CN109196098A - 包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物 - Google Patents
包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β‑半乳糖苷酶活性的多肽的组合物，用于在例如动物饲料中使用。本发明进一步涉及具有β‑半乳糖苷酶活性的多肽、具有半乳聚糖酶活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
Description
对序列表的引用
本申请包含处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物，用于在例如动物饲料中使用。本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性的多肽、具有半乳聚糖酶活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
大豆是一种原产于东亚的豆科植物物种，并且是全球第二大饲料作物，也是动物饲料中应用的最大蛋白质来源。可以加工(脱脂)大豆以产生豆粕(SBM)，并且SBM是用于动物饲料的重要且廉价的高质量蛋白质来源。其他常见类型的豆科植物是鹰嘴豆、羽扇豆、扁豆、花生、菜豆或豌豆，它们也可以加工并用作动物饲料。豆科植物(如大豆)含有大量的半乳聚糖多糖，它们需要通过酶降解以释放其中的糖，从而释放其中的能量。
然而，有很少有效地降解半乳聚糖多糖的解决方案，因此豆科植物中的能量不能被动物适当地利用。高达70％的农民支出来自动物饲料的成本。
Sakamoto等人在Appl Microbiol Biotechnol.[应用微生物学与生物技术]20139:2895-2906中披露了来自产黄青霉的GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合。DeVries等人在Carbohydrate Research[碳水化合物研究]327(2000)中披露了来自黑曲霉的GH35β-半乳糖苷酶LacA和GH53半乳聚糖酶GalA的组合。然而，如本文所披露的，这些现有技术解决方案在从豆科植物(如大豆)中释放半乳糖方面不是非常有效。因此，本发明的目的是提供一种解决方案，其有效地从半乳聚糖多糖中释放糖，从而改善豆科植物的营养价值，以通过重新配制饮食来降低饲料成本或为动物提供更多的能量从而改善动物生长。
发明内容
本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物。
本申请进一步涉及包含本发明的一种或多种多肽的颗粒；包含本发明的一种或多种组合物的动物饲料添加剂；包含本发明的一种或多种多肽的液体配制品；包含本发明的一种或多种多肽的动物饲料和颗粒状动物饲料；从植物基材料中释放半乳糖的方法；改善动物的一个或多个性能参数的方法以及本发明的组合物在动物饲料中、在动物饲料添加剂中、在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中、用于改善动物饲料的营养价值、用于提高动物饲料的消化率、用于改善动物的一个或多个性能参数和/或用于从植物基材料中释放半乳糖中的用途。
本发明还涉及具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的分离的多肽，编码本发明的多肽的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体、重组宿主细胞，以及产生这些多肽的方法。
序列表概述
SEQ ID NO:1是如分离自柯恩氏菌属物种(Cohnella sp)-60555的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是来自柯恩氏菌属物种-60555的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是带有His-标签的SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5是如分离自解木聚糖柯恩氏菌(Cohnella xylanilytica)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:6是如从SEQ ID NO:5推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是来自解木聚糖柯恩氏菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8是带有His-标签的SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是如分离自冻原类芽孢杆菌(Paenibacillus tundrae)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:10是如从SEQ ID NO:9推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11是来自冻原类芽孢杆菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是带有His-标签的SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13是如分离自巴其诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:14是如从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是来自巴其诺类芽孢杆菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16是带有His-标签的SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
SEQ ID NO:17是如分离自类芽孢杆菌属物种-62603的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:18是如从SEQ ID NO:17推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19是来自类芽孢杆菌属物种-62603的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:20是带有His-标签的SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21是如分离自解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:22是如从SEQ ID NO:21推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:23是来自解木聚糖类芽孢杆菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:24是带有His-标签的SEQ ID NO:23的氨基酸序列。
SEQ ID NO:25是如分离自类芽孢杆菌属物种-18179的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:26是如从SEQ ID NO:25推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27是来自类芽孢杆菌属物种-18179的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28是带有His-标签的SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
SEQ ID NO:29是如分离自皮奥利亚类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。(D448RG)
SEQ ID NO:30是如从SEQ ID NO:29推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31是来自皮奥利亚类芽孢杆菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:32是带有His-标签的SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
SEQ ID NO:33是如分离自食木糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanexedens)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:34是如从SEQ ID NO:33推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35是来自食木糖类芽孢杆菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36是带有His-标签的SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
SEQ ID NO:37是如分离自光滑柯恩氏菌(Cohnella laeviribosi)的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:38是如从SEQ ID NO:37推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:39是来自光滑柯恩氏菌的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:40是带有His-标签的SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
SEQ ID NO:41是如分离自副榛色钩囊菌(Hamigera paravellanea)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:42是如从SEQ ID NO:41推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:43是来自副榛色钩囊菌的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:44是如分离自爪甲曲霉(Aspergillus unguis)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:45是如从SEQ ID NO:44推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:46是来自爪甲曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:47是如分离自溜曲霉(Aspergillus tamarii)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:48是如从SEQ ID NO:47推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:49是来自溜曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:50是如分离自穗状弯孢霉(Curvularia spicifera)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:51是如从SEQ ID NO:51推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:52是来自穗状弯孢霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:53是如分离自米曲霉的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:54是如从SEQ ID NO:53推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:55是来自米曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:56是如分离自肉色曲霉(Aspergillus carneus)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:57是如从SEQ ID NO:56推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58是来自肉色曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:59是如分离自檞皮素青霉(Penicillium quercetorum)的GH35β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:60是如从SEQ ID NO:59推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:61是来自檞皮素青霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:62是如在WO 1997/032014中披露的来自特异腐质霉(Humicolainsolens)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:63是如在WO 1997/032014中披露的来自嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophile)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:64是如在WO 1997/032013中披露的来自大型亚灰树花菌(Meripilusgiganteus)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:65是保守基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE。
SEQ ID NO:66是保守基序WADP[A/G]xQxKPxAW。
SEQ ID NO:67是克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)分泌信号。
SEQ ID NO:68是如分离自简青霉(Penicillium simplicissimum)的GH35β-半乳糖苷酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:69是如从SEQ ID NO:68推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:70是来自简青霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:71是如分离自赭曲霉(Aspergillus westerdijkiae)的GH35β-半乳糖苷酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:72是如从SEQ ID NO:71推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:73是来自赭曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:74是如分离自文氏曲霉(Aspergillus wentii)的GH35β-半乳糖苷酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:75是如从SEQ ID NO:75推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:76是来自文氏曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:77是如分离自迟缓曲霉(Aspergillus lentulus)的GH35β-半乳糖苷酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:78是如从SEQ ID NO:77推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:79是来自迟缓曲霉的成熟GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:80是保守基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F。
SEQ ID NO:81是保守基序K[Y/F][Y/S]ETK。
SEQ ID NO:82是如Sakamoto等人在Appl Microbiol Biotechnol.[应用微生物学与生物技术]2013 9:2895-2906中披露的来自产黄青霉的GH35β-半乳糖苷酶的氨基酸序列(Swissprot：I0IV51)。
SEQ ID NO:83是如Sakamoto等人在Appl Microbiol Biotechnol.[应用微生物学与生物技术]2013 9:2895-2906中披露的来自产黄青霉的GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列(Swissprot：B5MGR3)。
SEQ ID NO:84是如De Vries等人在Carbohydrate Research[碳水化合物研究]327(2000)401–410中披露的来自黑曲霉的GH35β-半乳糖苷酶LacA的氨基酸序列(Swissprot：G3XR77)。
SEQ ID NO:85是如De Vries等人在Carbohydrate Research[碳水化合物研究]327(2000)401–410中披露的来自黑曲霉的GH53半乳聚糖酶GalA的氨基酸序列。
定义
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体基因座的基因的两个或更多个替代形式中的任一者。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽没有变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
α-半乳糖苷酶：术语“α-半乳糖苷酶”(也称为α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(E.C.3.2.1.22))意指催化α-D-半乳糖苷(如半乳糖寡糖、半乳甘露聚糖和半乳糖脂)中末端非还原α-D-半乳糖残基水解的酶。α-半乳糖苷酶活性可以在室温下在100mM MES(西格玛公司(Sigma))缓冲液pH 7.0±0.05中使用4-硝基苯基α-D-吡喃半乳糖苷(购自MegazymeInternational公司，Bray，威克洛郡，爱尔兰)作为底物来测定。将酶稀释成2倍稀释液，然后将4-硝基苯基α-D-吡喃半乳糖苷底物溶解在含有该酶的溶液中。通过测量随时间变化的释放的pNP在405nm处的吸光度来直接在缓冲液中跟踪α-半乳糖苷酶活性。可以在如本文所述的α-半乳糖苷酶测定中找到详细的测定。α-半乳糖苷酶的实例是在WO 1994/23022中披露的α-半乳糖苷酶(AAR60801)。在一方面，该α-半乳糖苷酶具有AAR60801的α-半乳糖苷酶活性的至少50％，如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。
动物：术语“动物”是指除人以外的所有动物。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如以下动物，如绵羊、山羊、牛(例如，肉牛、奶牛和牛犊)、鹿、yank、骆驼、美洲驼和袋鼠。非反刍动物包括单胃动物，例如猪(包括但不限于小猪、成长猪和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
动物饲料：术语“动物饲料”是指适合于或打算用于由动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。单胃动物的动物饲料通常包含浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(如在预混物中)，而反刍动物的动物饲料通常包含草料(包括粗粮和青贮)，并且可以进一步包含浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(如在预混物中)。
β-半乳糖苷酶：术语“β-半乳糖苷酶”意指催化β-D-半乳糖苷(如乳糖(1,4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖)、寡糖、糖脂和糖蛋白)中末端非还原β-D-半乳糖残基水解的β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(EC 3.2.1.23)。β-半乳糖苷酶活性可以在室温下在100mM MES(西格玛公司)缓冲液pH 7.0±0.05中使用4-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(购自MegazymeInternational公司，Bray，威克洛郡，爱尔兰)作为底物来测定。将酶稀释成2倍稀释液，然后将4-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷底物溶解在含有该酶的溶液中。通过测量随时间变化的释放的pNP在405nm处的吸光度来直接在缓冲液中跟踪β-半乳糖苷酶活性。可以在如本文所述的β-半乳糖苷酶测定中找到详细的测定。在一方面，本发明的多肽具有SEQ ID NO:43的多肽的β-半乳糖苷酶活性的至少60％，如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。
体重增加：术语“体重增加”意指在给定时间段期间动物的活重的增加，例如从第1天到第21天的体重增加。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录物是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列步骤进行加工，包括剪接。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由可读框决定，该可读框以起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。最少，控制序列包括启动子以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
表达：术语“表达”包括涉及多肽的产生的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，该DNA分子包含编码多肽的多核苷酸并且有效地连接至提供用于其表达的控制序列。
饲料转化率：术语“饲料转化率”是指用来将动物的体重增加一个指定量的喂给动物的饲料量。改善的饲料转化率意指较低的饲料转化率。“较低的饲料转化率”或“改善的饲料转化率”意味着当饲料不包含所述饲料添加剂组合物时，与以将动物体重增加到相同量所需的饲料量相比，在饲料中使用饲料添加剂组合物导致需要将更少量的饲料喂给动物，以将动物的体重增加一个指定量。
饲料效率：术语“饲料效率”意指当动物在一段时间内被任意喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的体重增加量。“增加的饲料效率”意味着根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比，每单位饲料摄入的增加的增重。
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少90％，如SEQID NO:3的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少286个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少464个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少284个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少284个氨基酸。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少92％，如SEQID NO:3的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少292个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少474个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少290个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少290个氨基酸。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少94％，如SEQID NO:3的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少298个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少485个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少297个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少297个氨基酸。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少96％，如SEQID NO:3的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少305个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少495个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少304个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少303个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少303个氨基酸。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少98％，如SEQID NO:3的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少311个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少505个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少310个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少309个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少309个氨基酸。
在一方面，该片段具有半乳聚糖酶活性并且包含成熟多肽长度的至少99％，如SEQID NO:3的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少314个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少510个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少313个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少312个氨基酸或SEQ ID NO:39的至少312个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少90％，如SEQ ID NO:43的至少886个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少913个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少898个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少884个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少898个氨基酸、SEQID NO:58的至少906个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少889个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少865个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少900个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少900个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少894个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少92％，如SEQ ID NO:43的至少906个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少933个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少918个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少904个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少918个氨基酸、SEQID NO:58的至少926个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少908个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少885个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少920个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少920个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少914个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少94％，如SEQ ID NO:43的至少925个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少954个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少938个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少924个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少938个氨基酸、SEQID NO:58的至少946个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少928个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少904个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少940个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少940个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少934个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少96％，如SEQ ID NO:43的至少945个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少974个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少958个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少943个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少958个氨基酸、SEQID NO:58的至少966个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少948个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少923个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少960个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少960个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少954个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少98％，如SEQ ID NO:43的至少965个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少994个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少978个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少963个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少978个氨基酸、SEQID NO:58的至少986个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少968个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少942个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少980个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少980个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少974个氨基酸。
在一方面，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且包含成熟多肽长度的至少99％，如SEQ ID NO:43的至少975个氨基酸、SEQ ID NO:46的至少1004个氨基酸、SEQ ID NO:49的至少988个氨基酸、SEQ ID NO:52的至少973个氨基酸、SEQ ID NO:55的至少988个氨基酸、SEQID NO:58的至少996个氨基酸、SEQ ID NO:61的至少978个氨基酸、SEQ ID NO:70的至少952个氨基酸、SEQ ID NO:73的至少990个氨基酸、SEQ ID NO:76的至少990个氨基酸或SEQ IDNO:79的至少984个氨基酸。
半乳聚糖酶：术语“半乳聚糖酶”(也称为内切-1,4-β-半乳聚糖酶)意指催化I型阿拉伯半乳聚糖中(1→4)-β-D-半乳糖苷键水解的阿拉伯半乳聚糖内切-β-1,4-半乳聚糖酶(E.C.3.2.1.89)。可以使用由Lever(Analytical Biochemistry[分析生物化学]47,273-279,1972)研发的比色测定通过还原末端来测定半乳聚糖酶活性。半乳聚糖酶产生还原末端糖，其与PAHBAH反应，从而产生颜色的变化，这在用于该测定的条件下与酶活性成比例。可以在如本文所述的半乳聚糖酶测定中找到详细的测定。
本发明的半乳聚糖酶具有SEQ ID NO:3的多肽的半乳聚糖酶活性的至少60％，如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分增加物质的量(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)而修饰的任何物质。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:2的氨基酸-32至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:4的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至318，并且SEQ ID NO:6的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:7的氨基酸1至318。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至326。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:10的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:10的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:12的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:14的氨基酸-35至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:15的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:16的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:18的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:18的氨基酸-31至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:19的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:22的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:22的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:23的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:24的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:26的氨基酸1至516，并且SEQ ID NO:26的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:27的氨基酸1至516。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:28的氨基酸1至524。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:30的氨基酸1至317，并且SEQ ID NO:30的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:31的氨基酸1至317。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:32的氨基酸1至325。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:34的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:34的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:35的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:36的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:38的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:38的氨基酸-31至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:39的氨基酸1至316。在一个替代方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:42的氨基酸1至985，并且SEQ ID NO:42的氨基酸-23至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:43的氨基酸1至985。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015，并且SEQ ID NO:45的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:48的氨基酸1至998，并且SEQ ID NO:48的氨基酸-22至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:49的氨基酸1至998。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:51的氨基酸1至983，并且SEQ ID NO:51的氨基酸-27至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:52的氨基酸1至983。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:54的氨基酸1至998，并且SEQ ID NO:54的氨基酸-22至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:55的氨基酸1至998。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007，并且SEQ ID NO:57的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:60的氨基酸1至988，并且SEQ ID NO:60的氨基酸-23至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:61的氨基酸1至988。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:69的氨基酸1至962，并且SEQ ID NO:69的氨基酸-21至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:70的氨基酸1至962。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000，并且SEQ ID NO:72的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000，并且SEQ ID NO:75的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:78的氨基酸1至994，并且SEQ ID NO:78的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:79的氨基酸1至994。
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
营养素消化率：术语“营养素消化率”意指从胃肠道或胃肠道的指定区段(例如小肠)处消失的营养素的分数。营养素消化率可以测量为给予受试者的营养素与受试者粪便中所排出来的营养素之间的差值、或给予受试者的营养素与保留在胃肠道指定区段(例如回肠)上的消化物中的营养素之间的差值。
可以通过以下方式测量如本文所用的营养素消化率：在一段时间内营养素的摄入与通过排泄物的总收集获得的排泄的营养素之间的差值；或者使用惰性标记物，该惰性标记物不被动物吸收并且允许研究人员计算在整个胃肠道或胃肠道的区段中消失的营养素的量。这种惰性标记物可以是二氧化钛、氧化铬或酸不溶性灰分。消化率可以表示为营养素在饲料中的百分比，或表示为可消化的营养素的质量单位/饲料中的营养素的质量单位。如本文所用的营养素消化率涵盖淀粉消化率、脂肪消化率、蛋白质消化率和氨基酸消化率。
如本文所用的能量消化率意指所消耗的饲料总能量减去粪便的总能量，或所消耗的饲料总能量减去动物胃肠道指定区段(例如回肠)上的剩余消化物的总能量。如本文所用的代谢能是指表观代谢能，并且意指所消耗的饲料总能量减去粪便、尿和消化的气体产物中包含的总能量。能量消化率和代谢能可以测量为总能量的摄入与粪便中排泄的或胃肠道指定区段中存在的消化物中的总能量之间的差值，其使用与测量营养素消化率相同的方法，针对氮排泄进行适当校正以计算饲料的代谢能。
有效地连接：术语“有效地连接”意指这样一种配置，在该配置中，一个控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，这样使得该控制序列指导该编码序列的表达。
每kg豆粕释放x g半乳糖：术语“每kg豆粕释放x g半乳糖”意指在豆粕与酶一起孵育后释放到上清液中的半乳糖(以克计)的量。出于本发明的目的，当如本文的半乳糖SBM测定中所述，在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时测定每kg豆粕的半乳糖释放。
在一个更详细的实施例中，从研磨至0.5mm粒度的豆粕和0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 6.5±0.05)中制备10w/v％豆粕浆料。将含10w/v％豆粕浆料的孵育容器在搅拌下加热至40℃±2℃的稳定温度。当达到稳定温度时，将六种D-(+)-半乳糖标准品添加到孵育容器中，使得容器内浓度为5mg、2.5mg、1.25mg、0.625mg、0.313mg和0.157mg半乳糖/mL孵育体积。每种标准品一式两份地孵育。然后将稀释的酶以达到其所需浓度(以mg EP/kg豆粕计)所需的体积添加到它们各自的孵育容器中。每种酶处理一式三份地孵育。另外，包括两倍三个作为空白处理的没有标准品或酶处理的孵育容器以获得豆粕浆料中的基线半乳糖浓度。将孵育容器在搅拌下在40℃±2℃下孵育2小时。在孵育后，将容器在5℃下以1500g离心15分钟。然后在基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名称K-RAFGA)的测定中分析上清液，然后如本文的半乳糖SBM测定中所述计算半乳糖的浓度。
植物基材料：术语“植物基材料”意指植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科(Caesalpinioideae)或含羞草亚科(Mimosoideae)或蝶形花亚科(Papilionoideae)，或更优选来自菜豆族(Phaseoleae)、鹰嘴豆族(Cicereae)、染料木族(Genisteae)、蚕豆族(Fabeae)、黄檀族(Dalbergieae)或菜豆族(Phaseoleae)。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目(Brassicales)，如十字花科，优选芸薹族(Brassiceae)，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆(slimjim bean)、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性程度。使用6.1.0版。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长的同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人,2000，同上)(优选3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性程度。使用6.1.0版。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长的同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：
(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指具有从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的一个或多个(例如，若干个)核苷酸的多核苷酸；其中该子序列编码β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的片段。
基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％和至多0.5％的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。例如，这可以通过采用熟知的重组方法或采用经典的纯化方法制备多肽来实现。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(若干个)位置包含改变(即，一个或多个(若干个)氨基酸残基的取代、插入和/或缺失)的具有半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸置换占用某一位置的氨基酸；缺失意指去除占用某一位置的氨基酸；并且插入意指邻近占据某一位置的氨基酸添加1-3个氨基酸。在一方面，本发明的半乳聚糖酶变体具有SEQ ID NO:3的多肽的半乳聚糖酶活性的至少60％，如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。在一方面，本发明的β-半乳糖苷酶变体具有SEQ ID NO:43的多肽的β-半乳糖苷酶活性的至少60％，如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。
命名法
出于本发明的目的，命名[Y/F]意指在此位置的氨基酸可以是酪氨酸(Try，Y)或苯丙氨酸(Phe，F)。同样，命名[V/G/A/I]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val，V)、甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)或异亮氨酸(Ile，I)，对于如本文所述的其他组合，依次类推。除非进一步另有限制，氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
具体实施方式
β-半乳糖苷酶是水解存在于例如豆科植物、蔬菜、谷粒、谷物等中的β-D-半乳糖苷(如乳糖、寡糖、糖脂和糖蛋白)中的末端非还原β-D-半乳糖残基的糖苷水解酶。半乳聚糖酶是水解I型阿拉伯半乳聚糖中的内切半乳糖苷键的糖苷水解酶。
诸位发明人已经发现，来自糖苷水解酶家族35(本文中称为GH35)的β-半乳糖苷酶与一种或多种GH53半乳聚糖酶的组合在通过降解豆科植物(如大豆)的果胶中发现的半乳聚糖聚合物来释放半乳糖方面令人惊讶地好。使用单一酶类不会导致半乳糖的显著释放。
半乳聚糖的降解可以测量为当例如用GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶处理豆粕时释放到上清液中的半乳糖的量。增加的溶解量将导致更多的半乳糖被释放，这可以使用例如如本文所述的半乳糖SBM定方法来检测。
包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物
因此，在第一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在一个另外的实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科曲霉科。
在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个优选的实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和K[Y/F][Y/S]ETK(SEQID NO:81)。
在一个另外的实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科(Paenibacillaceae)。
在另一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中：
(a)该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)；并且
(b)当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个另外的实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中：
(a)该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)；并且
(b)当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个另外的实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中：
(a)该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)；
(b)该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)；并且
(c)当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个另外的实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
并且其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
并且其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
并且其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
并且其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，和(b)由围绕核心的一个或多个层组成的包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(b)包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至318或由其组成的多肽；
(c)包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(d)包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(e)包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(f)包含SEQ ID NO:23的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(g)包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至516或由其组成的多肽；
(h)包含SEQ ID NO:31的氨基酸1至317或由其组成的多肽；
(i)包含SEQ ID NO:35的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(j)包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或由其组成的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸取代，优选保守取代；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段；
并且其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)包含SEQ ID NO:43的氨基酸1至985或由其组成的多肽；
(b)包含SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015或由其组成的多肽；
(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸1至998或由其组成的多肽；
(d)包含SEQ ID NO:52的氨基酸1至983或由其组成的多肽；
(e)包含SEQ ID NO:55的氨基酸1至998或由其组成的多肽；
(f)包含SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007或由其组成的多肽；
(g)包含SEQ ID NO:61的氨基酸1至988或由其组成的多肽；
(h)包含SEQ ID NO:70的氨基酸1至962或由其组成的多肽；
(i)包含SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000或由其组成的多肽；
(j)包含SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000或由其组成的多肽；
(k)包含SEQ ID NO:79的氨基酸1至994或由其组成的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸取代，优选保守取代；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；以及
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在第一方面的任何部分的一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第一方面的任何部分的一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科曲霉科。
在第一方面的任何部分的一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第一方面的任何部分的一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
组合
本发明的第一方面的具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的特定组合如下。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ IDNO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ IDNO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:43的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ IDNO:46的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQID NO:49的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:52的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:55的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:58的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:61的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:70的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:73的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:76的GH35多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:79的GH35多肽。
在一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
具有半乳聚糖酶活性的多肽
在第二方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少82％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:2的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:3具有至少82％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:3具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:4；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少82％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:3的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:3中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
这些氨基酸改变可以具有微小性质，即不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；通常为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化的小延伸。
保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979在The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中进行了描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。
可替代地，这些氨基酸改变具有这样一种性质，使得多肽的物理化学性质发生改变。例如，氨基酸改变可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。
可以根据本领域已知的程序(如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085))来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的β-半乳糖苷酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序是如由以下文献披露的那些：Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625。其他可使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量自动化筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的诱变多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可以从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并且使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许迅速确定多肽中个体氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的一个区域在另一种多肽的一个区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明的多核苷酸融合而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可以进一步包含两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割而释放这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；and Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构，功能与遗传]6:240-248；and Stevens,2003,DrugDiscovery World[世界药物发现]4:35-48。
碳水化合物分子通常在翻译后修饰过程中附接至来自真菌来源的多肽。为了辅助质谱分析，该多肽可以用内切糖苷酶孵育以使各N-连接的位置去糖基化。对于每个去糖基化的N-连接位点，一个N-乙酰己糖胺仍然在该蛋白质主链上。
在一个实施例中，第二方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第三方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:6的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至318或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:7具有至少83％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:7具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:7相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:8相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:8；包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至318或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至326或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:7的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:7中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:7中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:7中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:7中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:7中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:7中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第三方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第四方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:10的成熟多肽具有至少99.0％(例如，至少99.3％、至少99.6％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:10的成熟多肽相差多达3个氨基酸(例如，1、2或3个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:11具有至少99.0％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少99.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少99.6％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:11相差多达3个氨基酸(例如，1、2或3个氨基酸)。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:12相差多达3个氨基酸(例如，1、2或3个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:12；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.0％(例如，至少99.3％、至少99.6％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:11的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:11中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过3，例如1、2或3。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:11中的取代、缺失和/或插入的数目不超过3，例如1、2或3。在一个另外的实施例中，在SEQ IDNO:11中的取代的数目不超过3，例如1、2或3。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:11中的保守取代的数目不超过3，例如1、2或3。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第四方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第五方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％或至少99.6％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:15具有至少96.4％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少96.7％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.6％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:15相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:16相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:16；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％或至少99.6％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:15的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过11，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:15中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:15中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第五方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第六方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:18的成熟多肽具有至少84％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:18的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:19具有至少84％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:19具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:19相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:20相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:20；包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第六面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少84％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:19的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:19中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:19中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:19中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:19中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:19中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:19中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第六方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第七方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:22的成熟多肽具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％或至少99.6％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:22的成熟多肽相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:22的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:22的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:23具有至少96.4％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少96.7％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.3％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.6％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:23相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:24相差多达11个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:24；包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:23的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％或至少99.6％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:23的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:23中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过11，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:23中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:23中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:23中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第七方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第八方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:26的成熟多肽具有至少86％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:26的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:26的氨基酸1至516或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:27具有至少86％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:27相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:28相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:28；包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至516或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:28的氨基酸1至524或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少86％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:27的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:27中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:27中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第八方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第九方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:30的成熟多肽具有至少99.3％(例如，至少99.6％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:30的成熟多肽相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:30的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸1至317或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:31具有至少99.3％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:31具有至少99.6％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:31相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:32相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:32；包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸1至317或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:32的氨基酸1至325或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:31的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:31中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在另一个实施例中，在SEQ IDNO:31中的取代、缺失和/或插入的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:31中的取代的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:31中的保守取代的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第九方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第十方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:34的成熟多肽具有至少99.3％(例如，至少99.6％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:34的成熟多肽相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:34的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:35具有至少99.3％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:35具有至少99.6％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:35相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:36相差多达2个氨基酸(例如，1或2个氨基酸)。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:36；包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:35的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:36的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:35的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:35中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在另一个实施例中，在SEQ IDNO:35中的取代、缺失和/或插入的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:35中的取代的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:35中的保守取代的数目不超过2个氨基酸，例如1或2。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
在第十一方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:38的成熟多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:38的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:38的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:38的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:39具有至少83％的序列同一性的具有半乳聚糖酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:39具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:39相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:40相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:40；包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:39的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:39中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:39中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:39中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十一方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
具有β-半乳糖苷酶活性的多肽
在第十二方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:42的成熟多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:42的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:42的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至985或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:43具有至少80％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:43具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:43具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:43具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:43相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:43的氨基酸1至985或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:43的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:43中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:43中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:43中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:43中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:43中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十二方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十三方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:45的成熟多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:45的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:45的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:46具有至少83％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:46具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:46具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:46具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:46相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:44的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:46的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:46中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:46中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:46中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:46中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:46中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十三方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十四方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:48的成熟多肽具有至少96.4％(例如，至少96.6％、至少96.8％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:48的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1与38个之间的氨基酸，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:48的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:48的氨基酸1至998或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:49具有至少96.4％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少96.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少96.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少97.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少97.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少97.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少97.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少97.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少98.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少98.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少98.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:49具有至少98.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少98.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少99.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少99.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少99.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少99.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:49具有至少99.8％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:49相差多达38个氨基酸，例如1与38个之间的氨基酸，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:49的氨基酸1至998或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:47的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少96.4％(例如，至少96.6％、至少96.8％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:49的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:49中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过38，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与38之间，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:49中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:49中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:49中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:49中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十四方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十五方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:51的成熟多肽具有至少92％(例如，至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:51的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:51的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:51的氨基酸1至983或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:52具有至少92％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:52具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:52具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:52相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:52的氨基酸1至983或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:50的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少892％(例如，至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:52的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:52中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:52中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:52中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:52中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:52中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十五方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十六方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:54的成熟多肽具有至少99.7％(例如，至少99.8％、至少99.9％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:54的成熟多肽相差多达3个氨基酸或1、2或3个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:54的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:54的氨基酸1至998或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:55具有至少99.7％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:55具有至少99.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:55具有至少99.9％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:55相差多达3个氨基酸或1、2或3个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:55的氨基酸1至998或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:53的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.7％(例如，至少99.8％、至少99.9％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:55的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:55中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过3个氨基酸或1、2或3。在另一个实施例中，在SEQ IDNO:55中的取代、缺失和/或插入的数目不超过3，例如1、2或3。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:55中的取代的数目不超过3，例如1、2或3。在一个另外的实施例中，在SEQ IDNO:55中的保守取代的数目不超过3，例如1、2或3。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十六方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十七方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:57的成熟多肽具有至少93％(例如，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:57的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:57的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:58具有至少93％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:58具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:58具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:58具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:58具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:58具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:58具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:58相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:56的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少93％(例如，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:58的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:58中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:58中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:58中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:58中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:58中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十七方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十八方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:60的成熟多肽具有至少85％(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:60的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:60的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:60的氨基酸1至988或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:61具有至少85％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:61具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:61具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:61具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:61相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:61的氨基酸1至988或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:59的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少85％(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:61的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:61中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:61中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:61中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:61中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:61中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:61中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十八方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第十九方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:69的成熟多肽具有至少95.5％(例如，至少96.0％、至少96.5％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:69的成熟多肽相差多达43个氨基酸，例如1与43个之间的氨基酸，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:69的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:69的氨基酸1至962或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:70具有至少95.5％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少96.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少96.5％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少97.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少97.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少97.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少97.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少97.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少98.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少98.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少98.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:70具有至少98.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少98.8％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少99.0％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少99.2％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少99.4％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少99.6％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:70具有至少99.8％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:70相差多达43个氨基酸，例如1与43个之间的氨基酸，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41或43个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:70的氨基酸1至962或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:68的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少95.5％(例如，至少96.0％、至少96.5％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:70的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:70中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过43，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:70中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与43之间，如1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:70中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQID NO:70中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:70中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:70中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十九方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)。
在第二十方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:72的成熟多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:72的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:72的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:73具有至少80％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:73具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:73具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:73具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:73相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:71的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:73的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:73中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:73中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:73中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:73中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:73中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:73中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
在第二十一方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:75的成熟多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)的序列同一性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:75的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:75的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:76具有至少80％的序列同一性的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少85％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少86％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少87％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少88％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:76具有至少89％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少90％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少91％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少92％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少93％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少94％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少95％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少96％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少97％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:76具有至少98％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:76具有至少99％的序列同一性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:76相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:74的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的序列同一性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:76的变体，这些变体在一个或多个(例如，若干个)位置包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ IDNO:76中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过50，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:76中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目在1与50之间，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:76中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:76中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:76中的取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:76中的保守取代的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十一方面的多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ IDNO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。
具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的多肽的来源
本发明的具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面，获得自给定来源的多肽被分泌到细胞外。
具有半乳聚糖酶活性的多肽是细菌多肽，优选来自厚壁菌门或更优选来自杆菌纲。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽来自芽孢杆菌目的细菌，或来自类芽孢杆菌科，或来自柯恩氏菌属或来自种柯恩氏菌属物种-60555、解木聚糖柯恩氏菌或光滑柯恩氏菌。在另一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽来自芽孢杆菌目的细菌，或来自类芽孢杆菌科，或来自类芽孢杆菌属或来自种冻原类芽孢杆菌、巴其诺类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-18179、皮奥利亚类芽孢杆菌或食木糖类芽孢杆菌。
具有β-半乳糖苷酶活性的多肽是真菌多肽，优选来自子囊菌门或更优选来自散囊菌纲(Eurotiomycetes)或座囊菌纲(Dothideomycetes)。在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的多肽来自散囊菌目的真菌，或来自曲霉科，或来自钩囊菌属(Hamigera)或来自种副榛色钩囊菌。在一个实施例中，该多肽来自散囊菌目的真菌，或来自曲霉科，或来自曲霉属或来自种爪甲曲霉、溜曲霉、米曲霉、肉色曲霉、赭曲霉、文氏曲霉或迟缓曲霉。在一个实施例中，该多肽来自格孢腔目的真菌，或来自孢腔菌科，或来自弯孢属或来自种穗状弯孢霉。在一个实施例中，该多肽来自散囊菌目的真菌，或来自曲霉科，或来自青霉属或来自种檞皮素青霉或简青霉。
应理解的是对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学的等效物(equivalent)，例如无性型(anamorph)，而与他们已知的种名无关。本领域的技术人员将容易地识别适当等效物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于直接地从自然生活环境分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员所知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989，同上)分离或克隆多核苷酸。
包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的液体配制品
在第十九方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；以及
(C)水。
在第十九方面的一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)20％至80％w/w的多元醇；以及
(D)水。
在第十九方面的一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；以及
(D)水。
在第十九方面的一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)20％至80％w/w的多元醇；
(D)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；以及
(E)水。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)，并且该GH35多肽包含基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F(SEQ ID NO:80)和/或基序K[Y/F][Y/S]ETK(SEQ ID NO:81)。在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段；
并且该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类科曲霉科。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g(如至少13g、如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种多元醇，优选选自由甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)组成的组，更优选选自由甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)或其任何组合组成的组的多元醇。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇。在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w防腐剂或最优选0.1％至0.5％w/w防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至2.0％w/w防腐剂(即防腐剂的总量)，优选0.02％至1.5％w/w防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w防腐剂或最优选0.1％至0.5％w/w防腐剂，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在第九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至25％w/w具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，优选0.05％至20％w/w具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，更优选0.2％至15％w/w具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，更优选0.5％至15％具有β-半乳糖苷酶活性的多肽或最优选1.0％至10％w/w具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。
在第九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至25％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，优选0.05％至20％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，更优选0.2％至15％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，更优选0.5％至15％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽或最优选1.0％至10％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第十九方面的任何部分的一个实施例中，该液体配制品一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属物种、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
改善动物性能的方法
在第二十方面，本发明涉及改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一只或多只动物施用本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如第二十方面所述的液体配制品。
本发明的第二十方面还涉及改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一只或多只动物施用动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个实施例中，动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种氨基酸或其任何组合。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十方面还涉及改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一只或多只动物施用动物饲料，该动物饲料包含本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”和植物基材料的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个优选的实施例中，该动物饲料已经被颗粒化。
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
在一个实施例中，该性能参数选自由以下组成的列表：体重增加(BWG)、欧洲生产效率因子(EPEF)和饲料转化率(FCR)。
释放半乳糖的方法
在第二十一方面，本发明涉及从植物基材料中释放半乳糖的方法，该方法包括用本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物处理植物基材料。在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如第二十方面所述的液体配制品。
本发明的第二十一方面还涉及从植物基材料中释放半乳糖的方法，该方法包括用动物饲料添加剂处理植物基材料，该动物饲料添加剂包含本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种氨基酸或其任何组合。在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
用于改善动物饲料的营养价值的方法
术语改善动物饲料的营养价值意指提高饲料中营养素的可利用性。营养价值特别是指改善非淀粉多糖(NSP)部分(如细胞壁果胶网络中的半乳聚糖多糖)的溶解和降解，从而增加可被动物利用的释放的半乳糖的量。因此，改善的半乳糖释放将导致饲料的营养价值得到改善，从而导致生长速率和/或体重增加和/或饲料转化(即相对于体重增加的饲料摄取量)增加。
在第二十二方面，本发明涉及用于改善动物饲料的营养价值的方法，该方法包括用本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物处理动物饲料。在一个实施例中，该动物饲料包含来自分类亚纲蔷薇分支的植物基材料。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如第二十方面所述的液体配制品。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十二方面还涉及用于改善动物饲料的营养价值的方法，该方法包括用动物饲料添加剂处理动物饲料，该动物饲料添加剂包含本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个实施例中，该动物饲料包含来自分类亚纲蔷薇分支的植物基材料。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
在一个优选的实施例中，该动物饲料已经被颗粒化。该动物饲料可以在颗粒化步骤之前用本发明的酶处理或在颗粒化步骤之后喷洒。
用于降低动物饲料的抗营养作用的方法
后肠中过量的寡糖可能由于肠胃气胀产生而导致抗营养作用。通过减少寡糖发酵的量，可以降低一些动物饲料的抗营养作用，从而改善肠道和动物健康。
在第二十三方面，本发明涉及用于改善动物饲料的营养价值的方法，该方法包括用本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物处理动物饲料。在一个实施例中，该动物饲料包含来自分类亚纲蔷薇分支的植物基材料。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如第二十方面所述的液体配制品。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十三方面还涉及用于改善动物饲料的营养价值的方法，该方法包括用动物饲料添加剂处理动物饲料，该动物饲料添加剂包含本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物。在一个实施例中，该动物饲料包含来自分类亚纲蔷薇分支的植物基材料。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
在一个优选的实施例中，该动物饲料已经被颗粒化。该动物饲料可以在颗粒化步骤之前用本发明的酶处理或在颗粒化步骤之后喷洒。
制备动物饲料的方法
在第二十四方面，本发明涉及制备动物饲料的方法，该方法包括将本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物与植物基材料混合。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十四方面还涉及制备动物饲料的方法，该方法包括将本文(如在与“包含GH35β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物”相关的部分或关于“组合”的部分中)定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任何实施例的组合物与植物基材料混合。在一个实施例中，该动物饲料包含来自分类亚纲蔷薇分支的植物基材料。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如第二十方面所述的液体配制品。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的配制剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种如本文定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。在一方面，该植物基材料来自分类目豆目，如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
在一个优选的实施例中，该动物饲料已经被颗粒化。该动物饲料可以在颗粒化步骤之前用本发明的酶处理或在颗粒化步骤之后喷洒。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明多肽的分离的多核苷酸。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的并且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],Academic Press[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以克隆自芽孢杆菌属的菌株或相关有机体，并且因此，例如可以是该多核苷酸多肽编码区的等位基因变体或物种变体。
编码本发明多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似于”该多肽是指该多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，其包含有效地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，该一个或多个控制序列指导该编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可以用许多方式操作该多核苷酸以便于多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体以前操纵多核苷酸可以是令人希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域已知的。
该控制序列可以是启动子，即被宿主细胞识别以对编码本发明多肽的多核苷酸进行表达的多核苷酸。该启动子含有转录控制序列，其介导该多肽的表达。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型及杂合型启动子，并且可以是由编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于指导本发明核酸构建体在细菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下基因获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。另外的启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94中的"Useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]"；以及Sambrook等人,1989，同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于指导本发明核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下的基因获得的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(达莉亚)(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(奎恩)(WO00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉半乳聚糖酶I、里氏木霉半乳聚糖酶II、里氏木霉半乳聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子连同NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子描述于美国专利号6,011,147中。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)以及酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶。Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
该控制序列也可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子有效地连接至编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在该宿主细胞中起作用的任何终止子都可以用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉半乳聚糖酶I、里氏木霉半乳聚糖酶II、里氏木霉半乳聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3磷酸脱氢酶。Romanos等人,1992(同上)描述了酵母宿主细胞的其他有用终止子。
该控制序列也可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区，它增加该基因的表达。
适合的mRNA稳定子区的实例从以下基因获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
该控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列有效地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中起作用的任何前导序列。
丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
该控制序列也可以是聚腺苷酸化序列，一种有效地连接至多核苷酸的3'-末端的序列，并且当转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加到转录的mRNA的信号。可以使用在宿主细胞中起作用的任何聚腺苷酸化序列。
丝状真菌宿主细胞的优选聚腺苷酸化序列从以下的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
Guo和Sherman,1995,Mol.Cellular Biol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述了酵母宿主细胞的有用的聚腺苷酸化序列。
该控制序列也可以是编码与多肽的N-端连接并指导该多肽进入细胞的分泌途径的信号肽的信号肽编码区。该多核苷酸的编码序列的5’-端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码该多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’-端可以含有对编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列不天然地含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌属NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA。Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述了另外的信号肽。
丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。Romanos等人,1992(同上)描述了其他的有用的信号肽编码序列。
该控制序列也可以是编码位于多肽的N-末端处的前肽的前肽编码序列。生成的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可以通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可能令人希望的是添加调节序列，这些调节序列调节相对于宿主细胞的生长的该多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac以及trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码该多肽的多核苷酸将与调控序列有效地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，其可以包括一个或多个便利的限制性酶切位点以允许在此类位点插入或取代编码该多肽的多核苷酸。可替代地，该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，使得该编码序列与用于表达的适当控制序列有效地连接。
该重组表达载体可以是可方便地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将通常取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是线状或闭合的环状质粒。
该载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。该载体可以含有用于确保自我复制的任何装置。可替代地，该载体可以是这样一种载体，当它被引入宿主细胞中时，被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
该载体优选地含有一个或多个选择性标记，这些标记容许容易地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等。选择性标记是这样一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因，或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1以及URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等效物。优选的用于在曲霉属细胞中使用的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。优选的用于在木霉属细胞中使用的是adeA、adeB、amdS、hph和pyrG基因。
选择性标记可以是如在WO 2010/039889中描述的双选择性标记系统。在一方面，该双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
该载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞基因组中或允许载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可以含有用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置整合的可能性，这些整合元件应含有足够数量的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，其与相应的靶序列具有高度的序列同一性以增强同源重组的可能性。这些整合元件可以是与宿主细胞基因组中的靶序列同源的任何序列。此外，这些整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一方面，该载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
对于自主复制，该载体可以进一步含有使载体能够在所讨论的宿主细胞中自主地进行复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1的复制起点。
用于在酵母宿主细胞中使用的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合以及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可以将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入到宿主细胞中以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989，同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，其包含有效地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
该宿主细胞可以是在本发明多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单孢菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌、化脓性链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)或转导(参见例如，Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
该宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
该宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门、担子菌门、壶菌门和接合菌门以及卵菌门和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在Ainsworthand Bisby’s Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby的真菌大词典]，第8版，1995，国际CAB(CAB International)，大学出版社，剑桥，英国中定义的)。
真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目)、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲)的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门和卵菌门的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌属(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporiummerdarium)、毡金孢子菌、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、杆孢状镰孢、禾谷镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。
真菌细胞能以本身已知的方式的通过涉及原生质体形成、原生质体的转化以及细胞壁的再生的过程进行转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023，Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述了用于转化镰孢属物种的适合方法。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.[学术出版社有限公司],纽约；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；并且任选地(b)回收该多肽。在一方面，该细胞是柯恩氏菌属细胞。在另一方面，该细胞是柯恩氏菌属物种-60555细胞。在一个另外的方面，该细胞是解木聚糖柯恩氏菌细胞。在一个另外的方面，该细胞是光滑柯恩氏菌细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属细胞。在另一方面，该细胞是冻原类芽孢杆菌细胞。在一个另外的方面，该细胞是巴其诺类芽孢杆菌细胞。在另一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62603细胞。在一个另外的方面，该细胞是解木聚糖类芽孢杆菌细胞。在另一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-18179细胞。在一个另外的方面，该细胞是皮奥利亚类芽孢杆菌细胞。在另一方面，该细胞是食木糖类芽孢杆菌细胞。
在一方面，该细胞是钩囊菌属细胞。在另一方面，该细胞是副榛色钩囊菌细胞。在一方面，该细胞是曲霉属细胞。在另一方面，该细胞是爪甲曲霉细胞。在一个另外的方面，该细胞是溜曲霉细胞。在另一方面，该细胞是米曲霉细胞。在一个另外的方面，该细胞是肉色曲霉细胞。在一方面，该细胞是弯孢霉细胞。在另一方面，该细胞是穗状弯孢霉细胞。在一方面，该细胞是青霉属细胞。在另一方面，该细胞是檞皮素青霉细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；并且任选地(b)回收该多肽。
这些宿主细胞是在适合于使用本领域已知的方法产生该多肽的营养培养基中培养的。例如，可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵罐中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在适合的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果该多肽被分泌到营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果该多肽不分泌，那么其可以从细胞裂解液中回收。
可以使用本领域已知的对于这些多肽是特异性的方法来检测该多肽。这些检测方法包括但不限于特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定该多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收该多肽。例如，可以通过常规程序(包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀)从营养培养基中回收该多肽。在一方面，回收包含该多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化该多肽，包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法和尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦电泳)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)，以便获得基本上纯的多肽。
在一个替代方面，不回收该多肽，而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作该多肽的来源。
植物中的产生
本发明还涉及分离的植物，例如转基因植物、植物部分或植物细胞，其包含本发明的多肽，从而以可回收的量表达和产生多肽或结构域。可以从该植物或植物部分回收该多肽或结构域。可替代地，含有该多肽或结构域的植物或植物部分可以按原样用于改善食品或饲料的质量，例如改善营养价值、可口性及流变学特性，或破坏抗营养因素。
转基因植物可以是双子叶的(双子叶植物)或单子叶的(单子叶植物)。单子叶植物的实例是草，如草地早熟禾(蓝草，早熟禾属)；饲用草，如羊茅属(Festuca)、黑麦草属(Lolium)；温带草，如翦股颖属(Agrostis)；以及谷物，例如小麦、燕麦、黑麦、大麦、稻、高粱和玉蜀黍(玉米)。
双子叶植物的实例是烟草、豆科植物(如羽扇豆、马铃薯、糖甜菜、豌豆、菜豆和大豆)以及十字花科植物(十字花科)(如花椰菜、油菜籽和紧密相关的模式生物体拟南芥)。
植物部分的实例是茎、愈伤组织、叶、根、果实、种子和块茎以及包含这些部分的独立组织，例如表皮、叶肉、薄壁组织、维管组织、分生组织。
植物细胞和特定的植物细胞区室(如叶绿体、质外体、线粒体、液泡、过氧化物酶体和细胞质)也被认为是植物部分。
同样包含于本发明范围内的是此类植物、植物部分以及植物细胞的后代。
可以根据本领域已知方法构建表达该多肽或结构域的转基因植物或植物细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽或结构域的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽或结构域的条件下培养转基因植物或植物细胞，该转基因植物或植物细胞包含编码该多肽或结构域的多核苷酸；并且(b)回收该多肽或结构域。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，该组合物是含有有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文所用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。通常，该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一个实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在一个具体的实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一方面，该组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨糖醇、氯化钠、山梨酸钾以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。通常，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)在允许蛋白质合成的碳限制条件下孵育生长到饱和之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物通常是液体，但是可以含有不溶性组分，如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以除去不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO2010/096673中所述的方法来产生。
酶组合物
优选地，这些组合物富含本发明第一方面的多肽。术语“富含(enriched)”表示该组合物的β-半乳糖苷酶活性和半乳聚糖酶活性例如以至少1.1(如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少3.0、至少4.0、至少5.0、至少10)的富集因子增加。在一个实施例中，该组合物包含本发明第一方面的多肽和一种或多种配制剂，如在下文“配制剂”部分中所述。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第二方面的多肽(SEQ ID NO:3)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第三方面的多肽(SEQ ID NO:7)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第四方面的多肽(SEQ ID NO:11)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第五方面的多肽(SEQ ID NO:15)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第六方面的多肽(SEQ ID NO:19)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第七方面的多肽(SEQ ID NO:23)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第八方面的多肽(SEQ ID NO:27)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第九方面的多肽(SEQ ID NO:31)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第十方面的多肽(SEQ ID NO:35)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明第十一方面的多肽(SEQ ID NO:39)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十二方面的多肽(SEQ IDNO:43)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十三方面的多肽(SEQ IDNO:46)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十四方面的多肽(SEQ IDNO:49)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十五方面的多肽(SEQ IDNO:52)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十六方面的多肽(SEQ IDNO:55)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十七方面的多肽(SEQ IDNO:58)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十八方面的多肽(SEQ IDNO:61)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十八方面的多肽(SEQ IDNO:70)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十八方面的多肽(SEQ IDNO:73)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十八方面的多肽(SEQ IDNO:76)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明第十八方面的多肽(SEQ IDNO:79)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
这些组合物可以包含本发明的多肽作为主要酶组分，例如单组分组合物。这样的组合物可以进一步包含配制剂，如在下文“配制剂”部分中所述。可替代地，这些组合物可以包含多种酶活性，如一种或多种(例如，若干种)选自下组的酶，该组由以下组成：植酸酶、半乳聚糖酶、半乳聚糖酶、蛋白酶、磷脂酶、葡糖苷酸酶、溶血磷脂酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶、β-木糖苷酶、内切-1,4-β-半乳聚糖酶乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-糖苷酶、支链淀粉酶或其任何混合物。
目前考虑，按以下量(剂量范围)中的一个或多个使用半乳聚糖酶(例如在饲料中)：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围都是每kg底物中半乳聚糖酶蛋白的mg数(ppm)。目前考虑，按以下量(剂量范围)中的一个或多个施用β-半乳糖苷酶(例如在饲料中)：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围都是每kg底物中β-半乳糖苷酶蛋白的mg数(ppm)。进一步考虑，半乳聚糖酶与β-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶。
在一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽的组合物，其中该GH53多肽以每千克组合物0.01mg与100g之间的多肽(酶蛋白)的剂量给料并且选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至少0.02mg的多肽(酶蛋白)，如每千克组合物至少0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g或75g。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至多75g的多肽，如每千克组合物至多50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物0.01mg与75g之间的多肽(酶蛋白)，如在每千克组合物0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g或50g与每千克组合物50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg之间或其任何组合。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糖糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中，可以使用该组合物：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
在一个实施例中，该组合物是动物饲料添加剂并且进一步包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素(phytogenic)；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
在一个实施例中，该组合物是包含植物基材料和任选地一种或多种选自由以下组成的列表的组分的动物饲料：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
在一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有α-半乳糖苷酶活性的多肽(EC 3.2.1.22)的组合物，其中酶的总量以每千克组合物0.01mg与100g之间的多肽(酶蛋白)给料，并且该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至少0.02mg的多肽(酶蛋白)，如每千克组合物至少0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g或75g。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至多75g的多肽，如每千克组合物至多50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物0.01mg与75g之间的多肽(酶蛋白)，如在每千克组合物0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g或50g与每千克组合物50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg之间或其任何组合。
在一个实施例中，半乳聚糖酶与α-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糖糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该组合物包含一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中，可以使用该组合物：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
在一个实施例中，该组合物是动物饲料添加剂并且进一步包含一种或多种选自由以下组成的列表的组分：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
在一个实施例中，该组合物是包含植物基材料和任选地一种或多种选自由以下组成的列表的组分的动物饲料：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
在一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽的颗粒，其中该GH53多肽以每千克组合物0.01mg与100g之间的多肽(酶蛋白)的剂量给料并且选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中，该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在一个实施例中，该颗粒包含每千克组合物至少0.02mg的多肽(酶蛋白)，如每千克组合物至少0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g或75g。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至多75g的多肽，如每千克组合物至多50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物0.01mg与75g之间的多肽(酶蛋白)，如在每千克组合物0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g或50g与每千克组合物50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg之间或其任何组合。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糖糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中，可以使用该颗粒：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
在一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有α-半乳糖苷酶活性的多肽(EC 3.2.1.22)的颗粒，其中酶的总量以每千克组合物0.01mg与100g之间的多肽(酶蛋白)给料，并且该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
在一个实施例中，该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。在一个优选的实施例中，该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。优选的配制品披露在下文的配制品部分中。
在一个实施例中，该颗粒包含每千克组合物至少0.02mg的多肽(酶蛋白)，如每千克组合物至少0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g或75g。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至多75g的多肽，如每千克组合物至多50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物0.01mg与75g之间的多肽(酶蛋白)，如在每千克组合物0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g或50g与每千克组合物50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg之间或其任何组合。
在一个实施例中，半乳聚糖酶与α-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糖糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中，可以使用该颗粒：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
在一方面，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽，其中具有半乳聚糖酶活性的该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；和
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段；以及
(B)水。
在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种多元醇，优选选自由甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)组成的组，更优选选自由甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)或其任何组合组成的组的多元醇。
在一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇。在一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选25％-75％多元醇，更优选30％-70％多元醇，更优选35％-65％多元醇或最优选40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇和丙二醇(MPG)。
在一个实施例中，该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w防腐剂或最优选0.1％至0.5％w/w防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.001％至2.0％w/w防腐剂(即防腐剂的总量)，优选0.02％至1.5％w/w防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w防腐剂或最优选0.1％至0.5％w/w防腐剂，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至25％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，优选0.05％至20％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，更优选0.2％至15％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽，更优选0.5％至15％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽或最优选1.0％至10％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽。
在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该液体配制品包含α-半乳糖苷酶。在一个实施例中，该液体配制品包含α-半乳糖苷酶，其中半乳聚糖酶与α-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶。
在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种益生素。该一种或多种益生素优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
在一个实施例中，可以使用该液体配制品：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
因此，在一个实施例中，本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽(如0.05％至20％w/w，优选0.2％至15％w/w，更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w具有半乳聚糖酶活性的多肽)，其中具有半乳聚糖酶活性的该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少90％或至少95％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；和
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段；以及
(B)20％至80％w/w的多元醇；
(C)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；
(D)任选地0.001％至25％w/w的具有α-半乳糖苷酶活性的多肽(如0.05％至20％w/w，优选0.2％至15％w/w，更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w具有α-半乳糖苷酶活性的多肽)；以及(E)水。
多元醇和防腐剂的类型和量可以如上所述选择。在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种另外的酶，如上述那些。在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种益生素，如上述那些。在一个实施例中，半乳聚糖酶与α-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:α-半乳糖苷酶。
在一个实施例中，可以使用该液体配制品：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
配制品
本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该配制剂可以包括多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是液体组合物，其包含本发明的多肽和一种或多种选自由以下组成的列表的配制剂：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨糖醇。该液体配制品可以喷洒在已经历颗粒化的饲料上，或可以添加到供给动物的饮用水中。
针对固体配制品，该配制品可以例如作为颗粒、喷雾干粉或聚结物(例如如在WO2000/70034中所披露)。配制剂可以包括盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)。
在一个实施例中，该组合物是固体组合物，如喷雾干燥组合物，其包含本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶和一种或多种选自由以下组成的列表的配制剂：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素。在一个优选的实施例中，该配制剂选自一种或多种以下化合物：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。
本发明还涉及包含任选地与一种或多种另外的酶组合的本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。
通常，该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度缩减(size reduction)法、转鼓造粒(drumgranulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；Particle size enlargement[粒度增大]C.E.Capes著；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制品技术，例如：
a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含有酶的颗粒状材料；
b)层状产品，其中酶作为层包衣在预形成的惰性核心粒子周围，其中包含酶的溶液被雾化，通常在流化床装置中，其中预形成的核心粒子被流体化，并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中；
c)吸收的核心粒子，其中不是包衣该酶作为核心周围的层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或颗粒化的(pelletized)产品，其中将含有酶的糊料压成颗粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊料中的热发生，这对酶是有害的；
e)颗粒化的产品，其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献；
f)混合造粒产品，其中将液体添加到例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并附聚，并且粒子将构建，形成包含酶的微粒。这样的方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的一种具体产品中，将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的微粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-微粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
g)粒度缩减，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、颗粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度缩减描述于(Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])；
h)流化床造粒，其涉及将颗粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷洒液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒；
i)这些核心可经受干燥，如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选地含有0.1-10％w/w的水。
该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包含粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
该核心通常作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
在一个实施例中，该核心包含选自下组的材料，该组由以下组成：盐(如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作含水层状硅酸铝)。在一个实施例中，该核心包含粘土矿物质，如高岭石或高岭土。
该核心可以包含惰性粒子，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm，具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以被至少一个包衣包围，例如以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。任选的一个或多个包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣或其他合适的包衣材料。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选地是至少0.1μm厚，具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施例中，该包衣的厚度低于100μm，如低于60μm或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封或封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60％的盐，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm，如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃下在100g水中至少0.1g的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、山梨酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，具体地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如WO 1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719中所述或者是如WO2001/00042中所述的聚合物包衣。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。
该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地，作为盐溶液施加该盐，例如使用流化床。
蜡包衣可以包含按重量计至少60％的蜡，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
蜡的具体实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物脂油如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。
该颗粒可以包含含有本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶的核心、一个或多个盐包衣和一个或多个蜡包衣。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO1997/23606和WO 2016/149636中。
可以产生非粉尘微粒，例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露，并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；具有12至20个碳原子并且存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯和甘油三酯。适合于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
该微粒可以进一步包含一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于更多颗粒中，确保酶的更均匀分布，并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共微粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共微粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
因此，在一个另外的方面，本发明提供了颗粒，其包含：
(a)包含根据本发明的β-半乳糖苷酶的核心，以及
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
因此，在一个另外的方面，本发明提供了颗粒，其包含：
(a)包含根据本发明的半乳聚糖酶的核心，以及
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
因此，在一个另外的方面，本发明提供了颗粒，其包含：
(a)包含根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶的核心，以及
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
植物基材料
在一个实施例中，该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支，如分类目豆目或分类目十字花目。
在一个实施例中，该植物基材料来自豆科，如云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科。在一个实施例中，该植物基材料来自蝶形花亚科，如相思子族(Abreae)或紫穗槐族(Amorpheae)或Bossiaeeae或Brongniartieae或鹰嘴豆族或猪屎豆族(Crotalarieae)或黄檀族或Desmodieae或Dipterygeae或山豆根族(Euchresteae)或蚕豆族或山羊豆族(Galegeae)或染料木族或岩黄耆族(Hedysareae)或Hypocalypteae或木蓝族(Indigofereae)或百脉根族(Loteae)或崖豆族(Millettieae)或Mirbelieae或菜豆族或黄花木族(Podalyrieae)或补骨脂族(Psoraleeae)或洋槐族(Robinieae)或田菁族(Sesbanieae)或槐族(Sophoreae)或斯沃铁豆族(Swartzieae)或野决明族(Thermopsideae)或车轴草族(Trifolieae)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自菜豆族，如Adenodolichos或Alistilus或两型豆属(Amphicarpaea)或Ancistrotropis或土圞儿属(Apios)或虫豆属(Atylosia)或Bionia或Bolusafra或紫铆属(Butea)或木豆属(Cajanus)或毛蔓豆属(Calopogonium)或Camptosema或刀豆属或距瓣豆属(Centrosema)或Cleobulia或蝶豆属(Clitoria)或旋花豆属(Cochlianthus)或螺豆属(Cochliasanthus)或Collaea或Cologania或Condylostylis或克拉豆属(Cratylia)或Cymbosema或Decorsea或Dioclea或Dipogon或Dolichopsis或扁豆属(Dolichos)或山黑豆属(Dumasia)或野扁豆属(Dunbaria)或雀脷珠属(Eriosema)或刺桐属(Erythrina)或千斤拔属(Flemingia)或乳豆属(Galactia)或大豆属(Glycine)或一叶豆属(Hardenbergia)或Helicotropis或珊瑚豌豆属(Kennedia)或扁豆属(Lablab)或Leptospron或大翼豆属(Macroptilium)或硬皮豆属(Macrotyloma)或闭荚藤属(Mastersia)或黎豆属(Mucuna)或Mysanthus或爪哇大豆属(Neonotonia)或茎豆属(Neorautanenia)或Nesphostylis或土黄芪属(Nogra)或拟大豆属(Ophrestia)或Otoptera或Oxyrhynchus或豆薯属(Pachyrhizus)或Paracalyx或菜豆属或苞护豆属(Phylacium)或毒扁豆属(Physostigma)或Pseudeminia或Pseudovigna或四棱豆属(Psophocarpus)或葛藤属(Pueraria)或Ramirezella或Rhodopis或鹿藿属(Rhynchosia)或宿苞豆属(Shuteria)或Sigmoidotropis或华扁豆属(Sinodolichos)或Spathionema或密花豆属(Spatholobus)或楔柱豆属(Sphenostylis)或碧玉藤属(Strongylodon)或Strophostyles或软荚豆属(Teramnus)或琼豆属(Teyleria)或Vandasina或Vatovaea或豇豆属(Vigna)或Wajira。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自大豆属，如种烟豆(Glycine aff.tabacina)或白色大豆(Glycine albicans)或Glycine aphyonota或Glycine arenaria或Glycine argyrea或Glycine canescens或澎湖大豆(Glycineclandestina)或Glycine curvata或Glycine cyrtoloba或扁豆荚大豆(Glycinedolichocarpa)或短剑大豆(Glycine falcata)或Glycine gracei或Glycine hirticaulis或Glycine lactovirens或Glycine latifolia或Glycine latrobeana或Glycinemicrophylla或Glycine peratosa或Glycine pindanica或Glycine pullenii或黄紫大豆(Glycine rubiginosa)或Glycine stenophita或Glycine syndetika或烟豆(Glycinetabacina)或短绒野大豆(Glycine tomentella)或大豆物种T1或大豆物种T5或半野生大豆(Glycine gracilis)或大豆(Glycine max/soy bean)或Glycine max x Glycine soja或野生大豆(Glycine soja/wild soybean)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自木豆属，如种木豆(Cajanus cajan/pigeon pea)、Cajanus cajanifolius和Cajanus scarabaeoide。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自菜豆属，如种尖叶菜豆(Phaseolus acutifolius)(花菜豆(tepary bean))或Phaseolus acutifoliusvar.latifolius或白色菜豆(Phaseolus albescens)或Phaseolus albiflorus或Phaseolus albinervus或Phaseolus altimontanus或Phaseolus amblyosepalus或小叶菜豆(Phaseolus angustissimus)或Phaseolus augusti或Phaseolus bolivianus或Phaseolus campanulatus或英国菜豆(Phaseolus carteri)或Phaseolus chiapasanus或多花菜豆(Phaseolus coccineus/scarlet runner bean)或Phaseolus coccineussubsp.coccineus或Phaseolus coccineus subsp.polyanthus或Phaseoluscostaricensis或白藓菜豆(Phaseolus dasycarpus)或Phaseolus dumosus或Phaseolusesperanzae或Phaseolus esquincensis或Phaseolus filiformis(瘦身豆)或Phaseolusglabellus或Phaseolus gladiolatus或Phaseolus grayanus或Phaseolus hintonii或Phaseolus jaliscanus或Phaseolus juquilensis或疏花菜豆(Phaseolus laxiflorus)或Phaseolus leptostachyus或Phaseolus lignosus或棉豆(Phaseolus lunatus)(利马豆)或Phaseolus macrolepis或Phaseolus maculatifolius或斑点菜豆(Phaseolusmaculatus)(cocolmeca bean)或Phaseolus maculatus subsp.ritensis或Phaseolusmacvaughii或Phaseolus magnilobatus或Phaseolus marechalii或Phaseolusmicranthus或Phaseolus microcarpus或Phaseolus mollis 或花斑菜豆(Phaseolusneglectus)或Phaseolus nelsonii或Phaseolus nodosus 或Phaseolus novoleonensis或Phaseolus oaxacanus或Phaseolus oligospermus或Phaseolus pachyrrhizoides或Phaseolus parvifolius或小型菜豆(Phaseolus parvulus)或少花菜豆(Phaseoluspauciflorus)或Phaseolus pedicellatus或Phaseolus perplexus或Phaseoluspersistentus或Phaseolus plagiocylix或Phaseolus pluriflorus或Phaseoluspolymorphus或Phaseolus polystachios或Phaseolus polystachios subsp.sinuatus或Phaseolus polystachios subsp.smilacifolius或网状菜豆(Phaseolus reticulatus)或圆菜豆(Phaseolus rotundatus)或Phaseolus salicifolius或Phaseolus sonorensis或Phaseolus talamancensis或Phaseolus tenellus或Phaseolus texensis或Phaseolustuerckheimii或寻常菜豆(Phaseolus vulgaris)(四季豆)或Phaseolus vulgarisvar.aborigineus或Phaseolus vulgaris var.nanus或Phaseolus xanthotrichus或Phaseolus xolocotzii或Phaseolus zimapanensis。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自鹰嘴豆族，如鹰嘴豆属，如种Cicer anatolicum或鹰嘴豆(Cicer arietinum/chickpea)或Cicer bijugum或Cicercanariense或Cicer chorassanicum或Cicer cuneatum或Cicer echinospermum或弯梗鹰嘴豆(Cicer flexuosum)或Cicer floribundum或Cicer graecum或Cicer incisum或Cicerisauricum或Cicer judaicum或Cicer kermanense或Cicer macracanthum或鹰嘴豆属亚门(Cicer microphyllum)或Cicer montbretii或Cicer multijugum或Cicer nuristanicum或尖齿鹰嘴豆(Cicer oxyodon)或Cicer pinnatifidum或尖刺鹰嘴豆(Cicer pungens)或Cicer rechingeri或Cicer reticulatum或准噶尔鹰嘴豆(Cicer songaricum)或Cicerspiroceras或Cicer stapfianum或Cicer subaphyllum或Cicer tragacanthoides或Ciceryamashitae
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自染料木族，如Adenocarpus或Anarthrophyllum或Argyrocytisus或银豆属(Argyrolobium)或Calicotome或山雀花属(Chamaecytisus)或Cytisophyllum或金雀花属(Cytisus)或Dichilus或Echinospartum或Erinacea或染料木属(Genista)或Gonocytisus或Hesperolaburnum或金链花属(Laburnum)或Lembotropis或羽扇豆属或Melolobium或Petteria或Podocytisus或Polhillia或Retama或Sellocharis或鹰爪豆属(Spartium)或Stauracanthus或Teline或荆豆属(Ulex)
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自蚕豆族，如山黧豆属(Lathyrus)或扁豆属(Lens)或豌豆属(Pisum)或Vavilovia或蚕豆属(Vicia)。在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自扁豆属(Lens)，如种扁豆(Lens culinaris/lentil)或Lens culinaris subsp.culinaris或Lens culinaris subsp.odemensis或Lensculinaris subsp.tomentosus或霞扁豆(Lens cyanea)或小扁豆(Lens ervoides)或拉氏扁豆(Lens lamottei)或Lens nigricans或东方扁豆(Lens orientalis)(野兵豆)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自蚕豆属，如种Viciagarinensis或Vicia sojakii或Vicia rechingeri或Vicia kurdica或多叶蚕豆(Viciamultijuga)或Vicia akhmaganica或变型蚕豆(Vicia variabilis)或斑叶蚕豆(Viciavariegata)或Vicia persica或Vicia kotschyana或Vicia hirta或Vicia gregaria或Vicia ciceroidea或Vicia cappadocica或巴氏蚕豆(Vicia balansae)或奥谢蚕豆(Viciaaucheri)或蚕豆属物种“telaponensis”或Vicia venulosa或Vicia subvillosa或Viciastenophylla或西库拉蚕豆(Vicia sicula)或Vicia sibthorpii或Vicia semiglabra或Vicia scandens或Vicia pinetorum或Vicia picta或Vicia pectinata或少叶蚕豆(Viciapaucifolia)或巴勒斯坦蚕豆(Vicia palaestina)或Vicia onobrychioides或黄白蚕豆(Vicia ochroleuca)或Vicia nataliae或Vicia montevidensis或Vicia monardii或小花蚕豆(Vicia minutiflora)或曼西蚕豆(Vicia menziesii)或大龙骨蚕豆(Viciamegalotropis)或Vicia malosana或Vicia lunata或白花蚕豆(Vicia leucantha)或宽叶蚕豆(Vicia leavenworthii)或Vicia larissae或伊朗蚕豆(Vicia iranica)或Viciaincana或Vicia hololasia或Vicia glauca或三叶蚕豆(Vicia freyniana)或佛罗里达蚕豆(Vicia floridana)或细叶蚕豆(Vicia filicaulis)或Vicia ferreirensis或Viciaexigua或Vicia dennesiana或塞浦路斯蚕豆(Vicia cypria)或Vicia cretica或新疆蚕豆(Vicia costata)或Vicia claessensii或Vicia chaetocalyx或卡西亚蚕豆(Viciacassia)或Vicia capreolata或凯撒利亚蚕豆(Vicia caesarea)或二年生蚕豆(Viciabiennis)或贝加尔蚕豆(Vicia baicalensis)或Vicia altissima或阿尔卑斯蚕豆(Viciaalpestris)或尖叶蚕豆(Vicia acutifolia)或柔毛蚕豆(Vicia pubescens)或Viciacirrhosa或科氏蚕豆(Vicia koeieana)或北蚕豆(Vicia ramuliflora)或多茎蚕豆(Viciamulticaulis)或小花蚕豆(Vicia parviflora)或Vicia vicioides或细叶蚕豆(Viciatenuifolia)或香蚕豆(Vicia orobus)或黑蚕豆(Vicia nigra)或裂叶蚕豆(Viciaincisa)或Vicia epetiolaris或Vicia crocea或疏花蚕豆(Vicia sparsiflora)或西南蚕豆(Vicia nummularia)或二色蚕豆(Vicia dichroantha)或Vicia cassubica或单花蚕豆(Vicia monantha/bard vetch)或灰蚕豆(Vicia cinerea)或Vicia oroboides或藏南蚕豆(Vicia tibetica)或卡罗莱纳州蚕豆(Vicia caroliniana)(卡罗莱纳州或林生蚕豆(vetch))或Vicia disperma或Vicia esdraelonensis或秀丽蚕豆(Vicia pulchella)或墨西哥蚕豆(Vicia mexicana)或马德拉蚕豆(Vicia leucophaea)或扁平蚕豆(Viciahumilis)或Vicia barbazitae或比利牛斯蚕豆(Vicia pyrenaica)或Vicia qatmensis或宽翼蚕豆(Vicia lathyroides)或尖叶蚕豆(Vicia cuspidata)或Vicia dionysiensis或短小蚕豆(Vicia abbreviata)或蚕豆(Vicia sepium)或Vicia sericocarpa或Vicianoeana或Vicia hyrcanica或杂种蚕豆(Vicia hybrida)或Vicia galeata或Viciaciliatula或Vicia assyriaca或Vicia tigridis或Vicia anatolica或林生蚕豆(Viciasylvatica)或灌丛蚕豆(Vicia dumetorum)或软蚕豆(Vicia mollis)或Viciaaintabensis或Vicia peregrina或黄蚕豆(Vicia lutea/yellow vetch)或大花蚕豆(Vicia grandiflora)或单花蚕豆(Vicia articulata)或美国蚕豆(Vicia americana)或密叶蚕豆(Vicia michauxii)或Vicia vicina或柳叶蚕豆(Vicia venosa)或四籽蚕豆(Vicia tetrasperma)或苦蚕豆(Vicia ervilia)或孟加拉蚕豆(Vicia benghalensis)(紫色或冬季蚕豆)或Vicia angustipinnata或黑龙江蚕豆(Vicia amurensis)或歪头菜(Vicia unijuga)或假香蚕豆(Vicia pseudo-orobus)或豆状蚕豆(Vicia pisiformis)或日本蚕豆(Vicia nipponica)或微黑蚕豆(Vicia nigricans)或线叶蚕豆(Vicialinearifolia)或东方蚕豆(Vicia japonica)或Vicia hirticalycina或Vicia fauriae或朝鲜蚕豆(Vicia chosenensis)或大花蚕豆(Vicia bungei)或二叶蚕豆(Vicia bifolia)或山蚕豆(Vicia amoena)或Vicia montbretii或齿叶蚕豆(Vicia serratifolia)或深裂蚕豆(Vicia paucijuga)或Vicia kalakhensis或约翰尼斯蚕豆(Vicia johannis)或Viciahyaeniscyamus或Vicia galilaea或Vicia eristalioides或Vicia bithynica或Viciamelanops或Vicia ludoviciana或匈牙利蚕豆(Vicia pannonica)或法国蚕豆(Vicianarbonensis)或长柔毛蚕豆(Vicia villosa)或硬毛蚕豆(Vicia hirsuta)或箭舌蚕豆(Vicia sativa/spring vetch)或蚕豆(Vicia faba/broad bean或fava bean)或广布蚕豆(Vicia cracca/bird vetech)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自豌豆属，如种阿比西尼亚豌豆(Pisum abyssinicum/Abyssinian pea)或叶豌豆(Pisum fulvum)或豌豆(Pisumsativum/pea)或Pisum sativum subsp.asiaticum或Pisum sativum subsp.elatius(野豌豆)或Pisum sativum var.pumilio(叙利亚饲料豌豆)或Pisum sativum subsp.jomardii或Pisum sativum subsp.Sativum或Pisum sativum var.arvense或Pisum sativumvar.choresmicum或Pisum sativum var.macrocarpon(雪豌豆)或Pisum sativumvar.ponderosum或Pisum sativum var.tibetanicum或Pisum sativumsubsp.transcaucasicum
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自黄檀族，如Adesmia或田皂角属(Aeschynomene)或Amicia或柯桠树属(Andira)或落花生属(Arachis)或Brya或Bryaspis或Cascaronia或正裂果属(Centrolobium)或Chaetocalyx或Chapmannia或Cranocarpus或Cyclocarpa或黄檀属(Dalbergia)或川续断属(Diphysa)或Discolobium或Etaballia或Fiebrigiella或Fissicalyx或睫苞豆属(Geissaspis)或Geoffroea或Grazielodendron或Humularia或Hymenolobium或Inocarpus或Kotschya或Machaerium或Maraniona或Nissolia或Ormocarpopsis或链荚木属(Ormocarpum)或Paramachaerium或Peltiera或皮克特菊石属(Pictetia)或Platymiscium或Platypodium或Poiretia或紫檀属(Pterocarpus)或Ramorinoa或Riedeliella或Smithia或Soemmeringia或Steinbachiella或柱花草属(Stylosanthes)或蔷薇木属(Tipuana)或Weberbauerella或丁癸草属(Zornia)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的该植物基材料来自落花生属，如种Appressipila(amendoim bravo)或Arachis batizocoi或短柄落花生(Arachisbrevipetiolata)或普通落花生(Arachis burchellii)或Arachis burkartii或Arachiscardenasii或Arachis chiquitana或科伦蒂纳落花生(Arachis correntina)或克鲁兹落花生(Arachis cruziana)或Arachis decora或Arachis diogoi或蔓花生(Arachisduranensis)或Arachis duranensis x Arachis stenosperma或无毛落花生(Arachisglabrata/amendoim-bravo)或Arachis glabrata var.glabrata或Arachis glabratavar.hagenbeckii或Arachis glabrata x Arachis hypogaea或有腺落花生(Arachisglandulifera)或深蓝落花生(Arachis guaranitica)或沼生落花生(Arachis helodes)或赫氏落花生(Arachis hermannii)或霍氏落花生(Arachis hoehnei)或花生(Arachishypogaea/peanut)或Arachis hypogaea subsp.Fastigiata或Arachis hypogaeavar.vulgaris(西班牙花生)或Arachis hypogaea subsp.Hypogaea或Arachis hypogaeavar.hirsuta或Arachis ipaensis或Arachis ipaensis x Arachis magna或Arachiskempff-mercadoi或Arachis kretschmeri或Arachis kuhlmannii或线叶落花生(Arachislinearifolia)或土黄色落花生(Arachis lutescens)或大型落花生(Arachis magna)或大型落花生(Arachis major)或Arachis matiensis或细籽落花生(Arachis microsperma)或山地落花生(Arachis monticola)或沼生落花生(Arachis palustris)或巴拉圭落花生(Arachis paraguariensis)或Arachis paraguariensis subsp.capibarensis或Arachisparaguariensis subsp.paraguariensis或Arachis pflugeae或平托落花生(Arachispintoi)或早熟落花生(Arachis praecox)或小落花生(Arachis pusilla/amendoim decaracar)或匍匐落花生(Arachis repens)或Arachis rigonii或Arachis schinini或Arachis simpsonii或狭叶落花生(Arachis stenophylla)或Arachis stenosperma或Arachis stenosperma x Arachis cardenasii或Arachis sylvestris(amendoim doporco)或Arachis trinitensis或Arachis triseminata或块茎落花生(Arachistuberosa)或强壮落花生(Arachis valida)或Arachis villosa或Arachisvillosulicarpa或威氏落花生(Arachis williamsii)。
在一方面，该植物基材料来自分类目十字花目，如十字花科，优选芸薹族，更优选芸薹属。
在一个实施例中，来自芸薹族的该植物基材料来自芸薹科，如Brassica aucheri、巴利阿里芸薹(Brassica balearica)、Brassica barrelieri、埃塞俄比亚芸薹(Brassicacarinata)(阿比西尼亚芥菜(Abyssinian mustard))、埃塞俄比亚芸薹x甘蓝型油菜(Brassica carinata x Brassica napus)、埃塞俄比亚芸薹x芜菁(Brassica carinata xBrassica rapa)、Brassica cretica、急弯芸薹(Brassica deflexa)、Brassicadesnottesii、Brassica drepanensis、长芸薹(Brassica elongata)、灌木芸薹(Brassicafruticulosa)、Brassica fruticulosa subsp.cossoniana、Brassica fruticulosasubsp.mauritanica、Brassica fruticulosa subsp.rifana、Brassica gravinae、Brassica hilarionis、芸薹属杂交品种、Brassica incana、海岛芸薹(Brassicainsularis)、Brassica insularis subsp.insularis、印度芸薹(Brassica juncea)(印度芥菜)、Brassica juncea var.crassicaulis、Brassica juncea var.gemmifera、Brassicajuncea var.gracilis、Brassica juncea var.juncea、Brassica juncea var.multiceps、Brassica juncea var.multisecta、Brassica juncea var.napiformis(芥菜疙瘩)、Brassica juncea var.rugosa、Brassica juncea var.strumata、Brassica junceavar.subintegrifolia、Brassica juncea var.tumida(榨菜)、Brassica junceavar.utilis、大花芸薹(Brassica macrocarpa)、Brassica maurorum、蒙大纳芸薹(Brassica montana)、油菜(Brassica napus/rape)、Brassica napus subsp.rapifera(瑞典芜菁)、Brassica napus var.napus(一年生油菜)、甘蓝型油菜x芜菁(Brassica napus xBrassica rapa)、黑芥菜(Brassica nigra/black mustard)、Brassica nigravar.abyssinica、甘蓝(Brassica oleracea)、Brassica oleracea var.albiflora、Brassica oleracea var.alboglabra(芥蓝(Chinese kale))、Brassica oleraceavar.botrytis(花椰菜)、Brassica oleracea var.capitata(卷心菜)、Brassica oleraceavar.costata(贝德福德卷心菜(Bedford cabbage))、Brassica oleracea var.gemmifera(球芽甘蓝)、Brassica oleracea var.gongylodes(球茎甘蓝(kohlrabi))、Brassicaoleracea var.italica(芦笋西兰花(asparagus broccoli))、Brassica oleraceavar.medullosa (髓茎羽衣甘蓝(marrow-stem kale))、Brassica oleraceavar.oleracea、Brassica oleracea var.ramosa(分枝布什羽衣甘蓝(branching bushkale))、Brassica oleracea var.sabauda、Brassica oleracea var.viridis(羽衣甘蓝)、Brassica oleracea x Brassica rapa subsp.pekinensis、Brassica oxyrrhina、匍匐芸薹(Brassica procumbens)、芜菁(荠菜)、Brassica rapa subsp.chinensis(小白菜)、Brassica rapa var.parachinensis(菜心)、Brassica rapa var.purpuraria(紫茎芥菜)、Brassica rapa subsp.narinosa、Brassica rapa subsp.nipposinica(水菜)、Brassicarapa var.perviridis(kabuna)、Brassica rapa subsp.oleifera(两年生球茎甘蓝(biennial turnip rape))、芜菁(Nippo-oleifera Group)、Brassica rapasubsp.pekinensis(大白菜(Chinese cabbage))、Brassica rapa subsp.rapa(芜菁(turnip))、Brassica rapa var.oleifera、Brassica rapa x Brassica nigra、Brassicarepanda、Brassica repanda subsp.baldensis、Brassica repanda subsp.blancoana、Brassica repanda subsp.cadevallii、Brassica repanda subsp.confusa、Brassicarepanda subsp.glabrescens、Brassica repanda subsp.gypsicola、Brassica repandasubsp.latisiliqua、Brassica repanda subsp.maritima、Brassica repandasubsp.repanda、Brassica repanda subsp.saxatilis、石生芸薹(Brassica rupestris)、Brassica ruvo(broccoletto)、苏氏芸薹(Brassica souliei)、Brassica soulieisubsp.amplexicaulis、Brassica spinescens、Brassica tournefortii、Brassicavillosa或Brassica villosa subsp.Bivoniana。
在具体实施例中，该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，该植物基材料是大豆或豆粕。
动物饲料和动物饲料添加剂
本发明还涉及包含本发明的一种或多种β-半乳糖苷酶和本发明的一种或多种半乳聚糖酶的动物饲料组合物和动物饲料添加剂。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含配制剂、本发明的一种或多种β-半乳糖苷酶和本发明的一种或多种半乳聚糖酶。在一个另外的实施例中，该配制剂包括一种或多种以下化合物：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
动物饲料组合物或饮食具有相对较高的蛋白质含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外，此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有50-800g/kg的粗蛋白含量，并且此外包含本发明的至少一种β-半乳糖苷酶和如本文要求保护的本发明的至少一种半乳聚糖酶。
此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中，本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量；和/或0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)x6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。
可以根据NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求],ninthrevised edition[第九次再版]1988,subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council[国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会].National Academy Press[美国国家科学院出版社],华盛顿特区,第2-6页以及European Table of Energy Values for Poultry Feed-stuffs[欧洲家禽饲养材料能量值表],Spelderholt centre for poultry research andextension[斯克得霍特家禽研究与推广中心],7361DA贝克贝亨,荷兰.Grafisch bedrijfPonsen&looijen bv,瓦格宁根.ISBN 90-71463-12-5计算可代谢能量。
根据诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN 90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在一个具体实施例中，本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白，如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，通常量为0-25％。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，通常量为0-30％。
本发明的动物饲料组合物还可以含有昆虫蛋白，如来自粉虫、家蝇或黑水虻幼虫的蛋白质，通常为粉形式。昆虫粉可以完全或部分替代鱼粉，因此可以占总饲料的0-10％。
在再进一步具体的实施例中，本发明的动物饲料组合物含有0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％豆粕；和/或0-25％鱼粉；和/或0-25％肉和骨粉；和/或0-20％乳清。
该动物饲料可以包含植物蛋白。在具体实施例中，这些植物蛋白的蛋白含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源，如豆科植物和谷物，例如来自豆科(Fabaceae/Leguminosae)、十字花科、苋科和早熟禾科植物的材料，如豆粕、羽扇豆粕、油菜籽粕及其组合。
在一个具体实施例中，该植物蛋白来源是来自豆科的一种或多种植物(如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中，该植物蛋白来源是来自苋科的一种或多种植物(如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜)的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜籽、海甘蓝和卷心菜。在另一个具体实施例中，大豆是优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非颗粒化)或颗粒化饲料。通常，混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如，对于粉状饲料，在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于颗粒化饲料，也可以在饲料成分步骤之前或期间添加(液体或固体)β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶制剂。通常，液体β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶制剂包含本发明的β-半乳糖苷酶和本发明的半乳聚糖酶，任选地具有多元醇(如甘油、乙二醇或丙二醇)，并且是在颗粒化步骤后添加，如通过将该液体配制品喷洒至颗粒上。也可以将该酶掺入饲料添加剂或预混物中。
可替代地，可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(如研磨的豆粕)的混合物，然后冻干该混合物来制备β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶。
在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种微生物。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种维生素。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种矿物质。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种其他饲料成分。
在另一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种微生物。在一个实施例中，该动物饲料包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种维生素。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种其他饲料成分。
在一个另外的实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含本发明的多肽、一种或多种配制剂和一种或多种选自由以下组成的列表的组分：一种或多种另外的酶；一种或多种微生物；一种或多种维生素；一种或多种矿物质；一种或多种氨基酸；以及一种或多种其他饲料成分。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生素，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸，优选如下文所述。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素，优选如下文所述。
对于每种酶，该饮食中的最终酶浓度在0.01-200mg酶蛋白/kg饮食的范围内，优选在0.05-100mg/kg饮食，更优选0.1-50mg，甚至更优选0.2-20mg酶蛋白/kg动物饮食之间。
目前考虑，按以下量(剂量范围)中的一个或多个施用半乳聚糖酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围都是每kg饲料中半乳聚糖酶蛋白的mg数(ppm)。目前考虑，按以下量(剂量范围)中的一个或多个施用β-半乳糖苷酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围都是每kg饲料中β-半乳糖苷酶蛋白的mg数(ppm)。进一步考虑，半乳聚糖酶与β-半乳糖苷酶的比例在100:1至1:100半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内，如范围50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶。
为了确定每kg饲料中半乳聚糖酶的mg数和/或β-半乳糖苷酶蛋白的mg数，从饲料组合物中纯化半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶，并且使用相关测定(参见半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶活性之下)确定经纯化的半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶的比活性。还使用相同测定同样地确定饲料组合物的半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性，并且根据这两个确定结果，计算以每kg饲料中半乳聚糖酶的mg数和/或β-半乳糖苷酶蛋白的mg数计的剂量。
在一个具体实施例中，本发明的动物饲料添加剂意欲以0.01至10.0％，更具体0.05％至5.0％或0.2％至1.0％(％意指g添加剂/100g饲料)的水平包含(或规定为必须包含)在动物饮食或饲料中。具体地说，对预混物也是如此。
同样的规则适用于确定饲料添加剂中的半乳聚糖酶的mg数或β-半乳糖苷酶蛋白的mg数。当然，如果样品使用了用于制备饲料添加剂或饲料的半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶，可以由此样品确定比活性(不需要从饲料组合物或添加剂中纯化半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶)。
另外的酶
在另一个实施例中，本文描述的组合物任选地包含一种或多种酶。酶可以在来自NC-IUBMB，1992年的酶命名法(Enzyme Nomenclature)手册的基础上分类，还可以在以下网址参见ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是相对于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB)，学术出版社公司(Academic Press,Inc.)，1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为其提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[ENZYME数据库],2000,Nucleic AcidsRes[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这种分类不反映这些酶的结构特征。
Henrissat等人在“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(如内切葡聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、溶菌酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。
因此，本发明的组合物还可以包含至少一种选自下组的其他酶，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.23)、酰基甘油脂肪酶(EC3.1.1.72)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)、纤维素酶(EC3.2.1.4)、阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)、β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)、三酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)、溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5)、溶菌酶(EC 3.2.1.17)、α-甘露糖苷酶(EC3.2.1.24)、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)(EC 3.2.1.25)、植酸酶(EC3.1.3.8，EC 3.1.3.26，EC 3.1.3.72)、磷脂酶A1(EC3.1.1.32)、磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)、磷脂酶D(EC 3.1.4.4)、蛋白酶(EC 3.4)、支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8,EC3.2.1.136)、β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)或其任何组合。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-FeedTM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、P、NP和HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、NatuphosTM(巴斯夫公司(BASF))、NatuphosTM E(巴斯夫公司)、和Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、(浩卫制药公司(Huvepharma))、Phytase(Aveve Biochem公司)、XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))以及PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO00/43503和WO 03/066847中的那些。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括WX(帝斯曼营养产品公司)、XT和Barley(ABVista公司)、(范恩尼姆公司(Verenium))、X(浩卫制药公司)、XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，杜邦公司)和XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶，杜邦公司)、XG 10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和02 CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶，Aveve Biochem公司)以及Naturgrain(巴斯夫公司)。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括ProAct(帝斯曼营养产品公司)。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括A和RumiStarTM(帝斯曼营养产品公司)。
在一个实施例中，本发明的组合物包含多组分酶产品，如Octazyme(Framelco公司)、G2、VP和MultiGrain(帝斯曼营养产品公司)、Excel或Advance(安迪苏公司(Adisseo))。
摄生品
摄生品(eubiotic)是意欲在胃肠道中提供微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生品包括许多不同的饲料添加剂，如益生素、益生元、植生素(精油)和有机酸，其在下面更详细地描述。
益生素
在一个实施例中，该动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的益生素。在一个具体实施例中，该动物饲料组合物进一步包含来自以下一个或多个属的细菌：乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌或其任何组合。
在一个优选的实施例中，动物饲料组合物进一步包含来自以下一种或多种菌株的细菌：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌、丙酸杆菌属物种。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM32315、NRRL B-50136、NRRL B-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B-50016、ATCC700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的细菌：DSM 29869、DSM29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x104和1x1014CFU/kg的干物质之间，优选在1x106和1x1012CFU/kg的干物质之间，并且更优选在1x107至1x1011CFU/kg的干物质之间。在一个更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x108和1x1010CFU/kg的干物质之间。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x105和1x1015CFU/动物/天之间，优选在1x107和1x1013CFU/动物/天之间，并且更优选在1x108和1x1012CFU/动物/天之间。在一个更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x109和1x1011CFU/动物/天之间。
在另一个实施例中，该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、Alterion(安迪苏公司)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))、Max、Guard、和(科汉森公司(Chr Hansen))、sol、me、(百奥明公司(Biomin))、(混合酶+益生素，杜邦动物营养公司)、和(Norel/Evonik)以及PY1(赢创公司(Evonik))。
益生元
益生元是诱导微生物(例如，细菌和真菌)生长或活动的物质，其有助于宿主的健康。益生元通常是不可消化的纤维化合物，其未消化地通过胃肠道的上部并刺激通过充当它们的底物而定殖大肠的有利细菌的生长或活动。通常，益生元增加胃肠道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活动。
酵母衍生物(灭活的整个酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包括甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物，并且通常衍生自酵母(酿酒酵母)的细胞壁。
酵母产品的实例是和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand AnimalNutrition))。
植生素
植生素是一组来自草药、香料或其他植物的用作饲料添加剂的天然生长促进剂或非抗生素生长促进剂。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专门产品)制备的单一物质。
植生素的实例是迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里酚、丁香酚、间甲酚、香草醛、水杨酸酯、间苯二酚、邻甲氧基苯酚(guajacol)、姜酚、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯、柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄和姜黄提取物。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、CinergyTM、CinergyTM FIT、BiacidTM(嘉吉公司)、和DC(百奥明公司)以及Envivo EO(杜邦动物营养公司)。
有机酸
有机酸(C1-C7)在自然界中作为植物或动物组织的正常成分广泛分布。它们也通过主要在大肠中的碳水化合物的微生物发酵形成。它们通常在猪和家禽生产中用作抗生素生长促进剂的替代品，因为它们对鸡的坏死性肠炎和仔猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可以作为单组分或通常2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的实例是丙酸、甲酸、柠檬酸、乳酸、山梨酸、苹果酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、丁酸和酒石酸或其盐(通常是钠或钾盐、如二甲酸钾或丁酸钠)。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、 NA(巴斯夫公司)、正丁酸AF(OXEA)、BiacidTM、ProhacidTM Classic和ProhacidTM AdvanceTM(嘉吉公司(Cargill))、(百奥明公司)以及Adimix Precision(Nutriad公司)。
预混物
将如上文示例的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如家禽饲料)中在实践中是使用浓缩剂或预混料进行的。预混料是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或载体的优选均匀的混合物。预混料用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的预混料可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加到饲料成分或饮用水中。
氨基酸
本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。
维生素和矿物质
在另一个实施例中，该动物饲料可以包含一种或多种维生素，如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该动物饲料可以任选地包含一种或多种矿物质，如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种巨量矿物质。
通常，脂溶性维生素和水溶性维生素以及痕量矿物质形成所谓的旨在添加到饲料中的预混物的一部分，而巨量矿物质通常被分开地添加到饲料中。
脂溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。
水溶性维生素的非限制性实例包括维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒和锌。
巨量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、钾和钠。
这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需求意指应在饮食中提供指定浓度的这些组分。
在替代方案中，本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地，此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包含在本发明的添加剂内。
在一个仍另外的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含至少一种以下维生素，优选以提供落入下表1中所限定的范围之内(分别针对仔猪饮食和肉鸡饮食)的饲料中浓度。
表1：典型维生素推荐
其他饲料成分
本发明的组合物可以进一步包含着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)、活性氧产生物质、抗氧化剂、抗微生物肽、抗真菌多肽以及霉菌毒素控制化合物。
着色剂的实例是类胡萝卜素，如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。
芳香化合物/调味品的实例是甲氧甲酚、茴香脑、十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和单宁。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)和他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。
多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。
活性氧产生物质的实例为诸如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品；以及诸如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。
抗氧化剂可以用于限制可产生的活性氧物质的数量，使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。
霉菌毒素(如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素)可以在动物饲料中发现，并且可以导致消极的动物性能或疾病。可以将能够如通过霉菌毒素的失活或通过霉菌毒素的结合控制霉菌毒素水平的化合物添加到饲料中以改善这些负面影响。霉菌毒素控制化合物的实例是Vitafix Ultra(核科学公司(Nuscience))、Secure、BBSH、MTV(百奥明公司)、以及Plus(Nutriad公司)。
用途
本发明还针对用于使用具有半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性的多肽或其组合物用于例如动物饲料的方法。本发明还针对用于使用具有半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性的多肽或其组合物的方法，如例如下文描述的那些。
在动物饲料中的用途
本发明还针对用于在动物饲料中使用本发明的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶的方法。
术语动物包括所有动物。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如以下动物，如绵羊、山羊和牛(例如，肉牛、奶牛和牛犊)。在一个具体实施例中，该动物为非反刍动物。非反刍动物包括单胃动物，例如猪(包括但不限于小猪、成长猪和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；和鱼(包括但不限于，鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
在根据本发明的用途中，可以在饮食之前、之后或同时将半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶饲喂给动物。优选后者。
在一个具体实施例中，对半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶添加到饲料或动物饲料添加剂中的形式进行了明确限定。明确限定意指如通过尺寸排阻色谱法(参见WO 01/58275的实例12)确定的，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂是至少50％纯。在其他具体实施例中，如通过此方法确定的，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂是至少60％、70％、80％、85％、88％、90％、92％、94％或至少95％纯。
明确限定的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂是有利的。例如，向饲料中正确地给料基本上不受其他半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶干扰或污染的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶容易得多。术语正确地给料(dose correctly)具体是指得到一致且恒定的结果的目标，和基于所希望的效果优化剂量的能力。
然而，为了在动物饲料中使用，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶不必那么纯；它可以例如包含其他酶，在此情况下它可以被称为半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂。
该半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂可以(a)直接添加到饲料中，或者(b)它可以用于随后添加到饲料(或者用于处理过程中)的一种或多种中间组合物，如饲料添加剂或预混物的生产。不论是根据上述(a)还是(b)来使用，上文所述的纯度水平是指原始半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂的纯度。
本发明的优选实施例
在下面的一组项目中描述了本发明的优选实施例。
1.一种组合物，该组合物包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽。
2.如项目1所述的组合物，其中该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
3.如项目1至2中任一项所述的组合物，其中该GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
4.如项目1至3中任一项所述的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)SEQ ID NO:7的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(n)SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)SEQ ID NO:19的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(p)SEQ ID NO:23的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(q)SEQ ID NO:27的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(r)SEQ ID NO:31的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(s)SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(t)SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(u)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)或(t)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(v)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)或(t)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(w)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
5.如项目4所述的组合物，其中该GH53多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQID NO:7的氨基酸1至
318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ ID NO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQ ID NO:14的氨基酸1至316、SEQ IDNO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ ID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ ID NO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。
6.如项目1至5中任一项所述的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)SEQ ID NO:46的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(n)SEQ ID NO:49的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)SEQ ID NO:52的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(p)SEQ ID NO:55的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(q)SEQ ID NO:58的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(r)SEQ ID NO:61的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(s)SEQ ID NO:70的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(t)SEQ ID NO:73的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(u)SEQ ID NO:76的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)或(v)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(x)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)或(v)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(y)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)或(v)的多肽的具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
7.如项目6所述的组合物，其中该GH35多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至985、SEQ ID NO:43的氨基酸1至985、SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:48的氨基酸1至998、SEQ ID NO:49的氨基酸1至998、SEQ ID NO:51的氨基酸1至983、SEQ ID NO:52的氨基酸1至983、SEQ ID NO:54的氨基酸1至998、SEQ ID NO:55的氨基酸1至998、SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007、SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007、SEQ IDNO:60的氨基酸1至988、SEQ ID NO:61的氨基酸1至988、SEQ ID NO:69的氨基酸1至962、SEQID NO:70的氨基酸1至962、SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:78的氨基酸1至994和SEQ ID NO:79的氨基酸1至994或由其组成。
8.如项目1至7中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
9.如项目8所述的组合物，其中该一种或多种配制剂选自下组，该组由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
10.如项目1至9中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
11.如项目10所述的组合物，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
12.如项目1至11中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种微生物。
13.如项目12所述的组合物，其中该一种或多种微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
14.如项目1至13中任一项所述的组合物，其中当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g半乳糖/kg豆粕。
15.如项目14所述的组合物，其中该组合物释放至少13g(如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g)半乳糖/kg豆粕。
16.如项目1至15中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含植物基材料。
17.如项目16所述的组合物，其中该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。
18.如项目16所述的组合物，其中该植物基材料来自豆科，优选蝶形花亚科。
19.如项目16所述的组合物，其中该植物基材料来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
20.如项目16所述的组合物，其中该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。
21.一种颗粒，该颗粒包含如项目1至15中任一项所述的组合物。
22.如项目21所述的颗粒，其中将该颗粒包衣。
23.如项目22所述的颗粒，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
24.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含如项目1至15中任一项所述的组合物或如项目21至23中任一项所述的颗粒。
25.如项目24所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含选自由以下组成的列表的一种或多种组分：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
26.一种动物饲料，该动物饲料包含植物基材料和如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂。
27.如项目26所述的动物饲料，其中该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支，优选来自豆科，更优选蝶形花亚科或甚至更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
28.如项目26所述的动物饲料，其中该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。
29.一种颗粒状动物饲料，该颗粒状动物饲料包含植物基材料和如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂。
30.如项目29所述的颗粒状动物饲料，其中该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支，优选来自豆科，更优选蝶形花亚科或甚至更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
31.如项目29所述的颗粒状动物饲料，其中该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。
32.如项目29至31中任一项所述的颗粒状动物饲料，其中将如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂喷洒到颗粒上。
33.一种液体配制品，该液体配制品包含如项目1至15中任一项所述的组合物。
34.如项目33所述的液体配制品，其中将具有β-半乳糖苷酶活性的该多肽在0.001％至25％w/w的液体配制品，优选0.01％至25％w/w，更优选0.05％至20％w/w，更优选0.2％至15％w/w，甚至更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w多肽给料。
35.如项目33至34中任一项所述的液体配制品，其中将具有半乳聚糖酶活性的该多肽在0.001％至25％w/w的液体配制品，优选0.01％至25％w/w，更优选0.05％至20％w/w，更优选0.2％至15％w/w，甚至更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w多肽给料。
36.如项目33至35中任一项所述的液体配制品，其中该配制品进一步包含20％至80％w/w的多元醇。
37.如项目36所述的液体配制品，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨糖醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
38.如项目33至37中任一项所述的液体配制品，其中该配制品进一步包含0.01％至2.0％w/w防腐剂。
39.如项目38所述的液体配制品，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
40.如项目33至39中任一项所述的液体配制品，该液体配制品进一步包含选自由以下组成的列表的一种或多种组分：
一种或多种酶；
一种或多种微生物；
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
41.一种制备动物饲料的方法，该方法包括将如项目33至40中任一项所述的液体配制品施加到植物基材料上。
42.如项目41所述的方法，其中该液体配制品通过喷雾施加。
43.如项目41至42中任一项所述的方法，其中该植物基材料选自下组，该组由以下组成：大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。
44.如项目41至43中任一项所述的方法，其中该植物基材料处于颗粒状形式。
45.一种使用如项目41至44中任一项所述的方法制备的颗粒状动物饲料。
46.一种从植物基材料中释放半乳糖的方法，该方法包括用如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品处理该植物基材料。
47.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一只或多只动物施用如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目26至28中任一项所述的动物饲料、如项目29至32或45中任一项所述的颗粒状动物饲料或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
48.如项目47所述的方法，其中该性能参数选自由以下组成的列表：体重增加(BWG)、欧洲生产效率因子(EPEF)和饲料转化率(FCR)或其任何组合。
49.一种用于改善动物饲料的营养价值的方法，该方法包括向该饲料中添加如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
50.一种制备动物饲料的方法，该方法包括混合如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
51.一种用于降低动物饲料的抗营养作用的方法，该方法包括向该饲料中添加如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
52.如项目46至51中任一项所述的方法，其中该植物基材料来自分类亚纲蔷薇分支。
53.如项目46至51中任一项所述的方法，其中该植物基材料来自豆科，优选蝶形花亚科。
54.如项目46至51中任一项所述的方法，其中该植物基材料来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、蚕豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
55.如项目46至51中任一项所述的方法，其中该植物基材料是大豆、野生大豆、菜豆、羽扇豆、花菜豆、多花菜豆、瘦身豆、利马豆、四季豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、扁豆、花生、西班牙花生、油菜、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)或豌豆或处于加工形式如豆粕、全脂豆粕、大豆浓缩蛋白(SPC)、发酵豆粕(FSBM)或其任何组合。
56.如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目26至28中任一项所述的动物饲料、如项目29至32或45中任一项所述的颗粒状动物饲料或如项目33至40中任一项所述的液体配制品在以下中的用途：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
57.一种具有半乳聚糖酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少82％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少99.0％(例如，至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少84％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少86％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(k)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少82％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(l)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少99.0％(例如，至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性；
(n)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性；
(o)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列具有至少84％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(p)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列具有至少96.4％(例如，至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％)序列同一性；
(q)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少86％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(r)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)序列同一性；
(s)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列具有至少99.3％(例如，至少99.6％或100％)序列同一性；
(t)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(u)SEQ ID NO:3的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:7的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2或3个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)SEQ ID NO:19的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(z)SEQ ID NO:23的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(aa)SEQ ID NO:27的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ab)SEQ ID NO:31的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1或2个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ac)SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1或2个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ad)SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ae)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；以及
(af)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(ag)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)或(ae)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
58.根据项57所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQ IDNO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQ IDNO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ ID NO:10的氨基酸1至316、SEQID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQ ID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ IDNO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ ID NO:36的氨基酸1至324、SEQID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。
59.一种具有β-半乳糖苷酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少96.4％(例如，至少96.6％、至少96.8％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少92％(例如，至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少99.7％(例如，至少99.8％、至少99.9％或100％)序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少93％(例如，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少85％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少95.5％(例如，至少96.0％、至少96.5％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性的多肽；
(k)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(l)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:44的成熟多肽编码序列具有至少83％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:47的成熟多肽编码序列具有至少96.4％(例如，至少96.6％、至少96.8％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)序列同一性；
(n)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:50的成熟多肽编码序列具有至少92％(例如，至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(o)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:53的成熟多肽编码序列具有至少99.7％(例如，至少99.8％、至少99.9％或100％)序列同一性；
(p)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:56的成熟多肽编码序列具有至少93％(例如，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(q)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:59的成熟多肽编码序列具有至少85％(例如，至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(r)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列具有至少95.5％(例如，至少96.0％、至少96.5％、至少97.0％、至少97.2％、至少97.4％、至少97.6％、至少97.8％、至少98.0％、至少98.2％、至少98.4％、至少98.6％、至少98.8％、至少99.0％、至少99.2％、至少99.4％、至少99.6％、至少99.8％或100％)序列同一性；
(s)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(t)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列具有至少80％(例如，至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列同一性；
(u)SEQ ID NO:43的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:46的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:49的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:52的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)SEQ ID NO:55的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2或3个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(z)SEQ ID NO:58的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(aa)SEQ ID NO:61的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ab)SEQ ID NO:70的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ac)SEQ ID NO:73的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ad)SEQ ID NO:76的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ae)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；以及
(af)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(ag)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽的具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽长度的至少90％的片段。
60.根据项59所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至985、SEQ IDNO:43的氨基酸1至985、SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:48的氨基酸1至998、SEQ ID NO:49的氨基酸1至998、SEQ ID NO:51的氨基酸1至983、SEQ ID NO:52的氨基酸1至983、SEQ ID NO:54的氨基酸1至998、SEQ ID NO:55的氨基酸1至998、SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007、SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007、SEQ ID NO:60的氨基酸1至988、SEQ ID NO:61的氨基酸1至988、SEQ ID NO:69的氨基酸1至962、SEQ IDNO:70的氨基酸1至962、SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000或SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000或由其组成。
61.一种编码如项目57至60中任一项所述的多肽的多核苷酸。
62.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如项目61所述的多核苷酸，该多核苷酸有效地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
63.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如项目61所述的多核苷酸，该多核苷酸有效地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
64.一种产生如项目57至60中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；并且
(b)回收该多肽。
65.一种产生如项目57至60中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如项目63所述的重组宿主细胞；并且
(b)回收该多肽。
66.一种用编码如如项目57至60中任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物、植物部分或植物细胞。
67.一种全液配制品或细胞培养组合物，该全液配制品或细胞培养组合物包含如项目57至60中任一项所述的多肽。
68.一种组合物，该组合物包含如项目57至60中任一项所述的多肽。
69.如项目68所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
70.如项目69所述的组合物，其中该一种或多种配制剂选自下组，该组由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
71.如项目68至70中任一项所述的组合物，该组合物处于微粒形式。
72.如项目71所述的组合物，其中将该颗粒包衣。
73.如项目72所述的组合物，其中该包衣包括盐和/或蜡和/或面粉包衣。
74.如项目68至73中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
75.如项目74所述的组合物，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
实例
菌株
这些半乳聚糖酶来源于通过标准微生物分离技术从环境样品中分离的细菌菌株。鉴定菌株并基于16S核糖体基因的DNA测序对分类进行指定(表2a和2b)。
表2a：细菌菌株的分离
表2b：真菌菌株的分离
1最初被分类为榛色钩囊菌(Hamigera avellanea)。
使用来自凯杰公司(Qiagen)(希尔登，德国)的DNA酶血液和组织试剂盒(DNeasyBlood&Tissue Kit)从单个菌株的纯培养物中分离的染色体DNA经受使用Illumina技术进行的全基因组测序。基因组测序，随后的读取的装配和基因发现(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
分析来自CAZY数据库家族GH53的半乳聚糖酶的细菌基因组序列(Lombard等人TheCarbohydrate-active enzymes database CAZy[碳水化合物活性酶数据库CAZy].NucleicAcids Res[核酸研究]2013,42:D490–D495)。此分析鉴定了十个具有SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33和37中给出的核苷酸序列的编码推定的半乳聚糖酶的基因。
分析来自CAZY数据库家族GH35的β-半乳糖苷酶的真菌基因组序列(Lombard等人The Carbohydrate-active enzymes database CAZy[碳水化合物活性酶数据库CAZy].Nucleic Acids Res[核酸研究]2013,42:D490–D495)。此分析鉴定了七个具有SEQ ID NO:41、44、47、50、53、56、59、68、71、74和77中给出的核苷酸序列的编码推定的β-半乳糖苷酶的基因。
α-半乳糖苷酶测定
可以如下使用4-硝基苯基α-D-吡喃半乳糖苷(产品代码O-PNPBGAL，购自MegazymeInternational公司，Bray，威克洛郡，爱尔兰)测定α-半乳糖苷酶活性。
使用100mM MES(西格玛公司)缓冲液pH 7.0±0.05以2倍稀释稀释酶，然后将4-硝基苯基α-D-吡喃半乳糖苷(1mg/ml，在100mM MES缓冲液pH 7.0±0.05中，在使用之前制备)添加到含有酶的溶液中。通过在室温(通常23℃)下测量5分钟随时间变化的释放的pNP(对硝基苯酚)在405nm处的吸光度直接在缓冲液中跟踪各自的半乳糖苷酶活性。1mg/mL的酶的浓度是很好的起点；然而，它将取决于酶及其比活性。
使用1-5分钟的时间窗口和0-2的吸光度窗口将活性计算为吸光度对时间的曲线的斜率(单位：mOD/min)。然后通过将活性除以酶浓度而将活性转化为比活性(单位：(mOD/min)/(mg/ml))。
β-半乳糖苷酶测定
可以如下使用4-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(购自Megazyme International公司，Bray，威克洛郡，爱尔兰)测定β-半乳糖苷酶活性。
使用100mM MES(西格玛公司)缓冲液pH 7.0±0.05以2倍稀释稀释酶，然后将4-硝基苯基β-D-吡喃半乳糖苷(1mg/ml，在100mM MES缓冲液pH 7.0±0.05中)添加到含有酶的溶液中。通过在室温(通常23℃)下测量5分钟随时间变化的释放的pNP(对硝基苯酚)在405nm处的吸光度直接在缓冲液中跟踪各自的半乳糖苷酶活性。1mg/mL的酶的浓度是很好的起点；然而，它将取决于酶及其比活性。
使用1-5分钟的时间窗口和0-2的吸光度窗口将活性计算为吸光度对时间的曲线的斜率(单位：mOD/min)。然后通过将活性除以酶浓度而将活性转化为比活性(单位：(mOD/min)/(mg/ml))。
半乳聚糖酶测定
可以使用还原末端比色测定来测定半乳聚糖酶活性。将10％豆粕底物(由研磨至0.5mm粒度的豆粕制备)用固体分配器填到96孔格式板中。在添加豆粕之前和之后测量重量，并且假设沿着板平等分布估计每孔的底物质量。
将酶在100mM活性缓冲液(100mM乙酸盐，100mM MES，100mM甘氨酸在0.01％TritonX100中，1mM CaCl2，pH 6.5)中稀释至0.6ppm(溶液中的最终酶浓度)，并且将样品在40℃下振荡2小时。将样品以3000xg离心5分钟，并且将75μl的每种样品(上清液)转移到新的PCR板中。向每个样品中添加75μl活性缓冲液，将样品混合，然后添加75μl终止溶液(15mg/mlPAHBAH(Sigma H-9882)，在Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液中，pH>10)。将溶液在95℃下混合10min，然后在10℃下混合1min，并且将样品转移到新的96MTP中并在405nm处测量吸光度。
半乳糖SBM测定
介绍
在酶促水解富含半乳糖的底物(豆粕)后，通过分光光度法测量溶液中半乳糖单糖的浓度。
总之，将一种或多种酶在40℃±2℃下在pH 6.5±0.05的10w/v％豆粕浆料中孵育2小时。然后在基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名称K-RAFGA)的测定中分析上清液。首先将上清液中的α-D-半乳糖用半乳糖变旋酶转化为β-D-半乳糖。然后在β-半乳糖脱氢酶存在下，β-D-半乳糖被NAD+氧化成D-半乳糖酸。在此反应中形成的NADH的量与上清液中D-半乳糖的量是化学计量的。然后通过340nm处吸光度的增加测量NADH浓度。
豆粕浆料
从研磨至0.5mm粒度的豆粕和0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 6.5±0.05)中制备10w/v％豆粕浆料。
将0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 6.5±0.05)在搅拌下加热至大约40℃的温度。然后将预热的缓冲液转移到豆粕中。在加热的同时搅拌所得浆料(此时不监测温度–仅施加加热以确保在搅拌浆料时温度不会降低太多)。然后将浆料用预先润湿的宽口径移液管转移到应在其中进行孵育的容器中。从混合物中的大致中心点移取浆料。从浆料混合到转移到最后一个孵育容器所经过的时间至多为15分钟。以这样的方式调节搅拌速度，使得粒子均匀分布在浆料中。
酶的稀释
将酶在超纯水中稀释至其所需浓度。酶稀释到的浓度基于每个孵育容器中酶的先前浓度(以mg酶蛋白/mL(mg EP/mL)计)和干物质(豆粕)的质量(kg)。
D-(+)-半乳糖标准品
由D-(+)-半乳糖和超纯水制备标准曲线。通过将D-(+)-半乳糖溶解在超纯水中至终浓度为250mg半乳糖/mL来制备D-(+)-半乳糖原液。将储备溶液在两倍稀释行中稀释以获得六种标准品，其浓度为250、125、62.5、31.25、15.625和7.813mg半乳糖/mL。
在豆粕上孵育α-半乳糖苷酶
将含10w/v％豆粕浆料的孵育容器在搅拌下加热至40℃±2℃的稳定温度。当达到稳定温度时，将六种D-(+)-半乳糖标准品添加到孵育容器中，使得容器内浓度为5mg、2.5mg、1.25mg、0.625mg、0.313mg和0.157mg半乳糖/mL孵育体积。每种标准品一式两份地孵育。
然后将稀释的酶以达到其所需浓度(以mg EP/kg豆粕计)所需的体积添加到它们各自的孵育容器中。每种酶处理一式三份地孵育。
另外，包括两倍三个作为空白处理的没有标准品或酶处理的孵育容器以获得豆粕浆料中的基线半乳糖浓度。
将孵育容器在搅拌下在40℃±2℃下孵育2小时。在孵育后，将容器在5℃下以1500g离心15分钟。
在豆粕上孵育半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶
将含10w/v％豆粕浆料的孵育容器在搅拌下加热至40℃±2℃的稳定温度。当达到稳定温度时，将六种D-(+)-半乳糖标准品添加到孵育容器中，使得容器内浓度为5mg、2.5mg、1.25mg、0.625mg、0.313mg和0.157mg半乳糖/mL孵育体积。每种标准品一式两份地孵育。
然后将稀释的酶以达到其所需浓度(以mg EP/kg豆粕计)所需的体积添加到它们各自的孵育容器中。每种酶处理一式三份地孵育。
另外，包括两倍三个作为空白处理的没有标准品或酶处理的孵育容器以获得豆粕浆料中的基线半乳糖浓度。
将孵育容器在搅拌下在40℃±2℃下孵育2小时。在孵育后，将容器在5℃下以1500g离心15分钟。
半乳糖浓度的测定
然后在基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名称K-RAFGA)的测定中分析现在离心的孵育容器中的上清液。在该测定中使用来自K-RAFGA试剂盒的三种试剂：测定缓冲液(在试剂盒中的瓶子1中提供并准备好)，β-NAD试剂(在试剂盒中的瓶子2中提供，在使用前如试剂盒中所述制备)和GalDH+GalM溶液(在试剂盒中的瓶子3中提供，在使用前在超纯水中以1:1稀释)。以下描述的所有步骤都使用Eppendorf 5075自动移液系统进行。
首先将来自离心孵育容器的上清液在0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 6.5±0.05)中稀释10倍(1份上清液加9份0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05)。
然后将69μL的每种稀释的上清液转移到新的容器中，并且将34μL超纯水添加到稀释的上清液中(其将从此处开始称为测定样品)。然后将69μL测定缓冲液添加到测定样品中，接着在687μL超纯水中稀释。将34μLβ-NAD试剂添加到测定样品中，然后添加14μL GalDH+GalM溶液并剧烈混合。
然后将262μL的每种测定样品转移到96孔微量滴定板中。在40℃±2℃下下测量96孔微量滴定板的每个孔中的在340nm处的吸光度持续20分钟或直至每个孔中的吸光度达到稳定水平。当达到稳定的吸光度时，在后面的计算中使用此稳定的吸光度。
半乳糖浓度的计算
将来自孵育容器中半乳糖标准品的测定样品的吸光度用作标准曲线(6种标准品，5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.157mg半乳糖/mL孵育体积，n＝2/标准品)。在excel中计算半乳糖标准曲线的等式，其中y是OD340，并且x是以mg半乳糖/mL孵育体积计的半乳糖浓度：
然后通过以下公式给出每个样品的以mg半乳糖/mL孵育体积计的半乳糖浓度：
然后在干物质基础上计算半乳糖浓度(g半乳糖/kg豆粕)并在以下实施例中报告：
实例1：从柯恩氏菌属物种-60555、解木聚糖柯恩氏菌、冻原类芽孢杆菌、巴其诺类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-18179、皮奥利亚类芽孢杆菌、食木糖类芽孢杆菌和光滑柯恩氏菌中克隆GH53半乳聚糖酶(SEQ IDNO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)
通过PCR扩增编码半乳聚糖酶的基因，并将其与调节元件、亲和纯化标签和同源区融合以重组到枯草芽孢杆菌基因组中。线性整合构建体是SOE-PCR融合产物(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)Engineering hybrid geneswithout the use of restriction enzymes,gene splicing by overlap extension[不使用限制酶，通过重叠延伸的基因剪接进行的工程化杂种基因]Gene[基因]77:61-68)，该融合产物由两个枯草芽孢杆菌染色体区域之间的基因连同强启动子与氯霉素抗性标记的融合制备。SOE PCR方法也描述于专利申请WO 2003095658.中。
在三联启动子系统(如WO 99/43835中所述)的控制下表达该基因，该启动子系统由包含稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。
用克劳氏芽孢杆菌分泌信号(编码以下氨基酸序列：MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA，SEQ ID NO:67)代替天然的分泌信号来表达该基因。此外，表达构建体导致在天然成熟蛋白质上添加氨基末端聚组氨酸纯化标签，从而允许通过固定化金属离子亲和色谱法纯化酶。
该SOE-PCR产物被转化进枯草芽孢杆菌中并且在染色体中通过同源重组将其整合到果胶裂解酶位点中。随后，选择一个含有对应的半乳聚糖酶表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶含有100ml富淀粉基培养基。在30℃至37℃下的3-5天培养时间后，通过离心收获含有酶的上清液并通过固定化金属亲和色谱法纯化酶。
实例2：从柯恩氏菌属物种-60555、解木聚糖柯恩氏菌、冻原类芽孢杆菌、巴其诺类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌、类芽孢杆菌属物种-18179、皮奥利亚类芽孢杆菌、食木糖类芽孢杆菌和光滑柯恩氏菌中纯化GH53半乳聚糖酶(SEQ IDNO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)
将来自实例1的上清液的pH调节至pH 8，通过0.2μM滤器过滤，然后施加到5mlHisTrapTMexcel柱(GE医疗集团生命科学部(GE Healthcare Life Sciences)，匹兹堡，美国)上。在加载之前，该柱已经在5个柱体积(CV)的50mM Tris/HCl pH 8中平衡。为了去除未结合的材料，将该柱用8CV的50mM Tris/HCl pH 8洗涤，并且靶标的洗脱是用50mM HEPESpH 7+10mM咪唑获得。将洗脱的蛋白质在HiPrepTM26/10脱盐柱(GE医疗集团生命科学部，匹兹堡，美国)上脱盐，将该脱盐柱使用3CV的50mM HEPES pH 7+100mM NaCl平衡。也将此缓冲液用于靶标的洗脱，并且流速是10ml/min。选择相关级分，并且基于色谱图和SDS-PAGE分析进行合并。
实例3：从副榛色钩囊菌、爪甲曲霉、溜曲霉、穗状弯孢霉、肉色曲霉和檞皮素青霉中克隆GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、46、49、52、58和61)
将具有核苷酸序列SEQ ID NO:41、44、47、50、56和59和示于SEQ ID NO:42、45、48、51、57和60中的蛋白质的肽翻译的β-半乳糖苷酶从基因组DNA中进行PCR扩增，并且使用BamHI和XhoI限制性酶切位点如WO2013024021所述的克隆到表达载体pDAu222中。
证实了克隆于表达载体中的β-半乳糖苷酶编码基因的序列，并且将表达构建体转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中，以分别产生具有蛋白质序列SEQ ID NO:43、46、49、52、58和61的分泌成熟肽。在从原生质体再生期间，在乙酰胺上选择转化体，并且随后在选择下重新分离(Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO04/032648)。
为了产生重组β-半乳糖苷酶，将每种质粒构建体的单个曲霉属转化体在各自两个500ml带挡板的烧瓶中进行培养，每个烧瓶含有150ml的DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)。将培养物在旋转台上在30℃下以100RPM振荡4天。随后使培养液通过穿过0.22um滤器与细胞材料分离。
实例4：从米曲霉中克隆GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:55)
将具有核苷酸序列SEQ ID NO:53和示于SEQ ID NO:54中的蛋白质的肽翻译的β-半乳糖苷酶从分离自米曲霉的基因组DNA中进行PCR扩增，并且使用BamHI和HindIII限制性酶切位点如WO 2013024021所述的克隆到表达载体pDAu222中。
证实了克隆于表达载体中的β-半乳糖苷酶编码基因的序列，并且将表达构建体转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中，以产生具有蛋白质序列SEQ ID NO:55的分泌成熟肽。在从原生质体再生期间，在乙酰胺上选择转化体，并且随后在选择下重新分离(Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO 04/032648)。
为了产生重组β-半乳糖苷酶，将单个曲霉属转化体在各自两个500ml带挡板的烧瓶中进行培养，每个烧瓶含有150ml的DAP-4C-1培养基(WO12/103350)。将培养物在旋转台上在30℃下以100RPM振荡4天。随后使培养液通过穿过0.22um滤器与细胞材料分离。
实例5：从副榛色钩囊菌、爪甲曲霉、溜曲霉、穗状弯孢霉、米曲霉、肉色曲霉和檞皮素青霉中纯化GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、46、49、52、55、58和61)
将过滤液调节至pH 7.0并且在0.22μm PES滤器(Nalge Nunc International公司，耐尔根实验室耗材(Nalgene labware)目录号#595-4520)上过滤。然后，向滤液中添加1.8M硫酸铵。将滤液加载到用1.2M硫酸铵、25mM HEPES pH 7.0平衡的Phenyl SepharoseTM6快流柱(Fast Flow column)(高取代(high sub)(GE医疗集团(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上。用1.0M硫酸铵洗涤后，将结合的蛋白质用25mM HEPES pH 7.0分批洗脱。收集多个级分并且通过SDS-PAGE进行分析。将级分合并并且将其施加到在25mMHEPES pH 7.5中平衡的SephadexTMG-25(中等)(GE医疗集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)柱上。将级分施加到在25mM HEPES pH 7中平衡的SOURCETM15Q(GE医疗集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)柱上，并且用25mM HEPES pH 7、1M氯化钠经大约20CV结合的蛋白质进行洗脱。收集多个级分并且通过SDS-PAGE进行分析。
实例6：使用GH53半乳聚糖酶水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用两种已知的半乳聚糖酶(SEQ ID NO:62和63)的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表3中。
表3：使用已知的半乳聚糖酶的半乳糖从豆粕中的释放
结果表明，这些GH53半乳聚糖酶不会独立地从豆粕中释放出大量的半乳糖。
实例7：使用已知的GH53半乳聚糖酶与已知的GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用3种现有技术的半乳聚糖酶(SEQ ID NO:62、63或64)或本发明的半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与本发明的β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43)的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表4和5中。
表4：与本发明的多肽相比，使用已知的多肽的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
表5：与本发明的多肽相比，使用已知的多肽的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，与独立地使用半乳聚糖酶相比(来自表3)，本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43)与任何GH53半乳聚糖酶的组合都从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例8：使用GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用四种β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、46、49和52)与GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)的组合的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表6、7和8中。
表6：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与三种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43和46)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
AB：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP1207中的TukeyHSD程序比较平均值
表7：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与两种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
43和49)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
表8：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与两种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
43和52)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
AB：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，如实例5中证明的，与现有技术的半乳聚糖酶相比，本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、46、49和52)与本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)的组合均从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例9：使用GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用本发明的β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43)与本发明的9种GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)的组合的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表9、10和11中。
表9：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与四种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
4、8、12和16)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
表10：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与四种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
4、20、24和28)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
表11：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与四种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
4、32、36和40)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SASJMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，如实例5中证明的，与现有技术的半乳聚糖酶相比，本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQID NO:43)一起均从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例10：使用GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用本发明的三种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、58和61)与本发明的两种GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4和40)的组合的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表12中。
表12：使用两种GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4和40)与三种GH35β-半乳糖苷酶
(SEQ ID NO:43、58和61)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABC：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，如实例5中证明的，与现有技术的半乳聚糖酶相比，本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4和40)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、58和61)一起均从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例11：使用GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用本发明的两种GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43和55)与本发明的三种GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8和40)的组合的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于下表13中。
表13：使用两种GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8和40)与三种GH35β-半乳糖苷酶
(SEQ ID NO:43和55)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，如实例5中证明的，与现有技术的半乳聚糖酶相比，本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8和40)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43和55)一起均从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例12：使用单独的GH53半乳聚糖酶、单独的GH35β-半乳糖苷酶或GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定单独使用三种不同的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、58和61)或单独使用三种不同的GH53半乳聚糖酶(SEQID NO:4、8和32)的半乳糖从豆粕中的释放。还测试了使用GH35β-半乳糖苷酶之一与GH53半乳聚糖酶之一一起的三种不同组合，以证明酶组合的协同效应。结果呈现于下表14中。
表14：使用单独的GH53半乳聚糖酶、单独的GH35β-半乳糖苷酶或GH53半乳聚糖酶
与GH35β-半乳糖苷酶的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SASJMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，在测试条件下，单独的GH53半乳聚糖酶和单独的GH35β-半乳糖苷酶均不释放显著量的半乳糖。然而，测试的三种GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合均从豆粕中释放显著量的半乳糖，从而证明了酶组合的协同效应。
实例13：包含半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶的动物饲料和动物饲料添加剂
动物饲料添加剂
将含有0.01g至10g酶蛋白的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶(例如SEQ IDNO:3、4、7、8、11、12、15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35、36、39或40中的一种或多种和SEQ ID NO:43、46、49、52、55、58或61中的一种或多种)的配制品添加到以下预混物中(每千克预混物)：
动物饲料
这是包含如上所述的动物饲料添加剂的动物饲料(肉鸡饲料)的实例：
62.55％玉蜀黍
3.8％豆粕(50％粗蛋白)
1.0％大豆油
0.2％DL-甲硫氨酸
0.22％DCP(磷酸二钙)
0.76％CaCO3(碳酸钙)
0.32％砂
0.15％NaCl(氯化钠)
1％上述预混料
将各成分混合，并且将饲料在所需温度(例如，60℃、65℃、75℃、80℃、85℃、90℃或甚至95℃)下颗粒化。
液体配制品
半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶(例如SEQ ID NO:3、4、7、8、11、12、15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35、36、39或40中的一种或多种和SEQ ID NO:43、46、49、52、55、58或61中的一种或多种)的液体配制品包含0.1％至10w/w酶蛋白(组合的)、40％-60％甘油、0.1％至0.5％苯甲酸钠和水。将液体配制品喷洒到上述颗粒状动物饲料上(在这种情况下，动物饲料添加剂不包含本发明的β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶)。
实例14：从简青霉、赭曲霉和文氏曲霉中克隆GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:70、73和76)
将具有核苷酸序列SEQ ID NO:41、44、47、50、56和59和示于SEQ ID NO:42、45、48、51、57和60中的蛋白质的肽翻译的β-半乳糖苷酶从基因组DNA中进行PCR扩增，并且使用BamHI和XhoI限制性酶切位点如WO 2013024021所述的克隆到表达载体pDAu222中。
证实了克隆于表达载体中的β-半乳糖苷酶编码基因的序列，并且将表达构建体转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中，以分别产生具有蛋白质序列SEQ ID NO:43、46、49、52、58和61的分泌成熟肽。在从原生质体再生期间，在乙酰胺上选择转化体，并且随后在选择下重新分离(Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO04/032648)。
为了产生重组β-半乳糖苷酶，将每种质粒构建体的单个曲霉属转化体在各自两个500ml带挡板的烧瓶中进行培养，每个烧瓶含有150ml的DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)。将培养物在旋转台上在30℃下以100RPM振荡4天。随后使培养液通过穿过0.22um滤器与细胞材料分离。
实例15：从简青霉、赭曲霉和文氏曲霉中纯化GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:70、73和76)
将培养液用3.6M硫酸铵以50:50稀释，搅拌30分钟，然后通过0.2μm滤器过滤。将样品施加到净化器上的5ml HiTrapTMPhenyl(FF)柱(GE医疗集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上。在加载之前，该柱已在5个柱体积(CV)的50mM HEPES+1.8M硫酸铵pH 7中平衡。为了除去未结合的材料，将该柱用5CV的50mM HEPES+1.8M硫酸铵pH 7洗涤。使用50mMHEPES+20％异丙醇pH 7将靶蛋白从柱洗脱到10ml环中。从该环中，将样品加载到已经用3CV的50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0平衡的脱盐柱(HiPrepTM26/10脱盐)上。将靶蛋白用50mMHEPES+100mM NaCl pH 7.0洗脱，选择相关级分，并基于色谱图进行合并。流速为5ml/min。
实例16：从迟缓曲霉中克隆GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:79)
将具有核苷酸序列SEQ ID NO:77的β-半乳糖苷酶从分离自迟缓曲霉的基因组DNA中进行PCR扩增，并克隆到作为pCaHj505(WO 2013/029496)的衍生物的表达载体pSUN515中。
将最终的表达质粒转化到米曲霉MT3568表达宿主中。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355(WO 02/40694)的衍生物，其中通过用pyrG基因破坏米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因恢复pyrG营养缺陷型。在转化时将β-半乳糖苷酶基因通过同源重组整合到米曲霉MT3568宿主细胞基因组中。
将编码amdS的基因用作标记。在补充有10mM乙酰胺的pyrG培养基琼脂上选择转化体。选择一个含有β-半乳糖苷酶表达构建体的重组米曲霉克隆，并且在旋转摇床上在4个2-升带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶含有400ml YPM(1％酵母提取物、2％蛋白胨和2％麦芽糖)。在30℃下的3天培养时间后，使用0.2μm 1-升瓶顶部真空滤器(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific Inc.)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)通过过滤收获含酶的上清液。
实例17：从迟缓曲霉中纯化GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:79)
用硫酸铵(80％饱和)沉淀收获的培养液。将沉淀物重新溶于50ml的20mM PBS pH7.0中，然后通过0.45μm滤器过滤。将过滤后的粗蛋白溶液施加到用20mM PBS pH 7.0和300mM氯化钠平衡的20ml自填充Ni琼脂糖凝胶excel亲和柱(GE医疗集团，白金汉郡，英国)上。通过线性0-0.5M咪唑梯度(经0.5CV)，然后是0.5M咪唑(再经4CV)洗脱蛋白质(CV是柱体积的缩写CV＝20ml，)。使用Mini-PROTEAN TGX无染色4％-15％预制凝胶(伯乐实验室(Bio-Rad Laboratories)，加利福尼亚州，美国)通过SDS-PAGE分析级分。通过在pH 6.5、40℃下观察400nm波长处的吸光度，在邻硝基苯基-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)上评估级分的β-半乳糖苷酶活性。合并含有重组蛋白带并显示出阳性活性的级分。然后将合并的溶液通过超滤进行浓缩。
实例18：使用单独的GH53半乳聚糖酶、单独的GH35β-半乳糖苷酶或GH53半乳聚糖酶与GH35β-半乳糖苷酶的组合水解豆粕(SBM)
使用半乳糖SBM测定来确定使用本发明的六中GH35β-半乳糖苷酶(SSEQ ID NO:43、55、70、73、76或79)与本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)的组合的半乳糖从豆粕中的释放。结果呈现于表15至18中。
表15：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与GH35β-半乳糖苷酶(SEQ
ID NO:43或
70)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
表16：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与GH35β-半乳糖苷酶(SEQ
ID NO:43或
73)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
表17：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与GH35β-半乳糖苷酶(SEQ
ID NO:43、
55或76)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
表18：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与GH35β-半乳糖苷酶(SEQ
ID NO:43或
79)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值
结果证明，如实例5中证明的，与现有技术的半乳聚糖酶相比，本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43、55、70、73、76或79)一起均从豆粕中释放显著更高量的半乳糖。
实例19：使用GH53半乳聚糖酶和GH35β-半乳糖苷酶的现有技术组合水解豆粕(SBM)
Sakamoto等人在Appl Microbiol Biotechnol.[应用微生物学与生物技术]20139:2895-2906中描述了来自产黄青霉的GH53半乳聚糖酶(Swissprot：B5MGR3，SEQ IDNO:83)和GH35β-半乳糖苷酶(Swissprot：I0IV51，SEQ ID NO:82)。
De Vries等人在Carbohydrate Research[碳水化合物研究]327(2000)401–410中描述了来自黑曲霉的GH53半乳聚糖酶GalA(Swissprot：G3XR77，SEQ ID NO:84)和GH35β-半乳糖苷酶LacA(Swissprot：Q8X168，校正了1个AA，SEQ ID NO:85)。
使用半乳糖SBM测定来确定使用现有技术的组合B5MGR3+I0IV51和现有技术的组合G3XR77+Q8X168的半乳糖从豆粕中的释放。作为阴性对照，运行空白样品。作为阳性对照，使用具有SEQ ID NO:43的GH35β-半乳糖苷酶和具有SEQ ID NO:4的GH53半乳聚糖酶。结果呈现于下表19中。
表19：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与GH35 β-半乳糖苷酶(SEQ
ID NO:43
或79)的组合的半乳糖从豆粕中的释放
ABCD：不共享大写字母的栏中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD程序比较平均值。*校正了1个AA。
结果证明，与本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:43)一起相比，现有技术的组合从豆粕中释放显著更少量的半乳糖。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等效方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，对于本领域的技术人员而言本发明的各种修改将从前述的说明书变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物
<130> 13202-WO-PCT
<150> EP16170963.9
<151> 2016-05-24
<160> 85
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 1047
<212> DNA
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1044)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(96)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (97)..(1044)
<400> 1
atg atg ttc aag aga acg gta acg ggc atg atg gcc ttg ctg ctg gtg 48
Met Met Phe Lys Arg Thr Val Thr Gly Met Met Ala Leu Leu Leu Val
-30 -25 -20
ctg gct ctg ttc gtc gcg caa ggt tcg cag ccg cac caa gcc gcc gcg 96
Leu Ala Leu Phe Val Ala Gln Gly Ser Gln Pro His Gln Ala Ala Ala
-15 -10 -5 -1
gcg ccg tcg ttc gcc aaa ggg gcg gac atc agc tgg gtg ccg gga atg 144
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
gaa gcc cag ggg tac aag tgg aag gac aag aac ggc gtg cag cgg gac 192
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
att ttg gac att ttg aaa aac gat tat cag atc aac tcc gtg cgc atc 240
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
cgc gtg tgg gtc aac cct tcg agc agc tac acg aac ggg tac ctg aac 288
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
aag gac cgt gcg gcc gcg ctg gcg aag cgg gcc aag gcg gcg ggg atg 336
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
agc gtc atg ctg acg ctc cat tac agc gac agc tgg gcg gac ccc ggc 384
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
caa cag acg aag ccg gcg gca tgg aag agc tac acg ttc cag caa ctg 432
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
atg gac gcc gtg tgg aac tgg aca cgc gac gtc atg acg acg atg cag 480
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
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gcg aac ggc gtg acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac 528
Ala Asn Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
aac ggc atg ctg tgg gac gac ggc aag gct tcg ctc agc atg aag aat 576
Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn
145 150 155 160
tat gcg tgg ctc gtg aac acg ggc aac aac gcg gtg aag tcg atc agc 624
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
agc tcg acc aag acg atc gtg cac ctg gcc aac ggc tac gac aat tcg 672
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
ctg ttc gtc tgg aac atc gga ggc ttg atc gcc aac gga gcg acg ttc 720
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
gac atc atc ggc atg tcg ctc tat ccg agc gcg tcg gat tgg tcg gcc 768
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
aag gtg acg cag acg atc gcg aac gcg aac gac atg atc tcg cgt tac 816
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
ggc aag ccg atc atg gtg acg gag atc ggc atg gac tac agc cag ccg 864
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
agc gcg gcc aag agc ttc gtg tcg gac atc aag acg aag atc cgc aac 912
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
ctg tcc ggc ggc aag ggg caa ggc gtg ttc tac tgg gag ccc gaa gcg 960
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
acg ccc ggc tac aac ggc ggc tac agc atg ggc gcc tgg caa gcg gac 1008
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
atg aag ccg acg atc gcg ctc gag ggc ttc tgg aac taa 1047
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
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<211> 348
<212> PRT
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<400> 2
Met Met Phe Lys Arg Thr Val Thr Gly Met Met Ala Leu Leu Leu Val
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Leu Ala Leu Phe Val Ala Gln Gly Ser Gln Pro His Gln Ala Ala Ala
-15 -10 -5 -1
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
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85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
115 120 125
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130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn
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Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
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Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
<210> 3
<211> 316
<212> PRT
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 3
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
115 120 125
Ala Asn Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
<210> 4
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser
50 55 60
Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala
65 70 75 80
Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr
115 120 125
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Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn
225 230 235 240
Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser
260 265 270
Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
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Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu
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<211> 1044
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<213> 解木聚糖柯恩氏菌
<220>
<221> CDS
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<220>
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<220>
<221> 成熟肽
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atg ttg cgc aaa gcg gtt gcg gtg ttc atc acc ttg gtg ttg gga ctg 48
Met Leu Arg Lys Ala Val Ala Val Phe Ile Thr Leu Val Leu Gly Leu
-25 -20 -15
act cta cta tcg gcg cag gga gga cga ccg cag gaa gcg gcg gcg gct 96
Thr Leu Leu Ser Ala Gln Gly Gly Arg Pro Gln Glu Ala Ala Ala Ala
-10 -5 -1 1
ccg tcg ttc gct aag gga gcg gac atc agc tgg gtg ccg gga atg gaa 144
Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
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gcg caa ggg tac agg tgg aag gac aag aac ggc gtg cag cgg gac atc 192
Ala Gln Gly Tyr Arg Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
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ctg gac att ctc aag aac gat tac cag atc aac tcc gtc cgc att cgg 240
Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
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gta tgg gtc aat cct tcg agc agc tat acg aac ggc tac ctg aac aag 288
Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
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gac cgg gcg gcc gcg ctc gcg aag cgg gcg aag gcg gcg ggg ctc agc 336
Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser
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gtc atg ctg acg ctg cat tac agc gac agc tgg gcc gac ccc ggg aag 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag acg aag ccg gcg gcg tgg gcc ggg tac aac ttc cag cag ctg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Gly Tyr Asn Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110 115
gac gcg gtg tgg aac tgg acg cgc gag gtc atg acg acg atg cag gcc 480
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Glu Val Met Thr Thr Met Gln Ala
120 125 130
agc ggg gtg acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac aac 528
Ser Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
135 140 145
ggc atg ctg tgg gac gac ggg aag gcc tcg ctg agc atg aag aat tac 576
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr
150 155 160
gcc tgg ctc gtc aac acg ggc aac aac gcg gtc aag tcg atc agc agc 624
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
ggg acg aaa acg atc gtg cat ctc gcc aac ggg tac gac aat tcg ttg 672
Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190 195
ttc gtc tgg aac atc ggc ggc ctg atc gcg aac ggc gcc acg ttc gac 720
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp
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att atc ggc atg tcg ctg tat ccg agc gcg tcc gac tgg tcc tcg aag 768
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ser Lys
215 220 225
gtg acg cag acg atc tcc aac gcg aac gat atg atc tcc cgg tac ggc 816
Val Thr Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
aag ccg atc atg atc acg gag atc ggc atg gac tac aac cag ccg tcg 864
Lys Pro Ile Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser
245 250 255
gcg gcc aag agc ttc gtc gcg gat atc aag acg aag atc cgc agc ctg 912
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Ser Leu
260 265 270 275
tcc ggc ggc cga ggg ctc ggc gtc ttc tac tgg gag ccg gag gcg acc 960
Ser Gly Gly Arg Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
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Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met
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aag ccg acg atc gct ctc gaa ggt ttt ctg aac taa 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
310 315
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<211> 347
<212> PRT
<213> 解木聚糖柯恩氏菌
<400> 6
Met Leu Arg Lys Ala Val Ala Val Phe Ile Thr Leu Val Leu Gly Leu
-25 -20 -15
Thr Leu Leu Ser Ala Gln Gly Gly Arg Pro Gln Glu Ala Ala Ala Ala
-10 -5 -1 1
Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
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Ala Gln Gly Tyr Arg Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
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Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
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Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
55 60 65
Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser
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Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Gly Tyr Asn Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110 115
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Glu Val Met Thr Thr Met Gln Ala
120 125 130
Ser Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
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Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr
150 155 160
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190 195
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<213> 解木聚糖柯恩氏菌
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<221> 成熟肽
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Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met
145 150 155 160
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
165 170 175
Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp
180 185 190
Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala
195 200 205
Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp
210 215 220
Ser Ser Lys Val Thr Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser
225 230 235 240
Arg Tyr Gly Lys Pro Ile Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn
245 250 255
Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile
260 265 270
Arg Ser Leu Ser Gly Gly Arg Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
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290 295 300
Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
305 310 315
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<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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<400> 8
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Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala
65 70 75 80
Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser Val Met Leu Thr Leu
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130 135 140
Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp
145 150 155 160
Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn
165 170 175
Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile
180 185 190
Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile
195 200 205
Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser
210 215 220
Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ser Lys Val Thr Gln Thr Ile
225 230 235 240
Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Ile Met Ile
245 250 255
Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe
260 265 270
Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Ser Leu Ser Gly Gly Arg Gly
275 280 285
Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly
290 295 300
Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala
305 310 315 320
Leu Glu Gly Phe Leu Asn
325
<210> 9
<211> 1050
<212> DNA
<213> 冻原类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
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atg gaa gcc caa ggt tac aaa tgg aaa gat aaa aac ggg gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
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gac atc att gat att ttg aaa aag gac tat caa att aac tcc gtt cgc 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
att cgg gtc ttt gtt aat cct tcg aat gat tat ggg aac ggt tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aat aag gaa cgt gcg gct aca ctc gca caa cgt gct aaa aat gcc ggc 336
Asn Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gta atg ctt acc ctg cat tac agc gac tct tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggt caa cag acc aaa cca gct gcc tgg aaa aac tat acc ttc caa cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctc atg gac gca gtg tgg aat cac aca cgt gat gtc atg act gcg atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
caa agc aaa ggc gtt acc ccg gac tgg gta cag atc ggg aat gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agt aac ggc atg tta tgg gaa gat ggt aaa gca tcc acc aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aac tat gcg tgg ctg gtg aac aca ggc cat aat gca gtg aaa tcc ctg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
agc agt ggc acc aaa acc att gtg cac ctg gca ggt ggg gat gat aac 672
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctc tat gta tgg aat att ggt ggt ttg atc aat aat gga gct aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttt gac atg att gcc atg tcc ctc tac cct tcg gct tcc ggc tgg aac 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtg acg aat acg gta aac aat gcc aag gat atg atc aac cgt 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
tat ggc aaa gag atc atc atc tcc gaa att ggc atg gat aat aac cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
gct gca gca ggt aaa agt ttt gtt gcg gcg atg aaa aac caa atc cgc 912
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
aat ctg ccg aat ggc aaa gga aaa ggc gta ttc tac tgg gag cct cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca ggt tat aac agt ggc tac ggc aaa ggc gct tgg caa tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg ccg aca gtt gtc atg gaa gga ttt att gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 10
<211> 349
<212> PRT
<213> 冻原类芽孢杆菌
<400> 10
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Thr Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
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100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
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Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 11
<211> 316
<212> PRT
<213> 冻原类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 11
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala
245 250 255
Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
290 295 300
Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 12
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp
35 40 45
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50 55 60
Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala
65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
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100 105 110
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130 135 140
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145 150 155 160
Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn
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<213> 巴其诺类芽孢杆菌
<220>
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<220>
<221> 信号肽
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<220>
<221> 成熟肽
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Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Val Lys Thr Ser Val Leu Leu
-35 -30 -25 -20
gca ttg gtt ttg tta ttt act tct att ctg ctg cct gca ggc cag cac 96
Ala Leu Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Leu Leu Pro Ala Gly Gln His
-15 -10 -5
gcc agc gcc gca ccg agc ttt gcc aag gga gct gac atc agc tgg gtt 144
Ala Ser Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val
-1 1 5 10
ccc ggc atg gag gct caa ggg tac aaa tgg aag gat aaa aac ggg gta 192
Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val
15 20 25
caa cgt gat att att gat att ttg aaa aag gat tac caa att aac tcc 240
Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser
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gtt cgt att cgg gta ttc gtt aat cca tcg aac gat tat ggt aac ggt 288
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tac atg aat aag gat cgc gcg gct gct ctt gca cag cgt gcc aaa aat 336
Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn
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Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala
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gac cca ggc aaa caa agc aaa cca gcg gca tgg aaa aat tac tcc ttc 432
Asp Pro Gly Lys Gln Ser Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Ser Phe
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caa cag ctc atg gac gct gtc tgg aat tat aca cgt gaa gtg atg aca 480
Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Tyr Thr Arg Glu Val Met Thr
110 115 120 125
gct atg caa aac aaa ggg gtt acg ccg gac tgg gta cag atc ggt aac 528
Ala Met Gln Asn Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn
130 135 140
gaa aca agc aac ggc atg tta tgg gat gac ggg aaa gcc tct gtt aac 576
Glu Thr Ser Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn
145 150 155
atg aaa aac tat gca tgg ctc gtg aac aca gga cat aat gcg gta aaa 624
Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys
160 165 170
tcc att agc agc ggc acc aaa acg atc gtt cat ctg gcc ggt ggc gac 672
Ser Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp
175 180 185
gac aat gcg ctg tat gtc tgg aat att ggc ggc ctg atc aac aac ggc 720
Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly
190 195 200 205
gct aac ttt gac atg atc gct atg tcg ctt tac cct tcc gct tcc ggc 768
Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly
210 215 220
tgg aat act gcg gtg acc aac acg gtc aac aat gca aag gat atg atc 816
Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile
225 230 235
aat cgg tac ggc aaa gag atc atg atc tcc gaa att ggc atg gac aac 864
Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn
240 245 250
aat cag gcg gcg gca ggc aaa agc ttc gta gct gcg atg aaa aat caa 912
Asn Gln Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln
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Ile Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu
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ccg cag gct aca cct ggc tat aac ggt gga tac ggt aaa ggc gct tgg 1008
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Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 14
<211> 351
<212> PRT
<213> 巴其诺类芽孢杆菌
<400> 14
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Val Lys Thr Ser Val Leu Leu
-35 -30 -25 -20
Ala Leu Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Leu Leu Pro Ala Gly Gln His
-15 -10 -5
Ala Ser Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val
-1 1 5 10
Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val
15 20 25
Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser
30 35 40 45
Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn
65 70 75
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Asp Pro Gly Lys Gln Ser Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Ser Phe
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130 135 140
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145 150 155
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160 165 170
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190 195 200 205
Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly
210 215 220
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225 230 235
Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn
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Asn Gln Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln
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290 295 300
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305 310 315
<210> 15
<211> 316
<212> PRT
<213> 巴其诺类芽孢杆菌
<400> 15
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
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50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
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Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala
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305 310 315
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<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 16
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Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
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145 150 155 160
Lys Ala Ser Val Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
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195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn
225 230 235 240
Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala
260 265 270
Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly
275 280 285
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290 295 300
Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu
305 310 315 320
Gly Phe Ile Asp
<210> 17
<211> 1044
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种-62603
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 信号肽
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (94)..(1041)
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atg aaa cga agg ttt tac agt ttg acg ctt gtt gtc gcc ttg tta atg 48
Met Lys Arg Arg Phe Tyr Ser Leu Thr Leu Val Val Ala Leu Leu Met
-30 -25 -20
act att ttt gga gtg aat ggg gga tct gtg ccg cag gtc agc gca gct 96
Thr Ile Phe Gly Val Asn Gly Gly Ser Val Pro Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
cct gca ttc gcg aaa ggt gcg gac att agc tgg gta gtc ggc atg gag 144
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu
5 10 15
gcg caa ggg tat acg tgg aag gac aaa aac ggc gta act agg gac att 192
Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile
20 25 30
att caa att ttg aag cag gat tac caa atc aac tcc gta cgt att cga 240
Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
gta ttc gtc aat cct tct tcg aac tat ggc aac ggg tat atg aat aaa 288
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys
50 55 60 65
gat cgc gct gca acc ttg gcg aag cgg gcg aag gat gct ggg atg agc 336
Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser
70 75 80
gtc atg ctt aca ttg cat tac agc gat tcg tgg gcg gac ccc gga aaa 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag aca aag cca gcg gct tgg gca agc tat tcg ttc cag cag ctg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110
gat gca gtt tat aat cat acg cgt gag gta atg aca gct atg caa agc 480
Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser
115 120 125
aaa ggt gtc aca ccg gat tgg gtg caa atc ggc aac gaa acg aac gat 528
Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp
130 135 140 145
ggc atg ctc tgg aat gac ggg aaa gct tcc tta aac atg caa aac tac 576
Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr
150 155 160
gct tgg ctg atc aac act ggc aac aat gcg gtc aag tcc att agt tca 624
Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
gct aca aaa acg att gtc cac ttg tcc aac ggt tat gac aac agt tta 672
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180 185 190
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245 250 255
gct gcc aaa agc ttt gtc gct gat ata aag aca aaa ata cgt aat att 912
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile
260 265 270
gca ggt gga aaa ggg ctt ggc gtg ttt tat tgg gaa ccg gaa gcg acc 960
Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
cct ggt tat aac gga ggt tat aat aag gga gct tgg cag gcg gac ggc 1008
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly
290 295 300 305
aaa cca aca att gcg ctt gac ggc ttc ttg aat taa 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 18
<211> 347
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种-62603
<400> 18
Met Lys Arg Arg Phe Tyr Ser Leu Thr Leu Val Val Ala Leu Leu Met
-30 -25 -20
Thr Ile Phe Gly Val Asn Gly Gly Ser Val Pro Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu
5 10 15
Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile
20 25 30
Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys
50 55 60 65
Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser
70 75 80
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110
Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser
115 120 125
Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp
130 135 140 145
Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr
150 155 160
Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Ala Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp
195 200 205
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr Lys
210 215 220 225
Val Thr Gln Thr Val Ser Asn Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
Lys Pro Val Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ala
245 250 255
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile
260 265 270
Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly
290 295 300 305
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 19
<211> 316
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种-62603
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 19
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Lys Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
Asp Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Ala Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Val Ser Asn Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Val Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro
245 250 255
Ala Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Ile Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Gly Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
305 310 315
<210> 20
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 20
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Ser
50 55 60
Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala
65 70 75 80
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Tyr Asn His Thr
115 120 125
Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly
165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ala Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr Lys Val Thr Gln Thr Val Ser Asn
225 230 235 240
Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Val Met Ile Thr Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ala Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala
260 265 270
Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
290 295 300
Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp
305 310 315 320
Gly Phe Leu Asn
<210> 21
<211> 1050
<212> DNA
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
<400> 21
atg ctt aaa ttt gta agg ggt tac aaa aca tcg att gct ctt gtt ctt 48
Met Leu Lys Phe Val Arg Gly Tyr Lys Thr Ser Ile Ala Leu Val Leu
-30 -25 -20
gtg ttg ttg ttc acc tcc att atg ctg cct gtg ggt cag cat gtc agc 96
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Val Gly Gln His Val Ser
-15 -10 -5
gca gca ccc agc ttc gcc aag ggg gct gat ata agc tgg gta cca ggc 144
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gcg caa ggg tac aaa tgg aaa gac aaa aat ggt gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
gac att att gat att ttg aaa aac gat tat cag atc aac tcg gtt cgt 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
atc cgg gtg ttt gtt aat cct tct aat gat tac ggc aac ggg tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aat aag gat cgt gtc gct gct ttg gca cag cgg gcc aaa aac gcg ggc 336
Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gtc atg ttg act ctg cac tac agt gat tcc tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggc caa cag acc aaa ccg gca gcc tgg aaa aac tac acc ttc cag cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctg atg gat gcc gtt tgg aat cat aca cgc gat gtg atg acg gcc atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
cag agt aaa ggg gtt acg cct gac tgg gta caa atc ggg aac gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agc aac ggc atg tta tgg gag gac ggt aaa gcg tcc acg aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aat tac gca tgg ctg gtg aac acg ggc cat aat gcc gtc aag tcc atg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met
160 165 170 175
agt aca ggg acc aaa acg att gtc cat ctt gca ggc ggt gac gac aat 672
Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctt tat gta tgg aat atc ggc gga ctg atc aac aac ggt gcc aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttc gat atg att gcc atg tcc ctc tat cct tcg gct tcc ggc tgg aat 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtc acc aat acg gtg aat aat gcc aag gac ttg atc aac cgc 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg
225 230 235
tac ggc aaa gag att atc gtc tca gaa atc ggc atg gac aac aat cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
ccc gca gct ggc aaa agt ttc gtt gct gcg atg aaa aat caa ttc cgc 912
Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg
260 265 270
aac ctg cca aat ggg aaa gga aaa ggc gta ttc tac tgg gag ccg cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca ggt tat aac ggt ggt tac ggc aaa ggc gct tgg cag tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg cca aca gcg gtc atg gaa gga ttt ata gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 22
<211> 349
<212> PRT
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌
<400> 22
Met Leu Lys Phe Val Arg Gly Tyr Lys Thr Ser Ile Ala Leu Val Leu
-30 -25 -20
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Val Gly Gln His Val Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met
160 165 170 175
Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg
225 230 235
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 23
<211> 316
<212> PRT
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 23
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Ser
130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met Ser
165 170 175
Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Pro
245 250 255
Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg Asn
260 265 270
Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
290 295 300
Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 24
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 24
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn
50 55 60
Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala
65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr
115 120 125
Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
His Asn Ala Val Lys Ser Met Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn
225 230 235 240
Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala
260 265 270
Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
290 295 300
Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu
305 310 315 320
Gly Phe Ile Asp
<210> 25
<211> 1638
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种-18179
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1635)
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> 该基因具有替代的起始密码子gtg，其通常编码Val，但当它是第一个密码子时翻译成Met。
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(87)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (88)..(1635)
<400> 25
gtg ggt aaa tgg gtt aga gct att gct tta gca ggt gta gtt gca ctt 48
Val Gly Lys Trp Val Arg Ala Ile Ala Leu Ala Gly Val Val Ala Leu
-25 -20 -15
ttt aca tct atg atc act cct ctt caa gaa aca aag gct gct gga ggc 96
Phe Thr Ser Met Ile Thr Pro Leu Gln Glu Thr Lys Ala Ala Gly Gly
-10 -5 -1 1
ttc gtt atg ggg gga gac gtt tca atg ctc cat gaa gtt gag cag tta 144
Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu
5 10 15
ggc ggg aag ttt tac gat cag ggc act cca aag gat gct ttg caa att 192
Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile
20 25 30 35
tta agc gca cat ggc atg aat gct gtc cga ttg cgt cta tgg gtt gac 240
Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp
40 45 50
ccg tat gac agt ttc gga aat cct tat ggc ggt gga aca aac gat ctg 288
Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu
55 60 65
gct acg act ata tct ctt gca cag cga gcg aag gca caa ggt atg gag 336
Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu
70 75 80
gtg ctg ctg gat ttt cac ttc agt gat ttc tgg gca gac cca ggg aag 384
Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag aac aag cct aaa gct tgg cag agc tta acg tac aac cag ctg ctt 432
Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu
100 105 110 115
act acg gta tat gat tat acg cat agt gta att acg caa atg aaa gcg 480
Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala
120 125 130
gct ggc gtg atg cct gat atg gtt cag gta gga aac gag gca agc agc 528
Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser
135 140 145
ggc atc ctc tgg aat gat ggc aag gtg ggg gga ggc att gat gat ttt 576
Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe
150 155 160
acg aaa ctc gga gaa ctg ttt acc tct gct att aat ggg att aat gcg 624
Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala
165 170 175
gcc ctc agc tct agt gag aac att gag att gtt ctg cat ttg gat cat 672
Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His
180 185 190 195
ggc ggc gac aac aat tta tac act tgg tgg ttc gat aaa att gaa gcg 720
Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala
200 205 210
gag aac gtg gat tac gat att atc ggc ttg acc tac tat ccg ttt tgg 768
Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp
215 220 225
cat gga acg atg gga gaa ttg gcg tat aat ctt aat gcg atc agc agt 816
His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser
230 235 240
cgt tac aat aag gac gta atg att gtg gaa acg tcg tat ggc ttt acg 864
Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr
245 250 255
ctg gat gat ggt gat ggt tta ggc aac tct ttt tac acg gcg gaa gaa 912
Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu
260 265 270 275
agc att ggg ggt tac ccg gct aca gta gaa ggc cag acg gcg tat ttg 960
Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu
280 285 290
cgg gat ttg aag gaa att gtt agg gat gtc cca aac aac cgc ggc cgc 1008
Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg
295 300 305
ggc att ttc tgg tgg gag ccg aca tgg ctg cct gtt gca ggg gct aac 1056
Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn
310 315 320
tgg ggg acg gat gca ggc aag ctg tac aac aat gat act gga cta cta 1104
Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu
325 330 335
tct aat cct tgg gac aat cag acc ttg ttt gat ttt aat gga aat gtg 1152
Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val
340 345 350 355
ttg tct aca gtt tca gta ttt aca caa agt gct cca acc aac ctt gtt 1200
Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val
360 365 370
gct aat cat agc ttt gag gcc gat ggt tgg aca aca aca cca tct agc 1248
Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser
375 380 385
tgg aat cgc tgg gca gcc gat acg gca tcc tat aat gct att aag gtt 1296
Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val
390 395 400
gaa gaa aac ggt att acg ggc agc tat aag ctg acg cat tgg agt gat 1344
Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp
405 410 415
tct gct tat gag gcc tct acg tac cag act gtt tca gga tta agc aat 1392
Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn
420 425 430 435
ggt acc tat act tta tcc gct tgg gtg ctt aac agt ggc gga caa aat 1440
Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn
440 445 450
acg ctg cag ctt tac gct aaa aat tac ggg ggt tca gaa cgg aac gtc 1488
Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val
455 460 465
aat ctt cct gtt agc cca aca aag tgg gta aaa gta aaa att gaa aac 1536
Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn
470 475 480
atc agt gtt aca aat ggt caa atc gaa tta ggc att tat tca gat gcg 1584
Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala
485 490 495
aat gct gat aat tgg atg aac ctc gat aac gtc aaa ctt tat aaa aca 1632
Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr
500 505 510 515
aac tag 1638
Asn
<210> 26
<211> 545
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种-18179
<400> 26
Val Gly Lys Trp Val Arg Ala Ile Ala Leu Ala Gly Val Val Ala Leu
-25 -20 -15
Phe Thr Ser Met Ile Thr Pro Leu Gln Glu Thr Lys Ala Ala Gly Gly
-10 -5 -1 1
Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu
5 10 15
Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile
20 25 30 35
Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp
40 45 50
Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu
55 60 65
Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu
70 75 80
Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu
100 105 110 115
Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala
120 125 130
Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser
135 140 145
Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe
150 155 160
Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala
165 170 175
Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His
180 185 190 195
Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala
200 205 210
Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp
215 220 225
His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser
230 235 240
Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr
245 250 255
Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu
260 265 270 275
Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu
280 285 290
Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg
295 300 305
Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn
310 315 320
Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu
325 330 335
Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val
340 345 350 355
Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val
360 365 370
Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser
375 380 385
Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val
390 395 400
Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp
405 410 415
Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn
420 425 430 435
Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn
440 445 450
Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val
455 460 465
Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn
470 475 480
Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala
485 490 495
Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr
500 505 510 515
Asn
<210> 27
<211> 516
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种-18179
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(516)
<400> 27
Ala Gly Gly Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val
1 5 10 15
Glu Gln Leu Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala
20 25 30
Leu Gln Ile Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu
35 40 45
Trp Val Asp Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr
50 55 60
Asn Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln
65 70 75 80
Gly Met Glu Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp
85 90 95
Pro Gly Lys Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn
100 105 110
Gln Leu Leu Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln
115 120 125
Met Lys Ala Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu
130 135 140
Ala Ser Ser Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile
145 150 155 160
Asp Asp Phe Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly
165 170 175
Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His
180 185 190
Leu Asp His Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys
195 200 205
Ile Glu Ala Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr
210 215 220
Pro Phe Trp His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala
225 230 235 240
Ile Ser Ser Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr
245 250 255
Gly Phe Thr Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr
260 265 270
Ala Glu Glu Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr
275 280 285
Ala Tyr Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn
290 295 300
Arg Gly Arg Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala
305 310 315 320
Gly Ala Asn Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr
325 330 335
Gly Leu Leu Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn
340 345 350
Gly Asn Val Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr
355 360 365
Asn Leu Val Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr
370 375 380
Pro Ser Ser Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala
385 390 395 400
Ile Lys Val Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His
405 410 415
Trp Ser Asp Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly
420 425 430
Leu Ser Asn Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly
435 440 445
Gly Gln Asn Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu
450 455 460
Arg Asn Val Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys
465 470 475 480
Ile Glu Asn Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr
485 490 495
Ser Asp Ala Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu
500 505 510
Tyr Lys Thr Asn
515
<210> 28
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(524)
<400> 28
His His His His His His Pro Arg Ala Gly Gly Phe Val Met Gly Gly
1 5 10 15
Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu Gly Gly Lys Phe Tyr
20 25 30
Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile Leu Ser Ala His Gly
35 40 45
Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp Pro Tyr Asp Ser Phe
50 55 60
Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ser
65 70 75 80
Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu Val Leu Leu Asp Phe
85 90 95
His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Asn Lys Pro Lys
100 105 110
Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu Thr Thr Val Tyr Asp
115 120 125
Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala Ala Gly Val Met Pro
130 135 140
Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser Gly Ile Leu Trp Asn
145 150 155 160
Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe Thr Lys Leu Gly Glu
165 170 175
Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ser Ser
180 185 190
Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His Gly Gly Asp Asn Asn
195 200 205
Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala Glu Asn Val Asp Tyr
210 215 220
Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp His Gly Thr Met Gly
225 230 235 240
Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser Arg Tyr Asn Lys Asp
245 250 255
Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr Leu Asp Asp Gly Asp
260 265 270
Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu Ser Ile Gly Gly Tyr
275 280 285
Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu Arg Asp Leu Lys Glu
290 295 300
Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg Gly Ile Phe Trp Trp
305 310 315 320
Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn Trp Gly Thr Asp Ala
325 330 335
Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu Ser Asn Pro Trp Asp
340 345 350
Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val Leu Ser Thr Val Ser
355 360 365
Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val Ala Asn His Ser Phe
370 375 380
Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser Trp Asn Arg Trp Ala
385 390 395 400
Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val Glu Glu Asn Gly Ile
405 410 415
Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp Ser Ala Tyr Glu Ala
420 425 430
Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn Gly Thr Tyr Thr Leu
435 440 445
Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn Thr Leu Gln Leu Tyr
450 455 460
Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val Asn Leu Pro Val Ser
465 470 475 480
Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn Ile Ser Val Thr Asn
485 490 495
Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala Asn Ala Asp Asn Trp
500 505 510
Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr Asn
515 520
<210> 29
<211> 1053
<212> DNA
<213> 皮奥利亚类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1050)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1050)
<400> 29
atg aaa aca ggt aac cgc acg atg gta ttt gcg atg ttg atc ttg ctt 48
Met Lys Thr Gly Asn Arg Thr Met Val Phe Ala Met Leu Ile Leu Leu
-30 -25 -20
tcc agc tta ttg tat ccg ttc ggc tct gta ggg ttg ggt gcg gct tcg 96
Ser Ser Leu Leu Tyr Pro Phe Gly Ser Val Gly Leu Gly Ala Ala Ser
-15 -10 -5
gcc gcc cct gct ttc gcc aaa gga gca gat ata agc tgg gta gca gga 144
Ala Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gcg caa ggt atg act tgg aag gat aaa aag ggt gtt cgt cga 192
Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg
20 25 30
gat ata ctg caa att ttg cga gat gac tat cag atc aac tcg gta cgt 240
Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
atc cgt gtg tgg gta aac ccc gac atg aaa gat tat gca agc gga tac 288
Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr
50 55 60
atg aat gcc gaa aag gca gca gaa ctg gcg cag cga gct aaa aaa ttg 336
Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu
65 70 75
ggt atg agc gtt atg ctg act cta cat tat agt gat tcc tgg gca gat 384
Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp
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cca ggg caa cag aac aaa cct tat gcg tgg cgc aat ttt aca ttt aca 432
Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr
100 105 110
caa ctc atg gat gca gtc tgg tct cat acg gtt tat gtt atg aac acg 480
Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr
115 120 125
atg aaa agc aag ggg gta aca ccg gac tgg gtg cag atc ggt aat gag 528
Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu
130 135 140
acg aac aat gga atg ctc tgg gaa gac ggc aaa gct tcg gtg aac atg 576
Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met
145 150 155
aaa aac tat gcc tgg ctc gtc aat aca ggt aat aat gct gta aaa tcg 624
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
160 165 170 175
gta agc agc agt act aaa acg ata gta cat tta gcc aac ggg gat aac 672
Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn
180 185 190
ggt tcc gtg ttg aac tgg aat atc ggc gga ctg att gat aat gga gct 720
Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala
195 200 205
cag ttt gat ctc atc ggg ctg tct ctg tat ccg tct cct tct gac tgg 768
Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp
210 215 220
cag ggc aag gtg gat cag acg att acg aat gcc aat aac ctc att gcc 816
Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala
225 230 235
aaa tac ggt aaa ggt att gtc atc agt gaa atc ggg atg gaa tat aac 864
Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn
240 245 250 255
gaa cct gca gct tcc aag gca ttt att tct gca atc aaa aca aag gtt 912
Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val
260 265 270
cgg aac atg gga ggc ggc aaa ggc aca ggg gta ttt tat tgg gag ccg 960
Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
gct gca act cca ggt tac aat caa ggt tat aac aaa ggt gct tgg cag 1008
Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln
290 295 300
gct gac ggt aaa cca acc tca gct ttg gag gga ttt gta aat taa 1053
Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 30
<211> 350
<212> PRT
<213> 皮奥利亚类芽孢杆菌
<400> 30
Met Lys Thr Gly Asn Arg Thr Met Val Phe Ala Met Leu Ile Leu Leu
-30 -25 -20
Ser Ser Leu Leu Tyr Pro Phe Gly Ser Val Gly Leu Gly Ala Ala Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg
20 25 30
Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr
50 55 60
Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu
65 70 75
Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp
80 85 90 95
Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr
100 105 110
Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr
115 120 125
Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu
130 135 140
Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met
145 150 155
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
160 165 170 175
Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn
180 185 190
Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala
195 200 205
Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp
210 215 220
Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala
225 230 235
Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn
240 245 250 255
Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val
260 265 270
Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln
290 295 300
Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 31
<211> 317
<212> PRT
<213> 皮奥利亚类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(317)
<400> 31
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu Gly
65 70 75 80
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
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Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr Met
115 120 125
Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Lys
145 150 155 160
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Val
165 170 175
Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn Gly
180 185 190
Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala Gln
195 200 205
Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp Gln
210 215 220
Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala Lys
225 230 235 240
Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn Glu
245 250 255
Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val Arg
260 265 270
Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Ala
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala
290 295 300
Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 32
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(325)
<400> 32
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met
50 55 60
Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu
65 70 75 80
Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His
85 90 95
Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala
100 105 110
Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His
115 120 125
Thr Val Tyr Val Met Asn Thr Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp
130 135 140
Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp
145 150 155 160
Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr
165 170 175
Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val
180 185 190
His Leu Ala Asn Gly Asp Asn Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly
195 200 205
Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr
225 230 235 240
Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser
245 250 255
Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile
260 265 270
Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr
275 280 285
Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly
290 295 300
Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu
305 310 315 320
Glu Gly Phe Val Asn
325
<210> 33
<211> 1050
<212> DNA
<213> 食木糖类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
<400> 33
atg ttc aaa aat gta agg ggt ttc agg ata tcc atc atg ttg gct ttt 48
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Arg Ile Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
gtt ttg tta ttc acc tcc atc atg ttg ccc gca ggt cag cat gcc agc 96
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
gca gca cca agt ttc gcc aaa gga gcc gac atc agt tgg gtt ccc gga 144
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gct caa ggc tac aaa tgg aaa gat aaa aac ggg gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
gac atc att gat att ttg aaa aat gac tat caa atc aat tcc gtt cgt 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
att cgg gtc ttt gtt aat cct tcg aac gat tat ggg aac ggt tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aac aag gat cgt gcg gct gca ctc gca caa cgt gcc aag aat gcc ggc 336
Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gta atg ctc acc ctg cac tac agc gat tcc tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggt caa cag acc aaa cca gct gcc tgg aaa aac tac acg ttc cag cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctc atg gat gcg gtg tgg aat cac aca cgt gat gtc atg act gca atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
caa agc aaa ggc gtt acc ccg gac tgg gta cag atc ggg aat gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agc aac ggc atg tta tgg gaa gat ggc aaa gca tct acc aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aac tat gcg tgg ctg gta aac aca ggc cat aat gca gtg aaa tcc ctg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
agc agc ggc acc aaa acc att gtg cat ctg gca ggt gga gat gat aac 672
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctc tat gta tgg aat att gga ggc ctg atc aat aac gga gcc aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttt gac atg att gcg atg tcc ctc tac cct tcg gct tcc ggc tgg aac 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtg acg aat aca gta aac aat gcc aag gat atg atc aac cgt 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
tat ggc aaa gag atc att atc tcc gaa att ggt atg gac aat aac cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
gct gca gct ggt aaa agt ttt gtt gcg gcg atg aaa aac caa atc cgc 912
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
aat ctg ccg aat ggt aaa ggc aaa ggc gta ttc tac tgg gag cct cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca gga tac aac agc ggc tat ggc aaa ggt gca tgg caa tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg ccg acg gta gtc atg gaa gga ttt att gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
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<211> 349
<212> PRT
<213> 食木糖类芽孢杆菌
<400> 34
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Arg Ile Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
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-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
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Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
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100 105 110
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210 215 220
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225 230 235
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Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 35
<211> 316
<212> PRT
<213> 食木糖类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 35
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
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Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Ser
130 135 140
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165 170 175
Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
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Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala
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260 265 270
Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
290 295 300
Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 36
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
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Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn
50 55 60
Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala
65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
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Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
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<220>
<221> 成熟肽
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acc ctg gcg ctc ggc aac gcc gtg tct ccc ggc gac gcg aaa gcc gcc 96
Thr Leu Ala Leu Gly Asn Ala Val Ser Pro Gly Asp Ala Lys Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
ccg gca ttt gcg aaa ggc gcg gac atc agc tgg gtt ccg ggc atg gag 144
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
gcg caa ggg tac aaa tgg aag gac aaa aac ggc gtg cag cgg gac atc 192
Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
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att gat att tta aag cag gat tac cag atc aac tcc gtc cgg atc cgc 240
Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
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gtg ttt gtc aat ccg tca agc gat tac ggc aac ggc tac ttg aac aag 288
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
50 55 60 65
gaa cgc gcg gcc gac ttg gcc cag cgg gcg aaa aac gcc ggc atg agc 336
Glu Arg Ala Ala Asp Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser
70 75 80
gtc atg ctg acg ctg cac tac agc gat tcg tgg gcg gac ccc ggc aag 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
caa acc aag ccg gcc gcg tgg caa aat tat acg ttc gag caa ttg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Gln Asn Tyr Thr Phe Glu Gln Leu Met
100 105 110
gac gcc gta tgg aac tgg acg cgc gat gtg atg acg acg atg cag agc 480
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ser
115 120 125
aga ggc gtt acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac aac 528
Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
130 135 140 145
ggc atg ctg tgg gat gac ggc aag gcg tcc gtc aac atg cgt aat tac 576
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Arg Asn Tyr
150 155 160
gcc tgg ctc gtc aat acc ggc aac aat gcg gtc aag tcg atc agc agc 624
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
tcc acg aag acg atc gtc cat ctt tcc aac ggc tac gac aat tcg ctg 672
Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190
ttc gtc tgg aac atc ggt ggg ctg atc agc aac ggc gcg acg ttt gac 720
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe Asp
195 200 205
att atc ggc atg tcg ctg tac ccg tcc gcg tcc gac tgg cag acg aag 768
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr Lys
210 215 220 225
gtc aat cag acg atc agc aac gcg aac gat ctg att tcg cgc tac ggc 816
Val Asn Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Leu Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
aag agc atc atg atc tcc gaa atc ggc atg gac tac aac cag cct tcg 864
Lys Ser Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser
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gcc gcg aag agc ttc atc tcc gac atc aag acg aag gtc cgg aat ctt 912
Ala Ala Lys Ser Phe Ile Ser Asp Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Leu
260 265 270
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Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
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Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp Met
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aag ccg acg atc gcg ctg gaa ggc ttc ctg aac tga 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 38
<211> 347
<212> PRT
<213> 光滑柯恩氏菌
<400> 38
Met Lys Arg Lys Thr Phe Gly Trp Leu Leu Thr Ala Leu Leu Gly Leu
-30 -25 -20
Thr Leu Ala Leu Gly Asn Ala Val Ser Pro Gly Asp Ala Lys Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
20 25 30
Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
50 55 60 65
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70 75 80
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
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Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Gln Asn Tyr Thr Phe Glu Gln Leu Met
100 105 110
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ser
115 120 125
Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
130 135 140 145
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150 155 160
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165 170 175
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<211> 316
<212> PRT
<213> 光滑柯恩氏菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 39
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
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Lys Glu Arg Ala Ala Asp Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
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115 120 125
Ser Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
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165 170 175
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe
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Leu Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
305 310 315
<210> 40
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 40
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
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Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Ser
50 55 60
Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Glu Arg Ala Ala Asp Leu Ala
65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Gln Asn Tyr Thr Phe Glu Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr
115 120 125
Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ser Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Val Asn Met Arg Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr Lys Val Asn Gln Thr Ile Ser Asn
225 230 235 240
Ala Asn Asp Leu Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Ser Ile Met Ile Ser Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe Ile Ser
260 265 270
Asp Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Leu Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
290 295 300
Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu
305 310 315 320
Gly Phe Leu Asn
<210> 41
<211> 3352
<212> DNA
<213> 副榛色钩囊菌
<220>
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<220>
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atg acg cgc ctt agt gag tgg gct ttc gtc cta ctc tca act ttg ggc 48
Met Thr Arg Leu Ser Glu Trp Ala Phe Val Leu Leu Ser Thr Leu Gly
-20 -15 -10
gtc ttc gcg gct gct cag gcc caa aca gtg tcg caa tgg ccc atc cac 96
Val Phe Ala Ala Ala Gln Ala Gln Thr Val Ser Gln Trp Pro Ile His
-5 -1 1 5
gac aat gac ttg aac aca gtc gtc cag tgg gac cac tac agc ttc atc 144
Asp Asn Asp Leu Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Ile
10 15 20 25
att aac gga cag cgt atc ttc gtt ttc tcg ggc gaa ttc cac tac tgg 192
Ile Asn Gly Gln Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
cgc att ccg gtc ccc ggg tta tgg agg gat atc ctc gag aag gtc aaa 240
Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55
gcg gcc gga ttc act gcg ttt gca ttc tac tcc agc tgg gcg tac cac 288
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
60 65 70
gct ccg aat aac cac acc gtc gac ttc tcg aca ggt gcc cgt gat atc 336
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile
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cgt ccg ggg ccc tac gtc aac gcg gaa gcc aat gct ggt ggc tac cct 432
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Tyr Pro
110 115 120
ctt tgg ctc acc acc ggt gct tat gga agc ctg agg aac aat gac acg 480
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asn Asp Thr
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cgg tac atc aat gcc ttg gaa cct tac ttt tcc aag gtg tcg cag atc 528
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aca agc cag tat cag atc acc aac gac cac aac acc atc tgc tat caa 576
Thr Ser Gln Tyr Gln Ile Thr Asn Asp His Asn Thr Ile Cys Tyr Gln
155 160 165
atc gag aac gag tat ggc cag caa tgg atc ggc agt gca tac gac agg 624
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Ser Ala Tyr Asp Arg
170 175 180 185
gtt ccg aat gag acg gcc att gca tac atg gaa atc ctc aag gcg agc 672
Val Pro Asn Glu Thr Ala Ile Ala Tyr Met Glu Ile Leu Lys Ala Ser
190 195 200
gct cgc aga aat ggc att gat att cct ctc acg gcg aat gac ccg aac 720
Ala Arg Arg Asn Gly Ile Asp Ile Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215
atg aac act cgt tcg tgg ggg aaa gac tgg tcc gac gaa ggt gga aac 768
Met Asn Thr Arg Ser Trp Gly Lys Asp Trp Ser Asp Glu Gly Gly Asn
220 225 230
gtg gac atc ccc ggc gtc gac tcc tat cct tcg gtatgtggag actatgatca 821
Val Asp Ile Pro Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser
235 240
ttttggaggt gaaccttttc tgatgttttt ttcttcatct ccgtcttcca g tgc tgg 878
Cys Trp
245
tca tgc gac ctc agt gta tgc act tcg aca aac gga gta tac gtc ccg 926
Ser Cys Asp Leu Ser Val Cys Thr Ser Thr Asn Gly Val Tyr Val Pro
250 255 260
ttc cag gtc ctg aac tac tac gac tat ttc gca gaa acg tca ccg acg 974
Phe Gln Val Leu Asn Tyr Tyr Asp Tyr Phe Ala Glu Thr Ser Pro Thr
265 270 275
atg ccg tca ttc atg cca gaa ttt cag ggt ggc tct tac aat ccc tgg 1022
Met Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp
280 285 290
ggc ggt ccc gaa ggt ggc tgt ccg gac gac ata gga ccg gaa ttt gcg 1070
Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro Asp Asp Ile Gly Pro Glu Phe Ala
295 300 305 310
aac ctg ttc tac agg tgg aac atc ggt cag cgt gtc acg gct atg agt 1118
Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser
315 320 325
ttg tat atg ctc tat gga gga aca aac tgg ggt gca atg gct gct ccc 1166
Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Met Ala Ala Pro
330 335 340
gtg aca gct agc agc tat gac tat tct gct ccc atc tca gag gat cgc 1214
Val Thr Ala Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg
345 350 355
tcc atc ggc gcg aaa tac tat gag acc aag ctc ctg ggg ctg ttc agt 1262
Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Phe Ser
360 365 370
cgg agc gcg cga gac ctg acc gtg acg gat ctg atc ggc aat gga acc 1310
Arg Ser Ala Arg Asp Leu Thr Val Thr Asp Leu Ile Gly Asn Gly Thr
375 380 385 390
cag tat acc aac aac gtg atg att cag gca cgc gaa ctc aga aac ccg 1358
Gln Tyr Thr Asn Asn Val Met Ile Gln Ala Arg Glu Leu Arg Asn Pro
395 400 405
gaa acc aat gcc gct ttc tac gtc aca gtt cat acc aac acc tct gtt 1406
Glu Thr Asn Ala Ala Phe Tyr Val Thr Val His Thr Asn Thr Ser Val
410 415 420
tct act aac gag gtc ttc cac ctg aga gtc aac acc tct gcc gga gct 1454
Ser Thr Asn Glu Val Phe His Leu Arg Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala
425 430 435
cta acg att cct aaa cac gcg ctt ggc att cga ctg aat ggt cac cag 1502
Leu Thr Ile Pro Lys His Ala Leu Gly Ile Arg Leu Asn Gly His Gln
440 445 450
tcg aag atc ata gtg acg gac ttt acc ttc ggc ccc agg act ctg ctc 1550
Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe Gly Pro Arg Thr Leu Leu
455 460 465 470
tac tcg acc gca gaa gtc ctc gcc tat gcc gcg ctg gac gac acc cca 1598
Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Ala Tyr Ala Ala Leu Asp Asp Thr Pro
475 480 485
act ctg gct ctc tgg gtt cca cct gga gag tcc gga gag ttt aac gtc 1646
Thr Leu Ala Leu Trp Val Pro Pro Gly Glu Ser Gly Glu Phe Asn Val
490 495 500
aag ggc gca aaa tcg gga tcg gtc aag aaa tgc cag ggg tgt tcg aac 1694
Lys Gly Ala Lys Ser Gly Ser Val Lys Lys Cys Gln Gly Cys Ser Asn
505 510 515
gtc cag ttc cac cag gaa aac ggt ggt ctt aca gtc gcc ttc act caa 1742
Val Gln Phe His Gln Glu Asn Gly Gly Leu Thr Val Ala Phe Thr Gln
520 525 530
tct caa ggg atg agc gtt gtg gaa ctg aac gat ggt agt cgc gtg gtt 1790
Ser Gln Gly Met Ser Val Val Glu Leu Asn Asp Gly Ser Arg Val Val
535 540 545 550
ctg ctt gac agg gaa tcc gca tac cgt ttc tgg gct cca gca ttg act 1838
Leu Leu Asp Arg Glu Ser Ala Tyr Arg Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr
555 560 565
aac gat cca ttc gtg ccg gag gat gag act g gtgcgtgttt tccttatgcc 1889
Asn Asp Pro Phe Val Pro Glu Asp Glu Thr
570 575
aatcgtgaaa aaaaaaaatg cttgctgacc tgccaagcag tt ctg atc caa ggc 1943
Val Leu Ile Gln Gly
580
ccc tac ctc gtc cgc ggg gct aaa ctg tca ggc tct acg ctg tcg gta 1991
Pro Tyr Leu Val Arg Gly Ala Lys Leu Ser Gly Ser Thr Leu Ser Val
585 590 595
aca ggt gat atc gtg aat gca acg acc gtg gag atc ttc gcg ccc aaa 2039
Thr Gly Asp Ile Val Asn Ala Thr Thr Val Glu Ile Phe Ala Pro Lys
600 605 610
acc gtc aag tcc att acc tgg aac ggg aga gaa ctg aag act tcg aag 2087
Thr Val Lys Ser Ile Thr Trp Asn Gly Arg Glu Leu Lys Thr Ser Lys
615 620 625
acg tct tat ggc agt ctg cag ggc tct ttg aag gct cct gca ccc gtc 2135
Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Gln Gly Ser Leu Lys Ala Pro Ala Pro Val
630 635 640 645
aaa ttg ccc gct ctt acc ggc tgg aaa tcc aag gac agc ttg ccc gag 2183
Lys Leu Pro Ala Leu Thr Gly Trp Lys Ser Lys Asp Ser Leu Pro Glu
650 655 660
cgg ctt gca tca tat gac gac tct ggt gcg gcc tgg gtt g gtgagtagaa 2233
Arg Leu Ala Ser Tyr Asp Asp Ser Gly Ala Ala Trp Val
665 670
gaaaatcata agcagttgaa cggagcggaa tagaacagaa tcggtaaact gacatccacc 2293
aag at gcc aac cac atg aca aca ttg aac ccg agc cct cca gca aca 2340
Asp Ala Asn His Met Thr Thr Leu Asn Pro Ser Pro Pro Ala Thr
675 680 685
ctt cca gtc cta tac gcc gac gaa tat g gtattgccgc ctcctttcca 2388
Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu Tyr
690 695
cctgtttccg acgatccgtc atactgactt tcgtatag gc ttc cac aac ggc gtc 2443
Gly Phe His Asn Gly Val
700
cgt ctc tgg cga ggc tac ttc aac ggc acc gct acg ggg gtc ttc ttg 2491
Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Thr Ala Thr Gly Val Phe Leu
705 710 715 720
aac atc caa gga gga agc gcc tt gtaagctatt cacaatcgcc actcagcaaa 2544
Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe
725
gcccgggtcc aatactaaca tctcgacaca cag c ggc tgg tca gcc tac ctc 2596
Gly Trp Ser Ala Tyr Leu
730
aac ggc cac ttc ctg gga tcc cat ctc ggc gcc gcc tcc atc gcc caa 2644
Asn Gly His Phe Leu Gly Ser His Leu Gly Ala Ala Ser Ile Ala Gln
735 740 745 750
gcc aac cgt acc ctc tcc ttc gcc aac gcc acc ctc aat gcc ttt ggc 2692
Ala Asn Arg Thr Leu Ser Phe Ala Asn Ala Thr Leu Asn Ala Phe Gly
755 760 765
ccc aat gtc ctc ctc gtc atc cac gac gac aca ggc cac gat caa acc 2740
Pro Asn Val Leu Leu Val Ile His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr
770 775 780
acc ggt gcc ctg aac ccg cgc ggc att ctg aac gcg acc ctc ctc tcc 2788
Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Asn Ala Thr Leu Leu Ser
785 790 795
ggc gac gac tcg gcc caa ttc act cac tgg cgc ctc gcc ggc acc gcc 2836
Gly Asp Asp Ser Ala Gln Phe Thr His Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala
800 805 810
ggc ggc gaa tcc aac ctc gac ccc gtc cgc ggc gtg tac aac gaa gac 2884
Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp
815 820 825 830
ggc ctc ttc gcc gag cgc gtc ggc tgg cac ctc ccc ggg ttc gac gac 2932
Gly Leu Phe Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp
835 840 845
tcg gct tgg ccc gac gcc tcg tct ccg cgc gag ggc ttc gcg ggc gcg 2980
Ser Ala Trp Pro Asp Ala Ser Ser Pro Arg Glu Gly Phe Ala Gly Ala
850 855 860
acc gtc cgg ttc tac cgg acc acc gtg gcc tta gac ctg ccg cgg gac 3028
Thr Val Arg Phe Tyr Arg Thr Thr Val Ala Leu Asp Leu Pro Arg Asp
865 870 875
gtg gac gcg tcg ata tcg ttc gtg ttc tcg act cct ccg tcg tcg tcc 3076
Val Asp Ala Ser Ile Ser Phe Val Phe Ser Thr Pro Pro Ser Ser Ser
880 885 890
gcc gcg tac cgg gcc cag ttg ttc gtg aac gga tac cag tac ggt cgg 3124
Ala Ala Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg
895 900 905 910
tat cat ccg cac atc ggc aac cag gtc gtg tac ccg gtt cca ccg ggc 3172
Tyr His Pro His Ile Gly Asn Gln Val Val Tyr Pro Val Pro Pro Gly
915 920 925
atc ttg gat tac cag ggc gac aac acc atc ggg gtc gca gtg tgg gcg 3220
Ile Leu Asp Tyr Gln Gly Asp Asn Thr Ile Gly Val Ala Val Trp Ala
930 935 940
cag acg gag gaa ggg gca cgg gtg ggg ttg gac tgg cgc gtg aac tat 3268
Gln Thr Glu Glu Gly Ala Arg Val Gly Leu Asp Trp Arg Val Asn Tyr
945 950 955
gtg gcg gat agt tcc ttg gat gtt tct ttc gac ggg gct gcg ttg aga 3316
Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val Ser Phe Asp Gly Ala Ala Leu Arg
960 965 970
ccg ggg tgg gac gag ggg cgg ttg cag tat gca tag 3352
Pro Gly Trp Asp Glu Gly Arg Leu Gln Tyr Ala
975 980 985
<210> 42
<211> 1008
<212> PRT
<213> 副榛色钩囊菌
<400> 42
Met Thr Arg Leu Ser Glu Trp Ala Phe Val Leu Leu Ser Thr Leu Gly
-20 -15 -10
Val Phe Ala Ala Ala Gln Ala Gln Thr Val Ser Gln Trp Pro Ile His
-5 -1 1 5
Asp Asn Asp Leu Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Ile
10 15 20 25
Ile Asn Gly Gln Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
60 65 70
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile
75 80 85
Thr Pro Ile Phe Asp Leu Ala Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Val Ile Val
90 95 100 105
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Tyr Pro
110 115 120
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asn Asp Thr
125 130 135
Arg Tyr Ile Asn Ala Leu Glu Pro Tyr Phe Ser Lys Val Ser Gln Ile
140 145 150
Thr Ser Gln Tyr Gln Ile Thr Asn Asp His Asn Thr Ile Cys Tyr Gln
155 160 165
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Ser Ala Tyr Asp Arg
170 175 180 185
Val Pro Asn Glu Thr Ala Ile Ala Tyr Met Glu Ile Leu Lys Ala Ser
190 195 200
Ala Arg Arg Asn Gly Ile Asp Ile Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215
Met Asn Thr Arg Ser Trp Gly Lys Asp Trp Ser Asp Glu Gly Gly Asn
220 225 230
Val Asp Ile Pro Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asp
235 240 245
Leu Ser Val Cys Thr Ser Thr Asn Gly Val Tyr Val Pro Phe Gln Val
250 255 260 265
Leu Asn Tyr Tyr Asp Tyr Phe Ala Glu Thr Ser Pro Thr Met Pro Ser
270 275 280
Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro
285 290 295
Glu Gly Gly Cys Pro Asp Asp Ile Gly Pro Glu Phe Ala Asn Leu Phe
300 305 310
Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met
315 320 325
Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Met Ala Ala Pro Val Thr Ala
330 335 340 345
Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly
350 355 360
Ala Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Phe Ser Arg Ser Ala
365 370 375
Arg Asp Leu Thr Val Thr Asp Leu Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr
380 385 390
Asn Asn Val Met Ile Gln Ala Arg Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn
395 400 405
Ala Ala Phe Tyr Val Thr Val His Thr Asn Thr Ser Val Ser Thr Asn
410 415 420 425
Glu Val Phe His Leu Arg Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile
430 435 440
Pro Lys His Ala Leu Gly Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile
445 450 455
Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe Gly Pro Arg Thr Leu Leu Tyr Ser Thr
460 465 470
Ala Glu Val Leu Ala Tyr Ala Ala Leu Asp Asp Thr Pro Thr Leu Ala
475 480 485
Leu Trp Val Pro Pro Gly Glu Ser Gly Glu Phe Asn Val Lys Gly Ala
490 495 500 505
Lys Ser Gly Ser Val Lys Lys Cys Gln Gly Cys Ser Asn Val Gln Phe
510 515 520
His Gln Glu Asn Gly Gly Leu Thr Val Ala Phe Thr Gln Ser Gln Gly
525 530 535
Met Ser Val Val Glu Leu Asn Asp Gly Ser Arg Val Val Leu Leu Asp
540 545 550
Arg Glu Ser Ala Tyr Arg Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro
555 560 565
Phe Val Pro Glu Asp Glu Thr Val Leu Ile Gln Gly Pro Tyr Leu Val
570 575 580 585
Arg Gly Ala Lys Leu Ser Gly Ser Thr Leu Ser Val Thr Gly Asp Ile
590 595 600
Val Asn Ala Thr Thr Val Glu Ile Phe Ala Pro Lys Thr Val Lys Ser
605 610 615
Ile Thr Trp Asn Gly Arg Glu Leu Lys Thr Ser Lys Thr Ser Tyr Gly
620 625 630
Ser Leu Gln Gly Ser Leu Lys Ala Pro Ala Pro Val Lys Leu Pro Ala
635 640 645
Leu Thr Gly Trp Lys Ser Lys Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Ala Ser
650 655 660 665
Tyr Asp Asp Ser Gly Ala Ala Trp Val Asp Ala Asn His Met Thr Thr
670 675 680
Leu Asn Pro Ser Pro Pro Ala Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu
685 690 695
Tyr Gly Phe His Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly
700 705 710
Thr Ala Thr Gly Val Phe Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe Gly
715 720 725
Trp Ser Ala Tyr Leu Asn Gly His Phe Leu Gly Ser His Leu Gly Ala
730 735 740 745
Ala Ser Ile Ala Gln Ala Asn Arg Thr Leu Ser Phe Ala Asn Ala Thr
750 755 760
Leu Asn Ala Phe Gly Pro Asn Val Leu Leu Val Ile His Asp Asp Thr
765 770 775
Gly His Asp Gln Thr Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Asn
780 785 790
Ala Thr Leu Leu Ser Gly Asp Asp Ser Ala Gln Phe Thr His Trp Arg
795 800 805
Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly
810 815 820 825
Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu
830 835 840
Pro Gly Phe Asp Asp Ser Ala Trp Pro Asp Ala Ser Ser Pro Arg Glu
845 850 855
Gly Phe Ala Gly Ala Thr Val Arg Phe Tyr Arg Thr Thr Val Ala Leu
860 865 870
Asp Leu Pro Arg Asp Val Asp Ala Ser Ile Ser Phe Val Phe Ser Thr
875 880 885
Pro Pro Ser Ser Ser Ala Ala Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly
890 895 900 905
Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr His Pro His Ile Gly Asn Gln Val Val Tyr
910 915 920
Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr Gln Gly Asp Asn Thr Ile Gly
925 930 935
Val Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly Ala Arg Val Gly Leu Asp
940 945 950
Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val Ser Phe Asp
955 960 965
Gly Ala Ala Leu Arg Pro Gly Trp Asp Glu Gly Arg Leu Gln Tyr Ala
970 975 980 985
<210> 43
<211> 985
<212> PRT
<213> 副榛色钩囊菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(985)
<400> 43
Gln Thr Val Ser Gln Trp Pro Ile His Asp Asn Asp Leu Asn Thr Val
1 5 10 15
Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Ile Ile Asn Gly Gln Arg Ile Phe
20 25 30
Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu
35 40 45
Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe
50 55 60
Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn His Thr Val
65 70 75 80
Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile Thr Pro Ile Phe Asp Leu Ala
85 90 95
Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Val Ile Val Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn
100 105 110
Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Tyr Pro Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala
115 120 125
Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asn Asp Thr Arg Tyr Ile Asn Ala Leu Glu
130 135 140
Pro Tyr Phe Ser Lys Val Ser Gln Ile Thr Ser Gln Tyr Gln Ile Thr
145 150 155 160
Asn Asp His Asn Thr Ile Cys Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln
165 170 175
Gln Trp Ile Gly Ser Ala Tyr Asp Arg Val Pro Asn Glu Thr Ala Ile
180 185 190
Ala Tyr Met Glu Ile Leu Lys Ala Ser Ala Arg Arg Asn Gly Ile Asp
195 200 205
Ile Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn Met Asn Thr Arg Ser Trp Gly
210 215 220
Lys Asp Trp Ser Asp Glu Gly Gly Asn Val Asp Ile Pro Gly Val Asp
225 230 235 240
Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asp Leu Ser Val Cys Thr Ser Thr
245 250 255
Asn Gly Val Tyr Val Pro Phe Gln Val Leu Asn Tyr Tyr Asp Tyr Phe
260 265 270
Ala Glu Thr Ser Pro Thr Met Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly
275 280 285
Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro Asp Asp
290 295 300
Ile Gly Pro Glu Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln
305 310 315 320
Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp
325 330 335
Gly Ala Met Ala Ala Pro Val Thr Ala Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala
340 345 350
Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys
355 360 365
Leu Leu Gly Leu Phe Ser Arg Ser Ala Arg Asp Leu Thr Val Thr Asp
370 375 380
Leu Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Asn Asn Val Met Ile Gln Ala
385 390 395 400
Arg Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn Ala Ala Phe Tyr Val Thr Val
405 410 415
His Thr Asn Thr Ser Val Ser Thr Asn Glu Val Phe His Leu Arg Val
420 425 430
Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile Pro Lys His Ala Leu Gly Ile
435 440 445
Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe
450 455 460
Gly Pro Arg Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Ala Tyr Ala
465 470 475 480
Ala Leu Asp Asp Thr Pro Thr Leu Ala Leu Trp Val Pro Pro Gly Glu
485 490 495
Ser Gly Glu Phe Asn Val Lys Gly Ala Lys Ser Gly Ser Val Lys Lys
500 505 510
Cys Gln Gly Cys Ser Asn Val Gln Phe His Gln Glu Asn Gly Gly Leu
515 520 525
Thr Val Ala Phe Thr Gln Ser Gln Gly Met Ser Val Val Glu Leu Asn
530 535 540
Asp Gly Ser Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Glu Ser Ala Tyr Arg Phe
545 550 555 560
Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Phe Val Pro Glu Asp Glu Thr
565 570 575
Val Leu Ile Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg Gly Ala Lys Leu Ser Gly
580 585 590
Ser Thr Leu Ser Val Thr Gly Asp Ile Val Asn Ala Thr Thr Val Glu
595 600 605
Ile Phe Ala Pro Lys Thr Val Lys Ser Ile Thr Trp Asn Gly Arg Glu
610 615 620
Leu Lys Thr Ser Lys Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Gln Gly Ser Leu Lys
625 630 635 640
Ala Pro Ala Pro Val Lys Leu Pro Ala Leu Thr Gly Trp Lys Ser Lys
645 650 655
Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Ala Ser Tyr Asp Asp Ser Gly Ala Ala
660 665 670
Trp Val Asp Ala Asn His Met Thr Thr Leu Asn Pro Ser Pro Pro Ala
675 680 685
Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu Tyr Gly Phe His Asn Gly Val
690 695 700
Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Thr Ala Thr Gly Val Phe Leu
705 710 715 720
Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe Gly Trp Ser Ala Tyr Leu Asn Gly
725 730 735
His Phe Leu Gly Ser His Leu Gly Ala Ala Ser Ile Ala Gln Ala Asn
740 745 750
Arg Thr Leu Ser Phe Ala Asn Ala Thr Leu Asn Ala Phe Gly Pro Asn
755 760 765
Val Leu Leu Val Ile His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr Thr Gly
770 775 780
Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Asn Ala Thr Leu Leu Ser Gly Asp
785 790 795 800
Asp Ser Ala Gln Phe Thr His Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly
805 810 815
Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu
820 825 830
Phe Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Ala
835 840 845
Trp Pro Asp Ala Ser Ser Pro Arg Glu Gly Phe Ala Gly Ala Thr Val
850 855 860
Arg Phe Tyr Arg Thr Thr Val Ala Leu Asp Leu Pro Arg Asp Val Asp
865 870 875 880
Ala Ser Ile Ser Phe Val Phe Ser Thr Pro Pro Ser Ser Ser Ala Ala
885 890 895
Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr His
900 905 910
Pro His Ile Gly Asn Gln Val Val Tyr Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu
915 920 925
Asp Tyr Gln Gly Asp Asn Thr Ile Gly Val Ala Val Trp Ala Gln Thr
930 935 940
Glu Glu Gly Ala Arg Val Gly Leu Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala
945 950 955 960
Asp Ser Ser Leu Asp Val Ser Phe Asp Gly Ala Ala Leu Arg Pro Gly
965 970 975
Trp Asp Glu Gly Arg Leu Gln Tyr Ala
980 985
<210> 44
<211> 3391
<212> DNA
<213> 爪甲曲霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(801)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(3388)
<220>
<221> CDS
<222> (847)..(1831)
<220>
<221> CDS
<222> (1883)..(2176)
<220>
<221> CDS
<222> (2236)..(2307)
<220>
<221> CDS
<222> (2368)..(2458)
<220>
<221> CDS
<222> (2527)..(3388)
<400> 44
atg gcg cga gtc ttt caa ctg ctt ctc ttc ctc ctg gga agc ttt cag 48
Met Ala Arg Val Phe Gln Leu Leu Leu Phe Leu Leu Gly Ser Phe Gln
-20 -15 -10 -5
ctt ctg aca gca gct cag aac agc tcc caa acc gaa tgg cct gta cat 96
Leu Leu Thr Ala Ala Gln Asn Ser Ser Gln Thr Glu Trp Pro Val His
-1 1 5 10
gac aac ggg cta agc gag gtc gtc caa tgg gac cat tac agc ttt tac 144
Asp Asn Gly Leu Ser Glu Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Tyr
15 20 25
gtt cac ggc cag cgg ttc ttc ctg ttc tca ggg gaa ttt cac tac tgg 192
Val His Gly Gln Arg Phe Phe Leu Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
cga atc cca gtc ccg gcc ttg tgg cgc gac att ttg gag aag gtc aag 240
Arg Ile Pro Val Pro Ala Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
gcg ctt ggg ttc acc ggc ttt gcg ttc tac tca agc tgg gca tac cat 288
Ala Leu Gly Phe Thr Gly Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
gcg ccc aac aac cac acg gtc gac ttc tcg acc ggt gcg cgc aac atc 336
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asn Ile
80 85 90
aag cac atc ttt gac ctt gca gag gag ctt gga atg tac att att gtg 384
Lys His Ile Phe Asp Leu Ala Glu Glu Leu Gly Met Tyr Ile Ile Val
95 100 105
cga ccc gga ccg tac gtc aac gct gaa gcc tct gct ggt ggg ttt ccg 432
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
ctc tgg ctt aca aca ggc gcg tat ggg tcg aca agg aac gac gat cct 480
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Thr Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
aga tat acc gcg gcg tgg aag cca tat ttt tct aag gtg tct gag atc 528
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Ser Lys Val Ser Glu Ile
145 150 155
acg agc agg tat cag gtc acg gat ggt cac aat acg ttg att tac cag 576
Thr Ser Arg Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Ile Tyr Gln
160 165 170
atc gag aat gag tat ggg cag cag tgg atc ggg gat ccg gtc gat agg 624
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Val Asp Arg
175 180 185
gac ctt aac gag aca gct gct gct tat atg gat ttg ttg aaa gcg aca 672
Asp Leu Asn Glu Thr Ala Ala Ala Tyr Met Asp Leu Leu Lys Ala Thr
190 195 200
gct cgt gaa aac gga atc aag gtg ccc ttg act gcg aac gat cct aac 720
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Lys Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
atg gga tca aaa tct tgg ggc aac gac tgg tcg gat gct gca ggg aac 768
Met Gly Ser Lys Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asp Ala Ala Gly Asn
225 230 235
gtc gat gct gtg ggg ttg gac tct tat cct tct gtgagtgctc agtctccata 821
Val Asp Ala Val Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser
240 245
atcaagtcct gtctaatcga tcaag tgc tgg agc tgc gac gtc agc gtc tgc 873
Cys Trp Ser Cys Asp Val Ser Val Cys
250 255
aca gga acg aac gga gaa tac gta cca tac caa gta ata aac tac tac 921
Thr Gly Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Gln Val Ile Asn Tyr Tyr
260 265 270
gac tac ttc aac gaa gtc cag cca agc atg cct ttc ttc atg ccc gaa 969
Asp Tyr Phe Asn Glu Val Gln Pro Ser Met Pro Phe Phe Met Pro Glu
275 280 285
ttc caa gga gga tcg tat aat cca tgg ggt ggc cct gag ggt ggc tgt 1017
Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys
290 295 300
ccc gag gac acc gga gcg gac ttt gcc aac ttg ttc tac agg tgg aat 1065
Pro Glu Asp Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn
305 310 315 320
atc ggg cag cgc gag aca gcc ata agt ctg tac atg att ttc ggg gga 1113
Ile Gly Gln Arg Glu Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Met Ile Phe Gly Gly
325 330 335
aca aac tgg ggt ggt atc gcc gcg cca gtc acc gca acc agt tat gac 1161
Thr Asn Trp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr Asp
340 345 350
tac tcc gct cct atc tca gag gat cga tcg ata ggc tca aag ttc tac 1209
Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ser Lys Phe Tyr
355 360 365
gag aca aag ctg cta gcc ctg ttc aca cga gct gcg aaa gat ttg act 1257
Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Ala Ala Lys Asp Leu Thr
370 375 380
gtg act gat cgt gtc ggc aac gga acg cag tat acg agc aat aaa gcc 1305
Val Thr Asp Arg Val Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Ser Asn Lys Ala
385 390 395 400
gtc agc gca att gag ctg cgc aac cct gag acc aat acg ggt ttt tac 1353
Val Ser Ala Ile Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn Thr Gly Phe Tyr
405 410 415
gtg acc agc cac ttg gac act aca acc ggc aca gac gag gcc ttc aag 1401
Val Thr Ser His Leu Asp Thr Thr Thr Gly Thr Asp Glu Ala Phe Lys
420 425 430
ctg cac gtc aac acc tcc gaa ggg gca ttc acc atc cca agg cta aat 1449
Leu His Val Asn Thr Ser Glu Gly Ala Phe Thr Ile Pro Arg Leu Asn
435 440 445
ggc acc ata agg ctt aat ggc cat caa tca aag att atc gtc acc gac 1497
Gly Thr Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp
450 455 460
ttc aaa ttc ggc ttc aag acg ctt tta tac tca acc gca gag gtt ctc 1545
Phe Lys Phe Gly Phe Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu
465 470 475 480
acc tac gca gtc ttt gac cat aaa cca act ctc gtc ctt tgg gtt ccc 1593
Thr Tyr Ala Val Phe Asp His Lys Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro
485 490 495
act ggt gaa tca ggc gaa ttc gca atc aaa ggc gcg aaa tca ggt tct 1641
Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Ser
500 505 510
gct tcg act gcg tcg gtg cag ttc cat cgg cac gga aga aca ctg act 1689
Ala Ser Thr Ala Ser Val Gln Phe His Arg His Gly Arg Thr Leu Thr
515 520 525
gtt ggg ttt acc cag gct aaa ggc ctg agt gtt ctg gag ctt gat aat 1737
Val Gly Phe Thr Gln Ala Lys Gly Leu Ser Val Leu Glu Leu Asp Asn
530 535 540
ggc gtc aga gta gtt ttg ctg gat agg gag gcg gcg tat acg ttc tgg 1785
Gly Val Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Glu Ala Ala Tyr Thr Phe Trp
545 550 555 560
gca cct gcc ttg acg gac aat ccg ctt gtt cct gag ggt gaa agt g 1831
Ala Pro Ala Leu Thr Asp Asn Pro Leu Val Pro Glu Gly Glu Ser
565 570 575
gtgagttccc ttttttctct ctcttaataa tcggtgatgc taataaagta g tc ctt 1887
Val Leu
gtc agc gga ccc tac ctc gtc cga tcc tcc aaa cta tcc gga tca acc 1935
Val Ser Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ser Lys Leu Ser Gly Ser Thr
580 585 590
cta gct cta cga ggt gac tcg ctg ggc gaa aca aca cta gaa gtc ttt 1983
Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Leu Gly Glu Thr Thr Leu Glu Val Phe
595 600 605
gct cca aac aat gta aag aag gtg aca tgg aac gga aag aag gtc aag 2031
Ala Pro Asn Asn Val Lys Lys Val Thr Trp Asn Gly Lys Lys Val Lys
610 615 620 625
gtg tct agg acc aaa tac ggg agc ctg aaa gcc aac ctc gcc gaa ccg 2079
Val Ser Arg Thr Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Ala Asn Leu Ala Glu Pro
630 635 640
cgc tct gtg gaa ctg ccc gct ctc gac gga tgg aag gtc agc gac agc 2127
Arg Ser Val Glu Leu Pro Ala Leu Asp Gly Trp Lys Val Ser Asp Ser
645 650 655
ctg cca gag agg ttc tca gac tat gat gac tcg ggc aag gct tgg gtt g 2176
Leu Pro Glu Arg Phe Ser Asp Tyr Asp Asp Ser Gly Lys Ala Trp Val
660 665 670
gtatgttaca tactccgtat acctggatct ttgaagagat aaaatactga catgagcag 2235
cc gca aac cat ctg aca aca ccc aat ccc aat aaa cca gcg act ctc 2282
Ala Ala Asn His Leu Thr Thr Pro Asn Pro Asn Lys Pro Ala Thr Leu
675 680 685
ccc gtt ctc tac gcc aat gaa tat g gtattccgcc tgaactctaa 2327
Pro Val Leu Tyr Ala Asn Glu Tyr
690 695
ctcggatcaa ccagatcatg agctaacaac ttgattccag gc ttc cac aac ggc 2381
Gly Phe His Asn Gly
700
gtc cgc ctc tgg cgc ggc tac ttt aac tcc tct act gcg acg ggc gtc 2429
Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Ser Ser Thr Ala Thr Gly Val
705 710 715
ttc cta aac atc caa ggc ggc gct gca tt gtacgtccaa ccaaacccct 2478
Phe Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ala Ala Phe
720 725
gccttctgta aagccagtca tgaacagaca taatactaat aaacccag c ggt tgg 2533
Gly Trp
730
tcc gcc tgg ctt aac ggc cag ctc att ggc tcg cac cta ggc aac gcg 2581
Ser Ala Trp Leu Asn Gly Gln Leu Ile Gly Ser His Leu Gly Asn Ala
735 740 745
acg atc gaa caa gcc aac gca aca ctc cca ttc ccg gac aac acc ctc 2629
Thr Ile Glu Gln Ala Asn Ala Thr Leu Pro Phe Pro Asp Asn Thr Leu
750 755 760
tcc aag aac gga gaa cag aat gtg ctc ctc gtc gtc cac gat gac acg 2677
Ser Lys Asn Gly Glu Gln Asn Val Leu Leu Val Val His Asp Asp Thr
765 770 775
gga cat gac cag aca acg ggt gtg ctc aac cca cga gga atc ctc gaa 2725
Gly His Asp Gln Thr Thr Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Glu
780 785 790
gcg cgt ctc ctc tca gac agt gaa gaa gag aat gaa gac gag caa gga 2773
Ala Arg Leu Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn Glu Asp Glu Gln Gly
795 800 805 810
gga ttc acg cat tgg cgc gtc gcg gga gct gca ggc ggc gaa tcg aac 2821
Gly Phe Thr His Trp Arg Val Ala Gly Ala Ala Gly Gly Glu Ser Asn
815 820 825
ctc gat ccc gtc cga ggt gtg tat aac gag gat gga ctc tac gcg gag 2869
Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu
830 835 840
cgt gtg ggt tgg cat tta cct ggg ttc gac gac agc gag tgg tct ctc 2917
Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Glu Trp Ser Leu
845 850 855
gca gac aat gcg aag gca cca cta gcc ttc acc ggc gca aca gtc aag 2965
Ala Asp Asn Ala Lys Ala Pro Leu Ala Phe Thr Gly Ala Thr Val Lys
860 865 870
ttc ttc cgg act gtc ata ccc ccg tta tcg atc cca gag ggc ctc gac 3013
Phe Phe Arg Thr Val Ile Pro Pro Leu Ser Ile Pro Glu Gly Leu Asp
875 880 885 890
gtc tcc atc tcg ttt gtg ttt tcc acg gcg aat gtg tcg tcc atc tcg 3061
Val Ser Ile Ser Phe Val Phe Ser Thr Ala Asn Val Ser Ser Ile Ser
895 900 905
acc acc acc acc aca aac tca acg gtt gga gaa gaa aac aaa ggc gat 3109
Thr Thr Thr Thr Thr Asn Ser Thr Val Gly Glu Glu Asn Lys Gly Asp
910 915 920
aaa tcg gcc ttc cgc gct caa ctc ttc gtc aac ggc tac cag tac gga 3157
Lys Ser Ala Phe Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly
925 930 935
cgg tac aat cca att gtc ggg aac caa gtt gcg tat cct gtc ccg ccg 3205
Arg Tyr Asn Pro Ile Val Gly Asn Gln Val Ala Tyr Pro Val Pro Pro
940 945 950
ggg att ttg gac tac aat gac gag aat acg gtt ggg gtt gca gtt tgg 3253
Gly Ile Leu Asp Tyr Asn Asp Glu Asn Thr Val Gly Val Ala Val Trp
955 960 965 970
gca cag acg gag gcc gga gcg gaa ttc ggg ctc gat tgg aaa gtc gat 3301
Ala Gln Thr Glu Ala Gly Ala Glu Phe Gly Leu Asp Trp Lys Val Asp
975 980 985
tat gtg ctt gag agt tcg ctg gat gtt gtg aat ttg gat gtg gag ggg 3349
Tyr Val Leu Glu Ser Ser Leu Asp Val Val Asn Leu Asp Val Glu Gly
990 995 1000
ttg agg ccg agg tgg agt gag gag agg gag aga ttt gcg tag 3391
Leu Arg Pro Arg Trp Ser Glu Glu Arg Glu Arg Phe Ala
1005 1010 1015
<210> 45
<211> 1035
<212> PRT
<213> 爪甲曲霉
<400> 45
Met Ala Arg Val Phe Gln Leu Leu Leu Phe Leu Leu Gly Ser Phe Gln
-20 -15 -10 -5
Leu Leu Thr Ala Ala Gln Asn Ser Ser Gln Thr Glu Trp Pro Val His
-1 1 5 10
Asp Asn Gly Leu Ser Glu Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Tyr
15 20 25
Val His Gly Gln Arg Phe Phe Leu Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
Arg Ile Pro Val Pro Ala Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
Ala Leu Gly Phe Thr Gly Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asn Ile
80 85 90
Lys His Ile Phe Asp Leu Ala Glu Glu Leu Gly Met Tyr Ile Ile Val
95 100 105
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Thr Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Ser Lys Val Ser Glu Ile
145 150 155
Thr Ser Arg Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Ile Tyr Gln
160 165 170
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Val Asp Arg
175 180 185
Asp Leu Asn Glu Thr Ala Ala Ala Tyr Met Asp Leu Leu Lys Ala Thr
190 195 200
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Lys Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
Met Gly Ser Lys Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asp Ala Ala Gly Asn
225 230 235
Val Asp Ala Val Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asp
240 245 250
Val Ser Val Cys Thr Gly Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Gln Val
255 260 265
Ile Asn Tyr Tyr Asp Tyr Phe Asn Glu Val Gln Pro Ser Met Pro Phe
270 275 280
Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro
285 290 295 300
Glu Gly Gly Cys Pro Glu Asp Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe
305 310 315
Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Glu Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Met
320 325 330
Ile Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala
335 340 345
Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly
350 355 360
Ser Lys Phe Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Ala Ala
365 370 375 380
Lys Asp Leu Thr Val Thr Asp Arg Val Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr
385 390 395
Ser Asn Lys Ala Val Ser Ala Ile Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn
400 405 410
Thr Gly Phe Tyr Val Thr Ser His Leu Asp Thr Thr Thr Gly Thr Asp
415 420 425
Glu Ala Phe Lys Leu His Val Asn Thr Ser Glu Gly Ala Phe Thr Ile
430 435 440
Pro Arg Leu Asn Gly Thr Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile
445 450 455 460
Ile Val Thr Asp Phe Lys Phe Gly Phe Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr
465 470 475
Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Phe Asp His Lys Pro Thr Leu Val
480 485 490
Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Ile Lys Gly Ala
495 500 505
Lys Ser Gly Ser Ala Ser Thr Ala Ser Val Gln Phe His Arg His Gly
510 515 520
Arg Thr Leu Thr Val Gly Phe Thr Gln Ala Lys Gly Leu Ser Val Leu
525 530 535 540
Glu Leu Asp Asn Gly Val Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Glu Ala Ala
545 550 555
Tyr Thr Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asp Asn Pro Leu Val Pro Glu
560 565 570
Gly Glu Ser Val Leu Val Ser Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ser Lys
575 580 585
Leu Ser Gly Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Leu Gly Glu Thr
590 595 600
Thr Leu Glu Val Phe Ala Pro Asn Asn Val Lys Lys Val Thr Trp Asn
605 610 615 620
Gly Lys Lys Val Lys Val Ser Arg Thr Lys Tyr Gly Ser Leu Lys Ala
625 630 635
Asn Leu Ala Glu Pro Arg Ser Val Glu Leu Pro Ala Leu Asp Gly Trp
640 645 650
Lys Val Ser Asp Ser Leu Pro Glu Arg Phe Ser Asp Tyr Asp Asp Ser
655 660 665
Gly Lys Ala Trp Val Ala Ala Asn His Leu Thr Thr Pro Asn Pro Asn
670 675 680
Lys Pro Ala Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asn Glu Tyr Gly Phe His
685 690 695 700
Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Ser Ser Thr Ala Thr
705 710 715
Gly Val Phe Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ala Ala Phe Gly Trp Ser Ala
720 725 730
Trp Leu Asn Gly Gln Leu Ile Gly Ser His Leu Gly Asn Ala Thr Ile
735 740 745
Glu Gln Ala Asn Ala Thr Leu Pro Phe Pro Asp Asn Thr Leu Ser Lys
750 755 760
Asn Gly Glu Gln Asn Val Leu Leu Val Val His Asp Asp Thr Gly His
765 770 775 780
Asp Gln Thr Thr Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Glu Ala Arg
785 790 795
Leu Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn Glu Asp Glu Gln Gly Gly Phe
800 805 810
Thr His Trp Arg Val Ala Gly Ala Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp
815 820 825
Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu Arg Val
830 835 840
Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Glu Trp Ser Leu Ala Asp
845 850 855 860
Asn Ala Lys Ala Pro Leu Ala Phe Thr Gly Ala Thr Val Lys Phe Phe
865 870 875
Arg Thr Val Ile Pro Pro Leu Ser Ile Pro Glu Gly Leu Asp Val Ser
880 885 890
Ile Ser Phe Val Phe Ser Thr Ala Asn Val Ser Ser Ile Ser Thr Thr
895 900 905
Thr Thr Thr Asn Ser Thr Val Gly Glu Glu Asn Lys Gly Asp Lys Ser
910 915 920
Ala Phe Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr
925 930 935 940
Asn Pro Ile Val Gly Asn Gln Val Ala Tyr Pro Val Pro Pro Gly Ile
945 950 955
Leu Asp Tyr Asn Asp Glu Asn Thr Val Gly Val Ala Val Trp Ala Gln
960 965 970
Thr Glu Ala Gly Ala Glu Phe Gly Leu Asp Trp Lys Val Asp Tyr Val
975 980 985
Leu Glu Ser Ser Leu Asp Val Val Asn Leu Asp Val Glu Gly Leu Arg
990 995 1000
Pro Arg Trp Ser Glu Glu Arg Glu Arg Phe Ala
1005 1010 1015
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<211> 1015
<212> PRT
<213> 爪甲曲霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(1015)
<400> 46
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Pro Ala Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys Ala Leu Gly Phe
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65 70 75 80
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Asp Leu Ala Glu Glu Leu Gly Met Tyr Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro
100 105 110
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Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Thr Arg Asn Asp Asp Pro Arg Tyr Thr Ala
130 135 140
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145 150 155 160
Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Ile Tyr Gln Ile Glu Asn Glu
165 170 175
Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Val Asp Arg Asp Leu Asn Glu
180 185 190
Thr Ala Ala Ala Tyr Met Asp Leu Leu Lys Ala Thr Ala Arg Glu Asn
195 200 205
Gly Ile Lys Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn Met Gly Ser Lys
210 215 220
Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asp Ala Ala Gly Asn Val Asp Ala Val
225 230 235 240
Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asp Val Ser Val Cys
245 250 255
Thr Gly Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Gln Val Ile Asn Tyr Tyr
260 265 270
Asp Tyr Phe Asn Glu Val Gln Pro Ser Met Pro Phe Phe Met Pro Glu
275 280 285
Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys
290 295 300
Pro Glu Asp Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn
305 310 315 320
Ile Gly Gln Arg Glu Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Met Ile Phe Gly Gly
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Ala Ala Lys Asp Leu Thr
370 375 380
Val Thr Asp Arg Val Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Ser Asn Lys Ala
385 390 395 400
Val Ser Ala Ile Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn Thr Gly Phe Tyr
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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660 665 670
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675 680 685
Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asn Glu Tyr Gly Phe His Asn Gly Val Arg
690 695 700
Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Ser Ser Thr Ala Thr Gly Val Phe Leu
705 710 715 720
Asn Ile Gln Gly Gly Ala Ala Phe Gly Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly
725 730 735
Gln Leu Ile Gly Ser His Leu Gly Asn Ala Thr Ile Glu Gln Ala Asn
740 745 750
Ala Thr Leu Pro Phe Pro Asp Asn Thr Leu Ser Lys Asn Gly Glu Gln
755 760 765
Asn Val Leu Leu Val Val His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr Thr
770 775 780
Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Glu Ala Arg Leu Leu Ser Asp
785 790 795 800
Ser Glu Glu Glu Asn Glu Asp Glu Gln Gly Gly Phe Thr His Trp Arg
805 810 815
Val Ala Gly Ala Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly
820 825 830
Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu
835 840 845
Pro Gly Phe Asp Asp Ser Glu Trp Ser Leu Ala Asp Asn Ala Lys Ala
850 855 860
Pro Leu Ala Phe Thr Gly Ala Thr Val Lys Phe Phe Arg Thr Val Ile
865 870 875 880
Pro Pro Leu Ser Ile Pro Glu Gly Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Val
885 890 895
Phe Ser Thr Ala Asn Val Ser Ser Ile Ser Thr Thr Thr Thr Thr Asn
900 905 910
Ser Thr Val Gly Glu Glu Asn Lys Gly Asp Lys Ser Ala Phe Arg Ala
915 920 925
Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro Ile Val
930 935 940
Gly Asn Gln Val Ala Tyr Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr Asn
945 950 955 960
Asp Glu Asn Thr Val Gly Val Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Ala Gly
965 970 975
Ala Glu Phe Gly Leu Asp Trp Lys Val Asp Tyr Val Leu Glu Ser Ser
980 985 990
Leu Asp Val Val Asn Leu Asp Val Glu Gly Leu Arg Pro Arg Trp Ser
995 1000 1005
Glu Glu Arg Glu Arg Phe Ala
1010 1015
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<212> DNA
<213> 溜曲霉
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> CDS
<222> (2886)..(3856)
<400> 47
atg ctc atc tcc aag acc gtg ttc agc ggg ctt gcc ttg ggg gcg tcc 48
Met Leu Ile Ser Lys Thr Val Phe Ser Gly Leu Ala Leu Gly Ala Ser
-20 -15 -10
ttt gtt ggc gtt tct ggt cag cag aat tca agc cgt tgg ccg ttg cac 96
Phe Val Gly Val Ser Gly Gln Gln Asn Ser Ser Arg Trp Pro Leu His
-5 -1 1 5 10
gac aac ggt ttg aca gac act gta gaa tg gtgggttcag tcaaattgcg 145
Asp Asn Gly Leu Thr Asp Thr Val Glu Trp
15 20
aattcaaggc tgtttggttg gctctgacac catggctata cag g gat cac tat agt 201
Asp His Tyr Ser
ttc ttg att aat ggt cag aga cat ttc gtt ttc tct gga gag 243
Phe Leu Ile Asn Gly Gln Arg His Phe Val Phe Ser Gly Glu
25 30 35
gtttgtccgc ccaatcccct atattctgta tattcaatac attaacatca tatag ttc 301
Phe
cat tac tgg cgt atc cct gt gtaaggcaag agtcccacaa cggcaacgct 351
His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
40 45
ctagctaatg gattaccag a ccc gaa tta tgg aga gat cta ctc gag aag 401
Pro Glu Leu Trp Arg Asp Leu Leu Glu Lys
50 55
atc aaa gcc gct gg gtaggtagtc tcagattctt gacgcccgtt gtcaacaaca 455
Ile Lys Ala Ala Gly
60
cgctaataac gaattggata g t ttc act gcc ttt tcc atc tac aat cac tgg 507
Phe Thr Ala Phe Ser Ile Tyr Asn His Trp
65 70
gga tat cat acc ccc aag ccc ggc gtt ctc gac ttc gag aac ggg gcc 555
Gly Tyr His Thr Pro Lys Pro Gly Val Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala
75 80 85
cac aac ttc act tcg atc atg act cta gcc aaa gag ata ggt ctc tac 603
His Asn Phe Thr Ser Ile Met Thr Leu Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr
90 95 100
atg att atc cga ccg ggc cca tac gtc aat gcg gaa gcc aat gct ggc 651
Met Ile Ile Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly
105 110 115
ggt ctc cct ctg tgg gca act aca ggt gcc tac gga aaa cta cgg gat 699
Gly Leu Pro Leu Trp Ala Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Lys Leu Arg Asp
120 125 130 135
aac gac cct cgg tac ttg gag gct ttg acc cca tac tgg gct aac att 747
Asn Asp Pro Arg Tyr Leu Glu Ala Leu Thr Pro Tyr Trp Ala Asn Ile
140 145 150
tct aaa atc att gct cct cat ctc atc acc aac ggc gga aat gtc atc 795
Ser Lys Ile Ile Ala Pro His Leu Ile Thr Asn Gly Gly Asn Val Ile
155 160 165
ctg tat cag atc gag aat gag tac gcc gag cag tgg ctt gac gag gaa 843
Leu Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Ala Glu Gln Trp Leu Asp Glu Glu
170 175 180
acc cag gag ccc aac acg tct ggt cag gaa tac atg cag tat ttg gag 891
Thr Gln Glu Pro Asn Thr Ser Gly Gln Glu Tyr Met Gln Tyr Leu Glu
185 190 195
gac gtt gct cgg gaa aac ggc att gat gct cct ctg atc cat aat ctt 939
Asp Val Ala Arg Glu Asn Gly Ile Asp Ala Pro Leu Ile His Asn Leu
200 205 210 215
ccg aac atg gtagggcaat acgctcgctt gctgaagata cagaattttt 988
Pro Asn Met
ggctgataca tagcag aac ggt cac tca tgg tcc aag gac ctc tcc aac gct 1040
Asn Gly His Ser Trp Ser Lys Asp Leu Ser Asn Ala
220 225 230
act gga aat gtc gat gtc att ggc gtg gac agc tat ccc act tgc tgg 1088
Thr Gly Asn Val Asp Val Ile Gly Val Asp Ser Tyr Pro Thr Cys Trp
235 240 245
acc tgc aat gtc agt gag tgt ctc tca act aac gga gag tat atc cca 1136
Thr Cys Asn Val Ser Glu Cys Leu Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Ile Pro
250 255 260
tat gtaagtaacg cctgcctttc tttggtgatt tattatacta aactctctca g aaa 1193
Tyr Lys
acc ttg acc tac tac ga gtaagtgcaa tagtacacgg atttgtatga 1240
Thr Leu Thr Tyr Tyr Asp
265 270
gtgaaacact aatttaccct caaatcag c tac ttc aag aaa cta tca cc 1289
Tyr Phe Lys Lys Leu Ser Pro
275
gtaagctttg ccctctctga gactatctac acattctaat tctctattac ag c act 1345
Thr
cag cca agc ttt atg ccc gag ttc caa ggc ggt tca tac aac cca tgg 1393
Gln Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp
280 285 290
ggt gga ccc caa gga ggc tgc ccg gat gat ctt ggc ccg gat ttc gcg 1441
Gly Gly Pro Gln Gly Gly Cys Pro Asp Asp Leu Gly Pro Asp Phe Ala
295 300 305 310
aac ctc ttc tac cga aac cta atc tat cag aga gtc agt gct atc tcg 1489
Asn Leu Phe Tyr Arg Asn Leu Ile Tyr Gln Arg Val Ser Ala Ile Ser
315 320 325
ctg tac atg tta tac ggc ggt aca aac tgg ggc tgg cac ggc tca aca 1537
Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Trp His Gly Ser Thr
330 335 340
gat gtc g gtgagttatt cccaagtcga atttatgcca caggtgctga tgagcccag 1593
Asp Val
cg aca agt tac gat tac tct tct cca att tcg gag aac cga aag ctt 1640
Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asn Arg Lys Leu
345 350 355 360
att gag aaa tac tac gag aca aaa gtg ctc act caa ttc acg aaa a 1686
Ile Glu Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Val Leu Thr Gln Phe Thr Lys
365 370 375
gtacgcctct tttagtacga tatgtggaag cttgccaagc taacctcatg atacag tc 1744
Ile
gcc cgg gat ctg tct aaa gtc gat cgt tta ggc aac gtaagtagag 1790
Ala Arg Asp Leu Ser Lys Val Asp Arg Leu Gly Asn
380 385
cagaacaata tcgtctacag agaaacgcta acaggggtca acag agc acg aga tat 1846
Ser Thr Arg Tyr
390
tca agt aac cca gct gtt tca gtt tct gag ctg cga aat cct gac aat 1894
Ser Ser Asn Pro Ala Val Ser Val Ser Glu Leu Arg Asn Pro Asp Asn
395 400 405
ggc gcg gct ttc tac gta act cag cac gaa tac act cca tct gga acg 1942
Gly Ala Ala Phe Tyr Val Thr Gln His Glu Tyr Thr Pro Ser Gly Thr
410 415 420
gtc gaa aag ttc aca gtc aag gtt aac aca tcc gat ggt gct c 1985
Val Glu Lys Phe Thr Val Lys Val Asn Thr Ser Asp Gly Ala
425 430 435
gtatgttacc tcctgcggtc tgaatttggt atatcacaat gataatctgc taattactcg 2045
acaag tc act att cct caa tac ggc tcc caa atc act ctc aat ggt cac 2094
Leu Thr Ile Pro Gln Tyr Gly Ser Gln Ile Thr Leu Asn Gly His
440 445 450
cag tcc aag att atc gtc aca gac ttc aac ttc ggc tcg aag acg ctc 2142
Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Asn Phe Gly Ser Lys Thr Leu
455 460 465
ctt tac tct acg gca gaa gtt ctt acc tat gct gtt att gat ggt aaa 2190
Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Gly Lys
470 475 480 485
gaa gtg ctg gct ctc tgg gtc ccg act ggt gaa tct gga gag ttc acc 2238
Glu Val Leu Ala Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Thr
490 495 500
gtg aag gga gtg aat tcg gcc aag ttc gcc gac aaa gga cgc act gcg 2286
Val Lys Gly Val Asn Ser Ala Lys Phe Ala Asp Lys Gly Arg Thr Ala
505 510 515
aac atc gag att cgc ccc gga gca aac aag gtg aca gta tct ttc atg 2334
Asn Ile Glu Ile Arg Pro Gly Ala Asn Lys Val Thr Val Ser Phe Met
520 525 530
cag aga gcg ggt atg agc gtg gtt gag ctt ggt gat gga aca cgc att 2382
Gln Arg Ala Gly Met Ser Val Val Glu Leu Gly Asp Gly Thr Arg Ile
535 540 545
gtt ctt ctc gat cgg tct gct gct cat gta ttc tgg tct cct cca ctc 2430
Val Leu Leu Asp Arg Ser Ala Ala His Val Phe Trp Ser Pro Pro Leu
550 555 560 565
aac aat gac cct gcc gag gcc ggc aac aac act g gtaagtccac 2474
Asn Asn Asp Pro Ala Glu Ala Gly Asn Asn Thr
570 575
atcgatggcg ttatacaaac agttgataga ctcgctgaca tgcttcag tc ctc gtc 2530
Val Leu Val
cat ggt ccc tac tta gtt cgc tcg gct aga ttg gaa ggc tgt gac ttg 2578
His Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Arg Leu Glu Gly Cys Asp Leu
580 585 590 595
aag ctc act gga gat atc cag aat tct aca aag gtc agc atc ttt gcg 2626
Lys Leu Thr Gly Asp Ile Gln Asn Ser Thr Lys Val Ser Ile Phe Ala
600 605 610
ccc aat tcg gta tgc tcc gtc aat tgg aat ggc aag aag aca tcc gtc 2674
Pro Asn Ser Val Cys Ser Val Asn Trp Asn Gly Lys Lys Thr Ser Val
615 620 625
aag tca gcg aag ggt ggt gtc ata acc aca acc ttg gga ggc gat gcc 2722
Lys Ser Ala Lys Gly Gly Val Ile Thr Thr Thr Leu Gly Gly Asp Ala
630 635 640
aag ttc gaa ctt ccc acg atc tcc ggc tgg aag tat gcg gac agt ctc 2770
Lys Phe Glu Leu Pro Thr Ile Ser Gly Trp Lys Tyr Ala Asp Ser Leu
645 650 655
cct gaa atc gcg aag gac tat tcc gct aca agc aag gct tgg gtt g 2816
Pro Glu Ile Ala Lys Asp Tyr Ser Ala Thr Ser Lys Ala Trp Val
660 665 670
gtatgttatt tctctcctcc tcggtcgcca atagcacccg ccagtgccag ctaacaacag 2876
aaaaaccag tg gct acg aag aca aac tcg tct aat ccg act ccc ccg gca 2926
Val Ala Thr Lys Thr Asn Ser Ser Asn Pro Thr Pro Pro Ala
675 680 685
cca aac aac cca gtc ctc tac gtg gac gag aac gat atc cac gtc ggc 2974
Pro Asn Asn Pro Val Leu Tyr Val Asp Glu Asn Asp Ile His Val Gly
690 695 700
aac cac atc tac cgc gcc act ttc ccc agc acc gac gag ccc cca acc 3022
Asn His Ile Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Ser Thr Asp Glu Pro Pro Thr
705 710 715 720
gac gtc tac ctc aac atc acc gga ggt cgc gca ttc ggc tac tct gtc 3070
Asp Val Tyr Leu Asn Ile Thr Gly Gly Arg Ala Phe Gly Tyr Ser Val
725 730 735
tgg ctg aac tca gaa ttc atc ggc tcc tgg ctc ggc acc ccg aca acc 3118
Trp Leu Asn Ser Glu Phe Ile Gly Ser Trp Leu Gly Thr Pro Thr Thr
740 745 750
gag cag aac gac cag aca ttc tca ttc tcc aac gca acc ctc agc aca 3166
Glu Gln Asn Asp Gln Thr Phe Ser Phe Ser Asn Ala Thr Leu Ser Thr
755 760 765
gac gga gac aac atc cta gtc gtc gtc atg gac aac tcg gcc cac gat 3214
Asp Gly Asp Asn Ile Leu Val Val Val Met Asp Asn Ser Ala His Asp
770 775 780
ctg cgc gag gga gca acc gac ccc cga gga atc aca aac gcc act ctc 3262
Leu Arg Glu Gly Ala Thr Asp Pro Arg Gly Ile Thr Asn Ala Thr Leu
785 790 795 800
gtc ggt ccc gga acc tac tcc ttc acc gag tgg aaa ctc gcc ggc aac 3310
Val Gly Pro Gly Thr Tyr Ser Phe Thr Glu Trp Lys Leu Ala Gly Asn
805 810 815
gca ggc ttc gaa gac cac ctt gat ccg gtc cgc gcc ccg ctc aac gag 3358
Ala Gly Phe Glu Asp His Leu Asp Pro Val Arg Ala Pro Leu Asn Glu
820 825 830
ggc agt ctg tac gcc gag cga gtc ggt atc cat ctc ccg gga tat cag 3406
Gly Ser Leu Tyr Ala Glu Arg Val Gly Ile His Leu Pro Gly Tyr Gln
835 840 845
ttc gac gag gcc gaa gag gtg cct tcg aac agc acg agc cta acc gtt 3454
Phe Asp Glu Ala Glu Glu Val Pro Ser Asn Ser Thr Ser Leu Thr Val
850 855 860
ccc ggt gct ggt att cgc gtc ttc cgc acc gtt gtt ccc ctc tcc gtg 3502
Pro Gly Ala Gly Ile Arg Val Phe Arg Thr Val Val Pro Leu Ser Val
865 870 875 880
ccc cag gga ctg gac gtc tct atc tcg ttc cgt ttg act gct ccc tcg 3550
Pro Gln Gly Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Arg Leu Thr Ala Pro Ser
885 890 895
aat gtg acc ttt acc tct acg gag gga tac acc aac cag ctg cgc gct 3598
Asn Val Thr Phe Thr Ser Thr Glu Gly Tyr Thr Asn Gln Leu Arg Ala
900 905 910
ctg ctc ttc gtt aat gga tac cag tat ggt cgc ttt aac cct tac atc 3646
Leu Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Ile
915 920 925
ggt cat cag att gac ttc cct gtt cct ccg ggc gtc ctt gat tat aat 3694
Gly His Gln Ile Asp Phe Pro Val Pro Pro Gly Val Leu Asp Tyr Asn
930 935 940
ggg gat aac acg att gcg gtg acg gtg tgg agt cag agt gtg gat ggt 3742
Gly Asp Asn Thr Ile Ala Val Thr Val Trp Ser Gln Ser Val Asp Gly
945 950 955 960
gct gag atg aaa att gat tgg aat gtg gac tat gtc cat gag acc agc 3790
Ala Glu Met Lys Ile Asp Trp Asn Val Asp Tyr Val His Glu Thr Ser
965 970 975
ttc gac atg aac ttt gac gga gca tac ctg aga cct gga tgg atc gag 3838
Phe Asp Met Asn Phe Asp Gly Ala Tyr Leu Arg Pro Gly Trp Ile Glu
980 985 990
gag aga cgt gaa tat gct taa 3859
Glu Arg Arg Glu Tyr Ala
995
<210> 48
<211> 1020
<212> PRT
<213> 溜曲霉
<400> 48
Met Leu Ile Ser Lys Thr Val Phe Ser Gly Leu Ala Leu Gly Ala Ser
-20 -15 -10
Phe Val Gly Val Ser Gly Gln Gln Asn Ser Ser Arg Trp Pro Leu His
-5 -1 1 5 10
Asp Asn Gly Leu Thr Asp Thr Val Glu Trp Asp His Tyr Ser Phe Leu
15 20 25
Ile Asn Gly Gln Arg His Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
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Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Leu Leu Glu Lys Ile Lys
45 50 55
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ser Ile Tyr Asn His Trp Gly Tyr His
60 65 70
Thr Pro Lys Pro Gly Val Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asn Phe
75 80 85 90
Thr Ser Ile Met Thr Leu Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr Met Ile Ile
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Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Leu Pro
110 115 120
Leu Trp Ala Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Lys Leu Arg Asp Asn Asp Pro
125 130 135
Arg Tyr Leu Glu Ala Leu Thr Pro Tyr Trp Ala Asn Ile Ser Lys Ile
140 145 150
Ile Ala Pro His Leu Ile Thr Asn Gly Gly Asn Val Ile Leu Tyr Gln
155 160 165 170
Ile Glu Asn Glu Tyr Ala Glu Gln Trp Leu Asp Glu Glu Thr Gln Glu
175 180 185
Pro Asn Thr Ser Gly Gln Glu Tyr Met Gln Tyr Leu Glu Asp Val Ala
190 195 200
Arg Glu Asn Gly Ile Asp Ala Pro Leu Ile His Asn Leu Pro Asn Met
205 210 215
Asn Gly His Ser Trp Ser Lys Asp Leu Ser Asn Ala Thr Gly Asn Val
220 225 230
Asp Val Ile Gly Val Asp Ser Tyr Pro Thr Cys Trp Thr Cys Asn Val
235 240 245 250
Ser Glu Cys Leu Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Ile Pro Tyr Lys Thr Leu
255 260 265
Thr Tyr Tyr Asp Tyr Phe Lys Lys Leu Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe
270 275 280
Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Gln
285 290 295
Gly Gly Cys Pro Asp Asp Leu Gly Pro Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr
300 305 310
Arg Asn Leu Ile Tyr Gln Arg Val Ser Ala Ile Ser Leu Tyr Met Leu
315 320 325 330
Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Trp His Gly Ser Thr Asp Val Ala Thr
335 340 345
Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asn Arg Lys Leu Ile Glu
350 355 360
Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Val Leu Thr Gln Phe Thr Lys Ile Ala Arg
365 370 375
Asp Leu Ser Lys Val Asp Arg Leu Gly Asn Ser Thr Arg Tyr Ser Ser
380 385 390
Asn Pro Ala Val Ser Val Ser Glu Leu Arg Asn Pro Asp Asn Gly Ala
395 400 405 410
Ala Phe Tyr Val Thr Gln His Glu Tyr Thr Pro Ser Gly Thr Val Glu
415 420 425
Lys Phe Thr Val Lys Val Asn Thr Ser Asp Gly Ala Leu Thr Ile Pro
430 435 440
Gln Tyr Gly Ser Gln Ile Thr Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile
445 450 455
Val Thr Asp Phe Asn Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala
460 465 470
Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Gly Lys Glu Val Leu Ala Leu
475 480 485 490
Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Thr Val Lys Gly Val Asn
495 500 505
Ser Ala Lys Phe Ala Asp Lys Gly Arg Thr Ala Asn Ile Glu Ile Arg
510 515 520
Pro Gly Ala Asn Lys Val Thr Val Ser Phe Met Gln Arg Ala Gly Met
525 530 535
Ser Val Val Glu Leu Gly Asp Gly Thr Arg Ile Val Leu Leu Asp Arg
540 545 550
Ser Ala Ala His Val Phe Trp Ser Pro Pro Leu Asn Asn Asp Pro Ala
555 560 565 570
Glu Ala Gly Asn Asn Thr Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val Arg
575 580 585
Ser Ala Arg Leu Glu Gly Cys Asp Leu Lys Leu Thr Gly Asp Ile Gln
590 595 600
Asn Ser Thr Lys Val Ser Ile Phe Ala Pro Asn Ser Val Cys Ser Val
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620 625 630
Ile Thr Thr Thr Leu Gly Gly Asp Ala Lys Phe Glu Leu Pro Thr Ile
635 640 645 650
Ser Gly Trp Lys Tyr Ala Asp Ser Leu Pro Glu Ile Ala Lys Asp Tyr
655 660 665
Ser Ala Thr Ser Lys Ala Trp Val Val Ala Thr Lys Thr Asn Ser Ser
670 675 680
Asn Pro Thr Pro Pro Ala Pro Asn Asn Pro Val Leu Tyr Val Asp Glu
685 690 695
Asn Asp Ile His Val Gly Asn His Ile Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Ser
700 705 710
Thr Asp Glu Pro Pro Thr Asp Val Tyr Leu Asn Ile Thr Gly Gly Arg
715 720 725 730
Ala Phe Gly Tyr Ser Val Trp Leu Asn Ser Glu Phe Ile Gly Ser Trp
735 740 745
Leu Gly Thr Pro Thr Thr Glu Gln Asn Asp Gln Thr Phe Ser Phe Ser
750 755 760
Asn Ala Thr Leu Ser Thr Asp Gly Asp Asn Ile Leu Val Val Val Met
765 770 775
Asp Asn Ser Ala His Asp Leu Arg Glu Gly Ala Thr Asp Pro Arg Gly
780 785 790
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20 25 30
Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Pro Glu
35 40 45
Leu Trp Arg Asp Leu Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe Thr Ala
50 55 60
Phe Ser Ile Tyr Asn His Trp Gly Tyr His Thr Pro Lys Pro Gly Val
65 70 75 80
Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asn Phe Thr Ser Ile Met Thr Leu
85 90 95
Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr Met Ile Ile Arg Pro Gly Pro Tyr Val
100 105 110
Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Leu Pro Leu Trp Ala Thr Thr Gly
115 120 125
Ala Tyr Gly Lys Leu Arg Asp Asn Asp Pro Arg Tyr Leu Glu Ala Leu
130 135 140
Thr Pro Tyr Trp Ala Asn Ile Ser Lys Ile Ile Ala Pro His Leu Ile
145 150 155 160
Thr Asn Gly Gly Asn Val Ile Leu Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Ala
165 170 175
Glu Gln Trp Leu Asp Glu Glu Thr Gln Glu Pro Asn Thr Ser Gly Gln
180 185 190
Glu Tyr Met Gln Tyr Leu Glu Asp Val Ala Arg Glu Asn Gly Ile Asp
195 200 205
Ala Pro Leu Ile His Asn Leu Pro Asn Met Asn Gly His Ser Trp Ser
210 215 220
Lys Asp Leu Ser Asn Ala Thr Gly Asn Val Asp Val Ile Gly Val Asp
225 230 235 240
Ser Tyr Pro Thr Cys Trp Thr Cys Asn Val Ser Glu Cys Leu Ser Thr
245 250 255
Asn Gly Glu Tyr Ile Pro Tyr Lys Thr Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Phe
260 265 270
Lys Lys Leu Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly
275 280 285
Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Gln Gly Gly Cys Pro Asp Asp
290 295 300
Leu Gly Pro Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Asn Leu Ile Tyr Gln
305 310 315 320
Arg Val Ser Ala Ile Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp
325 330 335
Gly Trp His Gly Ser Thr Asp Val Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser
340 345 350
Pro Ile Ser Glu Asn Arg Lys Leu Ile Glu Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys
355 360 365
Val Leu Thr Gln Phe Thr Lys Ile Ala Arg Asp Leu Ser Lys Val Asp
370 375 380
Arg Leu Gly Asn Ser Thr Arg Tyr Ser Ser Asn Pro Ala Val Ser Val
385 390 395 400
Ser Glu Leu Arg Asn Pro Asp Asn Gly Ala Ala Phe Tyr Val Thr Gln
405 410 415
His Glu Tyr Thr Pro Ser Gly Thr Val Glu Lys Phe Thr Val Lys Val
420 425 430
Asn Thr Ser Asp Gly Ala Leu Thr Ile Pro Gln Tyr Gly Ser Gln Ile
435 440 445
Thr Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Asn Phe
450 455 460
Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala
465 470 475 480
Val Ile Asp Gly Lys Glu Val Leu Ala Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu
485 490 495
Ser Gly Glu Phe Thr Val Lys Gly Val Asn Ser Ala Lys Phe Ala Asp
500 505 510
Lys Gly Arg Thr Ala Asn Ile Glu Ile Arg Pro Gly Ala Asn Lys Val
515 520 525
Thr Val Ser Phe Met Gln Arg Ala Gly Met Ser Val Val Glu Leu Gly
530 535 540
Asp Gly Thr Arg Ile Val Leu Leu Asp Arg Ser Ala Ala His Val Phe
545 550 555 560
Trp Ser Pro Pro Leu Asn Asn Asp Pro Ala Glu Ala Gly Asn Asn Thr
565 570 575
Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Arg Leu Glu Gly
580 585 590
Cys Asp Leu Lys Leu Thr Gly Asp Ile Gln Asn Ser Thr Lys Val Ser
595 600 605
Ile Phe Ala Pro Asn Ser Val Cys Ser Val Asn Trp Asn Gly Lys Lys
610 615 620
Thr Ser Val Lys Ser Ala Lys Gly Gly Val Ile Thr Thr Thr Leu Gly
625 630 635 640
Gly Asp Ala Lys Phe Glu Leu Pro Thr Ile Ser Gly Trp Lys Tyr Ala
645 650 655
Asp Ser Leu Pro Glu Ile Ala Lys Asp Tyr Ser Ala Thr Ser Lys Ala
660 665 670
Trp Val Val Ala Thr Lys Thr Asn Ser Ser Asn Pro Thr Pro Pro Ala
675 680 685
Pro Asn Asn Pro Val Leu Tyr Val Asp Glu Asn Asp Ile His Val Gly
690 695 700
Asn His Ile Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Ser Thr Asp Glu Pro Pro Thr
705 710 715 720
Asp Val Tyr Leu Asn Ile Thr Gly Gly Arg Ala Phe Gly Tyr Ser Val
725 730 735
Trp Leu Asn Ser Glu Phe Ile Gly Ser Trp Leu Gly Thr Pro Thr Thr
740 745 750
Glu Gln Asn Asp Gln Thr Phe Ser Phe Ser Asn Ala Thr Leu Ser Thr
755 760 765
Asp Gly Asp Asn Ile Leu Val Val Val Met Asp Asn Ser Ala His Asp
770 775 780
Leu Arg Glu Gly Ala Thr Asp Pro Arg Gly Ile Thr Asn Ala Thr Leu
785 790 795 800
Val Gly Pro Gly Thr Tyr Ser Phe Thr Glu Trp Lys Leu Ala Gly Asn
805 810 815
Ala Gly Phe Glu Asp His Leu Asp Pro Val Arg Ala Pro Leu Asn Glu
820 825 830
Gly Ser Leu Tyr Ala Glu Arg Val Gly Ile His Leu Pro Gly Tyr Gln
835 840 845
Phe Asp Glu Ala Glu Glu Val Pro Ser Asn Ser Thr Ser Leu Thr Val
850 855 860
Pro Gly Ala Gly Ile Arg Val Phe Arg Thr Val Val Pro Leu Ser Val
865 870 875 880
Pro Gln Gly Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Arg Leu Thr Ala Pro Ser
885 890 895
Asn Val Thr Phe Thr Ser Thr Glu Gly Tyr Thr Asn Gln Leu Arg Ala
900 905 910
Leu Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Ile
915 920 925
Gly His Gln Ile Asp Phe Pro Val Pro Pro Gly Val Leu Asp Tyr Asn
930 935 940
Gly Asp Asn Thr Ile Ala Val Thr Val Trp Ser Gln Ser Val Asp Gly
945 950 955 960
Ala Glu Met Lys Ile Asp Trp Asn Val Asp Tyr Val His Glu Thr Ser
965 970 975
Phe Asp Met Asn Phe Asp Gly Ala Tyr Leu Arg Pro Gly Trp Ile Glu
980 985 990
Glu Arg Arg Glu Tyr Ala
995
<210> 50
<211> 3197
<212> DNA
<213> 穗状弯孢霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(265)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(81)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (82)..(3194)
<220>
<221> CDS
<222> (320)..(917)
<220>
<221> CDS
<222> (973)..(1925)
<220>
<221> CDS
<222> (1981)..(3194)
<400> 50
atg aag act ttc gtt ggg ctc tcg tgg ctg tcg gcc ttg tct tcg ttg 48
Met Lys Thr Phe Val Gly Leu Ser Trp Leu Ser Ala Leu Ser Ser Leu
-25 -20 -15
gtg acg ctc cca aat ggc tcc ggt gtt gct gcc cag aac aac acg cct 96
Val Thr Leu Pro Asn Gly Ser Gly Val Ala Ala Gln Asn Asn Thr Pro
-10 -5 -1 1 5
agt acg tgg ccg ctc cac gac aat ggt ctg aat gat gtc gta caa tgg 144
Ser Thr Trp Pro Leu His Asp Asn Gly Leu Asn Asp Val Val Gln Trp
10 15 20
gat cat tat tcc ttt aaa gtg aac gga aag cgc ctt ttc gtt ttc tct 192
Asp His Tyr Ser Phe Lys Val Asn Gly Lys Arg Leu Phe Val Phe Ser
25 30 35
gga gaa att cac tac tgg cgt atc ccg gtc tat gag gtt tgg gag gac 240
Gly Glu Ile His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Tyr Glu Val Trp Glu Asp
40 45 50
ttg tta gaa aaa att aag gcg gct g gtaagtattt ccatttgcat 285
Leu Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala
55 60
aagatgcatg tcgattacgg ctgacgacca ttag gt ttc acg gct ttc gcc ttc 339
Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe
65
tac ggc aac tgg gcc tat cac agc gca aac aac cag acc ttg gac ttt 387
Tyr Gly Asn Trp Ala Tyr His Ser Ala Asn Asn Gln Thr Leu Asp Phe
70 75 80
gaa agc ggc gcg cac gac ttt acg aag ctc ttc gag atc gcg gag cgc 435
Glu Ser Gly Ala His Asp Phe Thr Lys Leu Phe Glu Ile Ala Glu Arg
85 90 95 100
gtc ggc ctt tac gtc att acc agg cct ggt cct tat gtc aat gct gag 483
Val Gly Leu Tyr Val Ile Thr Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu
105 110 115
gcg aac gct gga ggc ttc cca tta tgg ctc act acg gga gct tat gga 531
Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly
120 125 130
acg cta cgc aac gac gac ccc aga tac ctc caa gca ttg gac cct tac 579
Thr Leu Arg Asn Asp Asp Pro Arg Tyr Leu Gln Ala Leu Asp Pro Tyr
135 140 145
ttc tcc aag ttc tct gag ctc aca tcc aag cat ctc gtg acc aag ggc 627
Phe Ser Lys Phe Ser Glu Leu Thr Ser Lys His Leu Val Thr Lys Gly
150 155 160
gga aaa gcg ctt gtc tac cag atc gag aac gag tat ggt gag cag tgg 675
Gly Lys Ala Leu Val Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Glu Gln Trp
165 170 175 180
aag aat aga gac cag aag att ccc aat gaa agt gcc gga aga tat atg 723
Lys Asn Arg Asp Gln Lys Ile Pro Asn Glu Ser Ala Gly Arg Tyr Met
185 190 195
cag gcg ctt gag gat ttg gca cgg gct cat ggc att gac gtc ccc cta 771
Gln Ala Leu Glu Asp Leu Ala Arg Ala His Gly Ile Asp Val Pro Leu
200 205 210
atc cac aac gac ccc aat atg aac acc aag agc tgg agc aaa gac tat 819
Ile His Asn Asp Pro Asn Met Asn Thr Lys Ser Trp Ser Lys Asp Tyr
215 220 225
gcc cct ggt gct gta gga aat gtc gat gtt gct ggg ctc gac agc tac 867
Ala Pro Gly Ala Val Gly Asn Val Asp Val Ala Gly Leu Asp Ser Tyr
230 235 240
cca tcc tgt tgg tcc tgc aac ctg gat gag tgc acg ggt acc aat gga 915
Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asn Leu Asp Glu Cys Thr Gly Thr Asn Gly
245 250 255 260
ga gtaagtgttg taaatctcaa acgctccagt aacagttact aacgttatgt tctag 972
Glu
a tac gta gca tac caa acc atc aac tac ttt gat cat ttc gaa gaa gta 1021
Tyr Val Ala Tyr Gln Thr Ile Asn Tyr Phe Asp His Phe Glu Glu Val
265 270 275
tct cca acc cag cca agc ttc ttc cct gaa ttc caa ggt ggt tcg tac 1069
Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe Phe Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr
280 285 290
aat cct tgg ggt gga ccc gaa ggt ggc tgt ccc ggt gac att gga gct 1117
Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro Gly Asp Ile Gly Ala
295 300 305
gat ttc gca aat ctc ttc tac cga aac ctg gtc tcc caa cgc gtt acc 1165
Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Asn Leu Val Ser Gln Arg Val Thr
310 315 320 325
gca atc tca ctt tat atg gtt ttt ggc ggc aca aat tgg ggc gcc att 1213
Ala Ile Ser Leu Tyr Met Val Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile
330 335 340
gca gcc cca gtc aca gcc acg tcg tat gac tat agc agt cct atc agc 1261
Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser
345 350 355
gag aac cgg gag att ggc gcc aaa ttc tac gag acg aag aac ttg gct 1309
Glu Asn Arg Glu Ile Gly Ala Lys Phe Tyr Glu Thr Lys Asn Leu Ala
360 365 370
ttg ttc act cgt gtt gcg gaa gac ttg aca gtt acc gat cgc ctt gga 1357
Leu Phe Thr Arg Val Ala Glu Asp Leu Thr Val Thr Asp Arg Leu Gly
375 380 385
aat tct act tct tac acg acc aac tcg gca gtc gag gcg agt gaa ctc 1405
Asn Ser Thr Ser Tyr Thr Thr Asn Ser Ala Val Glu Ala Ser Glu Leu
390 395 400 405
cgc aac cca cac acc aac ggc gca ttt tac gtt acc att cat gcc aca 1453
Arg Asn Pro His Thr Asn Gly Ala Phe Tyr Val Thr Ile His Ala Thr
410 415 420
tcg tct tcc gcg acg aag gaa tca ttc aag ctc cat gtg agc aca tcc 1501
Ser Ser Ser Ala Thr Lys Glu Ser Phe Lys Leu His Val Ser Thr Ser
425 430 435
atc ggt aat ctc act atc cct caa cat gct ggt tct att gtt ctc gat 1549
Ile Gly Asn Leu Thr Ile Pro Gln His Ala Gly Ser Ile Val Leu Asp
440 445 450
ggc cat caa tcc aag atc ctt gtt acc gat ttc gca atg ggc aac agt 1597
Gly His Gln Ser Lys Ile Leu Val Thr Asp Phe Ala Met Gly Asn Ser
455 460 465
acc ttg aca tac tcc act gca gaa gtt gtc acc tac gct ctt atc gac 1645
Thr Leu Thr Tyr Ser Thr Ala Glu Val Val Thr Tyr Ala Leu Ile Asp
470 475 480 485
tcc aag cca gtt gtt ttg cta tca act ggt att ggc gag tct gct gaa 1693
Ser Lys Pro Val Val Leu Leu Ser Thr Gly Ile Gly Glu Ser Ala Glu
490 495 500
ttc cat gtc aag ggc gct aag aag ggt tcc gct gtc agc agt ggt gct 1741
Phe His Val Lys Gly Ala Lys Lys Gly Ser Ala Val Ser Ser Gly Ala
505 510 515
agc tcg aat gct acg ttc tac acc gag gcc ggt ggt gtt acg acc agc 1789
Ser Ser Asn Ala Thr Phe Tyr Thr Glu Ala Gly Gly Val Thr Thr Ser
520 525 530
ata cag aaa gtt tcg ggt atg agc gtc tac cag ttc gat aat ggt gtg 1837
Ile Gln Lys Val Ser Gly Met Ser Val Tyr Gln Phe Asp Asn Gly Val
535 540 545
aag gtt gtt gtt gcg gat aag cct acc gcg tac ctg ttc tgg gca cct 1885
Lys Val Val Val Ala Asp Lys Pro Thr Ala Tyr Leu Phe Trp Ala Pro
550 555 560 565
aac ctg tcg aac gac ccc ttt gcg ccc gtt gat caa tcc g gtaagtatac 1935
Asn Leu Ser Asn Asp Pro Phe Ala Pro Val Asp Gln Ser
570 575
taaattcgtg attcttctgg ttctcgaaat ctaacatgca catag tt ttg gtc cag 1991
Val Leu Val Gln
580
gga cca tac ctc gtc cgc cac gta gct ctc gac ggc cac gtc ctc gcc 2039
Gly Pro Tyr Leu Val Arg His Val Ala Leu Asp Gly His Val Leu Ala
585 590 595
ctg aaa gga gat atc atg aac agc act gac atc gaa gtc ttt gcc tgt 2087
Leu Lys Gly Asp Ile Met Asn Ser Thr Asp Ile Glu Val Phe Ala Cys
600 605 610
cac aat gcc aaa act ctg tcc tgg aat gga aag aag ctc tct acc tcg 2135
His Asn Ala Lys Thr Leu Ser Trp Asn Gly Lys Lys Leu Ser Thr Ser
615 620 625 630
cga acc tcg tac ggt agt ctg aaa gcc cac atc acc gct ttc aac ggc 2183
Arg Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala His Ile Thr Ala Phe Asn Gly
635 640 645
act att cag cta cct tcc ctc gac aac tgg aaa gtc aac gaa ggt ctc 2231
Thr Ile Gln Leu Pro Ser Leu Asp Asn Trp Lys Val Asn Glu Gly Leu
650 655 660
cca gag aag gag gca gat tac gat gac agc agc gcc gct tgg gtt ata 2279
Pro Glu Lys Glu Ala Asp Tyr Asp Asp Ser Ser Ala Ala Trp Val Ile
665 670 675
gcc gac cac ctc agc acc ccc aac cct acc aag ccc gac act ctt ccc 2327
Ala Asp His Leu Ser Thr Pro Asn Pro Thr Lys Pro Asp Thr Leu Pro
680 685 690
gtt ctg tac gtc gat gag tat ggc ttc cac aac agc ttc cac ctt ttc 2375
Val Leu Tyr Val Asp Glu Tyr Gly Phe His Asn Ser Phe His Leu Phe
695 700 705 710
cgc ggc tac ttc gat ggc tcc gcc acc ggc gtc caa ctc tct gtg caa 2423
Arg Gly Tyr Phe Asp Gly Ser Ala Thr Gly Val Gln Leu Ser Val Gln
715 720 725
ggc ggt ctc gca ttt ggc tgg agt gcc tgg cta aac ggc aaa cat att 2471
Gly Gly Leu Ala Phe Gly Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly Lys His Ile
730 735 740
ggt tct tgg ctg ggc aat acg acc ctc ggt gta ggc aac gca acg ctc 2519
Gly Ser Trp Leu Gly Asn Thr Thr Leu Gly Val Gly Asn Ala Thr Leu
745 750 755
tcc ttt gcc aac gcc aca gtt cac tcc aat gga acc aac gtc ctc ctc 2567
Ser Phe Ala Asn Ala Thr Val His Ser Asn Gly Thr Asn Val Leu Leu
760 765 770
gtc gcc caa gac aac aca ggc cac gat ctc cgc ggc ggc gcc acc gat 2615
Val Ala Gln Asp Asn Thr Gly His Asp Leu Arg Gly Gly Ala Thr Asp
775 780 785 790
ccc cgc ggt atc ctg cgc gca tcc ctt tcc ggc ccc tca aac ttc aca 2663
Pro Arg Gly Ile Leu Arg Ala Ser Leu Ser Gly Pro Ser Asn Phe Thr
795 800 805
agc tgg aaa atc gca ggt gaa gcc ggc ggc gaa tcc atc cag ctc gac 2711
Ser Trp Lys Ile Ala Gly Glu Ala Gly Gly Glu Ser Ile Gln Leu Asp
810 815 820
ccc gtc cgt ggt ccc ctg gct gaa ggc ggc ctc gtc gct gaa cgc ctt 2759
Pro Val Arg Gly Pro Leu Ala Glu Gly Gly Leu Val Ala Glu Arg Leu
825 830 835
ggc tgg cac ctc cct ggc ttc gac gac gcg gac tgg gcc acc agc tcg 2807
Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ala Asp Trp Ala Thr Ser Ser
840 845 850
cct tcc gcc gga ttc tca ggc gca gat ata aag ttc tac cgt act aca 2855
Pro Ser Ala Gly Phe Ser Gly Ala Asp Ile Lys Phe Tyr Arg Thr Thr
855 860 865 870
ttc ccg ctt gat gta cct gac cat gtt gat gct tcc ttc gca ttt gtg 2903
Phe Pro Leu Asp Val Pro Asp His Val Asp Ala Ser Phe Ala Phe Val
875 880 885
ctg aac gcc cct gct gcg aag acg att cgc gtc cag ctt ttt gtc aat 2951
Leu Asn Ala Pro Ala Ala Lys Thr Ile Arg Val Gln Leu Phe Val Asn
890 895 900
ggg tat cag tat gcg cgg ttt aat ccg tat gtg ggt aat gaa atc aag 2999
Gly Tyr Gln Tyr Ala Arg Phe Asn Pro Tyr Val Gly Asn Glu Ile Lys
905 910 915
ttc cct gtt cct ccg ggc att ctc aac tac agc gga gag aat gtg gtt 3047
Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asn Tyr Ser Gly Glu Asn Val Val
920 925 930
ggg ctg agt gtg tgg gca caa gag gaa gac gga gca aag gtc gat gtg 3095
Gly Leu Ser Val Trp Ala Gln Glu Glu Asp Gly Ala Lys Val Asp Val
935 940 945 950
cgt atg gtg cag gag ttt gcg gtt gaa agt agt tgg aaa tcg agg ttt 3143
Arg Met Val Gln Glu Phe Ala Val Glu Ser Ser Trp Lys Ser Arg Phe
955 960 965
aat ggc gag tat ttg agg ccg aag tgg aca gag gag aga ctg gag tat 3191
Asn Gly Glu Tyr Leu Arg Pro Lys Trp Thr Glu Glu Arg Leu Glu Tyr
970 975 980
gct tga 3197
Ala
<210> 51
<211> 1010
<212> PRT
<213> 穗状弯孢霉
<400> 51
Met Lys Thr Phe Val Gly Leu Ser Trp Leu Ser Ala Leu Ser Ser Leu
-25 -20 -15
Val Thr Leu Pro Asn Gly Ser Gly Val Ala Ala Gln Asn Asn Thr Pro
-10 -5 -1 1 5
Ser Thr Trp Pro Leu His Asp Asn Gly Leu Asn Asp Val Val Gln Trp
10 15 20
Asp His Tyr Ser Phe Lys Val Asn Gly Lys Arg Leu Phe Val Phe Ser
25 30 35
Gly Glu Ile His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Tyr Glu Val Trp Glu Asp
40 45 50
Leu Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr
55 60 65
Gly Asn Trp Ala Tyr His Ser Ala Asn Asn Gln Thr Leu Asp Phe Glu
70 75 80 85
Ser Gly Ala His Asp Phe Thr Lys Leu Phe Glu Ile Ala Glu Arg Val
90 95 100
Gly Leu Tyr Val Ile Thr Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala
105 110 115
Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Thr
120 125 130
Leu Arg Asn Asp Asp Pro Arg Tyr Leu Gln Ala Leu Asp Pro Tyr Phe
135 140 145
Ser Lys Phe Ser Glu Leu Thr Ser Lys His Leu Val Thr Lys Gly Gly
150 155 160 165
Lys Ala Leu Val Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Glu Gln Trp Lys
170 175 180
Asn Arg Asp Gln Lys Ile Pro Asn Glu Ser Ala Gly Arg Tyr Met Gln
185 190 195
Ala Leu Glu Asp Leu Ala Arg Ala His Gly Ile Asp Val Pro Leu Ile
200 205 210
His Asn Asp Pro Asn Met Asn Thr Lys Ser Trp Ser Lys Asp Tyr Ala
215 220 225
Pro Gly Ala Val Gly Asn Val Asp Val Ala Gly Leu Asp Ser Tyr Pro
230 235 240 245
Ser Cys Trp Ser Cys Asn Leu Asp Glu Cys Thr Gly Thr Asn Gly Glu
250 255 260
Tyr Val Ala Tyr Gln Thr Ile Asn Tyr Phe Asp His Phe Glu Glu Val
265 270 275
Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe Phe Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr
280 285 290
Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro Gly Asp Ile Gly Ala
295 300 305
Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Asn Leu Val Ser Gln Arg Val Thr
310 315 320 325
Ala Ile Ser Leu Tyr Met Val Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile
330 335 340
Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser
345 350 355
Glu Asn Arg Glu Ile Gly Ala Lys Phe Tyr Glu Thr Lys Asn Leu Ala
360 365 370
Leu Phe Thr Arg Val Ala Glu Asp Leu Thr Val Thr Asp Arg Leu Gly
375 380 385
Asn Ser Thr Ser Tyr Thr Thr Asn Ser Ala Val Glu Ala Ser Glu Leu
390 395 400 405
Arg Asn Pro His Thr Asn Gly Ala Phe Tyr Val Thr Ile His Ala Thr
410 415 420
Ser Ser Ser Ala Thr Lys Glu Ser Phe Lys Leu His Val Ser Thr Ser
425 430 435
Ile Gly Asn Leu Thr Ile Pro Gln His Ala Gly Ser Ile Val Leu Asp
440 445 450
Gly His Gln Ser Lys Ile Leu Val Thr Asp Phe Ala Met Gly Asn Ser
455 460 465
Thr Leu Thr Tyr Ser Thr Ala Glu Val Val Thr Tyr Ala Leu Ile Asp
470 475 480 485
Ser Lys Pro Val Val Leu Leu Ser Thr Gly Ile Gly Glu Ser Ala Glu
490 495 500
Phe His Val Lys Gly Ala Lys Lys Gly Ser Ala Val Ser Ser Gly Ala
505 510 515
Ser Ser Asn Ala Thr Phe Tyr Thr Glu Ala Gly Gly Val Thr Thr Ser
520 525 530
Ile Gln Lys Val Ser Gly Met Ser Val Tyr Gln Phe Asp Asn Gly Val
535 540 545
Lys Val Val Val Ala Asp Lys Pro Thr Ala Tyr Leu Phe Trp Ala Pro
550 555 560 565
Asn Leu Ser Asn Asp Pro Phe Ala Pro Val Asp Gln Ser Val Leu Val
570 575 580
Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg His Val Ala Leu Asp Gly His Val Leu
585 590 595
Ala Leu Lys Gly Asp Ile Met Asn Ser Thr Asp Ile Glu Val Phe Ala
600 605 610
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615 620 625
Ser Arg Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala His Ile Thr Ala Phe Asn
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650 655 660
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730 735 740
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760 765 770
Leu Val Ala Gln Asp Asn Thr Gly His Asp Leu Arg Gly Gly Ala Thr
775 780 785
Asp Pro Arg Gly Ile Leu Arg Ala Ser Leu Ser Gly Pro Ser Asn Phe
790 795 800 805
Thr Ser Trp Lys Ile Ala Gly Glu Ala Gly Gly Glu Ser Ile Gln Leu
810 815 820
Asp Pro Val Arg Gly Pro Leu Ala Glu Gly Gly Leu Val Ala Glu Arg
825 830 835
Leu Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ala Asp Trp Ala Thr Ser
840 845 850
Ser Pro Ser Ala Gly Phe Ser Gly Ala Asp Ile Lys Phe Tyr Arg Thr
855 860 865
Thr Phe Pro Leu Asp Val Pro Asp His Val Asp Ala Ser Phe Ala Phe
870 875 880 885
Val Leu Asn Ala Pro Ala Ala Lys Thr Ile Arg Val Gln Leu Phe Val
890 895 900
Asn Gly Tyr Gln Tyr Ala Arg Phe Asn Pro Tyr Val Gly Asn Glu Ile
905 910 915
Lys Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asn Tyr Ser Gly Glu Asn Val
920 925 930
Val Gly Leu Ser Val Trp Ala Gln Glu Glu Asp Gly Ala Lys Val Asp
935 940 945
Val Arg Met Val Gln Glu Phe Ala Val Glu Ser Ser Trp Lys Ser Arg
950 955 960 965
Phe Asn Gly Glu Tyr Leu Arg Pro Lys Trp Thr Glu Glu Arg Leu Glu
970 975 980
Tyr Ala
<210> 52
<211> 983
<212> PRT
<213> 穗状弯孢霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(983)
<400> 52
Gln Asn Asn Thr Pro Ser Thr Trp Pro Leu His Asp Asn Gly Leu Asn
1 5 10 15
Asp Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Lys Val Asn Gly Lys Arg
20 25 30
Leu Phe Val Phe Ser Gly Glu Ile His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Tyr
35 40 45
Glu Val Trp Glu Asp Leu Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe Thr
50 55 60
Ala Phe Ala Phe Tyr Gly Asn Trp Ala Tyr His Ser Ala Asn Asn Gln
65 70 75 80
Thr Leu Asp Phe Glu Ser Gly Ala His Asp Phe Thr Lys Leu Phe Glu
85 90 95
Ile Ala Glu Arg Val Gly Leu Tyr Val Ile Thr Arg Pro Gly Pro Tyr
100 105 110
Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr Thr
115 120 125
Gly Ala Tyr Gly Thr Leu Arg Asn Asp Asp Pro Arg Tyr Leu Gln Ala
130 135 140
Leu Asp Pro Tyr Phe Ser Lys Phe Ser Glu Leu Thr Ser Lys His Leu
145 150 155 160
Val Thr Lys Gly Gly Lys Ala Leu Val Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr
165 170 175
Gly Glu Gln Trp Lys Asn Arg Asp Gln Lys Ile Pro Asn Glu Ser Ala
180 185 190
Gly Arg Tyr Met Gln Ala Leu Glu Asp Leu Ala Arg Ala His Gly Ile
195 200 205
Asp Val Pro Leu Ile His Asn Asp Pro Asn Met Asn Thr Lys Ser Trp
210 215 220
Ser Lys Asp Tyr Ala Pro Gly Ala Val Gly Asn Val Asp Val Ala Gly
225 230 235 240
Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Ser Cys Asn Leu Asp Glu Cys Thr
245 250 255
Gly Thr Asn Gly Glu Tyr Val Ala Tyr Gln Thr Ile Asn Tyr Phe Asp
260 265 270
His Phe Glu Glu Val Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe Phe Pro Glu Phe
275 280 285
Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro
290 295 300
Gly Asp Ile Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Asn Leu Val
305 310 315 320
Ser Gln Arg Val Thr Ala Ile Ser Leu Tyr Met Val Phe Gly Gly Thr
325 330 335
Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr
340 345 350
Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asn Arg Glu Ile Gly Ala Lys Phe Tyr Glu
355 360 365
Thr Lys Asn Leu Ala Leu Phe Thr Arg Val Ala Glu Asp Leu Thr Val
370 375 380
Thr Asp Arg Leu Gly Asn Ser Thr Ser Tyr Thr Thr Asn Ser Ala Val
385 390 395 400
Glu Ala Ser Glu Leu Arg Asn Pro His Thr Asn Gly Ala Phe Tyr Val
405 410 415
Thr Ile His Ala Thr Ser Ser Ser Ala Thr Lys Glu Ser Phe Lys Leu
420 425 430
His Val Ser Thr Ser Ile Gly Asn Leu Thr Ile Pro Gln His Ala Gly
435 440 445
Ser Ile Val Leu Asp Gly His Gln Ser Lys Ile Leu Val Thr Asp Phe
450 455 460
Ala Met Gly Asn Ser Thr Leu Thr Tyr Ser Thr Ala Glu Val Val Thr
465 470 475 480
Tyr Ala Leu Ile Asp Ser Lys Pro Val Val Leu Leu Ser Thr Gly Ile
485 490 495
Gly Glu Ser Ala Glu Phe His Val Lys Gly Ala Lys Lys Gly Ser Ala
500 505 510
Val Ser Ser Gly Ala Ser Ser Asn Ala Thr Phe Tyr Thr Glu Ala Gly
515 520 525
Gly Val Thr Thr Ser Ile Gln Lys Val Ser Gly Met Ser Val Tyr Gln
530 535 540
Phe Asp Asn Gly Val Lys Val Val Val Ala Asp Lys Pro Thr Ala Tyr
545 550 555 560
Leu Phe Trp Ala Pro Asn Leu Ser Asn Asp Pro Phe Ala Pro Val Asp
565 570 575
Gln Ser Val Leu Val Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg His Val Ala Leu
580 585 590
Asp Gly His Val Leu Ala Leu Lys Gly Asp Ile Met Asn Ser Thr Asp
595 600 605
Ile Glu Val Phe Ala Cys His Asn Ala Lys Thr Leu Ser Trp Asn Gly
610 615 620
Lys Lys Leu Ser Thr Ser Arg Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala His
625 630 635 640
Ile Thr Ala Phe Asn Gly Thr Ile Gln Leu Pro Ser Leu Asp Asn Trp
645 650 655
Lys Val Asn Glu Gly Leu Pro Glu Lys Glu Ala Asp Tyr Asp Asp Ser
660 665 670
Ser Ala Ala Trp Val Ile Ala Asp His Leu Ser Thr Pro Asn Pro Thr
675 680 685
Lys Pro Asp Thr Leu Pro Val Leu Tyr Val Asp Glu Tyr Gly Phe His
690 695 700
Asn Ser Phe His Leu Phe Arg Gly Tyr Phe Asp Gly Ser Ala Thr Gly
705 710 715 720
Val Gln Leu Ser Val Gln Gly Gly Leu Ala Phe Gly Trp Ser Ala Trp
725 730 735
Leu Asn Gly Lys His Ile Gly Ser Trp Leu Gly Asn Thr Thr Leu Gly
740 745 750
Val Gly Asn Ala Thr Leu Ser Phe Ala Asn Ala Thr Val His Ser Asn
755 760 765
Gly Thr Asn Val Leu Leu Val Ala Gln Asp Asn Thr Gly His Asp Leu
770 775 780
Arg Gly Gly Ala Thr Asp Pro Arg Gly Ile Leu Arg Ala Ser Leu Ser
785 790 795 800
Gly Pro Ser Asn Phe Thr Ser Trp Lys Ile Ala Gly Glu Ala Gly Gly
805 810 815
Glu Ser Ile Gln Leu Asp Pro Val Arg Gly Pro Leu Ala Glu Gly Gly
820 825 830
Leu Val Ala Glu Arg Leu Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ala
835 840 845
Asp Trp Ala Thr Ser Ser Pro Ser Ala Gly Phe Ser Gly Ala Asp Ile
850 855 860
Lys Phe Tyr Arg Thr Thr Phe Pro Leu Asp Val Pro Asp His Val Asp
865 870 875 880
Ala Ser Phe Ala Phe Val Leu Asn Ala Pro Ala Ala Lys Thr Ile Arg
885 890 895
Val Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Ala Arg Phe Asn Pro Tyr
900 905 910
Val Gly Asn Glu Ile Lys Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asn Tyr
915 920 925
Ser Gly Glu Asn Val Val Gly Leu Ser Val Trp Ala Gln Glu Glu Asp
930 935 940
Gly Ala Lys Val Asp Val Arg Met Val Gln Glu Phe Ala Val Glu Ser
945 950 955 960
Ser Trp Lys Ser Arg Phe Asn Gly Glu Tyr Leu Arg Pro Lys Trp Thr
965 970 975
Glu Glu Arg Leu Glu Tyr Ala
980
<210> 53
<211> 3829
<212> DNA
<213> 米曲霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(125)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(66)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (67)..(3826)
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
<222> (378)..(422)
<220>
<221> CDS
<222> (481)..(952)
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
<222> (2507)..(2800)
<220>
<221> CDS
<222> (2856)..(3826)
<400> 53
atg ctc atc tcc aag acc gtg ctc agc gga ctt gcc ttg ggg gcg tcc 48
Met Leu Ile Ser Lys Thr Val Leu Ser Gly Leu Ala Leu Gly Ala Ser
-20 -15 -10
ttc gtt ggc gtt tct gct cag cag aac tca acc cgt tgg ccg ttg cat 96
Phe Val Gly Val Ser Ala Gln Gln Asn Ser Thr Arg Trp Pro Leu His
-5 -1 1 5 10
gac aac ggc ttg aca gac act gta gaa tg gtaggtttag ccaatttgtg 145
Asp Asn Gly Leu Thr Asp Thr Val Glu Trp
15 20
gattcatttg tggatcaata ctgttagctc tgacaccatg gctatacag g gat cac 201
Asp His
tat agt ttc ttg att aat ggt cag aga cat ttt gtt ttc tct gga gag 249
Tyr Ser Phe Leu Ile Asn Gly Gln Arg His Phe Val Phe Ser Gly Glu
25 30 35
gttggtccac ccaatcgttt atgttctaca tggttcaatg cattaacatc gtatag ttc 308
Phe
cat tac tgg cgt att cct gt gtaaggcaag agtcctacaa cggcagcgct 358
His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
40 45
ctcgctaata tataaccag g ccc gaa tta tgg aga gat cta ctg gag aag 408
Pro Glu Leu Trp Arg Asp Leu Leu Glu Lys
50 55
atc aag gcc gct gg gtaggtagtt ccagattttg aaagtcgttt ctcggcacgc 462
Ile Lys Ala Ala Gly
60
taatggcaaa ttcgacag t ttc act gcc ttt tcc atc tac aat cac tgg gga 514
Phe Thr Ala Phe Ser Ile Tyr Asn His Trp Gly
65 70
tac cac agc cct aaa ccc ggt gtt ctc gac ttt gag aac gga gcc cac 562
Tyr His Ser Pro Lys Pro Gly Val Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala His
75 80 85
aat ttc acc tcg atc atg act cta gcc aaa gag ata ggt ctc tac atg 610
Asn Phe Thr Ser Ile Met Thr Leu Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr Met
90 95 100
atc atc cgg ccg ggc cca tac gtc aat gca gaa gcc aat gct ggc ggt 658
Ile Ile Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly
105 110 115 120
ctc cct ctg tgg acg act aca ggt gcc tac ggg aaa ctg cgg gat aac 706
Leu Pro Leu Trp Thr Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Lys Leu Arg Asp Asn
125 130 135
gac cct cgg tat ctg gag gct ttg acc ccg tac tgg gct aac att tct 754
Asp Pro Arg Tyr Leu Glu Ala Leu Thr Pro Tyr Trp Ala Asn Ile Ser
140 145 150
aaa att att gcc cct cat ctc atc act aat gac gga aat gta atc ctg 802
Lys Ile Ile Ala Pro His Leu Ile Thr Asn Asp Gly Asn Val Ile Leu
155 160 165
tat cag atc gaa aat gag tac gcc gag cag tgg ctt gat gag gaa acc 850
Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Ala Glu Gln Trp Leu Asp Glu Glu Thr
170 175 180
cac gag ccc aac acg tct ggt cag gaa tac atg cag tat ttg gag gat 898
His Glu Pro Asn Thr Ser Gly Gln Glu Tyr Met Gln Tyr Leu Glu Asp
185 190 195 200
gtt gct cgg gaa aat ggc att gat gct cct ctg atc cat aat ctt ccc 946
Val Ala Arg Glu Asn Gly Ile Asp Ala Pro Leu Ile His Asn Leu Pro
205 210 215
aac atg gtagggcaat atgctcactt actgaagata cagaatattt ggctgatgta 1002
Asn Met
taacag aac ggt cac tca tgg tcc aag gac ctc tcc aac gcc acc gga 1050
Asn Gly His Ser Trp Ser Lys Asp Leu Ser Asn Ala Thr Gly
220 225 230
aat gtc gat gtc att ggc gtg gac agc tat ccc act tgc tgg acc tgc 1098
Asn Val Asp Val Ile Gly Val Asp Ser Tyr Pro Thr Cys Trp Thr Cys
235 240 245
aat gtc agt gag tgt gct tca act aac gga gag tat atc cca tat 1143
Asn Val Ser Glu Cys Ala Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Ile Pro Tyr
250 255 260
gtaagtagga ctttgtcttt gtctggaggt tcatgctaat ttacctcag aaa acc ttg 1201
Lys Thr Leu
265
atc tac tac ga gtaagtgtga tgcacagact gtacgagtta aaactgactt 1252
Ile Tyr Tyr Asp
270
accctcaaat tag c tac ttt aag gaa tta tca cc gtgagtttgc 1296
Tyr Phe Lys Glu Leu Ser Pro
275
tctacttgag actacccaca cattctaacg cctatcatag c act caa cca agc ttc 1352
Thr Gln Pro Ser Phe
280
atg ccc gag ttc caa ggc ggc tcg tac aac cca tgg ggt gga cct caa 1400
Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Gln
285 290 295
ggc ggc tgc ccg gat gac ctt ggc ccg gat ttt gcg aat ctc ttc tac 1448
Gly Gly Cys Pro Asp Asp Leu Gly Pro Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr
300 305 310
cga aac ttg atc tcc cag aga gtc agc gct atc tcg ttg tac atg ttg 1496
Arg Asn Leu Ile Ser Gln Arg Val Ser Ala Ile Ser Leu Tyr Met Leu
315 320 325 330
tac ggc ggt acc aac tgg ggc tgg cac gcc tca acg gat gtc g 1539
Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Trp His Ala Ser Thr Asp Val
335 340
gtaagttatc cccaatccaa cttatgctat aggtgttgat gagcccag cg acg agc 1595
Ala Thr Ser
345
tac gac tac tcc tcc cca att tcg gag aac cga aag ctc att gag aaa 1643
Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asn Arg Lys Leu Ile Glu Lys
350 355 360
tac tat gag acg aaa gta ctc act caa ttc acg aaa a gtacgcctct 1690
Tyr Tyr Glu Thr Lys Val Leu Thr Gln Phe Thr Lys
365 370 375
ttatccgata ggtggaagct cgccaagcta atctcaggat acag tc gcc cag gat 1745
Ile Ala Gln Asp
ctg tct aag gtc gac cgg tta ggc aac gtaagtagat gataacaata 1792
Leu Ser Lys Val Asp Arg Leu Gly Asn
380 385
tcgtgtaccg agaaacatta accaagttaa tag agc acg aaa tac tcg agc aat 1846
Ser Thr Lys Tyr Ser Ser Asn
390 395
cca gca gtg tcg gtt gct gag ctg cgg aac cct gac act ggc gcg gct 1894
Pro Ala Val Ser Val Ala Glu Leu Arg Asn Pro Asp Thr Gly Ala Ala
400 405 410
ttc tac gta act cag cac gag tac act cca tct gga acg gtt gaa aag 1942
Phe Tyr Val Thr Gln His Glu Tyr Thr Pro Ser Gly Thr Val Glu Lys
415 420 425
ttc acg gtc aag gtt aac act tcc gag ggt gct c gtatgttatc 1986
Phe Thr Val Lys Val Asn Thr Ser Glu Gly Ala
430 435
tcctctagta cccatatcgc aatgatcaac tgctgacttc ttgacaag tt act att 2042
Leu Thr Ile
440
cct cag tat ggc tcc caa atc act ctc aac ggt cac caa tcc aag atc 2090
Pro Gln Tyr Gly Ser Gln Ile Thr Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile
445 450 455
att gtc acg gac ttc aag ttc ggc tcg aag aca ctc ctt tac tct acg 2138
Ile Val Thr Asp Phe Lys Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr
460 465 470
gcg gag gtt ctt acc tac gct gtt att gat ggc aaa gaa gtg ctg gct 2186
Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Gly Lys Glu Val Leu Ala
475 480 485
ctc tgg gtc cct act gga gaa tcg gga gaa ttc acc gtg aag gga gtg 2234
Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Thr Val Lys Gly Val
490 495 500 505
aat tcg gct aag ttc gcc gac aaa ggg cgt act gcg aac atc gag att 2282
Asn Ser Ala Lys Phe Ala Asp Lys Gly Arg Thr Ala Asn Ile Glu Ile
510 515 520
cac cct ggg aca aac aat gta aca gtc tct ttc atg cag aga tcg ggt 2330
His Pro Gly Thr Asn Asn Val Thr Val Ser Phe Met Gln Arg Ser Gly
525 530 535
atg agc ctg gtt gag ctt ggt gat gga aca cgc att gtt ctt ctc gat 2378
Met Ser Leu Val Glu Leu Gly Asp Gly Thr Arg Ile Val Leu Leu Asp
540 545 550
cgg tct gct gct cat gta ttc tgg tct act cca ctc aac aat gac cct 2426
Arg Ser Ala Ala His Val Phe Trp Ser Thr Pro Leu Asn Asn Asp Pro
555 560 565
gcc gag gct ggc aac aac act g gtgagtcccc atcgatggcg gtatacaaac 2478
Ala Glu Ala Gly Asn Asn Thr
570 575
agttgatagg ctcgctgaca ctcctcag tc ctt gtc cat ggc ccc tac tta 2529
Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu
580
gtt cgc tcg gct aaa ctg gaa ggc tgt gac ttg aaa ctc act gga gat 2577
Val Arg Ser Ala Lys Leu Glu Gly Cys Asp Leu Lys Leu Thr Gly Asp
585 590 595 600
atc cag aac tct aca gag gtc agc atc ttt gca ccc aag tct gta tgc 2625
Ile Gln Asn Ser Thr Glu Val Ser Ile Phe Ala Pro Lys Ser Val Cys
605 610 615
tct gtc aat tgg aat ggc aag aag aca tcc gtc aag tcg gcg aag ggt 2673
Ser Val Asn Trp Asn Gly Lys Lys Thr Ser Val Lys Ser Ala Lys Gly
620 625 630
ggt gtt ata acc aca acc ctg gga ggc gat gcc aag ttc gag ctt ccc 2721
Gly Val Ile Thr Thr Thr Leu Gly Gly Asp Ala Lys Phe Glu Leu Pro
635 640 645
acg atc tct ggc tgg aag tct gcg gac agt ctc cct gaa atc gca aag 2769
Thr Ile Ser Gly Trp Lys Ser Ala Asp Ser Leu Pro Glu Ile Ala Lys
650 655 660
gac tac tcc gct aca agc aag gct tgg gtt g gtatgttacc ctctcctcca 2820
Asp Tyr Ser Ala Thr Ser Lys Ala Trp Val
665 670
cggccaatag tacccaccag ctaacaaaag accag tg gct aca aag aca aac 2872
Val Ala Thr Lys Thr Asn
675 680
tcg tct aac cct act ccc ccg gca ccg aac aac cca gtc ctc tac gta 2920
Ser Ser Asn Pro Thr Pro Pro Ala Pro Asn Asn Pro Val Leu Tyr Val
685 690 695
gac gag aac gat atc cac gtc ggc aac cac atc tac cgc gcc aca ttc 2968
Asp Glu Asn Asp Ile His Val Gly Asn His Ile Tyr Arg Ala Thr Phe
700 705 710
ccc agc acc gac gag cct cca acc gac gtc tac ctc aac atc acc gga 3016
Pro Ser Thr Asp Glu Pro Pro Thr Asp Val Tyr Leu Asn Ile Thr Gly
715 720 725
ggt cgc gca ttc ggc tac tca gtc tgg ctg aac tcc gac ttc atc ggc 3064
Gly Arg Ala Phe Gly Tyr Ser Val Trp Leu Asn Ser Asp Phe Ile Gly
730 735 740
tcc tgg ctc ggc act gcg aca act gag caa aac gac cag aca ttc tcc 3112
Ser Trp Leu Gly Thr Ala Thr Thr Glu Gln Asn Asp Gln Thr Phe Ser
745 750 755 760
ttc tcc aac gca acc ctc agc aca gac gaa gac aac atc cta gtc gtc 3160
Phe Ser Asn Ala Thr Leu Ser Thr Asp Glu Asp Asn Ile Leu Val Val
765 770 775
gtc atg gac aac tca gcc cac gac ttg cgc gac gga gca ctc aac ccc 3208
Val Met Asp Asn Ser Ala His Asp Leu Arg Asp Gly Ala Leu Asn Pro
780 785 790
cga ggc atc aca aac gcc acc ctc atc ggt ccc gga agc tac tcc ttc 3256
Arg Gly Ile Thr Asn Ala Thr Leu Ile Gly Pro Gly Ser Tyr Ser Phe
795 800 805
acc gag tgg aaa ctg gcc ggc aac gca ggc ttc gaa gac cac ctt gac 3304
Thr Glu Trp Lys Leu Ala Gly Asn Ala Gly Phe Glu Asp His Leu Asp
810 815 820
ccg gtc cgc gcc ccg ctc aac gag ggc agt ctg tac gcc gag cgc gtc 3352
Pro Val Arg Ala Pro Leu Asn Glu Gly Ser Leu Tyr Ala Glu Arg Val
825 830 835 840
ggt atc cat ctc ccg ggc tat gag ttc gac gaa gcc gag gag gtg tct 3400
Gly Ile His Leu Pro Gly Tyr Glu Phe Asp Glu Ala Glu Glu Val Ser
845 850 855
tca aac agc acg agc cta acc gtt ccc ggc gct ggt att cgc gtc ttc 3448
Ser Asn Ser Thr Ser Leu Thr Val Pro Gly Ala Gly Ile Arg Val Phe
860 865 870
cgc act gtt gtt ccc ctc tcc gtg ccc cag gga ctg gac gtc tct atc 3496
Arg Thr Val Val Pro Leu Ser Val Pro Gln Gly Leu Asp Val Ser Ile
875 880 885
tcg ttc cgt ctg acg gcg ccc tcg aac gta acc ttt acc tct gcg gag 3544
Ser Phe Arg Leu Thr Ala Pro Ser Asn Val Thr Phe Thr Ser Ala Glu
890 895 900
ggg tat act aac cag ctg cgg gct ctg ctt ttc gtc aat ggg tac cag 3592
Gly Tyr Thr Asn Gln Leu Arg Ala Leu Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln
905 910 915 920
tat ggt cgc ttt aac ccc tat atc ggt cat cag atc gac ttc cct gtt 3640
Tyr Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Ile Gly His Gln Ile Asp Phe Pro Val
925 930 935
cct ccg ggt gtc ctt gat tac aac ggg gat aac acg att gcc gtg acg 3688
Pro Pro Gly Val Leu Asp Tyr Asn Gly Asp Asn Thr Ile Ala Val Thr
940 945 950
gtg tgg agt cag agt gtg gat ggt gct gag atc aag gtc gat tgg aat 3736
Val Trp Ser Gln Ser Val Asp Gly Ala Glu Ile Lys Val Asp Trp Asn
955 960 965
gtg gac tat gtc cat gag acc agc ttc gat atg aac ttt gat gga gcg 3784
Val Asp Tyr Val His Glu Thr Ser Phe Asp Met Asn Phe Asp Gly Ala
970 975 980
tac ctg aga cct gga tgg atc gag gag aga cgt gaa tat gct taa 3829
Tyr Leu Arg Pro Gly Trp Ile Glu Glu Arg Arg Glu Tyr Ala
985 990 995
<210> 54
<211> 1020
<212> PRT
<213> 米曲霉
<400> 54
Met Leu Ile Ser Lys Thr Val Leu Ser Gly Leu Ala Leu Gly Ala Ser
-20 -15 -10
Phe Val Gly Val Ser Ala Gln Gln Asn Ser Thr Arg Trp Pro Leu His
-5 -1 1 5 10
Asp Asn Gly Leu Thr Asp Thr Val Glu Trp Asp His Tyr Ser Phe Leu
15 20 25
Ile Asn Gly Gln Arg His Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Leu Leu Glu Lys Ile Lys
45 50 55
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ser Ile Tyr Asn His Trp Gly Tyr His
60 65 70
Ser Pro Lys Pro Gly Val Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asn Phe
75 80 85 90
Thr Ser Ile Met Thr Leu Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr Met Ile Ile
95 100 105
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Leu Pro
110 115 120
Leu Trp Thr Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Lys Leu Arg Asp Asn Asp Pro
125 130 135
Arg Tyr Leu Glu Ala Leu Thr Pro Tyr Trp Ala Asn Ile Ser Lys Ile
140 145 150
Ile Ala Pro His Leu Ile Thr Asn Asp Gly Asn Val Ile Leu Tyr Gln
155 160 165 170
Ile Glu Asn Glu Tyr Ala Glu Gln Trp Leu Asp Glu Glu Thr His Glu
175 180 185
Pro Asn Thr Ser Gly Gln Glu Tyr Met Gln Tyr Leu Glu Asp Val Ala
190 195 200
Arg Glu Asn Gly Ile Asp Ala Pro Leu Ile His Asn Leu Pro Asn Met
205 210 215
Asn Gly His Ser Trp Ser Lys Asp Leu Ser Asn Ala Thr Gly Asn Val
220 225 230
Asp Val Ile Gly Val Asp Ser Tyr Pro Thr Cys Trp Thr Cys Asn Val
235 240 245 250
Ser Glu Cys Ala Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Ile Pro Tyr Lys Thr Leu
255 260 265
Ile Tyr Tyr Asp Tyr Phe Lys Glu Leu Ser Pro Thr Gln Pro Ser Phe
270 275 280
Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro Gln
285 290 295
Gly Gly Cys Pro Asp Asp Leu Gly Pro Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr
300 305 310
Arg Asn Leu Ile Ser Gln Arg Val Ser Ala Ile Ser Leu Tyr Met Leu
315 320 325 330
Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Trp His Ala Ser Thr Asp Val Ala Thr
335 340 345
Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asn Arg Lys Leu Ile Glu
350 355 360
Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Val Leu Thr Gln Phe Thr Lys Ile Ala Gln
365 370 375
Asp Leu Ser Lys Val Asp Arg Leu Gly Asn Ser Thr Lys Tyr Ser Ser
380 385 390
Asn Pro Ala Val Ser Val Ala Glu Leu Arg Asn Pro Asp Thr Gly Ala
395 400 405 410
Ala Phe Tyr Val Thr Gln His Glu Tyr Thr Pro Ser Gly Thr Val Glu
415 420 425
Lys Phe Thr Val Lys Val Asn Thr Ser Glu Gly Ala Leu Thr Ile Pro
430 435 440
Gln Tyr Gly Ser Gln Ile Thr Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile
445 450 455
Val Thr Asp Phe Lys Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala
460 465 470
Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Gly Lys Glu Val Leu Ala Leu
475 480 485 490
Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Thr Val Lys Gly Val Asn
495 500 505
Ser Ala Lys Phe Ala Asp Lys Gly Arg Thr Ala Asn Ile Glu Ile His
510 515 520
Pro Gly Thr Asn Asn Val Thr Val Ser Phe Met Gln Arg Ser Gly Met
525 530 535
Ser Leu Val Glu Leu Gly Asp Gly Thr Arg Ile Val Leu Leu Asp Arg
540 545 550
Ser Ala Ala His Val Phe Trp Ser Thr Pro Leu Asn Asn Asp Pro Ala
555 560 565 570
Glu Ala Gly Asn Asn Thr Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val Arg
575 580 585
Ser Ala Lys Leu Glu Gly Cys Asp Leu Lys Leu Thr Gly Asp Ile Gln
590 595 600
Asn Ser Thr Glu Val Ser Ile Phe Ala Pro Lys Ser Val Cys Ser Val
605 610 615
Asn Trp Asn Gly Lys Lys Thr Ser Val Lys Ser Ala Lys Gly Gly Val
620 625 630
Ile Thr Thr Thr Leu Gly Gly Asp Ala Lys Phe Glu Leu Pro Thr Ile
635 640 645 650
Ser Gly Trp Lys Ser Ala Asp Ser Leu Pro Glu Ile Ala Lys Asp Tyr
655 660 665
Ser Ala Thr Ser Lys Ala Trp Val Val Ala Thr Lys Thr Asn Ser Ser
670 675 680
Asn Pro Thr Pro Pro Ala Pro Asn Asn Pro Val Leu Tyr Val Asp Glu
685 690 695
Asn Asp Ile His Val Gly Asn His Ile Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Ser
700 705 710
Thr Asp Glu Pro Pro Thr Asp Val Tyr Leu Asn Ile Thr Gly Gly Arg
715 720 725 730
Ala Phe Gly Tyr Ser Val Trp Leu Asn Ser Asp Phe Ile Gly Ser Trp
735 740 745
Leu Gly Thr Ala Thr Thr Glu Gln Asn Asp Gln Thr Phe Ser Phe Ser
750 755 760
Asn Ala Thr Leu Ser Thr Asp Glu Asp Asn Ile Leu Val Val Val Met
765 770 775
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780 785 790
Ile Thr Asn Ala Thr Leu Ile Gly Pro Gly Ser Tyr Ser Phe Thr Glu
795 800 805 810
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815 820 825
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830 835 840
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<213> 米曲霉
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Leu Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asn Phe Thr Ser Ile Met Thr Leu
85 90 95
Ala Lys Glu Ile Gly Leu Tyr Met Ile Ile Arg Pro Gly Pro Tyr Val
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Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Leu Pro Leu Trp Thr Thr Thr Gly
115 120 125
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145 150 155 160
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405 410 415
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Thr Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Lys Phe
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Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala
465 470 475 480
Val Ile Asp Gly Lys Glu Val Leu Ala Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu
485 490 495
Ser Gly Glu Phe Thr Val Lys Gly Val Asn Ser Ala Lys Phe Ala Asp
500 505 510
Lys Gly Arg Thr Ala Asn Ile Glu Ile His Pro Gly Thr Asn Asn Val
515 520 525
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850 855 860
Pro Gly Ala Gly Ile Arg Val Phe Arg Thr Val Val Pro Leu Ser Val
865 870 875 880
Pro Gln Gly Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Arg Leu Thr Ala Pro Ser
885 890 895
Asn Val Thr Phe Thr Ser Ala Glu Gly Tyr Thr Asn Gln Leu Arg Ala
900 905 910
Leu Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Phe Asn Pro Tyr Ile
915 920 925
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<213> 肉色曲霉
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<220>
<221> CDS
<222> (2530)..(3352)
<400> 56
atg gcg cgt ctc cca cag ctc ctc ttc cta ctc ctc gcg agt gtc ggg 48
Met Ala Arg Leu Pro Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Ala Ser Val Gly
-20 -15 -10 -5
ctc ctc agc gca gcc cag aac cac acc gac tcc gaa tgg cca ctc cac 96
Leu Leu Ser Ala Ala Gln Asn His Thr Asp Ser Glu Trp Pro Leu His
-1 1 5 10
gat aac ggc cta aac acc gtc gtt caa tgg gat cac tac agc ttc cag 144
Asp Asn Gly Leu Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln
15 20 25
gtc cac ggc cag cgc atc ttc gtc ttc tcc ggc gaa ttt cac tac tgg 192
Val His Gly Gln Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
cgc atc ccc gtc ccg gga ctc tgg cgc gac atc ctg gag aag atc aag 240
Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys
45 50 55 60
gct gcc gga ttc act gca ttc gct ttc tac tcc agc tgg gcc tac cat 288
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
gca ccc aac aat cac act gtg gac ttc tcg acc ggc gcc cgc gac atc 336
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile
80 85 90
acc ccc atc tac gag ctc gcg aaa gag ctg ggc atg tat atc atc gtc 384
Thr Pro Ile Tyr Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Ile Ile Val
95 100 105
cga ccg ggc ccc tac gtc aat gcg gag gcc agc gcc ggc ggc tat ccc 432
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Tyr Pro
110 115 120
ctg tgg gtg acc acc ggt gca tac ggc agt ctg cgg aac gac gac gca 480
Leu Trp Val Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asp Asp Ala
125 130 135 140
cgg tac acc gag gcc tgg aag ccg tac ttt gcc aaa atg tcg gaa atc 528
Arg Tyr Thr Glu Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Ala Lys Met Ser Glu Ile
145 150 155
acg agc cag tac cag gtc acc gat ggc cac aat acg ttc tgc tat cag 576
Thr Ser Gln Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Phe Cys Tyr Gln
160 165 170
att gag aac gag tac ggc cag caa tgg att gga gat ccc gtc gat cga 624
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Val Asp Arg
175 180 185
aac ccc aac cag acg gcc gtt gcg tac atg gaa ctc ctc gaa gag agt 672
Asn Pro Asn Gln Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Glu Ser
190 195 200
gcc cgc gaa aat ggc atc gtc gtg cca ttg act gcg aat gac ccc aac 720
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Val Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
atg aac acc aag tcc tgg ggg aat gat tgg tct aat gca ggg ggc aat 768
Met Asn Thr Lys Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn
225 230 235
gtc gat gtt gtc ggg ctg gat tct tac cct tct gtaagctatt ctccctccta 821
Val Asp Val Val Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser
240 245
tacaacaccc ctatacaaga tctcctgacc aacaaactaa tgatacag tgc tgg act 878
Cys Trp Thr
250
tgc gac gtc acc caa tgc acc tcc acc aac gga gaa tac gtg ccc tac 926
Cys Asp Val Thr Gln Cys Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr
255 260 265
aag gtg atg ggg tac tac gac tac ttc cag gag gtg cag ccc acc atg 974
Lys Val Met Gly Tyr Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Thr Met
270 275 280
ccg ggc ttc atg cct gag ttc cag ggt ggg agt tac aac ccc tgg gcc 1022
Pro Gly Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala
285 290 295
ggc ccg gag ggt gga tgt ccc gga gac acg gga gtc gac ttt gcg aat 1070
Gly Pro Glu Gly Gly Cys Pro Gly Asp Thr Gly Val Asp Phe Ala Asn
300 305 310
ctc ttc tac cgg tgg aac atc gcg cag cgg gtg acg gct atg agt ctg 1118
Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Ala Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu
315 320 325 330
tac atg ctg tac ggg ggc acg aac tgg ggc gcc atc gcc gcg ccg gtc 1166
Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val
335 340 345
acg gct acc agc tac gac tac tcc tcg ccc atc tcg gaa gac cgc tcc 1214
Thr Ala Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser
350 355 360
atc ggc agc aaa tac tac gag acc aag ctc ctg gcg ctc ttc acc cgc 1262
Ile Gly Ser Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg
365 370 375
agt gcc acg gac ctg acc atg acc gac cgc atc gga aac ggc acg cag 1310
Ser Ala Thr Asp Leu Thr Met Thr Asp Arg Ile Gly Asn Gly Thr Gln
380 385 390
tac acg aac aac ccg gct gtc gcc gcc tac gaa ctg cgt aac ccc gtc 1358
Tyr Thr Asn Asn Pro Ala Val Ala Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Val
395 400 405 410
acc aac ggg gcg ttt tac gtg acc atc cat gca gac agc acc gtc ggc 1406
Thr Asn Gly Ala Phe Tyr Val Thr Ile His Ala Asp Ser Thr Val Gly
415 420 425
tcg gat gag tcg ttc cgg ttg aac gtc aac acc tcc gca ggt gcg ttc 1454
Ser Asp Glu Ser Phe Arg Leu Asn Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Phe
430 435 440
acg gtc ccc agc aag ggc gca atc cgt ctc aac gga cac caa tcg aag 1502
Thr Val Pro Ser Lys Gly Ala Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys
445 450 455
att gtc gtc acg gac ttc cgc ttc ggg ccc tct cac tcg ttg ctg tat 1550
Ile Val Val Thr Asp Phe Arg Phe Gly Pro Ser His Ser Leu Leu Tyr
460 465 470
tcc acc gcg gag gtc ctc acc cat gcg gtg ttc gac aag cag gcc act 1598
Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr His Ala Val Phe Asp Lys Gln Ala Thr
475 480 485 490
atc gtc ctt tgg gtt ccc acc ggg gag tcg ggc gaa ttc gcc gtc aag 1646
Ile Val Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Val Lys
495 500 505
ggc gca aag tcc ggt aag gta gaa agc tgt cca cgg tgc tcc aac gcg 1694
Gly Ala Lys Ser Gly Lys Val Glu Ser Cys Pro Arg Cys Ser Asn Ala
510 515 520
acc ttc act cgg aag aaa gat gtg ctc gtt gtc aac ttt acg cag act 1742
Thr Phe Thr Arg Lys Lys Asp Val Leu Val Val Asn Phe Thr Gln Thr
525 530 535
ggc ggg atg agt gtg ctc cag ctg aac aac ggc gtg cgc gtc gtt ctt 1790
Gly Gly Met Ser Val Leu Gln Leu Asn Asn Gly Val Arg Val Val Leu
540 545 550
ctt gat cgt ccc gct gca tac aac ttc tgg gct cct ccg gtg acc gac 1838
Leu Asp Arg Pro Ala Ala Tyr Asn Phe Trp Ala Pro Pro Val Thr Asp
555 560 565 570
gat cct ttt gcc cca gag acc gat ctg g gtaagatggc ttcgcccttc 1886
Asp Pro Phe Ala Pro Glu Thr Asp Leu
575
taaggtcaca attcgttaac agtaggcag tt ctc gtc caa ggc cca tac ctc 1938
Val Leu Val Gln Gly Pro Tyr Leu
580 585
gtg cgt tcc gcg agt ctg tcc ggg tcg acc ctc gcg ctg aga ggc gac 1986
Val Arg Ser Ala Ser Leu Ser Gly Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp
590 595 600
tcg atc aaa gag acc gcg ttg gag atc ttc gca ccc aag aag gtg aag 2034
Ser Ile Lys Glu Thr Ala Leu Glu Ile Phe Ala Pro Lys Lys Val Lys
605 610 615
aca gtc acc tgg aat ggg aag cga gtc aag act tcc aag tca tca tac 2082
Thr Val Thr Trp Asn Gly Lys Arg Val Lys Thr Ser Lys Ser Ser Tyr
620 625 630 635
ggg agt ctc acc gcg tcg ctc gca cct cca ccg gct gtg acg ctc ccg 2130
Gly Ser Leu Thr Ala Ser Leu Ala Pro Pro Pro Ala Val Thr Leu Pro
640 645 650
gca ttg acc tcg acc cga tgg aag tcc caa gac agt ctg ccc gaa agg 2178
Ala Leu Thr Ser Thr Arg Trp Lys Ser Gln Asp Ser Leu Pro Glu Arg
655 660 665
ctt cca tcc tac gac gac tcc gga ccg gcc tgg gtt g gtacgtatct 2225
Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser Gly Pro Ala Trp Val
670 675
cgctacattc tctctatgtc ccgtactaac aacctacgca g ac gcc gac cac atg 2280
Asp Ala Asp His Met
680
act aca cag aac ccc agg acc ccg gag acc ctc ccc gtg ctc tac gca 2328
Thr Thr Gln Asn Pro Arg Thr Pro Glu Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala
685 690 695 700
gat gaa tac g gtactatcac cctcactcac attccctcaa acacctcact 2378
Asp Glu Tyr
aacggtacag gc ttc cac aat ggc atc cgc ctc tgg cgc ggg tcc ttc 2426
Gly Phe His Asn Gly Ile Arg Leu Trp Arg Gly Ser Phe
705 710 715
acc gac gct gcc tcg ggc gtc tac ctc aac gtc caa ggc ggc gcc gcc 2474
Thr Asp Ala Ala Ser Gly Val Tyr Leu Asn Val Gln Gly Gly Ala Ala
720 725 730
tt gtacgtacat tccctcctca tccctcccag caccaactaa catacattcc cag t 2530
Phe
ggc tgg tcc gcc tac ctg aac ggc cac ttc ctc ggc tcc cac ctc ggc 2578
Gly Trp Ser Ala Tyr Leu Asn Gly His Phe Leu Gly Ser His Leu Gly
735 740 745
aca gca aca acc tcc cag gcg aac aaa acg ctc gtc ttc cca acc ggt 2626
Thr Ala Thr Thr Ser Gln Ala Asn Lys Thr Leu Val Phe Pro Thr Gly
750 755 760 765
gca ctc aac caa aac gcc acc aac acc ctc ctc gtc atc cat gac gac 2674
Ala Leu Asn Gln Asn Ala Thr Asn Thr Leu Leu Val Ile His Asp Asp
770 775 780
acc ggc cac gac cag acc acc ggc gcg ctg aac ccg cgc ggc atc ctc 2722
Thr Gly His Asp Gln Thr Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu
785 790 795
gcc gcc cgg ctg ctc ccc gcc tcc aac gcc gcg gcc gac tcg acc gcc 2770
Ala Ala Arg Leu Leu Pro Ala Ser Asn Ala Ala Ala Asp Ser Thr Ala
800 805 810
ccg acc ttc aca cgg tgg cgc gtc gcc ggc aca gcg ggc ggg gaa tcc 2818
Pro Thr Phe Thr Arg Trp Arg Val Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser
815 820 825
gac ctc gac ccc gta cgc ggc gtc tac aac gaa gac ggg ctc ttc gcg 2866
Asp Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala
830 835 840 845
gag cgc gtc ggc tgg cac ctc ccc ggc ttc gac gac ggc gcc tgg ccc 2914
Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Gly Ala Trp Pro
850 855 860
gcc gcc aac acg acc gcc gtg gcg caa gaa acc gga acc gtg tcg ctg 2962
Ala Ala Asn Thr Thr Ala Val Ala Gln Glu Thr Gly Thr Val Ser Leu
865 870 875
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Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Val Ile Pro Leu
880 885 890
cat ctg ccg cgc ggc atc gac gcg tcc atc tcg ttc gtg ctg ggc acg 3058
His Leu Pro Arg Gly Ile Asp Ala Ser Ile Ser Phe Val Leu Gly Thr
895 900 905
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ccg gtt ccg gcg gga gtg ctg gac tac gac ggt gag aac acg atc ggc 3202
Pro Val Pro Ala Gly Val Leu Asp Tyr Asp Gly Glu Asn Thr Ile Gly
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Val Ala Val Trp Ala Gln Ser Asp Ala Gly Ala Ala Ile Asn Leu Asp
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tgg cgg gtg aac tac gtt gcc gac agc tcg ttg gac gcg gtg cgg ctt 3298
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Asp
gca aac cac cag tcc aca ttg aac cct cgt gcc cct act act ctg cca 2322
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Gly Phe His Asn Gly Val Arg Leu Trp
705
cgc gga tac ttc aac ggc tct gca aca ggg gcc tac atc aac gtc cag 2473
Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Ser Ala Thr Gly Ala Tyr Ile Asn Val Gln
710 715 720 725
ggt gga tat gcc tt gtaagtccct ctactcgaac cccaacccat gcccagcact 2527
Gly Gly Tyr Ala Phe
730
aacacaatcc ag c ggc tgg tcc gcc tgg ctc aac ggc caa ttc atc ggc 2576
Gly Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly Gln Phe Ile Gly
735 740
tcc tac ctc ggc tcc gcc gac ctc gag tcc ggc aac cta tcc cta tcc 2624
Ser Tyr Leu Gly Ser Ala Asp Leu Glu Ser Gly Asn Leu Ser Leu Ser
745 750 755
ttc acc aac gca acc atc aac acc aac aaa ccc aac atc ctc ctc atc 2672
Phe Thr Asn Ala Thr Ile Asn Thr Asn Lys Pro Asn Ile Leu Leu Ile
760 765 770
gtc cat gac gac aca ggc cac gac gag aca agc ggc gcc ctc aat ccc 2720
Val His Asp Asp Thr Gly His Asp Glu Thr Ser Gly Ala Leu Asn Pro
775 780 785 790
cgc ggt atc ctc gac gcc cac ctc ctc ggc tca tca tcc ggc ttc acc 2768
Arg Gly Ile Leu Asp Ala His Leu Leu Gly Ser Ser Ser Gly Phe Thr
795 800 805
cac tgg cgt ctc gcc ggt acc gcg ggc ggc gag tcc aac ctc gac ccc 2816
His Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro
810 815 820
gtg cgc ggc gtc ttc aac gaa gat ggg ctc tac ggc gaa cgg gtt ggc 2864
Val Arg Gly Val Phe Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Gly Glu Arg Val Gly
825 830 835
tgg cat ctc ccg ggc tac gac gac tcg acc tgg tcc agc agc ggt ggt 2912
Trp His Leu Pro Gly Tyr Asp Asp Ser Thr Trp Ser Ser Ser Gly Gly
840 845 850
tca agt cta agc ttc act ggc gca aca gtc cgc ttc ttc cgc aca acc 2960
Ser Ser Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Thr
855 860 865 870
atc ccg ctc aat ttc ccc tcc aac aca gac gta tca atc tcc ttc atc 3008
Ile Pro Leu Asn Phe Pro Ser Asn Thr Asp Val Ser Ile Ser Phe Ile
875 880 885
ttg tcc aca ccg tct ggc agc acg acc gca tac cgg gcc cag atc ttt 3056
Leu Ser Thr Pro Ser Gly Ser Thr Thr Ala Tyr Arg Ala Gln Ile Phe
890 895 900
gtg aac ggg tac cag tac ggc cgg tat aac ccg tac atc ggg aac cag 3104
Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro Tyr Ile Gly Asn Gln
905 910 915
gtg gtg tat cct gtt ccg gcg ggg att ttg aac tac agc ggg gag aat 3152
Val Val Tyr Pro Val Pro Ala Gly Ile Leu Asn Tyr Ser Gly Glu Asn
920 925 930
acg gtg gct gtt gct gtg tgg gcg cag acg gag gag ggg gcg agg atg 3200
Thr Val Ala Val Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly Ala Arg Met
935 940 945 950
gag gtg gat tgg cgg gtg aat tat gtg gcg gat agt tcg ttg gat gtt 3248
Glu Val Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val
955 960 965
gtt agt gtt agt aag aag gcg gag ggg ttg agg acg aag tgg act gag 3296
Val Ser Val Ser Lys Lys Ala Glu Gly Leu Arg Thr Lys Trp Thr Glu
970 975 980
gtg cgg gag aag ttt gct tga 3317
Val Arg Glu Lys Phe Ala
985
<210> 60
<211> 1011
<212> PRT
<213> 檞皮素青霉
<400> 60
Met Thr Arg Ala Thr Arg Leu Phe Tyr Gly Leu Gly Thr Ile Phe Ser
-20 -15 -10
Leu Leu Gly Ala Thr Ile Ala Ala Glu Asn Gln Thr Thr Thr Glu Trp
-5 -1 1 5
Pro Leu His Asp Asp Gly Leu Asn Gln Val Val Gln Trp Asp His Tyr
10 15 20 25
Ser Phe Gln Ile Asn Ser Gln Arg Ile Phe Ile Phe Ser Gly Glu Phe
30 35 40
His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu
45 50 55
Lys Ile Lys Ala Val Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp
60 65 70
Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn Gln Thr Leu Asp Phe Thr Thr Gly Ala
75 80 85
His Asp Phe Thr Pro Leu Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Leu Tyr
90 95 100 105
Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly
110 115 120
Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr Thr Gly Asp Tyr Gly Thr Leu Arg Asn
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Asn Asp Thr Arg Tyr Thr Lys Ala Trp Thr Pro Tyr Phe Thr Lys Met
140 145 150
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155 160 165
Val Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Glu Gln Trp Val Gly Ser Ala
170 175 180 185
Ser Lys Arg Val Pro Asn Glu Lys Ala Ile Asn Tyr Met Glu Leu Leu
190 195 200
Glu Ala Asn Ala Arg Ala Asn Gly Ile Thr Val Pro Leu Thr Ala Asn
205 210 215
Asp Pro Asn Met Asn Ser His Ser Trp Gly Ser Asp Trp Ser Lys Glu
220 225 230
Gly Gly Asn Val Asp Val Ala Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp
235 240 245
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250 255 260 265
Phe Gln Val Met Asp Tyr Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Ser Gln Pro Thr
270 275 280
Met Pro Glu Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp
285 290 295
Gly Gly Pro Glu Gly Gly Cys Ala Glu Asn Ser Asn Gln Asp Phe Ala
300 305 310
Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser
315 320 325
Leu Tyr Met Leu Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro
330 335 340 345
Val Thr Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg
350 355 360
Ser Ile Gly Asp Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr
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380 385 390
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395 400 405
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410 415 420 425
Ser Thr Asn Glu Ala Phe His Leu Lys Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala
430 435 440
Leu Thr Val Pro Thr His Gly Gly Val Val Arg Leu Asn Gly His Gln
445 450 455
Ser Lys Ile Leu Val Thr Asp Phe Thr Phe Gly Lys Glu Thr Leu Leu
460 465 470
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475 480 485
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490 495 500 505
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510 515 520
Val Lys Phe Phe Lys Glu His Gly Gly Leu Thr Ala Ala Ile Thr Gln
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540 545 550
Leu Asp Arg Thr Ser Ala Tyr Lys Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn
555 560 565
Asp Pro Leu Val Pro Glu Thr Glu Ser Val Leu Val Gln Gly Pro Tyr
570 575 580 585
Leu Val Arg Gly Ala Ser Leu Ser Gly Ser Lys Leu Ala Val Thr Gly
590 595 600
Asp Ile Ile Asn Ala Thr Thr Leu Glu Val Phe Ala Pro Lys Ala Val
605 610 615
Lys Ser Ile Thr Trp Asn Gly Lys Thr Leu Lys Thr Gln Arg Thr Glu
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Tyr Gly Ser Leu Lys Gly Ser Ile Ala Ala Pro Lys Ala Val Thr Leu
635 640 645
Pro Ser Phe Lys Ser Trp Lys Ser Lys Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu
650 655 660 665
Ala Asp Tyr Asp Asp Ala Gly Ala Ala Trp Val Asp Ala Asn His Gln
670 675 680
Ser Thr Leu Asn Pro Arg Ala Pro Thr Thr Leu Pro Val Met Tyr Ala
685 690 695
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Asn Gly Ser Ala Thr Gly Ala Tyr Ile Asn Val Gln Gly Gly Tyr Ala
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Phe Gly Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly Gln Phe Ile Gly Ser Tyr Leu
730 735 740 745
Gly Ser Ala Asp Leu Glu Ser Gly Asn Leu Ser Leu Ser Phe Thr Asn
750 755 760
Ala Thr Ile Asn Thr Asn Lys Pro Asn Ile Leu Leu Ile Val His Asp
765 770 775
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810 815 820 825
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830 835 840
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875 880 885
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Pro Val Pro Ala Gly Ile Leu Asn Tyr Ser Gly Glu Asn Thr Val Ala
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Val Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly Ala Arg Met Glu Val Asp
940 945 950
Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val Val Ser Val
955 960 965
Ser Lys Lys Ala Glu Gly Leu Arg Thr Lys Trp Thr Glu Val Arg Glu
970 975 980 985
Lys Phe Ala
<210> 61
<211> 988
<212> PRT
<213> 檞皮素青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(988)
<400> 61
Ala Glu Asn Gln Thr Thr Thr Glu Trp Pro Leu His Asp Asp Gly Leu
1 5 10 15
Asn Gln Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln Ile Asn Ser Gln
20 25 30
Arg Ile Phe Ile Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
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Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys Ala Val Gly Phe
50 55 60
Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn
65 70 75 80
Gln Thr Leu Asp Phe Thr Thr Gly Ala His Asp Phe Thr Pro Leu Phe
85 90 95
Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro
100 105 110
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195 200 205
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210 215 220
Ser Trp Gly Ser Asp Trp Ser Lys Glu Gly Gly Asn Val Asp Val Ala
225 230 235 240
Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp Leu Ser Gln Cys
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Phe Gly Gly
325 330 335
Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Tyr Asp
340 345 350
Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Asp Lys Tyr Tyr
355 360 365
Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Cys Ala Lys Asp Leu Thr
370 375 380
Met Thr Asn Leu Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Asp Asn Gly Asn
385 390 395 400
Val Arg Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Asp Thr Asn Ala Gly Phe Tyr
405 410 415
Ala Thr Phe His Thr Asn Thr Ser Val Ser Thr Asn Glu Ala Phe His
420 425 430
Leu Lys Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Val Pro Thr His Gly
435 440 445
Gly Val Val Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Leu Val Thr Asp
450 455 460
Phe Thr Phe Gly Lys Glu Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu
465 470 475 480
Thr Tyr Ala Val Phe Asp Lys Thr Pro Thr Leu Val Leu Trp Met Pro
485 490 495
Thr Gly Glu Thr Gly Glu Phe Asn Ile Lys Gly Ala Lys Lys Gly Ser
500 505 510
Val Gln Lys Cys Gln Gly Cys Ser Ser Val Lys Phe Phe Lys Glu His
515 520 525
Gly Gly Leu Thr Ala Ala Ile Thr Gln Ser Ser Gly Met Ser Val Leu
530 535 540
Ala Ile Asp Asp Ile Gln Val Ile Val Leu Asp Arg Thr Ser Ala Tyr
545 550 555 560
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565 570 575
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Ser Gly Ser Lys Leu Ala Val Thr Gly Asp Ile Ile Asn Ala Thr Thr
595 600 605
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610 615 620
Lys Thr Leu Lys Thr Gln Arg Thr Glu Tyr Gly Ser Leu Lys Gly Ser
625 630 635 640
Ile Ala Ala Pro Lys Ala Val Thr Leu Pro Ser Phe Lys Ser Trp Lys
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660 665 670
Ala Ala Trp Val Asp Ala Asn His Gln Ser Thr Leu Asn Pro Arg Ala
675 680 685
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Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Ser Ala Thr Gly Ala
705 710 715 720
Tyr Ile Asn Val Gln Gly Gly Tyr Ala Phe Gly Trp Ser Ala Trp Leu
725 730 735
Asn Gly Gln Phe Ile Gly Ser Tyr Leu Gly Ser Ala Asp Leu Glu Ser
740 745 750
Gly Asn Leu Ser Leu Ser Phe Thr Asn Ala Thr Ile Asn Thr Asn Lys
755 760 765
Pro Asn Ile Leu Leu Ile Val His Asp Asp Thr Gly His Asp Glu Thr
770 775 780
Ser Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Asp Ala His Leu Leu Gly
785 790 795 800
Ser Ser Ser Gly Phe Thr His Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly
805 810 815
Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Phe Asn Glu Asp Gly Leu
820 825 830
Tyr Gly Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Tyr Asp Asp Ser Thr
835 840 845
Trp Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val
850 855 860
Arg Phe Phe Arg Thr Thr Ile Pro Leu Asn Phe Pro Ser Asn Thr Asp
865 870 875 880
Val Ser Ile Ser Phe Ile Leu Ser Thr Pro Ser Gly Ser Thr Thr Ala
885 890 895
Tyr Arg Ala Gln Ile Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn
900 905 910
Pro Tyr Ile Gly Asn Gln Val Val Tyr Pro Val Pro Ala Gly Ile Leu
915 920 925
Asn Tyr Ser Gly Glu Asn Thr Val Ala Val Ala Val Trp Ala Gln Thr
930 935 940
Glu Glu Gly Ala Arg Met Glu Val Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala
945 950 955 960
Asp Ser Ser Leu Asp Val Val Ser Val Ser Lys Lys Ala Glu Gly Leu
965 970 975
Arg Thr Lys Trp Thr Glu Val Arg Glu Lys Phe Ala
980 985
<210> 62
<211> 331
<212> PRT
<213> 特异腐质霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(331)
<400> 62
Leu Gln Tyr Lys Gly Val Asp Trp Ser Ser Val Met Val Glu Glu Arg
1 5 10 15
Ala Gly Val Arg Tyr Lys Asn Val Asn Gly Gln Glu Lys Pro Leu Glu
20 25 30
Tyr Ile Leu Ala Glu Asn Gly Val Asn Met Val Arg Gln Arg Val Trp
35 40 45
Val Asn Pro Trp Asp Gly Asn Tyr Asn Leu Asp Tyr Asn Ile Gln Leu
50 55 60
Ala Arg Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Gly Leu Tyr Ile Asn Phe His
65 70 75 80
Tyr Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Ala His Gln Thr Thr Pro Ala Gly
85 90 95
Trp Pro Ser Asp Ile Asn Asn Leu Ala Trp Lys Leu Tyr Asn Tyr Thr
100 105 110
Leu Asp Ser Met Asn Arg Phe Ala Asp Ala Gly Ile Gln Val Asp Ile
115 120 125
Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Thr Gln Gly Leu Leu Trp Pro Leu Gly
130 135 140
Lys Thr Asn Asn Trp Tyr Asn Ile Ala Arg Leu Leu His Ser Ala Ala
145 150 155 160
Trp Gly Val Lys Asp Ser Arg Leu Asn Pro Lys Pro Lys Ile Met Val
165 170 175
His Leu Asp Asn Gly Trp Asn Trp Asp Thr Gln Asn Trp Trp Tyr Thr
180 185 190
Asn Val Leu Ser Gln Gly Pro Phe Glu Met Ser Asp Phe Asp Met Met
195 200 205
Gly Val Ser Phe Tyr Pro Phe Tyr Ser Ala Ser Ala Thr Leu Asp Ser
210 215 220
Leu Arg Arg Ser Leu Asn Asn Met Val Ser Arg Trp Gly Lys Glu Val
225 230 235 240
Ala Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Thr Ser Cys Pro Tyr Pro Arg Tyr
245 250 255
Gln Phe Pro Ala Asp Val Arg Asn Val Pro Phe Ser Ala Ala Gly Gln
260 265 270
Thr Gln Tyr Ile Gln Ser Val Ala Asn Val Val Ser Ser Val Ser Lys
275 280 285
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290 295 300
Leu Gly Ser Ser Cys Ala Asp Asn Thr Met Phe Thr Pro Ser Gly Gln
305 310 315 320
Ala Leu Ser Ser Leu Ser Val Phe His Arg Ile
325 330
<210> 63
<211> 332
<212> PRT
<213> 嗜热毁丝霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(332)
<400> 63
Ala Leu Thr Tyr Arg Gly Val Asp Trp Ser Ser Val Val Val Glu Glu
1 5 10 15
Arg Ala Gly Val Ser Tyr Lys Asn Thr Asn Gly Asn Ala Gln Pro Leu
20 25 30
Glu Asn Ile Leu Ala Ala Asn Gly Val Asn Thr Val Arg Gln Arg Val
35 40 45
Trp Val Asn Pro Ala Asp Gly Asn Tyr Asn Leu Asp Tyr Asn Ile Ala
50 55 60
Ile Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Gly Val Tyr Ile Asp Phe
65 70 75 80
His Tyr Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Ala His Gln Thr Met Pro Ala
85 90 95
Gly Trp Pro Ser Asp Ile Asp Asn Leu Ser Trp Lys Leu Tyr Asn Tyr
100 105 110
Thr Leu Asp Ala Ala Asn Lys Leu Gln Asn Ala Gly Ile Gln Pro Thr
115 120 125
Ile Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Arg Ala Gly Leu Leu Trp Pro Thr
130 135 140
Gly Arg Thr Glu Asn Trp Ala Asn Ile Ala Arg Leu Leu His Ser Ala
145 150 155 160
Ala Trp Gly Ile Lys Asp Ser Ser Leu Ser Pro Lys Pro Lys Ile Met
165 170 175
Ile His Leu Asp Asn Gly Trp Asp Trp Gly Thr Gln Asn Trp Trp Tyr
180 185 190
Thr Asn Val Leu Lys Gln Gly Thr Leu Glu Leu Ser Asp Phe Asp Met
195 200 205
Met Gly Val Ser Phe Tyr Pro Phe Tyr Ser Ser Ser Ala Thr Leu Ser
210 215 220
Ala Leu Lys Ser Ser Leu Asp Asn Met Ala Lys Thr Trp Asn Lys Glu
225 230 235 240
Ile Ala Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Ile Ser Cys Pro Asn Pro Arg
245 250 255
Tyr Ser Phe Pro Ser Asp Val Lys Asn Ile Pro Phe Ser Pro Glu Gly
260 265 270
Gln Thr Thr Phe Ile Thr Asn Val Ala Asn Ile Val Ser Ser Val Ser
275 280 285
Arg Gly Val Gly Leu Phe Tyr Trp Glu Pro Ala Trp Ile His Asn Ala
290 295 300
Asn Leu Gly Ser Ser Cys Ala Asp Asn Thr Met Phe Ser Gln Ser Gly
305 310 315 320
Gln Ala Leu Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Arg Ile
325 330
<210> 64
<211> 324
<212> PRT
<213> 大型亚灰树花菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 64
Leu Thr Tyr Lys Gly Ala Asp Ile Ser Ser Val Pro Leu Val Glu Gln
1 5 10 15
Ala Gly Ile Lys Tyr Thr Asp Gly Gly Lys Val Thr Pro Phe Glu Asn
20 25 30
Ile Ile His Asn His Gly Ala Asn Thr Val Arg Ile Arg Ile Trp Thr
35 40 45
Ala Gly Asp Tyr Asn Leu Gln Tyr Gly Leu Ala Leu Ala Lys Arg Val
50 55 60
Lys Ala Ala Gly Leu Thr Leu Val Val Asp Leu His Tyr Ser Asp Thr
65 70 75 80
Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Ala Ile Pro Ser Ala Trp Pro Lys Asp
85 90 95
Leu Asp Gly Leu Asn Thr Gln Ile Trp Gln Tyr Thr Lys Asp Val Val
100 105 110
Thr Ser Phe Ala Asn Gln Gly Thr Pro Ile Asp Ile Leu Gln Val Gly
115 120 125
Asn Glu Ile Asn Asn Gly Leu Leu Trp Pro Val Gly Glu Ile Ser Ser
130 135 140
Asn Gly Ile Asn Pro Val Ser Gln Leu Leu His Ser Ala Ile Asn Gly
145 150 155 160
Ala Lys Ala Ala Gly Asn Pro Lys Ile Leu Ile His Leu Ala Asn Gly
165 170 175
Trp Asp Trp Ser Gly Leu Asn Ser Phe Phe Gly Lys Val Phe Ile Pro
180 185 190
Gly Ala Leu Ser Ala Asp Glu Val Asp Ile Ile Gly Val Ser Phe Tyr
195 200 205
Pro Phe Tyr Asp Ala Gly Ala Thr Leu Ser Ala Leu Lys Ser Ser Leu
210 215 220
Ala Asn Leu Ala Asn Thr Phe Lys Lys Pro Ile Val Val Ala Glu Thr
225 230 235 240
Asp Trp Pro Val Ala Cys Ser Gly Val Lys Leu Thr Glu Pro Ser Val
245 250 255
Pro Val Ser Thr Ser Gly Gln Gln Thr Trp Ile Gly Asp Ile Lys Asn
260 265 270
Val Leu Gln Ser Leu Pro Asn Gly Leu Gly Gln Gly Ile Phe Tyr Trp
275 280 285
Glu Pro Gly Trp Ile Gly Asn Ala Asn Leu Gly Ser Gly Cys Ser Asp
290 295 300
Asn Leu Leu Val Ser Ser Asn Gly Ala Thr Arg Asp Ser Ile Asn Ile
305 310 315 320
Phe Asn Gln Met
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 65是保守基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 保守基序的3位氨基酸是苏氨酸（T）或甲硫氨酸（M）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 保守基序的6位氨基酸是色氨酸（W）或甲硫氨酸（M）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 保守基序的9位氨基酸是异亮氨酸（I）或缬氨酸（V）。
<400> 65
Gly Val Xaa Pro Asp Xaa Val Gln Xaa Gly Asn Glu
1 5 10
<210> 66
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 66是保守基序WADP[A/G]xQxKPxAW。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> 保守基序的5位氨基酸是丙氨酸（A）或甘氨酸（G）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 保守基序的6位氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> 保守基序的第8位氨基酸是任何氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> 保守基序的第11位氨基酸是任何氨基酸。
<400> 66
Trp Ala Asp Pro Xaa Xaa Gln Xaa Lys Pro Xaa Ala Trp
1 5 10
<210> 67
<211> 27
<212> PRT
<213> 克劳氏芽孢杆菌
<400> 67
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala
20 25
<210> 68
<211> 3138
<212> DNA
<213> 简青霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(235)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(63)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (64)..(3135)
<220>
<221> CDS
<222> (306)..(1382)
<220>
<221> CDS
<222> (1439)..(1940)
<220>
<221> CDS
<222> (2001)..(3135)
<400> 68
atg cgg ttt ttc gca ttt ctc ccg ttg ctc ctt atc ggg gcg ctg tcg 48
Met Arg Phe Phe Ala Phe Leu Pro Leu Leu Leu Ile Gly Ala Leu Ser
-20 -15 -10
agc att gtc tct gcg acg gac aat ggc aag act acc gat gtt act tgg 96
Ser Ile Val Ser Ala Thr Asp Asn Gly Lys Thr Thr Asp Val Thr Trp
-5 -1 1 5 10
gac aag tat agt ctc tcc gtg aag ggg gag aga gtc ttt gtc ttt tct 144
Asp Lys Tyr Ser Leu Ser Val Lys Gly Glu Arg Val Phe Val Phe Ser
15 20 25
ggt gaa ttc cat tat atg cgt ctt cct gtt ccg gag atg tgg ctt gat 192
Gly Glu Phe His Tyr Met Arg Leu Pro Val Pro Glu Met Trp Leu Asp
30 35 40
gtg ttc caa aag ttg cgc tcc aat ggc ttc aac gcg gta tcc a 235
Val Phe Gln Lys Leu Arg Ser Asn Gly Phe Asn Ala Val Ser
45 50 55
gtgagtaaac caatatatat cccatacacc acactcaatc aattaaaacc aattcaacta 295
accgttcaag tc tac ttc ttc tgg agc ttc cac tcc gct tcg gaa gac 343
Ile Tyr Phe Phe Trp Ser Phe His Ser Ala Ser Glu Asp
60 65 70
aca ttt gac ttt gaa aac ggc gcc cac gat gtc cag cgc gtc ttc gac 391
Thr Phe Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asp Val Gln Arg Val Phe Asp
75 80 85
tac gct aaa caa gcc ggt ctg tat gtg att gcc cgt gca gga ccc tac 439
Tyr Ala Lys Gln Ala Gly Leu Tyr Val Ile Ala Arg Ala Gly Pro Tyr
90 95 100
atc aac gct gaa acc tcg gcc ggt gga ttc gcc ctg tgg gca gcg aac 487
Ile Asn Ala Glu Thr Ser Ala Gly Gly Phe Ala Leu Trp Ala Ala Asn
105 110 115
gga caa atg ggc agt gaa cga acc agt gcc tcg tcc tac tac gac aaa 535
Gly Gln Met Gly Ser Glu Arg Thr Ser Ala Ser Ser Tyr Tyr Asp Lys
120 125 130
tgg ctt ccc tgg atc ctg aag atc ggc aag atc atc gcg gat aac cag 583
Trp Leu Pro Trp Ile Leu Lys Ile Gly Lys Ile Ile Ala Asp Asn Gln
135 140 145 150
atc acc aac ggc gga ccg gtg atc ctg aac cag cac gag aac gag ctc 631
Ile Thr Asn Gly Gly Pro Val Ile Leu Asn Gln His Glu Asn Glu Leu
155 160 165
cag gag acc acc cac agc gcg acc aac act cta gtt ctg tac atg gag 679
Gln Glu Thr Thr His Ser Ala Thr Asn Thr Leu Val Leu Tyr Met Glu
170 175 180
caa atc gca gcc gca ttc gag gag gcc ggt gtc atc gtg ccc agc tcg 727
Gln Ile Ala Ala Ala Phe Glu Glu Ala Gly Val Ile Val Pro Ser Ser
185 190 195
cac aac gaa aaa ggt atg cgc tcg gaa agc tgg tcg aca gat tac gaa 775
His Asn Glu Lys Gly Met Arg Ser Glu Ser Trp Ser Thr Asp Tyr Glu
200 205 210
gac gtc ggc ggt gca gta aac gtc tac ggc ctc gat tca tac ccc ggc 823
Asp Val Gly Gly Ala Val Asn Val Tyr Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Gly
215 220 225 230
ggt ctg tcc tgc aca aac ccc gac tcg gga ttc aac ctc gtc cgc act 871
Gly Leu Ser Cys Thr Asn Pro Asp Ser Gly Phe Asn Leu Val Arg Thr
235 240 245
tac tac caa tgg ttc cag aac tac tcc tac aca cag ccc gaa ttc ctc 919
Tyr Tyr Gln Trp Phe Gln Asn Tyr Ser Tyr Thr Gln Pro Glu Phe Leu
250 255 260
ccc gaa ttt gag ggc ggc tgg ttc cag ccc tgg ggt gga tat ttc tac 967
Pro Glu Phe Glu Gly Gly Trp Phe Gln Pro Trp Gly Gly Tyr Phe Tyr
265 270 275
gac gag tgt gcc gca gag cac tcg ccc gaa ttc gcc gac gtc tat tac 1015
Asp Glu Cys Ala Ala Glu His Ser Pro Glu Phe Ala Asp Val Tyr Tyr
280 285 290
aag aat aac att ggg tcc cgg gtc acc ctg cag agt ctg tat atg gcc 1063
Lys Asn Asn Ile Gly Ser Arg Val Thr Leu Gln Ser Leu Tyr Met Ala
295 300 305 310
ttt ggc ggg acg aat tgg ggt cat agt gcc acg ccg gtc gtt tat act 1111
Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly His Ser Ala Thr Pro Val Val Tyr Thr
315 320 325
tcg tat gac tat gcg gcg ccg cta agg gag acg aga gag atc cag gat 1159
Ser Tyr Asp Tyr Ala Ala Pro Leu Arg Glu Thr Arg Glu Ile Gln Asp
330 335 340
aaa ctc aag cag act aag ttg att ggt ttg ttt act cgg gtt tca tcg 1207
Lys Leu Lys Gln Thr Lys Leu Ile Gly Leu Phe Thr Arg Val Ser Ser
345 350 355
gga ttg ttg cag act gtc atg gag ggc aat gga acg gga tat act agt 1255
Gly Leu Leu Gln Thr Val Met Glu Gly Asn Gly Thr Gly Tyr Thr Ser
360 365 370
gat act agt att tat acg tgg gct ttg cgg aat ccc gag acg gac gct 1303
Asp Thr Ser Ile Tyr Thr Trp Ala Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asp Ala
375 380 385 390
ggg ttc tat gtg ctt gcg cat agt acg agt tcg tct cgt gcg gtg acg 1351
Gly Phe Tyr Val Leu Ala His Ser Thr Ser Ser Ser Arg Ala Val Thr
395 400 405
acg ttc tcg ctg aat gtt aat act tcg gct g gtatggttcc tcacgctgga 1402
Thr Phe Ser Leu Asn Val Asn Thr Ser Ala
410 415
gtgctttgag aatattttga ctaactcgct tcttag gt gct ctg act atc cct 1455
Gly Ala Leu Thr Ile Pro
420
gac att gaa ctg gat ggt cgc caa agc aaa atc atc gtc acg gat tac 1503
Asp Ile Glu Leu Asp Gly Arg Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Tyr
425 430 435
gaa atc ggc aag gcc tcg agc ctt ctc tac tca tcc gcc gag gtt ctg 1551
Glu Ile Gly Lys Ala Ser Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Ala Glu Val Leu
440 445 450
acc tac gct acc ctc gac gtg gac gtg ctg gtg ctc tac ctg aac att 1599
Thr Tyr Ala Thr Leu Asp Val Asp Val Leu Val Leu Tyr Leu Asn Ile
455 460 465 470
gga caa aag ggc gtg ttc gca ttc aag aat gcc cca tcc cac ttg acg 1647
Gly Gln Lys Gly Val Phe Ala Phe Lys Asn Ala Pro Ser His Leu Thr
475 480 485
ttc aag aca tac ggt aac tcg aac ttg act tcc acc aca tcg acc aat 1695
Phe Lys Thr Tyr Gly Asn Ser Asn Leu Thr Ser Thr Thr Ser Thr Asn
490 495 500
gga acg cag tac tcg tac acc caa gga gat ggt gcg acc gct gtc aag 1743
Gly Thr Gln Tyr Ser Tyr Thr Gln Gly Asp Gly Ala Thr Ala Val Lys
505 510 515
ttc tcc aac ggg gtt ctt cta tat ctg ctg gac aag gaa acc gct tgg 1791
Phe Ser Asn Gly Val Leu Leu Tyr Leu Leu Asp Lys Glu Thr Ala Trp
520 525 530
aac ttc ttt gct gtg act acc acg tcc aac ccg aat gtg acc ccc agc 1839
Asn Phe Phe Ala Val Thr Thr Thr Ser Asn Pro Asn Val Thr Pro Ser
535 540 545 550
gaa cac att ctt gct ctt gga ccg tat ttg gtt cgt gag gcg agt atc 1887
Glu His Ile Leu Ala Leu Gly Pro Tyr Leu Val Arg Glu Ala Ser Ile
555 560 565
agc cat gat acc gtt agc ctg att ggt gat aat gcg aat acc acc aca 1935
Ser His Asp Thr Val Ser Leu Ile Gly Asp Asn Ala Asn Thr Thr Thr
570 575 580
ctg ga gtaagttgat tcccatggaa gggtatttgg tggaactgca cttgctaacc 1990
Leu Glu
tttctcatag a gtc tac cct ggt aac gcc cag gta acc aag atc aag tgg 2040
Val Tyr Pro Gly Asn Ala Gln Val Thr Lys Ile Lys Trp
585 590 595
aat ggc aaa ccg att gcg act aag aag acc gca tac ggc agt ctc atc 2088
Asn Gly Lys Pro Ile Ala Thr Lys Lys Thr Ala Tyr Gly Ser Leu Ile
600 605 610
ggc tca gcc caa ggc gca gaa acc gcc aag atc tcc ctg ccc tct ctg 2136
Gly Ser Ala Gln Gly Ala Glu Thr Ala Lys Ile Ser Leu Pro Ser Leu
615 620 625
aca tcc tgg aag tct caa gat act ctt ccc gag atc aag caa gac tac 2184
Thr Ser Trp Lys Ser Gln Asp Thr Leu Pro Glu Ile Lys Gln Asp Tyr
630 635 640 645
gac gac tcg cgc tgg acg gtc tgc aac aag agc acg acg gtc aac tct 2232
Asp Asp Ser Arg Trp Thr Val Cys Asn Lys Ser Thr Thr Val Asn Ser
650 655 660
gtc gca cca ctg tcg ctg ccc gtc cta tac tcg ggc gac tac gga tac 2280
Val Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Leu Tyr Ser Gly Asp Tyr Gly Tyr
665 670 675
cac gca ggc acc aag atc tac cgc ggt cgc ttc gac gga cgc aat gcc 2328
His Ala Gly Thr Lys Ile Tyr Arg Gly Arg Phe Asp Gly Arg Asn Ala
680 685 690
acc ggc gcc aac gtg acg gtg caa aac ggc gtc gcc gct ggc tgg gca 2376
Thr Gly Ala Asn Val Thr Val Gln Asn Gly Val Ala Ala Gly Trp Ala
695 700 705
gcc tgg ttg aac ggc gac tat gtt ggc ggt gcc cta ggc aat cca gct 2424
Ala Trp Leu Asn Gly Asp Tyr Val Gly Gly Ala Leu Gly Asn Pro Ala
710 715 720 725
ctc gca gca acc tcc gac ttg tta acc ttc aac agc tcc tcc ctc cgg 2472
Leu Ala Ala Thr Ser Asp Leu Leu Thr Phe Asn Ser Ser Ser Leu Arg
730 735 740
gat acc gat aac gtc ctc acg gtc gtg atg gac tat acc ggc cac gac 2520
Asp Thr Asp Asn Val Leu Thr Val Val Met Asp Tyr Thr Gly His Asp
745 750 755
gag aac aac gtc aag ccg gcc ggt acc cag aac ccc cgc ggt atc ttg 2568
Glu Asn Asn Val Lys Pro Ala Gly Thr Gln Asn Pro Arg Gly Ile Leu
760 765 770
gga gcc acc ctc ttc ggc ggc ggc aac ttc acc tcc tgg cgc atc caa 2616
Gly Ala Thr Leu Phe Gly Gly Gly Asn Phe Thr Ser Trp Arg Ile Gln
775 780 785
ggc aac gca ggc ggc gaa gca aac atc gac ccc gtc cgc ggc ccc atg 2664
Gly Asn Ala Gly Gly Glu Ala Asn Ile Asp Pro Val Arg Gly Pro Met
790 795 800 805
aac gaa ggt ggc ctc tac ggc gaa cga ctc ggc tgg cat ctc ccg gga 2712
Asn Glu Gly Gly Leu Tyr Gly Glu Arg Leu Gly Trp His Leu Pro Gly
810 815 820
tac acc gca ccc aag agc gcg ggc agc tca tcc ccc ctg cag ggt gtc 2760
Tyr Thr Ala Pro Lys Ser Ala Gly Ser Ser Ser Pro Leu Gln Gly Val
825 830 835
tcg aac gcc gca gga cgc ttc tac acg aca acc ttc aag ctc aat cta 2808
Ser Asn Ala Ala Gly Arg Phe Tyr Thr Thr Thr Phe Lys Leu Asn Leu
840 845 850
gag gcc gat ctg gac gtc ccg att ggc ctg cag ctc ggg gca gcg gcc 2856
Glu Ala Asp Leu Asp Val Pro Ile Gly Leu Gln Leu Gly Ala Ala Ala
855 860 865
aat acc agt gcg gtg gtg cag gtg ttt atg aac ggg tac cag ttt ggc 2904
Asn Thr Ser Ala Val Val Gln Val Phe Met Asn Gly Tyr Gln Phe Gly
870 875 880 885
cat tac ctg ccg cat att gga ccg cag acg ctg ttc ccg ttc cca ccg 2952
His Tyr Leu Pro His Ile Gly Pro Gln Thr Leu Phe Pro Phe Pro Pro
890 895 900
ggt att atc aat aat cgg ggg gag aat acg ttg gcg att agt ctg tgg 3000
Gly Ile Ile Asn Asn Arg Gly Glu Asn Thr Leu Ala Ile Ser Leu Trp
905 910 915
gcg ttg acg gat gag ggg gcg gcg ttg gat cag gtg gag ttg gtc gcg 3048
Ala Leu Thr Asp Glu Gly Ala Ala Leu Asp Gln Val Glu Leu Val Ala
920 925 930
tac ggg gcg tat cgg acc ggg ttc gat ttt aat cag gat tgg acg tac 3096
Tyr Gly Ala Tyr Arg Thr Gly Phe Asp Phe Asn Gln Asp Trp Thr Tyr
935 940 945
ctg cag ccg aag tgg aag aat aat cgg ggg tcg tat gtg tag 3138
Leu Gln Pro Lys Trp Lys Asn Asn Arg Gly Ser Tyr Val
950 955 960
<210> 69
<211> 983
<212> PRT
<213> 简青霉
<400> 69
Met Arg Phe Phe Ala Phe Leu Pro Leu Leu Leu Ile Gly Ala Leu Ser
-20 -15 -10
Ser Ile Val Ser Ala Thr Asp Asn Gly Lys Thr Thr Asp Val Thr Trp
-5 -1 1 5 10
Asp Lys Tyr Ser Leu Ser Val Lys Gly Glu Arg Val Phe Val Phe Ser
15 20 25
Gly Glu Phe His Tyr Met Arg Leu Pro Val Pro Glu Met Trp Leu Asp
30 35 40
Val Phe Gln Lys Leu Arg Ser Asn Gly Phe Asn Ala Val Ser Ile Tyr
45 50 55
Phe Phe Trp Ser Phe His Ser Ala Ser Glu Asp Thr Phe Asp Phe Glu
60 65 70 75
Asn Gly Ala His Asp Val Gln Arg Val Phe Asp Tyr Ala Lys Gln Ala
80 85 90
Gly Leu Tyr Val Ile Ala Arg Ala Gly Pro Tyr Ile Asn Ala Glu Thr
95 100 105
Ser Ala Gly Gly Phe Ala Leu Trp Ala Ala Asn Gly Gln Met Gly Ser
110 115 120
Glu Arg Thr Ser Ala Ser Ser Tyr Tyr Asp Lys Trp Leu Pro Trp Ile
125 130 135
Leu Lys Ile Gly Lys Ile Ile Ala Asp Asn Gln Ile Thr Asn Gly Gly
140 145 150 155
Pro Val Ile Leu Asn Gln His Glu Asn Glu Leu Gln Glu Thr Thr His
160 165 170
Ser Ala Thr Asn Thr Leu Val Leu Tyr Met Glu Gln Ile Ala Ala Ala
175 180 185
Phe Glu Glu Ala Gly Val Ile Val Pro Ser Ser His Asn Glu Lys Gly
190 195 200
Met Arg Ser Glu Ser Trp Ser Thr Asp Tyr Glu Asp Val Gly Gly Ala
205 210 215
Val Asn Val Tyr Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Gly Gly Leu Ser Cys Thr
220 225 230 235
Asn Pro Asp Ser Gly Phe Asn Leu Val Arg Thr Tyr Tyr Gln Trp Phe
240 245 250
Gln Asn Tyr Ser Tyr Thr Gln Pro Glu Phe Leu Pro Glu Phe Glu Gly
255 260 265
Gly Trp Phe Gln Pro Trp Gly Gly Tyr Phe Tyr Asp Glu Cys Ala Ala
270 275 280
Glu His Ser Pro Glu Phe Ala Asp Val Tyr Tyr Lys Asn Asn Ile Gly
285 290 295
Ser Arg Val Thr Leu Gln Ser Leu Tyr Met Ala Phe Gly Gly Thr Asn
300 305 310 315
Trp Gly His Ser Ala Thr Pro Val Val Tyr Thr Ser Tyr Asp Tyr Ala
320 325 330
Ala Pro Leu Arg Glu Thr Arg Glu Ile Gln Asp Lys Leu Lys Gln Thr
335 340 345
Lys Leu Ile Gly Leu Phe Thr Arg Val Ser Ser Gly Leu Leu Gln Thr
350 355 360
Val Met Glu Gly Asn Gly Thr Gly Tyr Thr Ser Asp Thr Ser Ile Tyr
365 370 375
Thr Trp Ala Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asp Ala Gly Phe Tyr Val Leu
380 385 390 395
Ala His Ser Thr Ser Ser Ser Arg Ala Val Thr Thr Phe Ser Leu Asn
400 405 410
Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile Pro Asp Ile Glu Leu Asp
415 420 425
Gly Arg Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Tyr Glu Ile Gly Lys Ala
430 435 440
Ser Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Thr Leu
445 450 455
Asp Val Asp Val Leu Val Leu Tyr Leu Asn Ile Gly Gln Lys Gly Val
460 465 470 475
Phe Ala Phe Lys Asn Ala Pro Ser His Leu Thr Phe Lys Thr Tyr Gly
480 485 490
Asn Ser Asn Leu Thr Ser Thr Thr Ser Thr Asn Gly Thr Gln Tyr Ser
495 500 505
Tyr Thr Gln Gly Asp Gly Ala Thr Ala Val Lys Phe Ser Asn Gly Val
510 515 520
Leu Leu Tyr Leu Leu Asp Lys Glu Thr Ala Trp Asn Phe Phe Ala Val
525 530 535
Thr Thr Thr Ser Asn Pro Asn Val Thr Pro Ser Glu His Ile Leu Ala
540 545 550 555
Leu Gly Pro Tyr Leu Val Arg Glu Ala Ser Ile Ser His Asp Thr Val
560 565 570
Ser Leu Ile Gly Asp Asn Ala Asn Thr Thr Thr Leu Glu Val Tyr Pro
575 580 585
Gly Asn Ala Gln Val Thr Lys Ile Lys Trp Asn Gly Lys Pro Ile Ala
590 595 600
Thr Lys Lys Thr Ala Tyr Gly Ser Leu Ile Gly Ser Ala Gln Gly Ala
605 610 615
Glu Thr Ala Lys Ile Ser Leu Pro Ser Leu Thr Ser Trp Lys Ser Gln
620 625 630 635
Asp Thr Leu Pro Glu Ile Lys Gln Asp Tyr Asp Asp Ser Arg Trp Thr
640 645 650
Val Cys Asn Lys Ser Thr Thr Val Asn Ser Val Ala Pro Leu Ser Leu
655 660 665
Pro Val Leu Tyr Ser Gly Asp Tyr Gly Tyr His Ala Gly Thr Lys Ile
670 675 680
Tyr Arg Gly Arg Phe Asp Gly Arg Asn Ala Thr Gly Ala Asn Val Thr
685 690 695
Val Gln Asn Gly Val Ala Ala Gly Trp Ala Ala Trp Leu Asn Gly Asp
700 705 710 715
Tyr Val Gly Gly Ala Leu Gly Asn Pro Ala Leu Ala Ala Thr Ser Asp
720 725 730
Leu Leu Thr Phe Asn Ser Ser Ser Leu Arg Asp Thr Asp Asn Val Leu
735 740 745
Thr Val Val Met Asp Tyr Thr Gly His Asp Glu Asn Asn Val Lys Pro
750 755 760
Ala Gly Thr Gln Asn Pro Arg Gly Ile Leu Gly Ala Thr Leu Phe Gly
765 770 775
Gly Gly Asn Phe Thr Ser Trp Arg Ile Gln Gly Asn Ala Gly Gly Glu
780 785 790 795
Ala Asn Ile Asp Pro Val Arg Gly Pro Met Asn Glu Gly Gly Leu Tyr
800 805 810
Gly Glu Arg Leu Gly Trp His Leu Pro Gly Tyr Thr Ala Pro Lys Ser
815 820 825
Ala Gly Ser Ser Ser Pro Leu Gln Gly Val Ser Asn Ala Ala Gly Arg
830 835 840
Phe Tyr Thr Thr Thr Phe Lys Leu Asn Leu Glu Ala Asp Leu Asp Val
845 850 855
Pro Ile Gly Leu Gln Leu Gly Ala Ala Ala Asn Thr Ser Ala Val Val
860 865 870 875
Gln Val Phe Met Asn Gly Tyr Gln Phe Gly His Tyr Leu Pro His Ile
880 885 890
Gly Pro Gln Thr Leu Phe Pro Phe Pro Pro Gly Ile Ile Asn Asn Arg
895 900 905
Gly Glu Asn Thr Leu Ala Ile Ser Leu Trp Ala Leu Thr Asp Glu Gly
910 915 920
Ala Ala Leu Asp Gln Val Glu Leu Val Ala Tyr Gly Ala Tyr Arg Thr
925 930 935
Gly Phe Asp Phe Asn Gln Asp Trp Thr Tyr Leu Gln Pro Lys Trp Lys
940 945 950 955
Asn Asn Arg Gly Ser Tyr Val
960
<210> 70
<211> 962
<212> PRT
<213> 简青霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(962)
<400> 70
Thr Asp Asn Gly Lys Thr Thr Asp Val Thr Trp Asp Lys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Ser Val Lys Gly Glu Arg Val Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr
20 25 30
Met Arg Leu Pro Val Pro Glu Met Trp Leu Asp Val Phe Gln Lys Leu
35 40 45
Arg Ser Asn Gly Phe Asn Ala Val Ser Ile Tyr Phe Phe Trp Ser Phe
50 55 60
His Ser Ala Ser Glu Asp Thr Phe Asp Phe Glu Asn Gly Ala His Asp
65 70 75 80
Val Gln Arg Val Phe Asp Tyr Ala Lys Gln Ala Gly Leu Tyr Val Ile
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Pro Tyr Ile Asn Ala Glu Thr Ser Ala Gly Gly Phe
100 105 110
Ala Leu Trp Ala Ala Asn Gly Gln Met Gly Ser Glu Arg Thr Ser Ala
115 120 125
Ser Ser Tyr Tyr Asp Lys Trp Leu Pro Trp Ile Leu Lys Ile Gly Lys
130 135 140
Ile Ile Ala Asp Asn Gln Ile Thr Asn Gly Gly Pro Val Ile Leu Asn
145 150 155 160
Gln His Glu Asn Glu Leu Gln Glu Thr Thr His Ser Ala Thr Asn Thr
165 170 175
Leu Val Leu Tyr Met Glu Gln Ile Ala Ala Ala Phe Glu Glu Ala Gly
180 185 190
Val Ile Val Pro Ser Ser His Asn Glu Lys Gly Met Arg Ser Glu Ser
195 200 205
Trp Ser Thr Asp Tyr Glu Asp Val Gly Gly Ala Val Asn Val Tyr Gly
210 215 220
Leu Asp Ser Tyr Pro Gly Gly Leu Ser Cys Thr Asn Pro Asp Ser Gly
225 230 235 240
Phe Asn Leu Val Arg Thr Tyr Tyr Gln Trp Phe Gln Asn Tyr Ser Tyr
245 250 255
Thr Gln Pro Glu Phe Leu Pro Glu Phe Glu Gly Gly Trp Phe Gln Pro
260 265 270
Trp Gly Gly Tyr Phe Tyr Asp Glu Cys Ala Ala Glu His Ser Pro Glu
275 280 285
Phe Ala Asp Val Tyr Tyr Lys Asn Asn Ile Gly Ser Arg Val Thr Leu
290 295 300
Gln Ser Leu Tyr Met Ala Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly His Ser Ala
305 310 315 320
Thr Pro Val Val Tyr Thr Ser Tyr Asp Tyr Ala Ala Pro Leu Arg Glu
325 330 335
Thr Arg Glu Ile Gln Asp Lys Leu Lys Gln Thr Lys Leu Ile Gly Leu
340 345 350
Phe Thr Arg Val Ser Ser Gly Leu Leu Gln Thr Val Met Glu Gly Asn
355 360 365
Gly Thr Gly Tyr Thr Ser Asp Thr Ser Ile Tyr Thr Trp Ala Leu Arg
370 375 380
Asn Pro Glu Thr Asp Ala Gly Phe Tyr Val Leu Ala His Ser Thr Ser
385 390 395 400
Ser Ser Arg Ala Val Thr Thr Phe Ser Leu Asn Val Asn Thr Ser Ala
405 410 415
Gly Ala Leu Thr Ile Pro Asp Ile Glu Leu Asp Gly Arg Gln Ser Lys
420 425 430
Ile Ile Val Thr Asp Tyr Glu Ile Gly Lys Ala Ser Ser Leu Leu Tyr
435 440 445
Ser Ser Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Thr Leu Asp Val Asp Val Leu
450 455 460
Val Leu Tyr Leu Asn Ile Gly Gln Lys Gly Val Phe Ala Phe Lys Asn
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530 535 540
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625 630 635 640
Ile Lys Gln Asp Tyr Asp Asp Ser Arg Trp Thr Val Cys Asn Lys Ser
645 650 655
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660 665 670
Gly Asp Tyr Gly Tyr His Ala Gly Thr Lys Ile Tyr Arg Gly Arg Phe
675 680 685
Asp Gly Arg Asn Ala Thr Gly Ala Asn Val Thr Val Gln Asn Gly Val
690 695 700
Ala Ala Gly Trp Ala Ala Trp Leu Asn Gly Asp Tyr Val Gly Gly Ala
705 710 715 720
Leu Gly Asn Pro Ala Leu Ala Ala Thr Ser Asp Leu Leu Thr Phe Asn
725 730 735
Ser Ser Ser Leu Arg Asp Thr Asp Asn Val Leu Thr Val Val Met Asp
740 745 750
Tyr Thr Gly His Asp Glu Asn Asn Val Lys Pro Ala Gly Thr Gln Asn
755 760 765
Pro Arg Gly Ile Leu Gly Ala Thr Leu Phe Gly Gly Gly Asn Phe Thr
770 775 780
Ser Trp Arg Ile Gln Gly Asn Ala Gly Gly Glu Ala Asn Ile Asp Pro
785 790 795 800
Val Arg Gly Pro Met Asn Glu Gly Gly Leu Tyr Gly Glu Arg Leu Gly
805 810 815
Trp His Leu Pro Gly Tyr Thr Ala Pro Lys Ser Ala Gly Ser Ser Ser
820 825 830
Pro Leu Gln Gly Val Ser Asn Ala Ala Gly Arg Phe Tyr Thr Thr Thr
835 840 845
Phe Lys Leu Asn Leu Glu Ala Asp Leu Asp Val Pro Ile Gly Leu Gln
850 855 860
Leu Gly Ala Ala Ala Asn Thr Ser Ala Val Val Gln Val Phe Met Asn
865 870 875 880
Gly Tyr Gln Phe Gly His Tyr Leu Pro His Ile Gly Pro Gln Thr Leu
885 890 895
Phe Pro Phe Pro Pro Gly Ile Ile Asn Asn Arg Gly Glu Asn Thr Leu
900 905 910
Ala Ile Ser Leu Trp Ala Leu Thr Asp Glu Gly Ala Ala Leu Asp Gln
915 920 925
Val Glu Leu Val Ala Tyr Gly Ala Tyr Arg Thr Gly Phe Asp Phe Asn
930 935 940
Gln Asp Trp Thr Tyr Leu Gln Pro Lys Trp Lys Asn Asn Arg Gly Ser
945 950 955 960
Tyr Val
<210> 71
<211> 3309
<212> DNA
<213> 赭曲霉
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(801)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(60)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (61)..(3306)
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
<222> (2360)..(2447)
<220>
<221> CDS
<222> (2499)..(3306)
<400> 71
atg gcg cgc atc atg cac ctt gcc gtg ctg ctt ctt tcc agc atc gga 48
Met Ala Arg Ile Met His Leu Ala Val Leu Leu Leu Ser Ser Ile Gly
-20 -15 -10 -5
ctg ctg gct gct gcc cag aat cag tcc gac tct gac tgg cct ctg cac 96
Leu Leu Ala Ala Ala Gln Asn Gln Ser Asp Ser Asp Trp Pro Leu His
-1 1 5 10
gac aac ggt ctg aac acc gcc gtg caa tgg gac cat tac agc ttc cat 144
Asp Asn Gly Leu Asn Thr Ala Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe His
15 20 25
gtc cac gga cag cgc atc ttc atc ttc tcc ggc gag ttt cac tac tgg 192
Val His Gly Gln Arg Ile Phe Ile Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
cgt att ccc gtc ccc gag ctt tgg cgc gac atc ctc gag aag gtc aaa 240
Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
gcc acc ggc ttc acc gcg ttt gcc ttc tac tct agc tgg gcg tac cat 288
Ala Thr Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
gcg ccg aac aac cac acg gtg gac ttc cac acc ggt gcg cgc gac atc 336
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe His Thr Gly Ala Arg Asp Ile
80 85 90
acg ccc atc ttc gag ctc gcc aag gag ctg ggc atg tat atg atc gtg 384
Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val
95 100 105
cgg ccc ggg ccg tat gtc aat gcc gag gcc agc gct ggt ggc ttt ccg 432
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
ctg tgg gcg acc acc ggt gcg tat ggg tcg atg cgc aat gac gac ccc 480
Leu Trp Ala Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Met Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
agg tat act gcg gcg tgg aag ccg tac ttt gag aag atg tcg caa atc 528
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Glu Lys Met Ser Gln Ile
145 150 155
acc agt cag tac cag atc acc gat ggg gaa aac act ttc tgc tat cag 576
Thr Ser Gln Tyr Gln Ile Thr Asp Gly Glu Asn Thr Phe Cys Tyr Gln
160 165 170
atc gag aac gag tat ggc cag cag tgg gtt ggt gat ccc cgt gat cgg 624
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Val Gly Asp Pro Arg Asp Arg
175 180 185
aac ccg aat aag act gcg gtc gcc tat atg gaa ctg ctc gag gag agt 672
Asn Pro Asn Lys Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Glu Ser
190 195 200
gcc cgt gag aat ggt att gtc gtg ccg ctg acg gcc aac gat ccg aac 720
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Val Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
ctg aac acc cgc tct tgg gga aac gac tgg tcc aac gct gga gga aac 768
Leu Asn Thr Arg Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn
225 230 235
gtt gac gtt cct gga gtg gat tcg tat ccc tca gtgagttacc taaatcacat 821
Val Asp Val Pro Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser
240 245
ctgggtaatg caaattacta atctttccag tgc tgg act tgt gat gtc tct caa 875
Cys Trp Thr Cys Asp Val Ser Gln
250 255
tgc acc tcc acc aac gga gag tac gtt cct tac aaa gtg atc ccc tat 923
Cys Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Ile Pro Tyr
260 265 270
tac gac tac ttc cag gag gtc cag ccc tcg atg cct gcc ttc atg ccc 971
Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Ser Met Pro Ala Phe Met Pro
275 280 285
gaa ttc cag ggt gga tct tac aac ccc tgg gcc ggc ccc gaa ggt gga 1019
Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly
290 295 300
tgt ccc gag gat acc gga gcg gac ttt gcc aac ctg ttc tac cgg tgg 1067
Cys Pro Glu Asp Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp
305 310 315
aac atc gcc cag cga gtg acc gcc atg agc ttg tac atg gta ttt ggc 1115
Asn Ile Ala Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Val Phe Gly
320 325 330 335
gga acc aac tgg ggc tcg ctg gct gcc ccc gtt aca gcc acc agc tac 1163
Gly Thr Asn Trp Gly Ser Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr
340 345 350
gac tac tcc tcc ccg att gcc gaa gac cgc tcg att ggt gac aag tac 1211
Asp Tyr Ser Ser Pro Ile Ala Glu Asp Arg Ser Ile Gly Asp Lys Tyr
355 360 365
tac gag acc aag ctg ctt tcc ctg ttc act cgt agc gcc aag gat ctc 1259
Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ala Lys Asp Leu
370 375 380
acc atg acc gac ctc atc ggc aac ggc acc aag tac acc gac aat gct 1307
Thr Met Thr Asp Leu Ile Gly Asn Gly Thr Lys Tyr Thr Asp Asn Ala
385 390 395
gcc gtc agc gcg tac gaa ctc cgg aac ccc gag acc aac ggt gcc ttc 1355
Ala Val Ser Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn Gly Ala Phe
400 405 410 415
tac gtc acc atc cac aag gac acc acc gtc ggc tcg gac gag tcc ttc 1403
Tyr Val Thr Ile His Lys Asp Thr Thr Val Gly Ser Asp Glu Ser Phe
420 425 430
aag ctc cac gtg aac acc tcc gct ggc gcg ctg act atc cca agc gag 1451
Lys Leu His Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile Pro Ser Glu
435 440 445
ggg gca aag atc cgc ctg aac ggc cat cag tcc aag atc atc gtg act 1499
Gly Ala Lys Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr
450 455 460
gac ttt gcc ttc ggc tct aag acc ctc ctg tac tcc acc gcc gag gtg 1547
Asp Phe Ala Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val
465 470 475
ttg acc tat gcg gtc atc gat gac cag cct act ctg gtg ctt tgg gtc 1595
Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Asp Gln Pro Thr Leu Val Leu Trp Val
480 485 490 495
ccg aag gga gaa tct ggc gag ttc gct gtc aag ggc act aag tct ggc 1643
Pro Lys Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Val Lys Gly Thr Lys Ser Gly
500 505 510
aag gtg gcg agc tgc aac ggc tgc tcc agc gtc aag ttc aac gga aag 1691
Lys Val Ala Ser Cys Asn Gly Cys Ser Ser Val Lys Phe Asn Gly Lys
515 520 525
aag gac cac gtg gtt gtt ggg ttc aca cag gcc aag ggc atg agc gtg 1739
Lys Asp His Val Val Val Gly Phe Thr Gln Ala Lys Gly Met Ser Val
530 535 540
tat cag ctg gat gat gat gtc cgt gtc gtt gtt ctc gac cgg tcg tcc 1787
Tyr Gln Leu Asp Asp Asp Val Arg Val Val Val Leu Asp Arg Ser Ser
545 550 555
gct tat cac ttc tgg gcc cct act ttg act gat gat ccg att gcc ccg 1835
Ala Tyr His Phe Trp Ala Pro Thr Leu Thr Asp Asp Pro Ile Ala Pro
560 565 570 575
gag gat gaa att g gtatgctccc gtgtccgaga gaaatgactg attgctaata 1888
Glu Asp Glu Ile
tcatactag tc ctg gtc gag ggc ccc tac ctc gtc cgc tcg gcc agc gtc 1938
Val Leu Val Glu Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Ser Val
580 585 590
gag gga tct acc ctt gct ctc cgc ggt gac tct acc gac aag acc aac 1986
Glu Gly Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Thr Asp Lys Thr Asn
595 600 605
ctg gag gtt ttc gct cct aag agc gtc aag acc atc acc tgg aat ggc 2034
Leu Glu Val Phe Ala Pro Lys Ser Val Lys Thr Ile Thr Trp Asn Gly
610 615 620 625
aag aag gtc aag tcc tcc gag acc tcc tat ggc agc ctc aag gcc acg 2082
Lys Lys Val Lys Ser Ser Glu Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala Thr
630 635 640
ctc gcc gcg cca ccc tcg att aag cta ccc tct ttc ggc tca tgg cgg 2130
Leu Ala Ala Pro Pro Ser Ile Lys Leu Pro Ser Phe Gly Ser Trp Arg
645 650 655
tcg aac gac agc ttg ccg gag cgc ttg gag tcg tac gat gac tct ggc 2178
Ser Asn Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Glu Ser Tyr Asp Asp Ser Gly
660 665 670
ccg gcc tgg gtt g gtaagtacat ctccacggcg gtccaagatt cccgctcacc 2231
Pro Ala Trp Val
675
agaacag at gcc aac cat gaa acc acg ctg aac ccg cat ccc cct gtc 2279
Asp Ala Asn His Glu Thr Thr Leu Asn Pro His Pro Pro Val
680 685 690
acg act cct gtc ttg tac gca aac gaa tac g gtatgcatct ctggccttca 2330
Thr Thr Pro Val Leu Tyr Ala Asn Glu Tyr
695 700
ttctttagtc tcatgctcat cacgtccag gc ttc cac aac ggc gtc cgc ctc 2382
Gly Phe His Asn Gly Val Arg Leu
705
tgg cgc ggc tat ttc aac gga acc gcc tcc ggc gtc ttc ctc aac atc 2430
Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Thr Ala Ser Gly Val Phe Leu Asn Ile
710 715 720 725
caa ggt ggc gct gca tt gtaagcaccc tctccctcct aacatccacg 2477
Gln Gly Gly Ala Ala Phe
730
accatctaac caaaagtcca g c ggc tgg tcc gcc tat ctc aac ggc cac ttc 2529
Gly Trp Ser Ala Tyr Leu Asn Gly His Phe
735 740
ctt ggc tcc tac ctc ggc aac gcc acc atc gcg caa gcc aac aaa acc 2577
Leu Gly Ser Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ile Ala Gln Ala Asn Lys Thr
745 750 755
ctc acc ttc ccg aac aac acg ctc cac acg cgc ccc ggc tcc cgg aac 2625
Leu Thr Phe Pro Asn Asn Thr Leu His Thr Arg Pro Gly Ser Arg Asn
760 765 770
acc ctc ctc gtc atc cac gac gac acc ggc cac gac cag acc acc ggc 2673
Thr Leu Leu Val Ile His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr Thr Gly
775 780 785
gtg ctc aac ccg cgc ggc atc atc gaa gcc cgc ctc ctc ggc tcc aac 2721
Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Ile Glu Ala Arg Leu Leu Gly Ser Asn
790 795 800 805
gcc ccg aac ttc acc cac tgg cgt ctc gcc ggt acc gcc ggc ggc gaa 2769
Ala Pro Asn Phe Thr His Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu
810 815 820
tca aac ctc gat ccc gtc cgc ggc gtc tac aac gaa gac ggc ctc cac 2817
Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu His
825 830 835
gcg gag cgc gtc ggc tgg cat ctc cct ggc ttc gac gac agc gac tgg 2865
Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Asp Trp
840 845 850
cct gtc acc aac cac tcc tcc tcc tcc tct agc tcc aaa tcc ctc tcc 2913
Pro Val Thr Asn His Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Leu Ser
855 860 865
acc ctc tcc ttc acc ggc gca acc gtt cgc ttc ttc cgc acc acc atc 2961
Thr Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Thr Ile
870 875 880 885
ccc cta aat atc ccc tcg ggc ctc gac gtc tcg atc tcc ttc ctc ctc 3009
Pro Leu Asn Ile Pro Ser Gly Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Leu Leu
890 895 900
ggc acg ccg aca ggc acg agt aag gcc tac cgc gcg cag ctc ttc gtt 3057
Gly Thr Pro Thr Gly Thr Ser Lys Ala Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val
905 910 915
aac ggc tac cag tac ggg cgc tac tat ccg cac atc ggc aac cag gtc 3105
Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Tyr Pro His Ile Gly Asn Gln Val
920 925 930
gtg tat ccg gtc ccg gcg ggg att ttg gat tac cgc ggc gag aac acg 3153
Val Tyr Pro Val Pro Ala Gly Ile Leu Asp Tyr Arg Gly Glu Asn Thr
935 940 945
atc ggg ttg gct gtt tgg gcg cag agc gag gat ggc gcg gcg gtc agt 3201
Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala Gln Ser Glu Asp Gly Ala Ala Val Ser
950 955 960 965
gtt gat tgg agg gtg aat tat gtg gcg gat agt tcg ttg gat gtt gcg 3249
Val Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val Ala
970 975 980
ggg att ggg gag gag agg ttg agg ccg ggg tat gag aag gtg agg gag 3297
Gly Ile Gly Glu Glu Arg Leu Arg Pro Gly Tyr Glu Lys Val Arg Glu
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1000
<210> 72
<211> 1020
<212> PRT
<213> 赭曲霉
<400> 72
Met Ala Arg Ile Met His Leu Ala Val Leu Leu Leu Ser Ser Ile Gly
-20 -15 -10 -5
Leu Leu Ala Ala Ala Gln Asn Gln Ser Asp Ser Asp Trp Pro Leu His
-1 1 5 10
Asp Asn Gly Leu Asn Thr Ala Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe His
15 20 25
Val His Gly Gln Arg Ile Phe Ile Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
Ala Thr Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe His Thr Gly Ala Arg Asp Ile
80 85 90
Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val
95 100 105
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
Leu Trp Ala Thr Thr Gly Ala Tyr Gly Ser Met Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Glu Lys Met Ser Gln Ile
145 150 155
Thr Ser Gln Tyr Gln Ile Thr Asp Gly Glu Asn Thr Phe Cys Tyr Gln
160 165 170
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Val Gly Asp Pro Arg Asp Arg
175 180 185
Asn Pro Asn Lys Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Glu Ser
190 195 200
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205 210 215 220
Leu Asn Thr Arg Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn
225 230 235
Val Asp Val Pro Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp
240 245 250
Val Ser Gln Cys Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val
255 260 265
Ile Pro Tyr Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Ser Met Pro Ala
270 275 280
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285 290 295 300
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305 310 315
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320 325 330
Val Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ser Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala
335 340 345
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350 355 360
Asp Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu Leu Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ala
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385 390 395
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400 405 410
Gly Ala Phe Tyr Val Thr Ile His Lys Asp Thr Thr Val Gly Ser Asp
415 420 425
Glu Ser Phe Lys Leu His Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile
430 435 440
Pro Ser Glu Gly Ala Lys Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile
445 450 455 460
Ile Val Thr Asp Phe Ala Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr
465 470 475
Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Ile Asp Asp Gln Pro Thr Leu Val
480 485 490
Leu Trp Val Pro Lys Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Val Lys Gly Thr
495 500 505
Lys Ser Gly Lys Val Ala Ser Cys Asn Gly Cys Ser Ser Val Lys Phe
510 515 520
Asn Gly Lys Lys Asp His Val Val Val Gly Phe Thr Gln Ala Lys Gly
525 530 535 540
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545 550 555
Arg Ser Ser Ala Tyr His Phe Trp Ala Pro Thr Leu Thr Asp Asp Pro
560 565 570
Ile Ala Pro Glu Asp Glu Ile Val Leu Val Glu Gly Pro Tyr Leu Val
575 580 585
Arg Ser Ala Ser Val Glu Gly Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser
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Thr Asp Lys Thr Asn Leu Glu Val Phe Ala Pro Lys Ser Val Lys Thr
605 610 615 620
Ile Thr Trp Asn Gly Lys Lys Val Lys Ser Ser Glu Thr Ser Tyr Gly
625 630 635
Ser Leu Lys Ala Thr Leu Ala Ala Pro Pro Ser Ile Lys Leu Pro Ser
640 645 650
Phe Gly Ser Trp Arg Ser Asn Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Glu Ser
655 660 665
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670 675 680
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685 690 695 700
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705 710 715
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750 755 760
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765 770 775 780
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785 790 795
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800 805 810
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815 820 825
Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu His Ala Glu Arg Val Gly Trp His
830 835 840
Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Asp Trp Pro Val Thr Asn His Ser Ser
845 850 855 860
Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ser Leu Ser Thr Leu Ser Phe Thr Gly Ala
865 870 875
Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Thr Ile Pro Leu Asn Ile Pro Ser Gly
880 885 890
Leu Asp Val Ser Ile Ser Phe Leu Leu Gly Thr Pro Thr Gly Thr Ser
895 900 905
Lys Ala Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg
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925 930 935 940
Ile Leu Asp Tyr Arg Gly Glu Asn Thr Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala
945 950 955
Gln Ser Glu Asp Gly Ala Ala Val Ser Val Asp Trp Arg Val Asn Tyr
960 965 970
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975 980 985
Arg Pro Gly Tyr Glu Lys Val Arg Glu Lys Phe Ala
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<212> PRT
<213> 赭曲霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(1000)
<400> 73
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Pro Glu Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Val Lys Ala Thr Gly Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val Arg Pro Gly Pro
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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Gln Ile Thr Asp Gly Glu Asn Thr Phe Cys Tyr Gln Ile Glu Asn Glu
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210 215 220
Ser Trp Gly Asn Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn Val Asp Val Pro
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Gly Val Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp Val Ser Gln Cys
245 250 255
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275 280 285
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340 345 350
Tyr Ser Ser Pro Ile Ala Glu Asp Arg Ser Ile Gly Asp Lys Tyr Tyr
355 360 365
Glu Thr Lys Leu Leu Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ala Lys Asp Leu Thr
370 375 380
Met Thr Asp Leu Ile Gly Asn Gly Thr Lys Tyr Thr Asp Asn Ala Ala
385 390 395 400
Val Ser Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn Gly Ala Phe Tyr
405 410 415
Val Thr Ile His Lys Asp Thr Thr Val Gly Ser Asp Glu Ser Phe Lys
420 425 430
Leu His Val Asn Thr Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ile Pro Ser Glu Gly
435 440 445
Ala Lys Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp
450 455 460
Phe Ala Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu
465 470 475 480
Thr Tyr Ala Val Ile Asp Asp Gln Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro
485 490 495
Lys Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Val Lys Gly Thr Lys Ser Gly Lys
500 505 510
Val Ala Ser Cys Asn Gly Cys Ser Ser Val Lys Phe Asn Gly Lys Lys
515 520 525
Asp His Val Val Val Gly Phe Thr Gln Ala Lys Gly Met Ser Val Tyr
530 535 540
Gln Leu Asp Asp Asp Val Arg Val Val Val Leu Asp Arg Ser Ser Ala
545 550 555 560
Tyr His Phe Trp Ala Pro Thr Leu Thr Asp Asp Pro Ile Ala Pro Glu
565 570 575
Asp Glu Ile Val Leu Val Glu Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Ser
580 585 590
Val Glu Gly Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Thr Asp Lys Thr
595 600 605
Asn Leu Glu Val Phe Ala Pro Lys Ser Val Lys Thr Ile Thr Trp Asn
610 615 620
Gly Lys Lys Val Lys Ser Ser Glu Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala
625 630 635 640
Thr Leu Ala Ala Pro Pro Ser Ile Lys Leu Pro Ser Phe Gly Ser Trp
645 650 655
Arg Ser Asn Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Glu Ser Tyr Asp Asp Ser
660 665 670
Gly Pro Ala Trp Val Asp Ala Asn His Glu Thr Thr Leu Asn Pro His
675 680 685
Pro Pro Val Thr Thr Pro Val Leu Tyr Ala Asn Glu Tyr Gly Phe His
690 695 700
Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Thr Ala Ser Gly
705 710 715 720
Val Phe Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ala Ala Phe Gly Trp Ser Ala Tyr
725 730 735
Leu Asn Gly His Phe Leu Gly Ser Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ile Ala
740 745 750
Gln Ala Asn Lys Thr Leu Thr Phe Pro Asn Asn Thr Leu His Thr Arg
755 760 765
Pro Gly Ser Arg Asn Thr Leu Leu Val Ile His Asp Asp Thr Gly His
770 775 780
Asp Gln Thr Thr Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Ile Glu Ala Arg
785 790 795 800
Leu Leu Gly Ser Asn Ala Pro Asn Phe Thr His Trp Arg Leu Ala Gly
805 810 815
Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn
820 825 830
Glu Asp Gly Leu His Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly Phe
835 840 845
Asp Asp Ser Asp Trp Pro Val Thr Asn His Ser Ser Ser Ser Ser Ser
850 855 860
Ser Lys Ser Leu Ser Thr Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe
865 870 875 880
Phe Arg Thr Thr Ile Pro Leu Asn Ile Pro Ser Gly Leu Asp Val Ser
885 890 895
Ile Ser Phe Leu Leu Gly Thr Pro Thr Gly Thr Ser Lys Ala Tyr Arg
900 905 910
Ala Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Tyr Pro His
915 920 925
Ile Gly Asn Gln Val Val Tyr Pro Val Pro Ala Gly Ile Leu Asp Tyr
930 935 940
Arg Gly Glu Asn Thr Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala Gln Ser Glu Asp
945 950 955 960
Gly Ala Ala Val Ser Val Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser
965 970 975
Ser Leu Asp Val Ala Gly Ile Gly Glu Glu Arg Leu Arg Pro Gly Tyr
980 985 990
Glu Lys Val Arg Glu Lys Phe Ala
995 1000
<210> 74
<211> 3299
<212> DNA
<213> 文氏曲霉
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
<222> (2474)..(3296)
<400> 74
atg gcg cgc att ttc cat ttg ttt ctt gcc cta ctt tca agt ata ggg 48
Met Ala Arg Ile Phe His Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Ser Ile Gly
-20 -15 -10 -5
ctt ttg gca gct gca gag tca caa tgg cct ctc cac gat aac agc tta 96
Leu Leu Ala Ala Ala Glu Ser Gln Trp Pro Leu His Asp Asn Ser Leu
-1 1 5 10
aac acc gtc gtt caa tgg gat cat tac agc ttc cag atc cac ggg cag 144
Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln Ile His Gly Gln
15 20 25
aga atc ttc gtc ttc tcc ggt gaa ttc cac tac tgg cgc att cca gtt 192
Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
30 35 40
cca gga cta tgg agg gat att ctt gag aag att aaa gcg gct gga ttt 240
Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe
45 50 55 60
act gca ttc gca ttt tac tcc agt tgg gct tac cat gcg cca aat aac 288
Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn
65 70 75
cat acc gtt gac ttt tcg acc ggt gct cgt gat atc aca cct att ttc 336
His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile Thr Pro Ile Phe
80 85 90
gaa ctt gcc aag gag ttg ggc ttg tat atc atc gtt cgc cca ggg cca 384
Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro
95 100 105
tat gtc aat gcg gaa gcc aat gct ggt ggc ttt ccc ttg tgg ctg acg 432
Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr
110 115 120
act ggg gaa tac gga acg cta cgc aat gac gat gaa cgc tat act gcc 480
Thr Gly Glu Tyr Gly Thr Leu Arg Asn Asp Asp Glu Arg Tyr Thr Ala
125 130 135 140
gcg tgg aag ccg tac ttc act aaa atg tcg cag att acg agc aaa tat 528
Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Thr Lys Met Ser Gln Ile Thr Ser Lys Tyr
145 150 155
cag atc acg gat ggc gag aac acc ttg ttt tat cag att gaa aac gaa 576
Gln Ile Thr Asp Gly Glu Asn Thr Leu Phe Tyr Gln Ile Glu Asn Glu
160 165 170
tac gga gac cag tgg atc ggc gat cca agt gat cga gtt ccg aat aat 624
Tyr Gly Asp Gln Trp Ile Gly Asp Pro Ser Asp Arg Val Pro Asn Asn
175 180 185
act gca att gct tat atg gag ctt ctc gag gcg agt gca cgg gaa aac 672
Thr Ala Ile Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser Ala Arg Glu Asn
190 195 200
ggc atc aat gta cct ctc acc gcg aat gat cct aat atg aac tcg aaa 720
Gly Ile Asn Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn Met Asn Ser Lys
205 210 215 220
tct tgg ggg aaa gat tgg tct aat gct ggt gga aac gtt gac gcc cct 768
Ser Trp Gly Lys Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn Val Asp Ala Pro
225 230 235
ggc ttg gac tct tac ccg tcg gtaggttaac cataactcta agactggatt 819
Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser
240
attctgacag tagcag tgt tgg acg tgt gat att agc caa tgc acc tcg acg 871
Cys Trp Thr Cys Asp Ile Ser Gln Cys Thr Ser Thr
245 250 255
aat ggc gag tat gtg ccg tac aaa gta atg cag tat tac gac tac ttc 919
Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Met Gln Tyr Tyr Asp Tyr Phe
260 265 270
caa gaa gtt caa ccg aca acg ccg tct ttc atg ccc gag ttc cag ggc 967
Gln Glu Val Gln Pro Thr Thr Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly
275 280 285
ggt tct tac aat ccc tgg gca gga cct gaa ggt gga tgc tcc gag aat 1015
Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly Cys Ser Glu Asn
290 295 300
acc ggg gca gac ttt gcg aat ctg ttc tat cgg tgg aac att ggc cag 1063
Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln
305 310 315
cat gtg acg gct atg agt ctg tac atg cta tac gga ggt acg aat tgg 1111
His Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp
320 325 330 335
ggg tcg ctc gct gca ccg gtg acg gca agt agt tat gac tac tca gcc 1159
Gly Ser Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala
340 345 350
ccg att tcc gaa gat cgg tct att ggg gca aag tat tat gag act aaa 1207
Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys
355 360 365
cta ctg gca ttg ttc acg cgg tgt gca aga gat ttg acc atg act gaa 1255
Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Cys Ala Arg Asp Leu Thr Met Thr Glu
370 375 380
ttg att gga aat gga act cag tat acc gat aat ata gca gtg gaa gca 1303
Leu Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Asp Asn Ile Ala Val Glu Ala
385 390 395
tac gaa ttg agg aat ccg cag acc aat gcc ggt ttc tac gtt acc atc 1351
Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn Ala Gly Phe Tyr Val Thr Ile
400 405 410 415
cac agc aac tct tcc tct ggg aca aac gag gcc ttt caa ctt cag gtc 1399
His Ser Asn Ser Ser Ser Gly Thr Asn Glu Ala Phe Gln Leu Gln Val
420 425 430
aac act tct gtc gga ggt ctg act gtt cct agc cat gga ggt act ata 1447
Asn Thr Ser Val Gly Gly Leu Thr Val Pro Ser His Gly Gly Thr Ile
435 440 445
cgt ctc aat ggt cac cag tcc aag att atc gtg acg gac ttt aca ttt 1495
Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe
450 455 460
ggt tcc aag act ctt ctc tat tcc acc gcg gag gtt ctc acc tac gct 1543
Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala
465 470 475
gtg ttg gat gac aaa cct aca ctt gtc ctc tgg gta cct acc gga gaa 1591
Val Leu Asp Asp Lys Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu
480 485 490 495
tcc ggc gag ttc tcc atc aaa gga gtc aag tct gga tca gtc agt aac 1639
Ser Gly Glu Phe Ser Ile Lys Gly Val Lys Ser Gly Ser Val Ser Asn
500 505 510
tgt cag ggc tgc tcg ggt atg ggt ttc tac cag gaa aat ggt ggt ctc 1687
Cys Gln Gly Cys Ser Gly Met Gly Phe Tyr Gln Glu Asn Gly Gly Leu
515 520 525
acg gta aga ttc acc cag tca tct gga atg agc atc ctc cag ctc gac 1735
Thr Val Arg Phe Thr Gln Ser Ser Gly Met Ser Ile Leu Gln Leu Asp
530 535 540
gat gta cgc gtg gtt tta ctc gat aga aca agc gca tat aat ttc tgg 1783
Asp Val Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Thr Ser Ala Tyr Asn Phe Trp
545 550 555
gcg cct gca ttg aca aat gac cca ttt gtt cca gag aca gaa agt g 1829
Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Phe Val Pro Glu Thr Glu Ser
560 565 570
gtatgtttcg cctgatttat taattggcat ttactaaccg gtcgaag tt ctg att 1884
Val Leu Ile
575
caa ggt cca tac ctc gtt cgc ggt gcc aaa att act gaa tca act ctt 1932
Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg Gly Ala Lys Ile Thr Glu Ser Thr Leu
580 585 590
gca gtg act ggt gat tct gtg gat gct acg agt atc gag gtc ttc gca 1980
Ala Val Thr Gly Asp Ser Val Asp Ala Thr Ser Ile Glu Val Phe Ala
595 600 605
ccc cag acc ttg gat aca atc acc tgg aat ggc aaa gag gtc aaa acc 2028
Pro Gln Thr Leu Asp Thr Ile Thr Trp Asn Gly Lys Glu Val Lys Thr
610 615 620 625
acg agg acg gaa tat gga agt ctg cgg gct tct ctt gct gca cca cca 2076
Thr Arg Thr Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Ala Ser Leu Ala Ala Pro Pro
630 635 640
tct att aag tta ccc tcg ttg aca tcg tgg aaa aca aaa gac agt cta 2124
Ser Ile Lys Leu Pro Ser Leu Thr Ser Trp Lys Thr Lys Asp Ser Leu
645 650 655
cca gag cgg ttg cca tca tat gat gac tct ggt gag gcg tgg gct g 2170
Pro Glu Arg Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser Gly Glu Ala Trp Ala
660 665 670
gtaagtgcca cttatctatc tacactcact caatgctaat cgaggatag at gcc aac 2227
Asp Ala Asn
675
cat atg aca act tcg aat cca cat aaa cca gaa act tat ccc gtt ctt 2275
His Met Thr Thr Ser Asn Pro His Lys Pro Glu Thr Tyr Pro Val Leu
680 685 690
tat ggg gat gat tat g gtatgtccat tgtatccatg atagttatca ataagctaac 2331
Tyr Gly Asp Asp Tyr
695
aaagaag gc ttc cac aac ggc atc cgt ctc tgg cga gga tac ttt aac 2379
Gly Phe His Asn Gly Ile Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn
700 705 710
aac acc gcg aaa ggc gtc tac ctg aac atc caa gga gga aca gct tt 2426
Asn Thr Ala Lys Gly Val Tyr Leu Asn Ile Gln Gly Gly Thr Ala Phe
715 720 725
gtaagatcca tctcttttcc atttaggtga acaagctaac aaatcag t ggc tgg tct 2483
Gly Trp Ser
gcc tat ctg aac ggc cac ttc ctc tcc tct tac ctg ggc aat gca aca 2531
Ala Tyr Leu Asn Gly His Phe Leu Ser Ser Tyr Leu Gly Asn Ala Thr
730 735 740 745
gaa acc caa gga aat aag acc atc ctc ttc cca tct gat atc ctc tcc 2579
Glu Thr Gln Gly Asn Lys Thr Ile Leu Phe Pro Ser Asp Ile Leu Ser
750 755 760
aca aaa cca gaa acg aat cca aat acc ctc ctc atc atc cac gat gac 2627
Thr Lys Pro Glu Thr Asn Pro Asn Thr Leu Leu Ile Ile His Asp Asp
765 770 775
aca ggc cac gac caa aca acc ggc gtt ctc aac ccg cgc ggc atc ctc 2675
Thr Gly His Asp Gln Thr Thr Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu
780 785 790
gaa gca cgt ctc ctc gac gaa gac gag aaa agc agt gaa gac ctc gca 2723
Glu Ala Arg Leu Leu Asp Glu Asp Glu Lys Ser Ser Glu Asp Leu Ala
795 800 805
ttt acg cac tgg cgc gtt gca ggt aca gct gga gga gaa tcg aat ctc 2771
Phe Thr His Trp Arg Val Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu
810 815 820 825
gat ccc gtc cgc ggc gta tac aat gaa gac gga cta tac gcc gaa cgg 2819
Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu Arg
830 835 840
atg ggc tgg cat tta ccc ggt ttc gac gat agt gat tgg tct acg att 2867
Met Gly Trp His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Asp Trp Ser Thr Ile
845 850 855
aac aca acc acg tcc agt act acc agc agc ccc cca tta aca ttc acc 2915
Asn Thr Thr Thr Ser Ser Thr Thr Ser Ser Pro Pro Leu Thr Phe Thr
860 865 870
aac gca acc atc caa ttc ttc cga agc gtc atc ccc ctc gac ctc ccc 2963
Asn Ala Thr Ile Gln Phe Phe Arg Ser Val Ile Pro Leu Asp Leu Pro
875 880 885
aac aac acc gac aca tcc atg tcc ttc atc ctc tcc act cca tcc acc 3011
Asn Asn Thr Asp Thr Ser Met Ser Phe Ile Leu Ser Thr Pro Ser Thr
890 895 900 905
agc agc aaa gcc tac cgc gcc caa ata ttc ata aac ggg tac caa tac 3059
Ser Ser Lys Ala Tyr Arg Ala Gln Ile Phe Ile Asn Gly Tyr Gln Tyr
910 915 920
ggc cgg tac aac ccc cac atc ggg aac cag gtg gtc ttc ccc gtt ccg 3107
Gly Arg Tyr Asn Pro His Ile Gly Asn Gln Val Val Phe Pro Val Pro
925 930 935
ccg ggg ata ctg gat tac cac ggc gac aac acg att gga gta gcg gtg 3155
Pro Gly Ile Leu Asp Tyr His Gly Asp Asn Thr Ile Gly Val Ala Val
940 945 950
tgg gca cag agc gag gat ggg gcg agt att gaa tta gat tgg agg gtg 3203
Trp Ala Gln Ser Glu Asp Gly Ala Ser Ile Glu Leu Asp Trp Arg Val
955 960 965
aat tac gtt gct gat agt tcg ctg gat gtg ggc cgt ttg gat gag ggg 3251
Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Asp Val Gly Arg Leu Asp Glu Gly
970 975 980 985
gga tcg ctg agg ccg ggg tgg agt gag gag agg ttg agg ttt gcg tga 3299
Gly Ser Leu Arg Pro Gly Trp Ser Glu Glu Arg Leu Arg Phe Ala
990 995 1000
<210> 75
<211> 1020
<212> PRT
<213> 文氏曲霉
<400> 75
Met Ala Arg Ile Phe His Leu Phe Leu Ala Leu Leu Ser Ser Ile Gly
-20 -15 -10 -5
Leu Leu Ala Ala Ala Glu Ser Gln Trp Pro Leu His Asp Asn Ser Leu
-1 1 5 10
Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln Ile His Gly Gln
15 20 25
Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
30 35 40
Pro Gly Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe
45 50 55 60
Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn
65 70 75
His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile Thr Pro Ile Phe
80 85 90
Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro
95 100 105
Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr
110 115 120
Thr Gly Glu Tyr Gly Thr Leu Arg Asn Asp Asp Glu Arg Tyr Thr Ala
125 130 135 140
Ala Trp Lys Pro Tyr Phe Thr Lys Met Ser Gln Ile Thr Ser Lys Tyr
145 150 155
Gln Ile Thr Asp Gly Glu Asn Thr Leu Phe Tyr Gln Ile Glu Asn Glu
160 165 170
Tyr Gly Asp Gln Trp Ile Gly Asp Pro Ser Asp Arg Val Pro Asn Asn
175 180 185
Thr Ala Ile Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser Ala Arg Glu Asn
190 195 200
Gly Ile Asn Val Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn Met Asn Ser Lys
205 210 215 220
Ser Trp Gly Lys Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn Val Asp Ala Pro
225 230 235
Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp Ile Ser Gln Cys
240 245 250
Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Met Gln Tyr Tyr
255 260 265
Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Thr Thr Pro Ser Phe Met Pro Glu
270 275 280
Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly Cys
285 290 295 300
Ser Glu Asn Thr Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn
305 310 315
Ile Gly Gln His Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly
320 325 330
Thr Asn Trp Gly Ser Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala Ser Ser Tyr Asp
335 340 345
Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Tyr
350 355 360
Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Cys Ala Arg Asp Leu Thr
365 370 375 380
Met Thr Glu Leu Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Asp Asn Ile Ala
385 390 395
Val Glu Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn Ala Gly Phe Tyr
400 405 410
Val Thr Ile His Ser Asn Ser Ser Ser Gly Thr Asn Glu Ala Phe Gln
415 420 425
Leu Gln Val Asn Thr Ser Val Gly Gly Leu Thr Val Pro Ser His Gly
430 435 440
Gly Thr Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp
445 450 455 460
Phe Thr Phe Gly Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu
465 470 475
Thr Tyr Ala Val Leu Asp Asp Lys Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro
480 485 490
Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ser Ile Lys Gly Val Lys Ser Gly Ser
495 500 505
Val Ser Asn Cys Gln Gly Cys Ser Gly Met Gly Phe Tyr Gln Glu Asn
510 515 520
Gly Gly Leu Thr Val Arg Phe Thr Gln Ser Ser Gly Met Ser Ile Leu
525 530 535 540
Gln Leu Asp Asp Val Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Thr Ser Ala Tyr
545 550 555
Asn Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Phe Val Pro Glu Thr
560 565 570
Glu Ser Val Leu Ile Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg Gly Ala Lys Ile
575 580 585
Thr Glu Ser Thr Leu Ala Val Thr Gly Asp Ser Val Asp Ala Thr Ser
590 595 600
Ile Glu Val Phe Ala Pro Gln Thr Leu Asp Thr Ile Thr Trp Asn Gly
605 610 615 620
Lys Glu Val Lys Thr Thr Arg Thr Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Ala Ser
625 630 635
Leu Ala Ala Pro Pro Ser Ile Lys Leu Pro Ser Leu Thr Ser Trp Lys
640 645 650
Thr Lys Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser Gly
655 660 665
Glu Ala Trp Ala Asp Ala Asn His Met Thr Thr Ser Asn Pro His Lys
670 675 680
Pro Glu Thr Tyr Pro Val Leu Tyr Gly Asp Asp Tyr Gly Phe His Asn
685 690 695 700
Gly Ile Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Asn Thr Ala Lys Gly Val
705 710 715
Tyr Leu Asn Ile Gln Gly Gly Thr Ala Phe Gly Trp Ser Ala Tyr Leu
720 725 730
Asn Gly His Phe Leu Ser Ser Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Glu Thr Gln
735 740 745
Gly Asn Lys Thr Ile Leu Phe Pro Ser Asp Ile Leu Ser Thr Lys Pro
750 755 760
Glu Thr Asn Pro Asn Thr Leu Leu Ile Ile His Asp Asp Thr Gly His
765 770 775 780
Asp Gln Thr Thr Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Glu Ala Arg
785 790 795
Leu Leu Asp Glu Asp Glu Lys Ser Ser Glu Asp Leu Ala Phe Thr His
800 805 810
Trp Arg Val Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val
815 820 825
Arg Gly Val Tyr Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu Arg Met Gly Trp
830 835 840
His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Asp Trp Ser Thr Ile Asn Thr Thr
845 850 855 860
Thr Ser Ser Thr Thr Ser Ser Pro Pro Leu Thr Phe Thr Asn Ala Thr
865 870 875
Ile Gln Phe Phe Arg Ser Val Ile Pro Leu Asp Leu Pro Asn Asn Thr
880 885 890
Asp Thr Ser Met Ser Phe Ile Leu Ser Thr Pro Ser Thr Ser Ser Lys
895 900 905
Ala Tyr Arg Ala Gln Ile Phe Ile Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr
910 915 920
Asn Pro His Ile Gly Asn Gln Val Val Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile
925 930 935 940
Leu Asp Tyr His Gly Asp Asn Thr Ile Gly Val Ala Val Trp Ala Gln
945 950 955
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960 965 970
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975 980 985
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<222> (1)..(1000)
<400> 76
Ala Glu Ser Gln Trp Pro Leu His Asp Asn Ser Leu Asn Thr Val Val
1 5 10 15
Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln Ile His Gly Gln Arg Ile Phe Val
20 25 30
Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val Pro Gly Leu Trp
35 40 45
Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala
50 55 60
Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp
65 70 75 80
Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys
85 90 95
Glu Leu Gly Leu Tyr Ile Ile Val Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala
100 105 110
Glu Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr Thr Gly Glu Tyr
115 120 125
Gly Thr Leu Arg Asn Asp Asp Glu Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Lys Pro
130 135 140
Tyr Phe Thr Lys Met Ser Gln Ile Thr Ser Lys Tyr Gln Ile Thr Asp
145 150 155 160
Gly Glu Asn Thr Leu Phe Tyr Gln Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Asp Gln
165 170 175
Trp Ile Gly Asp Pro Ser Asp Arg Val Pro Asn Asn Thr Ala Ile Ala
180 185 190
Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser Ala Arg Glu Asn Gly Ile Asn Val
195 200 205
Pro Leu Thr Ala Asn Asp Pro Asn Met Asn Ser Lys Ser Trp Gly Lys
210 215 220
Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn Val Asp Ala Pro Gly Leu Asp Ser
225 230 235 240
Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp Ile Ser Gln Cys Thr Ser Thr Asn
245 250 255
Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Met Gln Tyr Tyr Asp Tyr Phe Gln
260 265 270
Glu Val Gln Pro Thr Thr Pro Ser Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly
275 280 285
Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly Cys Ser Glu Asn Thr
290 295 300
Gly Ala Asp Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln His
305 310 315 320
Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly
325 330 335
Ser Leu Ala Ala Pro Val Thr Ala Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro
340 345 350
Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Tyr Glu Thr Lys Leu
355 360 365
Leu Ala Leu Phe Thr Arg Cys Ala Arg Asp Leu Thr Met Thr Glu Leu
370 375 380
Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Asp Asn Ile Ala Val Glu Ala Tyr
385 390 395 400
Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn Ala Gly Phe Tyr Val Thr Ile His
405 410 415
Ser Asn Ser Ser Ser Gly Thr Asn Glu Ala Phe Gln Leu Gln Val Asn
420 425 430
Thr Ser Val Gly Gly Leu Thr Val Pro Ser His Gly Gly Thr Ile Arg
435 440 445
Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe Gly
450 455 460
Ser Lys Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val
465 470 475 480
Leu Asp Asp Lys Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser
485 490 495
Gly Glu Phe Ser Ile Lys Gly Val Lys Ser Gly Ser Val Ser Asn Cys
500 505 510
Gln Gly Cys Ser Gly Met Gly Phe Tyr Gln Glu Asn Gly Gly Leu Thr
515 520 525
Val Arg Phe Thr Gln Ser Ser Gly Met Ser Ile Leu Gln Leu Asp Asp
530 535 540
Val Arg Val Val Leu Leu Asp Arg Thr Ser Ala Tyr Asn Phe Trp Ala
545 550 555 560
Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Phe Val Pro Glu Thr Glu Ser Val Leu
565 570 575
Ile Gln Gly Pro Tyr Leu Val Arg Gly Ala Lys Ile Thr Glu Ser Thr
580 585 590
Leu Ala Val Thr Gly Asp Ser Val Asp Ala Thr Ser Ile Glu Val Phe
595 600 605
Ala Pro Gln Thr Leu Asp Thr Ile Thr Trp Asn Gly Lys Glu Val Lys
610 615 620
Thr Thr Arg Thr Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Ala Ser Leu Ala Ala Pro
625 630 635 640
Pro Ser Ile Lys Leu Pro Ser Leu Thr Ser Trp Lys Thr Lys Asp Ser
645 650 655
Leu Pro Glu Arg Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser Gly Glu Ala Trp Ala
660 665 670
Asp Ala Asn His Met Thr Thr Ser Asn Pro His Lys Pro Glu Thr Tyr
675 680 685
Pro Val Leu Tyr Gly Asp Asp Tyr Gly Phe His Asn Gly Ile Arg Leu
690 695 700
Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Asn Thr Ala Lys Gly Val Tyr Leu Asn Ile
705 710 715 720
Gln Gly Gly Thr Ala Phe Gly Trp Ser Ala Tyr Leu Asn Gly His Phe
725 730 735
Leu Ser Ser Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Glu Thr Gln Gly Asn Lys Thr
740 745 750
Ile Leu Phe Pro Ser Asp Ile Leu Ser Thr Lys Pro Glu Thr Asn Pro
755 760 765
Asn Thr Leu Leu Ile Ile His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr Thr
770 775 780
Gly Val Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Glu Ala Arg Leu Leu Asp Glu
785 790 795 800
Asp Glu Lys Ser Ser Glu Asp Leu Ala Phe Thr His Trp Arg Val Ala
805 810 815
Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr
820 825 830
Asn Glu Asp Gly Leu Tyr Ala Glu Arg Met Gly Trp His Leu Pro Gly
835 840 845
Phe Asp Asp Ser Asp Trp Ser Thr Ile Asn Thr Thr Thr Ser Ser Thr
850 855 860
Thr Ser Ser Pro Pro Leu Thr Phe Thr Asn Ala Thr Ile Gln Phe Phe
865 870 875 880
Arg Ser Val Ile Pro Leu Asp Leu Pro Asn Asn Thr Asp Thr Ser Met
885 890 895
Ser Phe Ile Leu Ser Thr Pro Ser Thr Ser Ser Lys Ala Tyr Arg Ala
900 905 910
Gln Ile Phe Ile Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro His Ile
915 920 925
Gly Asn Gln Val Val Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr His
930 935 940
Gly Asp Asn Thr Ile Gly Val Ala Val Trp Ala Gln Ser Glu Asp Gly
945 950 955 960
Ala Ser Ile Glu Leu Asp Trp Arg Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser
965 970 975
Leu Asp Val Gly Arg Leu Asp Glu Gly Gly Ser Leu Arg Pro Gly Trp
980 985 990
Ser Glu Glu Arg Leu Arg Phe Ala
995 1000
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> CDS
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<220>
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<220>
<221> CDS
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<220>
<221> CDS
<222> (2518)..(3307)
<400> 77
atg gcg cac atc tac caa ctt ctc ctt ctt ctt ctt tca aat ctg tgg 48
Met Ala His Ile Tyr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Asn Leu Trp
-20 -15 -10 -5
ttc gcg aca gct gct cag aac cag tca gag act gaa tgg cct ctt cat 96
Phe Ala Thr Ala Ala Gln Asn Gln Ser Glu Thr Glu Trp Pro Leu His
-1 1 5 10
gat aat ggc ttg agc aag gta gtg caa tgg gac cac tat agc ttc cac 144
Asp Asn Gly Leu Ser Lys Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe His
15 20 25
gtc aac ggg cag agg atc ttc gtc ttt tcc ggc gaa ttc cat tac tgg 192
Val Asn Gly Gln Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
cgt att cca gtc ccc gag ttg tgg agg gat gtt ctc gag aag gtg aaa 240
Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Val Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
gct acc ggt ttc act gcg ttt gcg ttc tac tct agc tgg gcc tat cat 288
Ala Thr Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
gcg ccc aac aac cac acg gtc gac ttc tcg acc ggc gct cgc gat atc 336
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile
80 85 90
acg ccc atc ttt gag ctt gca aag gag ctc ggc atg tat atg att gtg 384
Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val
95 100 105
cgc ccc ggg ccc tac gtc aat gct gaa gcc agc gcg ggc ggc ttc cct 432
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
ctg tgg ctg acg act ggc gag tat ggc tcg ctg cgg aat gat gac ccg 480
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
cgg tat acg gcc gca tgg acg ccg tac ttt gcc aac atg tcg caa atc 528
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Thr Pro Tyr Phe Ala Asn Met Ser Gln Ile
145 150 155
act agc aag tat cag gtt acg gat gga cat aac acg ctc gtc tac cag 576
Thr Ser Lys Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Val Tyr Gln
160 165 170
att gag aat gag tac ggt cag cag tgg atc gga gat ccc aag gat cgc 624
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Lys Asp Arg
175 180 185
aag ccg aat aag act gcg gtt gct tac atg gag ctc ttg gaa gca tct 672
Lys Pro Asn Lys Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser
190 195 200
gct cgt gag aat ggt atc act gtg cca ttg aca agc aac gat ccc aac 720
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Thr Val Pro Leu Thr Ser Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
atg aac tcg aaa tct tgg gga tcg gac tgg tcc aat gct gga ggc aat 768
Met Asn Ser Lys Ser Trp Gly Ser Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn
225 230 235
gtc gac gtg gct ggt ttg gat tct tat ccg tcg gtgagttacc attagatcct 821
Val Asp Val Ala Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser
240 245
ttttatttgt ttcgttctga ctgttgaag tgc tgg aca tgc gac gtg agc caa 874
Cys Trp Thr Cys Asp Val Ser Gln
250 255
tgt acc tcc acc aat ggg gag tat gtt ccc tac aaa gtg att gat tat 922
Cys Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Ile Asp Tyr
260 265 270
tac gac tac ttc caa gaa gtt cag cca act ctt ccc tcg ttc atg ccc 970
Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Thr Leu Pro Ser Phe Met Pro
275 280 285
gag ttc cag ggc ggt tcg tac aac ccc tgg gcc ggt cct gaa ggt gga 1018
Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly
290 295 300
tgt cct cag gac acc ggc gcc gag ttt gct aac ctg ttc tac cga tgg 1066
Cys Pro Gln Asp Thr Gly Ala Glu Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp
305 310 315
aac att ggc cag cga gtg acc gcc atg agt ctg tat atg ctg tac gga 1114
Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly
320 325 330 335
gga acc aac tgg ggt gca att gct gct cct gtg aca gca acc agc tac 1162
Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr
340 345 350
gac tac tcc gct ccc atc tcc gaa gac cgc tcg att gga gcc aag tat 1210
Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr
355 360 365
tcc gag acc aag cta ctg gca ttg ttc acc cgt acc gca aag gac ctc 1258
Ser Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Thr Ala Lys Asp Leu
370 375 380
aca atg aca gag gcg atc ggg aac gga aca caa tat acc acc aac aca 1306
Thr Met Thr Glu Ala Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Thr Asn Thr
385 390 395
gcc gtc cgt gca ttc gag ttg aga aat cct cag acc aac gcc ggg ttc 1354
Ala Val Arg Ala Phe Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn Ala Gly Phe
400 405 410 415
tac gtc aca ttc cac aac gac acc acc gtt ggt gga aat caa gcg ttc 1402
Tyr Val Thr Phe His Asn Asp Thr Thr Val Gly Gly Asn Gln Ala Phe
420 425 430
aaa ctc cat gtc aac act tct gtc ggt gcc ttg act gtc ccc aag aac 1450
Lys Leu His Val Asn Thr Ser Val Gly Ala Leu Thr Val Pro Lys Asn
435 440 445
gag ggt gtg atc cag ctg aat ggt cat caa tcc aag atc atc gtg acc 1498
Glu Gly Val Ile Gln Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr
450 455 460
gac ttc acg ctc ggc aaa cgt act ctt ctc tat tca act gcc gag gtc 1546
Asp Phe Thr Leu Gly Lys Arg Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val
465 470 475
ttg acc tac gcc gtt ttt gaa gac agg ccc acc ctc gtg ctc tgg gtt 1594
Leu Thr Tyr Ala Val Phe Glu Asp Arg Pro Thr Leu Val Leu Trp Val
480 485 490 495
cct act ggg gaa tcc ggc gag ttc gcg atc aag gga gcc aag tca gga 1642
Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly
500 505 510
aag gtt gaa aat ggc gat ggc tgc tcg gga atc aaa ttt gag agt gag 1690
Lys Val Glu Asn Gly Asp Gly Cys Ser Gly Ile Lys Phe Glu Ser Glu
515 520 525
aag aac tat ctc gtc gtg aat ttc tct cag gcc aag gga ttg agc gtc 1738
Lys Asn Tyr Leu Val Val Asn Phe Ser Gln Ala Lys Gly Leu Ser Val
530 535 540
ttg cgg ctc gat aat ggt gtg cgc gtg gtt ctg ctc gac aag gcc gcc 1786
Leu Arg Leu Asp Asn Gly Val Arg Val Val Leu Leu Asp Lys Ala Ala
545 550 555
gcg tac cgc ttc tgg gct cct gca ttg aca aat gat cct gtc gtg caa 1834
Ala Tyr Arg Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Val Val Gln
560 565 570 575
gag gcc gaa act g gtaagttcac ttcatgcgta gtacattgtc atttcatact 1887
Glu Ala Glu Thr
aatggttaca g tg ctc gtc cac ggc ccg tac ctt gtt cgc tcc gcc agc 1936
Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Ser
580 585 590
gtg tcg aag tcc aca ctg gcg ctc cga gga gac tca gtc gag aag acg 1984
Val Ser Lys Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Val Glu Lys Thr
595 600 605
aca ctg gaa atc ttc gca cct cac agc gtg agg gag att acc tgg aat 2032
Thr Leu Glu Ile Phe Ala Pro His Ser Val Arg Glu Ile Thr Trp Asn
610 615 620
ggg aaa caa gtg aag acc tct cag act tca tat ggc agt ctc aaa gcg 2080
Gly Lys Gln Val Lys Thr Ser Gln Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala
625 630 635 640
act ctc gct gca ccg ccg acc ata aag tta ccc gct ctc acc tcc tgg 2128
Thr Leu Ala Ala Pro Pro Thr Ile Lys Leu Pro Ala Leu Thr Ser Trp
645 650 655
aga tcc aac gac agc ttg ccg gag cgg ctt cca tcg tat gac gat tcc 2176
Arg Ser Asn Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser
660 665 670
gga ccg gcc tgg att g gtgagttgga ttccaatcga tctggcctgg acgaaatcta 2232
Gly Pro Ala Trp Ile
675
atgcgtttga cag ag gca aac cac atg acc aca tct aac ccc agt aaa 2280
Glu Ala Asn His Met Thr Thr Ser Asn Pro Ser Lys
680 685
cct gca acc ctt cca gtc cta tac gca gac gaa tac g gtatgtcaac 2327
Pro Ala Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu Tyr
690 695 700
ctctataccg acaccatcac aagtctaacc cgcctacag gc ttc cac aac ggc 2380
Gly Phe His Asn Gly
705
gtc cgc ctc tgg cgc ggc tac ttc aac ggc tct gct tcc gga gtc tac 2428
Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Ser Ala Ser Gly Val Tyr
710 715 720
ctc aac atc caa gga gga agc gcc tt gtacgttacc ctccccatcc 2474
Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe
725 730
cctctcaact atctcatcga aactaacaac ctcccctccg cag c ggc tgg tcc gcc 2530
Gly Trp Ser Ala
735
tgg cta aac ggc cac ttc ctc gac tcc cac ctc ggc gac gca aca acc 2578
Trp Leu Asn Gly His Phe Leu Asp Ser His Leu Gly Asp Ala Thr Thr
740 745 750
tcc caa gca aac aaa acc ctc ccc ttc cca ccc tcc ctc ctc aac ccc 2626
Ser Gln Ala Asn Lys Thr Leu Pro Phe Pro Pro Ser Leu Leu Asn Pro
755 760 765
acc gaa aac gtc ctc ctc atc gtc cac gac gac aca ggc cac gac cag 2674
Thr Glu Asn Val Leu Leu Ile Val His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln
770 775 780
aca acc ggc gcc cta aac cca cgc ggc atc ctc gcg gcc cgc ctc ctc 2722
Thr Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Ala Ala Arg Leu Leu
785 790 795
tcc aac gac tcc tcg tcc ccc gcg ccg gaa ttc acc cgc tgg cgc ctc 2770
Ser Asn Asp Ser Ser Ser Pro Ala Pro Glu Phe Thr Arg Trp Arg Leu
800 805 810 815
gcc ggc acc gca ggc ggg gaa tcg aac ctc gat ccc atc cgc ggc gtc 2818
Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Ile Arg Gly Val
820 825 830
ttc aac gag gac ggc ctc ttc gca gaa cgc atg ggc tgg cac ctc ccc 2866
Phe Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala Glu Arg Met Gly Trp His Leu Pro
835 840 845
ggc ttc gac gac agc gcc tgg acg gcc gag aac tca act gca tcc acc 2914
Gly Phe Asp Asp Ser Ala Trp Thr Ala Glu Asn Ser Thr Ala Ser Thr
850 855 860
tcg gca ctg agc ttc acc ggc gca acc gtc cgc ttc ttc cgc acc gtc 2962
Ser Ala Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Val
865 870 875
gtc ccc ctc gat atc cct gct ggt ctg gac gtc tcc gtc tcc ttc gtg 3010
Val Pro Leu Asp Ile Pro Ala Gly Leu Asp Val Ser Val Ser Phe Val
880 885 890 895
ctc tcg acc cca tcg aat gcg ccc aag gga tac cgc gca cag ctg ttc 3058
Leu Ser Thr Pro Ser Asn Ala Pro Lys Gly Tyr Arg Ala Gln Leu Phe
900 905 910
gtc aat ggg tac cag tat ggt cgg tac aac cca cac atc ggc aat cag 3106
Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro His Ile Gly Asn Gln
915 920 925
gtg gtg ttc cct gtt ccg ccg ggt att ctc gat tac cag gga gat aac 3154
Val Val Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr Gln Gly Asp Asn
930 935 940
acg atc ggg ttg gcg gtc tgg gcg cag acg gaa gag ggg gcg agt atc 3202
Thr Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly Ala Ser Ile
945 950 955
cag gtg gac tgg aag gtg aat tac gtg gcg gat agc tcg ttg agt gtc 3250
Gln Val Asp Trp Lys Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Ser Val
960 965 970 975
gct gga ttt ggg aaa ggc ttg agg ccg ggt tgg acc gag gag cgg ttg 3298
Ala Gly Phe Gly Lys Gly Leu Arg Pro Gly Trp Thr Glu Glu Arg Leu
980 985 990
aag ttt acc tag 3310
Lys Phe Thr
<210> 78
<211> 1014
<212> PRT
<213> 迟缓曲霉
<400> 78
Met Ala His Ile Tyr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ser Asn Leu Trp
-20 -15 -10 -5
Phe Ala Thr Ala Ala Gln Asn Gln Ser Glu Thr Glu Trp Pro Leu His
-1 1 5 10
Asp Asn Gly Leu Ser Lys Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe His
15 20 25
Val Asn Gly Gln Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
30 35 40
Arg Ile Pro Val Pro Glu Leu Trp Arg Asp Val Leu Glu Lys Val Lys
45 50 55 60
Ala Thr Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
65 70 75
Ala Pro Asn Asn His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile
80 85 90
Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val
95 100 105
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro
110 115 120
Leu Trp Leu Thr Thr Gly Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asp Asp Pro
125 130 135 140
Arg Tyr Thr Ala Ala Trp Thr Pro Tyr Phe Ala Asn Met Ser Gln Ile
145 150 155
Thr Ser Lys Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Val Tyr Gln
160 165 170
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Lys Asp Arg
175 180 185
Lys Pro Asn Lys Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser
190 195 200
Ala Arg Glu Asn Gly Ile Thr Val Pro Leu Thr Ser Asn Asp Pro Asn
205 210 215 220
Met Asn Ser Lys Ser Trp Gly Ser Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn
225 230 235
Val Asp Val Ala Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp
240 245 250
Val Ser Gln Cys Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val
255 260 265
Ile Asp Tyr Tyr Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Thr Leu Pro Ser
270 275 280
Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro
285 290 295 300
Glu Gly Gly Cys Pro Gln Asp Thr Gly Ala Glu Phe Ala Asn Leu Phe
305 310 315
Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met
320 325 330
Leu Tyr Gly Gly Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala
335 340 345
Thr Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly
350 355 360
Ala Lys Tyr Ser Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Thr Ala
365 370 375 380
Lys Asp Leu Thr Met Thr Glu Ala Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr
385 390 395
Thr Asn Thr Ala Val Arg Ala Phe Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn
400 405 410
Ala Gly Phe Tyr Val Thr Phe His Asn Asp Thr Thr Val Gly Gly Asn
415 420 425
Gln Ala Phe Lys Leu His Val Asn Thr Ser Val Gly Ala Leu Thr Val
430 435 440
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465 470 475
Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Phe Glu Asp Arg Pro Thr Leu Val
480 485 490
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495 500 505
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510 515 520
Glu Ser Glu Lys Asn Tyr Leu Val Val Asn Phe Ser Gln Ala Lys Gly
525 530 535 540
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545 550 555
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560 565 570
Val Val Gln Glu Ala Glu Thr Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val
575 580 585
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590 595 600
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605 610 615 620
Ile Thr Trp Asn Gly Lys Gln Val Lys Thr Ser Gln Thr Ser Tyr Gly
625 630 635
Ser Leu Lys Ala Thr Leu Ala Ala Pro Pro Thr Ile Lys Leu Pro Ala
640 645 650
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655 660 665
Tyr Asp Asp Ser Gly Pro Ala Trp Ile Glu Ala Asn His Met Thr Thr
670 675 680
Ser Asn Pro Ser Lys Pro Ala Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu
685 690 695 700
Tyr Gly Phe His Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly
705 710 715
Ser Ala Ser Gly Val Tyr Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe Gly
720 725 730
Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly His Phe Leu Asp Ser His Leu Gly Asp
735 740 745
Ala Thr Thr Ser Gln Ala Asn Lys Thr Leu Pro Phe Pro Pro Ser Leu
750 755 760
Leu Asn Pro Thr Glu Asn Val Leu Leu Ile Val His Asp Asp Thr Gly
765 770 775 780
His Asp Gln Thr Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Ala Ala
785 790 795
Arg Leu Leu Ser Asn Asp Ser Ser Ser Pro Ala Pro Glu Phe Thr Arg
800 805 810
Trp Arg Leu Ala Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Ile
815 820 825
Arg Gly Val Phe Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala Glu Arg Met Gly Trp
830 835 840
His Leu Pro Gly Phe Asp Asp Ser Ala Trp Thr Ala Glu Asn Ser Thr
845 850 855 860
Ala Ser Thr Ser Ala Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe
865 870 875
Arg Thr Val Val Pro Leu Asp Ile Pro Ala Gly Leu Asp Val Ser Val
880 885 890
Ser Phe Val Leu Ser Thr Pro Ser Asn Ala Pro Lys Gly Tyr Arg Ala
895 900 905
Gln Leu Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro His Ile
910 915 920
Gly Asn Gln Val Val Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr Gln
925 930 935 940
Gly Asp Asn Thr Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly
945 950 955
Ala Ser Ile Gln Val Asp Trp Lys Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser
960 965 970
Leu Ser Val Ala Gly Phe Gly Lys Gly Leu Arg Pro Gly Trp Thr Glu
975 980 985
Glu Arg Leu Lys Phe Thr
990
<210> 79
<211> 994
<212> PRT
<213> 迟缓曲霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(994)
<400> 79
Ala Gln Asn Gln Ser Glu Thr Glu Trp Pro Leu His Asp Asn Gly Leu
1 5 10 15
Ser Lys Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe His Val Asn Gly Gln
20 25 30
Arg Ile Phe Val Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp Arg Ile Pro Val
35 40 45
Pro Glu Leu Trp Arg Asp Val Leu Glu Lys Val Lys Ala Thr Gly Phe
50 55 60
Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His Ala Pro Asn Asn
65 70 75 80
His Thr Val Asp Phe Ser Thr Gly Ala Arg Asp Ile Thr Pro Ile Phe
85 90 95
Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Met Ile Val Arg Pro Gly Pro
100 105 110
Tyr Val Asn Ala Glu Ala Ser Ala Gly Gly Phe Pro Leu Trp Leu Thr
115 120 125
Thr Gly Glu Tyr Gly Ser Leu Arg Asn Asp Asp Pro Arg Tyr Thr Ala
130 135 140
Ala Trp Thr Pro Tyr Phe Ala Asn Met Ser Gln Ile Thr Ser Lys Tyr
145 150 155 160
Gln Val Thr Asp Gly His Asn Thr Leu Val Tyr Gln Ile Glu Asn Glu
165 170 175
Tyr Gly Gln Gln Trp Ile Gly Asp Pro Lys Asp Arg Lys Pro Asn Lys
180 185 190
Thr Ala Val Ala Tyr Met Glu Leu Leu Glu Ala Ser Ala Arg Glu Asn
195 200 205
Gly Ile Thr Val Pro Leu Thr Ser Asn Asp Pro Asn Met Asn Ser Lys
210 215 220
Ser Trp Gly Ser Asp Trp Ser Asn Ala Gly Gly Asn Val Asp Val Ala
225 230 235 240
Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp Val Ser Gln Cys
245 250 255
Thr Ser Thr Asn Gly Glu Tyr Val Pro Tyr Lys Val Ile Asp Tyr Tyr
260 265 270
Asp Tyr Phe Gln Glu Val Gln Pro Thr Leu Pro Ser Phe Met Pro Glu
275 280 285
Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Ala Gly Pro Glu Gly Gly Cys
290 295 300
Pro Gln Asp Thr Gly Ala Glu Phe Ala Asn Leu Phe Tyr Arg Trp Asn
305 310 315 320
Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met Leu Tyr Gly Gly
325 330 335
Thr Asn Trp Gly Ala Ile Ala Ala Pro Val Thr Ala Thr Ser Tyr Asp
340 345 350
Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Gly Ala Lys Tyr Ser
355 360 365
Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Thr Ala Lys Asp Leu Thr
370 375 380
Met Thr Glu Ala Ile Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr Thr Asn Thr Ala
385 390 395 400
Val Arg Ala Phe Glu Leu Arg Asn Pro Gln Thr Asn Ala Gly Phe Tyr
405 410 415
Val Thr Phe His Asn Asp Thr Thr Val Gly Gly Asn Gln Ala Phe Lys
420 425 430
Leu His Val Asn Thr Ser Val Gly Ala Leu Thr Val Pro Lys Asn Glu
435 440 445
Gly Val Ile Gln Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile Ile Val Thr Asp
450 455 460
Phe Thr Leu Gly Lys Arg Thr Leu Leu Tyr Ser Thr Ala Glu Val Leu
465 470 475 480
Thr Tyr Ala Val Phe Glu Asp Arg Pro Thr Leu Val Leu Trp Val Pro
485 490 495
Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ala Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Lys
500 505 510
Val Glu Asn Gly Asp Gly Cys Ser Gly Ile Lys Phe Glu Ser Glu Lys
515 520 525
Asn Tyr Leu Val Val Asn Phe Ser Gln Ala Lys Gly Leu Ser Val Leu
530 535 540
Arg Leu Asp Asn Gly Val Arg Val Val Leu Leu Asp Lys Ala Ala Ala
545 550 555 560
Tyr Arg Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro Val Val Gln Glu
565 570 575
Ala Glu Thr Val Leu Val His Gly Pro Tyr Leu Val Arg Ser Ala Ser
580 585 590
Val Ser Lys Ser Thr Leu Ala Leu Arg Gly Asp Ser Val Glu Lys Thr
595 600 605
Thr Leu Glu Ile Phe Ala Pro His Ser Val Arg Glu Ile Thr Trp Asn
610 615 620
Gly Lys Gln Val Lys Thr Ser Gln Thr Ser Tyr Gly Ser Leu Lys Ala
625 630 635 640
Thr Leu Ala Ala Pro Pro Thr Ile Lys Leu Pro Ala Leu Thr Ser Trp
645 650 655
Arg Ser Asn Asp Ser Leu Pro Glu Arg Leu Pro Ser Tyr Asp Asp Ser
660 665 670
Gly Pro Ala Trp Ile Glu Ala Asn His Met Thr Thr Ser Asn Pro Ser
675 680 685
Lys Pro Ala Thr Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Glu Tyr Gly Phe His
690 695 700
Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly Ser Ala Ser Gly
705 710 715 720
Val Tyr Leu Asn Ile Gln Gly Gly Ser Ala Phe Gly Trp Ser Ala Trp
725 730 735
Leu Asn Gly His Phe Leu Asp Ser His Leu Gly Asp Ala Thr Thr Ser
740 745 750
Gln Ala Asn Lys Thr Leu Pro Phe Pro Pro Ser Leu Leu Asn Pro Thr
755 760 765
Glu Asn Val Leu Leu Ile Val His Asp Asp Thr Gly His Asp Gln Thr
770 775 780
Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Leu Ala Ala Arg Leu Leu Ser
785 790 795 800
Asn Asp Ser Ser Ser Pro Ala Pro Glu Phe Thr Arg Trp Arg Leu Ala
805 810 815
Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asn Leu Asp Pro Ile Arg Gly Val Phe
820 825 830
Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala Glu Arg Met Gly Trp His Leu Pro Gly
835 840 845
Phe Asp Asp Ser Ala Trp Thr Ala Glu Asn Ser Thr Ala Ser Thr Ser
850 855 860
Ala Leu Ser Phe Thr Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr Val Val
865 870 875 880
Pro Leu Asp Ile Pro Ala Gly Leu Asp Val Ser Val Ser Phe Val Leu
885 890 895
Ser Thr Pro Ser Asn Ala Pro Lys Gly Tyr Arg Ala Gln Leu Phe Val
900 905 910
Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro His Ile Gly Asn Gln Val
915 920 925
Val Phe Pro Val Pro Pro Gly Ile Leu Asp Tyr Gln Gly Asp Asn Thr
930 935 940
Ile Gly Leu Ala Val Trp Ala Gln Thr Glu Glu Gly Ala Ser Ile Gln
945 950 955 960
Val Asp Trp Lys Val Asn Tyr Val Ala Asp Ser Ser Leu Ser Val Ala
965 970 975
Gly Phe Gly Lys Gly Leu Arg Pro Gly Trp Thr Glu Glu Arg Leu Lys
980 985 990
Phe Thr
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 80是保守基序Y[Y/F][D/Q][Y/H/W]F。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 保守基序的2位氨基酸是苯丙氨酸（F）或酪氨酸（Y）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 保守基序的3位氨基酸是天冬氨酸（D）或谷氨酰胺（Q）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 保守基序的4位氨基酸是苯丙氨酸（F）、酪氨酸（Y）或色氨酸（W）。
<400> 80
Tyr Xaa Xaa Xaa Phe
1 5
<210> 81
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 81是保守基序K[Y/F][Y/S]ETK。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 保守基序的2位氨基酸是苯丙氨酸（F）或酪氨酸（Y）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 保守基序的3位氨基酸是丝氨酸（S）或酪氨酸（Y）。
<400> 81
Lys Xaa Xaa Glu Thr Lys
1 5
<210> 82
<211> 1013
<212> PRT
<213> 产黄青霉
<400> 82
Met Thr Arg Ile Leu Asn Cys Leu Leu Val Leu Leu Ala Cys Leu Gly
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Ala Glu Asp Gln Ala Val Thr Gln Trp Pro Leu Gln
20 25 30
Asp Asn Gly Leu Asn Thr Val Val Gln Trp Asp His Tyr Ser Phe Gln
35 40 45
Ile Asn Gly Gln Arg Ile Phe Ile Phe Ser Gly Glu Phe His Tyr Trp
50 55 60
Arg Ile Pro Val Pro Ala Leu Trp Arg Asp Ile Leu Glu Lys Ile Lys
65 70 75 80
Ala Ala Gly Phe Thr Ala Phe Ala Phe Tyr Ser Ser Trp Ala Tyr His
85 90 95
Ala Pro Asn Asn Ala Thr Val Asp Phe Thr Thr Gly Ala Arg Asp Ile
100 105 110
Thr Pro Ile Phe Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Met Tyr Ile Ile Val
115 120 125
Arg Pro Gly Pro Tyr Val Asn Ala Glu Ala Asn Ala Gly Gly Phe Pro
130 135 140
Leu Trp Val Thr Thr Gly Asp Tyr Gly Thr Leu Arg Asn Asp Asp Thr
145 150 155 160
Arg Tyr Thr Asn Ala Trp Thr Pro Tyr Phe Thr Glu Val Thr Glu Ile
165 170 175
Thr Ser Arg Tyr Gln Val Thr Asp Gly His Tyr Ser Ile Val Tyr Gln
180 185 190
Ile Glu Asn Glu Tyr Gly Asn Gln Trp Leu Gly Asp Pro Thr Leu Arg
195 200 205
Val Pro Asn Glu Thr Ala Ile Ala Tyr Met Glu Leu Leu Lys Ala Asn
210 215 220
Ala Arg Asp Asn Gly Ile Thr Leu Pro Leu Thr Val Asn Asp Pro Asn
225 230 235 240
Met Lys Thr His Ser Trp Gly Lys Asp Trp Ser Asp Ala Gly Gly Asn
245 250 255
Val Asp Ala Ala Gly Leu Asp Ser Tyr Pro Ser Cys Trp Thr Cys Asp
260 265 270
Ile Ser Gln Cys Thr Ser Thr Asn Gly Ala Tyr Val Pro Phe Gln Val
275 280 285
Leu Glu Tyr His Asp Tyr Phe Gln Glu Ser Gln Pro Ser Met Pro Ala
290 295 300
Phe Met Pro Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr Asn Pro Trp Gly Gly Pro
305 310 315 320
Glu Gly Gly Cys Pro Gly Asp Ile Gly Asp Asp Phe Ala Asn Leu Phe
325 330 335
Tyr Arg Trp Asn Ile Gly Gln Arg Val Thr Ala Met Ser Leu Tyr Met
340 345 350
Met Phe Gly Gly Gln Asn Pro Gly Ala Met Ala Ala Pro Val Thr Ala
355 360 365
Ser Ser Tyr Asp Tyr Ser Ala Pro Ile Ser Glu Asp Arg Ser Ile Trp
370 375 380
Ser Lys Tyr His Glu Thr Lys Leu Leu Ala Leu Phe Thr Arg Ser Ala
385 390 395 400
Lys Asp Leu Thr Met Thr Glu Leu Met Gly Asn Gly Thr Gln Tyr Thr
405 410 415
Asp Asn Pro Ala Val Arg Ala Tyr Glu Leu Arg Asn Pro Glu Thr Asn
420 425 430
Ser Ala Phe Tyr Ala Thr Phe His Ser Asn Thr Ser Ile Ser Thr Asn
435 440 445
Glu Pro Phe His Leu Lys Val Asn Thr Ser Ala Gly Val Leu Thr Val
450 455 460
Pro Lys Tyr Ala Ser Thr Ile Arg Leu Asn Gly His Gln Ser Lys Ile
465 470 475 480
Ile Val Thr Asp Phe Thr Phe Gly Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Ser Thr
485 490 495
Ala Glu Val Leu Thr Tyr Ala Val Phe Asp Lys Lys Pro Thr Leu Val
500 505 510
Leu Trp Val Pro Thr Gly Glu Ser Gly Glu Phe Ser Ile Lys Gly Ala
515 520 525
Lys Lys Gly Ser Ile Lys Lys Cys Gln Gly Cys Ser Arg Val Lys Phe
530 535 540
Ile Lys Glu His Gly Gly Leu Thr Thr Ser Leu Thr Gln Ser Ala Gly
545 550 555 560
Met Thr Val Leu Glu Phe Asp Asp Gly Val Arg Val Ile Leu Leu Asp
565 570 575
Arg Thr Ser Ala Tyr Asp Phe Trp Ala Pro Ala Leu Thr Asn Asp Pro
580 585 590
Phe Val Pro Glu Thr Glu Ser Val Leu Ile Gln Gly Pro Tyr Leu Val
595 600 605
Arg Asp Ala Lys Leu Ser Gly Ser Lys Leu Ala Ile Thr Gly Asp Val
610 615 620
Val Asn Ala Thr Thr Leu Asp Val Phe Ala Pro Lys Gly Val Lys Ser
625 630 635 640
Val Thr Trp Asn Gly Lys Lys Val Asp Thr His Ser Thr Glu Tyr Gly
645 650 655
Ser Leu Lys Gly Ser Leu Asp Ala Pro Gln Ser Ile Lys Leu Pro Ala
660 665 670
Leu Ala Ser Trp Lys Ser Lys Asp Ser Leu Pro Glu Arg Phe Ala Asp
675 680 685
Tyr Asp Asp Ser Gly Ala Ala Trp Val Asp Ala Asn His Met Thr Thr
690 695 700
Leu Asn Pro Arg Thr Pro Thr Ser Leu Pro Val Leu Tyr Ala Asp Gln
705 710 715 720
Tyr Gly Phe His Asn Gly Val Arg Leu Trp Arg Gly Tyr Phe Asn Gly
725 730 735
Thr Ala Thr Gly Ala Phe Ile Asn Val Gln Gly Gly Ser Ala Phe Gly
740 745 750
Trp Ser Ala Trp Leu Asn Gly Glu Phe Leu Ala Ser His Leu Gly Asn
755 760 765
Ala Thr Thr Ser Gln Ala Asn Leu Ser Leu Ser Phe Thr Asp Ala Thr
770 775 780
Leu His Thr Asp Thr Pro Asn Val Leu Leu Ile Val His Asp Asp Thr
785 790 795 800
Gly His Asp Gln Thr Thr Gly Ala Leu Asn Pro Arg Gly Ile Met Asp
805 810 815
Ala Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ser Gly Phe Thr His Trp Arg Leu Ala
820 825 830
Gly Thr Ala Gly Gly Glu Ser Asp Leu Asp Pro Val Arg Gly Val Tyr
835 840 845
Asn Glu Asp Gly Leu Phe Ala Glu Arg Val Gly Trp His Leu Pro Gly
850 855 860
Phe Asp Asp Ser Asp Trp Gly Glu Glu Ala Ser Ala Lys Asp Ser Thr
865 870 875 880
Thr Ser Val Leu Ser Phe Glu Gly Ala Thr Val Arg Phe Phe Arg Thr
885 890 895
Thr Cys Pro Leu Asp Ile Pro Ala His Thr Asp Val Ser Ile Ser Phe
900 905 910
Val Leu Ser Thr Pro Ala Gly Ala Thr Thr Glu Tyr Arg Ala Gln Leu
915 920 925
Phe Val Asn Gly Tyr Gln Tyr Gly Arg Tyr Asn Pro Tyr Ile Gly Asn
930 935 940
Gln Val Val Tyr Pro Val Pro Val Gly Ile Leu Asp Tyr Lys Gly Glu
945 950 955 960
Asn Thr Ile Gly Val Ala Val Trp Ala Gln Ser Glu Glu Gly Ala Ser
965 970 975
Ile Gly Ile Asp Trp Arg Val Asn Tyr Leu Ala Asp Ser Ser Leu Asp
980 985 990
Val Ala Ser Trp Asp Thr Lys Asp Leu Arg Pro Gly Trp Thr Glu Glu
995 1000 1005
Arg Val Lys Tyr Ala
1010
<210> 83
<211> 352
<212> PRT
<213> 产黄青霉
<400> 83
Met Leu Pro His Leu Leu Leu Ala Ala Ala Gln Leu Phe Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ser Ala Ala Leu Thr Tyr Asn Gly Ala Asp Ile Ser Ser Leu Leu Val
20 25 30
Glu Glu Gly Lys Gly Val Ser Tyr Lys Asn Leu Ala Gly Thr Pro Glu
35 40 45
Lys Leu Glu Thr Ile Leu Ser Ala Ser Gly Val Asn Ser Val Arg Gln
50 55 60
Arg Ile Trp Val Asn Pro Ser Asp Gly Ser Tyr Asp Leu Asp Tyr Asn
65 70 75 80
Val Lys Leu Ala Lys Arg Val Gln Ala Gln Gly Met Gly Thr Tyr Leu
85 90 95
Asp Leu His Tyr Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Lys Ser Gln Thr Thr
100 105 110
Pro Ser Gly Trp Ser Thr Thr Asp Ile Gly Ile Leu Ala Gly Gln Val
115 120 125
Tyr Asp Tyr Thr Leu Asp Val Cys Asn Thr Phe Ala Ala Asn Lys Ile
130 135 140
Asp Val Asp Ile Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Arg Asn Gly Leu Leu
145 150 155 160
Trp Pro Leu Gly Gly Thr Ser Asn Tyr Asn Asn Ile Ala Arg Leu Leu
165 170 175
His Ser Ala Ala Trp Gly Val Lys Asp Ser Lys Leu Ala Thr Thr Pro
180 185 190
Lys Ile Met Ile His Leu Asp Asn Gly Trp Asp Ser Gly Ala Gln Ser
195 200 205
Tyr Phe Tyr Asp Gln Val Leu Ala Pro Gly Ser Gly Leu Val Ser Thr
210 215 220
Asp Phe Asp Tyr Ile Gly Val Ser Tyr Tyr Pro Phe Tyr Asn Ala Asp
225 230 235 240
Ala Thr Leu Ala Ala Leu Lys Thr Ser Leu Thr Asn Leu His Ser Lys
245 250 255
Tyr Lys Lys Glu Thr Leu Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Phe Ser Cys
260 265 270
Pro Asn Pro Glu Tyr Ala Phe Pro Thr Asp Leu Lys Asp Ile Pro Phe
275 280 285
Ser Val Glu Gly Gln Gln Thr Phe Leu Gln Arg Leu Ala Lys Ala Val
290 295 300
Glu Glu Val Gly Gly Leu Gly Ile Tyr Tyr Trp Glu Pro Ala Trp Val
305 310 315 320
Asp Asn Ala Gly Leu Gly Ser Ser Cys Asp Asp Asn Leu Phe Phe Ala
325 330 335
Trp Ser Asn Asp Gln Ala Arg Ala Ser Leu Asp Thr Leu Gly Gly Leu
340 345 350
<210> 84
<211> 1007
<212> PRT
<213> 黑曲霉
<400> 84
Met Lys Leu Ser Ser Ala Cys Ala Ile Ala Leu Leu Ala Ala Gln Ala
1 5 10 15
Ala Gly Ala Ser Ile Lys His Arg Ile Asn Gly Phe Thr Leu Thr Glu
20 25 30
His Ser Asp Pro Ala Lys Arg Glu Leu Leu Gln Lys Tyr Val Thr Trp
35 40 45
Asp Asp Lys Ser Leu Phe Ile Asn Gly Glu Arg Ile Met Ile Phe Ser
50 55 60
Gly Glu Phe His Pro Phe Arg Leu Pro Val Lys Glu Leu Gln Leu Asp
65 70 75 80
Ile Phe Gln Lys Val Lys Ala Leu Gly Phe Asn Cys Val Ser Phe Tyr
85 90 95
Val Asp Trp Ala Leu Val Glu Gly Lys Pro Gly Glu Tyr Arg Ala Asp
100 105 110
Gly Ile Phe Asp Leu Glu Pro Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu Ala Gly
115 120 125
Ile Tyr Leu Leu Ala Arg Pro Gly Pro Tyr Ile Asn Ala Glu Ser Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Phe Pro Gly Trp Leu Gln Arg Val Asn Gly Thr Leu Arg
145 150 155 160
Ser Ser Asp Lys Ala Tyr Leu Asp Ala Thr Asp Asn Tyr Val Ser His
165 170 175
Val Ala Ala Thr Ile Ala Lys Tyr Gln Ile Thr Asn Gly Gly Pro Ile
180 185 190
Ile Leu Tyr Gln Pro Glu Asn Glu Tyr Thr Ser Gly Cys Cys Gly Val
195 200 205
Glu Phe Pro Asp Pro Val Tyr Met Gln Tyr Val Glu Asp Gln Ala Arg
210 215 220
Asn Ala Gly Val Val Ile Pro Leu Ile Asn Asn Asp Ala Ser Ala Ser
225 230 235 240
Gly Asn Asn Ala Pro Gly Thr Gly Lys Gly Ala Val Asp Ile Tyr Gly
245 250 255
His Asp Ser Tyr Pro Leu Gly Phe Asp Cys Ala Asn Pro Thr Val Trp
260 265 270
Pro Ser Gly Asp Leu Pro Thr Asn Phe Arg Thr Leu His Leu Glu Gln
275 280 285
Ser Pro Thr Thr Pro Tyr Ala Ile Val Glu Phe Gln Gly Gly Ser Tyr
290 295 300
Asp Pro Trp Gly Gly Pro Gly Phe Ala Ala Cys Ser Glu Leu Leu Asn
305 310 315 320
Asn Glu Phe Glu Arg Val Phe Tyr Lys Asn Asp Phe Ser Phe Gln Ile
325 330 335
Ala Ile Met Asn Leu Tyr Met Ile Phe Gly Gly Thr Asn Trp Gly Asn
340 345 350
Leu Gly Tyr Pro Asn Gly Tyr Thr Ser Tyr Asp Tyr Gly Ser Ala Val
355 360 365
Thr Glu Ser Arg Asn Ile Thr Arg Glu Lys Tyr Ser Glu Leu Lys Leu
370 375 380
Leu Gly Asn Phe Ala Lys Val Ser Pro Gly Tyr Leu Thr Ala Ser Pro
385 390 395 400
Gly Asn Leu Thr Thr Ser Gly Tyr Ala Asp Thr Thr Asp Leu Thr Val
405 410 415
Thr Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ser Phe Phe Val Val Arg His
420 425 430
Ser Asp Tyr Ser Ser Glu Glu Ser Thr Ser Tyr Lys Leu Arg Leu Pro
435 440 445
Thr Ser Ala Gly Ser Val Thr Ile Pro Gln Leu Gly Gly Thr Leu Thr
450 455 460
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Lys Ile His Val Thr Asp Tyr Asn Val Ser
465 470 475 480
Gly Thr Asn Ile Ile Tyr Ser Thr Ala Glu Val Phe Thr Trp Lys Lys
485 490 495
Phe Ala Asp Gly Lys Val Leu Val Leu Tyr Gly Gly Ala Gly Glu His
500 505 510
His Glu Leu Ala Ile Ser Thr Lys Ser Asn Val Thr Val Ile Glu Gly
515 520 525
Ser Glu Ser Gly Ile Ser Ser Lys Gln Thr Ser Ser Ser Val Val Val
530 535 540
Gly Trp Asp Val Ser Thr Thr Arg Arg Ile Ile Gln Val Gly Asp Leu
545 550 555 560
Lys Ile Leu Leu Leu Asp Arg Asn Ser Ala Tyr Asn Tyr Trp Val Pro
565 570 575
Gln Leu Ala Thr Asp Gly Thr Ser Pro Gly Phe Ser Thr Pro Glu Lys
580 585 590
Val Ala Ser Ser Ile Ile Val Lys Ala Gly Tyr Leu Val Arg Thr Ala
595 600 605
Tyr Leu Lys Gly Ser Gly Leu Tyr Leu Thr Ala Asp Phe Asn Ala Thr
610 615 620
Thr Ser Val Glu Val Ile Gly Val Pro Ser Thr Ala Lys Asn Leu Phe
625 630 635 640
Ile Asn Gly Asp Lys Thr Ser His Thr Val Asp Lys Asn Gly Ile Trp
645 650 655
Ser Ala Thr Val Asp Tyr Asn Ala Pro Asp Ile Ser Leu Pro Ser Leu
660 665 670
Lys Asp Leu Asp Trp Lys Tyr Val Asp Thr Leu Pro Glu Ile Gln Ser
675 680 685
Ser Tyr Asp Asp Ser Leu Trp Pro Ala Ala Asp Leu Lys Gln Thr Lys
690 695 700
Asn Thr Leu Arg Ser Leu Thr Thr Pro Thr Ser Leu Tyr Ser Ser Asp
705 710 715 720
Tyr Gly Phe His Thr Gly Tyr Leu Leu Tyr Arg Gly His Phe Thr Ala
725 730 735
Thr Gly Asn Glu Ser Thr Phe Ala Ile Asp Thr Gln Gly Gly Ser Ala
740 745 750
Phe Gly Ser Ser Val Trp Leu Asn Gly Thr Tyr Leu Gly Ser Trp Thr
755 760 765
Gly Leu Tyr Ala Asn Ser Asp Tyr Asn Ala Thr Tyr Asn Leu Pro Gln
770 775 780
Leu Gln Ala Gly Lys Thr Tyr Val Ile Thr Val Val Ile Asp Asn Met
785 790 795 800
Gly Leu Glu Glu Asn Trp Thr Val Gly Glu Asp Leu Met Lys Thr Pro
805 810 815
Arg Gly Ile Leu Asn Phe Leu Leu Ala Gly Arg Pro Ser Ser Ala Ile
820 825 830
Ser Trp Lys Leu Thr Gly Asn Leu Gly Gly Glu Asp Tyr Glu Asp Lys
835 840 845
Val Arg Gly Pro Leu Asn Glu Gly Gly Leu Tyr Ala Glu Arg Gln Gly
850 855 860
Phe His Gln Pro Glu Pro Pro Ser Gln Asn Trp Lys Ser Ser Ser Pro
865 870 875 880
Leu Glu Gly Leu Ser Glu Ala Gly Ile Gly Phe Tyr Ser Ala Ser Phe
885 890 895
Asp Leu Asp Leu Pro Lys Gly Trp Asp Val Pro Leu Phe Leu Asn Ile
900 905 910
Gly Asn Ser Thr Thr Pro Ser Pro Tyr Arg Val Gln Val Tyr Val Asn
915 920 925
Gly Tyr Gln Tyr Ala Lys Tyr Ile Ser Asn Ile Gly Pro Gln Thr Ser
930 935 940
Phe Pro Val Pro Glu Gly Ile Leu Asn Tyr Arg Gly Thr Asn Trp Leu
945 950 955 960
Ala Val Thr Leu Trp Ala Leu Asp Ser Ala Gly Gly Lys Leu Glu Ser
965 970 975
Leu Glu Leu Ser Tyr Thr Thr Pro Val Leu Thr Ala Leu Gly Glu Val
980 985 990
Glu Ser Val Asp Gln Pro Lys Tyr Lys Lys Arg Lys Gly Ala Tyr
995 1000 1005
<210> 85
<211> 350
<212> PRT
<213> 黑曲霉
<400> 85
Met Ile Tyr Pro Leu Leu Leu Ser Ala Leu Pro Leu Leu Ser Ser Ala
1 5 10 15
Ala Leu Thr Tyr Arg Gly Ala Asp Ile Ser Ser Leu Leu Ile Glu Glu
20 25 30
Asp Ala Gly Ile Ser Tyr Lys Asn Leu Asn Gly Glu Thr Gln Ala Leu
35 40 45
Glu Asp Ile Leu Val Asn Asn Gly Val Asn Ser Ile Arg Gln Arg Val
50 55 60
Trp Val Asp Pro Ser Asp Gly Ser Tyr Asp Leu Asp Tyr Asn Leu Lys
65 70 75 80
Leu Ala Lys Arg Val Gln Ala Ala Gly Met Ser Ile Tyr Leu Asp Leu
85 90 95
His Leu Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Ser Asp Gln Thr Thr Pro Thr
100 105 110
Gly Trp Ser Thr Thr Asp Ile Asp Thr Leu Thr Trp Gln Leu Tyr Asn
115 120 125
Tyr Thr Leu Asp Val Cys Asn Thr Phe Ala Glu Asn Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Ile Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Ser Ser Gly Leu Leu Trp Pro
145 150 155 160
Leu Gly Lys Thr Ser Asn Tyr Asp Asn Ile Ala Lys Leu Leu His Ser
165 170 175
Gly Ala Trp Gly Val Lys Asp Ser Asn Gln Ala Thr Thr Pro Lys Ile
180 185 190
Met Ile His Leu Asp Asn Gly Trp Asp Trp Glu Glu Gln Glu Tyr Phe
195 200 205
Tyr Lys Thr Val Leu Ala Thr Gly Ser Leu Leu Ser Thr Asp Phe Asp
210 215 220
Leu Met Gly Val Ser Tyr Tyr Pro Phe Tyr Asn Ser Glu Ala Thr Leu
225 230 235 240
Ser Ala Leu Gln Thr Ser Leu Thr Asn Met Gln Ser Asn Tyr Asp Lys
245 250 255
Ser Val Val Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Val Ser Cys Pro Asp Pro
260 265 270
Glu Tyr Ser Phe Pro Ser Asp Leu Ser Ser Ile Pro Phe Ser Ala Ala
275 280 285
Gly Gln Glu Glu Phe Leu Glu Lys Leu Ala Glu Val Val Glu Gly Val
290 295 300
Thr Asp Gly Leu Gly Ile Tyr Tyr Trp Glu Pro Ala Trp Val Asp Asn
305 310 315 320
Ala Ala Leu Ala Ser Ser Cys Ala Asp Asn Leu Met Val Asp Ile Asp
325 330 335
Thr Asp Glu Val Leu Glu Ser Val Thr Val Phe Glu Asp Leu
340 345 350
Claims (25)
1.一种组合物，该组合物包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH35多肽。
2.如权利要求1所述的组合物，其中该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。
3.如权利要求1至2中任一项所述的组合物，其中该GH53多肽获得自或可获得自分类科类芽孢杆菌科。
4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽长度的至少90％的片段。
5.如权利要求4所述的组合物，其中该GH53多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ ID NO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQ ID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ IDNO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ ID NO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。
6.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该GH35多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:79的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55、SEQID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:79的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；
(n)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(o)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽长度的至少90％的片段。
7.如权利要求6所述的组合物，其中该GH35多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至985、SEQ ID NO:43的氨基酸1至985、SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:48的氨基酸1至998、SEQ ID NO:49的氨基酸1至998、SEQ ID NO:51的氨基酸1至983、SEQ ID NO:52的氨基酸1至983、SEQ ID NO:54的氨基酸1至998、SEQ ID NO:55的氨基酸1至998、SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007、SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007、SEQ IDNO:60的氨基酸1至988、SEQ ID NO:61的氨基酸1至988、SEQ ID NO:69的氨基酸1至962、SEQID NO:70的氨基酸1至962、SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:78的氨基酸1至994和SEQ ID NO:79的氨基酸1至994或由其组成。
8.如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中当在反应条件每kg豆粕20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶、在10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液pH 6.5中、在40℃下孵育2小时下进行时，该组合物释放至少12g半乳糖/kg豆粕。
9.一种颗粒，该颗粒包含如权利要求1至8中任一项所述的组合物。
10.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含
(a)如权利要求1至8中任一项所述的组合物或如权利要求9所述的颗粒，以及
(b)选自由以下组成的列表的一种或多种组分：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
11.一种动物饲料，该动物饲料包含植物基材料和如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒或如权利要求10所述的动物饲料添加剂。
12.一种颗粒状动物饲料，该颗粒状动物饲料包含植物基材料和如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒或如权利要求10所述的动物饲料添加剂。
13.一种液体配制品，该液体配制品包含如权利要求1至8中任一项所述的组合物。
14.一种从植物基材料中释放半乳糖的方法，该方法包括用如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂或如权利要求13所述的液体配制品处理该植物基材料。
15.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一只或多只动物施用如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂、如权利要求11所述的动物饲料、如权利要求12所述的颗粒状动物饲料或如权利要求13所述的液体配制品。
16.如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂或如权利要求13所述的液体配制品在以下中的用途：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中的一个或多个性能参数；和/或
用于从分类亚纲蔷薇分支的植物基材料中释放半乳糖。
17.一种具有半乳聚糖酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少99.0％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少96.4％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少96.4％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少99.3％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少99.3％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；
(k)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少82％序列同一性；
(l)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少83％序列同一性；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少99.0％序列同一性；
(n)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少96.4％序列同一性；
(o)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列具有至少84％序列同一性；
(p)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列具有至少96.4％序列同一性；
(q)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少86％序列同一性；
(r)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列具有至少99.3％序列同一性；
(s)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列具有至少99.3％序列同一性；
(t)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少83％序列同一性；
(u)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2或3个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:23的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且在1或2个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；以及
(z)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(aa)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽的具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽长度的至少90％的片段。
18.根据权利要求17所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ ID NO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQ ID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ IDNO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ ID NO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。
19.一种具有β-半乳糖苷酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:43的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:46的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:49的多肽具有至少96.4％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:52的多肽具有至少92％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:55的多肽具有至少99.7％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:58的多肽具有至少93％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:61的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:70的多肽具有至少95.5％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:73的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:76的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列具有至少80％序列同一性；
(l)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:44的成熟多肽编码序列具有至少83％序列同一性；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:47的成熟多肽编码序列具有至少96.4％序列同一性；
(n)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:50的成熟多肽编码序列具有至少92％序列同一性；
(o)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:53的成熟多肽编码序列具有至少99.7％序列同一性；
(p)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:56的成熟多肽编码序列具有至少93％序列同一性；
(q)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:59的成熟多肽编码序列具有至少85％序列同一性；
(r)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列具有至少95.5％序列同一性；
(s)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列具有至少80％序列同一性；
(t)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列具有至少80％序列同一性；
(u)SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:61、SEQID NO:73或SEQ ID NO:76的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:49的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:55的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2或3个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:70的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签的多肽；以及
(z)包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸的多肽；以及
(aa)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽的具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽长度的至少90％的片段。
20.根据权利要求19所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至985、SEQID NO:43的氨基酸1至985、SEQ ID NO:45的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:46的氨基酸1至1015、SEQ ID NO:48的氨基酸1至998、SEQ ID NO:49的氨基酸1至998、SEQ ID NO:51的氨基酸1至983、SEQ ID NO:52的氨基酸1至983、SEQ ID NO:54的氨基酸1至998、SEQ ID NO:55的氨基酸1至998、SEQ ID NO:57的氨基酸1至1007、SEQ ID NO:58的氨基酸1至1007、SEQ IDNO:60的氨基酸1至988、SEQ ID NO:61的氨基酸1至988、SEQ ID NO:69的氨基酸1至962、SEQID NO:70的氨基酸1至962、SEQ ID NO:72的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:73的氨基酸1至1000、SEQ ID NO:75的氨基酸1至1000或SEQ ID NO:76的氨基酸1至1000或由其组成。
21.一种编码如权利要求17至20中任一项所述的多肽的多核苷酸。
22.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如权利要求21所述的多核苷酸，该多核苷酸有效地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
23.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如权利要求21所述的多核苷酸，该多核苷酸有效地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
24.一种产生如权利要求17至20中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；并且
(b)回收该多肽。
25.一种产生如权利要求17至20中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求23所述的重组宿主细胞；并且
(b)回收该多肽。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: L. Carstensen Inventor after: N Sibociboge Inventor after: M. Yemonsen Inventor after: J. Salomon Inventor after: K.B.R.M. Crowe Inventor after: E. A. Drapa Inventor before: L. Carstensen Inventor before: N Sibociboge Inventor before: M. Yemonsen Inventor before: J. Salomon Inventor before: K.B.R.M. Crowe |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20190111 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |