CN109415709A - 具有木聚糖酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有木聚糖酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。本发明还涉及包含本发明的多肽的组合物以及本发明的多肽在溶解木聚糖及在动物饲料中的用途。

Description

具有木聚糖酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸
序列表的引用
本申请含有处于计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
背景技术
技术领域
本发明涉及具有木聚糖酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。本发明还涉及包含本发明的多肽的组合物以及本发明的多肽在溶解木聚糖及在动物饲料中的用途。
相关领域说明
木聚糖是在所有陆生植物中发现的半纤维素(Popper和Tuohy,Plant Physiology[植物生理学],2010,153:373-383)。它们在次生细胞壁和木质部细胞中尤其丰富。在具有II型细胞壁的草中，葡糖醛酸阿拉伯糖基木聚糖是主要的半纤维素，并且在许多基于草的食物和饲料产品中作为可溶性或不溶性膳食纤维存在。
植物木聚糖具有β-1,4-连接的吡喃木糖主链，该主链可以在O2或O3位置以物种和组织特异性方式被阿拉伯糖、葡萄糖醛酸和乙酸取代。黍亚科与经济上重要的物种(例如玉米、高粱、稻和粟)的富含淀粉的种子在它们的细胞壁中具有特殊类型的高度取代的木聚糖。与小麦粉相比，其中在阿拉伯糖基木聚糖主链中超过60％的木糖单元是未被取代的。在玉米核木聚糖中，对应的未被取代的主链木糖的百分比是20％-30％，并且在高粱中，该百分比是35％-40％(Huismann等人Carbohydrate Polymers[碳水化合物聚合物],2000,42:269-279)。此外，在玉米和高粱中，这些木聚糖侧链可以比在其他木聚糖中常见的单一阿拉伯糖或葡萄糖醛酸取代更长。这种附加的侧链复杂性通常是由于结合至该侧链阿拉伯糖或葡萄糖醛酸的L-和D-半乳糖以及D-木糖造成的。玉米核木聚糖中约每十分之一的阿拉伯糖还被阿魏酸酯化，并且约每四分之一木糖进行乙酰化(Agger等人J.Agric.Food Chem[农业与食品化学杂志],2010,58:6141-6148)。所有组合的这些因素使得玉米和高粱中高度取代的木聚糖对抗由传统的木聚糖酶引起的降解。
基于序列相似性，将负责木聚糖主链水解的已知的酶分类为酶家族(www.cazy.org)。主要具有内切-木聚糖酶活性的这些酶之前已描述于糖苷水解酶家族(GH)5、8、10、11、30和98中。家族内的酶共享一些特征，例如3D折叠，并且它们通常共同具有相同的反应机制。一些GH家族具有狭窄或单一底物特异性，然而其他家族具有宽泛的底物特异性。
通常使用可商购的GH10和GH11木聚糖酶来分解阿拉伯糖基木聚糖的木糖主链。在动物饲料中，这导致谷类作物细胞壁的降解，伴随着随后改善包封在细胞内的营养素释放(淀粉和蛋白质)。木聚糖的降解还导致木糖低聚物的形成，木糖低聚物可用于后肠发酵，并且因此可有助于动物获得更多可消化的能量。然而，此类木聚糖酶对侧链位阻敏感，并且虽然它们有效地降解来自小麦的阿拉伯糖基木聚糖，但是它们对在禾本科物种(例如玉米或高粱)的种子中发现的木聚糖不是非常有效的。
在全世界，玉米被用于动物饲料中，并且因此有需要发现具有木聚糖酶活性的新的多肽，这些多肽能分解细胞壁中的高度支链化的木聚糖主链，以便释放更多陷在细胞壁中的营养素。本发明的目的是提供能够溶解玉蜀黍中发现的这种高度支链化的木聚糖主链的木聚糖酶。
发明内容
本发明涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种配制剂的颗粒，以及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种维生素和/或矿物质和/或维生素的动物饲料添加剂，其中该多肽具有木聚糖酶活性，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
本发明进一步涉及具有木聚糖酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)SEQ ID NO:15的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
本申请进一步涉及组合物、动物饲料添加剂、动物饲料和颗粒化动物饲料、改善动物的一个或多个性能参数的方法；制备动物饲料的方法；用于改善动物饲料的营养价值的方法；从植物基材料中溶解木聚糖的方法；本发明的颗粒、多肽、组合物或动物饲料添加剂在动物饲料中、在动物饲料添加剂中、在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中、用于改善动物饲料的营养价值、用于提高动物饲料的消化率、用于改善动物中一个或多个性能参数、用于从黍亚科的植物基材料中溶解木聚糖、和/或用于从黍亚科的植物基材料中释放淀粉的用途。本发明进一步涉及编码本发明的多肽的多核苷酸；核酸构建体；表达载体；重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。
序列表概述
SEQ ID NO:1是如分离自解淀粉芽孢杆菌的GH30木聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是来自解淀粉芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是来自具有His标签的解淀粉芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5是如分离自地衣芽孢杆菌的GH30木聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:6是如从SEQ ID NO:5推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是来自地衣芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8是来自具有His标签的地衣芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是如分离自枯草芽孢杆菌的GH30木聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:10是如从SEQ ID NO:9推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11是来自枯草芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是来自具有His标签的枯草芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13是如分离自饲料类芽孢杆菌(Paenibacillus pabuli)的GH30木聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:14是如从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是来自饲料类芽孢杆菌的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16是来自具有His标签的饲料类芽孢杆菌(Paenibacillus pabuli)的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:17是如分离自解淀粉芽孢杆菌HB-26的GH30木聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:18是如从SEQ ID NO:17推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19是来自解淀粉芽孢杆菌HB-26的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:20是来自具有His标签的解淀粉芽孢杆菌HB-26的成熟GH30木聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21是具有聚组氨酸尾的赛威蛋白酶(Savinase)分泌信号肽的氨基酸序列。
定义
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据相同染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
动物：术语“动物”是指除人以外的所有动物。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如以下动物，如绵羊、山羊、牛(例如，肉牛、奶牛和牛犊)、鹿、yank、骆驼、美洲驼和袋鼠。非反刍动物包括单胃动物，例如猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
动物饲料：术语“动物饲料”是指适合于或旨在用于由动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。单胃动物的动物饲料典型地包含浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(如在预混物中)，而反刍动物的动物饲料通常包含饲草(包括粗粮和青贮)，并且可以进一步包含浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(如在预混物中)。
含阿拉伯糖基木聚糖的材料：术语“含阿拉伯糖基木聚糖的材料”意指含有阿拉伯糖基木聚糖的任何材料。阿拉伯糖基木聚糖是在植物(包括木头和谷物)的初生和次生细胞壁两者中发现的半纤维素，该阿拉伯糖基木聚糖由两种戊糖、阿拉伯糖和木糖的共聚物组成。该阿拉伯糖基木聚糖链包含大量的1,4-连接的木糖单元。许多木糖单元被2-、3-或2,3-取代的阿拉伯糖残基取代。
含阿拉伯糖基木聚糖的材料的实例是饲草、粗粮、种子和谷物(例如来自玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦的整体或通过粉碎、研磨等制备的)、树木或硬木(如杨树、柳树、桉树、棕榈、枫树、桦树)、竹子、草本和/或木本能源作物、农业粮食和饲料作物、动物饲料产品、木薯皮、可可豆荚、甘蔗、糖用甜菜、槐豆粕、蔬菜或水果果渣、木材废料、树皮、刨花、锯末、木浆、制浆废液、废纸、纸板、建筑和拆除木材废料、工业或城市废水固体或污泥、肥料、来自酿造和/或发酵过程的副产物、湿酒糟、干酒糟、谷物渣、酒糟和甘蔗渣。
如本文所定义的饲草还包括粗粮。饲草是新鲜的植物材料，例如来自饲草植物(禾草)和其他饲草植物(海草、发芽谷物和豆科作物)或其任何组合的干草和青贮饲料。饲草植物的实例是苜蓿(紫花苜蓿)、百脉根、芸苔属植物(例如，羽衣甘蓝、油菜籽(卡诺拉(canola))、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、萝卜)、三叶草(例如，杂三叶、红三叶、地三叶、白三叶)、禾草(例如，百慕大草、雀麦、伪燕麦草、羊茅、石南草(heath grass)、草地早熟禾(meadowgrasse)、芒草、鸭茅(orchard grass)、黑麦草、柳枝稷、梯牧草(Timothy-grass))、玉米(玉蜀黍)、大麻、粟、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦和蔬菜(如甜菜)。适用于青贮的作物是普通的禾草、三叶草、紫花苜蓿、野豌豆、燕麦、黑麦和玉蜀黍。饲草进一步包括来自谷物生产的作物残余物(如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的秸秆)；来自蔬菜像甜菜缨(beet top)的残余物；来自油籽生产像来自大豆、油菜籽和其他豆科作物的茎和叶的残余物；以及来自用于动物或人消耗的谷物精制或来自燃料生产或其他行业的部分。
粗粮一般是具有高水平纤维的干植物材料，例如来自种子和谷物以及作物残余物(例如秸秆、干椰肉(copra)、稻草、谷壳、糖用甜菜废料)的纤维、麸、壳。
含阿拉伯糖基木聚糖的材料的优选来源是饲草、粗粮、种子和谷物、甘蔗、糖用甜菜和木浆。
体增重：术语“体增重”意指在给定时间段期间动物的活重的增加，例如从第1天到第21天的体重增加。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由可读框确定，该可读框以起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
饲料转化率：术语“饲料转化率”是指用来将动物的体重增加一个指定量的喂给动物的饲料量。改善的饲料转化率意指较低的饲料转化率。“较低的饲料转化率”或“改善的饲料转化率”意味着当饲料不包含所述饲料添加剂组合物时，与以将动物体重增加到相同量所需的饲料量相比，在饲料中使用饲料添加剂组合物导致需要将更少量的饲料喂给动物，以将动物的体重增加一个指定量。
饲料效率：术语“饲料效率”意指当动物在一段时间内被任意喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的体重增加量。“增加的饲料效率”意味着根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比，每单位饲料摄入的增加的增重。
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有木聚糖酶活性。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少90％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少354个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少354个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少361个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少355个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少355个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少354个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少354个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少361个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少352个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少352个氨基酸、SEQID NO:16的至少360个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少354个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少354个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少361个氨基酸。
在另一方面，该片段包含成熟多肽的至少92％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少369个氨基酸、SEQ IDNO:6的至少363个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少363个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少369个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少360个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少360个氨基酸、SEQ ID NO:16的至少368个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少362个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少369个氨基酸。
在另一方面，该片段包含成熟多肽的至少94％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少377个氨基酸、SEQ IDNO:6的至少371个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少371个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少377个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少368个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少368个氨基酸、SEQ ID NO:16的至少376个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少370个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少370个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少377个氨基酸。
在另一方面，该片段包含成熟多肽的至少96％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少385个氨基酸、SEQ IDNO:6的至少379个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少379个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少385个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少376个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少376个氨基酸、SEQ ID NO:16的至少384个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少378个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少378个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少385个氨基酸。
在另一方面，该片段包含成熟多肽的至少98％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少393个氨基酸、SEQ IDNO:6的至少387个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少387个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少394个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少393个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少384个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少384个氨基酸、SEQ ID NO:16的至少392个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少386个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少386个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少393个氨基酸。
在另一方面，该片段包含成熟多肽的至少99％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少390个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少390个氨基酸、SEQ ID NO:4的至少397个氨基酸、SEQ IDNO:6的至少391个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少391个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少398个氨基酸、SEQ ID NO:10的至少390个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少390个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少397个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少388个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少388个氨基酸、SEQ ID NO:16的至少396个氨基酸、SEQ ID NO:18的至少390个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少390个氨基酸或SEQ ID NO:20的至少397个氨基酸。
高度支链化的木聚糖：术语“高度支链化的木聚糖”意指在阿拉伯糖基木聚糖主链中超过50％的木糖单元是被取代的。这优选地从如在Huismann等人(CarbohydratePolymers[碳水化合物聚合物],2000,42:269-279)中进行的连锁分析来计算。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的一种物质。分离的物质的非限制性实例包括：(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至394，并且SEQ ID NO:2的氨基酸-28至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至394。在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:4的氨基酸1至402。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至395，并且SEQ ID NO:6的氨基酸-25至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:7的氨基酸1至395。在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至403。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:10的氨基酸1至394，并且SEQ ID NO:10的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至394。在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:12的氨基酸1至402。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至392，并且SEQ ID NO:14的氨基酸-31至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:15的氨基酸1至392。在一方面，成熟多肽是SEQ ID NO:16的氨基酸1至400。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:18的氨基酸1至394，并且SEQ ID NO:18的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:19的氨基酸1至394。在一方面，成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
在本领域已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。本领域还已知，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有木聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸85至1266，并且SEQ ID NO:1的核苷酸1至84编码信号肽。
在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:5的核苷酸76至1260，并且SEQ ID NO:5的核苷酸1至75编码信号肽。
在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:9的核苷酸88至1269，并且SEQ ID NO:9的核苷酸1至87编码信号肽。
在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:13的核苷酸94至1269，并且SEQ IDNO:13的核苷酸1至93编码信号肽。
在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:17的核苷酸88至1269，并且SEQ IDNO:17的核苷酸1至87编码信号肽。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
营养素消化率：术语“营养素消化率”意指从胃肠道或胃肠道的指定区段(例如小肠)处消失的营养素的分数。营养素消化率可以测量为给予受试者的营养素与受试者粪便中所排出来的营养素之间的差值、或给予受试者的营养素与保留在胃肠道指定区段(例如回肠)上的消化物中的营养素之间的差值。
可以通过以下方式测量如本文所用的营养素消化率：在一段时间内营养素的摄入与通过排泄物的总收集获得的排泄的营养素之间的差值；或者使用惰性标志，该惰性标志不被动物吸收并且允许研究人员计算在整个胃肠道或胃肠道的区段中消失的营养素的量。这种惰性标志可以是二氧化钛、氧化铬或酸不溶性灰分。消化率可以表示为营养素在饲料中的百分比，或表示为可消化的营养素的质量单位/饲料中的营养素的质量单位。如本文所用的营养素消化率涵盖淀粉消化率、脂肪消化率、蛋白质消化率和氨基酸消化率。
如本文所用的能量消化率意指所消耗的饲料总能量减去粪便的总能量，或所消耗的饲料总能量减去动物胃肠道指定区段(例如回肠)上的剩余消化物的总能量。如本文所用的代谢能是指表观代谢能，并且意指所消耗的饲料总能量减去粪便、尿和消化的气体产物中包含的总能量。能量消化率和代谢能可以测量为总能量的摄入与粪便中排泄的或胃肠道指定区段中存在的消化物中的总能量之间的差值，其使用与测量营养素消化率相同的方法，针对氮排泄进行适当校正以计算饲料的代谢能。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下的构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列的适当位置处，使得该控制序列引导该编码序列的表达。
序列一致性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选地3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性程度。使用6.1.0版。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且如下计算：
(一致的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件]，Rice等人,2000，同上)(优选3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性程度。使用6.1.0版。所用的可选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)替代矩阵。Needle标注的“最长一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且如下计算：
(一致的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对长度-比对中的空位总数)
严格条件：不同的严格性条件定义如下。
术语“非常低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用1.4X SSC、0.2％SDS，在55℃洗涤三次，每次15分钟。
术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12小时至24小时。运载体材料最终使用1.4X SSC、0.2％SDS，在60℃洗涤三次，每次15分钟。
术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用1.4X SSC、0.2％SDS，在65℃洗涤三次，每次15分钟。
术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用0.7X SSC、0.2％SDS，在65℃洗涤三次，每次15分钟。
术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用0.7X SSC、0.2％SDS，在70℃洗涤三次，每次15分钟。
术语“非常高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用0.7X SSC、0.2％SDS，在75℃洗涤三次，每次15分钟。
子序列：术语“子序列”意指具有从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的一个或多个(例如，若干个)核苷酸的多核苷酸；其中该子序列编码具有木聚糖酶活性的片段。
基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％和至多0.5％的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。例如，这可以通过采用熟知的重组方法或采用经典的纯化方法制备多肽来实现。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(若干个)位置处包含改变(即，一个或多个(若干个)氨基酸残基的取代、插入和/或缺失)的具有木聚糖酶活性的多肽。取代意指将占据一个位置的氨基酸用不同的氨基酸替换；缺失意指去除占据一个位置的氨基酸；并且插入意指邻近占据某一位置的氨基酸添加1-3个氨基酸。
木聚糖酶：术语“木聚糖酶”是指葡糖醛酸阿拉伯糖基木聚糖内切-1,4-β-木聚糖酶(E.C.3.2.1.136)，其催化一些葡糖醛酸阿拉伯糖基木聚糖中1,4-β-D-木糖链的内切水解。木聚糖酶活性可以在37℃、在0.01％ X-100和200mM磷酸钠(pH 6)中用0.2％AZCL-葡糖醛酸木聚糖作为底物来确定。将一个单位的木聚糖酶活性定义为在37℃、pH 6，在200mM磷酸钠(pH 6)中从作为底物的0.2％AZCL-葡糖醛酸木聚糖每分钟产生1.0μmole的天青蛋白。
具体实施方式
诸位发明人已经发现，来自糖苷水解酶家族30(本文中被称为GH30)的某些木聚糖酶出人意料地擅长降解于植物基材料(例如来自黍亚科)中发现的位阻阿拉伯糖基木聚糖的木糖主链，从而溶解增加量的阿拉伯糖基木聚糖，其如阿拉伯糖和木糖所测量的。增加的降解可以为使用植物基材料(例如来自黍亚科(如玉米或高粱))的许多工业带来优势。
具有木聚糖酶活性的多肽
在第一方面，本发明涉及具有木聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少85％(例如，至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％)的序列一致性的多肽。在一个实施例中，本发明涉及具有木聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少95％的序列一致性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:14的成熟多肽的至少80％(例如至少90％、至少95％或至少100％)的木聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37,38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在第一方面的延续中，本发明进一步涉及与SEQ ID NO:15具有至少85％的序列一致性的多肽，这些多肽具有木聚糖酶活性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少86％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少87％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少88％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ IDNO:15具有至少89％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少90％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少91％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少92％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少93％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少94％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少95％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少96％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98％的序列一致性。在实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99％的序列一致性。
在一个实施例中，本发明涉及具有木聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少85％序列一致性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少80％(例如至少90％、至少95％或至少100％)的木聚糖酶活性。在一个实施例中，本发明涉及具有木聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少90％序列一致性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少80％(例如至少90％、至少95％或至少100％)的木聚糖酶活性。在一个实施例中，本发明涉及具有木聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少95％序列一致性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:15的至少80％(例如至少90％、至少95％或至少100％)的木聚糖酶活性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:15相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个氨基酸，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:15的多肽的至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％的活性。
在一个实施例中，该多肽优选包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，如SEQ ID NO:16；或者是其片段，该片段具有α-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:15的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至392或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第一方面的延续中，本发明涉及具有木聚糖酶活性的多肽，该多肽由多核苷酸编码，该多核苷酸在非常高严格条件下，与(i)SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长补体杂交(Sambrook等人,1989,Molecular Cloning,A Laboratory Manual[分子克隆，实验室手册],第2版,Cold Spring Harbor[冷泉港],New York[纽约])。
在第一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有木聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少985％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性。
在第一方面的延续中，本发明涉及具有木聚糖酶活性的SEQ ID NO:15的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:15中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在实施例中，该变体具有SEQ ID NO:15的多肽的至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少100％的活性。
这些氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，例如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。通常不改变比活性的氨基酸取代在本领域是已知的，并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979，于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],New York[纽约]中进行了描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。
可以根据本领域已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的活性进行测试以鉴定对于该分子的阿拉伯呋喃糖苷酶活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625中披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可为融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一个多肽在本发明的多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一种或多种相同的启动子和终止子的控制之下。还可使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可以进一步包含两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995，Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins[蛋白质]；Structure,Function,and Genetics[结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
具有木聚糖酶活性的多肽的来源
本发明的具有木聚糖酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面，获得自给定来源的多肽被分泌到细胞外。
该多肽可以是细菌多肽。例如，该多肽可以是革兰氏阳性细菌多肽，如具有木聚糖酶活性的芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳酸杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属、链球菌属、或链霉菌属多肽。在一个实施例中，该多肽来自于芽孢杆菌纲的细菌，例如来自芽孢杆菌目，或来自类芽胞杆菌(Paenibacillaceae)科，或来自类芽孢杆菌(Paenibacillus)属，或来自饲料类芽孢杆菌物种。
应理解的是对于前述物种，本发明涵盖完全阶段(perfect state)和不完全阶段(imperfect state)两者，和其他分类学的等效物，例如无性型，而与它们已知的物种名称无关。本领域技术人员将容易地识别适当等效物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center,NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员所知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989，同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的分离的多核苷酸。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],AcademicPress[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以克隆自类芽孢杆菌或金黄杆菌的菌株或相关生物，并且因此，例如可以是该多核苷酸多肽编码区的等位基因变体或物种变体。
编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，其包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，该一个或多个控制序列指导该编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子含有转录控制序列，其介导该多肽的表达。启动子可以在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以是从编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。另外的启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中，用于指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下酶的基因获得的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延长因子，以及NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导序列已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导序列已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子描述于美国专利号6,011,147中。
在酵母宿主中，从以下酶的基因获得有用的启动子：酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1，ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接到编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从针对以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
用于酵母宿主细胞的优选的终止子从以下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人,1992,同上描述。
该控制序列还可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区域，它增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区域的实例从以下获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导子，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的合适的前导序列从以下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列也可以是多聚腺苷化序列，一种与多核苷酸3’-末端可操作地连接并在转录时由宿主细胞识别为向转录的mRNA添加聚腺苷酸残基的信号序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何聚腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选聚腺苷酸化序列从以下酶的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列也可为编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’-端可固有地含有在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5'-端可含有对于编码序列为外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837生麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号序列由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人,1992,同上描述。
控制序列也可以是编码位于多肽N-末端处的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列两者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可为希望的是添加调节序列，该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac以及trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是那些允许基因扩增的序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体，其可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，这样使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线性或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标志。选择性标志是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标志的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标志。酵母宿主细胞的合适的标志包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞中的选择性标志包括但不限于：adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、以及其等效物。优选地用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。优选地用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标志可以是如描述于WO 2010/039889中的双选择性标志系统。在一方面，双选择性标志是hph-tk双选择性标志系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，该核酸与对应的靶序列具有高度序列一致性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体还可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点、以及允许在芽孢杆菌中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标志基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标志基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人，1989，同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，其包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
该宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单孢菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌、化脓性链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见，例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见，例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见，例如Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)或转导(参见例如，Burke等人，2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞可以通过以下来实现：例如天然感受态(natural competence)(参见，例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见，例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见，例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见，例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
该宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人所定义的，在：Ainsworth andBisby’s Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby的真菌大词典],第8版,1995,CABInternational[国际CAB],University Press[大学出版社],Cambridge[剑桥],英国)。
真菌宿主细胞可为酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编，Soc.App.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9]，1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995,同上)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌属(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属(Piromyces)、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporiuminops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametesversicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
真菌细胞可以通过以下过程转化，该过程涉及原生质体形成、原生质体的转化、以及以本身已知的方式的细胞壁的再生。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适的程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988，Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的合适的方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.[学术出版社有限公司],纽约；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。在一方面，该细胞是饲料类芽孢杆菌细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在合适于使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在合适的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于这些多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收多肽。在一方面，回收包含多肽的发酵液。
可通过本领域已知的多种方法纯化多肽以获得基本上纯的多肽，该方法包括但不限于层析(例如，离子交换、亲和、疏水、层析聚焦和大小排阻)、电泳方法(例如，制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见，例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)。
在替代性方面，不回收多肽，而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作多肽的来源。
植物
本发明还涉及分离的植物，例如转基因植物、植物部分或植物细胞，其包含本发明的多肽，从而以可回收的量表达和产生多肽或结构域。可以从该植物或植物部分回收该多肽或结构域。可替代地，含有该多肽或结构域的植物或植物部分可以按原样用于改善食品或饲料的质量，例如改善营养价值、可口性及流变学特性，或破坏抗营养因素。
转基因植物可以是双子叶的(双子叶植物)或单子叶的(单子叶植物)。单子叶植物的实例是草，如草地早熟禾(蓝草，早熟禾属)；饲草，如羊茅属(Festuca)、黑麦草属(Lolium)；温带草，如翦股颖属(Agrostis)；以及谷类作物，例如小麦、燕麦、黑麦、大麦、稻、高粱和玉蜀黍(玉米)。
双子叶植物的实例是烟草、豆科作物(如羽扇豆、马铃薯、糖用甜菜、豌豆、菜豆和大豆)以及十字花科植物(十字花科)(如花椰菜、油菜籽和紧密相关的模式生物体拟南芥)。
植物部分的实例是茎、愈伤组织、叶、根、果实、种子和块茎以及包含这些部分的独立组织，例如表皮、叶肉、薄壁组织、维管组织、分生组织。
植物细胞和特定的植物细胞区室(如叶绿体、质外体、线粒体、液泡、过氧化物酶体和细胞质)也被认为是植物部分。
同样包括于本发明范围内的是此类植物、植物部分以及植物细胞的后代。
可以根据本领域已知方法构建表达该多肽或结构域的转基因植物或植物细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽或结构域的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽或结构域的条件下培养转基因植物或植物细胞，该转基因植物或植物细胞包含编码该多肽或结构域的多核苷酸；和(b)回收该多肽或结构域。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，该组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文所用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在具体实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐，或前述中的两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐，或前述中的两种或更多种的混合物。
在一方面，该组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)在允许蛋白质合成的碳限制条件下孵育生长到饱和之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以除去不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过描述于WO 90/15861或WO 2010/096673中的方法来产生。
酶组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的组合物。优选地，这些组合物富含本发明的多肽。术语“富集”表示组合物的木聚糖酶活性已增加，例如富集因子为至少1.1，如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少3.0、至少4.0、至少5.0、至少10。
在实施例中，该组合物包含本发明的多肽，和一种或多种如下所述的配制剂。
组合物可进一步包含多种酶活性，如一种或多种(例如：若干种)选自下组的酶，该组由以下组成：植酸酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
组合物可以进一步包含一种或多种微生物。在实施例中，该微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属物种、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、丙酸杆菌属物种和链球菌属或其任何组合。
在实施例中，该组合物包含一种或多种如本文所披露的配制剂，优选选自如下列表的一种或多种化合物，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
在实施例中，组合物包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：维生素、矿物质和氨基酸。
在实施例中，组合物包含来自如本文中所披露的黍亚科的植物基材料，优选地为玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。
配制品
本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该配制剂可以包含多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是液体组合物，其包含本发明的多肽和选自如下列表的一种或多种配制剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇。该液体配制品可以喷洒在已经历颗粒化的饲料上，或可以施加至供给动物的饮用水中。
针对固体配制品，该配制品可以例如作为颗粒、喷雾干粉或团聚物(例如如在WO2000/70034中所披露)。配制剂可以包含盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)。
在一个实施例中，该组合物是固体组合物，例如喷雾干燥组合物，该固体组合物包括本发明的木聚糖酶和选自如下列表的一种或多种配制剂，该列表由以下组成：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素。在优选的实施例中，该配制剂选自一种或多种以下化合物：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。
本发明还涉及包含本发明的木聚糖酶的酶颗粒/粒子任选地与一种或多种另外的酶的组合。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。
典型地，该颗粒/粒子的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；Particle size enlargement[粒度增大]C.E.Capes著；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制品技术，例如：
a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶的颗粒材料；
b)层状产品，其中酶作为层包衣在预形成的惰性核心粒子周围，其中包含酶的溶液被雾化(典型地在流化床装置中)，其中预形成的核心粒子被流化，并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有所希望的尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有所希望的尺寸的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中；
c)吸收的核心粒子，其中不是包衣该酶作为核心周围的层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这种方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或颗粒化的(pelletized)产品，其中将含酶的糊料压成丸粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊料中的热发生，这对酶是有害的；
e)粒化(prilled)的产品，其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献；
f)混合造粒产品，其中将液体施加至例如常用粒化组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或两者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并附聚，并且粒子将构建，形成包含酶的微粒。这种方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中，将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的微粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-微粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将研磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])；
h)流化床造粒，其涉及将颗粒悬浮于空气流中并经由喷嘴喷洒液体到流化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒；
i)这些核心可经受干燥，如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选地含有0.1％-10％w/w的水。
该核心可以包括另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包括粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
该核心典型地作为均匀的共混物可以包括多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
在一个实施例中，该核心包含选自下组的材料，该组由以下组成：盐(如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及黏土矿物质(也称作含水层状硅酸铝)。在一个实施例中，该核心包含黏土矿物质，如高岭石或高岭土。
该核心可以包括惰性粒子，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm，具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以被至少一个包衣包围，例如以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。任选的一个或多个包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣或其他合适的包衣材料。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选地是至少0.1μm厚，具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施例中，该包衣的厚度低于100μm，如低于60μm或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封或封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步含有本领域已知的其他材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60％的盐，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm，如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、山梨酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体地，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃具有超过60％的恒定湿度，具体地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如WO1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO 2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO 2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO 2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719中所述或者是如WO 2001/00042中所述的聚合物包衣。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。
该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地，作为盐溶液施加该盐，例如使用流化床。
蜡包衣可以包含按重量计至少60％的蜡，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
蜡的具体实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物脂油如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。
该颗粒可以包含核心(其包含本发明的木聚糖酶)、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO 1997/23606和WO 2016/149636中。
可以产生非粉尘微粒，例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露，并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化的壬基酚；其中的醇含有从12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化的脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
该微粒可以进一步包含一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于更多颗粒中，确保酶的更均匀分布，并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共微粒的方法披露于ip.com披露内容IPCOM000200739D中。
通过使用共微粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
因此，在另外的方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：
(a)包含根据本发明的木聚糖酶的核心，以及
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含盐包衣，然后是本文所述的蜡包衣。
动物饲料添加剂
本发明还涉及包含本发明一种或多种木聚糖酶的动物饲料组合物和动物饲料添加剂。在实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含配制剂和本发明的一种或多种木聚糖酶。在另外的实施例中，该配制剂包含一种或多种以下化合物：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素。
因此，本发明进一步涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种维生素的动物饲料添加剂，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种氨基酸和/或一种或多种其他饲料成分。在实施例中，具有木聚糖酶活性的多肽是颗粒形式。在优选的实施例中，该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
在实施例中，该动物饲料添加剂中酶的量为按组合物重量计0.001％至10％。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂，优选如上文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素，优选如下文所述。
本发明进一步涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种矿物质的动物饲料添加剂，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种氨基酸和/或一种或多种其他饲料成分。在实施例中，具有木聚糖酶活性的多肽是颗粒形式。在优选的实施例中，该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
在实施例中，该动物饲料添加剂中酶的量为按组合物重量计0.001％至10％。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂，优选如上文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素，优选如下文所述。
本发明进一步涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种氨基酸的动物饲料添加剂，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种其他饲料成分。在实施例中，具有木聚糖酶活性的多肽是颗粒形式。在优选的实施例中，该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
在实施例中，该动物饲料添加剂中酶的量为按组合物重量计0.001％至10％。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂，优选如上文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素，优选如下文所述。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
动物饲料
本发明还涉及包含本发明的一种或多种木聚糖酶的动物饲料组合物。因此，本发明涉及包含如本文所述的颗粒和植物基材料的动物饲料。本发明还涉及包含本文所述的动物饲料添加剂和植物基材料的动物饲料。
因此，本发明涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和植物基材料的动物饲料，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
在另外的方面，本发明涉及包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和植物基材料的颗粒化动物饲料，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，该植物基材料来自黍亚科。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
动物饲料组合物或饮食具有相对较高的蛋白质含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外，此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有的粗蛋白含量为50-800g/kg，此外还包含至少一种本文所要求的木聚糖酶。
此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中，本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量；和/或0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275的表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任一个内。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)x 6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)确定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],Washington DC[华盛顿特区])。
可代谢能量可基于如下进行计算：NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求],第九次再版1988,subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council.[国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会]National Academy Press[美国国家科学院出版社],Washington,D.C.[华盛顿特区],第2-6页以及European Table of Energy Values forPoultry Feed-stuffs[欧洲家禽饲养材料能量值表],Spelderholt centre for poultryresearch and extension[斯克得霍特家禽研究与推广中心],7361DA Beekbergen[贝克贝亨],荷兰.Grafisch bedrijf Ponsen和looijen bv,Wageningen[瓦格宁根].ISBN 90-71463-12-5。
根据例如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN 90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在具体实施例中，本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白，如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，典型地量为0-25％。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，典型地量为0-30％。
在仍另外的具体实施例中，本发明的动物饲料组合物含有0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％大豆粉；和/或0-25％鱼粉；和/或0-25％肉和骨粉；和/或0-20％乳清。
该动物饲料可以包含植物蛋白。在具体实施例中，这些植物蛋白的蛋白含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源，如豆科作物和谷类作物，例如来自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料，如大豆粉、羽扇豆粉、油菜籽粉及其组合。
在具体实施例中，该植物蛋白来源是来自豆科的一种或多种植物(如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中，植物蛋白来源是来自藜科的一种或多种植物，例如甜菜、糖用甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜籽和卷心菜。在另一个具体实施例中，大豆是优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷类作物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非颗粒化)或颗粒化饲料。典型地，混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如，对于粉状饲料，在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于颗粒化饲料，在饲料成分步骤前或期间还可添加该(固体或液体)木聚糖酶/酶制剂。典型地，液体木聚糖酶/酶制剂包含本发明的木聚糖酶，任选地伴随着多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇)，并且是在颗粒化步骤后添加，例如通过将该液体配制品喷涂至丸粒上。也可以将该酶掺入饲料添加剂或预混物中。
可替代地，可以通过冷冻液体酶溶液与膨胀剂(例如研磨的大豆粉)的混合物，并且然后冻干该混合物，来制备木聚糖酶。
饮食中的最终酶浓度在0.01-200mg酶蛋白/kg饮食的范围内，优选地在0.05-100mg/kg饮食之间，更优选地0.1-50mg，甚至更优选地0.2-20mg酶蛋白/kg动物饮食。
目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种给予酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10；–所有这些范围都是以mg木聚糖酶蛋白/kg饲料(ppm)。
为了确定mg木聚糖酶蛋白/kg饲料，从饲料组合物中纯化木聚糖酶，并且使用相关测定(参见木聚糖酶活性)确定经纯化的木聚糖酶的比活性。使用相同测定来确定该饲料组合物的木聚糖酶活性，并且在这两次确定的基础上计算出以mg木聚糖酶蛋白/kg饲料的剂量。
在具体实施例中，本发明的动物饲料添加剂旨在以0.01％至10.0％；更具体地为0.05％至5.0％；或0.2％至1.0％(％意指g添加剂/100g饲料)的水平包括(或规定为必须包括)在动物饮食或饲料中。具体地，对预混物也是如此。
将同样的原理应用于确定饲料添加剂中mg木聚糖酶蛋白。当然，如果样品使用了用于制备饲料添加剂或饲料的木聚糖酶，可以由此样品确定比活性(不需要从饲料组合物或添加剂中纯化木聚糖酶)。
来自黍亚科的植物基材料
在一个实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自蜀黍族(Andropogoneae)，如以下级别：须芒草属(Andropogon)或翼颖草属(Andropterum)或水蔗草属(Apluda)或楔颖草属(Apocopis)或荩草属(Arthraxon)或孔颖草属(Bothriochloa)或细柄草属(Capillipedium)或葫芦草属(Chionachne)或金须草属(Chrysopogon)或空轴茅属(Coelorachis)或薏苡属(Coix)或香茅属(Cymbopogon)或双花草属(Dichanthium)或双黄茅属(Diheteropogon)或觿茅属(Dimeria)或香鳞茅属(Elionurus)或娱蚣草属(Eremochloa)或优解草属(Euclasta)或金茅属(Eulalia)或吉曼草属(Germainia)或牛鞭草属(Hemarthria)或异蛇尾草属(Heteropholis)或黄茅属(Heteropogon)或苞芽属(Hyparrhenia)或金苞茅属(Hyperthelia)或白茅属(Imperata)或鸭嘴草属(Ischaemum)或合穗茅属(Iseilema)或泰蔗草属(Kerriochloa)或莠竹属(Microstegium)或芒羽藓属(Miscanthidium)或芒属或毛俭草属(Mnesithea)或蛇尾草属(Ophiuros)或偏基草属(Oxyrhachis)或束尾草属(Phacelurus)或蜥尾禾属(Pholiurus)或金丝草属(Pogonatherum)或多裔草属(Polytoca)或单序草属(Polytrias)或假金发草属(Pseudopogonatherum)或假高粱属(Pseudosorghum)或皱颖草属(Rhytachne)或筒轴茅属(Rottboellia)或甘蔗属(Saccharum)(例如甘蔗)或针粱草属(Sarga)或裂稃草属(Schizachyrium)或沟颖草属(Sehima)或假高粱属(Sorghastrum)或高粱属(Sorghum)或大油芒属(Spodiopogon)或假蛇尾草属(Thaumastochloa)或疣颖草属(Thelepogon)或菅草属(Themeda)或皱芒草属(Trachypogon)或荻属(Triarrhena)或摩擦草属(Tripsacum)或尾鳞草属(Urelytrum)或香根草属(Vetiveria)或河马草属(Vossia)或旱米草属(Xerochloa)或玉蜀黍属(Zea)。
在优选的实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自玉蜀黍属级别，如以下物种：二倍体多年生类玉米(Zea diploperennis)、繁茂类玉米(Zea luxurians)、玉蜀黍(Zeamays)、尼加拉瓜类玉米(Zea nicaraguensis)或四倍体多年生类玉米(Zea perennis)。
在优选的实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自高粱属级别，如以下物种：阔叶高粱(Sorghum amplum)、狭叶高粱(Sorghum angustum)、澳大利亚高粱(Sorghumaustraliense)、双色高粱(Sorghum bicolor)、短柄高粱(Sorghum brachypodum)、球茎高粱(Sorghum bulbosum)、龙骨状高粱(Sorghum ecarinatum)、外鞘柄高粱(Sorghumexstans)、格兰德高粱(Sorghum grande)、假高粱(Sorghum halepense)、高粱杂种栽培品种、中间高粱(Sorghuminterjectum)、非可迁黍(Sorghum intrans)、疏花高粱(Sorghumlaxiflorum)、利奥克拉德高粱(Sorghum leiocladum)、巨籽高粱(Sorghummacrospermum)、麦特粒高粱(Sorghum matarankense)、光高粱(Sorghum nitidum)、羽状高粱(Sorghum plumosum)、拟高梁(Sorghum propinquum)、紫绢毛高粱(Sorghumpurpureosericeum)、针茅高粱(Sorghum stipoideum)、苏丹草(Sorghum sudanense)、帝汶高粱(Sorghum timorense)、多色高粱(Sorghum versicolor)、高粱属物种(Sorghum sp.)‘西尔克’(‘Silk’)、或如WO 2007/002267中所定义的高粱属物种。
在另一个实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自黍族，如以下级别：缠芒草属(Acritochaete)、凤头黍属(Acroceras)、Alexfloydia、毛颖草属(Alloteropsis)、姬苇属(Amphicarpum)、钩穗草属(Ancistrachne)、瓶刷草属(Anthephora)、臂形草属(Brachiaria)(例如臂形草)、纤隐草属(Calyptochloa)、蒺藜草属(Cenchrus)、髯柄草属(Chaetium)、鬃禾属(Chaetopoa)、鬃针茅属(Chamaeraphis)、绿兜草属(Chlorocalymma)、蔺隐草属(Cleistochloa)、拱稃草属(Cyphochlaena)、弓果黍属(Cyrtococcum)、二型花属(Dichanthelium)、马唐属(Digitaria)、假狗尾草属(Dissochondrus)、稗草属(Echinochloa)、内毛草属(Entolasia)、野黍属(Eriochloa)、同鳞虎属(Homopholis)、水鞭草属(Hygrochloa)、林行黍属(Hylebates)、火鸡草属(Ixophorus)、小芦竹属(Lasiacis)、玉毛虫属(Leucophrys)、泥稗属(Louisiella)、长颖马唐属(Megaloprotachne)、大序黍属(Megathyrsus)、糖蜜草属(Melinis)、新小竹属(Microcalamus)、Moorochloa、脉颖草属(Neurachne)、水斗草属(Odontelytrum)、球米草属(Oplismenus)、露籽草属(Ottochloa)、黍属(Panicum)、秃刷草属(Paractaenum)、异脉颖草属(Paraneurachne)、隐鬃草属(Paratheria)、Parodiophyllochloa、类雀稗属(Paspalidium)、狼尾草属(Pennisetum)、鬃刷草属(Plagiosetum)、灿穗黍属(Poecilostachys)、钩毛草属(Pseudechinolaena)、枝狼草属(Pseudochaetochloa)、伪针茅属(Pseudoraphis)、Rupichloa、囊颖草属(Sacciolepis)、盾颖黍属(Scutachne)、狗尾草属(Setaria)、坚狗尾草属(Setariopsis)、胁穗草属(Snowdenia)、滨刺草属(Spinifex)、钝叶草属(Stenotaphrum)、芒马唐属(Stereochlaena)、交雀草属(Thrasya)、萏雷草属(Thuarea)、窗颖草属(Thyridolepis)、贫地黍属(Tricholaena)、未归类的黍、节鞭草属(Uranthoecium)、尾稃草属(Urochloa)(例如臂形草)、Walwhalleya、丝梗黍属(Whiteochloa)、柱梗黍属(Yakirra)、弱臂草属(Yvesia)、Zuloagaea或沙芜草属(Zygochloa)。
在优选的实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自黍属级别，如以下物种：紫茎黍(Panicum adenophorum)、尖头黍(Panicum aff.Aquaticum)JKT-2012、苦黍(Panicumamarum)、蓝黍(Panicum antidotale)、粉绿黍(Panicum aquaticum)、天栌黍(Panicumarctum)、筒节黍(Panicum arundinariae)、暗红黍(Panicum atrosanguineum)、奥里科姆黍(Panicum auricomum)、折萼黍(Panicum auritum)、巴氏黍(Panicum bartlettii)、伯氏黍(Panicum bergii)、糠稷(Panicum bisulcatum)、勃氏黍(Panicum boliviense)、布拉柴维尔黍(Panicum brazzavillense)、短叶黍(Panicum brevifolium)、卡瓜苏黍(Panicumcaaguazuense)、坎佩斯特雷黍(Panicum campestre)、毛绒稷(Panicum capillare)、卡宴恩瑟黍(Panicum cayennense)、卡约恩瑟黍(Panicum cayoense)、塞尔维黍(Panicumcervicatum)、绿亮状黍(Panicum chloroleucum)、克氏黍(Panicum claytonii)、着色黍(Panicum coloratum)、暗蓝黍(Panicum cyanescens)、多籽黍(Panicum decompositum)、焦色黍(Panicum deustum)、洋野黍(Panicum dichotomiflorum)、细叶黍(Panicumdinklagei)、黄藓黍(Panicum distichophyllum)、藤黍(Panicum dregeanum)、象脚黍(Panicum elephantipes)、傅氏黍(Panicum fauriei)、柔性黍(Panicum flexile)、弗吕科拉黍(Panicum fluviicola)、铺地黍(Panicum gouinii)、细长黍(Panicumgracilicaule)、广东黍(Panicum granuliferum)、危地马拉黍(Panicum guatemalense)、霍氏黍(Panicum hallii)、杂多穗黍(Panicum heterostachyum)、腺毛茎黍(Panicumhirticaule)、恶味黍(Panicum hirtum)、雨林黍(Panicum hylaeicum)、背倚黍(Panicumincumbens)、致病黍(Panicum infestum)、意大利黍(Panicum italicum)、光泽黍(Panicum laetum)、光滑节点黍(Panicum laevinode)、绵柄黍(Panicum lanipes)、拉科尼亚黍(Panicum larcomianum)、长梗黍(Panicum longipedicellatum)、町田黍(Panicummachrisianum)、软毛黍(Panicum malacotrichum)、珠黍(Panicum margaritiferum)、硬叶黍(Panicum micranthum)、猪粟(Panicum miliaceum)、多花黍(Panicum milioides)、粒结节黍(Panicum millegrana)、神秘黍(Panicum mystasipum)、纳塔莱黍(Panicumnatalense)、霞石黍(Panicum nephelophilum)、多脉黍(Panicum nervosum)、心叶稷(Panicum notatum)、奥格罗黍(Panicum olyroides)、水生黍(Panicum paludosum)、扩展黍(Panicum pansum)、周毛黍(Panicum pantrichum)、小叶黍(Panicum parvifolium)、铃珑黍(Panicum parviglume)、佩氏黍(Panicum pedersenii)、潘氏黍(Panicumpenicillatu)、彼氏黍(Panicum petersonii)、苇状黍(Panicum phragmitoides)、皮奥伊州黍(Panicum piauiense)、疏毛黍(Panicum pilosum)、丰饶黍(Panicum pleianthum)、多毛黍(Panicum polycomum)、黄精黍(Panicum polygonatum)、柳叶箬黍(Panicumpseudisachne)、多疣黍(Panicum pygmaeum)、梨果黍(Panicum pyrularium)、昆士兰单黍(Panicum queenslandicum)、葡萄状黍(Panicum racemosum)、铺地黍(Panicum repens)、桧藓稷(Panicum rhizogonum)、微硬毛黍(Panicum rigidulum)、紫萼黍(Panicumrivale)、野稷(Panicum rude)、汝孜黍(Panicum rudgei)、欣氏黍(Panicum schinzii)、施拉克黍(Panicum schwackeanum)、塞氏黍(Panicum sellowii)、半裸黍(Panicumseminudum)、毛梗黍(Panicum stapfianum)、窄纹黍(Panicum stenodes)、草黄黍(Panicumstramineum)、亚亮黍(Panicum subalbidum)、亚提拉米苏黍(Panicum subtiramulosum)、细柄黍(Panicum sumatrense)、柔叶黍(Panicum tenellum)、细叶黍(Panicumtenuifolium)、长毛黍(Panicum trichanthum)、毛鹧鸪黍(Panicum trichidiachne)、毛样黍(Panicum trichoides)、毛腺状黍(Panicum tricholaenoides)、阔叶黍(Panicumtuerckheimii)、圆锥黍(Panicum turgidum)、长尖黍(Panicum urvilleanum)、强壮黍(Panicum validum)、委内瑞拉黍(Panicum venezuelae)、鲜绿黍(Panicum verrucosum)、柳枝稷(Panicum virgatum)、宽叶雀稗(Panicum wettsteinii)、黍属(Panicum sp.)、黍属克里斯汀(Christin)16-200、黍属ELS-2011、黍属EM389或黍属福雷斯特(Forest)761。
在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍(玉蜀黍属(zea))、玉米(玉蜀黍属)、高粱(高粱属(Sorghum))、柳枝稷(switchgrass)(柳枝稷(Panicumvirgatum))、粟(millet)(黍(Panicum miliaceum))、珍珠粟(Cenchrus violaceus，还称珍珠稷(Pennisetum glaucum))、谷子(粟(Setaria italica)，还称秫米(Panicumitalicum))，或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。
在实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自植物的种子。在优选的实施例中，来自黍亚科的植物基材料来自玉蜀黍(玉蜀黍属(zea))、玉米(玉蜀黍属)、高粱(高粱属(Sorghum))、柳枝稷(switchgrass)(柳枝稷(Panicum virgatum))、粟(millet)(黍(Panicum miliaceum))、珍珠粟(Cenchrus violaceus，还称珍珠稷(Pennisetumglaucum))、谷子(粟(Setaria italica)，还称秫米(Panicum italicum))的种子，或其中该种子已经被加工，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。
另外的酶
在另一个实施例中，本文描述的组合物任选地包括一种或多种酶。可以根据来自NC-IUBMB,1992的酶命名手册(handbook Enzyme Nomenclature from NC-IUBMB,1992)对酶进行分类，也可参见因特网上的ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是相对于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB)，学术出版社公司(Academic Press，Inc.)，1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为其提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,Nucleic Acids Res[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这种分类不反映这些酶的结构特征。
某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、溶菌酶和半乳糖苷酶)的另一种分类描述于Henrissat等人,“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in 2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495；还参见cazy.org。
因此，本发明的组合物还可以包含至少一种选自下组的其他酶，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.23)、酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.72)、α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)、纤维素酶(EC 3.2.1.4)、阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)、半乳聚糖酶(EC3.2.1.89)、α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)、β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)、三酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)、溶血磷脂酶(EC3.1.1.5)、溶菌酶(EC 3.2.1.17)、α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)(EC 3.2.1.25)、植酸酶(EC 3.1.3.8，EC 3.1.3.26，EC 3.1.3.72)、磷脂酶A1(EC3.1.1.32)、磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)、磷脂酶D(EC 3.1.4.4)、蛋白酶(EC 3.4)、支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8,EC 3.2.1.136)、β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)或其任何组合。
在具体实施例中，本发明的组合物包含半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)和β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)。
在具体实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-FeedTM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、 P、 NP和 HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、NatuphosTM(巴斯夫公司(BASF))、NatuphosTM E(巴斯夫公司(BASF))、和 Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、(浩卫制药公司(Huvepharma))、 Phytase(Aveve Biochem公司)、 XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))以及 PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中的那些。
在具体实施例中，本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括 WX(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))、 XT和Barley(AB Vista公司)、(范恩尼姆公司(Verenium))、 X(浩卫制药公司(Huvepharma))、 XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，杜邦公司(DuPont))和 XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶，杜邦公司(DuPont))、XG10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和02CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶，Aveve Biochem公司)以及Naturgrain(巴斯夫公司(BASF))。
在具体实施例中，本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括 ProAct(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))。
在具体实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括 A和 RumiStarTM(帝斯曼营养产品公司(DSMNutritional Products))。
在一个实施例中，本发明的组合物包含多组分酶产品，如 Octazyme(Framelco公司)、 G2、 VP和 MultiGrain(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))、 Excel或 Advance(安迪苏公司(Adisseo))。
摄生品
摄生品(eubiotic)是意欲在胃肠道中提供微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生品包括许多不同的饲料添加剂，如益生素、益生元、植生素(精油)和有机酸，其在下面更详细地描述。
益生素
在实施例中，该动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的益生素。在具体实施例中，该动物饲料组合物进一步包含来自以下一个或多个属的细菌：乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌或其任何组合。
在优选的实施例中，动物饲料组合物进一步包含来自以下一种或多种菌株的细菌：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌、丙酸杆菌属物种。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-501 05)、BS18(NRRLB-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRLB-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRLB-50886。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的细菌：DSM 29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。
该动物饲料组合物中每种细菌菌株的细菌计数在1x104和1x1014CFU/kg的干物质之间，优选在1x106和1x1012CFU/kg的干物质之间，并且更优选在1x107至1x1011CFU/kg的干物质之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中每种细菌菌株的细菌计数在1x108和1x1010CFU/kg的干物质之间。
该动物饲料组合物中每种细菌菌株的细菌计数在1x105和1x1015CFU/动物/天之间，优选在1x107和1x1013CFU/动物/天之间，并且更优选在1x108和1x1012CFU/动物/天之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中每种细菌菌株的细菌计数在1x109和1x1011CFU/动物/天之间。在一个实施例中，益生素的量为按组合物重量计0.001％至10％。
在另一个实施例中，该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、Alterion(安迪苏公司(Adisseo))、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPontAnimal Nutrition))、(混合酶+益生素，杜邦动物营养公司(DuPont AnimalNutrition))、和(诺雷尔/赢创公司(Norel/Evonik))以及PY1(赢创公司(Evonik))。
益生元
益生元是诱导微生物(例如，细菌和真菌)生长或活动的物质，其有助于宿主的健康。益生元典型地是不可消化的纤维化合物，其未消化地通过胃肠道的上部并刺激通过充当它们的底物而定殖大肠的有利细菌的生长或活动。通常，益生元增加胃肠道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活动。
酵母衍生物(灭活的整个酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包括甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物，并且通常衍生自酵母(酿酒酵母)的细胞壁。
在一个实施例中，益生元的量为按组合物重量计0.001％至10％。酵母产品的实例是和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand Animal Nutrition))。
植生素
植生素是一组来自草药、香料或其他植物的用作饲料添加剂的天然生长促进剂或非抗生素生长促进剂。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专门产品)制备的单一物质。
植生素的实例是迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里酚、丁香酚、间甲酚、香草醛、水杨酸酯、间苯二酚、邻甲氧基苯酚(guajacol)、姜酚、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯、柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄和姜黄提取物。
在一个实施例中，植生素的量为按组合物重量计0.001％至10％。商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))；CinergyTM、BiacidTM、ProHacidTM Classic和ProHacidTM AdvanceTM(都属于Promivi/嘉吉公司(Promivi/Cargill))和Envivo EO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))。
有机酸
有机酸(C1-C7)在自然界中作为植物或动物组织的正常成分广泛分布。它们也通过主要在大肠中的碳水化合物的微生物发酵形成。它们通常在猪和家禽生产中用作抗生素生长促进剂的替代品，因为它们对鸡的坏死性肠炎和仔猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可以作为单组分或典型地2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的实例是丙酸、甲酸、柠檬酸、乳酸、山梨酸、苹果酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、丁酸和酒石酸或其盐(典型地是钠或钾盐、如二甲酸钾或丁酸钠)。
在一个实施例中，有机酸的量为按组合物重量计0.001％至10％。商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))、 (巴斯夫公司(BASF))、正丁酸AF(OXEA公司)以及Adimix Precision(Nutriad公司)。
预混物
将如上文示例的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如家禽饲料)中在实践中是使用浓缩物或预混物进行的。预混物是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或运载体的优选均匀的混合物。预混物用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的预混物可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体施加至饲料成分或饮用水中。
氨基酸
本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。在一个实施例中，氨基酸的量为按组合物重量计0.001％至10％。
维生素和矿物质
在另一个实施例中，该动物饲料可以包括一种或多种维生素，如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该动物饲料可以任选地包括一种或多种矿物质，如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种巨量矿物质。
通常，脂溶性维生素-和水溶-性维生素、以及痕量矿物质形成了一种所谓的旨在施加至饲料中的预混物的部分，而大量矿物质通常被分开地施加至饲料中。
脂-溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E、以及维生素K，例如维生素K3。
水-溶性维生素的非限制性实例包括维生素C、维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、碘、硒和锌。
巨量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、磷、钾和钠。
在一个实施例中，维生素的量为按组合物重量计0.001％至10％。在一个实施例中，矿物质的量为按组合物重量计0.001％至10％。
这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需求意指应在饮食中提供指定浓度的这些组分。
在替代方案中，本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地，此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包括在本发明的添加剂内。
在仍另外的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含至少一种以下维生素，优选以提供落入下表1中所限定的范围之内(分别针对仔猪饮食和肉仔鸡饮食)的饲料中浓度。
表1：典型维生素推荐
维生素 仔猪饮食 肉仔鸡饮食
维生素A 10,000-15,000IU/kg饲料 8-12,500IU/kg饲料
维生素D3 1800-2000IU/kg饲料 3000-5000IU/kg饲料
维生素E 60-100mg/kg饲料 150-240mg/kg饲料
维生素K3 2-4mg/kg饲料 2-4mg/kg饲料
维生素B1 2-4mg/kg饲料 2-3mg/kg饲料
维生素B2 6-10mg/kg饲料 7-9mg/kg饲料
维生素B6 4-8mg/kg饲料 3-6mg/kg饲料
维生素B12 0.03-0.05mg/kg饲料 0.015-0.04mg/kg饲料
烟酸(维生素B3) 30-50mg/kg饲料 50-80mg/kg饲料
泛酸 20-40mg/kg饲料 10-18mg/kg饲料
叶酸 1-2mg/kg饲料 1-2mg/kg饲料
生物素 0.15-0.4mg/kg饲料 0.15-0.3mg/kg饲料
氯化胆碱 200-400mg/kg饲料 300-600mg/kg饲料
其他饲料成分
本发明的组合物可以进一步包括着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)；活性氧产生物质、抗微生物肽和抗真菌多肽。
着色剂的实例是类胡萝卜素，如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。
芳香化合物/调味品的实例是甲氧甲酚，茴香脑，十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和单宁。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)和他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。
多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。
活性氧产生物质的实例为例如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品；以及例如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。
抗氧化剂可以用于限制可产生的活性氧物质的数量，使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。
霉菌毒素(如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素)可以在动物饲料中发现，并且可以导致消极的动物性能或疾病。可以将能够如通过霉菌毒素的失活或通过霉菌毒素的结合控制霉菌毒素水平的化合物施加至饲料中以改善这些负面影响。霉菌毒素控制化合物的实例是Vitafix Ultra(核科学公司(Nuscience))、 Secure、 BBSH、 MTV(百奥明公司(Biomin))、以及 Plus(Nutriad公司)。
改善动物性能的方法
本发明进一步涉及改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一种或多种动物给予具有木聚糖酶活性的GH30多肽和来自黍亚科的植物基材料，其中该GH30多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
来自黍亚科的植物基材料可与GH30多肽一起或分开给予。GH30多肽可在例如组合物或动物饲料添加剂中给予。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
在一个实施例中，“改善动物的性能”意指存在体增重的增加。在另一个实施例中，“改善动物的性能”意指存在改善的饲料转化率。在另外的实施例中，“改善动物的性能”意指存在增加的饲料效率。在另外的实施例中，“改善动物的性能”意指存在体增重的增加和/或改善的饲料转化率和/或增加的饲料效率。
制备动物饲料的方法
本发明进一步涉及制备动物饲料的方法，该方法包括将具有木聚糖酶活性的GH30多肽与植物基材料混合，其中该GH30多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
GH30可以是例如组合物或动物饲料添加剂的形式。在实施例中，该植物基材料来自黍亚科。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
用于改善动物饲料的营养价值的方法
术语改善动物饲料的营养价值意指改善饲料中营养素的可利用性。具体地，营养价值是指改善饲料中包含阿拉伯糖基木聚糖的部分(例如，如半纤维素)的溶解和降解，从而导致营养素从胚乳细胞中的释放增加，该胚乳具有由高度顽固性半纤维素组成的细胞壁。因此，增加的阿拉伯糖基木聚糖低聚物的释放表示细胞壁的破坏，并且结果是饲料的营养价值得到改善，导致生长速率和/或体重增加和/或饲料转化(即相对于体重增加的饲料摄取量)增加。此外，阿拉伯糖基木聚糖低聚物释放可以直接或通过后肠中的细菌发酵改善这些组分本身的利用，从而导致短链脂肪酸的产生，该短链脂肪酸可以在后肠中容易地被吸收并用于能量代谢。
因此，本发明进一步涉及用于改善包含来自黍亚科的植物基材料的动物饲料的营养价值的方法，该方法包括向饲料中添加具有木聚糖酶活性的GH30多肽，其中该GH30多肽选自下组，该组由以下组成:
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
GH30可以是例如组合物或动物饲料添加剂的形式。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
释放淀粉的方法
本发明进一步涉及从植物基材料中释放淀粉的方法，该方法包括用具有木聚糖酶活性的GH30多肽处理来自黍亚科的植物基材料，其中该GH30多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
GH30可以是例如组合物或动物饲料添加剂的形式。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
溶解木糖的方法
本发明进一步涉及从植物基材料中溶解木聚糖的方法，该方法包括用具有木聚糖酶活性的GH30多肽处理来自黍亚科的植物基材料，其中该GH30多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
GH30可以是例如组合物或动物饲料添加剂的形式。在实施例中，来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。在另外的实施例中，来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至395或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至403或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至402或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:15的氨基酸1至392或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至400或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至394或由其组成。在实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:20的氨基酸1至402或由其组成。
用途
本发明还针对用于使用具有木聚糖酶活性的多肽或其组合物(用于例如动物饲料)的方法。本发明还针对用于使用具有木聚糖酶活性的多肽或其组合物的方法，像例如以下所描述的那些。
在动物饲料中的用途
本发明还针对用于在动物饲料中使用本发明的木聚糖酶的方法。
术语动物包括所有动物。在一个实施例中，术语“动物”不包括人。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如以下动物，如绵羊、山羊和牛(例如，肉牛、奶牛和牛犊)。在具体实施例中，该动物为非反刍动物。非反刍动物包括单胃动物，例如猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；和鱼(包括但不限于，鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
在根据本发明的用途中，可在饮食之前、之后或同时给动物饲喂木聚糖酶。优选后者。
在具体实施例中，明确限定了处于往饲料中添加的木聚糖酶或当包括在饲料添加剂中时的形式的木聚糖酶。明确限定指的是如经大小排阻色谱法(参见WO 01/58275的实例12)确定的，木聚糖酶制剂至少为50％纯。在其他具体实施例中，如经此方法确定的，木聚糖酶制剂至少为60％、70％、80％、85％、88％、90％、92％、94％、或至少为95％纯。
明确限定的木聚糖酶制剂是有利的。例如，对于实质上不受其他木聚糖酶干扰或污染的木聚糖酶而言，更容易确定它在饲料中的正确地给料(dose correctly)。具体地，术语正确地给料(dose correctly)是指得到一致且恒定的结果的目标，和基于所希望的效果优化剂量的能力。
然而，为了在动物饲料中使用，木聚糖酶不必那么纯；可以例如包括其他酶，此时可将其称为木聚糖酶制品。
该木聚糖酶制剂可以(a)直接施加至饲料，或者(b)它可以用于随后施加至饲料(或者用于处理过程中)的一种或多种中间组合物，如饲料添加剂或者预混物的生产。不论是否根据上述(a)或(b)来使用，上文所述的纯度指的都是原始木聚糖酶制剂的纯度。
本发明的优选实施例
在下面的一组项目中描述了本发明的优选实施例。
1.一种颗粒，该颗粒包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种配制剂，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
2.如项目1所述的颗粒，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至394、SEQ ID NO:3的氨基酸1至394、SEQ ID NO:4的氨基酸1至402、SEQ ID NO:6的氨基酸1至395、SEQ ID NO:7的氨基酸1至395、SEQ ID NO:8的氨基酸1至403、SEQ ID NO:10的氨基酸1至394、SEQ ID NO:11的氨基酸1至394、SEQ ID NO:12的氨基酸1至402、SEQ ID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392、SEQ ID NO:16的氨基酸1至400、SEQ IDNO:18的氨基酸1至394、SEQ ID NO:19的氨基酸1至394、或SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
3.如项目1至2中任一项所述的颗粒，其中该一种或多种配制剂选自如下列表，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表。
4.如项目1至3中任一项所述的颗粒，其中该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣
5.如项目4所述的颗粒，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
6.如项目1至5中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
7.如项目6所述的颗粒，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
8.如项目1至7中任一项所述的颗粒，该颗粒进一步包含一种或多种微生物。
9.如项目8所述的颗粒，其中该一种或多种微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
10.一种具有木聚糖酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)SEQ ID NO:15的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
11.如项目10所述的多肽，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392或SEQ ID NO:16的氨基酸1至400。
12.一种组合物，该组合物包含如项目10至11中任一项所述的多肽。
13.如项目12所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
14.如项目13所述的组合物，其中该配制剂包含一种或多种以下化合物：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
15.如项目12至14中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；以及
一种或多种有机酸。
16.如项目12至15中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含植物基材料，优选来自黍亚科的植物基材料。
17.如项目16所述的组合物，其中该来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟、或其任何组合。
18.如项目16至17中任一项所述的组合物，其中该来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
19.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽或如项目12至18中任一项所述的组合物。
20.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种维生素和/或矿物质和/或维生素，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
21.如项目20所述的动物饲料添加剂，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:2的氨基酸1至394、SEQ ID NO:3的氨基酸1至394、SEQ ID NO:4的氨基酸1至402、SEQ IDNO:6的氨基酸1至395、SEQ ID NO:7的氨基酸1至395、SEQ ID NO:8的氨基酸1至403、SEQ IDNO:10的氨基酸1至394、SEQ ID NO:11的氨基酸1至394、SEQ ID NO:12的氨基酸1至402、SEQID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392、SEQ ID NO:16的氨基酸1至400、SEQ ID NO:18的氨基酸1至394、SEQ ID NO:19的氨基酸1至394、或SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
22.如项目19至21中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
23.如项目19至22中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种另外的酶。
24.如项目23的所述的动物饲料添加剂，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
25.如项目19至24中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种微生物。
26.如项目25所述的动物饲料添加剂，其中该一种或多种微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
27.一种液体配制品，该液体配制品包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种维生素和/或矿物质和/或维生素，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
28.如项目27所述的液体配制品，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至394、SEQ ID NO:3的氨基酸1至394、SEQ ID NO:4的氨基酸1至402、SEQ IDNO:6的氨基酸1至395、SEQ ID NO:7的氨基酸1至395、SEQ ID NO:8的氨基酸1至403、SEQ IDNO:10的氨基酸1至394、SEQ ID NO:11的氨基酸1至394、SEQ ID NO:12的氨基酸1至402、SEQID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392、SEQ ID NO:16的氨基酸1至400、SEQ ID NO:18的氨基酸1至394、SEQ ID NO:19的氨基酸1至394、或SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
29.如项目27至28中任一项所述的液体配制品，其中该木聚糖酶变体的給料为液体配制品的0.01％至25％w/w之间，优选0.05％至20％w/w、更优选0.2％至15％w/w、更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w木聚糖酶变体。
30.如项目27至29中任一项所述的液体配制品，其中该配制品进一步包含20％至80％w/w的多元醇。
31.如项目30所述的液体配制品，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
32.如项目27至31中任一项所述的液体配制品，其中该配制品进一步包含0.01％至2.0％w/w防腐剂。
33.如项目32所述的液体配制品，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
34.如项目27至33中任一项所述的液体配制品，该液体配制品进一步包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
35.如项目27至34中任一项所述的液体配制品，该液体配制品进一步包含一种或多种另外的酶。
36.如项目35所述的液体配制品，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、甘露聚糖酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酶、果胶裂解酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
37.如项目27至36中任一项所述的液体配制品，该液体配制品进一步包含一种或多种微生物。
38.如项目37所述的液体配制品添加剂，其中该一种或多种微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
39.一种制备动物饲料的方法，该方法包括将如项目27至38中任一项所述的液体配制品施加至植物基材料上。
40.如项目39所述的方法，其中该液体配制品经由喷雾施加。
41.如项目39至40中任一项所述的方法，其中该植物基材料包括处于其加工形式(如大豆粉、菜籽粉)的豆科作物、谷类作物、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjimbean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(Broad bean/fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(rapeseed/oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖用甜菜、菠菜、奎奴亚藜或豌豆，或者其任何组合。
42.如项目39至41中任一项所述的方法，其中该植物基材料处于颗粒化形式。
43.一种动物饲料，该动物饲料包含如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目27至38中任一项所述的液体配制品与植物基材料。
44.如项目43所述的动物饲料，其中该植物基材料来自黍亚科。
45.如项目43所述的动物饲料，其中该来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟或其任何组合。
46.如项目43至45中任一项所述的动物饲料，其中该植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
47.一种使用如项目39至42中任一项所述的方法或通过将如权利要求43至46中任一项所述的动物饲料颗粒化所制备的颗粒化动物饲料。
48.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一种或多种动物给予如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26所中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目27至38中任一项所述的液体配制品、如项目43至46中任一项所述的动物饲料或如项目47所述的颗粒化动物饲料。
49.如项目48所述的方法，其中改善动物的性能意指改善的体增重、改善的欧洲生产效率因子(EPEF)和/或改善的FCR。
50.一种制备动物饲料的方法，该方法包括将如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目27至38中任一项所述的液体配制品与植物基材料混合。
51.一种用于改善包含来自黍亚科的植物基材料的动物饲料的营养价值的方法，该方法包括向该饲料中添加如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目27至38中任一项所述的液体配制品。
52.一种从植物基材料中溶解木聚糖的方法，该方法包括用如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂、或如项目27至38中任一项所述的液体配制品处理来自黍亚科的植物基材料。
53.一种从基于植物的材料中释放淀粉的方法，该方法包括用如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂、或如项目27至38中任一项所述的液体配制品处理来自黍亚科的植物基材料。
54.如项目50至53中任一项所述的方法，其中该来自黍亚科的植物基材料是玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子，或其经加工的形式，如研磨的玉米、研磨的玉蜀黍、脱脂玉蜀黍、脱脂脱淀粉的玉蜀黍、研磨的高粱、研磨的柳枝稷、研磨的粟、研磨的谷子、研磨的珍珠粟或其任何组合。
55.如项目50至53中任一项所述的方法，其中该来自黍亚科的植物基材料是来自植物的种子部分(如胚乳和/或壳)。
56.一种编码如项目10至11中任一项所述的多肽的多核苷酸。
57.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如项目56所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
58.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如项目56所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
59.一种产生如项目10至11中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；以及
(b)回收该多肽。
60.一种产生如项目10至11中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如项目58所述的宿主细胞；以及
(b)回收该多肽。
61.一种用编码如项目10至11中任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物、植物部分或植物细胞。
62.一种全液配制品或细胞培养组合物，该全液配制品或细胞培养组合物包含如项目10至11中任一项所述的多肽。
63.如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目27至38中任一项所述的液体配制品在动物饲料中；在动物饲料添加剂中；在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；用于改善动物饲料的营养价值；用于提高动物饲料的消化率；用于改善动物中一个或多个性能参数；用于从黍亚科的植物基材料中溶解木聚糖；和/或用于从黍亚科的植物基材料中释放淀粉的用途。
64.一种颗粒化动物饲料，该颗粒化动物饲料包含如项目1至9中任一项所述的颗粒、如项目10至11中任一项所述的多肽、如项目12至18中任一项所述的组合物、如项目19至26中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目27至38中任一项所述的液体配制品与植物基材料。
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
实例
菌株
表2：菌株的分离
基因组测序，随后的读取的装配和基因发现(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
底物
脱淀粉玉蜀黍(DSM)的制备
在53℃，将107kg的研磨的玉蜀黍(<10mm)在槽中与253kg的自来水混合以制作浆料。该浆料的温度是47℃并且是pH 5.9。用1L的1N NaOH将该pH调节至6.15，并且然后将该槽加热至95℃。在52℃添加1.119kg的α-淀粉酶(诺维信公司(Novozymes A/S)，巴格斯瓦德(Bagsvaerd)，丹麦)并在95℃孵育80分钟。在该孵育结束时测量的pH是6.17。将冷自来水施加至该浆料中并对该浆料进行离心，使用Westfalia倾析器CA-225-110(4950±10rpm，流速约600l/h)将该浆料倾析3次，给出64.5kg的污泥。然后收集该污泥，进行冷冻并冻干以给出17.1kg的脱淀粉的玉蜀黍(DSM)。
脱脂脱淀粉玉蜀黍(DFDSM)的制备
将500mL丙酮施加至100克的脱淀粉的玉蜀黍中，如上所描述的进行制备。将该浆料搅拌5分钟并允许其沉降。倾析该丙酮并重复该程序2次。将该残余物空气干燥过夜以给出在室温储存的脱脂脱淀粉的玉蜀黍(DFDSM)。
实例1：表达载体
将ExpVec8用作表达载体。该载体使得可能通过同源重组将枯草芽孢杆菌染色体上的基因构建体整合入枯草芽孢杆菌宿主的果胶裂解酶基因座中。该基因由三联启动子系统表达，该启动子系统由包括稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成(如WO99/43835中所述)。ExpVec8含有赛威蛋白酶(savinase)信号肽、6个连续组氨酸残基的多组氨酸标签、赛威蛋白酶终止子、使在枯草芽孢杆菌中选择整合体成为可能的氯霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因(bla)、卡那霉素抗性基因(neo)和大肠杆菌复制起点。
实例2：表达克隆
编码GH30木聚糖酶(SEQ ID NO:1、5、9、13或17)的成熟部分作为StringsTm DNA片段订购自基因从赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)。根据制造商的说明书，将5'和3'区域与 StringsTm DNA片段融合，以允许使用IN-FUSIONTM克隆试剂盒(美国加利福尼亚州(CA)帕洛阿尔托(Palo Alto)的BD生物科学公司(BD Biosciences))直接亚克隆到ExpVec8中。作为亚克隆到ExpVec8的一部分，GH30木聚糖酶的成熟部分在N-末端与赛威蛋白酶分泌信号肽融合，该信号肽具有由6个连续组氨酸、脯氨酸和精氨酸残基组成的聚组氨酸尾(编码氨基酸序列：SEQ ID NO:21)，从而替换天然分泌信号。根据IN-FUSIONTM克隆试剂盒说明书将编码GH30木聚糖酶的成熟部分的StringsTm DNA片段克隆到ExpVec8中，并转化到大肠杆菌(Top10，英杰公司(Invitrogen))中。将含有插入的表达质粒从大肠杆菌转化体中纯化出来，并用载体引物和基因特异性引物进行测序以便确定没有PCR错误的代表性质粒表达克隆。将没有PCR错误的代表性质粒表达克隆转化到枯草芽孢杆菌中。随后将含有该整合表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆在液体培养基中在37℃进行生长5天。将培养液离心(20000xg，20min)并且将上清液小心地与沉淀物滗析分开，并用于酶的表征。
实例3：GH30木聚糖酶(SEQ ID NO:4、8、12、16和20)的纯化
将GH30木聚糖酶培养液离心(26000x g，20min)并且将上清液小心地与沉淀物滗析分开。将上清液通过Nalgene 0.2μm过滤装置过滤以便除去剩余的芽孢杆菌宿主细胞。将滤液中的pH调节至pH 8.0，并将木聚糖酶滤液施加至在20mM Tris/HCl、1mM CaCl2、pH 8.0中平衡的MEP Hypercel柱(来自颇尔公司(Pall))上。在将柱用平衡缓冲液充分洗涤后，将木聚糖酶用20mM CH3COOH/NaOH、1mM CaCl2、pH 4.5进行洗脱。分析来自柱的级分的木聚糖酶活性。合并木聚糖酶峰并且将其转移至G25交联葡聚糖柱(来自GE医疗集团(GEHealthcare))上的20mM MES/NaOH、pH 6.0中。将G25交联葡聚糖转移的酶施加至在20mMMES/NaOH、pH 6.0中平衡的SP-琼脂糖凝胶FF柱(来自GE医疗集团(GE Healthcare))上。在将柱用平衡缓冲液充分地洗涤之后，将木聚糖酶用线性NaCl梯度在平衡缓冲液与20mMMES/NaOH、5mM CaCl2、500mM NaCl、pH 6.0之间进行洗脱超过四个柱体积。分析来自柱的级分的木聚糖酶活性，并且通过SDS-PAGE进一步分析活性级分。将级分(在考马斯染色的SDS-PAGE凝胶上的仅见到一条带)合并，并且用于进一步表征。
实例4：使用阿魏酸荧光测定法测量木聚糖酶活性
使用阿魏酸荧光测定法测量GH30木聚糖酶的活性。该测定法测量来自天然存在于底物(玉米阿拉伯糖基木聚糖)中的阿魏酸残基的固有荧光。因此，当木聚糖酶水解玉米阿拉伯糖基木聚糖时，可溶性多糖被释放到溶液中，其可以使用荧光光谱法测量(激发/发射：360/460)。
方法
将1ppm木聚糖酶(相对于底物)添加至在96孔板中100mM乙酸钠(pH 5)中的3.5％(w/w)脱淀粉脱脂的研磨的玉米(相当于0.035μg/ml木聚糖酶)中。将样品在40℃放置1h，用于在搅拌(1100RPM)下进行酶法水解。水解后，将样品离心(3000RPM)并将100μl上清液转移至96孔荧光板(Nunc荧光板)中。使用Polar star酶标仪测量上清液的荧光(360/460nm)，并且结果呈现于下表3中。
表3：本发明的GH30木聚糖酶活性
木聚糖酶 供体 活性(荧光测定法)
SEQ ID NO:4 解淀粉芽孢杆菌 621
SEQ ID NO:8 地衣芽孢杆菌 536
SEQ ID NO:12 枯草芽孢杆菌 695
SEQ ID NO:16 饲料类芽孢杆菌 589
SEQ ID NO:20 解淀粉芽孢杆菌 573
结果证明，本发明的全部GH30木聚糖酶在降解发现于脱淀粉脱脂的研磨的玉米中的高度支链化的阿拉伯糖基木聚糖中有效。
实例5：动物饲料和动物饲料添加剂
颗粒
通过用填料(例如硫酸钠、硫酸镁、碳酸钙和/或纤维素)粒化本发明的木聚糖酶并且然后任选地用蜡包衣(例如氢化棕榈油)或盐包衣(例如硫酸钠和/或硫酸镁)给颗粒包衣来制备颗粒。
可替代地，通过将本发明的木聚糖酶的液体溶液吸收到惰性核心上，并且然后任选地用蜡包衣(例如氢化棕榈油)或盐包衣(例如硫酸钠和/或硫酸镁)给颗粒包衣来制备颗粒。
动物饲料添加剂
将含有0.01g至10g酶蛋白酶/千克的预混物(任选地配制为包衣颗粒)的本发明的木聚糖酶的预混物配制品添加至以下预混物中：
动物饲料
这是一个动物饲料(肉仔鸡饲料)的实例，其包含如上文描述的动物饲料添加剂：
62.55％玉蜀黍
33.8％大豆粉(50％粗蛋白)
1.0％大豆油
0.2％DL-甲硫氨酸
0.22％DCP(磷酸二钙)
0.76％CaCO3(碳酸钙)
0.32％砂
0.15％NaCl(氯化钠)
1％上述预混物
将这些成分混合，将饲料在所希望的温度下颗粒化，例如60℃、65℃、75℃、80℃、85℃、90℃或甚至95℃。
液体配制品
本发明的木聚糖酶的液体配制品包含0.1％至10w/w酶蛋白，40％-60％甘油、0.1％至0.5％苯甲酸钠和水。将液体制剂喷雾到上述颗粒化动物饲料上(在这种情况下，动物饲料添加剂不包括存在的本发明的木聚糖酶)。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等效方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，对于本领域技术人员而言本发明的各种修改将从前述的说明书变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露内容为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 具有木聚糖酶活性的多肽和多核苷酸
<130> 14238-WO-PCT
<150> EP16178680.1
<151> 2016-07-08
<160> 21
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 1269
<212> DNA
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1266)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(84)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (85)..(1266)
<400> 1
atg tcg agc gta aaa aaa aca att tgt cta tta ttg gta tgt ttc act 48
Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe Thr
-25 -20 -15
acg ctg tca gta atg tta atg ggc cca ggc gct gct gag gtc ttg gcg 96
Thr Leu Ser Val Met Leu Met Gly Pro Gly Ala Ala Glu Val Leu Ala
-10 -5 -1 1
gca aat gat gta aca gtt aac att tcc gca gaa aga caa gtg att cgc 144
Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile Arg
5 10 15 20
ggt ttt gga ggg atg aac cac ccg gct tgg gtt gga gat tta aca gct 192
Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr Ala
25 30 35
gct caa aga gaa act gct ttt ggc aat ggg cag aac cag tta ggc ttt 240
Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe
40 45 50
tcg atc tta aga att cat gta gat gaa aat aga aat aac tgg tac aaa 288
Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Lys
55 60 65
gaa gta gag act gca aag agt gcg atc aaa cat gga gca atc gtt ttc 336
Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe
70 75 80
gct tct ccc tgg aat ccg cca aac gat atg gtc gag act ttc aat cat 384
Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn His
85 90 95 100
aat ggt gac aca tca gct aag cgg ctg aga tac gat aag tac gcc gca 432
Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala
105 110 115
tac gcg cag cat ctt aac gat ttc gtt aac ttc atg aag agt aat ggt 480
Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn Gly
120 125 130
gta aat ctg tat gca att tcc atc caa aac gag cct gat tac gct cac 528
Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His
135 140 145
gag tgg acg tgg tgg acg ccg caa gaa ata ctt cgc ttt atg aga gaa 576
Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg Glu
150 155 160
aac gcc ggc tca atc aat gcc cgc gtc att gcg cct gaa tca ttt caa 624
Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln
165 170 175 180
tac ttg aag aat ttg tcg gac ccg atc ttg aac gat cct cag gct ctt 672
Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu
185 190 195
gcc aat atg gat att ctc gga acc cac ctg tac gga act cag gtc agt 720
Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser
200 205 210
caa ttc cct tat cct ctt ttt aaa caa aaa gga gcg ggg aaa gac ctt 768
Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu
215 220 225
tgg atg acg gaa gta tac tat ccg aac agt gat aac aac tcg gcg gat 816
Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp
230 235 240
cga tgg ccc gag gcc ttg gat gtt tcg caa cat att cac agt tcg atg 864
Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Ser Ser Met
245 250 255 260
gta gaa ggg gat tta caa gct tat gtt tgg tgg tac atc cga aga tca 912
Val Glu Gly Asp Leu Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser
265 270 275
tat ggt cct atg aaa gaa gat ggc acg atc agc aaa cgc ggc tac aat 960
Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn
280 285 290
atg gcc cat ttc tct aaa ttt gtg cgc cct gga tat gta agg att gat 1008
Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile Asp
295 300 305
gca acg aaa aac cct aat ccg aat gtt tac gtg tca gcc tat aaa ggt 1056
Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly
310 315 320
gac aac aaa gtc gtg att gtc gcc att aac aaa acc aat aca ggg gtc 1104
Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Thr Asn Thr Gly Val
325 330 335 340
aac caa aac ttt gtg ttg cag aac gga tct gct tcg caa gta tcc aga 1152
Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser Arg
345 350 355
tgg atc acg agc agc aac agc aat ctt cag cct gga acg gat ctc aaa 1200
Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asp Leu Lys
360 365 370
gta acg gac aat cac ttt tgg gcc cat ctg ccg gct caa agc gtg aca 1248
Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr
375 380 385
aca ttt gtt gta aag cgt taa 1269
Thr Phe Val Val Lys Arg
390
<210> 2
<211> 422
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 2
Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe Thr
-25 -20 -15
Thr Leu Ser Val Met Leu Met Gly Pro Gly Ala Ala Glu Val Leu Ala
-10 -5 -1 1
Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile Arg
5 10 15 20
Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr Ala
25 30 35
Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe
40 45 50
Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Lys
55 60 65
Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe
70 75 80
Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn His
85 90 95 100
Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala
105 110 115
Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn Gly
120 125 130
Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His
135 140 145
Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg Glu
150 155 160
Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln
165 170 175 180
Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu
185 190 195
Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser
200 205 210
Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu
215 220 225
Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp
230 235 240
Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Ser Ser Met
245 250 255 260
Val Glu Gly Asp Leu Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser
265 270 275
Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn
280 285 290
Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile Asp
295 300 305
Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly
310 315 320
Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Thr Asn Thr Gly Val
325 330 335 340
Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser Arg
345 350 355
Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asp Leu Lys
360 365 370
Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr
375 380 385
Thr Phe Val Val Lys Arg
390
<210> 3
<211> 394
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(394)
<400> 3
Glu Val Leu Ala Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg
1 5 10 15
Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly
20 25 30
Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn
35 40 45
Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn
50 55 60
Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly
65 70 75 80
Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu
85 90 95
Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp
100 105 110
Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met
115 120 125
Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro
130 135 140
Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg
145 150 155 160
Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro
165 170 175
Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp
180 185 190
Pro Gln Ala Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly
195 200 205
Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala
210 215 220
Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn
225 230 235 240
Asn Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile
245 250 255
His Ser Ser Met Val Glu Gly Asp Leu Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr
260 265 270
Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys
275 280 285
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290 295 300
Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser
305 310 315 320
Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Thr
325 330 335
Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser
340 345 350
Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly
355 360 365
Thr Asp Leu Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala
370 375 380
Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val Lys Arg
385 390
<210> 4
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N-末端His标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(402)
<400> 4
His His His His His His Pro Arg Glu Val Leu Ala Ala Asn Asp Val
1 5 10 15
Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly
20 25 30
Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg
50 55 60
Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr
65 70 75 80
Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp
85 90 95
Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr
100 105 110
Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His
115 120 125
Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr
130 135 140
Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp
145 150 155 160
Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser
165 170 175
Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn
180 185 190
Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu Ala Asn Met Asp
195 200 205
Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr
210 215 220
Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr Glu
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu
245 250 255
Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Ser Ser Met Val Glu Gly Asp
260 265 270
Leu Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met
275 280 285
Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe
290 295 300
Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn
305 310 315 320
Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val
325 330 335
Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Thr Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe
340 345 350
Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser
355 360 365
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370 375 380
His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val
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Lys Arg
<210> 5
<211> 1263
<212> DNA
<213> 地衣芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1260)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (76)..(1260)
<400> 5
gtg aaa aaa tta att tgt gta ttg ttg gca tat gta acg atg ctg tcg 48
Val Lys Lys Leu Ile Cys Val Leu Leu Ala Tyr Val Thr Met Leu Ser
-25 -20 -15 -10
ctc atg tta acc ggg cct gcc gct gct gaa gtt tca gca gcc agt gac 96
Leu Met Leu Thr Gly Pro Ala Ala Ala Glu Val Ser Ala Ala Ser Asp
-5 -1 1 5
gca aca gtt cgt cta tca gca gaa aaa caa gtg att cgc ggt ttt gga 144
Ala Thr Val Arg Leu Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly
10 15 20
ggg atg aat cac ccg gct tgg atc ggg gat ctt aca gca gct caa aga 192
Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg
25 30 35
gaa acc gct ttt ggc aat gga cag aat cag tta ggc ttt tca att tta 240
Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu
40 45 50 55
aga att cat gtt gat gaa aat aga aac aat tgg tac aga gaa gtg gag 288
Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Arg Glu Val Glu
60 65 70
acg gca aag agt gcg atc aaa cac gga gca atc gtt ttt gct tct ccc 336
Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro
75 80 85
tgg aat ccg cca agc gat atg gtt gag act ttt aat cgg aat gga gac 384
Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg Asn Gly Asp
90 95 100
aca tca gct aaa cgg ctg aga tac gat aag tac gcc gca tac gcg aag 432
Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Lys
105 110 115
cat ctt aac gac ttt gtt acc ttc atg aaa aat aac ggc gtg aat ctg 480
His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Asn Asn Gly Val Asn Leu
120 125 130 135
tat gcg att tcc gtc caa aac gag cct gat tac gca cac gac tgg aca 528
Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp Trp Thr
140 145 150
tgg tgg aca ccg caa gaa ata ctt cgc ttt atg aaa gag aac gcc ggc 576
Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Lys Glu Asn Ala Gly
155 160 165
tcg att aat gcc cgt gtc atc gcg cct gag tcg ttt caa tac tta aaa 624
Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys
170 175 180
aat ata tcg gat ccg att gtg aat gat ccg aag gcg ctt gcc aat atg 672
Asn Ile Ser Asp Pro Ile Val Asn Asp Pro Lys Ala Leu Ala Asn Met
185 190 195
gat att ctt ggc gct cat ctt tat ggt aca cag ctt aac aat ttc gct 720
Asp Ile Leu Gly Ala His Leu Tyr Gly Thr Gln Leu Asn Asn Phe Ala
200 205 210 215
tat cca ctg ttc aaa caa aaa gga gca gga aaa gat ctt tgg atg acg 768
Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr
220 225 230
gaa gta tat tat ccg aac agt gac aat cat tct gcg gac cgc tgg cct 816
Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn His Ser Ala Asp Arg Trp Pro
235 240 245
gag gca ttg gat gtt tcg cac cat atc cac aat tcg atg gta gag gga 864
Glu Ala Leu Asp Val Ser His His Ile His Asn Ser Met Val Glu Gly
250 255 260
gat ttt cag gct tat gta tgg tgg tac atc cgc aga tca tac ggt cct 912
Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro
265 270 275
atg aaa gaa gac ggt acg atc agc aag cgc ggt tac aat atg gct cat 960
Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His
280 285 290 295
ttc tcg aag ttt gtc cgt ccc ggt tat gtc agg gtc gat gcg aca aag 1008
Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp Ala Thr Lys
300 305 310
agc ccc gct tca aac gtt tac gta tct gcc tat aaa ggt gat aac aaa 1056
Ser Pro Ala Ser Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys
315 320 325
gtc gtt ata gtt gcc att aat aaa aac aac tca ggg gtt aac caa aac 1104
Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Ser Gly Val Asn Gln Asn
330 335 340
ttc gtt ctg cag aat gga tct gtt tct caa gta tcc aga tgg atc acg 1152
Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Val Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr
345 350 355
agc agc agc agc aac ctt caa cct gga acg aat ctc aat gta aca gac 1200
Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu Asn Val Thr Asp
360 365 370 375
aat cat ttt tgg gcg cat ctt ccg gct cag agt gtg aca aca ttt gtc 1248
Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val
380 385 390
gct aac ctc cgc taa 1263
Ala Asn Leu Arg
395
<210> 6
<211> 420
<212> PRT
<213> 地衣芽孢杆菌
<400> 6
Val Lys Lys Leu Ile Cys Val Leu Leu Ala Tyr Val Thr Met Leu Ser
-25 -20 -15 -10
Leu Met Leu Thr Gly Pro Ala Ala Ala Glu Val Ser Ala Ala Ser Asp
-5 -1 1 5
Ala Thr Val Arg Leu Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly
10 15 20
Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg
25 30 35
Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu
40 45 50 55
Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Arg Glu Val Glu
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Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro
75 80 85
Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg Asn Gly Asp
90 95 100
Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Lys
105 110 115
His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Asn Asn Gly Val Asn Leu
120 125 130 135
Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp Trp Thr
140 145 150
Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Lys Glu Asn Ala Gly
155 160 165
Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys
170 175 180
Asn Ile Ser Asp Pro Ile Val Asn Asp Pro Lys Ala Leu Ala Asn Met
185 190 195
Asp Ile Leu Gly Ala His Leu Tyr Gly Thr Gln Leu Asn Asn Phe Ala
200 205 210 215
Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr
220 225 230
Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn His Ser Ala Asp Arg Trp Pro
235 240 245
Glu Ala Leu Asp Val Ser His His Ile His Asn Ser Met Val Glu Gly
250 255 260
Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro
265 270 275
Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His
280 285 290 295
Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp Ala Thr Lys
300 305 310
Ser Pro Ala Ser Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys
315 320 325
Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Ser Gly Val Asn Gln Asn
330 335 340
Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Val Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr
345 350 355
Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu Asn Val Thr Asp
360 365 370 375
Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val
380 385 390
Ala Asn Leu Arg
395
<210> 7
<211> 395
<212> PRT
<213> 地衣芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(395)
<400> 7
Glu Val Ser Ala Ala Ser Asp Ala Thr Val Arg Leu Ser Ala Glu Lys
1 5 10 15
Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly
20 25 30
Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn
35 40 45
Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn
50 55 60
Asn Trp Tyr Arg Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly
65 70 75 80
Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu
85 90 95
Thr Phe Asn Arg Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp
100 105 110
Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Lys His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met
115 120 125
Lys Asn Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro
130 135 140
Asp Tyr Ala His Asp Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg
145 150 155 160
Phe Met Lys Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro
165 170 175
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180 185 190
Pro Lys Ala Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Leu Tyr Gly
195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys
275 280 285
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290 295 300
Val Arg Val Asp Ala Thr Lys Ser Pro Ala Ser Asn Val Tyr Val Ser
305 310 315 320
Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn
325 330 335
Asn Ser Gly Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Val Ser
340 345 350
Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly
355 360 365
Thr Asn Leu Asn Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala
370 375 380
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385 390 395
<210> 8
<211> 403
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N-末端His标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(403)
<400> 8
His His His His His His Pro Arg Glu Val Ser Ala Ala Ser Asp Ala
1 5 10 15
Thr Val Arg Leu Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly
20 25 30
Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu
35 40 45
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50 55 60
Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Arg Glu Val Glu Thr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Lys Glu Asn Ala Gly Ser
165 170 175
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180 185 190
Ile Ser Asp Pro Ile Val Asn Asp Pro Lys Ala Leu Ala Asn Met Asp
195 200 205
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210 215 220
Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr Glu
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn His Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu
245 250 255
Ala Leu Asp Val Ser His His Ile His Asn Ser Met Val Glu Gly Asp
260 265 270
Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met
275 280 285
Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe
290 295 300
Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Val Asp Ala Thr Lys Ser
305 310 315 320
Pro Ala Ser Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val
325 330 335
Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Ser Gly Val Asn Gln Asn Phe
340 345 350
Val Leu Gln Asn Gly Ser Val Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser
355 360 365
Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu Asn Val Thr Asp Asn
370 375 380
His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Ala
385 390 395 400
Asn Leu Arg
<210> 9
<211> 1272
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1269)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(87)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (88)..(87)
<223> 1269
<400> 9
atg atg tcg agc gtc aaa aaa aca att tgt cta cta ttg gta tgt ttc 48
Met Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe
-25 -20 -15
act atg ctg tca gta atg tta atg ggc cca ggc gct gct gag gtc ttt 96
Thr Met Leu Ser Val Met Leu Met Gly Pro Gly Ala Ala Glu Val Phe
-10 -5 -1 1
gcg gca aat gat gta aca gtt aat att tct gca gaa aaa caa gtg att 144
Ala Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile
5 10 15
cgc ggt ttt gga gga atg aac cac ccg gct tgg gtt gga gat tta act 192
Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr
20 25 30 35
gct gct caa aga gaa act gct ttt ggc aat gga cag aat cag tta ggc 240
Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly
40 45 50
ttt tca atc tta aga att cat gta gat gaa aat aga aat aat tgg tac 288
Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr
55 60 65
aaa gaa gta gag act gca aag agc gcg atc aaa cac ggg gca atc gtt 336
Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val
70 75 80
ttc gct tct cct tgg aat cct cca agc aat atg gtt gag acc ttc aat 384
Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asn Met Val Glu Thr Phe Asn
85 90 95
cat aat ggt gac aca tca gct aaa cgc cta aga tac gat aag tac gcc 432
His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala
100 105 110 115
gca tac gcg cag cac ctt aac gat ttc gtt acc ttc atg aag agt aat 480
Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Ser Asn
120 125 130
gga gtg aat ctg tat gcg att tcc atc caa aac gag cct gat tac gct 528
Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala
135 140 145
cac gag tgg acg tgg tgg acg ccg caa gaa ata ctt cgc ttt atg aga 576
His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg
150 155 160
gaa aac gca ggc tcg ata aat gcc cgt gtc att gca cct gag tca ttt 624
Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe
165 170 175
caa tac ttg aag aat ttg tct gac cca atc ttg aac gat cct cag gct 672
Gln Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala
180 185 190 195
ctt gcc aat atg gat att ctc gga acc cac ctg tat ggg act cag gtc 720
Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val
200 205 210
agt caa ttc cct tat cct ctt ttt aaa caa aaa gga gcg ggg aag gac 768
Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp
215 220 225
ctt tgg atg acg gaa gta tac tat ccg aac agt gat aac aac tcg gcg 816
Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala
230 235 240
gat cga tgg ccc gag gcc ttg gat gtt tca caa cat att cac aat tcg 864
Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Asn Ser
245 250 255
atg gtt gaa ggg gat ttt caa gct tat gtt tgg tgg tac atc cga aga 912
Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg
260 265 270 275
tca tat ggt cct atg aaa gaa gat ggc acg atc agc aaa cgt ggc tac 960
Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr
280 285 290
aat atg gct cat ttc tca aag ttt gtg cgc cct gga tat gta agg att 1008
Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile
295 300 305
gat gca acg aaa aat cct aat ccg aac gtt tac gtg tca gcc tat aaa 1056
Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys
310 315 320
ggt gac aac aag gtc gtt att gtt gcc att aac aaa agc aac aca gga 1104
Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser Asn Thr Gly
325 330 335
gtt aac caa aac ttt gtt ttg cag aat gga tct gct tct cag gta tct 1152
Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser
340 345 350 355
aga tgg atc acc agc agc aac agc aat ctt caa cct ggg acg aat ctt 1200
Arg Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu
360 365 370
aaa gta acg gac aat cat ttt tgg gcc cat ctt cca gct caa agc gtg 1248
Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val
375 380 385
aca aca ttt gtc gta att cgt taa 1272
Thr Thr Phe Val Val Ile Arg
390
<210> 10
<211> 423
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 10
Met Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe
-25 -20 -15
Thr Met Leu Ser Val Met Leu Met Gly Pro Gly Ala Ala Glu Val Phe
-10 -5 -1 1
Ala Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile
5 10 15
Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr
20 25 30 35
Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly
40 45 50
Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr
55 60 65
Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val
70 75 80
Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asn Met Val Glu Thr Phe Asn
85 90 95
His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala
100 105 110 115
Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Ser Asn
120 125 130
Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala
135 140 145
His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg
150 155 160
Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe
165 170 175
Gln Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala
180 185 190 195
Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val
200 205 210
Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp
215 220 225
Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala
230 235 240
Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Asn Ser
245 250 255
Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg
260 265 270 275
Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr
280 285 290
Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile
295 300 305
Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys
310 315 320
Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser Asn Thr Gly
325 330 335
Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser
340 345 350 355
Arg Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu
360 365 370
Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val
375 380 385
Thr Thr Phe Val Val Ile Arg
390
<210> 11
<211> 394
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(394)
<400> 11
Glu Val Phe Ala Ala Asn Asp Val Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Lys
1 5 10 15
Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly
20 25 30
Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn
35 40 45
Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn
50 55 60
Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly
65 70 75 80
Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asn Met Val Glu
85 90 95
Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp
100 105 110
Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met
115 120 125
Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro
130 135 140
Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg
145 150 155 160
Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro
165 170 175
Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp
180 185 190
Pro Gln Ala Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly
195 200 205
Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala
210 215 220
Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn
225 230 235 240
Asn Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile
245 250 255
His Asn Ser Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr
260 265 270
Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys
275 280 285
Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr
290 295 300
Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser
305 310 315 320
Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser
325 330 335
Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser
340 345 350
Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly
355 360 365
Thr Asn Leu Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala
370 375 380
Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val Ile Arg
385 390
<210> 12
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N-末端His标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(402)
<400> 12
His His His His His His Pro Arg Glu Val Phe Ala Ala Asn Asp Val
1 5 10 15
Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Lys Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly
20 25 30
Met Asn His Pro Ala Trp Val Gly Asp Leu Thr Ala Ala Gln Arg Glu
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg
50 55 60
Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr
65 70 75 80
Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp
85 90 95
Asn Pro Pro Ser Asn Met Val Glu Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr
100 105 110
Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His
115 120 125
Leu Asn Asp Phe Val Thr Phe Met Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr
130 135 140
Ala Ile Ser Ile Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp
145 150 155 160
Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser
165 170 175
Ile Asn Ala Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn
180 185 190
Leu Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu Ala Asn Met Asp
195 200 205
Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr
210 215 220
Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Asp Leu Trp Met Thr Glu
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Asn Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu
245 250 255
Ala Leu Asp Val Ser Gln His Ile His Asn Ser Met Val Glu Gly Asp
260 265 270
Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met
275 280 285
Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe
290 295 300
Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn
305 310 315 320
Pro Asn Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val
325 330 335
Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Ser Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe
340 345 350
Val Leu Gln Asn Gly Ser Ala Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser
355 360 365
Ser Asn Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asn Leu Lys Val Thr Asp Asn
370 375 380
His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val
385 390 395 400
Ile Arg
<210> 13
<211> 1272
<212> DNA
<213> 饲料类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1269)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(93)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (94)..(1269)
<400> 13
gtg tta ata ttc aaa ttg aag aag tcg atc cac att cta ttg gcc tgt 48
Val Leu Ile Phe Lys Leu Lys Lys Ser Ile His Ile Leu Leu Ala Cys
-30 -25 -20
ctt act gcc ctg ccg ctg atg ttg acg ccg atc caa gtc tcg gca gca 96
Leu Thr Ala Leu Pro Leu Met Leu Thr Pro Ile Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
agc gat gtt acg gta aac tta tcc tct gaa aaa cag cta atc aag ggt 144
Ser Asp Val Thr Val Asn Leu Ser Ser Glu Lys Gln Leu Ile Lys Gly
5 10 15
ttt gga gga att aat cat ccc aac tgg atc ggt gat ttg acg ccc tca 192
Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Asn Trp Ile Gly Asp Leu Thr Pro Ser
20 25 30
caa aga gat act gct ttt ggt aat gga caa aac cag cta ggg ttt tcc 240
Gln Arg Asp Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser
35 40 45
atc cta cgc att tat att gat gat aac aag aac aat tgg tat aaa gaa 288
Ile Leu Arg Ile Tyr Ile Asp Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys Glu
50 55 60 65
ata ccc acg gca aaa cga gct att gaa caa gga gct atc gtc ttt gcc 336
Ile Pro Thr Ala Lys Arg Ala Ile Glu Gln Gly Ala Ile Val Phe Ala
70 75 80
tcg cca tgg aat cct ccc agt gat atg gtt gaa aca ttc aat cgc aat 384
Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg Asn
85 90 95
gga gac acg gcg gct aag cga ctt aaa tac gat aaa tac gct gcg tat 432
Gly Asp Thr Ala Ala Lys Arg Leu Lys Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr
100 105 110
gcc cag cac ctg aat gac ttt gtt tct tac atg aaa tcc aac gga gtt 480
Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Ser Tyr Met Lys Ser Asn Gly Val
115 120 125
aac ctc tac gca atc tcc gta caa aat gaa ccg gat tat gcg cat gat 528
Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp
130 135 140 145
tgg acg tgg tgg acg cct cag gaa atg ctt cga ttc atg aaa gat tat 576
Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Met Leu Arg Phe Met Lys Asp Tyr
150 155 160
gcc ggt tcc att acc ggt aca aaa gta atg gcg ccc gaa tcc ttc tct 624
Ala Gly Ser Ile Thr Gly Thr Lys Val Met Ala Pro Glu Ser Phe Ser
165 170 175
tat ctg aaa gaa atg tca gac ccc ata ctg aat gat ccg caa gcg cta 672
Tyr Leu Lys Glu Met Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu
180 185 190
gcc aac atg gac att ctg ggt gcc cat acg tat ggt acg caa ttc agt 720
Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Thr Tyr Gly Thr Gln Phe Ser
195 200 205
aat ttc cct tac ccc ctt ttt aaa caa aaa ggt gct gga aag gaa ctt 768
Asn Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu Leu
210 215 220 225
tgg atg tca gag gta tat tac ccc aat agt aat gca aat tcg gca gat 816
Trp Met Ser Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asn Ala Asn Ser Ala Asp
230 235 240
cat tgg cct gaa gcg ctg gat gtc tcc tat cac atc cat cat gca atg 864
His Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Tyr His Ile His His Ala Met
245 250 255
gtg gag gca gac ttt cag gca tat gta tgg tgg tat att cgt aga caa 912
Val Glu Ala Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Gln
260 265 270
tac ggg ccc atg aaa gag gat ggc acc att agc aaa cgg gga tat aat 960
Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn
275 280 285
atg gcc cat ttc tcc aag ttt gtt cga cca ggc ttt gtc aga gtg gat 1008
Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Phe Val Arg Val Asp
290 295 300 305
gcg acg aaa aat cca gat act caa acg ttt atc tct gca ttt aaa gga 1056
Ala Thr Lys Asn Pro Asp Thr Gln Thr Phe Ile Ser Ala Phe Lys Gly
310 315 320
gac aac aaa gta gta atc gta gca atc aac cgg gga act tcc gct gta 1104
Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Arg Gly Thr Ser Ala Val
325 330 335
aac cag aag ttt gta ttg cag aac gga aac gcg tca aac gta tca tcc 1152
Asn Gln Lys Phe Val Leu Gln Asn Gly Asn Ala Ser Asn Val Ser Ser
340 345 350
tgg gtt aca gac agc aca aga aat ctg gca gcc ggc tca tcg att atc 1200
Trp Val Thr Asp Ser Thr Arg Asn Leu Ala Ala Gly Ser Ser Ile Ile
355 360 365
atg aca ggc aat acg ttt act gcc caa ctt cct tct caa agt gtt acc 1248
Met Thr Gly Asn Thr Phe Thr Ala Gln Leu Pro Ser Gln Ser Val Thr
370 375 380 385
aca ttc gta gca cag tta aat taa 1272
Thr Phe Val Ala Gln Leu Asn
390
<210> 14
<211> 423
<212> PRT
<213> 饲料类芽孢杆菌
<400> 14
Val Leu Ile Phe Lys Leu Lys Lys Ser Ile His Ile Leu Leu Ala Cys
-30 -25 -20
Leu Thr Ala Leu Pro Leu Met Leu Thr Pro Ile Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
Ser Asp Val Thr Val Asn Leu Ser Ser Glu Lys Gln Leu Ile Lys Gly
5 10 15
Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Asn Trp Ile Gly Asp Leu Thr Pro Ser
20 25 30
Gln Arg Asp Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser
35 40 45
Ile Leu Arg Ile Tyr Ile Asp Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys Glu
50 55 60 65
Ile Pro Thr Ala Lys Arg Ala Ile Glu Gln Gly Ala Ile Val Phe Ala
70 75 80
Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg Asn
85 90 95
Gly Asp Thr Ala Ala Lys Arg Leu Lys Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr
100 105 110
Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Ser Tyr Met Lys Ser Asn Gly Val
115 120 125
Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp
130 135 140 145
Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Met Leu Arg Phe Met Lys Asp Tyr
150 155 160
Ala Gly Ser Ile Thr Gly Thr Lys Val Met Ala Pro Glu Ser Phe Ser
165 170 175
Tyr Leu Lys Glu Met Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu
180 185 190
Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Thr Tyr Gly Thr Gln Phe Ser
195 200 205
Asn Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu Leu
210 215 220 225
Trp Met Ser Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asn Ala Asn Ser Ala Asp
230 235 240
His Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Tyr His Ile His His Ala Met
245 250 255
Val Glu Ala Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Gln
260 265 270
Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn
275 280 285
Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Phe Val Arg Val Asp
290 295 300 305
Ala Thr Lys Asn Pro Asp Thr Gln Thr Phe Ile Ser Ala Phe Lys Gly
310 315 320
Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Arg Gly Thr Ser Ala Val
325 330 335
Asn Gln Lys Phe Val Leu Gln Asn Gly Asn Ala Ser Asn Val Ser Ser
340 345 350
Trp Val Thr Asp Ser Thr Arg Asn Leu Ala Ala Gly Ser Ser Ile Ile
355 360 365
Met Thr Gly Asn Thr Phe Thr Ala Gln Leu Pro Ser Gln Ser Val Thr
370 375 380 385
Thr Phe Val Ala Gln Leu Asn
390
<210> 15
<211> 392
<212> PRT
<213> 饲料类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(392)
<400> 15
Ala Ser Asp Val Thr Val Asn Leu Ser Ser Glu Lys Gln Leu Ile Lys
1 5 10 15
Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro Asn Trp Ile Gly Asp Leu Thr Pro
20 25 30
Ser Gln Arg Asp Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe
35 40 45
Ser Ile Leu Arg Ile Tyr Ile Asp Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys
50 55 60
Glu Ile Pro Thr Ala Lys Arg Ala Ile Glu Gln Gly Ala Ile Val Phe
65 70 75 80
Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg
85 90 95
Asn Gly Asp Thr Ala Ala Lys Arg Leu Lys Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala
100 105 110
Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Ser Tyr Met Lys Ser Asn Gly
115 120 125
Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His
130 135 140
Asp Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Met Leu Arg Phe Met Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Ala Gly Ser Ile Thr Gly Thr Lys Val Met Ala Pro Glu Ser Phe
165 170 175
Ser Tyr Leu Lys Glu Met Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala
180 185 190
Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly Ala His Thr Tyr Gly Thr Gln Phe
195 200 205
Ser Asn Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu
210 215 220
Leu Trp Met Ser Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asn Ala Asn Ser Ala
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Glu Ala Leu Asp Val Ser Tyr His Ile His His Ala
245 250 255
Met Val Glu Ala Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg
260 265 270
Gln Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr
275 280 285
Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Phe Val Arg Val
290 295 300
Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asp Thr Gln Thr Phe Ile Ser Ala Phe Lys
305 310 315 320
Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Arg Gly Thr Ser Ala
325 330 335
Val Asn Gln Lys Phe Val Leu Gln Asn Gly Asn Ala Ser Asn Val Ser
340 345 350
Ser Trp Val Thr Asp Ser Thr Arg Asn Leu Ala Ala Gly Ser Ser Ile
355 360 365
Ile Met Thr Gly Asn Thr Phe Thr Ala Gln Leu Pro Ser Gln Ser Val
370 375 380
Thr Thr Phe Val Ala Gln Leu Asn
385 390
<210> 16
<211> 400
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N-末端His标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(400)
<400> 16
His His His His His His Pro Arg Ala Ser Asp Val Thr Val Asn Leu
1 5 10 15
Ser Ser Glu Lys Gln Leu Ile Lys Gly Phe Gly Gly Ile Asn His Pro
20 25 30
Asn Trp Ile Gly Asp Leu Thr Pro Ser Gln Arg Asp Thr Ala Phe Gly
35 40 45
Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Ile Leu Arg Ile Tyr Ile Asp
50 55 60
Asp Asn Lys Asn Asn Trp Tyr Lys Glu Ile Pro Thr Ala Lys Arg Ala
65 70 75 80
Ile Glu Gln Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Ser
85 90 95
Asp Met Val Glu Thr Phe Asn Arg Asn Gly Asp Thr Ala Ala Lys Arg
100 105 110
Leu Lys Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe
115 120 125
Val Ser Tyr Met Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Val
130 135 140
Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Asp Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln
145 150 155 160
Glu Met Leu Arg Phe Met Lys Asp Tyr Ala Gly Ser Ile Thr Gly Thr
165 170 175
Lys Val Met Ala Pro Glu Ser Phe Ser Tyr Leu Lys Glu Met Ser Asp
180 185 190
Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu Ala Asn Met Asp Ile Leu Gly
195 200 205
Ala His Thr Tyr Gly Thr Gln Phe Ser Asn Phe Pro Tyr Pro Leu Phe
210 215 220
Lys Gln Lys Gly Ala Gly Lys Glu Leu Trp Met Ser Glu Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Pro Asn Ser Asn Ala Asn Ser Ala Asp His Trp Pro Glu Ala Leu Asp
245 250 255
Val Ser Tyr His Ile His His Ala Met Val Glu Ala Asp Phe Gln Ala
260 265 270
Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Gln Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp
275 280 285
Gly Thr Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe
290 295 300
Val Arg Pro Gly Phe Val Arg Val Asp Ala Thr Lys Asn Pro Asp Thr
305 310 315 320
Gln Thr Phe Ile Ser Ala Phe Lys Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val
325 330 335
Ala Ile Asn Arg Gly Thr Ser Ala Val Asn Gln Lys Phe Val Leu Gln
340 345 350
Asn Gly Asn Ala Ser Asn Val Ser Ser Trp Val Thr Asp Ser Thr Arg
355 360 365
Asn Leu Ala Ala Gly Ser Ser Ile Ile Met Thr Gly Asn Thr Phe Thr
370 375 380
Ala Gln Leu Pro Ser Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Ala Gln Leu Asn
385 390 395 400
<210> 17
<211> 1272
<212> DNA
<213> 解淀粉芽孢杆菌HB-26
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1269)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(87)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (88)..(1269)
<400> 17
atg atg tcg agc gta aaa aaa aca att tgt cta tta tta gta tgt ttc 48
Met Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe
-25 -20 -15
act acg ctg tca gta atg tta atg gac cca ggc gct gct gag gtc ttg 96
Thr Thr Leu Ser Val Met Leu Met Asp Pro Gly Ala Ala Glu Val Leu
-10 -5 -1 1
gcg gca agt gat gca aca gtt aat ata tct gca gaa aga caa gtg att 144
Ala Ala Ser Asp Ala Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile
5 10 15
cgc ggt ttt gga gga atg aac cac ccg gct tgg att gga gac ttg act 192
Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr
20 25 30 35
gcg cct caa cgg gtg acc gct ttt ggc aat gga cag aat cag tta ggt 240
Ala Pro Gln Arg Val Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly
40 45 50
ttt tcg gtc tta aga att cat gta gat gaa aat aga aac aat tgg tac 288
Phe Ser Val Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr
55 60 65
aag gaa gtg gag act gca aag agt gcg atc aaa cat gga gca atc gtt 336
Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val
70 75 80
ttt gct tcc cct tgg aat ccg cca aac gat atg gtt gag act ttc aat 384
Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn
85 90 95
cat aat ggt gac aca tca gct aag cgg ctg aga tac gat aag tac gcc 432
His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala
100 105 110 115
gca tac gcg cag cat ctt aac gat ttc gtt aat ttc atg aag agt aat 480
Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn
120 125 130
ggt gtg aat ctg tat gcg att tct atg caa aac gag cct gat tac gct 528
Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Met Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala
135 140 145
cac gaa tgg aca tgg tgg acg ccc caa gaa atc ctg cgt ttc atg aga 576
His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg
150 155 160
gag aat gcc ggt tcc att aat acc cgc gtg att gcg ccg gaa tca ttt 624
Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Thr Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe
165 170 175
caa tac ctg aaa aat ata tcg gac ccc att ttg aat gat ccg cag gcg 672
Gln Tyr Leu Lys Asn Ile Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala
180 185 190 195
ctt agg aat atg gat atc ctc gga acc cac ctg tac ggc act cag gtc 720
Leu Arg Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val
200 205 210
agt cag ttt cct tat cct ctt ttc aaa caa aaa gga gga ggg aaa gag 768
Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Gly Gly Lys Glu
215 220 225
cta tgg atg acg gag gta tac tat ccg aat agt gac aac tat tca gcg 816
Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Tyr Ser Ala
230 235 240
gat cgc tgg cct gag gct tta ggt gtt tca gag cat att cat cat tca 864
Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Gly Val Ser Glu His Ile His His Ser
245 250 255
atg gta gag gga gat ttt caa gct tat gtg tgg tgg tac atc cgc aga 912
Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg
260 265 270 275
tca tac ggc cct atg aaa gaa gat ggg atg atc agc aaa cgc gga tac 960
Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Met Ile Ser Lys Arg Gly Tyr
280 285 290
aac atg gct cat ttc tca aaa ttt gtg cgc cca ggc tat gta agg att 1008
Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile
295 300 305
gat gca acg aaa aat cct gaa ccg aat gtt tac gtg tca gcc tat aaa 1056
Asp Ala Thr Lys Asn Pro Glu Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys
310 315 320
gga gac aat aaa gtc gtg att gtt gcc att aat aaa aat aac aca ggg 1104
Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Thr Gly
325 330 335
gtc aac caa aac ttc gtg ttg cag aat gga act gct tcg caa gta tcc 1152
Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Thr Ala Ser Gln Val Ser
340 345 350 355
aga tgg atc acg agc agc agc agc aat ctt caa cct gga acg gat ctc 1200
Arg Trp Ile Thr Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asp Leu
360 365 370
aaa gta acg gac aat cat ttt tgg gcc cat ctt ccg gct caa agc gtg 1248
Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val
375 380 385
aca aca ttt gtt gta aag cgt taa 1272
Thr Thr Phe Val Val Lys Arg
390
<210> 18
<211> 423
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌HB-26
<400> 18
Met Met Ser Ser Val Lys Lys Thr Ile Cys Leu Leu Leu Val Cys Phe
-25 -20 -15
Thr Thr Leu Ser Val Met Leu Met Asp Pro Gly Ala Ala Glu Val Leu
-10 -5 -1 1
Ala Ala Ser Asp Ala Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile
5 10 15
Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr
20 25 30 35
Ala Pro Gln Arg Val Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly
40 45 50
Phe Ser Val Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr
55 60 65
Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val
70 75 80
Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn
85 90 95
His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala
100 105 110 115
Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn
120 125 130
Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Met Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala
135 140 145
His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg
150 155 160
Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Thr Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe
165 170 175
Gln Tyr Leu Lys Asn Ile Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala
180 185 190 195
Leu Arg Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val
200 205 210
Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Gly Gly Lys Glu
215 220 225
Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Tyr Ser Ala
230 235 240
Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Gly Val Ser Glu His Ile His His Ser
245 250 255
Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg
260 265 270 275
Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Met Ile Ser Lys Arg Gly Tyr
280 285 290
Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile
295 300 305
Asp Ala Thr Lys Asn Pro Glu Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys
310 315 320
Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Thr Gly
325 330 335
Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Thr Ala Ser Gln Val Ser
340 345 350 355
Arg Trp Ile Thr Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asp Leu
360 365 370
Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val
375 380 385
Thr Thr Phe Val Val Lys Arg
390
<210> 19
<211> 394
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌HB-26
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(394)
<400> 19
Glu Val Leu Ala Ala Ser Asp Ala Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg
1 5 10 15
Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly
20 25 30
Asp Leu Thr Ala Pro Gln Arg Val Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn
35 40 45
Gln Leu Gly Phe Ser Val Leu Arg Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn
50 55 60
Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly
65 70 75 80
Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu
85 90 95
Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp
100 105 110
Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met
115 120 125
Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr Ala Ile Ser Met Gln Asn Glu Pro
130 135 140
Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg
145 150 155 160
Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser Ile Asn Thr Arg Val Ile Ala Pro
165 170 175
Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn Ile Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp
180 185 190
Pro Gln Ala Leu Arg Asn Met Asp Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly
195 200 205
Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Gly
210 215 220
Gly Lys Glu Leu Trp Met Thr Glu Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu Ala Leu Gly Val Ser Glu His Ile
245 250 255
His His Ser Met Val Glu Gly Asp Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr
260 265 270
Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met Lys Glu Asp Gly Met Ile Ser Lys
275 280 285
Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr
290 295 300
Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn Pro Glu Pro Asn Val Tyr Val Ser
305 310 315 320
Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn
325 330 335
Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe Val Leu Gln Asn Gly Thr Ala Ser
340 345 350
Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly
355 360 365
Thr Asp Leu Lys Val Thr Asp Asn His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala
370 375 380
Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val Lys Arg
385 390
<210> 20
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N-末端His标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟序列
<222> (1)..(402)
<400> 20
His His His His His His Pro Arg Glu Val Leu Ala Ala Ser Asp Ala
1 5 10 15
Thr Val Asn Ile Ser Ala Glu Arg Gln Val Ile Arg Gly Phe Gly Gly
20 25 30
Met Asn His Pro Ala Trp Ile Gly Asp Leu Thr Ala Pro Gln Arg Val
35 40 45
Thr Ala Phe Gly Asn Gly Gln Asn Gln Leu Gly Phe Ser Val Leu Arg
50 55 60
Ile His Val Asp Glu Asn Arg Asn Asn Trp Tyr Lys Glu Val Glu Thr
65 70 75 80
Ala Lys Ser Ala Ile Lys His Gly Ala Ile Val Phe Ala Ser Pro Trp
85 90 95
Asn Pro Pro Asn Asp Met Val Glu Thr Phe Asn His Asn Gly Asp Thr
100 105 110
Ser Ala Lys Arg Leu Arg Tyr Asp Lys Tyr Ala Ala Tyr Ala Gln His
115 120 125
Leu Asn Asp Phe Val Asn Phe Met Lys Ser Asn Gly Val Asn Leu Tyr
130 135 140
Ala Ile Ser Met Gln Asn Glu Pro Asp Tyr Ala His Glu Trp Thr Trp
145 150 155 160
Trp Thr Pro Gln Glu Ile Leu Arg Phe Met Arg Glu Asn Ala Gly Ser
165 170 175
Ile Asn Thr Arg Val Ile Ala Pro Glu Ser Phe Gln Tyr Leu Lys Asn
180 185 190
Ile Ser Asp Pro Ile Leu Asn Asp Pro Gln Ala Leu Arg Asn Met Asp
195 200 205
Ile Leu Gly Thr His Leu Tyr Gly Thr Gln Val Ser Gln Phe Pro Tyr
210 215 220
Pro Leu Phe Lys Gln Lys Gly Gly Gly Lys Glu Leu Trp Met Thr Glu
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Pro Asn Ser Asp Asn Tyr Ser Ala Asp Arg Trp Pro Glu
245 250 255
Ala Leu Gly Val Ser Glu His Ile His His Ser Met Val Glu Gly Asp
260 265 270
Phe Gln Ala Tyr Val Trp Trp Tyr Ile Arg Arg Ser Tyr Gly Pro Met
275 280 285
Lys Glu Asp Gly Met Ile Ser Lys Arg Gly Tyr Asn Met Ala His Phe
290 295 300
Ser Lys Phe Val Arg Pro Gly Tyr Val Arg Ile Asp Ala Thr Lys Asn
305 310 315 320
Pro Glu Pro Asn Val Tyr Val Ser Ala Tyr Lys Gly Asp Asn Lys Val
325 330 335
Val Ile Val Ala Ile Asn Lys Asn Asn Thr Gly Val Asn Gln Asn Phe
340 345 350
Val Leu Gln Asn Gly Thr Ala Ser Gln Val Ser Arg Trp Ile Thr Ser
355 360 365
Ser Ser Ser Asn Leu Gln Pro Gly Thr Asp Leu Lys Val Thr Asp Asn
370 375 380
His Phe Trp Ala His Leu Pro Ala Gln Ser Val Thr Thr Phe Val Val
385 390 395 400
Lys Arg
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有多组氨酸尾的赛威酶（Savinase）分泌信号肽
<400> 21
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala His His His His His
20 25 30
His Pro Arg
35

Claims (20)

1.一种颗粒，该颗粒包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种配制剂，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
2.如权利要求1所述的颗粒，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至394、SEQ ID NO:3的氨基酸1至394、SEQ ID NO:4的氨基酸1至402、SEQ ID NO:6的氨基酸1至395、SEQ ID NO:7的氨基酸1至395、SEQ ID NO:8的氨基酸1至403、SEQ ID NO:10的氨基酸1至394、SEQ ID NO:11的氨基酸1至394、SEQ ID NO:12的氨基酸1至402、SEQ ID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392、SEQ ID NO:16的氨基酸1至400、SEQ IDNO:18的氨基酸1至394、SEQ ID NO:19的氨基酸1至394、或SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
3.如权利要求1至2中任一项所述的颗粒，其中该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣。
4.一种具有木聚糖酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)SEQ ID NO:15的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
5.如权利要求4所述的多肽，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392或SEQ ID NO:16的氨基酸1至400。
6.一种组合物，该组合物包含如权利要求4至5中任一项所述的多肽，并且任选地进一步包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种配制剂；
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；以及
一种或多种有机酸。
7.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含一种或多种具有木聚糖酶活性的多肽和一种或多种维生素和/或矿物质和/或维生素，其中该具有木聚糖酶活性的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:19的多肽的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(g)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(h)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有成熟多肽的至少90％的长度。
8.如权利要求7所述的动物饲料添加剂，其中该多肽包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:2的氨基酸1至394、SEQ ID NO:3的氨基酸1至394、SEQ ID NO:4的氨基酸1至402、SEQ IDNO:6的氨基酸1至395、SEQ ID NO:7的氨基酸1至395、SEQ ID NO:8的氨基酸1至403、SEQ IDNO:10的氨基酸1至394、SEQ ID NO:11的氨基酸1至394、SEQ ID NO:12的氨基酸1至402、SEQID NO:14的氨基酸1至392、SEQ ID NO:15的氨基酸1至392、SEQ ID NO:16的氨基酸1至400、SEQ ID NO:18的氨基酸1至394、SEQ ID NO:19的氨基酸1至394、或SEQ ID NO:20的氨基酸1至402。
9.如权利要求7至8中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含选自如下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；
一种或多种其他饲料成分；
一种或多种另外的酶；以及
一种或多种微生物。
10.一种动物饲料，该动物饲料包含如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂、以及植物基材料。
11.一种颗粒化动物饲料，该颗粒化动物饲料包含如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂、以及植物基材料。
12.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一种或多种动物给予如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物、如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂、如权利要求10所述的动物饲料或如权利要求11所述的颗粒化动物饲料。
13.一种制备动物饲料的方法，该方法包括将如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂与植物基材料混合。
14.一种用于改善包含来自黍亚科的植物基材料的动物饲料的营养价值的方法，该方法包括向该饲料中添加如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂。
15.一种从植物基材料中溶解木聚糖的方法，该方法包括用如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂处理来自黍亚科的植物基材料。
16.一种编码如权利要求4至5中任一项所述的多肽的多核苷酸。
17.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如权利要求16所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
18.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如权利要求16所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
19.一种产生如权利要求4至5中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求18所述的宿主细胞；以及
(b)回收该多肽。
20.如权利要求1至3中任一项所述的颗粒、如权利要求4至5中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的组合物或如权利要求7至9中任一项所述的动物饲料添加剂在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物中一个或多个性能参数；
用于从黍亚科的植物基材料中溶解木聚糖；和/或
用于从黍亚科的植物基材料中释放淀粉的用途。
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