性状：本制剂为浅棕色至棕褐色的液体；气香，味甜。

鉴别：取本口服液制剂10mL，加氯化钠2g，搅拌使溶解，用氯仿提取二次，每次25mL，氯仿液合并，在水浴上蒸干(约70℃)，加醋酸乙酯1mL使溶解，滤过，制成滤液，作为供试品溶液；另取蔊菜对照药材3g，加水煎煮二次，每次30分钟，趁热滤过，滤液合并，浓缩至约10mL，放冷，照前述供试品溶液制备方法，从“用氯仿提取二次”起，制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸收上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-环己烷(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液与9％三氯化铁乙醇溶液的混合液(体积比5∶1)，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

检查：相对密度应为1.02～1.08(照中国药典2000年版一部附录VII A检测)；其它应符合中国药典一部附录I J合剂项下有关的各项规定。

含量测定：萜类内酯照高效液相色谱法(中国药典附录VI D)测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-甲醇-四氢呋喃(65∶24∶11)为流动相，用蒸发光散射检测器检测；理论板数按银杏内酯B峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备精密称取银杏内酯B对照品适量，加甲醇制成每1mL含80μg、800μg两种浓度的溶液，即得；

供试品溶液的制备取装量差异项下的本口服液制剂适量，精密移取50mL，加2％盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次(40mL、30mL、30mL、30mL)，合并提取液，用5％醋酸钠溶液40mL洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20mL洗涤；合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20mL，合并水洗液，用醋酸乙酯20mL洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

本制剂每1mL含萜类内酯以银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)的含量计，不得少于15μg。

Claims

1.一种无糖银杏口服液，其特征在于：它是由白果仁476.2g、蔊菜714.3g、甜菊素1.8g、杏仁香精0.1mL、薄荷脑0.03g和山梨酸1g按照下述方法制成的：先将白果仁打碎，照流浸膏剂及浸膏剂项下的渗漉法，用7倍量60%乙醇作溶剂，进行渗漉，漉液回收乙醇并浓缩成55～65℃相对密度为1.02～1.07的清膏，静置，分层，过滤，滤液备用；蔊菜分别加10倍量、8倍量水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成55～65℃相对密度为1.17～1.22的清膏，冷后加乙醇等量混匀，放置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成55～65℃相对密度为1.17～1.22的清膏，与白果仁提取液合并，混匀，静置3天，滤过；取甜菊素和山梨酸加入该滤液，搅匀，加水至1000ml，调节pH值至5.0～6.0，搅匀，加热至微沸，保温1小时，冷却后加入溶于乙醇中的薄荷脑和杏仁香精，冷藏，滤过，灌装，灭菌，即得。

2.如权利要求1所述无糖银杏口服液的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括性状、检查、鉴别和含量测定项目；其中鉴别是对蔊菜的薄层色谱鉴别，蔊菜的鉴别方法是以蔊菜对照药材为对照，以醋酸乙酯∶环己烷=2∶1为展开剂的薄层色谱鉴别方法；含量测定为对银杏内酯B的含量测定，银杏内酯B的含量测定方法是以银杏内酯B对照品为对照，以水∶甲醇∶四氢呋喃=65∶24∶11为流动相的高效液相色谱法；

具体的含量测定方法为：

照中国药典附录ⅥD高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水∶甲醇∶四氢呋喃=65∶24∶11为流动相，用蒸发光散射检测器检测；理论板数按银杏内酯B峰计算应不低于3000；

供试品溶液的制备取装量差异项下的本口服液制剂适量，精密移取50ml，加2%盐酸溶液4滴，用醋酸乙酯振摇提取4次，合并提取液，用5%醋酸钠溶液40ml洗涤，分取醋酸钠液，再用醋酸乙酯20ml洗涤；合并醋酸乙酯提取液，用水洗涤2次，每次20ml，合并水洗液，用醋酸乙酯20ml洗涤，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

具体的鉴别方法为：取本口服液制剂10ml，加氯化钠2g，搅拌使溶解，用氯仿提取二次，每次25ml，氯仿液合并，在70℃水浴上蒸干，加乙酸乙酯1mL使溶解，滤过，制成滤液，作为供试品溶液；另取蔊菜对照药材3g，加水煎煮二次，每次30分钟，趁热滤过，滤液合并，浓缩至10ml，放冷，照前述供试品溶液制备方法，从“用氯仿提取二次”起，制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶环己烷=2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液与9%三氯化铁乙醇溶液体积比为5∶1的混合液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求2所述无糖银杏口服液的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下项目：

性状：本制剂为浅棕色至棕褐色的液体；气香，味甜；

检查：照中国药典一部附录ⅦA检测，相对密度为1.02～1.08；其它各项应符合中国药典一部附录I J项下有关的规定；

鉴别：取本口服液制剂10ml，加氯化钠2g，搅拌使溶解，用氯仿提取二次，每次25ml，氯仿液合并，在70℃水浴上蒸干，加乙酸乙酯1mL使溶解，滤过，制成滤液，作为供试品溶液；另取蔊菜对照药材3g，加水煎煮二次，每次30分钟，趁热滤过，滤液合并，浓缩至10ml，放冷，照前述供试品溶液制备方法，从“用氯仿提取二次”起，制成对照药材溶液；照中国药典2000年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯∶环己烷=2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液与9%三氯化铁乙醇溶液体积比为5∶1的混合液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：照中国药典附录ⅥD高效液相色谱法测定：

测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算银杏内酯B的含量，即得。