CN104000896A - 一种变叶海棠提取物及其制备方法和其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种变叶海棠提取物的制备方法，它包括如下步骤：a、取变叶海棠药材或变叶海棠水提液，用无机酸或有机酸、或生物酶的混合中水解，得到变叶海棠水解液；b、将水解液减压浓缩，真空干燥，得变叶海棠提取物。本发明还提供了该变叶海棠提取物的用途，以及含有该变叶海棠的药物组合物。本发明对藏药变叶海棠水解产物降糖、降脂作用机制从多方位进行研究，通过对药材或水提液通过酸或生物酶水解处理，药效明显提升，为川西特色藏药资源变叶海棠药物的开发、民族医药的发展及其产业化奠定前期工作基础。

Description

一种变叶海棠提取物及其制备方法和其用途

技术领域

本发明涉及一种变叶海棠提取物及其制备方法和用途。

背景技术

变叶海棠(学名：Malus toringoides)为蔷薇科苹果属的植物，为中国的特有植物。分布于中国大陆的甘肃、西藏、四川等地，生长于海拔2,000米至3,000米的地区，多生在山坡丛林中，目前已由人工引种栽培。它是川西特色藏药资源，已有研究表明其具有很高的药用价值，在当地已经作为一种天然的绿色保健品。

申请号：200810170831.8，发明名称：苹果属花楸苹果组植物的新用途，本发明提供了苹果属花楸苹果组植物在制备降血糖的药物或保健食品中的用途。本发明还提供了一种降血糖的苹果属花楸苹果组植物提取物和含有该提取物的药物组合物。其中所述的提取物为水或有机溶剂(乙醇)提取物。申请号：200910093098.9，发明名称：治疗糖尿病的药用植物，该专利也公开了药用植物变叶海棠(Malus toringoides(Rehd.)Hughes)、陇东海棠(Malus kansuensis Schneid)、花叶海棠(Malus transitoria Schneid)、小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jing)和马尔康海棠(Malusmaerkangesis Cheng，Zeng.et.Jin)中的一种或几种治疗糖尿病的药用新用途,其制备方法也是加水或乙醇提取制备得到的提取物。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种新的变叶海棠提取物的制备方法，本发明的另一技术方案是提供了该方法制备得到的提取物，以及该提取物的用途，以及含有该提取物的药物组合物。

本发明提供了一种变叶海棠提取物的制备方法，它包括如下步骤：

a、取变叶海棠药材或变叶海棠水提液，用无机酸或有机酸、或生物酶的混合中水解，得到变叶海棠水解液；

b、将水解液减压浓缩，真空干燥，得变叶海棠提取物。

所述的变叶海棠药材或变叶海棠水提液来源于变叶海棠的叶、茎、根。

其中，a步骤所述的酸的加入量为水提液中总固形物含量的0.1％～500％w/w；生物酶的加入量为水提液中总固形物含量的0.005％～10％w/w；a步骤所述的水解温度为30～100℃，时间为10min～24h。

其中，水提液中总固体形是指水提液的干膏量。

更进一步优选地，所述的水解条件为：盐酸浓度1％，水解时间1h，水解温度100℃。

其中，所述的无机酸为盐酸、磷酸、硫酸；所述的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸，乳酸、柠檬酸、苯甲酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、酒石酸；所述的生物酶为糖苷类水解酶。

其中，所述的糖苷类水解酶为β-葡萄糖苷酶、苦杏仁酶、纤维素酶。

其中，所述的变叶海棠水提取液的制备方法为：取变叶海棠叶、茎、根，加12-24倍量水煎煮，提取1-3次，每次1-2小时。

本发明还提供了所述的制备方法制备得到的变叶海棠提取物。

本发明还提供了变叶海棠提取物在制备降血糖或/和降血脂的药物中的用途。

本发明还提供了所述的变叶海棠提取物在制备预防或/和治疗胰岛素抵抗综合症的药物中的用途。

本发明药物可以改善胰岛素抵抗，可用于预防或/和治疗胰岛素抵抗综合征，可用于预防或/和治疗糖代谢异常、高血压、脂代谢紊乱、腹部性或内脏性肥胖、动脉粥样硬化、冠心病、多囊卵巢综合征、纤维蛋白原增多、纤溶活性降低、微量白蛋白尿、高尿酸血症、高瘦素血症等一组以胰岛素抵抗为特点的临床征候群的药物，且药效明确。

本发明提供了一种具有降血糖或/和降血脂的药物组合物，它是所述的变叶海棠提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂。

进一步优选地，所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、颗粒剂。

本发明对藏药变叶海棠水解产物降糖、降脂作用机制从多方位进行研究，通过对药材或水提液通过酸或生物酶水解处理，药效明显提升，为川西特色藏药资源变叶海棠药物的开发、民族医药的发展及其产业化奠定前期工作基础。

附图说明

图1空白组①(TUNEL×400)

图2模型组①(TUNEL×400)

图3阳性组①(TUNEL×400)

图4高剂量组①(TUNEL×400)

图5中剂量组①(TUNEL×400)

图6低剂量组①(TUNEL×400)

图7空白组②(TUNEL×400)

图8模型组②(TUNEL×400)

图9阳性组②(TUNEL×400)

图10高剂量组②(TUNEL×400)

图11中剂量组②(TUNEL×400)

图12低剂量组②(TUNEL×400)

具体实施方式

实施例1本发明变叶海棠提取物的制备

取变叶海棠叶水提液(每ml相当于原药材0.1g)100L，加入1％盐酸1000ml，搅拌均匀，加热至100℃，适当搅拌，保温水解1h。然后将该水解液减压浓缩至相对密度1.1(50℃)，再在60℃下真空干燥至干，将干浸膏粉碎，即得变叶海棠提取物。

实施例2本发明变叶海棠提取物的制备

取变叶海棠叶水提液(每ml相当于原药材0.1g)100L，加入冰醋酸5000ml，搅拌均匀，100℃加热回流2h。然后将该水解液减压浓缩至相对密度1.1(50℃)，再在60℃下真空干燥至干，将干浸膏粉碎，即得变叶海棠提取物。

实施例3本发明变叶海棠提取物的制备

取变叶海棠叶水提液(每ml相当于原药材0.1g)100L，加入苦杏仁酶100g，搅拌均匀，50℃保温6h。然后将该水解液减压浓缩至相对密度1.1(50℃)，再在60℃下真空干燥至干，将干浸膏粉碎，即得变叶海棠提取物。

实施例4本发明变叶海棠提取物的制备

取变叶海棠根10kg，加7％盐酸水煎煮三次，每次酸水用量10倍量，煎煮1小时；提取液过滤，合并三次滤液；然后将该水提液减压浓缩至相对密度1.1(50℃)，再在60℃下真空干燥至干，将干浸膏粉碎，即得变叶海棠提取物。

实施例5本发明变叶海棠提取物的制备

取变叶海棠茎10kg，加5％硫酸水煎煮三次，每次酸水用量10倍量，煎煮1小时。提取液过滤，合并三次滤液。然后将该水提液减压浓缩至约100L，经大孔树脂吸附。先用水洗脱除去多余的硫酸，再用40～90％乙醇作为洗脱剂进行洗脱，对洗脱液进行回收溶剂和浓缩干燥处理，得变叶海棠提取物。

实施例6本发明变叶海棠提取物的工艺筛选试验

1.水解条件正交试验设计

通过单因素水解条件的摸索，选出盐酸浓度、水解时间、水解温度三个因素，以根皮苷水解率为指标，选用L9(34)正交试验表安排实验。因素和水平见表1。

表1：因素水平表

2.试验方法

量取变叶海棠浓缩水提液适量，分别加入适量盐酸适量并稀释至100ml，使每ml相当于原药材0.1g，加入圆底烧瓶，置水浴锅中，按正交试验因素水平表的设计，以不同温度加热回流一定时间，取出，滤过。待滤液冷却后，精密吸取0.5ml至10ml量瓶中，用甲醇定容，摇匀，滤过，即为待测溶液。以根皮苷水解率(水解率＝根皮素摩尔浓度/水解前药液中根皮苷摩尔浓度×100％)为指标，对试验结果进行分析。

3.结果及分析

结果表明，变叶海棠水提液盐酸水解时各因素对水解率的影响大小为B＞C＞A,即水解时间＞水解温度＞盐酸浓度。

表2：水提工艺正交试验结果

再对试验结果进行方差分析，结果见表3。

表3：方差分析

方差分析结果表明，水解时间和水解温度对结果有显著影响(P<0.05)因此，选取最佳水解时间为1小时，最佳水解温度为100℃。盐酸浓度各水平无显著差异，从节约成本考虑选取1％为盐酸浓度。得出的最佳水解条件为A1B2C3，即盐酸浓度1％，水解时间1h，水解温度100℃。

4.验证试验

选取最优条件ABC，进行三次重复试验，每次将适量变叶海棠浓缩液加盐酸后，稀释至1000ml(每ml相当于原药材0.1g)，三次试验的根皮苷水解率分别为81.7％、81.4％、83.5％，结果表明，所选最优水解工艺稳定可行。

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1变叶海棠药效学研究

1、药品与试剂

变叶海棠提取物(以下也称“变叶海棠水解物”，由实施例1制备)，棕色浸膏，1.77g原生药/g浸膏，由四川省中医药科学院药学所制备，批号：130826。

马来酸罗格列酮片，国药准字H20020475，葛兰素史克(天津)有限公司。批号：12115119。

葡萄糖，成都化学试剂厂，分析纯，500g/瓶，批号：20120913。

胰岛素注射液，江苏万邦生化医药股份有限公司，批号：1205235。

甘油三酯试剂盒，四川迈克生物科技股份有限公司，批号：1212171。

总胆固醇试剂盒，四川迈克生物科技股份有限公司，批号：0712121。

低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，四川迈克生物科技股份有限公司，批号：0113011。

胰岛素试剂盒，北京北方生物技术研究所，批号：140102。

多聚甲醛(AR级)，批号：20130813，规格：500g/瓶，天津市进丰化工有限公司。

氢氧化钠(AR级)，批号：20130705，规格：500g/瓶，天津市滨海科迪化学试剂有限公司。

PBS磷酸盐缓冲液(0.01M PH7.2-7.4)，批号：ZLI-9062，规格：2000ml/袋，北京中杉金桥生物技术有限公司。

无水乙醇(AR级)、二甲苯(AR级)，批号分别为20130619、20130318，规格：500m1/瓶，成都科龙化工试剂厂。

中性树胶，规格：100g/瓶，批号：20130118，中国上海懿洋仪器有限公司。

重铬酸钾(AR级)、浓硫酸(AR级)，批号分别为20130520、20130109，规格：500g/瓶，成都市科龙化工试剂厂。

3-氨丙基-3-乙养基甲硅烷(APES)，批号：ZLI-9001，规格：1000ml/袋，北京中杉金桥生物技术有限公司。

苏木素(AR级)，批号：LM10N13，规格：25g/瓶，北京百灵威科技有限公司生产。

浓缩型DAB试剂盒，批号：K135925C，北京中衫金桥生物有限公司。

胰蛋白酶K(Proteinase K)，批号：1245680100，美国Merck Millipore公司。

罗氏(Roche)公司Tunel试剂盒(In situ cell death detection kit-POD法)，批号：14590300，瑞士罗氏公司(Roche Group)。

1号(蓝盖)Enzyme Solution酶溶液；

2号(紫盖)Label Solution标记液；

3号(棕瓶)Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；

2、实验环境与动物

实验环境符合国家大鼠、小鼠、豚鼠、兔屏障系统使用设施标准，四川省实验动物管理会，许可证号：SCXK(川)2008-100。

KK-Ay小鼠，SPF级，9-11周龄，雌雄各半，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2009-0004。

C57小鼠，SPF级，9-11周龄，雌雄各半，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2009-0004。

鼠料均经60Co灭菌，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，C57小鼠维持饲料，KK-Ay小鼠喂KK鼠料(高脂饲料)，许可证编号：SCXK(京)2009-0008。

3、实验仪器

罗氏卓越型血糖仪，Roche Diagnostics GmgH

卓越金锐血糖试纸，德国罗氏诊断有限公司，批号：471179

JA1003A电子天平(d＝1mg)，上海精天电子仪器有限公司

电子天平(d＝10mg)，北京赛多利斯仪器系统有限公司

日本7010全自动生化分析仪

ALLEG RAX-22R高速冷冻离心机，美国贝克曼库尔特公司

PYX-DHS-40×50-BS隔水式电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂

Multiskan MS/Denley Dragon MK2，3酶标仪，LABSYSTEMS

2015型转轮式切片机，德国徕卡(Leica)仪器有限公司

TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机，常州市中威电子仪器有限公司

PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪，常州市中威医疗仪器有限公司

BA200Digital数码三目摄像显微摄像系统，麦克奥迪实业集团有限公司

Image-Pro Plus6.0图像分析系统，美国Media Cybernetics公司

4、方法与结果

4.1变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠的影响

4.1.1对KK-Ay小鼠体重及脏器指数、脂肪指数的影响

4.1.1.1实验目的

KK-Ay小鼠是一种多基因自发性遗传动物模型，具有高血糖症、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、肥胖等病理特征，是理想的自发性胰岛素抵抗糖尿病动物模型和自发性遗传肥胖动物模型，且还伴有代谢综合征。C57BL/6J与KK-Ay小鼠具有基因同源性而作为正常对照组。采用KK-Ay小鼠模型，观察变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠体重、血糖、血脂、胰岛素等的作用并探讨其作用机理。

4.1.1.2实验方法

所有小鼠均适应性喂养1周后进行实验。10只C57小鼠作为正常对照组。50只KK-Ay小鼠按空腹血糖值随机分为模型对照组、阳性对照组(马来酸罗格列酮片2.67mg/kg)和变叶海棠水解物三个剂量组(1.50g、0.75g、0.375g原生药/kg)5组，每组10只。各组采用等体积不等浓度ig给药(正常对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水)，每日定时给药一次，连续35天。体重(BW)于给药前及给药后每周固定时间测定，每周一次；试验结束时取胰腺、肝脏、肾脏、腹腔脂肪和皮下脂肪称重，并计算脏器及脂肪指数(脏器或脂肪重g/体重100g)。

4.1.1.3结果

由表4可见，在实验期间所观察的5个时间点，KK-Ay小鼠体重均高于对照组同周龄的C57小鼠(p＜0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组在给药第14、21、28、35天时体重均低于模型组，与模型组比较统计差异有显著意义(p<0.05或p＜0.01)。

由表5可见，试验结束时，KK-Ay小鼠胰腺、肾脏、皮下脂肪、腹腔脂肪指数均高于对照组同周龄的C57小鼠(p＜0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组肝脏指数、腹腔脂肪指数均低于模型组，与模型组比较差异有显著意义(p<0.01或p<0.05)。

4.1.2对KK-Ay小鼠空腹血糖(FGB)的影响

4.1.2.1目的

同4.1.1.1。

4.1.2.2方法

分组及给药方法同4.1.1.2。给药前及给药后每周固定时间测定1次空腹血糖，测定前小鼠禁食3h(自由饮水)，剪尾取血，用罗氏卓越型血糖仪及血糖试条测定。

4.1.2.3结果

由表6可见，在实验期间所观察的6个时间点KK-Ay小鼠的血糖值均高于对照组同周龄C57小鼠(p<0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组在给药第14、21、28、35天血糖值均低于模型组，与模型组比较统计差异有显著意义(p<0.01)。

4.1.3对KK-Ay小鼠糖耐量(OGTT)的影响

4.1.3.1目的

同4.1.1.1。

4.1.3.2方法

分组及给药方法同4.1.1.2。于给药第21天测定。小鼠先禁食3h(自由饮水)，剪尾取血测血糖(零时)，然后给小鼠灌服葡萄糖2.5g/kg，测定灌糖后0.5,1,2h的血糖值，并计算曲线下面积(AUC)，AUC＝0.5*空腹血糖+0.5h血糖+1.5*1h血糖+2h血糖。

4.1.3.3结果

由表7可见，在给药21天时的糖耐量实验中，KK-Ay小鼠各时间点的血糖值及AUC值均高于对照组同周龄C57小鼠(p<0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组各时间点的血糖值及AUC值均低于模型组，与模型组比较统计差异有显著意义(p<0.01)。

4.1.4对KK-Ay小鼠胰岛素耐量的影响

4.1.4.1目的

同4.1.1.1。

4.1.4.2方法

分组及给药方法同4.1.1.2。于给药第28天测定。小鼠先禁食3h(自由饮水)，剪尾取血测血糖(零时)，然后给小鼠腹腔注射胰岛素0.5U/kg，测定注射胰岛素后45，90，135分钟的血糖值。

4.1.4.3结果

由表8可见，在给药28天时的胰岛素耐量实验中，KK-Ay小鼠各时间点腹腔注射胰岛素后血糖值仍高于对照组同周龄C57小鼠(p<0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组各时间点血糖值低于模型组，与模型组比较统计差异有显著意义(p<0.05或p<0.01)。

4.1.5对KK-Ay小鼠血清胰岛素及胰岛素敏感指数的影响

4.1.5.1目的

同4.1.1.1。

4.1.5.2方法

分组及给药方法同4.1.1.2。给药35天于禁食3小时测定血糖后摘眼球取血，分离血清，按ELISA试剂盒要求测定胰岛素(FINS)。按照公式计算胰岛素敏感指数(ISI)，空服血糖与空服胰岛素乘积的倒数，再取自然对数。

4.1.5.3结果

由表9可见，试验结束时，KK-Ay小鼠血清胰岛素高于对照组同周龄C57小鼠(p<0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组胰岛素低于模型组，与模型组比较统计差异不显著(p<0.01)；变叶海棠1.50、0.75、0.375g(原生药)/kg组胰岛素敏感指数均高于模型组，与模型组比较统计差异显著(p<0.01)。

表9：变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠血清胰岛素及胰岛素敏感指数的影响(n＝10)

注：与模型对照组比较(t检验或t’检验)：*p＜0.05；**p＜0.01。

4.1.6对KK-Ay小鼠甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的影响

4.1.6.1目的

同4.1.1.1。

4.1.6.2方法

分组及给药方法同4.1.1.2。给药35天于禁食3小时测定血糖后摘眼球取血，分离血清，检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，用全自动生化分析仪按试剂盒要求测定。

4.1.6.3结果

由表10可见，试验结束时，KK-Ay小鼠TC、TG、LDL-C值均高于对照组同周龄C57小鼠(p<0.01)；变叶海棠1.50g、0.75、0.375g(原生药)/kg组TC、TG、LDL-C均低于模型组，与模型对照组比较统计差异显著(p<0.01)。

表10：变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠血脂的影响(n＝10)

注：与模型对照组比较(t检验或t’检验)：*p＜0.05；**p＜0.01。

4.1.7对KK-Ay小鼠胰腺组织中细胞凋亡的影响

4.1.7.1目的

观察变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠胰腺组织中细胞凋亡的影响

4.1.7.2方法

(1)载玻片防脱片处理：使用APES侵泡，捞片后置烤箱60℃ 60min以使切片紧密粘附；

(2)切片常规脱蜡至水；

(3)用胰蛋白酶K(Proteinase K)工作液在37℃处理组织25min；

(4)PBS漂洗3次；

(5)制备TUNEL反应混合液：50μl 1号液+450μl 2号液混匀；

(6)玻片干后，加50μl TUNEL反应混合液于标本上，加盖玻片在暗湿盒中反应37℃，1h；

(7)PBS漂洗3次；

(8)玻片干后加50μl3号液(converter-POD)于标本上，加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃，30min；

(9)PBS漂洗3次；

(10)滴加50-100μl DAB显色剂，观察反应25℃，10min；

(11)PBS漂洗3次；

(12)苏木素轻度复染，几秒后自来水冲洗；

(13)酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

4.1.7.3结果

(1)阳性表达：

凋亡细胞核颜色为浅黄色或棕黄色，阴性表达为蓝色，底色为白色。

(2)图像采集及结果分析

采用麦克奥迪实业集团有限公司生产的BA200Digital数码三目摄像显微摄像系统显微摄像系统对切片进行图像采集，每张切片先于100倍下观察全部组织，再根据组织大小及表达情况分别选取1～3个区域400倍采集图像；对每张图片进行读片，计数100个细胞，统计阳性率。

小鼠胰腺TUNEL显微图片见图1-图12。表11：变叶海棠水解物对KK-Ay小鼠胰腺组织中细胞凋亡的影响(n＝10)

注：与模型对照组比较(t检验或t’检验)：*p＜0.05；**p＜0.01。

5、实验结论

变叶海棠水解物在所试剂量1.50g、0.75g、0.375g(原生药)/kg灌胃给药，对KK-Ay小鼠体重增长有一定的抑制作用；灌胃给药14天即可致KK-Ay小鼠空腹血糖降低，在14-35天给药期间维持在较低水平。同时可降低空腹胰岛素水平，具有增加胰岛素敏感指数作用。在糖耐量试验中，可观察到变叶海棠水提物对KK-Ay小鼠餐后血糖和AUC有明显降低作用。在降低KK-Ay小鼠空腹血糖的同时，还具有一定的改善胰岛素抵抗作用。此外，变叶海棠水提物能降低KK-Ay小鼠血清甘油三酯、总胆固醇水平，升高血清低密度脂蛋白胆固醇水平，改善脂质代谢。同时能降低KK-Ay小鼠腹腔脂肪指数，对肥胖有一定的改善作用。显著改善KK-Ay小鼠胰腺组织结构功能，减少凋亡胰岛细胞，保护和修复胰腺组织的结构和功能。

本发明药物可以改善胰岛素抵抗，可用于预防或/和治疗胰岛素抵抗综合征，可用于预防或/和治疗糖代谢异常、高血压、脂代谢紊乱、腹部性或内脏性肥胖、动脉粥样硬化、冠心病、多囊卵巢综合征、纤维蛋白原增多、纤溶活性降低、微量白蛋白尿、高尿酸血症、高瘦素血症等一组以胰岛素抵抗为特点的临床征候群的药物，且药效明确。

Claims (10)

1.一种变叶海棠提取物的制备方法，特征在于：它包括如下步骤：

a、取变叶海棠药材或变叶海棠水提液，用无机酸或有机酸、或生物酶的混合中水解，得到变叶海棠水解液；

b、将水解液减压浓缩，真空干燥，得变叶海棠提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：a步骤所述的酸的加入量为水提液中总固形物含量的0.1％～500％w/w；生物酶的加入量为水提液中总固形物含量的0.005％～10％w/w；a步骤所述的水解温度为30～100℃，时间为10min～24h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的无机酸为盐酸、磷酸、硫酸；所述的有机酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸，乳酸、柠檬酸、苯甲酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、酒石酸；所述的生物酶为糖苷类水解酶。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的糖苷类水解酶为β-葡萄糖苷酶、苦杏仁酶、纤维素酶。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的变叶海棠水提取液的制备方法为：取变叶海棠叶、茎、根，加12-24倍量水煎煮，提取1-3次，每次1-2小时。

6.权利要求1-5任意一项所述的制备方法制备得到的变叶海棠提取物。

7.权利要求6所述的变叶海棠提取物在制备降血糖或/和降血脂的药物中的用途。

8.权利要求6所述的变叶海棠提取物在制备预防或/和治疗胰岛素抵抗综合症的药物中的用途。

9.一种具有降血糖或/和降血脂的药物组合物，它是由权利要求6所述的变叶海棠提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂；优选地，所述的口服制剂是片剂、胶囊剂、口服液、丸剂、颗粒剂。