CN110139666A - 具有溶菌酶活性的多肽、编码该多肽的多核苷酸及其用途和组合物 - Google Patents
具有溶菌酶活性的多肽、编码该多肽的多核苷酸及其用途和组合物 Download PDFInfo
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Abstract
提供了包含一种或多种具有溶菌酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。提供了具有溶菌酶活性的多肽、编码多肽核酸构建体的多核苷酸、包含这些多核苷酸的载体和宿主细胞以及产生和使用这些多肽的方法。
Description
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技术领域
本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的多肽的动物饲料或动物饲料添加剂。本发明还涉及具有溶菌酶活性的多肽，编码这些多肽的多核苷酸，包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
溶菌酶是一种由许多生物作为对抗细菌的防御性机制而产生的O-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖的糖苷键引起细菌细胞壁的水解；肽聚糖是细菌中的一种重要的结构分子。在细菌的细胞壁被溶菌酶作用弱化后，由不平衡的渗透压导致细菌细胞溶解。
溶菌酶天然存在于许多生物中，例如病毒、植物、昆虫、鸟类、爬行类以及哺乳类。在哺乳类中，已经从鼻腔分泌物、唾液、眼泪、肠内容物、尿和乳中分离到溶菌酶。该酶裂解N-乙酰胞壁酸的1号碳与N-乙酰-D-葡糖胺的4号碳之间的糖苷键。在体内，这两种碳水化合物聚合以形成许多微生物的细胞壁多糖。
已经将溶菌酶分类为五种不同的糖苷水解酶(GH)家族(CAZy，www.cazy.org)：鸡蛋清溶菌酶(GH22)、鹅蛋清溶菌酶(GH23)、噬菌体T4溶菌酶(GH24)、鞘氨醇单胞菌鞭毛蛋白(GH73)以及拟鞘孢属(Chalaropsis)溶菌酶(GH25)。来自家族GH23和GH24的溶菌酶主要从噬菌体中已知并且近来在真菌中得以鉴定。已经发现溶菌酶家族GH25与其他溶菌酶家族在结构上是不相关的。
从鸡蛋清提取的溶菌酶是在商业市场可获得的主要产品，但不裂解例如金黄色葡萄球菌细胞壁中的N,6-O-二乙酰胞壁酸并且因此尤其不能溶解这一重要的人类病原体(Masschalck B,Deckers D,Michiels CW(2002),“Lytic and nonlytic mechanism ofinactivation of gram-positive bacteria by lysozyme under atmospheric and highhydrostatic pressure[在大气压和高流体静力压下由溶菌酶灭活革兰氏阳性细菌的溶解和非溶解机制]”,J Food Prot.[食品保护杂志]65(12):1916-23)。
传统上，抗微生物生长促进剂(AGP)已经用于动物的生长促进，并且可能通过防止病原体诸如产气荚膜梭菌的低水平感染来起作用。然而，AGP越来越多地被禁止在全世界范围内使用，并且因此促进动物生长但不是AGP的新解决方案是有利益性的。
WO 2013/076253和WO 2005/080559公开了用于动物饲料的GH25溶菌酶。然而，所述溶菌酶在降解溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)细胞壁(典型的溶菌酶活性测定)方面不具有高活性，并且需要更具活性的溶菌酶。本发明的目的是提供新的和更具活性的溶菌酶，其可适用于动物健康。
发明内容
本发明涉及对溶壁微球菌细胞壁中发现的肽聚糖具有改善的溶菌酶活性的多肽。本发明的溶菌酶都是GH25溶菌酶，并且都具有改善的裂解溶壁微球菌的细菌细胞壁的能力，从而使得它们适合用于动物饲料以改善动物健康。与WO 2013/076253中描述的溶菌酶(其在本文中描述为SEQ ID NO 159)相比，本发明的溶菌酶具有改善的活性。令人惊讶地发现大部分GH25溶菌酶还具有针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性。约氏乳杆菌是动物肠道菌群的重要细菌。不受特定理论的束缚，据信通过酶促裂解部分降解的细菌细胞壁从肠道菌群中去除死亡的约氏乳杆菌细胞是动物肠道健康的重要贡献者。
本发明的一个方面涉及具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
本发明的另外的方面涉及具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
如上所述，本发明的这些多肽具有改善的溶菌酶活性。本发明的令人关注的实施例涉及以下具有改善的溶菌酶活性的本发明的这些多肽：如通过i)确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法和ii)确定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的方法中的任一种确定，本发明的多肽具有a)与鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的溶菌酶活性相比或b)与SEQ ID NO:159的溶菌酶活性相比的改善的溶菌酶活性。
本发明的另外的方面涉及水解细菌细胞壁中肽聚糖的方法，该方法包括用一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽处理细菌细胞，其中该多肽是如上所定义的。
本发明还涉及提高动物饲料中肽聚糖消化率的方法，该方法包括使用如本文所述的多肽，并且涉及包含如本文所定义的多肽的动物饲料添加剂或动物饲料。本发明的相关方面涉及在家禽或猪饲料中使用的畜牧添加剂，所述添加剂包含如本文所定义的多肽。
本发明的方面涉及改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物的消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的量，该方法包括用包含如本发明所定义的多肽的饲料或饲料添加剂喂食该动物。
本发明的方面涉及改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物消化道中死亡的约氏乳杆菌约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的量，该方法包括用饲料或饲料添加剂喂食该动物，该饲料或饲料添加剂包含选自下组的多肽，该组由以下组成：与SEQ ID NO159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
本发明的方面涉及促进从动物的消化道中消除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括用选自下组的多肽或多肽来源喂食所述动物，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，或用选自下组的多肽或多肽来源喂食所述动物，该组由以下组成：与SEQ ID NO 159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明还涉及包含一种或多种如上所述的GH25多肽的颗粒。本发明进一步涉及如权利要求中所述的具有溶菌酶活性的分离的多肽。
本发明还涉及包含本发明多肽的组合物，例如动物饲料添加剂或动物饲料；本发明的多肽以下方面的用途：在动物饲料中、在动物饲料添加剂中，在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中，用于改善动物中的一个或多个性能参数；以及编码本发明多肽的分离的多核苷酸，重组宿主细胞和产生本发明多肽的方法。
序列表概述
SEQ ID NO:1是从Sporormia fimetaria分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:2是从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是来自Sporormia fimetaria的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是从点孔座壳(Poronia punctata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:5是从SEQ ID NO:4推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:6是来自点孔座壳的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是从点孔座壳(Poronia punctata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:8是从SEQ ID NO:7推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是来自点孔座壳的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:10是从轮枝菌属物种(Lecanicillium sp.)WMM742分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:11是从SEQ ID NO:10推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是来自轮枝菌属物种WMM742的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13是从轮枝菌属物种(Lecanicillium sp.)WMM742分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:14是从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是来自轮枝菌属物种WMM742的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16是从马爪甲团囊菌(Onygena equina)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:17是从SEQ ID NO:16推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:18是来自马爪甲团囊菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19是从淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:20是从SEQ ID NO:19推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21是来自淡紫紫孢菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:22是从Trichobolus zukalii分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:23是从SEQ ID NO:22推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:24是来自Trichobolus zukalii的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:25是从桔青霉(Penicillium citrinum)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:26是从SEQ ID NO:25推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27是来自桔青霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28是从珠芽枝鼻菌(Cladorrhinum bulbillosum)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:29是从SEQ ID NO:28推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:30是来自珠芽枝鼻菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31是从西部伞状霉(Umbelopsis westeae)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:32是从SEQ ID NO:31推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:33是来自西部伞状霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:34是从接合菌属物种(Zygomycetes sp.)XZ2655分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:35是从SEQ ID NO:34推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36是来自接合菌属物种XZ2655的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO：37是从毛壳菌(Chaetomium cupreum)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:38是从SEQ ID NO:37推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:39是来自毛壳菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:40是从深红虫草(Cordyceps cardinalis)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:41是从SEQ ID NO:40推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:42是来自深红虫草的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:43是从青霉属物种(Penicillium sp.)'qii'分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:44是从SEQ ID NO:43推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:45是来自青霉菌属物种'qii'的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:46是从曲霉属新物种(Aspergillus sp.nov.)XZ2609分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:47是从SEQ ID NO:46推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:48是来自曲霉属新物种XZ2609的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:49是从拟青霉属物种(Paecilomyces sp.)XZ2658分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:50是从SEQ ID NO:49推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:51是来自拟青霉属物种XZ2658的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:52是从拟青霉属物种XZ2658分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:53是从SEQ ID NO:52推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:54是来自拟青霉属物种XZ2658的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:55是从微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:56是从SEQ ID NO:55推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:57是来自微小根毛霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58是从Pycnidiophora cf.dispera分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:59是从SEQ ID NO:58推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:60是来自Pycnidiophora cf.dispera的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:61是从Thermomucor indicae-seudaticae分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:62是从SEQ ID NO:61推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:63是来自Thermomucor indicae-seudaticae的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:64是从虫草棒束孢(Isaria farinosa)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:65是从SEQ ID NO:64推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:66是来自虫草棒束孢的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:67是从轮枝菌属物种(Lecanicillium sp.)WMM742分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:68是从SEQ ID NO:67推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:69是来自轮枝菌属物种WMM742的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:70是从柄孢壳属物种(Zopfiella sp.)t180-6分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:71是从SEQ ID NO:70推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:72是来自柄孢壳属物种t180-6的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:73是从黄色樟绒枝霉(Malbranchea flava)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:74是从SEQ ID NO:73推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:75是来自黄色樟绒枝霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:76是从多毛垂幕菇(Hypholoma polytrichi)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:77是从SEQ ID NO:76推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:78是从多毛垂幕菇分离的GH25溶菌酶的密码子优化的DNA。
SEQ ID NO:79是从SEQ ID NO:78推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:80是来自多毛垂幕菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:81是从弯头曲霉(Aspergillus deflectus)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:82是从SEQ ID NO:81推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:83是来自弯头曲霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:84是从Ascobolus stictoideus分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:85是从SEQ ID NO:84推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:86是来自Ascobolus stictoideus的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:87是从锥毛壳属物种(Coniochaeta sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:88是从SEQ ID NO:87推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:89是来自锥毛壳属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:90是从开裂轮层炭壳菌(Daldinia fissa)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:91是从SEQ ID NO:90推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:92是来自开裂轮层炭壳菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:93是从座坚壳属物种(Rosellinia sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:94是从SEQ ID NO:93推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:95是来自座坚壳属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:96是从粪盘菌属物种(Ascobolus sp.)ZY179分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:97是从SEQ ID NO:96推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:98是来自粪盘菌属物种ZY179的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:99是从Curreya sp.XZ2623分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:100是从SEQ ID NO:99推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:101是来自Curreya sp.XZ2623的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:102是从盾壳霉属物种(Coniothyrium sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:103是从SEQ ID NO:102推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:104是来自盾壳霉属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:105是从炭团菌属物种(Hypoxylon sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:106是从SEQ ID NO:105推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:107是来自炭团菌属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:108是从炭角菌科物种(Xylariaceae sp.)1653h分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:109是从SEQ ID NO:108推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:110是来自炭角菌科物种1653h的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:111是从炭团菌属物种(Hypoxylon sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:112是从SEQ ID NO:111推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:113是来自炭团菌属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:114是从帚状云南螺(Yunnania penicillata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:115是从SEQ ID NO:114推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:116是来自帚状云南螺的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:117是从白色侧齿霉(Engyodontium album)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:118是从SEQ ID NO:117推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:119是来自白色侧齿霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:120是从球芽泛普可尼亚菌(Metapochonia bulbillosa)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:121是从SEQ ID NO:120推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:122是来自球芽泛普可尼亚菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:123是从副榛色钩囊菌(Hamigera paravellanea)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:124是从SEQ ID NO:123推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:125是来自副榛色钩囊菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:126是从翠绿绿僵菌(Metarhizium iadini)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:127是从SEQ ID NO:126推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:128是来自翠绿绿僵菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:129是从嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:130是从SEQ ID NO:129推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:131是来自嗜热子囊菌的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:132是从罗斯曼枝穗霉(Clonostachys rossmaniae)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:133是从SEQ ID NO:132推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:134是来自罗斯曼枝穗霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:135是从棒状简枝霉(Simplicillium obclavatum)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:136是从SEQ ID NO:135推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:137是来自棒状简枝霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:138是从膨胀曲霉(Aspergillus inflatus)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:139是从SEQ ID NO:138推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:140是来自膨胀曲霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:141是从Paracremonium inflatum分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:142是从SEQ ID NO:141推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:143是来自Paracremonium inflatum的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:144是从韦斯特壳属物种(Westerdykella sp.)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:145是从SEQ ID NO:144推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:146是来自韦斯特壳属物种的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:147是从半球球盖菇(Stropharia semiglobata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:148是从SEQ ID NO:147推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:149是来自半球球盖菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:150是从半球球盖菇(Stropharia semiglobata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:151是从SEQ ID NO:150推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:152是来自半球球盖菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:153是从半球球盖菇(Stropharia semiglobata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:154是从SEQ ID NO:153推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:155是来自半球球盖菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:156是从Gelasinospora cratophora分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:157是从SEQ ID NO:156推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:158是来自Gelasinospora cratophora的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:159是如在WO 2013/076253中描述的来自嗜碱枝顶孢(Acremoniumalcalophilum)的野生型GH25溶菌酶的成熟氨基酸序列。
SEQ ID NO:160是保守基序YKNA。
SEQ ID NO:161是保守基序FGGW[S/T]。
SEQ ID NO:162是正向引物C8VRJ-F。
SEQ ID NO:163是反向引物C8VRJ-R。
SEQ ID NO:164是正向引物C8VRQ-F。
SEQ ID NO:165是反向引物C8VRQ-R。
SEQ ID NO:166是正向引物C8VS9-F。
SEQ ID NO:167是反向引物C8VS9-R。
SEQ ID NO:168是正向引物C8VSA-F。
SEQ ID NO:169是反向引物C8VSA-R。
SEQ ID NO:170是正向引物C8VSC-F。
SEQ ID NO:171是反向引物C8VSC-R。
SEQ ID NO:172是正向引物C8VRT-F。
SEQ ID NO:173是反向引物C8VRT-R。
SEQ ID NO:174是正向引物C8VS8-F。
SEQ ID NO:175是反向引物C8VS8-R。
SEQ ID NO:176是正向引物C122P5-F。
SEQ ID NO:177是反向引物C122P5-R。
SEQ ID NO:178是正向引物C6ZGC-F。
SEQ ID NO:179是反向引物C6ZGC-R。
SEQ ID NO:180是正向引物C6ZG7-FF。
SEQ ID NO:181是反向引物C6ZG7-R。
SEQ ID NO:182是正向引物C122PC-F。
SEQ ID NO:183是反向引物C122PC-R。
SEQ ID NO:184是正向引物C122PA-F。
SEQ ID NO:185是反向引物C122PA-R。
SEQ ID NO:186是正向引物C122P9-F。
SEQ ID NO:187是反向引物C122P9-R。
SEQ ID NO:188是正向引物WIN1054-F。
SEQ ID NO:189是反向引物WIN1054-R。
SEQ ID NO:190是正向引物WIN1065-F。
SEQ ID NO:191是反向引物WIN1065-R。
SEQ ID NO:192是正向引物WIN1057-F。
SEQ ID NO:193是反向引物WIN1057-R。
SEQ ID NO:194是正向引物WIN1058-F。
SEQ ID NO:195是反向引物WIN1058-R。
SEQ ID NO:196是正向引物KKSC0132-F。
SEQ ID NO:197是反向引物KKSC0132-R。
SEQ ID NO:198是正向引物KKSC0133-F。
SEQ ID NO:199是反向引物KKSC0133-R。
SEQ ID NO:200是正向引物KKSC0311-F。
SEQ ID NO:201是反向引物KKSC0311-R。
SEQ ID NO:202是正向引物KKSC0314-F。
SEQ ID NO:203是反向引物KKSC0314-R。
SEQ ID NO:204是正向引物KKSC0862-F。
SEQ ID NO:205是反向引物KKSC0862-R。
SEQ ID NO:206是正向引物KKSC0819-F。
SEQ ID NO:207是反向引物KKSC0819-R。
SEQ ID NO:208是正向引物KKSC0317-F。
SEQ ID NO:209是反向引物KKSC0317-F。
SEQ ID NO:210是正向引物F1。
SEQ ID NO:211是反向引物F1。
SEQ ID NO:212是正向引物F3。
SEQ ID NO:213是反向引物F3。
SEQ ID NO:214是正向结合引物。
SEQ ID NO:215是反向结合引物。
SEQ ID NO:216是质粒pDAu770的合成DNA构建体。
SEQ ID NO:217是从金针菇(Flammulina velutipes)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:218是从SEQ ID NO:217推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:219是从金针菇分离的GH25溶菌酶的密码子优化的DNA。
SEQ ID NO:220是从SEQ ID NO:219推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:221是来自金针菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:222是从Deconica coprophila分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:223是从SEQ ID NO:222推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:224是来自Deconica coprophila的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:225是从微小根毛霉分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:226是从SEQ ID NO:225推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:227是来自微小根毛霉的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:228是从半球球盖菇(Stropharia semiglobata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:229是从SEQ ID NO:228推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:230是来自半球球盖菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:231是从半球球盖菇(Stropharia semiglobata)分离的GH25溶菌酶的cDNA序列。
SEQ ID NO:232是从SEQ ID NO:231推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:233是来自半球球盖菇的成熟GH25溶菌酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:234是正向引物C8VSE-F。
SEQ ID NO:235是反向引物C8VSE-R。
附图说明
图1代表质粒pDAu770上包含的不同DNA特征的图谱。amy2基因座侧翼区(3’和5’)由白色框表示。对于pyrG、tef1和tpi基因的启动子区域，用绿色框表示启动子区。紫色框表示选择盒(针对氨苄青霉素抗性的ampR和针对乙酰胺选择的amdS)。对于niaD和amg基因的终止子区，用蓝色框表示终止子区。FLPase的编码区(sFLP)和pyrG基因的第一个外显子以橙色表示。pyrG内含子的5’区以灰色表示。质粒的复制起点由ORI表示。
图2是通过转化DNA(质粒pDAu724或衍生物或OverlapExtension PCR产物)转化宿主菌株DAu785的示意图。
上图代表amy2基因座，其中整合了由FRT-F和FRT-F3构成的FLP着陆垫、FLPase识别位点，以及amdS(乙酰胺)选择标记和FLPase表达盒。已经使用了分裂的PyrG标记，并且在amy2基因座处插入了pyrG标记的5'末端。
中间图代表转化DNA，特别是在通过FLPase介导的位点特异性重组整合在FLP着陆垫处整合的区域。质粒或PCR产物必须含有FRT-F和F3位点以及pyrG标记的剩余3'部分。
下图代表在FRT位点之间转化DNA的位点特异性整合后所得的amy2基因座。已经将amdS和FLP盒与GOI表达盒和重构完整功能选择标记的pyrG标记的3’部分进行了交换。
图3和图4是一系列图，每个图示出了实例56的结果：在0.625ppm、1,25ppm、2,5ppm和5ppm的酶浓度下，用于测定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性(OD405)的方法。每个OD测量值表示减去原始(背景)读数后的差值，并表示两次OD测量值的平均值。
这些图说明即使在非常低的剂量下，针对溶壁微球菌的细胞壁中发现的肽聚糖具有改善的溶菌酶活性的许多酶还针对约氏乳杆菌的细胞壁中发现的肽聚糖具有优异的溶菌酶活性。
图5和6代表一系列图，每个图示出了实例56的结果：在0.625ppm、1,25ppm、2,5ppm、5ppm、10和20ppm的酶浓度下，用于测定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性(OD405)的方法。每个OD测量值表示减去原始(背景)读数后的差值，并表示两次OD测量值的平均值。
这些图说明即使在非常低的剂量下，针对溶壁微球菌的细胞壁中发现的肽聚糖具有改善的溶菌酶活性的许多酶还针对约氏乳杆菌的细胞壁中发现的肽聚糖具有优异的溶菌酶活性。
具体实施方式
动物：术语“动物”是指除人以外的任何动物。动物的实例是单胃动物，包括但不限于猪(包括但不限于仔猪、成长猪、和母猪)；家禽，如火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽子(包括乳鸽)和鸡(包括但不限于肉用仔鸡(在此称为肉鸡)、小鸡、下蛋鸡(在此称为蛋鸡))；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)，甲壳类动物(包括但不限于河虾和对虾)，以及鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、bocachico、鲤科鱼、鲶鱼、cachama、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、guapote、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、pearlspot、pejerrey、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)。
动物饲料：术语“动物饲料”是指适合于或打算用于由动物摄入的任何化合物、制剂或混合物。单胃动物的动物饲料通常包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)，而反刍动物的动物饲料通常包括草料(包括粗粮和青贮)，并且可以进一步包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。
抗微生物活性：在此将术语“抗微生物活性”定义为一种杀死微生物或抑制微生物的生长的活性，这些微生物是例如藻类、古细菌、细菌、真菌和/或原生动物。抗微生物活性可以是例如意在杀死细菌的杀菌的或意在阻止细菌的生长的抑菌的。抗微生物活性可以包括催化在肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸与N-乙酰-D-葡糖胺残基之间以及在壳糊精中的N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解。抗微生物活性还可以包括溶菌酶结合在微生物的表面并抑制其生长。抗微生物作用还可以包括通过抑制或减少细菌毒素并且通过噬菌素作用使用本发明的溶菌酶作为免疫刺激剂激活细菌自溶素。
体增重：术语“体增重”意指在给定时间段期间动物的活重的增加，例如从第1天到第21天的体重增加。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
浓缩物：术语“浓缩物”意指具有高蛋白和能量浓度的饲料，例如鱼粉、糖蜜、低聚糖、高粱、种子和谷物(例如来自玉米、燕麦、黑麦、大麦、小麦的整体或由破碎、碾磨等制备的)、油籽滤饼(例如从棉籽、红花、向日葵、大豆(例如大豆粉)、油菜籽/卡诺拉、花生或落花生)、棕榈仁饼、酵母衍生材料和酒糟(例如湿酒糟(WDS)和具有可溶物的干酒糟(DDGS))。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。这类控制序列包括但不限于前导序列、多聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
欧洲生产效率因子(EPEF)：欧洲生产效率因子是比较动物性能的一种方式。这种单一数字有助于比较农场内部和农场之间的性能，并可用于评估环境、气候和管理变量。EPEF计算为[(存活率(％)×活体重(kg))/(耗竭时的年龄(天)×FCR)]×100，其中存活率是出栏时存活的动物的百分比，活体重是出栏时动物的平均体重，耗竭年龄是出栏时动物的年龄，并且FCR是出栏时的饲料转化率。
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
饲料转化率(FCR)：FCR是动物将饲料质量转化为期望输出增加的效率的量度。饲养肉用动物-如猪、家禽和鱼-输出是动物获得的质量。具体来说，FCR是遍及指定的时间段内，按照饲料摄入量除以体重增加计算的。FCR的改善意指FCR值的降低。FCR改善2％意为FCR降低2％。
饲料效率：术语“饲料效率”意指当动物在一段时间内被任意喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的体重增加量。“增加的饲料效率”意味着根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比，每单位饲料摄入的增加的增重。
草料：如在此定义的术语“草料”还包括粗粮。草料是新鲜的植物物料，例如来自草料植物(禾草)和其他草料植物(海草、发芽谷物和豆类植物)或其任何组合的干草和青贮。草料植物的实例是紫花苜蓿(Alfalfa、lucerne)、百脉根、芸苔属植物(例如，羽衣甘蓝、油菜籽(卡诺拉(canola))、芜菁甘蓝(瑞典芜菁)、萝卜)、三叶草(例如，杂三叶、红三叶、地三叶、白三叶)、禾草(例如，百慕大草、雀麦、伪燕麦草、羊茅、石南草(heath grass)、草地早熟禾、鸭茅(orchard grass)、黑麦草、梯牧草(Timothy-grass))、玉米(玉蜀黍)、小米、大麦、燕麦、黑麦、高粱、大豆和小麦和蔬菜(如甜菜)。饲草进一步包括来自谷物生产的作物残余物(如玉米秸秆；来自小麦、大麦、燕麦、黑麦和其他谷物的秸秆)；来自蔬菜像甜菜缨(beettop)的残余物；来自油籽生产像来自大豆、油菜籽和其他豆科作物的茎和叶的残余物；以及来自用于动物或人消耗的谷物精制或来自燃料生产或其他行业的部分。
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有溶菌酶活性。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少90％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少186个氨基酸、SEQID NO:18的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少186个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少183个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少183个氨基酸、SEQID NO:53的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少187个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少181个氨基酸、SEQID NO:88的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少180个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少180个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少185个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少181个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少181个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少185个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少193个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少192个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少182个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少194个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少187个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少186个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少186个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少187个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:232的至少186个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少186个氨基酸。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少92％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少190个氨基酸、SEQID NO:18的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少190个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少187个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少187个氨基酸、SEQID NO:53的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少191个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少185个氨基酸、SEQID NO:88的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少184个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少184个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少189个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少185个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少185个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少189个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少197个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少196个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少186个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少198个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少191个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少190个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少190个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少191个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:232至少190个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少190个氨基酸。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少94％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少194个氨基酸、SEQID NO:18的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少194个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少191个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少191个氨基酸、SEQID NO:53的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少195个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少189个氨基酸、SEQID NO:88的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少188个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少188个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少193个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少189个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少189个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少193个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少202个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少201个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少190个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少195个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少194个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少194个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少195个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:232的至少194个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少194个氨基酸。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少96％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少198个氨基酸、SEQID NO:18的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少198个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少195个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少195个氨基酸、SEQID NO:53的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少199个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少208个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少208个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少193个氨基酸、SEQID NO:88的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少192个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少192个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少197个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少193个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少193个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少197个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少206个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少206个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少208个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少208个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少205个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少194个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少207个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少199个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少198个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少198个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少199个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:232至少198个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少198个氨基酸。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少98％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少202个氨基酸、SEQID NO:18的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少202个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少199个氨基酸、SEQID NO:53的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少197个氨基酸、SEQID NO:88的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少196个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少196个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少201个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少197个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少197个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少201个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少210个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少210个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少209个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少209个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少211个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少202个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少202个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少202个氨基酸、SEQ ID NO:232的至少202个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少202个氨基酸。
在一方面，该片段包含成熟多肽的至少99％的长度，例如SEQ ID NO:2的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:3的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:5的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:6的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:8的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:9的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:12的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:14的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:15的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:17的至少204个氨基酸、SEQID NO:18的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:20的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:21的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:24的至少204个氨基酸、SEQ IDNO:26的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:29的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:30的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:32的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:33的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:36的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:38的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:41的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:45的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少215个氨基酸、SEQ ID NO:48的至少215个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少201个氨基酸、SEQ ID NO:51的至少201个氨基酸、SEQID NO:53的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:54的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少206个氨基酸、SEQ ID NO:57的至少206个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少205个氨基酸、SEQ IDNO:60的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:63的至少207个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:66的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:69的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:72的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:74的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:75的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:77的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:79的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:80的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:82的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:83的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:85的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:86的至少199个氨基酸、SEQID NO:88的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:89的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:91的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:92的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:94的至少198个氨基酸、SEQ IDNO:95的至少198个氨基酸、SEQ ID NO:97的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:98的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:100的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:101的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:103的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:104的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:106的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:107的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:109的至少199个氨基酸、SEQ IDNO:110的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:112的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:113的至少199个氨基酸、SEQ ID NO:115的至少203个氨基酸、SEQ ID NO:116的至少203个氨基酸、SEQ IDNO:118的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:119的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:121的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:122的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:124的至少212个氨基酸、SEQ IDNO:125的至少212个氨基酸、SEQ ID NO:127的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:128的至少214个氨基酸、SEQ ID NO:130的至少211个氨基酸、SEQ ID NO:131的至少211个氨基酸、SEQ IDNO:133的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:134的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:136的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:137的至少200个氨基酸、SEQ ID NO:139的至少213个氨基酸、SEQ IDNO:140的至少213个氨基酸、SEQ ID NO:142的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:143的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:145的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:146的至少205个氨基酸、SEQ IDNO:148的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:149的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:151的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:152的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:154的至少204个氨基酸、SEQ IDNO:155的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:157的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:158的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:218的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:220的至少204个氨基酸、SEQ IDNO:221的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:223的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:224的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:226的至少205个氨基酸、SEQ ID NO:227的至少205个氨基酸、SEQ IDNO:229的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:230的至少204个氨基酸、SEQ ID NO:232的至少204个氨基酸、或SEQ ID NO:233的至少204个氨基酸。
融合多肽：术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。融合多肽可以进一步包含两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995，Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins[蛋白质]；Structure,Function,and Genetics[结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens，2003，Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
杂合多肽：术语“杂合多肽”是指包含来自两个或更多个多肽的结构域的多肽，例如，来自一个多肽的结合结构域和来自另一个多肽的催化结构域。结构域可以在N末端或C末端融合。
分离的：术语“分离的”是指以在自然界中不存在的形式的物质或处于在自然界中不存在该物质的环境中的该物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码所述物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码所述物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。
溶菌酶活性：术语“溶菌酶活性”意指肽聚糖中N-乙酰胞壁酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基之间或壳糊精中N-乙酰-D-葡糖胺残基之间的1,4-β-键的水解，导致溶菌作用。溶菌酶属于EC 3.2.1.17酶类。溶菌酶活性通常通过溶菌酶对滕黄微球菌(Micrococcus luteus)ATCC 4698的裂解作用来测量。在适当的实验条件下，这些变化与培养基中溶菌酶的量成比例(c.f.联合国粮食及农业组织联合食品添加剂规格综合纲要的INS1105(www.fao.org))。出于本发明的目的，根据描述于实例1中的还原末端测定(“溶菌酶活性的测定”)来测定溶菌酶活性。如果多肽示出针对藤黄微球菌ATCC 4698的活性，则该多肽具有溶菌酶活性，并且特别地，与现有技术的SEQ ID NO:159的溶菌酶相比，本发明的溶菌酶示出改善的活性，其中溶菌酶活性如实例1中所述测定。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:2的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:5的氨基酸1至201，并且SEQ ID NO:5的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至201。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至201，并且SEQ ID NO:8的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:9的氨基酸1至201。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至203，并且SEQ ID NO:11的氨基酸-21至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:12的氨基酸1至203。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:14的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:15的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:17的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:17的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:18的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:20的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:21的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:23的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:23的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:24的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:26的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:26的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:27的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:29的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:29的氨基酸-22至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:30的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:32的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:32的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:33的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:35的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:35的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:36的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:38的氨基酸1至206，并且SEQ ID NO:38的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:39的氨基酸1至206。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:41的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:41的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:42的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:44的氨基酸1至216，并且SEQ ID NO:44的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:45的氨基酸1至216。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:47的氨基酸1至218，并且SEQ ID NO:47的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:48的氨基酸1至218。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:50的氨基酸1至204，并且SEQ ID NO:50的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:51的氨基酸1至204。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:53的氨基酸1至203，并且SEQ ID NO:53的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:54的氨基酸1至203。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:56的氨基酸1至209，并且SEQ ID NO:56的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:57的氨基酸1至209。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:59的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:59的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:60的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:62的氨基酸1至210，并且SEQ ID NO:62的氨基酸-22至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:63的氨基酸1至210。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:65的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:65的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:66的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:68的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:68的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:69的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:71的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:71的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:72的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:74的氨基酸1至217，并且SEQ ID NO:74的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:75的氨基酸1至217。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:77的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:77的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:80的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:82的氨基酸1至201，并且SEQ ID NO:82的氨基酸-15至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:83的氨基酸1至201。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:85的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:85的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:86的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:88的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:88的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:89的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:91的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:91的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:92的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:94的氨基酸1至201，并且SEQ ID NO:94的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:95的氨基酸1至201。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:97的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:97的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:98的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:100的氨基酸1至206，并且SEQ ID NO:100的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:101的氨基酸1至206。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:103的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:103的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:104的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:106的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:106的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:107的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:109的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:109的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:110的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:112的氨基酸1至202，并且SEQ ID NO:112的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:113的氨基酸1至202。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:115的氨基酸1至206，并且SEQ ID NO:115的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:116的氨基酸1至206。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:118的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:118的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:119的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:121的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:121的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:122的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:124的氨基酸1至215，并且SEQ ID NO:124的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:125的氨基酸1至215。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:127的氨基酸1至217，并且SEQ ID NO:127的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:128的氨基酸1至217。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:130的氨基酸1至214，并且SEQ ID NO:130的氨基酸-16至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:131的氨基酸1至214。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:133的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:133的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:134的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:136的氨基酸1至203，并且SEQ ID NO:136的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:137的氨基酸1至203。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:139的氨基酸1至216，并且SEQ ID NO:139的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:140的氨基酸1至216。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:142的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:142的氨基酸-21至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:143的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:145的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:145的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:146的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:148的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:148的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:149的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:151的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:151的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:152的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:154的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:154的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:155的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:157的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:157的氨基酸-18至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:158的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:218的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:218的氨基酸-17至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:221的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:223的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:223的氨基酸-19至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:224的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:226的氨基酸1至208，并且SEQ ID NO:226的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:227的氨基酸1至208。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:229的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:229的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:230的氨基酸1至207。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:232的氨基酸1至207，并且SEQ ID NO:232的氨基酸-20至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:233的氨基酸1至207。
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有溶菌酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以原本不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
获得自或可获得自：术语“获得自或可获得自”是指多肽可以在来自特定分类等级的生物中发现。在一个实施例中，该多肽获得自或可获得自真菌界，其中术语界是分类等级。在一个优选的实施例中，该多肽获得自或可获得自子囊菌门，其中术语门是分类等级。在另一个优选的实施例中，该多肽获得自或可获得自盘菌亚门，其中亚门是分类等级。
如果多肽的分类等级未知，则它可以容易地由本领域普通技术人员通过进行多肽的BLASTP检索(使用例如国家生物技术信息中心(NCIB)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将其与最接近的同系物进行比较来确定。作为已知多肽的片段的未知多肽被认为是属于相同的分类物种。包括在多达10个位置中的取代、缺失和/或插入的未知天然多肽或人工变体被认为来自与已知多肽相同的分类物种。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下的构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列引导该编码序列的表达。
粗粮：术语“粗粮”意指具有高水平纤维的干植物物料，例如来自种子和谷物以及作物残余物(例如秸秆、干椰肉(copra)、稻草、谷壳、甜菜废料)的纤维、麸、苞叶。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人，2000，TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。Needle标注的“最长同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：
(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,见上文)来确定两个脱氧核苷酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，Rice等人,2000,见上文)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。Needle标注的“最长同一性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比同一性，并且如下计算：
(同一的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指具有从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的一个或多个(例如，若干个)核苷酸的多核苷酸；其中子序列编码具有溶菌酶活性的片段。
基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％和至多0.5％的与其天然或重组地相关的其他多肽材料的制剂。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。这可以例如通过熟知的重组方法或通过经典纯化方法制备该多肽来实现。
变体：术语“变体”意指包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个(若干个)氨基酸残基的改变(即，取代、插入、和/或缺失)的具有溶菌酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占用某一位置的氨基酸；缺失意指去除占用某一位置的氨基酸；并且插入意指邻近于并且紧跟着占据该位置的氨基酸之后添加1、2、或3个氨基酸。
在一方面，根据本发明的溶菌酶变体可以包含从1至5；从1至10；从1至15；从1至20；从1至25；从1至30；从1至35；从1至40；从1至45；或从1-50，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、或50个改变，并且具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。
在一方面，本发明的变体具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的变体具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
命名法
出于本发明的目的，命名法[E/Q]是指在该位置的氨基酸可以是谷氨酸(Glu，E)或谷氨酰胺(Gln，Q)。同样，命名[V/G/A/I]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val，V)、甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)或异亮氨酸(Ile，I)，对于如本文所述的其他组合，依次类推。除非进一步另有限制，否则氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
在细菌细胞壁中水解肽聚糖的方法
在第一方面，本发明涉及水解细菌细胞壁中的肽聚糖的方法，该方法包括用一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽处理细菌细胞，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％，例如至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，一种或多种GH25多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ ID NO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQ ID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
在优选的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
包含具有溶菌酶活性的多肽的颗粒
在第二方面，本发明涉及包含一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽的颗粒，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％，例如至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，一种或多种GH25多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ ID NO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQ ID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
在第二方面的一个实施例中，颗粒包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素组成的列表，优选选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
在第二方面的任一部分的进一步实施例中，该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣。在一个优选的实施例中，该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选选自下组，该组由以下组成：植酸酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
在一个实施例中，该颗粒包含一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
具有溶菌酶活性的多肽
在第三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:3具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:3具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:3长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:3的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置的一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:3中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在第三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
这些氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一官能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质]，学术出版社(Academic Press)，纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单一丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的溶菌酶活性以识别对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽或融合多肽。
在第四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽相差多达22个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、或22个氨基酸。
在第四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:6具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:6的成熟多肽相差多达22个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、或22个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:6具有至少89％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ IDNO:6具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:6具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:5的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:6长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至201或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:6的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于22个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个。在实施例中，在SEQ ID NO:6中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQ ID NO:6中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:6中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在第五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:9具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:9的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少81％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:9具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:9长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸1至201或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:9的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:9中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:9中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:9中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:12具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:12的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:12具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:12长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至203或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:10的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:12的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:12中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQ ID NO:12中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:12中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第六方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少97％，例如至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达6个氨基酸，例如1、2、3、4、5、或6个氨基酸。
在第七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:15具有至少97％，例如至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:15的成熟多肽相差多达6个氨基酸，例如1、2、3、4、5、或6个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少97％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少98％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:15具有至少99％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:15长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少97％，例如至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:15的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于6个，例如1、2、3、4、5、或6个。在实施例中，SEQ ID NO:15中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于6个，例如1、2、3、4、5、或6个。在一个实施例中，SEQ IDNO:15中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于6个，例如，1、2、3、4、5、或6个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:15中取代(优选保守取代)的数目不多于6个，例如1、2、3、4、5、或6个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:18具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:18的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:18具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:17的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:18长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:16的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:18的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:18中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:18中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:18中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第九方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:24具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:24的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:24具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:23的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:24长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:22的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:24的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:24中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:24中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:24中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:24中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第九方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:27具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:27的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:27具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:26的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:27长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:27的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:27中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQ ID NO:27中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:27中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第十方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第十一方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在第十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:30具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:30的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:30具有至少83％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:30具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:30具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:30具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:29的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:30长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:28的成熟多肽编码序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:30的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:30中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过33，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个。在实施例中，在SEQ ID NO:30中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:30中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:30中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十一方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十二方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:33具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:33的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:33具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:32的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:33长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:33的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:31的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:33的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:33中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:33中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:33中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:33中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十二方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:36具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:36的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:36具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:35的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:36长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:36的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:34的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:36的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:36中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:36中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:36中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:36中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在第十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:39具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:39的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少83％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:39具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:38的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:39长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至206或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:39的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过33，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个。在实施例中，在SEQ ID NO:39中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:39中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:39中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:42具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:42的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:42具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:41的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:42长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:42的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:42中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:42中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQ ID NO:42中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:42中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第十五方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽相差多达30个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸。
在第十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:45具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:45的成熟多肽相差多达30个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:45具有至少86％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:45具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:45具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:44的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:45长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:45的氨基酸1至216或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:45的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:45中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于30个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个。在实施例中，在SEQ ID NO:45中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，在SEQID NO:45中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:45中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:47的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:47的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:48具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:48的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:48具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:48具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:48具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:48具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:47的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:48长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:48的氨基酸1至218或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:48的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:48中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:48中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:48中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:48中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:50的成熟多肽具有至少92％，例如至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:50的成熟多肽相差多达16个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16个氨基酸。
在第十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:51具有至少92％，例如至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:51的成熟多肽相差多达16个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:51具有至少92％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:51具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:50的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:51长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:51的氨基酸1至204或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列具有至少92％，例如至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:51的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:51中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于16个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16个。在实施例中，在SEQ ID NO:51中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:51中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:51中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十九方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:53的成熟多肽具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:53的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在第十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:54具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:54的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:54具有至少81％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:54具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:54具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:54具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:53的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:54长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:54的氨基酸1至203或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:54的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:54中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:54中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:54中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:54中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第十九方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:56的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:57具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:57的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:57具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:57具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:57具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:57具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:56的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:57长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:57的氨基酸1至209或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:57的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:57中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:57中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:57中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:57中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第二十方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第二十一方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:59的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:59的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:60具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:60的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:60具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:60具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:60具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:60具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:59的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:60长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:60的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:58的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:60的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:60中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:60中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:60中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:60中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十一方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十二方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:62的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:62的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:63具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:63的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:63具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:63具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:63具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:63具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:62的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:63长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:63的氨基酸1至210或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:61的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十二方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:63的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:63中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:63中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:63中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:63中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十二方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第二十二方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第二十三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:65的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:65的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:66具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:66的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:66具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:66具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:66具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:66具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:65的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:66长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:66的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:64的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:66的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:66中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:66中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:66中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:66中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第二十三方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第二十四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:68的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:68的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:69具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:69的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:69具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:69具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:69具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:69具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:68的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:69长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:69的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:67的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:69的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:69中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:69中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:69中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:69中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:71的成熟多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:71的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在第二十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:72具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:72的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:72具有至少84％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:72具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:72具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:72具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:71的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:72长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:72的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:72的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:72中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过33，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个。在实施例中，在SEQ IDNO:72中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:72中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:72中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:74的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:74的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:75具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:75的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:75具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:75具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:75具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:75具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:74的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:75长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:75的氨基酸1至217或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:75的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:75中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:75中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:75中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:75中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:77的成熟多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:77的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在第二十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:79的成熟多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:79的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在第二十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:80具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:80相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:80具有至少84％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:80具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:80具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:80具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:77的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:79的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:80长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:80的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:80的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:80中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过33，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个。在实施例中，在SEQ IDNO:80中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:80中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:80中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第二十七方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第二十八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:82的成熟多肽具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:82的成熟多肽相差多达36个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个氨基酸。
在第二十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:83具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:83的成熟多肽相差多达36个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:83具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:83具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:83具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:83具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:82的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:83长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:83的氨基酸1至201或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:81的成熟多肽编码序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:83的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:83中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于36个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个。在实施例中，在SEQ ID NO:83中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:83中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:83中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十九方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:85的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:85的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第二十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:86具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:86的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:86具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:86具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:86具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:86具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:85的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:86长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:86的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:84的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十九方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第二十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:86的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:86中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:86中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:86中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:86中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二十九方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:88的成熟多肽具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:88的成熟多肽相差多达28个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28个氨基酸。
在第三十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQIDNO:89具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:89的成熟多肽相差多达28个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:89具有至少86％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:89具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:89具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:88的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:89长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:89的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:87的成熟多肽编码序列具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:89的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:89中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于28个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28个。在实施例中，在SEQ ID NO:89中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:89中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:89中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十一方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:91的成熟多肽具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:91的成熟多肽相差多达36个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个氨基酸。
在第三十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:92具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:92的成熟多肽相差多达36个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:92具有至少82％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:92具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:92具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:92具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:91的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:92长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:92的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:90的成熟多肽编码序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十一方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:92的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:92中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于36个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36个。在实施例中，在SEQ ID NO:92中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:92中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:92中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十一方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十二方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:94的成熟多肽具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:94的成熟多肽相差多达12个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个氨基酸。
在第三十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:95具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:95的成熟多肽相差多达12个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:95具有至少94％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:95具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:94的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:95长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:95的氨基酸1至201或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:93的成熟多肽编码序列具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十二方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:95的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:95中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于12个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个。在实施例中，在SEQ ID NO:95中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:95中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:95中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十二方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:97的成熟多肽具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:97的成熟多肽相差多达12个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个氨基酸。
在第三十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:98具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:98的成熟多肽相差多达12个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:98具有至少94％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:98具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:97的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:98长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:98的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:96的成熟多肽编码序列具有至少94％，例如至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:98的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:98中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于12个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个。在实施例中，在SEQ ID NO:98中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:98中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:98中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:100的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:100的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第三十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:101具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:101的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:101具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:101具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:101具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:101具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:100的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:101长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:101的氨基酸1至206或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:99的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:101的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:101中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:101中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:101中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:101中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:103的成熟多肽具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:103的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在第三十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:104具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:104的成熟多肽相差多达38个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:104具有至少81％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:104具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:104具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:104具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:103的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:104长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:104的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:102的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:104的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:104中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于38个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、或38个。在实施例中，在SEQ ID NO:104中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:104中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:104中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:106的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:106的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第三十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:107具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:107的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:107具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:107具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:107具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:107具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:106的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:107长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:107的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:105的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:107的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:107中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:107中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:107中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:107中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:109的成熟多肽具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:109的成熟多肽相差多达24个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24个氨基酸。
在第三十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:110具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:110的成熟多肽相差多达24个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:110具有至少88％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:110具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:110具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:109的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:110长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:110的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:108的成熟多肽编码序列具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:110的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:110中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于24个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24个。在实施例中，在SEQ ID NO:110中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:110中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:110中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:112的成熟多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:112的成熟多肽相差多达30个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸。
在第三十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:113具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:113的成熟多肽相差多达30个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:113具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:113具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:113具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:112的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:113长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:113的氨基酸1至202或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:111的成熟多肽编码序列具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:113的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:113中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于30个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个。在实施例中，在SEQ ID NO:113中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQID NO:113中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:113中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十九方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:115的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:115的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第三十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:116具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:116的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:116具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:116具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ IDNO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:116具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:116具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:115的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:116长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:116的氨基酸1至206或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:114的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三十九方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第三十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:116的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:116中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:116中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:116中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:116中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第三十九方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:118的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:118的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:119具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:119的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:119具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:119具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:119具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:119具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:118的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:119长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:119的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:117的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:119的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:119中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:119中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:119中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:119中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十一方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:121的成熟多肽具有至少96.5％，例如至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:121的成熟多肽相差多达7个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、或7个氨基酸。
在第四十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:122具有至少96.5％，例如至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:122的成熟多肽相差多达7个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、或7个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:122具有至少96.5％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:121的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:122长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:122的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:120的成熟多肽编码序列具有至少96.5％，例如至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十一方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:122的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:122中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过7，例如1、2、3、4、5、6或7个。在一个实施例中，SEQID NO:122中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于7个，例如，1、2、3、4、5、6、或7个。在一个另外的实施例中，在SEQ ID NO:122中取代，优选保守取代的数目不超过7，例如1、2、3、4、5、6或7个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十一方面的实施例中，该变体具有至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性的SEQ ID NO:159，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十二方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:124的成熟多肽具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:124的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:125具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:125的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:125具有至少81％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:125具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:125具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:125具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:124的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:125长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:125的氨基酸1至215或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在四十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:123的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十二方面的实施例中，该多肽具有至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性的SEQ ID NO:159，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:125的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:125中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:125中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:125中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:125中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十二方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:127的成熟多肽具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:127的成熟多肽相差多达23个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、或23个氨基酸。
在第四十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:128具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:128的成熟多肽相差多达23个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、或23个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:128具有至少89％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:128具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:128具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:127的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:128长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:128的氨基酸1至217或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:126的成熟多肽编码序列具有至少89％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:128的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:128中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于23个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、或23个。在实施例中，在SEQ ID NO:128中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:128中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:128中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:130的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:130的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:131具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:131的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:131具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:131具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:131具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:131具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:130的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:131长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:131的氨基酸1至214或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:129的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:131的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:131中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:131中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:131中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:131中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:133的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:133的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:134具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:134的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:134具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:134具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:134具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:134具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:133的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:134长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:134的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:132的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:134的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:134中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:134中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:134中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:134中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:136的成熟多肽具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:136的成熟多肽相差多达20个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个氨基酸。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:137具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:137的成熟多肽相差多达20个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:137具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:137具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:136的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:137长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:137的氨基酸1至203或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:135的成熟多肽编码序列具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:137的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:137中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于20个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在实施例中，在SEQ ID NO:137中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:137中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ IDNO:137中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:139的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:139的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:140具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:140的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:140具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:140具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:140具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:140具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:139的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:140的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:140长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:140的氨基酸1至216或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:138的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:140的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:140中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:140中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:140中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:140中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:142的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:142的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:143具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:143的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:143具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:143具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:143具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:143具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:142的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:143的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:143长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:143的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:141的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:143的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:143中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:143中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:143中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:143中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十九方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:145的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:145的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第四十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:146具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:146的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:146具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:146具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:146具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:146具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:145的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:146的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:146的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:146的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:146长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:146的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:144的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十九方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十九方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:146的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:146中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:146中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:146中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:146中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十九方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:148的成熟多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:148的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在第五十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ IDNO:149具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:149的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:149具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:149具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:149具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:148的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:149的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:149长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:149的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:147的成熟多肽编码序列具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:149的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:149中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于31个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个。在实施例中，在SEQ ID NO:149中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:149中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:149中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十一方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:151的成熟多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:151的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在第五十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:152具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:152的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:152具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:152具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:152具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:151的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:152的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:152长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:152的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:150的成熟多肽编码序列具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十一方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十一方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:152的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:152中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于31个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个。在实施例中，在SEQ ID NO:152中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:152中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:152中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十一方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十一方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十二方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:154的成熟多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:154的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在第五十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:155具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:155的成熟多肽相差多达33个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、或33个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:155具有至少84％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:155具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:155具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:155具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:154的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:155的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:155长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:155的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:153的成熟多肽编码序列具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十二方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十二方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:155的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:155中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过33，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33个。在实施例中，在SEQ IDNO:155中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:155中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:155中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十二方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十二方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十三方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:157的成熟多肽具有至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:157的成熟多肽相差多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸。
在第五十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:158具有至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:158的成熟多肽相差多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:158具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:157的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:158的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:158长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:158的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:156的成熟多肽编码序列具有至少95％，例如至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十三方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十三方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:158的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:158中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:158中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:158中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十三方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十四方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:218的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:218的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在第五十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:220的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:220的成熟多肽相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在第五十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:221具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:221相差多达35个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:221具有至少83％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:221具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:221具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:221具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:218的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:220的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:221长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:221的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:217的成熟多肽编码序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十四方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十四方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:221的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:221中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于35个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、或35个。在实施例中，在SEQ ID NO:221中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:221中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:221中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十四方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:136的成熟多肽具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:136的成熟多肽相差多达20个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个氨基酸。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:137具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:137的成熟多肽相差多达20个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:137具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:137具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:136的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:137长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:137的氨基酸1至203或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:135的成熟多肽编码序列具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第四十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:137的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:137中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于20个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在实施例中，在SEQ ID NO:137中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:137中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ IDNO:137中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第四十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十五方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:223的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:223的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第五十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:224具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:224的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:224具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:224具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:224具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:224具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:223的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:224的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:224的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:224的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:224长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:224的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:222的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十五方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十五方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:224的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:224中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:224中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:224中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:224中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十五方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十五方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十六方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:226的成熟多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:226的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在第五十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:227具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:227的成熟多肽相差多达40个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:227具有至少80％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:227具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:227具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:227具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:226的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:227长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:227的氨基酸1至208或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:225的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十六方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十六方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:227的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，在SEQ ID NO:227中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过40，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个。在实施例中，在SEQ ID NO:227中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:227中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:227中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十六方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十六方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十七方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:229的成熟多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:229的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在第五十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:230具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:230的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:230具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:230具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:230具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:229的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:230长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:230的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:228的成熟多肽编码序列具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十七方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十七方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:230的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:230中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于31个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个。在实施例中，在SEQ ID NO:230中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:230中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:230中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十七方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十七方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
在第五十八方面，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:232的成熟多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:232的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在第五十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的多肽，这些多肽与SEQID NO:233具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:233的成熟多肽相差多达31个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个氨基酸。
在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:233具有至少85％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:233具有至少90％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。在一个实施例中，本发明涉及具有溶菌酶活性并且与SEQ ID NO:233具有至少95％的序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:159的溶菌酶活性的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％或至少400％。
在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:232的成熟多肽或由其组成。在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列以及多达10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有SEQ ID NO:233长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:233的氨基酸1至207或由其组成。在实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有溶菌酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:231的成熟多肽编码序列具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五十八方面的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在第五十八方面的延续中，本发明涉及具有溶菌酶活性的SEQ ID NO:233的变体，这些变体包含在一个或多个(例如，若干个)位置处的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在实施例中，SEQ ID NO:233中包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不多于31个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、或31个。在实施例中，在SEQ ID NO:233中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一个实施例中，SEQ ID NO:233中取代和/或缺失和/或插入的数目不多于10个，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:233中取代(优选保守取代)的数目不多于10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在本发明的第三方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第五十八方面的实施例中，该变体具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在实施例中，第五十八方面的多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)。
分类学和结构家族
在一个实施例中，该GH25多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:27、SEQID NO:42、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ IDNO:233。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的伞菌目(Agaricales)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的伞菌目，优选分类学上的球盖菇科。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的球盖茹科(Strophariaceae)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:155、SEQID NO:224、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的座囊菌纲，优选分类学上的格孢腔目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的座囊菌纲(Dothideomycetes)，优选地分类学上的格孢腔目(Pleosporales)并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104和SEQID NO:146。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上散囊菌纲而非获得自或可获得自分类学上烟曲霉菌属。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的散囊菌纲(Eurotiomycetes)，而非获得自或可获得自分类学上的烟曲霉(Aspergillusfumigatus)属并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:131和SEQ IDNO:140。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的散囊菌目而非获得自或可获得自分类学上的烟曲霉菌属。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的散囊菌目而非获得自或可获得自分类学上的烟曲霉属并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:125、SEQ IDNO:131和SEQ ID NO:140。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的曲霉科而非获得自或可获得自分类学上的烟曲霉菌属。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的曲霉科，而非获得自或可获得自分类学上的烟曲霉属并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:125和SEQ ID NO:140。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的盘菌纲，优选分类学上的盘菌目，更优选分类学上的粪盘菌科。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的盘菌纲(Pezizomycetes)，优选地分类学上的盘菌目，更优选地分类学上的粪盘菌科(Ascobolaceae)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:98。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的毛孢壳目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的毛孢壳目，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:89。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的肉座菌目而非获得自或可获得自分类学上的里氏木霉属。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的肉座菌目(Hypocreales)，而非获得自或可获得自分类学上的里氏木霉(Trichoderma reesei)属，并且选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:122、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137和SEQ ID NO:143。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的麦角菌科。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的麦角菌科(Clavicipitaceae)并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:128。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的虫草菌科。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的虫草菌科(Cordycipitaceae)并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:66、SEQID NO:69和SEQ ID NO:137。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的小囊菌目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的小囊菌目(Microascales)并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:16。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的粪壳菌目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的粪壳菌目，并且选自下组，该组选自：SEQID NO:30、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:158。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的粪壳菌目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的粪壳菌目，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:158。
在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的炭角菌目。在一个实施例中，该GH25多肽获得自或可获得自分类学上的炭角菌目(Xylariales)并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:113。
具有溶菌酶活性的多肽的来源
本发明的具有溶菌酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面，获自给定来源的多肽被分泌到细胞外。
该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自曲霉属或来自曲霉属新物种XZ2609的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自粪壳菌目、或来自毛壳菌科、或来自毛壳菌属、或来自毛壳菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自粪壳菌目、或来自毛球壳科(Lasiosphaeriaceae)、或来自枝鼻菌属或来自珠芽枝鼻菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自虫草菌科、或来自虫草属、或来自深红虫草物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自伞菌纲的真菌的例如来自伞菌目、或来自球盖菇科、或来自菇属或来自多毛垂幕菇物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自虫草菌科、或来自棒束孢属或来自虫草棒束孢物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自虫草菌科、或来自轮枝菌属或来自轮枝菌属物种WMM742的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自绒枝霉属或来自黄色樟绒枝霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自爪甲团囊菌科、或来自爪甲团囊菌属、或来自马爪甲团囊菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自麦角菌科、或来自拟青霉属、或来自拟青霉属物种XZ2658的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自青霉属或来自桔青霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自青霉属或来自桔青霉物种或青霉属物种'qii'的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自炭角菌目、或来自炭角菌科、或来自孔座壳菌属或来自点孔座壳物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自荚孢腔菌科(Sporormiaceae)、或来自Pycnidiophora属或来自Pycnidiophora cf.dispera物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自毛霉目的真菌的例如来自峭囊霉科(Lichtheimiaceae)、或来自根毛霉属或来自微小根毛霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自荚孢腔菌科、或来自荚孢腔菌属、或来自Sporormia fimetaria物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自毛霉目的真菌的例如来自峭囊霉科、或来自Thermomucor属或来自Thermomucor indicae-seudaticae物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自Trichobolus属的真菌或来自Trichobolus zukalii物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自毛霉目的真菌的例如来自拟伞霉科(Umbelopsidaceae)、或来自伞状霉属或来自西部伞状霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自粪壳菌目、或来自毛壳菌科、或来自柄孢壳属或来自柄孢壳属物种t180-6的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自接合菌属真菌或来自接合菌属物种XZ2655的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自粪壳菌目、或来自粪壳菌科、或来自麻孢壳菌属(Gelasinospora)、或来自Gelasinospora cratophora物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自伞菌纲的真菌的例如来自伞菌目、或来自球盖菇科、或来自球盖茹属、或来自半球球盖菇物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自生赤壳科(Bionectriaceae)、或来自枝穗霉属(Clonostachys)、或来自罗斯曼枝穗霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自丛赤壳科(Nectriaceae)、或来自Paracremonium属、或来自Paracremonium inflatum物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自葫芦霉科(Cucurbitariaceae)、或来自Curreya属、或来自Curreya sp.物种XZ2623的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自麦角菌科、或来自泛普可尼亚菌属(Metapochonia)、或来自球芽泛普可尼亚菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自曲霉属、或来自膨胀曲霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自盘菌纲的真菌的例如来自盘菌目、或来自粪盘菌科、或来自粪盘菌属、或来自粪盘菌属物种ZY179的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自炭角菌目、或来自炭角菌科、或来自轮层炭壳菌属、或来自开裂轮层炭壳菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自毛孢壳目、或来自毛孢壳科(Coniochaetaceae)、或来自锥毛壳属、或来自锥毛壳属物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自曲霉属、或来自弯头曲霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自隐裂壳菌科(Delitschiaceae)、或来自隐裂壳菌属(Delitschia)、或来自隐裂壳菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自麦角菌科、或来自绿僵菌属、或来自翠绿绿僵菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的例如来自炭角菌目、或来自炭角菌科、或来自炭团菌属、或来自炭团菌属物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的例如来自炭角菌目、或来自炭角菌科、或来自炭团菌属、或来自炭团菌属物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自肉座菌目、或来自虫草菌科、或来自简枝霉属、或来自棒状简枝霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自小囊菌目、或来自小囊菌科、或来自云南螺属(Yunnania)、或来自帚状云南螺物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自荚孢腔菌科、或来自韦斯特壳属、或来自韦斯特壳属物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自嗜热子嚢菌科(Thermoascaceae)、或来自嗜热子囊菌属、或来自嗜热子囊菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自座囊菌纲的真菌的例如来自格孢腔目、或来自盾壳霉科(Coniothyriaceae)、或来自盾壳霉属、或来自盾壳霉属物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自盘菌纲的真菌的例如来自盘菌目、或来自粪盘菌科、或来自粪盘菌属、或来自Ascobolus stictoideus物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自散囊菌纲的真菌的例如来自散囊菌目、或来自曲霉科、或来自半内果菌属(Hamigera)、或来自副榛色钩囊菌物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自子囊菌门的的真菌的例如来自侧齿霉属(Engyodontium)、或来自白色侧齿霉物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自粪壳菌纲的真菌的例如来自炭角菌目、或来自炭角菌属、或来自炭角菌科物种1653h的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自伞菌纲的真菌的例如来自伞菌目、或来自球盖菇科、或来自Deconica属或来自Deconica coprophila物种的具有溶菌酶活性的多肽。
在另一方面，该多肽可以是真菌多肽。在一方面，该多肽是来自伞菌纲的真菌的例如来自伞菌目、或来自膨瑚菌科(Physalacriaceae)、或来自火菇属(Flammulina)或来自金针菇物种的具有溶菌酶活性的多肽。
应理解的是对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学的等效物(equivalent)，例如无性型(anamorph)，而与他们已知的种名无关。本领域的技术人员将容易地识别适当等效物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989，同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸，如本文中所述。在实施例中，编码本发明的多肽的多核苷酸已经被分离。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],学术出版社(Academic Press)，纽约。可以使用其他核酸扩增程序如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以由长毛盘菌属(Trichophaea)菌株或木霉属菌株或相关生物体克隆，并且因此，例如可以是该多核苷酸的多肽编码区的等位基因或种类变体。
编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，其包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作所述多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含转录控制序列，其介导该多肽的表达。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以是从编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和在Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中，用于指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的实例是获得自以下酶的基因的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖镰孢胰蛋白酶-样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延长因子，以及NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导序列已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)以及酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶-样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人,1992,同上描述。
所述控制序列还可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区域，它增加所述基因的表达。
合适的mRNA稳定子区的实例从以下获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
该控制序列也可以是聚腺苷酸化序列，一种可操作地连接至多核苷酸的3'-末端的序列，并且当转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加到转录的mRNA的信号。可以使用在宿主细胞中有功能的任何聚腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选聚腺苷酸化序列从以下酶的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
该控制序列也可以是编码与多肽的N-端连接并指导该多肽进入细胞的分泌途径的信号肽的信号肽编码区。该多核苷酸的编码序列的5’-端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码该多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5'-端可以包含对编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不包含信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人,1992,同上描述。
该控制序列也可以是编码位于多肽的N-末端处的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可为希望的是添加调节序列，该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKA α-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，这样使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以包含用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同包含待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标志。选择性标志是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标志的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标志。酵母宿主细胞的适合的标志包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等效物。优选用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。优选地用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标志可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标志系统。在一个方面，双选择性标志是hph-tk双选择性标志系统。
载体优选地包含允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可包含用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当包含足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体还可以另外包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标志基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标志基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
在一些实施例中，多肽对重组宿主细胞是异源的。
在一些实施例中，一个或多个控制序列中的至少一个与编码多肽的多核苷酸异源。
在一些实施例中，重组宿主细胞包含本发明的多核苷酸的至少两个拷贝，例如三个，四个或五个。
该宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属、链球菌属、以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单孢菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen，1979，Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961，J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或Dubnau和Davidoff-Abelson，1971，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower，1988，Biotechniques[生物技术]6:742-751)或轭合(参见例如，Koehler和Thorne，1987，J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，Burke等人，2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。可通过如下方法实现将DNA引入到链球菌属细胞：例如天然感受态(naturalcompetence)(参见，例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见，例如，Catt和Jollick，1991，Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见，例如，Buckley等人，1999，Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见，例如，Clewell，1981，Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域中已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
该宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义：Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby氏真菌字典]，第8版，1995，国际应用生物科学中心(CAB International)，英国剑桥大学出版社(UniversityPress,Cambridge,UK))。
真菌宿主细胞可为酵母细胞。如在此使用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9]，1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(见上文)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属、隐球菌属、线黑粉菌属、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametesversicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
真菌细胞可以通过以下过程转化，所述过程涉及原生质体形成、原生质体的转化、以及以本身已知的方式的细胞壁的再生。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适的程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988，Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的合适的方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and MolecularBiology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.[学术出版社有限公司],纽约；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。在一方面，该细胞是曲霉属(Aspergillus)新物种XZ2609细胞。在一方面，该细胞是毛壳菌细胞。在一方面，该细胞是珠芽枝鼻菌细胞。在一方面，该细胞是深红虫草细胞。在一方面，该细胞是多毛垂幕菇细胞。在一方面，该细胞是虫草棒束孢细胞。在一方面，该细胞是轮枝菌属物种WMM742细胞。在一方面，该细胞是黄色樟绒枝霉细胞。在一方面，该细胞是马爪甲团囊菌细胞。在一方面，该细胞是拟青霉属物种XZ2658细胞。在一方面，该细胞是桔青霉细胞。在一方面，该细胞是青霉属物种'qii'细胞。在一方面，该细胞是点孔座壳细胞。在一方面，该细胞是Pycnidiophora cf.dispera细胞。在一方面，该细胞是微小根毛霉细胞。在一方面，该细胞是Sporormia fimetaria细胞。在一方面，该细胞是Thermomucor indicae-seudaticae细胞。在一方面，该细胞是Trichobolus zukalii细胞。在一方面，该细胞是西部伞状霉细胞。在一方面，该细胞是柄孢壳属物种t180-6细胞。在一方面，该细胞是接合菌属物种XZ2655细胞。
在一方面，该细胞是Gelasinospora cratophora细胞。在一方面，该细胞是半球球盖菇细胞。在一方面，该细胞是罗斯曼枝穗霉细胞。在一方面，该细胞是Paracremoniuminflatum细胞。在一方面，该细胞是Curreya sp.物种XZ2623细胞。在一方面，该细胞是球芽泛普可尼亚菌细胞。在一方面，该细胞是膨胀曲霉细胞。在一方面，该细胞是Ascobolus sp.物种ZY179细胞。在一方面，该细胞是开裂轮层炭壳菌细胞。在一方面，该细胞是锥毛壳属物种细胞。在一方面，该细胞是弯头曲霉细胞。在一方面，该细胞是隐裂壳菌属物种细胞。在一方面，该细胞是翠绿绿僵菌细胞。在一方面，该细胞是炭团菌属物种细胞。在一方面，该细胞是炭团菌属物种细胞。在一方面，该细胞是棒状简枝霉细胞。在一方面，该细胞是帚状云南螺细胞。在一方面，该细胞是韦斯特壳属物种细胞。在一方面，该细胞是嗜热子囊菌细胞。在一方面，该细胞是盾壳霉属物种细胞。在一方面，该细胞是Ascobolus stictoideus细胞。在一方面，该细胞是副榛色钩囊菌细胞。在一方面，该细胞是白色侧齿霉细胞。在一方面，该细胞是炭角菌科物种1653h细胞。在一方面，该细胞是Deconica coprophila细胞。在一方面，该细胞是金针菇细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在合适的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从发酵培养基回收多肽。在一方面，回收包含多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化该多肽，包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法和尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦电泳)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)，以便获得基本上纯的多肽。
植物
本发明还涉及分离的植物，例如转基因植物、植物部分或植物细胞，其包含本发明的多肽，从而以可回收的量表达和产生多肽或结构域。可以从该植物或植物部分回收该多肽或结构域。可替代地，含有该多肽或结构域的植物或植物部分可以按原样用于改善食品或饲料的质量，例如改善营养价值、可口性及流变学特性，或破坏抗营养因素。
转基因植物可以是双子叶的(双子叶植物)或单子叶的(单子叶植物)。单子叶植物的实例是草，如草地早熟禾(蓝草，早熟禾属)；饲用草，如羊茅属(Festuca)、黑麦草属(Lolium)；温带草，如翦股颖属(Agrostis)；以及谷物，例如小麦、燕麦、黑麦、大麦、稻、高粱和玉蜀黍(玉米)。
双子叶植物的实例是烟草、豆科植物(如羽扇豆、马铃薯、糖甜菜、豌豆、菜豆和大豆)以及十字花科植物(十字花科)(如花椰菜、油菜籽和紧密相关的模式生物体拟南芥)。
植物部分的实例是茎、愈伤组织、叶、根、果实、种子和块茎以及包含这些部分的独立组织，例如表皮、叶肉、薄壁组织、维管组织、分生组织。
植物细胞和特定的植物细胞区室(如叶绿体、质外体、线粒体、液泡、过氧化物酶体和细胞质)也被认为是植物部分。
同样包含于本发明范围内的是此类植物、植物部分以及植物细胞的子代。
可以根据本领域已知方法构建表达该多肽或结构域的转基因植物或植物细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽或结构域的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽或结构域的条件下培养转基因植物或植物细胞，该转基因植物或植物细胞包含编码该多肽或结构域的多核苷酸；并且(b)回收该多肽或结构域。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，该组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在一些实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一个方面，该组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一些实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物通常是液体，但是可以含有不溶性组分，如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所描述的方法来产生。
酶组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的组合物。优选地，这些组合物富含本发明的多肽。术语“富集”表示组合物的溶菌酶活性已增加，例如富集因子为至少1.1，例如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少3.0、至少4.0、至少5.0、至少10。
在优选的实施例中，该组合物包含选自以下列表的一种或多种溶菌酶，该列表由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ IDNO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ IDNO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ IDNO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ IDNO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230、和SEQ ID NO:233。
在实施例中，该组合物包括本发明的多肽，和一种或多种如下所述的配制剂。
组合物可进一步包含多种酶活性，如一种或多种(例如：若干种)选自下组的酶，该组由以下组成：植酸酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
该组合物可进一步包含一种或多种益生菌。在实施例中，益生菌选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、肉食杆菌属、丁酸梭菌、梭菌属、屎肠球菌、肠球菌属、乳酸杆菌属、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属、明串珠菌属、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属、特氏丙酸杆菌(Propionibacteriumthoenii)、丙酸杆菌属、以及链球菌属或其任何组合。
在实施例中，该组合物包含一种或多种如本文披露的配制剂，优选一种或多种选自以下列表的化合物，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
在实施例中，该组合物包含一种或多种选自以下列表的组分，该列表由以下组成：维生素、矿物质和氨基酸。
配制品
本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该配制剂可以包括多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是液体组合物，其包含本发明的多肽和一种或多种选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇。该液体配制品可以喷洒在已经历颗粒化的饲料上，或可以添加到供给动物的饮用水中。
针对固体配制品，该配制品可以例如作为颗粒、喷雾干粉或聚结物(例如如在WO2000/70034中所披露)。配制剂可以包括盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)。
在一个实施例中，该组合物是一种固体组合物，例如喷雾干燥组合物，该固体组合物包括本发明的溶菌酶和一种或多种选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素。在一个优选的实施例中，该配制剂选自一种或多种以下化合物：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。
本发明还涉及包含本发明的溶菌酶的酶颗粒/粒子任选地与一种或多种另外的酶的组合。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。
通常，该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，例如：
a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含有酶的颗粒状材料；
b)层状产品，其中酶作为层包衣在预形成的惰性核心粒子周围，其中包括酶的溶液被雾化，通常在流化床装置中，其中预形成的核心粒子被流体化，并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于例如WO 97/23606中；
c)吸收的核心粒子，其中不是包衣该酶作为核心周围的层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或颗粒化的(pelletized)产品，其中将含有酶的糊料压成颗粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊料中的热发生，这对酶是有害的；
e)颗粒化的产品，其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献；
f)混合造粒产品，其中将液体添加到例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并附聚，并且粒子将构建，形成包含酶的颗粒。此种方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中，将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、颗粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])；
h)流化床造粒，其涉及将颗粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷洒液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着于其上并形成颗粒；
i)这些核心可经受干燥，如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核心在涂覆之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被涂覆，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1-10％w/w的水。
该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包含粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
该核心通常作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
在一个实施例中，该核心包含选自下组的材料，该组由以下组成：盐(如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作含水层状硅酸铝)。在一个实施例中，该核心包含粘土矿物质，如高岭石或高岭土。
该核心可以包含惰性粒子，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm，具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以被至少一个包衣包围，例如以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。任选的一个或多个包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣或其他合适的包衣材料。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选是至少0.1μm厚，具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施例中，该包衣的厚度低于100μm，如低于60μm或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封或封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60％的盐，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm，如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度，优选至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、山梨酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，具体地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如WO 1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719在所述或是如WO 2001/00042中所述的聚合物包衣。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)和柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。
该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地，作为盐溶液施加该盐，例如使用流化床。
蜡包衣可以包含按重量计至少60％的蜡，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
蜡的具体实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物脂油如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。
该颗粒可以包含核心(其包含本发明的溶菌酶)、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多个包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO 1997/23606和WO 2016/149636中。
可以产生非粉尘颗粒，例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露，并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化的壬基酚；其中的醇包含从12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单元的乙氧基化的脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
该颗粒可以进一步包含一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于更多颗粒中，确保酶的更均匀分布，并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
因此，在一个另外的方面，本发明提供了颗粒，其包含：
(a)包含根据本发明的溶菌酶的核心，和
(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包括如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含盐包衣，然后是本文所述的蜡包衣。
动物饲料添加剂
本发明还涉及包含一种或多种本发明溶菌酶的动物饲料添加剂。因此，在一个实施例中，本发明涉及动物饲料添加剂，其包含一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％，例如至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，一种或多种GH25多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ ID NO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQ ID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
在优选的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种配制剂，优选如上文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生菌，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种维生素，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种矿物质，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种氨基酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种益生元，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种有机酸，优选如下文所述。
在实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种植生素，优选如下文所述。
动物饲料
本发明还涉及包含一种或多种本发明溶菌酶的动物饲料组合物。在一个实施例中，本发明涉及包含如本文所述的颗粒和植物基材料的动物饲料。在一个实施例中，本发明涉及包含如本文所描述的动物饲料添加剂以及植物基材料的动物饲料。
动物饲料组合物或饮食具有相对高的蛋白含量。家禽和猪饮食可以如WO 01/58275的表B第2-3栏所示来表征。鱼饮食可以如表B第4栏所示来表征。此外，此类鱼饮食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有的粗蛋白含量为50-800g/kg，此外还包含至少一种本文所要求的溶菌酶。
此外或在(上述粗蛋白含量)的替代方案中，本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量；和/或0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275表B中的范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个内。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)x 6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984,Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。
可代谢能量可根据如下进行计算：NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求]，第九次再版1988，subcommittee on swine nutrition,committee onanimal nutrition,board of agriculture,national research council[美国国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会].美国国家科学院出版社，华盛顿特区，第2-6页和欧洲家禽饲养材料能量值表(European Table of Energy Values for Poultry Feed-stuffs)，斯克得霍特(Spelderholt)家禽研究与推广中心，7361DA贝克贝亨，荷兰，Grafisch bedrijf Ponsen&looijen bv,Wageningen.ISBN 90-71463-12-5。
根据诸如Veevoedertabel 1997,gegevens over chemische samenstelling,verteerbaarheid en voederwaarde van voedermiddelen,Central Veevoederbureau,Runderweg 6,8219pk Lelystad.ISBN 90-72839-13-7等饲料表计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在一个具体实施例中，本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以含有动物蛋白，如肉和骨粉、羽毛粉和/或鱼粉，通常量为0-25％。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，通常量为0-30％。
在再进一步具体的实施例中，本发明的动物饲料组合物含有0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0-40％豆粕；和/或0-25％鱼粉；和/或0-25％肉和骨粉；和/或0-20％乳清。
动物饲料可包含植物蛋白。在具体实施例中，这些植物蛋白的蛋白含量是至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源，如豆类和谷类，例如得自蝶形花科(豆科)、十字花科、藜科和早熟禾科植物的材料，如大豆粉饼、羽扇豆粉饼、油菜籽粉饼及其组合。
在一个具体实施例中，该植物蛋白来源是来自豆科的一种或多种植物(如大豆、羽扇豆、豌豆或菜豆)的材料。在另一个具体实施例中，植物蛋白来源是得自藜科的一种或多种植物，例如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜和卷心菜。在另一个具体实施例中，大豆是优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、稻和高粱。
可以将动物饮食制成例如粉状饲料(非粒化)或粒化饲料。通常，混合研磨的饲料并根据所讨论的种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。作为固体或液体酶配制品添加酶。例如，对于粉状饲料，在成分混合步骤前或期间可以添加固体或液体酶配制品。对于粒状饲料而言，也可以在饲料成分步骤之前或过程中添加该(液体或固体)溶菌酶/酶制剂。典型地，液体溶菌酶/酶制剂包括本发明的溶菌酶，任选地伴随着多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇)，并且是在压丸步骤后添加，例如通过将该液体配制品喷涂至丸粒上。也可以将该酶掺入饲料添加剂或预混物中。
可替代地，可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(例如研磨的大豆粉)的混合物，并且然后冻干该混合物，来制备溶菌酶。
饮食中的最终酶浓度在0.01-200mg酶蛋白/kg饮食的范围内，优选在0.05-100mg/kg饮食之间，更优选0.1-50mg，甚至更优选0.2-20mg酶蛋白/kg动物饮食。
目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种给予酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10；-所有这些范围都是以mg溶菌酶蛋白/kg饲料(ppm)。
为了确定每kg饲料中溶菌酶蛋白的mg数，从饲料组合物中纯化溶菌酶，并且使用相关试验(参见溶菌酶活性)确定经纯化的溶菌酶的比活性。使用相同试验测定该饲料组合物的溶菌酶活性，并且在这两次测定的基础上计算出以每kg饲料中溶菌酶蛋白的mg数计的剂量。
在具体实施例中，本发明的动物饲料添加剂意欲以0.01％至10.0％，更具体0.05％至5.0％或0.2％至1.0％(％意指g添加剂/100g饲料)的水平包含(或规定为必须包含)在动物饮食或饲料中。具体地说，对预混物也是如此。
将同样的规则应用于确定饲料添加剂中的溶菌酶蛋白mg数。当然，如果样品使用了用于制备饲料添加剂或饲料的溶菌酶，可以由此样品确定比活性(不需要从饲料组合物或添加剂中纯化溶菌酶)。
因此，在另一个方面，本发明还涉及包含一种或多种本发明的溶菌酶和植物基材料的动物饲料。另一方面，本发明还涉及包含本发明的动物饲料添加剂(如上所述)和植物基材料的动物饲料。
因此，在一个实施例中，本发明涉及动物饲料添加剂，其包含植物基材料和一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％，例如至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
在实施例中，一种或多种GH25多肽包含基序YKNA(SEQ ID NO:160)和/或基序FGGW[S/T](SEQ ID NO:161)，并且优选地选自下组，该组选自：SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ ID NO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQ ID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
在优选的实施例中，该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％(即，1.5倍以上)，例如至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
在实施例中，植物基材料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
在进一步的实施例中，该动物饲料是已经粒化的。
另外的酶
在另一个实施例中，本文描述的组合物任选地包含一种或多种酶。可以根据handbook Enzyme Nomenclature[酶命名手册](来自NC-IUBMB,1992)对酶进行分类，还参见因特网上的ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是相对于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB)，AcademicPress，Inc.[学术出版社公司]，1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为所述酶提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,NucleicAcids Res[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这种分类不反映这些酶的结构特征。
Henrissat等人在“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in 2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、溶菌酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。
因此，本发明的组合物还可以包括选自下组的至少一种其他的酶，该组由以下组成：植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)；木聚糖酶(EC 3.2.1.8)；半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)；α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)；蛋白酶(EC 3.4)，磷脂酶A1(EC 3.1.1.32)；磷脂酶A2(EC3.1.1.4)；溶血磷脂酶(EC 3.1.1.5)；磷脂酶C(3.1.4.3)；磷脂酶D(EC 3.1.4.4)；淀粉酶，如，例如α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)；阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)；β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)；乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.72)；阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)；纤维素酶(E.C.3.2.1.4)；纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91)；β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)；支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)、甘露聚糖酶(EC 3.2.1.25)和β-葡聚糖酶(EC 3.2.1.4或EC 3.2.1.6)，或其任何混合。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-FeedTM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、P、NP和HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、NatuphosTM(巴斯夫公司(BASF))、NatuphosTM E(巴斯夫公司)、和Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、(浩卫制药公司(Huvepharma))、Phytase(Aveve Biochem公司)、XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))以及PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于例如WO 98/28408、WO 00/43503和WO 03/066847中的那些。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括WX(帝斯曼营养产品公司)、XT和Barley(ABVista公司)、(范恩尼姆公司(Verenium))、X(浩卫制药公司)、XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，杜邦公司)和XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶，杜邦公司)、XG 10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和02CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶，Aveve Biochem公司)以及Naturgrain(巴斯夫公司)。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括ProAct(帝斯曼营养产品公司)。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括A和RumiStarTM(帝斯曼营养产品公司)。
在一个实施例中，本发明的组合物包含多组分酶产品，如Octazyme(Framelco公司)、G2、VP和MultiGrain(帝斯曼营养产品公司)、Excel或Advance(安迪苏公司(Adisseo))。
摄生品
摄生品(eubiotic)是意欲在胃肠道中提供微生物菌群的健康平衡的化合物。摄生品包括许多不同的饲料添加剂，如益生菌、益生元、植生素(精油)和有机酸，其在下面更详细地描述。
益生菌
在实施例中，该动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的益生菌。在具体实施例中，该动物饲料组合物进一步包含来自以下一个或多个属的细菌：乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、肉食杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌或其任何组合。
在优选的实施例中，动物饲料组合物进一步包含来自以下一种或多种菌株的细菌：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属物种和片球菌属物种、乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物亚种(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌唾液亚种(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌、丙酸杆菌属物种。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种枯草芽孢杆菌菌株的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRL B-50105)、BS 18(NRRLB-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRLB-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622以及PTA-7547。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种短小芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRLB-50886。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种地衣芽孢杆菌菌株的细菌：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。
在更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包含来自以下一种或多种解淀粉芽孢杆菌菌株的细菌：DSM 29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 104和1x 1014CFU/kg的干物质之间，优选在1x 106和1x 1012CFU/kg的干物质之间，并且更优选在1x 107至1x1011CFU/kg的干物质之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 108和1x 1010CFU/kg的干物质之间。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 105和1x 1015CFU/动物/天之间，优选在1x 107和1x 1013CFU/动物/天之间，并且更优选在1x 108和1x 1012CFU/动物/天之间。在更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数在1x 109和1x 1011CFU/动物/天之间。
在另一个实施例中，该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、Alterion(安迪苏公司)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))、(混合酶+益生菌，杜邦动物营养公司)、和(Norel/Evonik)以及PY1(赢创公司(Evonik))。
益生元
益生元是诱导微生物(例如，细菌和真菌)生长或活动的物质，其有助于宿主的健康。益生元通常是不可消化的纤维化合物，其未消化地通过胃肠道的上部并刺激通过充当它们的底物而定殖大肠的有利细菌的生长或活动。通常，益生元增加胃肠(GI)道中双歧杆菌和乳酸菌的数量或活动。
酵母衍生物(灭活的整个酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包括甘露寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质内容物，并且通常衍生自酵母(酿酒酵母)的细胞壁。
酵母产品的实例是和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand AnimalNutrition))。
植生素
植生素是一组来自草药、香料或其他植物的用作饲料添加剂的天然生长促进剂或非抗生素生长促进剂。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专门产品)制备的单一物质。
植生素的实例是迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里酚、丁香酚、间甲酚、香草醛、水杨酸酯、间苯二酚、邻甲氧基苯酚(guajacol)、姜酚、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯、柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄和姜黄提取物。
商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、CinergyTM、BiacidTM、ProHacidTM Classic和ProHacidTM AdvanceTM(all Promivi公司/嘉吉公司(Cargill))以及Envivo EO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))。
有机酸
有机酸(C1-C7)在自然界中作为植物或动物组织的正常成分广泛分布。它们也通过主要在大肠中的碳水化合物的微生物发酵形成。它们通常在猪和家禽生产中用作抗生素生长促进剂的替代品，因为它们对鸡的坏死性肠炎和仔猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可以作为单组分或通常2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的实例是丙酸、甲酸、柠檬酸、乳酸、山梨酸、苹果酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、丁酸和酒石酸或其盐(通常是钠或钾盐、如二甲酸钾或丁酸钠)。商业产品的实例是(帝斯曼营养产品公司)、Lupro-Lupro-Lupro-(巴斯夫公司)、正丁酸AF(OXEA)以及Adimix Precision(Nutriad公司)。
预混物
将如上文示例的饲料添加剂的组合物掺入动物饲料(例如家禽饲料)中在实践中是使用浓缩剂或预混料进行的。预混料是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或载体的优选均匀的混合物。预混料用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的预混料可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加到饲料成分或饮用水中。
氨基酸
本发明的组合物可以进一步包含一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。
维生素和矿物质
在另一个实施例中，该动物饲料可以包含一种或多种维生素，如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该动物饲料可以任选地包含一种或多种矿物质，如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种常量矿物质。
通常，脂溶性维生素和水溶性维生素以及痕量矿物质形成所谓的旨在添加到饲料中的预混物的一部分，而常量矿物质通常被分开地添加到饲料中。
脂溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E和维生素K，例如维生素K3。
水溶性维生素的非限制性实例包括维生素C、维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、、碘、硒和锌。
常量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、磷、钾和钠。
这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)列于WO 01/58275的表A中。营养需求意指应在饮食中提供指定浓度的这些组分。
在替代方案中，本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种意指一种或两种或三种或四种等直至所有十三种或直至所有十五种单独组分中的任一种、一种或多种。更具体地，此至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包含在本发明的添加剂内。
在一个仍另外的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含至少一种以下维生素，优选以提供落入下表1中所限定的范围之内(分别针对仔猪饮食和肉鸡饮食)的饲料中浓度。
表1：典型维生素推荐
| 维生素 | 仔猪饮食 | 肉鸡饮食 |
| 维生素A | 10,000-15,000IU/kg饲料 | 8-12,500IU/kg饲料 |
| 维生素D3 | 1800-2000IU/kg饲料 | 3000-5000IU/kg饲料 |
| 维生素E | 60-100mg/kg饲料 | 150-240mg/kg饲料 |
| 维生素K3 | 2-4mg/kg饲料 | 2-4mg/kg饲料 |
| 维生素B1 | 2-4mg/kg饲料 | 2-3mg/kg饲料 |
| 维生素B2 | 6-10mg/kg饲料 | 7-9mg/kg饲料 |
| 维生素B6 | 4-8mg/kg饲料 | 3-6mg/kg饲料 |
| 维生素B12 | 0.03-0.05mg/kg饲料 | 0.015-0.04mg/kg饲料 |
| 烟酸(维生素B3) | 30-50mg/kg饲料 | 50-80mg/kg饲料 |
| 泛酸 | 20-40mg/kg饲料 | 10-18mg/kg饲料 |
| 叶酸 | 1-2mg/kg饲料 | 1-2mg/kg饲料 |
| 生物素 | 0.15-0.4mg/kg饲料 | 0.15-0.3mg/kg饲料 |
| 氯化胆碱 | 200-400mg/kg饲料 | 300-600mg/kg饲料 |
其他饲料成分
本发明的组合物可以进一步包含着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和芳香化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)、活性氧产生物质、抗氧化剂、抗微生物肽、抗真菌多肽以及霉菌毒素控制化合物。
着色剂的实例是类胡萝卜素，如β-胡萝卜素、虾青素和叶黄素。
芳香化合物/调味品的实例是甲氧甲酚，茴香脑，十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜酚、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和单宁。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(Robert Lehrer,2000)、菌丝霉素(Plectasin)和他汀(包括在WO 03/044049和WO 03/048148中披露的化合物和多肽)以及以上的保留抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉和黑曲霉的肽连同其保留抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。
多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。
活性氧产生物质的实例为诸如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐等化学品；以及诸如氧化酶、氧合酶或合成酶等酶。
抗氧化剂可以用于限制可产生的活性氧物质的数量，使得活性氧物质的水平与抗氧化剂平衡。
霉菌毒素(如脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和伏马菌素)可以在动物饲料中发现，并且可以导致消极的动物性能或疾病。可以将能够如通过霉菌毒素的失活或通过霉菌毒素的结合控制霉菌毒素水平的化合物添加到饲料中以改善这些负面影响。霉菌毒素控制化合物的实例是Vitafix Ultra(核科学公司(Nuscience))、Secure、BBSH、MTV(百奥明公司)、Mold-Toxy-以及Plus(Nutriad公司)。
用途
在动物饲料中的用途
本发明的溶菌酶也可用于动物饲料，其中术语“动物”是指除人以外的所有动物。动物的实例是单胃动物，例如猪(pig或swine)(包括但不限于仔猪、成长猪和母猪)；家禽(包括但不限于家禽、火鸡、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、鹅、鸽、雏鸟、小鸡、肉鸡、下蛋鸡、小母鸡和小鸡)；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、菖鲉(bocachico)、鲤科鱼、鲶鱼、卡叉马鱼(cachama)、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、瓜波特鱼(guapote)、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、珍珠斑点鱼(pearlspot)、佩杰瑞鱼(pejerrey)、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)；以及甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
在根据本发明的用途中，可以在饮食之前、之后或同时给动物喂食该溶菌酶。优选后者。
在具体实施例中，明确限定了往饲料中添加的溶菌酶或包括在饲料添加剂中的溶菌酶。明确限定指的是如经大小排阻色谱法(参见WO 01/58275的实例12)确定的，溶菌酶制剂至少为50％纯。在其他具体实施例中，如经此方法确定的，溶菌酶制剂至少为60％、70％、80％、85％、88％、90％、92％、94％、或至少为95％纯。
明确限定的溶菌酶制剂是有利的。例如，对于实质上不受其他溶菌酶干扰或污染的溶菌酶而言，更容易确定它在饲料中的正确剂量。术语正确地给料(dose correctly)具体是指得到一致且恒定的结果的目标，和基于所希望的效果优化剂量的能力。
然而，为了在动物饲料中使用，溶菌酶不必是纯的；可以例如包括其他酶，此时可将其称为溶菌酶制品。
该溶菌酶制剂可以(a)直接添加饲料，或者(b)它可以用于随后添加饲料(或者用于处理过程中)的一种或多种中间组合物，如饲料添加剂或者预混物的生产。不论是否根据上述(a)或(b)来使用，上文所述的纯度指的都是原始溶菌酶制剂的纯度。
本发明的溶菌酶也可用于治疗坏死性肠炎和/或产气荚膜梭菌。
改善动物性能的方法
在实施例中，本发明还涉及改善动物性能的方法，该方法包括向动物给予本发明的动物饲料或动物饲料添加剂。
在优选的实施例中，改善动物的性能的方法包括向该动物给予动物饲料或动物饲料添加剂，该动物饲料或动物饲料添加剂包含选自下组的溶菌酶，该组由以下组成：SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ IDNO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ IDNO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ IDNO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，本发明还涉及本发明的动物饲料或动物饲料添加剂用于改善动物的性能的用途。在另一个实施例中，本发明涉及本发明的一种或多种溶菌酶用于改善动物的性能的用途。
在一个实施例中，“改善动物的性能”意指存在体增重的增加。在另一个实施例中，“改善动物的性能”意指存在改善的饲料转化率。在另外的实施例中，“改善动物的性能”意指存在增加的饲料效率。在另外的实施例中，“改善动物的性能”意指存在体增重的增加和/或改善的饲料转化率和/或增加的饲料效率。
在实施例中，动物饲料包含选自下组的植物基材料，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
制备动物饲料的方法
在实施例中，本发明提供了一种用于制备动物饲料组合物的方法，该方法包括将本发明的一种或多种溶菌酶添加至一种或多种动物饲料成分中。动物饲料成分包括但不限于浓缩物(如在此所定义)、草料(如在此所定义)、酶、益生菌、维生素、矿物质和氨基酸。
在优选的实施例中，制备动物饲料的方法包括将植物基材料与选自下组的溶菌酶混合，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ IDNO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233。
在实施例中，植物基材料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
实施例
下文列出了本发明的实施例的列表。
1.一种水解细菌细胞壁中的肽聚糖的方法，该方法包括用一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽处理细菌细胞，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
2.如项目1所述的方法，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；和
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少85％序列同一性的多肽。
3.如项目1所述的方法，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
4.如项目1所述的方法，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
5.如项目1所述的方法，其中该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ IDNO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ ID NO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQ ID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ IDNO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQ ID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQ ID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQ ID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
6.如项目1至5中任一项所述的方法，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。
7.如项目6所述的方法，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
8.如项目6所述的方法，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
9.包含一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽的颗粒，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
10.如项目9所述的颗粒，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；和
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少85％序列同一性的多肽。
11.如项目9所述的颗粒，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
12.如项目9所述的颗粒，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
13.如项目9所述的颗粒，其中该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ IDNO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQ ID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ IDNO:66的氨基酸1至207、SEQ ID NO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQ ID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQ ID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQID NO:152的氨基酸1至207、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQ ID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
14.如项目9至13中任一项所述的颗粒，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。
15.如项目14所述的颗粒，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
16.如项目14所述的颗粒，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mMK2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
17.如项目9至16中任一项所述的颗粒，其中该颗粒包含一种或多种配制剂。
18.如项目17所述的颗粒，其中该配制剂选自以下列表，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素，优选地选自以下列表，该列表由以下组成：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
19.如项目9至18中任一项所述的颗粒，其中该颗粒包含核心粒子和一个或多个包衣。
20.如项目19所述的颗粒，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
21.如项目9至20中任一项所述的颗粒，该颗粒进一步包含一种或多种另外的酶。
22.如项目21所述的颗粒，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：植酸酶、木聚糖酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
23.如项目9至22中任一项所述的颗粒，该颗粒进一步包含一种或多种益生菌。
24.如项23所述的颗粒，其中该一种或多种益生菌选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
25.一种具有溶菌酶活性的分离的多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少89％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少97％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少83％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少92％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少94％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少94％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少88％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少96.5％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少89％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少95％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少85％序列同一性的多肽；
(be)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:12、SEQID NO:18、SEQ ID NO:24SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:42、SEQID NO:48、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQID NO:75、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQID NO:146、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224和SEQ ID NO:227，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:54和SEQID NO:104，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:92，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bh)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:39，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bi)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:155，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32或33位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bj)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bk)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:113，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bl)SEQ ID NO:89的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、或28位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bm)SEQ ID NO:110的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、或24位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bn)SEQ ID NO:128的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、或23位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bo)SEQ ID NO:6的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、或22位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bp)SEQ ID NO:137的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bq)SEQ ID NO:51的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(br)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:98，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bs)SEQ ID NO:158的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bt)SEQ ID NO:122的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、或7位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bu)SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、或6位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bv)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)、(bf)、(bg)、(bh)、(bi)、(bj)、(bk)、(bl)、(bm)、(bn)、(bo)、(bp)、(bq)、(br)、(bs)、(bt)或(bu)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bw)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)、(bf)、(bg)、(bh)、(bi)、(bj)、(bk)、(bl)、(bm)、(bn)、(bo)、(bp)、(bq)、(br)、(bs)、(bt)或(bu)的多肽以及多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bx)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)、(bf)、(bg)、(bh)、(bi)、(bj)、(bk)、(bl)、(bm)、(bn)、(bo)、(bp)、(bq)、(br)、(bs)、(bt)或(bu)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
26.如项目25所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ IDNO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:9的氨基酸1至201、SEQ ID NO:12的氨基酸1至203、SEQID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:27的氨基酸1至207、SEQ ID NO:30的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ ID NO:42的氨基酸1至207、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQ ID NO:51的氨基酸1至204、SEQ ID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:57的氨基酸1至209、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:63的氨基酸1至210、SEQ ID NO:66的氨基酸1至207、SEQ IDNO:69的氨基酸1至207、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:83的氨基酸1至201、SEQ ID NO:86的氨基酸1至202、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:92的氨基酸1至202、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQ ID NO:104的氨基酸1至202、SEQ ID NO:107的氨基酸1至202、SEQ ID NO:110的氨基酸1至202、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ ID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:134的氨基酸1至208、SEQ ID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:140的氨基酸1至216、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:149的氨基酸1至207、SEQ ID NO:152的氨基酸1至207、SEQID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:158的氨基酸1至208、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:224的氨基酸1至207、SEQ ID NO:227的氨基酸1至208、SEQ ID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
27.如项目25至26中任一项所述的多肽，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性。
28.如项目25至27中任一项所述的多肽，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中如实例1所述测定溶菌酶活性。
29.如项目28所述的多肽，其中该多肽具有SEQ ID NO:159的至少150％、至少175％、至少200％、至少225％、至少250％、至少275％、至少300％、至少350％、或至少400％的溶菌酶活性，其中溶菌酶活性如下测定：将溶菌酶(在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mMK2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中50μL的0.7μg/mL溶菌酶)与溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中450μL 1％冻干的溶壁微球菌ATCC号4698)混合，并且伴随振荡(500rpm)在40℃下孵育45分钟；将样品离心(4000g，5分钟)；将上清液(100μL)与HCl(50μL 3.2M)混合并在95℃下孵育80分钟；添加NaOH(50μL，3.5M)并将150μL的样品添加到在K-Na酒石酸盐/NaOH缓冲液(75μL的50g/L K-Na酒石酸盐+20g/L NaOH)中的4-羟基苯甲酰肼里；将该混合物在95℃下孵育10分钟；并且在405nm处测量光密度。
30.一种组合物，该组合物包含如项目25至29中任一项所述的多肽。
31.如项目30所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种配制剂。
32.如项目31所述的组合物，其中该配制剂包含一种或多种以下化合物：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
33.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽或如项目30至32中任一项所述的组合物。
34.如项目33所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含选自以下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；和
一种或多种其他饲料成分。
35.如项目33至34中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种另外的酶。
36.如项目35所述的动物饲料添加剂，其中该一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：植酸酶、溶菌酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、蛋白酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、溶血磷脂酶、磷脂酶C、磷脂酶D、淀粉酶、溶菌酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、β-木糖苷酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-葡糖苷酶、支链淀粉酶、和β-葡聚糖酶或其任何组合。
37.如项目33至36中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种益生菌。
38.如项目37所述的动物饲料添加剂，其中该一种或多种益生菌选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
39.如项目33至38中任一项所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含一种或多种植生素。
40.如项目39所述的动物饲料添加剂，其中该植生素选自下组，该组由以下组成：迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香、柠檬草、精油、百里酚、丁香酚、间甲酚、香兰素、水杨酸盐、间苯二酚、邻甲氧基苯酚、姜辣素、薰衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉叶油素、薄荷脑、薄荷油、α-蒎烯；柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酮酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸酯、乙酸/乙酸酯、丁酸/丁酸酯、迷迭香油、丁香油、香叶醇、萜品醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(单宁)、姜黄根粉和姜黄提取物或其任何组合。
41.一种动物饲料，该动物饲料包含如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、或如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂以及植物基材料。
42.如项目41所述的动物饲料，其中该植物基材料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(favabean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
43.一种颗粒化动物饲料，该颗粒化动物饲料包含如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、或如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂以及植物基材料。
44.如项目43所述的颗粒化动物饲料，其中该植物基材料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
45.一种改善动物的一个或多个性能参数的方法，该方法包括向一种或多种动物给予如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目41至42中任一项所述的动物饲料、或如项目43至44中任一项所述的颗粒化动物饲料。
46.如项目45所述的方法，其中改善动物的性能意指改善的体增重、改善的欧洲生产效率因子(EPEF)和/或改善的FCR。
47.一种制备动物饲料的方法，该方法包括将如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、或如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂与植物基材料混合。
48.如项目47所述的方法，其中该植物基材料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
49.一种用于改善动物饲料营养价值的方法，该方法包括向该饲料中添加如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、或如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂。
50.如项目49所述的方法，其中该饲料选自下组，该组由以下组成：豆类、谷类、燕麦、黑麦、大麦、小麦、玉蜀黍、玉米、高粱、柳枝稷、粟、珍珠粟、谷子、大豆、野生大豆、豆、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜(oilseed rape)、稻、甜菜、卷心菜、糖甜菜、菠菜、奎奴亚藜、或豌豆，处于其加工形式(如豆粕、油菜籽粕)或者其任何组合。
51.一种编码如项目25至29中任一项所述的多肽的多核苷酸。
52.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如项目51所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
53.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如项目51所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
54.一种产生如项目25至29中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；和
(b)回收该多肽。
55.一种产生如项目25至29中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如项目53所述的宿主细胞；和
(b)回收该多肽。
56.一种用编码如项目25至29中任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物、植物部分或植物细胞。
57.一种全液配制品或细胞培养组合物，该全液配制品或细胞培养组合物包含如项目25至29中任一项所述的多肽。
58.如项目1至8中任一项所披露的溶菌酶、如项目9至24中任一项所述的颗粒、如项目25至29中任一项所述的多肽、如项目30至32中任一项所述的组合物、或如项目33至40中任一项所述的动物饲料添加剂在以下方面的用途：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；
用于改善动物饲料的营养价值；和/或
用于改善动物中的一个或多个性能参数。
59.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
60.根据实施例59所述的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
61.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQID NO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQID NO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ IDNO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
62.根据实施例59至61所述的多肽，如通过确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法确定，该多肽具有a)与鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的溶菌酶活性相比或b)与SEQ ID NO:39的溶菌酶活性相比的改善的溶菌酶活性。
63.根据实施例59至61所述的多肽，如通过i)确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法和ii)确定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的方法中的任一种确定，该多肽具有a)与鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的溶菌酶活性相比和b)与SEQ ID NO:39的溶菌酶活性相比的改善的溶菌酶活性。
64.根据实施例59至63中任一项所述的肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ IDNO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQ ID NO:51的氨基酸1至204、SEQID NO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQ ID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQID NO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ IDNO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
65.根据实施例59至63所述的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：与SEQID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
66.一种水解细菌细胞壁中的肽聚糖的方法，该方法包括用一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽处理细菌细胞，其中该多肽如实施例59至63中任一项所定义。
67.一种提高动物饲料中肽聚糖消化率的方法，该方法包括使用如实施例59至63中任一项所定义的肽。
68.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含如实施例59至63中任一项所定义的多肽。
68.根据实施例67所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂进一步包含选自以下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；
一种或多种其他饲料成分；
一种或多种另外的酶；
一种或多种益生菌；和
一种或多种植生素。
69.一种动物饲料，该动物饲料包含如实施例59至63中任一项所定义的多肽。
70.一种根据实施例69所述的动物饲料，该动物饲料进一步包含植物基材料。
71.一种组合物，该组合物包含如实施例59至63中任一项所述的多肽。
72.一种多核苷酸，该多核苷酸编码如实施例59至63中任一项所述的多肽。
73.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如实施例72所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
74.一种产生如实施例59至63中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求16所述的宿主细胞；和
(b)回收该多肽。
75.如实施例59至63中任一项所公开的多肽的用途：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；和/或
用于改善动物的肠道健康。
76.一种用于家禽饲料或猪饲料中的畜牧添加剂，所述添加剂包含如实施例59至63中任一项所定义的多肽。
77.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物的消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞的量，该方法包括用包含如实施例59至63中任一项所定义的多肽的饲料或饲料添加剂喂食该动物。
78.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的数量，该方法包括用饲料或饲料添加剂喂食动物，该饲料或饲料添加剂包含选自下组的多肽，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，优选地选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ IDNO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，更优选地与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
79.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的量，该方法包括用饲料或饲料添加剂喂食该动物，该饲料或饲料添加剂包含选自下组的多肽，该组由以下组成：与SEQ ID NO 159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
80.一种促进从动物消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括给所述动物喂食如在实施例61至63中任一项定义的多肽来源。
81.一种促进从动物的消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括用选自下组的多肽来源喂食所述动物，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，优选地选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，更优选地与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
82.一种促进从动物消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括给所述动物喂食选自下组的多肽来源，该组由以下组成：与SEQ ID NO 159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的多肽。
83.根据实施例77至82中任一项所述的方法，其中该多肽在5ppm下具有针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性，如通过确定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的方法确定，该溶菌酶活性在405nm处的光密度(OD)测量增加至少0.20。
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
实例
菌株
大肠杆菌Top-10菌株购自英杰公司(Invitrogen)(美国生命技术公司(LifeTechnologies)，卡尔斯巴德，加利福利亚州，美国)并用于繁殖编码溶菌酶多肽的表达载体。
米曲霉菌株MT3568用于溶菌酶多肽编码序列的异源表达。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破坏的基因衍生物(WO 2002/40694)，其中通过用pyrG基因破坏米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因来恢复pyrG营养缺陷型。
黑曲霉MBin118披露于WO 2004/090155中。
2003年在25C下通过用PDA培养基的稀释平板分离法，从收集自中国的凋落物样品中分离真菌菌株NN047801。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN047801鉴定为Sporormia fimetaria。
菌株点孔座壳NN009607从瑞典分离。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
2011年通过采用PDA培养基，10C的稀释平板法从中国西藏采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN054002。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN054002鉴定为轮枝菌属物种(Lecanicillium sp.)。
菌株马爪甲团囊菌NN056731在瑞典哥特兰岛分离。将菌株接种到PDA平板上并且在20℃于黑暗中孵育18天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在20℃以100rpm振荡孵育18天。
从来自美国的土壤样品中分离菌株淡紫紫孢菌NN070261，并接种到PDA平板上孵育并在黑暗中于26℃孵育8天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
菌株Trichobolus zukalii CBS720.69购自CBS-KNAW真菌生物多样性中心(CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre)，并接种到PDA平板上并在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
菌株桔青霉NN070248分离自澳大利亚。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育6天。
真菌菌株NN057876来自中国科学院微生物学研究所的蔡磊(Cai Lei)教授。2014年通过用PDA培养基(37C下)的稀释平板分离法从来自中国的堆肥样品中收集菌株。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN047801鉴定为珠芽枝鼻菌。
菌株西部伞状霉CBS871.85购自CBS-KNAW真菌生物多样性中心(CBS-KNAW FungalBiodiversity Centre)，并接种到PDA平板上并在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
2014年通过采用PDA培养基(pH3，25C)的稀释平板法从中国贵州省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN058098。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者将菌株NN058098鉴定为接合菌属物种。
2014年通过采用PDA培养基(25C)的稀释平板法从中国贵州省采集的凋落物样品中分离出真菌菌株NN058297。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN058297鉴定为毛壳菌。
深红虫草CBS113411购自CBS-KNAW真菌生物多样性中心，Uppsalalaan 8,3584CT，乌特勒支，荷兰，并接种到PDA平板上并在26℃下于黑暗中孵育8天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
1998年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN044232。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN044232鉴定为青霉属物种'qii'。
2014年采用PDA培养基(pH3)的稀释平板法从中国贵州省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN058292。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN058292鉴定为曲霉属新物种XZ2609。
2014年通过采用PDA培养基(pH3，25C)的稀释平板法从中国贵州省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN058101。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列两者，将菌株NN058101鉴定为拟青霉属物种XZ2658。
1998年通过采用YG培养基(pH7，45C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046782。然后通过将单分生孢子转移至另一个YG板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046782鉴定为微小根毛霉T185-2。
2008年采用PDA培养基(25C)的稀释平板法从中国采集的凋落物样品中分离出真菌菌株NN051201。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN051201鉴定为Pycnidiophora cf.dispera。
真菌菌株NN000400来自CBS，具有登录号为CBS104.75。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN000400鉴定为Thermomucor indicae-seudaticae。
2012年通过采用Horikoshi培养基(pH10，15C)的稀释平板法从中国西藏采集的死亡昆虫样品中分离出真菌菌株NN054449。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN054449鉴定为虫草棒束孢。
2000年通过采用YG培养基(37C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046871。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046871鉴定为柄孢壳属物种。
菌株黄色樟绒枝霉CBS132.77购自CBS-KNAW真菌生物多样性中心(CBS-KNAWFungal Biodiversity Centre)，并接种到PDA平板上并在黑暗中于26℃孵育14天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育20天。
从芬兰最北端的乌茨约基(Utsjoki)地区(69°45'N，27°01'E)分离菌株多毛垂幕菇NN057040。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育10天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育15天。
从中国吉林省分离菌株弯头曲霉NN051662。针对繁殖和DNA分离条件，请咨询NZ中国(NZ China)，在其他情况下进行如下：将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
分离自丹麦的菌株Ascobolus stictoideus NN007614(原始代码A4-1.1)购自哥本哈根大学孢子培养基研究所(Institut for Sporeplanter,University ofCopenhagen)。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
2011年通过用PDA培养基(pH 7，10C下)的稀释平板分离法，与中国科学院微生物研究所合作，从收集自中国的土壤样品中分离真菌菌株NN053834。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN053834鉴定为锥毛壳属物种。
2011年通过用PDA培养基(pH 7，10C下)的稀释平板分离法，与中国科学院微生物研究所合作，从收集自中国的土壤样品中分离真菌菌株NN054033。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN054033鉴定为开裂轮层炭壳菌。
2007年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的腐烂玉米秸秆样品中分离出真菌菌株NN051542。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN051542鉴定为座坚壳属物种。
2014年通过与中国科学院微生物学研究所的蔡磊(Cai Lei)教授的合作获得真菌菌株NN057909。从中国收集菌株。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将该菌株鉴定为粪盘菌属物种。
2014年通过采用PDA培养基(pH3)的稀释平板法从中国贵州省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN058306。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN058306鉴定为Curreya sp.。
1998年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN043614。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN043614鉴定为盾壳霉属物种。
1998年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN047189。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN047189鉴定为炭团菌属物种。
1998年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN043914。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN043914鉴定为炭角菌科物种。
1998年通过采用YG培养基(pH7，45C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046688。然后通过将单分生孢子转移至另一个YG板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046688鉴定为炭团菌属物种。
1998年通过采用PDA培养基(pH10，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046158。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046158鉴定为帚状云南螺。
菌株白色侧齿霉NN042720在丹麦被分离出来。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
从来自中国贵州的土壤样品中分离菌株球芽泛普可尼亚菌XZ2653NN058096。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
菌株副榛色钩囊菌A3661NN102174在日本分离。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
2002年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的死亡昆虫样品中分离出真菌菌株NN047633。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN047633鉴定为翠绿绿僵菌。
1998年通过采用YG培养基(pH7，45C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN044936。然后通过将单分生孢子转移至另一个YG琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN044936鉴定为嗜热子囊菌。
2015年采用Horikoshi培养基(pH10，25C)的稀释平板法从中国山东省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN071248。然后通过将单分生孢子转移至另一个Horikoshi板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN071248鉴定为罗斯曼枝穗霉。
1998年通过采用PDA培养基(pH7，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046572。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046572鉴定为棒状简枝霉。
2014年采用PDA培养基(pH3，25C)的稀释平板法从中国贵州省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN058092。然后通过将单分生孢子转移至PDA琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN058092鉴定为膨胀曲霉。
2015年采用Horikoshi培养基(pH10，25C)的稀释平板法从中国山东省采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN071247。然后通过将单分生孢子转移至另一个Horikoshi琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN071247鉴定为Paracremoniuminflatum
1998年通过采用Horikoshi培养基(pH10，25C)的稀释平板法从中国采集的土壤样品中分离出真菌菌株NN046156。然后通过将单分生孢子转移至另一个Horikoshi琼脂板上进行纯化。基于形态特征和ITS rDNA序列二者，将菌株NN046156鉴定为韦斯特壳属物种。
菌株半球球盖菇NN070885在丹麦的Kongstrup Bakker分离。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育32天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育14天。
菌株Gelasinospora cratophora NN070952从丹麦的土壤样品中分离。将菌株接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育2天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育4天。
菌株Deconica coprophila MS02928从丹麦分离。将菌株接种到半强度PDA平板上并且在20℃于黑暗中孵育10天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育15天。
培养基和溶液
DAP4C-1培养基由以下各项构成：0.5g酵母提取物、10g麦芽糖、20g右旋糖、11g硫酸镁七水合物、1g磷酸氢二钾、2g一水合柠檬酸、5.2g磷酸钾三元一水合物、1mL Dowfax63N10(消泡剂)、2.5g碳酸钙，补充有1mL KU6金属溶液以及去离子水补足至1000mL。
KU6金属溶液由以下各项构成：6.8g ZnCl2、2.5g CuSO4.5H2O、0.13g NiCl2、13.9gFeSO4.7H2O、8.45g MnSO4.H2O、3g C6H8O7.H2O、以及去离子水补足至1000mL。
YP 2％葡萄糖培养基由以下各项构成：10g酵母提取物、20g细菌用蛋白胨(Bacto-peptone)、20g葡萄糖、以及去离子水补足至1000mL。
LB板由以下各项构成：10g的细菌用胰蛋白胨(Bacto-tryptone)、5g的酵母提取物、10g的氯化钠、15g的细菌用琼脂(Bacto-agar)、以及去离子水补足至1000mL。
LB培养基由以下各项构成：10g的细菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物、和10g的氯化钠、以及去离子水补足至1000mL。
COVE-蔗糖-T平板由以下各项构成：342g的蔗糖、20g的琼脂粉、20mL的COVE盐溶液、以及去离子水补足至1000mL。该培养基通过在15psi下高压杀菌15分钟来进行灭菌(细菌学分析手册，第8版，修订A，1998)。将该培养基冷却至60℃并且添加10mM乙酰胺、TritonX-100(50μL/500mL)。
COVE-N-琼脂管由以下各项构成：218g山梨醇、10g右旋糖、2.02g KNO3、25g琼脂、50mL Cove盐溶液、以及去离子水补足至1000mL。
COVE盐溶液由以下各项构成：26g的MgSO4·7H2O、26g的KCL、26g的KH2PO4、50mL的COVE痕量金属溶液、以及去离子水补足至1000mL。
COVE痕量金属溶液由以下各项构成：0.04g的Na2B4O7·10H2O、0.4g的CuSO4·5H2O、1.2g的FeSO4·7H2O、0.7g的MnSO4·H2O、0.8g的Na2MoO4·2H2O、10g的ZnSO4·7H2O、以及去离子水补足至1000mL。YPM培养基含有1％酵母提取物、2％的蛋白胨和2％的麦芽糖。
鸡蛋清溶菌酶(HEWL)获得自西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)#62972
实例1：用于确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法(还原端方法)
将溶菌酶在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐，5mM K2HPO4,0.01％TritonX-100，pH5.0)中在聚丙烯管中稀释至50μg/mL。将稀释的溶菌酶在96孔聚丙烯微量滴定板中进一步稀释至在磷酸盐缓冲液(5mM柠檬酸盐，5mM K2HPO4，0.01％TritonX-100，pH 5.0)中浓度为0.7μg/mL。在聚丙烯深孔板中，将50μL溶菌酶稀释液与450μL 1％溶壁微球菌溶液(在milli-Q水中冻干的溶壁微球菌ATCC号4698(Sigma M3770))混合，并在40℃下伴随振荡(500rpm)孵育45分钟。孵育后，将深孔板离心(4000g，5分钟)以沉淀不溶物质，并将100μL上清液与50μL 3.2M HCl在96孔PCR板中混合，并在95℃孵育80分钟。向PCR板的每个孔中添加50μL的3.5M NaOH，并将150μL的每种样品转移到新PCR板，该新PCR板含有在酒石酸钾钠/NaOH缓冲液(50g/L酒石酸K-Na+20g/L NaOH)中的75μL/孔的4-羟基苯甲酰肼溶液。将板在95℃孵育10分钟，然后将100μL/样品转移至透明平底微量滴定板，用于405nm处的光密度(OD)测量。对三次稀释的样品(在Milli-Q水中在100μL中稀释的50μL样品)进行OD测量。OD测量值代表减去原始(背景)读数后的差值。通过本方法，在0.9ppm处针对鸡蛋清溶菌酶的平均OD测量值为0.55，并且在0.9ppm处针对SEQ ID NO 159的平均OD测量值为0.34(数据未显示)。
实例2：从以下各项的菌株中提取基因组DNA：Sporormia fimetaria(SEQ ID NO:1)、点孔座壳(SEQ ID NO:4和7)、轮枝菌属物种(SEQ ID NO:10、13和67)、马爪甲团囊菌(SEQ ID NO:16)、淡紫紫孢菌(SEQ ID NO:19)、Trichobolus zukalii(SEQ ID NO:22)、桔青霉(SEQ ID NO:25)、珠芽枝鼻菌(SEQ ID NO:28)、西部伞状霉(SEQ ID NO:31)、接合菌属物种(SEQ ID NO:34)、毛壳菌(SEQ ID NO:37)、深红虫草(SEQ ID NO:40)、青霉属物种'qii'(SEQ ID NO:43)、曲霉属新物种XZ2609(SEQ ID NO:46)、拟青霉属物种XZ2658(SEQ IDNO:49和52)、Pycnidiophora cf.dispera(SEQ ID NO:58)、虫草棒束孢(SEQ ID NO:64)、柄孢壳属物种(SEQ ID NO:70)、黄色樟绒枝霉(SEQ ID NO:73)、多毛垂幕菇(SEQ ID NO:76)、弯头曲霉(SEQ ID NO:81)、Ascobolus stictoideus(SEQ ID NO:84)、锥毛壳属物种(SEQID NO:87)、粪盘菌属物种ZY179(SEQ ID NO:96)、Curreya sp.XZ2623(SEQ ID NO:99)、盾壳霉属物种(SEQ ID NO:102)、炭团菌属物种(105和111)、炭角菌科物种1653h(SEQ ID NO:108)、白色侧齿霉(SEQ ID NO:117)、球芽泛普可尼亚菌XZ2653(SEQ ID NO:120)、副榛色钩囊菌A3661(SEQ ID NO:123)、翠绿绿僵菌(SEQ ID NO:126)、罗斯曼枝穗霉(SEQ ID NO:132)、膨胀曲霉(SEQ ID NO:138)、Paracremonium inflatum(SEQ ID NO:141)、韦斯特壳属物种(SEQ ID NO:144)、半球球盖菇(SEQ ID NO:228、231和153)、以及Gelasinosporacratophora(SEQ ID NO:156)。
将Sporormia fimetaria菌株NN047801接种到PDA平板上并且在28℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在28℃以160rpm振荡孵育3天。
将菌株点孔座壳NN009607接种到PDA平板上，在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将轮枝菌属物种菌株NN054002接种到PDA平板上，在黑暗中于15℃孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在20℃以160rpm振荡孵育5天。
将菌株马爪甲团囊菌NN056731接种到PDA平板上，在黑暗中于20℃孵育18天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在20℃以100rpm振荡孵育18天。
从来自美国的土壤样品中分离菌株淡紫紫孢菌NN070261，并接种到PDA平板上孵育并在黑暗中于26℃孵育8天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
菌株Trichobolus zukalii CBS720.69购自CBS-KNAW真菌生物多样性中心(CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre)，并接种到PDA平板上并在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
将菌株桔青霉NN070248接种到PDA平板上，在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育6天。
将珠芽枝鼻菌菌株NN057876接种到PDA平板上并且在37℃于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育3天。
将菌株西部伞状霉NN070463接种到PDA平板上，在黑暗中于26℃孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育3天。
将接合菌属物种菌株NN058098、毛壳菌菌株NN058297和Pycnidiophoracf.dispera菌株NN051201接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育3天。
将深红虫草NN070475接种到PDA平板上并且在26℃于黑暗中孵育8天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株青霉属物种'qii'NN044232接种到PDA平板上，并在黑暗中于25℃孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以100rpm振荡孵育4天。
将菌株曲霉属新物种XZ2609NN058292接种到PDA平板上，并在黑暗中于25℃孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以100rpm振荡孵育7天。
将菌株拟青霉属物种XZ2658NN058101接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以100rpm振荡孵育5天。
将虫草棒束孢菌株NN054449接种在PDA平板上，并且在15℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将柄孢壳属物种菌株NN046871接种到PDA平板上，并在37℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育2天。
将菌株黄色樟绒枝霉NN070411接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育14天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育20天。
将菌株多毛垂幕菇NN057040接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育10天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育15天。
将菌株弯头曲霉NN051662接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株Ascobolus stictoideus NN007614接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育7天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株锥毛壳属物种NN053834接种到PDA平板上，并在20℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在20℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株粪盘菌属物种ZY179NN057909接种到PDA平板上，并在37℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育5天。
将菌株Curreya sp.XZ2623NN058306接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育7天。
将菌株盾壳霉属物种NN043614接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育7天。
将菌株炭团菌属物种NN047189接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育7天。
将菌株炭角菌科物种1653h NN043914接种到PDA平板上，并在37℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育5天。
将菌株炭团菌属物种NN046688接种到PDA平板上，并在37℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株白色侧齿霉NN042720接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株球芽泛普可尼亚菌XZ2653NN058096接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株副榛色钩囊菌A3661NN102174接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育5天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育5天。
将菌株翠绿绿僵菌NN047633接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育5天。
将菌株罗斯曼枝穗霉NN071248接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株膨胀曲霉NN058092接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育5天。
将菌株Paracremonium inflatum NN071247接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株韦斯特壳属物种NN046156接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育7天。
将菌株半球球盖菇NN070885接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育32天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育14天。
将菌株Gelasinospora cratophora NN070952接种到PDA平板上，并在26℃下于黑暗中孵育2天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育4天。
将菌株Deconica coprophila MS02928接种到半强度PDA平板上，并在20℃下于黑暗中孵育10天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在26℃以100rpm振荡孵育15天。
在所有情况下，通过过滤，通过(康碧泉公司(Calbiochem),拉霍亚，加利福尼亚州，美国)来收集这些菌丝，并且在液氮冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉，并且使用Plant Maxi试剂盒(24)(凯杰有限公司(QIAGEN GmbH)，希尔登，德国)遵循制造商的说明分离出基因组DNA。
实例3：从微小根毛霉T185-2(SEQ ID NO:225)和Thermomucor indicae-seudaticae(SEQ ID NO:61)提取基因组DNA
将微小根毛霉T185-2NN046782接种到PDA平板上，并在45℃下于黑暗中孵育3天。将来自平板的菌丝体和孢子接种到含有100ml FG4培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在45℃以100rpm振荡孵育3天。
将Thermomucor indicae-seudaticae菌株NN000400接种到PDA平板上，并且45℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在45℃以160rpm振荡孵育3天。
在所有情况下，通过过滤，通过(康碧泉公司(Calbiochem),拉霍亚，加利福尼亚州，美国)来收集这些菌丝，并且在液氮冷冻。将冷冻的菌丝通过研钵和研杵磨成细粉，并且使用由斯科特O.罗杰斯(Scott O.Rogers)&阿诺德J.本迪斯(ArnoldJ.Bendich)(植物分子生物学(Plant Molecular Biology)5:69-76，1985)研发的方法分离基因组DNA。
实例4：从开裂轮层炭壳菌(SEQ ID NO:90)提取基因组DNA
将菌株开裂轮层炭壳菌NN054033接种到PDA平板上，并在15℃下于黑暗中孵育15天。
通过用无菌手术刀从琼脂平板上刮下来收集菌丝并在液氮下冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉，并且遵循制造商的说明使用FastDNA土壤用旋转试剂盒(安倍生物医疗(MP Biomedicals)，圣安娜(Santa Ana)，加利福尼亚州，美国)分离出基因组DNA。
实例5：从座坚壳属物种-51542(SEQ ID NO:93)、帚状云南螺(SEQ ID NO:114)和棒状简枝霉(SEQ ID NO:135)提取基因组DNA。
将菌株座坚壳属物种-51542NN051542接种到PDA平板上，并在37℃下于黑暗中孵育7天。.将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在37℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株帚状云南螺NN046158接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
将菌株棒状简枝霉NN046572接种到PDA平板上，并在25℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在25℃以160rpm振荡孵育4天。
在所有情况下，通过过滤，通过(康碧泉公司(Calbiochem),拉霍亚，加利福尼亚州，美国)来收集这些菌丝，并且在液氮冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉，并且遵循制造商的说明使用MP Faster DNA旋转试剂盒(安倍生物医疗(MPBiomedicals)，圣安娜(Santa Ana)，加利福尼亚州，美国)分离出基因组DNA。
实例6：从嗜热子囊菌(SEQ ID NO:129)提取基因组DNA
将菌株嗜热子囊菌NN044936接种到PDA平板上，并在45℃下于黑暗中孵育7天。将若干个菌丝-PDA塞接种于含有100ml的YPG培养基的500ml摇瓶中。将摇瓶在45℃以160rpm振荡孵育3天。
通过过滤，通过(康碧泉公司(Calbiochem),拉霍亚，加利福尼亚州，美国)来收集这些菌丝，并且在液氮冷冻。用研钵和研棒将冷冻的菌丝磨碎成细粉，并且遵循制造商的说明使用大规模柱真菌DNAout(Large-Scale Column Fungal DNAout)(北京盈信阳光生物技术有限公司(Win Honor Bioscience Limited)，北京，中国)分离出基因组DNA。
实例7：Sporormia fimetaria(SEQ ID NO:1)、Thermomucor indicae-seudaticae(SEQ ID NO:61)、嗜热子囊菌(SEQ ID NO:129)的基因组测序、装配和注释
将嗜热子囊菌、Sporormia fimetaria和Thermomucor indicae-seudaticae的提取的基因组DNA样品送至北京基因组研究所(BGI，深圳，中国)用于使用GA2系统(亿明达公司(Illumina,Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)进行基因组测序。使用SOAPdenovo程序(Li等人.,2010,Genome Research[基因组研究],20:265-72)将原始读数在BGI装配。使用标准生物信息学方法分析装配的序列，用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人，2008，Genome Research[基因组研究]18(12):1979-1990)预测基因。使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人，1990,Journal ofMolecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410),ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(美国国家生物技术信息中心(NCBI)，贝塞斯达，马里兰州，美国)基于结构同源性预测功能。通过分析Blast结果直接鉴定GH25家族溶菌酶。使用Agene程序(Munch和Krogh，2006，BMC Bioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人，1997，Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例8：珠芽枝鼻菌(SEQ ID NO:28)、接合菌属物种(SEQ ID NO:34)、毛壳菌(SEQID NO:37)、粪盘菌属物种ZY179(SEQ ID NO:96)、Curreya sp.XZ2623(SEQ ID NO:99)、炭团菌属物种(105和111)、炭角菌科物种1653h(SEQ ID NO:108)、翠绿绿僵菌(SEQ ID NO:126)、罗斯曼枝穗霉(SEQ ID NO:132)、棒状简枝霉(SEQ ID NO:135)、Paracremoniuminflatum(SEQ ID NO:141)以及韦斯特壳属物种(SEQ ID NO:144)的基因组测序、装配和注释。
珠芽枝鼻菌、接合菌属物种粪盘菌属物种ZY179、Curreya sp.XZ2623、盾壳霉属物种、炭团菌属物种、炭角菌科物种1653h、翠绿绿僵菌、罗斯曼枝穗霉、棒状简枝霉、Paracremonium inflatum、韦斯特壳属物种和毛壳菌的提取的基因组DNA样品送至诺维信戴维斯公司(Novozymes Davis)(美国)使用MiSeq System进行基因组测序。使用Spades程序(Anton Bankevich等人.,2012,Journal of Computational Biology[计算生物学杂志],19(5):455-477)将原始读数在诺维信丹麦公司(Novozymes Denmark)装配。使用标准生物信息学方法分析装配的序列，用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人，2008，Genome Research[基因组研究]18(12):1979-1990)预测基因。使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人，1990,Journal ofMolecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410),ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(美国国家生物技术信息中心(NCBI)，贝塞斯达，马里兰州，美国)基于结构同源性预测功能。通过分析Blast结果直接鉴定GH25家族溶菌酶。使用Agene程序(Munch和Krogh，2006，BMC Bioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人，1997，Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例9：Lecanicillium sp.(SEQ ID NO:10、13和67)、Pycnidiophora cf.dispera(SEQ ID NO:58)、虫草棒束孢(SEQ ID NO:64)、柄孢壳属物种(SEQ ID NO:70)、锥毛壳属物种(SEQ ID NO:87)、开裂轮层炭壳菌(SEQ ID NO:90)、座坚壳属物种-51542(SEQ ID NO:93)、盾壳霉属物种(SEQ ID NO:102)和帚状云南螺(SEQ ID NO:114)的基因组测序、装配进而注释。
将锥毛壳属物种、开裂轮层炭壳菌、座坚壳属物种、帚状云南螺、Lecanicilliumsp.、虫草棒束孢、Pycnidiophora cf.dispera和柄孢壳属物种的提取的基因组DNA样品送至Fasteris(瑞士)使用HiSeq 2000系统(亿明达公司(Illumina,Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)进行基因组测序。使用程序Idba(Peng Yu等人，2010,Research in Computational Molecular Biology[计算分子生物学研究].6044:426-440.柏林海德尔堡斯普林格出版社(Springer Berlin Heidelberg))将原始读数在丹麦诺维信公司(Novozymes Denmark)装配。使用标准生物信息学方法分析装配的序列，用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人，2008，GenomeResearch[基因组研究]18(12):1979-1990)预测基因。使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人，1990,Journal of Molecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410),ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(美国国家生物技术信息中心(NCBI)，贝塞斯达，马里兰州，美国)基于结构同源性预测功能。通过分析Blast结果直接鉴定GH25家族溶菌酶。使用Agene程序(Munch和Krogh，2006，BMCBioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人，1997，ProteinEngineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例10：膨胀曲霉(SEQ ID NO:138)的基因组测序、装配和注释。
将膨胀曲霉的提取的基因组DNA样品递送到Exiqon A/S(丹麦)使用MiSeq System(亿明达公司(Illumina,Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)进行基因组测序。使用Spades程序(Anton Bankevich等人.,2012,Journal ofComputational Biology[计算生物学杂志],19(5):455-477)将原始读数在诺维信丹麦公司(Novozymes Denmark)装配。使用标准生物信息学方法分析装配的序列，用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人，2008，Genome Research[基因组研究]18(12):1979-1990)预测基因。使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人，1990,Journal of Molecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410)，ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(美国国家生物技术信息中心(NCBI)，贝塞斯达，马里兰州，美国)基于结构同源性预测功能。通过分析Blast结果直接鉴定GH25家族溶菌酶。使用Agene程序(Munch和Krogh，2006，BMCBioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人，1997，ProteinEngineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人，2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例11：点孔座壳(SEQ ID NO:4和7)、马爪甲团囊菌(SEQ ID NO:16)、淡紫紫孢菌(SEQ ID NO:19)、Trichobolus zukalii(SEQ ID NO:22)、桔青霉(SEQ ID NO:25)、西部伞状霉(SEQ ID NO:31)、深红虫草(SEQ ID NO:40)、青霉属物种'qii'(SEQ ID NO:43)、曲霉属新物种XZ2609(SEQ ID NO:46)、拟青霉属物种XZ2658(SEQ ID NO:49和52)、微小根毛霉T185-2(SEQ ID NO:225)、黄色樟绒枝霉(SEQ ID NO:73)、多毛垂幕菇(SEQ ID NO:76)、弯头曲霉(SEQ ID NO:81)、Ascobolus stictoideus(SEQ ID NO:84)、白色侧齿霉(SEQ IDNO:117)、球芽泛普可尼亚菌XZ2653(SEQ ID NO:120)、副榛色钩囊菌A3661(SEQ ID NO:123)、半球球盖菇(SEQ ID NO:228、231和153)以及Gelasinospora cratophora(SEQ IDNO:156)的基因组测序、装配和注释。
使用HiSeq 2000系统(亿明达公司(Illumina,Inc.)，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国)，对以下各项的提取的基因组DNA样品进行基因组测序：深红虫草、黄色樟绒枝霉、点孔座壳、Gelasinospora cratophora、青霉属物种'qii'、拟青霉属物种XZ2658、曲霉属新物种XZ2609、球芽泛普可尼亚菌XZ2653、半球球盖菇、副榛色钩囊菌、微小根毛霉T185-2、西部伞状霉、多毛垂幕菇、Trichobolus zukalii、淡紫紫孢菌、桔青霉、Ascobolus stictoideus、白色侧齿霉、马爪甲团囊菌和弯头曲霉。
使用Spades程序(Anton Bankevich等人.,2012,Journal of ComputationalBiology[计算生物学杂志],19(5):455-477)装配深红虫草、黄色樟绒枝霉、点孔座壳、Gelasinospora cratophora、青霉属物种'qii'、拟青霉属物种XZ2658、曲霉属新物种XZ2609、球芽泛普可尼亚菌XZ2653、半球球盖菇和西部伞状霉的原始读数。使用Idba程序(Peng Yu等人.,2010,Research in Computational Molecular Biology[计算分子生物学研究].6044:426-440.柏林海德尔堡斯普林格出版社(Springer Berlin Heidelberg.))装配多毛垂幕菇、Trichobolus zukalii、淡紫紫孢菌、桔青霉、Ascobolus stictoideus、白色侧齿霉、马爪甲团囊菌、副榛色钩囊菌、微小根毛霉T185-2和弯头曲霉。使用标准生物信息学方法分析装配的序列，用于基因鉴定和功能预测。使用GeneMark-ES真菌版本(Ter-Hovhannisyan V等人，2008，Genome Research[基因组研究]18(12):1979-1990)预测基因。使用Blastall版本2.2.10(Altschul等人，1990,Journal of Molecular Biology[分子生物学杂志]215(3):403-410)，ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/blast/executables/release/2.2.10/)和HMMER版本2.1.1(美国国家生物技术信息中心(NCBI)，贝塞斯达，马里兰州，美国)基于结构同源性预测功能。GH25家族溶菌酶多肽通过分析Blast结果直接鉴定出。使用Agene程序(Munch和Krogh，2006，BMC Bioinformatics[BMC生物信息学]7:263)和SignalP程序(Nielsen等人，1997，Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)鉴定起始密码子。进一步使用SignalP程序来预测信号肽。使用Pepstats(Rice等人，2000，Trends inGenetics[遗传学趋势]16(6):276-277)来预测等电点和分子量。
实例12：GH25溶菌酶(SEQ ID NO:1、10、13、28、34、37、58、61、64、67和70)的克隆和表达
十一种真菌GH25溶菌酶野生型序列克隆自Sporormia fimetaria(SEQ ID NO:1)、轮枝菌属物种WMM742(SEQ ID NO:10、13、67)、珠芽枝鼻菌(SEQ ID NO:28)、接合菌属物种(SEQ ID NO:34)、毛壳菌(SEQ ID NO:37)、Pycnidiophora cf.dispera(SEQ ID NO:58)、Thermomucor indicae-seudaticae(SEQ ID NO:61)、虫草棒束孢(SEQ ID NO:64)和柄孢壳属物种(SEQ ID NO:70)。
如WO 2013029496中所述，将真菌GH25溶菌酶克隆到米曲霉表达载体pCaHj505中。具有天然分泌信号的GH25溶菌酶编码序列的转录处于米曲霉α-淀粉酶基因启动子的控制下。
将最终的表达质粒单独地转化到米曲霉表达宿主中。通过同源重组将GH25溶菌酶基因在转化后整合到米曲霉宿主基因组中。从选择性培养基琼脂平板中选择每个转化的四个转化体，并接种到24孔板中的3ml YPM培养基中，并在30℃，150rpm孵育。3天的孵育之后，根据制造商的说明，在NuPAGE Novex 4％-12％Bis-Tris凝胶w/MES上对来自每一转化体的20μl上清液进行分析。用Instant Blue染色所得凝胶。培养物的SDS-PAGE图谱显示，所有11种基因均表达1个或2个蛋白质条带，每个蛋白质条带各自分别在20KD、25KD、25KD、20KD、20KD、20KD、20KD、18&22KD、25KD、25KD和20KD处检测到。选择具有最强蛋白质条带的重组米曲霉菌株用于摇瓶培养，并在倾斜培养基制成的斜面上接种，并在37C培养6-7天。当菌株充分生长至完全形成孢子时，将它们接种到2L摇瓶中，每个摇瓶含有400ml YPM，并且每种菌株4-8个烧瓶。烧瓶在80rpm，30C振荡。在第3天收获培养物并使用0.45μm DURAPORE膜过滤，并分别如实例20至30中所述进行纯化。
实例13：GH25溶菌酶(SEQ ID NO:87、90、93、96、99、102、105、108、111、114、126、129、132、135、138、141和144)的克隆和表达
十七种真菌GH25溶菌酶野生型序列克隆自锥毛壳属物种(SEQ ID NO:87)、开裂轮层炭壳菌(SEQ ID NO:90)、座坚壳属物种(SEQ ID NO:93)、粪盘菌属物种(SEQ ID NO:96)、Curreya sp.物种(SEQ ID NO:99)、盾壳霉属物种(SEQ ID NO:102)、炭团菌属物种(SEQ IDNO:105)、炭角菌科物种(SEQ ID NO:108)、炭团菌属物种(SEQ ID NO:111)、帚状云南螺(SEQ ID NO:114)、翠绿绿僵菌(SEQ ID NO:126)、嗜热子囊菌(SEQ ID NO:129)、罗斯曼枝穗霉(SEQ ID NO:132)、棒状简枝霉(SEQ ID NO:135)、膨胀曲霉(SEQ ID NO:138)、Paracremonium inflatum(SEQ ID NO:141)、和韦斯特壳属物种(SEQ ID NO:144)。如WO2013029496中所述，将真菌GH25溶菌酶克隆到米曲霉表达载体pCaHj505中。具有天然分泌信号的GH25溶菌酶编码序列的转录处于米曲霉α-淀粉酶基因启动子的控制下。
将最终的表达质粒单独地转化到米曲霉表达宿主中。通过同源重组将GH25溶菌酶基因在转化后整合到米曲霉宿主基因组中。从选择性培养基琼脂平板中选择每个转化的四个转化体，并接种到24孔板中的3ml YPM或Dap4C培养基中，并在30℃，150rpm孵育。3天的孵育之后，根据制造商的说明，在NuPAGE Novex 4％-12％Bis-Tris凝胶w/MES上对来自每一转化体的20μl上清液进行分析。用Instant Blue染色所得凝胶。培养物的SDS-PAGE图谱显示，所有17种基因均表达1个或2个蛋白质条带，每个蛋白质条带各自分别在20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、20KD、25&28KD、25KD、26KD、24KD、26KD、26KD和20KD处检测到。选择具有最强蛋白质条带的重组米曲霉菌株用于摇瓶培养，并在倾斜培养基制成的斜面上接种，并在37C培养6-7天。当菌株充分生长至完全形成孢子时，将它们接种到2L摇瓶中，每个摇瓶含有400ml Dap4C，并且每种菌株2-6个烧瓶。烧瓶在80rpm，30C振荡。在第3天收获培养物并使用0.45μm DURAPORE膜过滤，并分别如实例31至47中所述进行纯化。
实例13：改善的分裂标记米曲霉宿主(DAU)的构建
构建了与WO 2016026938 A1中披露的实例5中描述的相当的改善的米曲霉宿主/载体系统。通过将位于质粒pDAu724的PART-II(参见WO 2016026938 A1中第34页，图7和SEQID NO:30)上的FLPase表达盒移至宿主菌株的基因组中的整合基因座amy2，做出改善以减小转化DNA的大小。通过从pDAu724扩增FLPase表达盒并在pDAu703的FRT-F3和amdS选择标记之间克隆，将FLPase表达盒克隆到pDAu703(WO 2016026938A1，第32页和图6以及SEQ IDNO:29)，以给出质粒pDAu770(图1，SEQ ID NO:216)。使用与WO 2016026938A1第33页中描述的相同的方案将线性化的质粒pDAu770转化进入米曲霉菌株Jal1338的原生质体中(披露于WO 2012/160097中)。在AmdS选择平板上选择转化体以获得菌株DAu785。所得重组宿主菌株DAu785具有与DAU716(WO 2016/026938)中相似的经修饰的amy2基因座，其中添加了FLPase表达盒(图2，上图)。该宿主菌株DAu785现在组成性地表达FLPase位点特异重组酶(在这一情况下允许在转化DNA的FRT位点处整合通过重叠延伸PCR反应获得的PCR片段(图2，中间图和底部图))并描述于以下实例17中。
实例14：溶菌酶编码序列SEQ ID NO:16、19、25、31、40、73和117的PCR扩增和的InFusion克隆
基于在马爪甲团囊菌、淡紫紫孢菌、黄色樟绒枝霉、白色侧齿霉、桔青霉、西部伞状霉、和深红虫草中基因组挖掘鉴定的溶菌酶基因序列，设计并订购了InFusion克隆引物(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich)，达姆施塔特，德国)(参见以下表2中的列表)。
表2：InFusion克隆引物
*-F-正向引物；-R-反向引物
编码溶菌酶多肽的SEQ ID NO:16、19、25、31、40、73和117的PCR扩增使用Phusion高保真DNA聚合酶(新英格兰实验室(New England Biolabs)，生物诺沃挪第克丹麦公司(BioNordika Denmark A/S)，海莱乌(Herlev)，丹麦)以50μL体积反应进行。PCR反应混合物由以下构成：10μL Phusion反应缓冲液HF(5x)；1μL PCR核苷酸混合物(10mM)；2μL正向克隆引物(2,5mM)；2μL反向克隆引物(2,5mM)；1μL Phusion高保真DNA聚合酶#M0530L(2000U/mL)；和PCR级水补充至50μL。使用以下程序在热循环仪T100(伯乐公司(Biorad)，赫拉克勒斯(Hercules)，加利福尼亚州，美国)上孵育PCR反应：在98℃初始变性2分钟，然后在98℃进行30个10秒的循环，在72℃进行2分钟，最后在72℃最终延伸10分钟。使用适用于BiomekFXp Liquid处理器(贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter)，布雷亚(Brea)，加利福尼亚，美国)的AMPure XP珠系统试剂盒(Agencourt公司，贝弗利(Beverly)，马萨诸塞州，美国)纯化PCR扩增子。
使用InFusion HD Plus EcoDry克隆系统试剂盒(宝生物公司(Takara)，草津市(Kusatsu)，日本)在预先用BamHI和HindIII限制酶消化的表达载体pDAu109(WO2005042735)中并遵循制造商说明书进行InFusion克隆。
将2.5μL体积的五倍稀释的连接混合物用于转化大肠杆菌TOP10(参见菌株章节)化学感受态细胞(生命科技公司(Life Technologies)，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)。从包含100μg的氨比西林/ml的LB琼脂平板中选择三个菌落并在3mL的补充有100μg的氨比西林/ml的LB培养基中培养过夜。根据制造商的说明，使用凯杰公司(Qiagen)旋转迷你制备型(Spin分钟iprep)试剂盒(目录27106)(凯杰股份有限公司(QIAGEN GmbH)，希尔登，德国)纯化质粒DNA。
通过Sanger DNA测序仔细检查通过InFusion克隆的溶菌酶序列的错误。
设计如下所示的正向和反向寡核苷酸引物以PCR扩增来自基因组DNA样品的GH25开放阅读框。使用IN-FUSIONTM克隆试剂盒(克罗泰克公司(Clontech)，Mountain View[山景]，加利福尼亚州，美国)将该片段直接克隆进表达载体pDau109中(WO 2005/042735)。
实例15：溶菌酶编码序列SEQ ID NO:43、46、49和52的PCR扩增和的InFusion克隆
基于BamHI-XhoI从青霉属物种'qii'(SEQ ID NO:43)、拟青霉属物种XZ2658(SEQID NO:46和49)和曲霉属新物种XZ2609(SEQ ID NO:52)的克隆。
表3中所示的正向和反向PCR引物用于从上述针对以下样品制备的基因组DNA产生EcoRI-XhoI侧翼克隆盒：
表3：PCR引物
*-F-正向引物；-R-反向引物
粗体字母代表编码序列。加下划线的序列与pDau109的插入位点是同源的。
PCR反应(25μl)由以下构成：12.5μl 2X IPROOFTM HF Master Mix，0.5μl适当的正向引物(100μM)，0.5μl适当的反向引物(100μM)，0.5μl基因组(100ng/μl)和11μl去离子水。将PCR反应在编程为如下的双块热循环仪(Dual-Block Thermal Cycler)(MJ研究公司(MJ Research Inc.),沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)中孵育：在98℃进行30秒的1个循环；30个循环，各自为在98℃持续10秒，在55℃下持续10秒，并且在72℃下持续60秒；以及1个循环，在72℃持续10分钟。在移出并且进一步加工之前将样品冷却至10℃。
使用TAE缓冲液通过1％琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应，其中观察到适当大小的DNA条带。例如，在WIN1054的情况下，观察到约700个碱基对的条带。根据制造商的说明，使用ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒(ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA and GelBand Purification Kit)纯化剩余的PCR反应。
然后使用IN-FUSIONTM克隆试剂盒(IN-FUSIONTM Cloning Kit)将片段克隆到BamHI和XhoI消化的pDau109中，得到含有插入物的质粒。将GH25溶菌酶PCR插入物克隆到Bam HI-XhoI消化的pDau109中导致克隆的基因在NA2-tpi双启动子控制下的转录。NA2-tpi是来自编码黑曲霉中性α-淀粉酶的基因的修饰的启动子，其中已经用来自编码构巢曲霉磷酸丙糖异构酶的基因的未翻译的前导子替换了未翻译的前导子。用载体引物对分离的质粒进行测序以便确定不含PCR错误的代表性质粒表达克隆。
实例16：溶菌酶编码序列SEQ ID NO:4、7、22、225、76、81和84的PCR扩增和的InFusion克隆
基于BamHI-HindIII从多毛垂幕菇(SEQ ID NO:76)、弯头曲霉(SEQ ID NO:81)、Trichobolus zukalii(SEQ ID NO:22)、微小根毛霉(SEQ ID NO:225)、点孔座壳(SEQ IDNO:4和7)和Ascobolus stictoideus(SEQ ID NO:84)的克隆。
表4中所示的正向和反向PCR引物用于从上述针对以下样品制备的基因组DNA产生BamHI-HindIII侧翼克隆盒：
表4：PCR引物
*-F-正向引物；-R-反向引物
粗体字母代表编码序列。加下划线的序列与pDau109的插入位点是同源的。
PCR反应(25μl)由以下构成：12.5μl 2X IPROOFTM HF Master Mix，0.5μl适当的正向引物(100μM)，0.5μl适当的反向引物(100μM)，0.5μl基因组(100ng/μl)和11μl去离子水。将PCR反应在编程为如下的双块热循环仪(Dual-Block Thermal Cycler)(MJ研究公司(MJ Research Inc.),沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)中孵育：在98℃进行30秒的1个循环；30个循环，各自为在98℃持续10秒，在55℃持续10秒，并且在72℃持续60秒；以及1个循环，在72℃持续10分钟。在移出并且进一步加工之前将样品冷却至10℃。
使用TAE缓冲液通过1％琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应，其中观察到适当大小的DNA条带。例如，在KKSC0317的情况下，观察到约860个碱基对的条带。根据制造商的说明，使用ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒(ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA and GelBand Purification Kit)纯化剩余的PCR反应。
然后使用IN-FUSIONTM HD Plus EcoDry克隆系统试剂盒(宝生物公司(Takara)，草津市(Kusatsu)，日本)，将这些片段克隆到BamHI和HindIII消化的pDau109中。将GH25溶菌酶PCR插入物克隆到BamHI-HindIII消化的pDau109中导致克隆的基因在NA2-tpi双启动子控制下的转录。NA2-tpi是来自编码黑曲霉中性α-淀粉酶的基因的修饰的启动子，其中已经用来自编码构巢曲霉磷酸丙糖异构酶的基因的未翻译的前导子替换了未翻译的前导子。用载体引物对分离的质粒进行测序以便确定不含PCR错误的代表性质粒表达克隆。
实例17：重叠延伸PCR克隆(SEQ ID NO:120、123、228、231、153和156)
在反应中，将pDAu724质粒用作DNA模板以扩增两种PCR产物(F1和F3)，该反应由以下各项构成：10μL的KAPA聚合酶缓冲液5x、1μL 10mM的KAPA PCR核苷酸混合物、1μL 10μM的适合的正向引物(F1的SEQ ID NO:210和F3的SEQ ID NO:212)、1μL 10μM的适合的反向引物(F1的SEQ ID NO:211和F3的SEQ ID NO:213)、1至10ng的pDAu724质粒、1μL的KAPA生物系统聚合酶KK2502(1单位)和PCR级水补充至50μL。
在Dual-Block热循环仪(MJ研究公司(MJ Research Inc.)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)上进行PCR扩增反应，程序为在98℃下2分钟，并随后进行在98℃下10秒和在72℃下2分钟的35个循环，以及在72℃下10分钟的最后一个循环。
使用TAE缓冲液通过1％琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应，其中观察到适当大小的DNA条带。根据制造商的说明，使用ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA和凝胶带纯化试剂盒(ILLUSTRATM GFXTM PCR DNA and Gel Band Purification Kit)纯化剩余的PCR反应。
正向引物F1：SEQ ID NO:210：GAATTCGAGCTCGGTACCTTGAAGTTC
反向引物F1：SEQ ID NO:211：GGTGGATCCCCAGTTGTGTATATAGAGGATT
正向引物F3：SEQ ID NO:212：TGCGCGGCGCGGCTGGGTCGACTCTA
反向引物F3：SEQ ID NO:213：TTCACACAGGAAACAGCTATGACCATG
用于对从Gelasinospora cratophora、球芽泛普可尼亚菌、副榛色钩囊菌、和半球球盖菇(3个序列)gDNA扩增的溶菌酶基因进行克隆的重叠延伸PCR反应由以下各项构成：10μL的KAPA聚合酶缓冲液(5X)、1μL 10mM的KAPA PCR核苷酸混合物、50ng的PCR片段F1、和等摩尔量的PCR片段F3、和编码SEQ ID NO:120、123、228、231、153和156的溶菌酶基因、1μl的KAPA生物系统聚合酶KK2502(1单位)以及PCR级水补足至48μL。使用以下构成的程序在Dual-Block热循环仪(MJ研究公司(MJ Research Inc.)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)上将反应进行孵育：在98℃下2分钟；随后进行5个循环，各自由以下各项构成：在98℃下10秒、在68℃下30秒、和在72℃下5分钟，以及最后在72℃下8分钟的最后的延伸。
在OE PCR反应期间，片段F1与分别编码SEQ ID NO:120、123、228、231、153和156的溶菌酶基因之间的退火通过包括在正向克隆引物(分别是C6ZGC-F；C6ZG7-F；C122PC-F；C122PA-F；C122P9-F和C122P5-F，表4a)中的重叠SEQ ID NO:214来确保，并且片段F3与分别编码SEQ ID NO:120、123、228、231、153和156的溶菌酶基因之间的退火通过包括在反向克隆引物(分别是C6ZGC-R；C6ZG7-R；C122PC-R；C122PA-R；C122P9-R和C122P5-R，表4a)中的重叠SEQ ID NO:215来确保。
表4a：克隆引物
将1μL 10μM的引物SEQ1和1μL 10μM的引物SEQ4添加到OE PCR反应中，并且使用以下构成的程序在Dual-Block热循环仪(MJ研究公司(MJ Research Inc.)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)上将这些反应第二次孵育：在98℃下2分钟；随后进行25个循环，各自由以下构成：在98℃下10秒.，和在72℃下4分钟，以及最后在72℃下10分钟的最后的延伸完成。
使用TAE缓冲液通过1％琼脂糖凝胶电泳分析五μl PCR反应，其中观察到适当大小的DNA条带。通过在60℃下加热管将剩余的PCR反应浓缩升至20μL。将10μL的这些反应用于米曲霉DAu785原生质体转化。
正向结合引物SEQ ID NO:214：CTATATACACAACTGGGGATCCACC
反向结合引物SEQ ID NO:215：TAGAGTCGACCCAGCCGCGCCGGCCA
实例18：曲霉属原生质体(SEQ ID NO:16、19、25、31、40、73、117、120、123、228、231、153和156)的制备和表达
米曲霉MT3568的原生质体是根据WO 95/002043制备的。将100μl的原生质体与1-3μg的曲霉属表达载体或OE PCR(SEQ ID NO:16、19、25、31、40、73、117、120、123、228、231、153和156)和250μL 60％PEG 4000(应用化学公司(Applichem)，达姆施塔特(Darmstadt)，德国)(聚乙二醇，分子量4,000)、10mM CaCl2、和10mM Tris-HCl pH 7.5混合，并轻轻混合。将混合物在37℃孵育30分钟并且将这些原生质体涂布到COVE平板上用于选择。在37℃孵育4-7天后，将4个转化体的孢子接种到96孔微量滴定板中的0.2mL YP+2％葡萄糖或DAP4C-1培养基中。在30℃培养4天后，通过SDS-PAGE分析培养液以鉴定产生最高量溶菌酶的转化体。
将每一转化的最佳转化体的孢子涂布于包含0.01％X-100的COVE板上，以便分离单个菌落。在含有10mM硝酸钠的COVE平板上总共重复铺展两次。然后将孢子接种到含有100mL YP+2％葡萄糖的500mL摇瓶中，并在30℃以100rpm振荡孵育4天。
将先前选择的菌株接种于带有挡板的250mL摇瓶中，所述摇瓶中含有100至150mL补充有DAP4C-1的乳酸和磷酸二铵或YP2％葡萄糖培养基，并在30℃的温度和150rpm的搅拌下发酵4天。使用0.2μm过滤装置通过过滤收获培养液。
可以如实例48中所述纯化培养液。
实例19：米曲霉(SEQ ID NO:4,7、22、43、46、49、52、225、76、81和84)中GH25溶菌酶的表达
米曲霉MT3568的原生质体是根据WO 95/002043制备的。将100μl的原生质体与1-3μg的以下曲霉属表达载体中的一种混合：SEQ ID NO:4、7、22、43、46、49、52、225、76、81和84。
将包含约3.0μg总DNA的六ul用于转化。将DNA轻轻地添加至100μl的米曲霉MT3568原生质体和250μl的60％PEG 4000(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)目录号95904)中。以下面的方式制备60％(W/V)PEG 4000：将PEG 4000粉末溶解于重蒸馏的H2O中并且然后在微波炉中、在800瓦特下加热10-20秒钟，直到溶解。将溶解的溶液冷却至室温并且然后用CaCl2溶液和Tris-HCl溶液(pH 7.5)进行调节，每种溶液的终浓度为10mM。在添加60％PEG4000溶液后，将试管进行轻轻混合并在37℃孵育30分钟。将混合液添加至6ml具有10mM乙酰胺的顶层琼脂中并且将其涂在具有10mM乙酰胺的COVE山梨醇板上。
将这些板在37℃孵育3天或更多天并且然后将其移至26℃，持续两天。通过首先将白色的10μl接种针(Nunc A/S公司，丹麦)浸泡在0.1％80溶液中，使形成孢子的菌落接触选择板，并且用该针在包含10mM乙酰胺的新鲜的COVE山梨醇板上再划痕来从4至8个单独的菌落中挑取孢子。在26℃5天后，使用来自再划痕的菌落的孢子接种96孔深碟板(NUNC，目录号260251，赛默科技公司，美国)。深碟板的这些孔包含500ul的YP+2％葡萄糖或DAP4C培养基。将接种的板用气体可渗透的胶带密封(89009-656，VWR.com)。将板在30℃固定孵育5天。通过使用10％Bis-Tris凝胶(英杰公司(Invitrogen)，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)在SDS-PAGE上分析20ul的收获的培养液以及考马斯蓝染色对表达进行证实。选择每个转化实验的一个转化体用于进一步的工作。
将每种指定的转化体的孢子接种到YP+2％葡萄糖培养基和DAP-4C-1培养基(100ml，在具有挡板的500ml Erlenmeyer摇瓶中)中。将这些培养物在26℃和150rpm下孵育3天并且如果必要的话孵育4天。使SDS凝胶如上地跑胶，以测试蛋白量。
在37℃孵育4-7天后，将4个转化体的孢子接种到96孔微量滴定板中的0.2mLYP+2％葡萄糖或DAP4C-1培养基中。在30℃培养4天后，通过SDS-PAGE分析培养液以鉴定产生最高量溶菌酶的转化体。
可以如实例48中所述纯化培养液。
实例20：SEQ ID NO:3的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23CD8的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，并然后浓缩，通过pH 6.0的20mM PBS改变缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例21：SEQ ID NO:12的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23T24的培养上清液，然后用pH 5.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。具有溶菌酶活性的级分通过SDS-PAGE分析，并且然后池化并浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例22：SEQ ID NO:15的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23T22的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，并然后池化在一起。
由于经纯化的样品具有两个以上的条带，因此将样品的电导率调节至140mS/cm，并然后加载到苯基HP柱(GE医疗)中，该柱通过pH 6.0的20mM PBS(其中添加1.2M(NH4)2SO4)平衡。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，并然后池化并浓缩。样品的缓冲液通过pH 6.0的20mM PBS交换用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例23：SEQ ID NO:30的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O233Q7的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。具有溶菌酶活性的级分通过SDS-PAGE分析，并且然后池化并浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例24：SEQ ID NO:36的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23CD9的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 7.5的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，并然后浓缩，通过pH 6.0的20mM PBS改变缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例25：SEQ ID NO:39的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O233Q9的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约190mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 6.5的20mM PBS(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。最终样品的缓冲液通过pH6.0的20mM PBS交换用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例26：SEQ ID NO:60的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O234A2的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例27：SEQ ID NO:63的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O241RS的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约160mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。
由于大多数溶菌酶活性保持在贯流级分中，因此将样品的电导率调节至180mS/cm，并再次加载到用pH4.5的20mM NaAc(其中添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的苯基琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，但发现两个主要的蛋白质条带。
将具有溶菌酶活性的级分池化在一起，并且用pH 4.5的20mM NaAc透析。将样品加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，并且也发现两个条带。将这些级分池化在一起，并加载到SP高效柱(GE医疗)中用于进一步纯化，但仍不能分开这两个条带。最后，将级分池化在一起，然后浓缩。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例28：SEQ ID NO:66的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23T25的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例29：SEQ ID NO:69的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O23T23的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约160mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 4.5的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例30：SEQ ID NO:72的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O14PP6的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例31：SEQ ID NO:89的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O24KKU的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例32：SEQ ID NO:92的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O24KKV的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 4.5的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例33：SEQ ID NO:95的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O24KKX的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约140mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc(添加1.2M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 4.5的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例34：SEQ ID NO:98的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRM的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 6.5的20mM Bis-Tris(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。
将具有溶菌酶活性的级分池化在一起，并用pH 6.5的20mM Bis-Tris透析。将样品加载到用pH 6.5的20mM Bis-Tris平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。最后，将级分池化在一起，然后浓缩。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例35：SEQ ID NO:101的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRQ的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 7.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例36：SEQ ID NO:104的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRN的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约140mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.5的20mM NaAc(添加1.2M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例37：SEQ ID NO:107的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRS的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 7.0的20mM PBS(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例38：SEQ ID NO:110的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRT的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约150mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc(其中添加3M NaCl)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.2M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例39：SEQ ID NO:113的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33DRU的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约185mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc(添加1.8M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.8M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例40：SEQ ID NO:116的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33V2R的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约170mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc(添加1.5M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖6快流柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从1.5M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过pH 5.0的20mM NaAc改变最终样品的缓冲液用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例41：SEQ ID NO:128的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3R的培养上清液，然后用pH 5.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例42：SEQ ID NO:131的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3S的培养上清液，然后用pH 5.0的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例43：SEQ ID NO:134的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3T的培养上清液，然后用pH 5.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例44：SEQ ID NO:137的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3V的培养上清液，然后用pH 5.0的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 5.0的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，但发现两个条带。
将具有溶菌酶活性的级分池化在一起，并将pH调节至4.5，然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP高效柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分。分别收集具有溶菌酶活性的两个条带，然后用两个不同的纯化ID浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例45：SEQ ID NO:140的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3W的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的SP快流柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例46：SEQ ID NO:143的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O34A3X的培养上清液，然后向沉淀中添加水以调节电导至约200mS/cm。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 6.0的20mM PBS(添加2.0M(NH4)2SO4)平衡的苯基-琼脂糖高效柱(GE医疗)中。使用(NH4)2SO4浓度梯度降低作为从2.0M至0的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性并通过SDS-PAGE分析。将具有溶菌酶活性的级分合并在一起，并然后用pH 5.0的20mM NaAc透析。将样品加载到用pH 5.0的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，合并在一起，然后浓缩。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例47：SEQ ID NO:146的纯化
首先用硫酸铵(80％饱和度)沉淀O33X6Z的培养上清液，然后用pH 4.5的20mMNaAc透析。将溶液用0.45um过滤器过滤，并且然后加载到用pH 4.5的20mM NaAc平衡的Capto SP柱(GE医疗)中。使用NaCl浓度梯度增加作为从0至1M的洗脱缓冲液，并且然后收集洗脱级分和贯流级分以检测溶菌酶活性。通过SDS-PAGE分析具有溶菌酶活性的级分，池化在一起，并然后浓缩用于进一步评估。通过蛋白质测定试剂盒(英杰公司(Invitrogen)，目录Q33212)测定蛋白质浓度。
实例48：GH25溶菌酶的纯化
一般纯化程序
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。用10％乙酸将pH调节至4.5。在调节pH后，该溶液变得有一点模糊并且通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤来去除这种模糊。
在预处理后，通过在XK26柱中的大约50ml的SP琼脂糖(SP Sepharose)上的色谱法纯化约650ml包含该溶菌酶的溶液，使用50mM乙酸钠(pH 4.5)作为缓冲液A并且使用50mM乙酸钠+1M NaCl(pH 4.5)作为缓冲液B。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。将池化的部分进行缓冲液交换进50mM乙酸钠(pH 5.5)中，并且使用具有10kDa截留的Amicon自旋过滤器进行浓缩。
SEQ ID NO:45、48、51和54的纯化
通过离心分离发酵液生物质。然后使用安装在系统上的中空纤维0.2μ柱体通过切向流过滤进行样品过滤，然后加载到用pH 8的50mM HEPES+pH 8.0的1.5M硫酸铵平衡的疏水柱(Phenyl-650M)中。应用逐步梯度降低的硫酸铵浓度作为洗脱缓冲液从1.5M到零。收集合并的洗脱峰级分，洗涤并且在SDS凝胶上分析贯流物。然后将凝胶上具有溶菌酶条带的峰用50mM HEPES pH 8进行缓冲液交换，并通过分光光度计(Agilent 8453紫外-可见光谱系统)测定蛋白质浓度。
SEQ ID NO:6、18、21、24、27、33、42、227、75、86、119、122、230、233、和155的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
如果表达水平低和/或电导率高(通常>10S/m)，则可能需要预处理过滤的培养液。可以使用3-5kDa截留膜上的超滤，G25凝胶过滤柱上的缓冲液交换或透析进行预处理。使用G25凝胶过滤柱，使用pH 4.5的50mM乙酸盐预处理SEQ ID NO:33、42、75和122，而SEQ IDNO:18、21和27在pH 4.5的50mM乙酸盐中在透析膜(6-8KDa)中预处理过夜。
将pH调节至4.5。如果在pH调节后溶液变浑浊，则通过具有0.22μm截止值的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤除去。含有溶菌酶的溶液通过SP Sepharose层析(在XK26柱中约50ml，使用50mM乙酸钠pH 4.5作为缓冲液A，使用50mM乙酸钠+1M NaCl pH4.5作为缓冲液B，以及0-100％的梯度，超过约10CV)纯化。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
SEQ ID NO:9的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
将pH调节至7.5，并且将样品通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PESBottle)顶部过滤器过滤。含有溶菌酶的溶液通过Q Sepharose层析(在XK26柱中约70ml，使用50mM Tris pH 7.5作为缓冲液A，使用50mM Tris+1M NaCl pH 7.5作为缓冲液B，以及0-100％的梯度，超过约5CV)纯化。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
SEQ ID NO:78的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
在vivacelle(截留值5000kd)上浓缩样品。将样品用Milli-Q水稀释3x并将pH调节至7.5。含有溶菌酶的溶液通过Q Sepharose层析(在XK26柱中约30ml，使用50mM Hepes pH7.5作为缓冲液A，使用50mM Hepes+1M NaCl pH 7.5作为缓冲液B，以及0-50％的梯度，超过约10CV)纯化。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
SEQ ID NO:83的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
将样品超滤并在Sartorius UF-系统10kDa上渗滤。如果在pH调节后溶液变浑浊，则通过具有0.22μm截止值的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤除去。含有溶菌酶的溶液通过Q Sepharose层析(在XK26柱中约50ml，使用50mM HepespH 7.0作为缓冲液A，使用50mM Hepes+1M NaCl pH 7.0作为缓冲液B，以及0-100％的梯度，超过约10CV)纯化。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
SEQ ID NO:125的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
使用G25凝胶过滤柱，使用50mM乙酸钠pH将样品预处理，并且通过Q-琼脂糖柱上的色谱法(XK26柱中大约50ml，使用50mM Tris pH 8.0作为缓冲液A并且使用50mM Tris+2MNaCl pH 8.0作为缓冲液B，以及0-100％梯度，超过约10CV)纯化洗脱液。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
SEQ ID NO:158的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
将样品用milli-Q水稀释50％，并将pH调节至pH 4.5。通过Capto S上的色谱法(在XK26柱中大约50ml，使用50mM乙酸盐pH 9.0作为缓冲液A并且使用50mM乙酸盐+2M NaCl pH9.0作为缓冲液B)来纯化样品。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
实例49：溶菌酶活性的确定
确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法。
根据实例1，在与现有技术溶菌酶(来自如WO 2013/076253中所述的嗜碱枝顶孢的GH25溶菌酶，本文中表示为SEQ ID NO:159)相同的平板上测试本申请的溶菌酶。计算本发明的溶菌酶与SEQ ID NO:159的溶菌酶的OD测量值的比率，并且示出在以下表5至32中。
表5：SEQ ID NO:24和227的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.41 | - |
| SEQ ID NO:227 | 1.34 | 3.3 |
| SEQ ID NO:24 | 1.99 | 4.9 |
表6：SEQ ID NO:6和9的OD测量值
表7：SEQ ID NO:72和83的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.49 | - |
| SEQ ID NO:83 | 0.99 | 2.0 |
| SEQ ID NO:72 | 2.22 | 4.5 |
表8：SEQ ID NO:86的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.65 | |
| SEQ ID NO:86 | 1.34 | 2.1 |
表9：SEQ ID NO:30和60的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.61 | - |
| SEQ ID NO:60 | 2.32 | 3.5 |
| SEQ ID NO:30 | 2.14 | 3.2 |
表10：SEQ ID NO:3、36和39的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.52 | - |
| SEQ ID NO:36 | 2.52 | 4.8 |
| SEQ ID NO:3 | 2.60 | 5.0 |
| SEQ ID NO:39 | 1.71 | 3.3 |
表11：SEQ ID NO:27和80的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.62 | - |
| SEQ ID NO:80 | 1.86 | 3.0 |
| SEQ ID NO:27 | 1.20 | 2.0 |
表12：SEQ ID NO:18和21的OD测量值
表13：SEQ ID NO:63、66和69的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.63 | - |
| SEQ ID NO:63 | 1.38 | 2.2 |
| SEQ ID NO:66 | 1.72 | 2.7 |
| SEQ ID NO:69 | 2.03 | 3.2 |
表14：SEQ ID NO:12和15的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.71 | - |
| SEQ ID NO:15 | 1.79 | 2.5 |
| SEQ ID NO:12 | 1.47 | 2.1 |
表15：SEQ ID NO:45、51和54的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.50 | - |
| SEQ ID NO:51 | 2.06 | 4.2 |
| SEQ ID NO:54 | 1.98 | 4.0 |
| SEQ ID NO:45 | 2.07 | 4.2 |
表16：SEQ ID NO:48的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.44 | - |
| SEQ ID NO:48 | 0.93 | 2.1 |
表17：SEQ ID NO:33和75的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.56 | - |
| SEQ ID NO:75 | 1.56 | 2.8 |
| SEQ ID NO:33 | 2.33 | 4.2 |
表18：SEQ ID NO:21和42的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.72 | - |
| SEQ ID NO:21 | 3.13 | 4.4 |
| SEQ ID NO:42 | 1.94 | 2.7 |
表19：SEQ ID NO:24和125的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.44 | - |
| SEQ ID NO:24 | 1.97 | 4.5 |
| SEQ ID NO:125 | 1.74 | 2.9 |
表20：SEQ ID NO:98的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.55 | - |
| SEQ ID NO:98 | 1.79 | 3.3 |
表21：SEQ ID NO:104和122的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.44 | - |
| SEQ ID NO:122 | 2.09 | 4.8 |
| SEQ ID NO:104 | 1.23 | 2.8 |
表22：SEQ ID NO:89的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.63 | - |
| SEQ ID NO:89 | 2.11 | 3.4 |
表23：SEQ ID NO:92、95、128、134和143的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.49 | - |
| SEQ ID NO:92 | 1.30 | 2.6 |
| SEQ ID NO:95 | 1.59 | 3.2 |
| SEQ ID NO:128 | 2.38 | 4.8 |
| SEQ ID NO:134 | 1.24 | 2.5 |
| SEQ ID NO:143 | 2.59 | 5.2 |
表24：SEQ ID NO:146的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.38 | - |
| SEQ ID NO:146 | 1.94 | 5.1 |
表25：SEQ ID NO:110和116的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.46 | - |
| SEQ ID NO:110 | 1.53 | 3.3 |
| SEQ ID NO:116 | 1.28 | 2.8 |
表26：SEQ ID NO:131的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.30 | - |
| SEQ ID NO:131 | 2.35 | 7.8 |
表27：SEQ ID NO:110、128和137的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.34 | - |
| SEQ ID NO:137 | 1.87 | 5.5 |
| SEQ ID NO:137 | 1.48 | 4.4 |
| SEQ ID NO:128 | 2.09 | 6.2 |
| SEQ ID NO:110 | 1.50 | 4.5 |
表28：SEQ ID NO:131的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.40 | - |
| SEQ ID NO:131 | 2.42 | 6.0 |
表29：SEQ ID NO:140的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.61 | - |
| SEQ ID NO:140 | 2.03 | 3.3 |
表30：SEQ ID NO:158的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.56 | - |
| SEQ ID NO:158 | 1.65 | 3.0 |
表31：SEQ ID NO:230、233和155的OD测量值
表32：SEQ ID NO:101、107、113和119的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.53 | - |
| SEQ ID NO:113 | 1.77 | 3.4 |
| SEQ ID NO:101 | 1.91 | 3.6 |
| SEQ ID NO:107 | 1.50 | 2.9 |
| SEQ ID NO:119 | 2.40 | 4.6 |
结果显示与现有技术溶菌酶相比，本发明的溶菌酶具有增加的活性。
实例50：包含本发明溶菌酶的动物饲料和动物饲料添加剂
动物饲料添加剂
将包含0.01g至10g酶蛋白的本发明溶菌酶(例如，SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60、63、66、69、72、75、80、83、86、89、92、95、98、101、104、107、110、113、116、119、122、125、128、131、134、137、140、143、146、149、152、155、158、221、224、227、230或233)的配制品添加至以下预混物(/千克预混物)中：
动物饲料
这是一个动物饲料(肉鸡饲料)的实例，其包含如上文描述的动物饲料添加剂：
62.55％玉蜀黍
33.8％豆粕(50％粗蛋白)
1.0％大豆油
0.2％DL-甲硫氨酸
0.22％DCP(磷酸二钙)
0.76％CaCO3(碳酸钙)
0.32％砂
0.15％NaCl(氯化钠)
1％上述预混料
将这些成分混合，将饲料在所希望的温度下粒化，例如60℃、65℃、75℃、80℃、85℃、90℃或甚至95℃。
实例51：金针菇(SEQ ID NO:221)的克隆和表达
根据来自以下工程的下载的基因组DNA装配来鉴定GH25溶菌酶：Park YJ等人.,"Whole genome and global gene expression analyses of the model mushroomFlammulina velutipes reveal a high capacity for lignocellulose degradation.[蘑菇金针菇模型的全基因组和全基因表达分析揭示了木质纤维素降解的高容量]",PLoSOne[公共科学图书馆],2014年4月8；9(4):e93560。
金针菇GH25溶菌酶(SEQ ID NO:217)的密码子优化的无内含子版本从GeneArt，英杰公司(Invitrogen)定购，具有SEQ ID NO:219。
SEQ ID NO:219-下划线部分是用于克隆到pDau109中的限制性内切酶。
ACACAACTGGGGATCCACCATGCGAATCCTCTTGTTCATCGCAGTCACAATCGCGTTGGGAGTCCATGCCAGGCTCAACGGCATCGATGTCTCGGGATACCAGCCGAACGTCAACTGGGCCACGGTCAAAGCGAACGGCGTGTCCTTCGCGTACATCAAGGCAACCGAGGGCACCACGTATACAAACCCCTCGTTCTCCTCCCAGTACACCGGAGCAACAAAAGCCGGATTGATCAGGGGCTCCTACCATTTCGCGCATCCTTCGTCGTCCACAGGCGCAGCACAGGCACGATACTTCGTGGCACATGGCGGTGGTTGGTCCGGTGATGGTATCACCTTGCCTGGTGCGCTCGATATCGAGTATAACCCTTCGGGTGCGACATGTTACGGCCTCTCGACCTCGTCCATGGTGAACTGGATCGCCGATTTCTCCAACACTTATCACTCGCTCACAGGCAGGTACCCCGTCATTTACACCACTGCCGATTGGTGGCGAACCTGTACCGGCAACTCCGCATCCTTCGCAAACAACTCGCCTCTCTGGATTGCGCGTTACGCGTCGACTATCGGTACGCTCCCTGCCGGATGGTCGTACGCGACCTTCTGGCAGTATGCGGATTCGGGCTCCAACCCTGGCGATCAGGATTACTTCAACGGTGACGCAGCGGGTCTCAAGCGTCTCGCGACATCGTAATAAGCTTCTCGAGATCT
如实例16所述，将合成基因直接克隆到pDau109中，作为连接到载体的BamHI-HindIII位点。如实例19所述表达具有SEQ ID NO:221的GH25溶菌酶，并且如实例52所述进行纯化。
实例52：来自金针菇(SEQ ID NO:221)的GH25溶菌酶的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
使用G25凝胶过滤柱，使用50mM乙酸盐pH 4.5将样品预处理，并且通过SP-琼脂糖柱上的色谱法(XK26柱中大约50ml，使用50mM乙酸钠pH 4.5作为缓冲液A并且使用50mM乙酸钠+2M NaCl pH 4.5作为缓冲液B，以及0-100％梯度，超过约10CV)纯化洗脱液。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
实例53：溶菌酶编码序列SEQ ID NO:222的PCR扩增和InFusion克隆
将表33中给出的InFusion克隆用于从如实例16所述的基因组DNA生成BamHI-HindIII侧翼克隆盒。
表33：InFusion克隆引物
*-F-正向引物；-R-反向引物
粗体字母代表编码序列。加下划线的序列与pDau109的插入位点是同源的。
如实例19所述在米曲霉中表达GH25溶菌酶，并且如实例54所述进行纯化。
实例54：来自Deconica coprophila(SEQ ID NO:222)的GH25溶菌酶的纯化
通过具有0.22μm截留的快速PES瓶(Fast PES Bottle)顶部过滤器过滤具有溶菌酶的发酵上清液。
使用G25凝胶过滤柱，使用50mM乙酸盐pH 4.5将样品预处理，并且通过SP-琼脂糖柱上的色谱法(XK26柱中大约50ml，使用50mM乙酸钠pH 4.5作为缓冲液A并且使用50mM乙酸钠+2M NaCl pH 4.5作为缓冲液B，以及0-100％梯度，超过约10CV)纯化洗脱液。基于色谱图(在280nm和254nm处的吸收)和SDS-PAGE分析将来自该柱的部分进行池化。
由SDS-PAGE估算分子量，并且纯度>90％。
实例55：溶菌酶活性的确定
根据实例1，在与现有技术溶菌酶(来自如WO 2013/076253中所述的嗜碱枝顶孢的GH25溶菌酶，本文中表示为SEQ ID NO:159)相同的平板上测试本申请的溶菌酶。计算本发明的溶菌酶与SEQ ID NO:159的溶菌酶的OD测量值的比率，并且示出在以下表34中。
表34：SEQ ID NO:221和224的OD测量值
| 溶菌酶 | OD测量值 | 比率 |
| SEQ ID NO:159 | 0.51 | - |
| SEQ ID NO:221 | 1.74 | 3.4 |
| SEQ ID NO:224 | 1.80 | 3.5 |
结果显示与现有技术溶菌酶相比，本发明的溶菌酶具有增加的活性。
实例56针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的确定方法。
PGN提取：
培养约氏乳杆菌：
材料
·MRS培养液，产品号BD 288130，pH 6.3-6.7。
·MRS琼脂平板，BD 288130；琼脂Oxoid LP0011；pH 6.3-6.7。
·0.9％NaCl，默克公司(Merck)106404，Cas no.7647145
·罐，供应商默克公司(Merck)116387，Anaerocult厌氧罐2.5L
·Anaerogen 2,5L，赛默飞科学公司(ThermoScientific)，目录号AN0025A
约氏乳杆菌，DSM10533
程序
将约氏乳杆菌从冷冻原液划线至MRS琼脂平板并在厌氧条件下孵育2天，厌氧罐具有Anaerogen 2.5L，30℃。将一些菌落接种到500mL蓝色盖帽瓶中的500mL MRS培养液中，并置于具有Anaerogen 2.5L的厌氧罐中，在30℃72小时。
将培养物离心(6000rpm，10分钟)，倒出上清液，然后进行另一轮离心。将沉淀物在100mL 0.9％NaCl中洗涤，并且将悬浮液充分混合并以6000rpm离心10分钟。倒出上清液，并且重复在0.9％NaCl中的洗涤程序至总共三次洗涤。向沉淀中添加约40mL 0.9％NaCl，并且将溶液转移至50mL falcon管中。将溶液以6000rpm离心10分钟，并且倒出上清液。将沉淀物储存在-18℃直至进行肽聚糖的提取。
提取程序：
材料
·来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的蛋白酶，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P5147，CAS 9036-06-0
·PBS pH 7.3：
NaCl：8g，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)31434，CAS 7647-14-5
KCl：0.2g，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P9333，CAS 7447-40-7
KH2PO4：0.24g，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P5655，CAS 7778-77-0
Na2HPO4.2H2O:1.44g，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)30412，CAS 10028-24-7
添加Milli-Q水至1000mL
·1％Triton-X 100溶液：
1mL Triton X100，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)X100，CAS 9002-93-1
添加Milli Q水至100mL
·500mM碳酸钠缓冲液，pH 9.3：
500mM碳酸钠由在500mL MQ水中的21g Na2CO3(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)S7795，CAS 497-19-8)制成
500mM碳酸氢钠由在500mL MW水中的72g NaHCO3(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)S6014，CAS 144-55-8)制成
pH 9.3缓冲液由320mL NaHCO3和80mL Na2CO3制成，并且用HCl调节pH值
·含10mM Tris HCl pH 8.0，1mM EDTA，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P4557，CAS 108-95-2的苯酚溶液
·丙酮，西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)32201-M，CAS 67-64-1
·乙醇，96％，CCS医疗保健(CCS Healthcare)1680643，CAS 64-17-5
程序
约氏乳杆菌细胞材料被冷冻干燥。将冷冻干燥的材料(525mg)悬浮在50mL Falcon管中的PBS(40mL)中。将该悬浮液在室温下在热振荡器中以700rpm振荡2小时。然后添加灰色链霉菌(Streptomyces griseus)蛋白酶(55mg)，并且将悬浮液在37℃在热振荡器中富有6小时。然后在室温下将其在1900g下离心20分钟，并且倾析出上清液。将沉淀重悬于1％Triton X-100(40mL)中并在37℃振荡过夜。在另一次离心和倾析后，将沉淀重悬于PBS(40mL)中并再次添加蛋白酶(55mg)。将悬浮液再次在37℃孵育6小时，离心并倾析。将沉淀重悬于PBS(40mL)中并在37℃振荡过夜。用PBS(40mL，30分钟搅拌)重复该洗涤程序一次，然后用50％乙醇/水(40mL，30分钟搅拌)重复该洗涤程序一次。然后将沉淀物分到两个Falcon管中。向每个管中添加预热至40℃的苯酚溶液(15mL)。将悬浮液在40℃振荡10分钟，并且然后添加96％乙醇(每管25mL)，离心并倾析。在冷冻干燥之前，用丙酮(每管40mL)和96％乙醇(每管40mL)进一步洗涤沉淀。将来自两个管的沉淀合并，得到80mg纯化的肽聚糖，为白色粉末。
还原端测定
取决于可用储备液的强度，在聚丙烯管中，将溶菌酶稀释于磷酸稀释缓冲液(5mM柠檬酸盐、5mM K2HPO4、0.01％TritonX-100、pH 5.0)中至200或50μg/mL。通过在磷酸盐稀释缓冲液(5mM柠檬酸盐，5mM K2HPO4，0.01％TritonX-100，pH 5.0)中制备2倍稀释系列降至浓度为6.3μg/mL，将稀释的溶菌酶在96孔聚丙烯微量滴定板中进一步稀释。制备在MillQ中的约氏乳杆菌底物的50mg/ml原液并在磷酸盐缓冲液(50mM柠檬酸盐，50mM K2HPO4，pH 5.0)中稀释至250μg/ml。在聚丙烯深孔板中，将50μL溶菌酶稀释液与450μL约氏乳杆菌溶液混合并在40℃在振荡(500rpm)下孵育45分钟。孵育后，将深孔板离心(3200rpm，7分钟)以沉淀不溶物质，并将100μL上清液与50μL 3.2M HCl在96孔PCR板中混合，并在95℃孵育80分钟。向PCR板的每个孔中添加50μL的3.5M NaOH，并将150μL的每种样品转移到新PCR板，该新PCR板含有在酒石酸钾钠/NaOH缓冲液(50g/L酒石酸K-Na+20g/L NaOH)中的75μL/孔的4-羟基苯甲酰肼(PAHBAH)溶液。将板在95℃孵育10分钟，然后将100μL/样品转移至透明平底微量滴定板，用于405nm处的光密度(OD)测量。对三次稀释的样品(在Milli-Q水中在100μL中稀释的50μL样品)进行OD测量。OD测量值表示减去原始(背景)读数后的差值，并表示两个OD测量值的平均值。结果示出在表35和图3和4中。
表35：还原端测定中的平均OD405测量值(背景校正)
ND：由于酶储备溶液低浓度而未确定
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等效方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，对于本领域的技术人员而言本发明的各种修改将从前述说明变得显而易见。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。
Claims (26)
1.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少84％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少86％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少82％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少81％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少80％序列同一性的多肽；
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(bg)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(bh)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽以及多达10个氨基酸例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；和
(bi)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)、(am)、(an)、(ao)、(ap)、(aq)、(ar)、(as)、(at)、(au)、(av)、(aw)、(ax)、(ay)、(az)、(ba)、(bb)、(bc)、(bd)、(be)或(bf)的多肽的片段，该片段具有溶菌酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
2.根据权利要求1所述的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(u)与SEQ ID NO:63的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(v)与SEQ ID NO:66的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(w)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aa)与SEQ ID NO:83的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ab)与SEQ ID NO:86的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ad)与SEQ ID NO:92的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ah)与SEQ ID NO:104的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ai)与SEQ ID NO:107的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aj)与SEQ ID NO:110的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ao)与SEQ ID NO:125的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ap)与SEQ ID NO:128的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ar)与SEQ ID NO:134的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(at)与SEQ ID NO:140的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(az)与SEQ ID NO:158的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bb)与SEQ ID NO:224的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bc)与SEQ ID NO:227的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
3.一种具有溶菌酶活性的分离的GH25多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(t)与SEQ ID NO:60的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(x)与SEQ ID NO:72的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(y)与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(z)与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ac)与SEQ ID NO:89的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ae)与SEQ ID NO:95的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(af)与SEQ ID NO:98的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ag)与SEQ ID NO:101的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ak)与SEQ ID NO:113的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(al)与SEQ ID NO:116的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(am)与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(an)与SEQ ID NO:122的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aq)与SEQ ID NO:131的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(as)与SEQ ID NO:137的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(au)与SEQ ID NO:143的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(av)与SEQ ID NO:146的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(aw)与SEQ ID NO:149的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ax)与SEQ ID NO:152的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ay)与SEQ ID NO:155的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(ba)与SEQ ID NO:221的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(bd)与SEQ ID NO:230的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；
(be)与SEQ ID NO:233的多肽具有至少90％序列同一性的多肽；和
(bf)选自下组的多肽的变体，该组由以下组成：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:66、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101、SEQID NO:104、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134、SEQID NO:137、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:149、SEQ ID NO:152、SEQ ID NO:155、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:221、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:227、SEQID NO:230和SEQ ID NO:233，其中该变体具有溶菌酶活性，并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。
4.根据权利要求1至3所述的多肽，如通过确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法确定，该多肽具有a)与鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的溶菌酶活性相比或b)与SEQ ID NO:159的溶菌酶活性相比的改善的溶菌酶活性。
5.根据权利要求1至3所述的多肽，如通过i)确定针对溶壁微球菌的溶菌酶活性的方法和ii)确定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的方法中的任一种确定，该多肽具有a)与鸡蛋清溶菌酶(HEWL)的溶菌酶活性相比和b)与SEQ ID NO:159的溶菌酶活性相比的改善的溶菌酶活性。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的多肽，其中该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至207、SEQ ID NO:6的氨基酸1至201、SEQ ID NO:15的氨基酸1至208、SEQ ID NO:18的氨基酸1至207、SEQ ID NO:21的氨基酸1至208、SEQ ID NO:24的氨基酸1至207、SEQ ID NO:33的氨基酸1至208、SEQ ID NO:36的氨基酸1至208、SEQ ID NO:39的氨基酸1至206、SEQ ID NO:45的氨基酸1至216、SEQ ID NO:48的氨基酸1至218、SEQ ID NO:51的氨基酸1至204、SEQ IDNO:54的氨基酸1至203、SEQ ID NO:60的氨基酸1至208、SEQ ID NO:72的氨基酸1至208、SEQID NO:75的氨基酸1至217、SEQ ID NO:80的氨基酸1至208、SEQ ID NO:89的氨基酸1至207、SEQ ID NO:95的氨基酸1至201、SEQ ID NO:98的氨基酸1至202、SEQ ID NO:101的氨基酸1至206、SEQ ID NO:113的氨基酸1至202、SEQ ID NO:116的氨基酸1至206、SEQ ID NO:119的氨基酸1至207、SEQ ID NO:122的氨基酸1至208、SEQ ID NO:125的氨基酸1至215、SEQ IDNO:128的氨基酸1至217、SEQ ID NO:131的氨基酸1至214、SEQ ID NO:137的氨基酸1至203、SEQ ID NO:143的氨基酸1至207、SEQ ID NO:146的氨基酸1至208、SEQ ID NO:155的氨基酸1至207、SEQ ID NO:221的氨基酸1至207、SEQ ID NO:230的氨基酸1至207、或SEQ ID NO:233的氨基酸1至207，或由其组成。
7.根据权利要求1至6所述的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：与SEQ IDNO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
8.一种水解细菌细胞壁中的肽聚糖的方法，该方法包括用一种或多种具有溶菌酶活性的GH25多肽处理细菌细胞，其中该多肽如权利要求1至7中任一项所定义。
9.一种提高动物饲料中肽聚糖消化率的方法，该方法包括使用如权利要求1至7中任一项所定义的肽。
10.一种动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂包含如权利要求1至7中任一项所定义的多肽。
11.根据权利要求10所述的动物饲料添加剂，该动物饲料添加剂还包含选自由以下组成的列表的一种或多种组分：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；
一种或多种其他饲料成分；
一种或多种另外的酶；
一种或多种益生菌；和
一种或多种植生素。
12.一种动物饲料，该动物饲料包含如权利要求1至7中任一项所定义的多肽。
13.根据权利要求12所述的动物饲料，该动物饲料还包含植物基材料。
14.一种组合物，该组合物包含如权利要求1至7中任一项所述的多肽。
15.一种编码如权利要求1至7中任一项所述的多肽的多核苷酸。
16.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如权利要求14所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
17.一种产生如权利要求1至7中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求16所述的宿主细胞；并且
(b)回收该多肽。
18.如权利要求1至7中任一项所披露的多肽的用途：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在用于在动物饲料中使用的组合物的制备中；和/或
用于改善动物的肠道健康。
19.一种用于家禽饲料或猪饲料中的畜牧添加剂，所述添加剂包含如权利要求1至7中任一项所定义的多肽。
20.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物的消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞的量，该方法包括用包含如权利要求3至7中任一项所定义的多肽的饲料或饲料添加剂喂食该动物。
21.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞的数量，该方法包括用饲料或饲料添加剂喂食该动物，该饲料或饲料添加剂包含选自下组的多肽，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，优选地选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，更优选地与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽和与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
22.一种改善动物肠道健康的方法，该方法包括减少所述动物消化道中死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的量，该方法包括用饲料或饲料添加剂喂食该动物，该饲料或饲料添加剂包含选自下组的多肽，该组由以下组成：与SEQ ID NO 159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
23.一种促进从动物消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括给所述动物喂食如在权利要求3至7中任一项定义的多肽来源。
24.一种促进从动物消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括给所述动物喂食选自下组的多肽来源，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:75的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，优选地选自下组，该组由以下组成：与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:119的多肽具有至少90％序列同一性的多肽，更优选地与SEQ ID NO:36的多肽具有至少90％序列同一性的多肽、和与SEQ ID NO:80的多肽具有至少90％序列同一性的多肽。
25.一种促进从动物消化道中清除死亡的约氏乳杆菌细胞或其细胞壁碎片的方法，该方法包括给所述动物喂食选自下组的多肽来源，该组由以下组成：与SEQ ID NO 159的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％，至少98％，至少99％或100％的序列同一性的多肽。
26.根据权利要求20至25中任一项所述的方法，其中该多肽在5ppm下具有针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性，如通过确定针对约氏乳杆菌的溶菌酶活性的方法确定，该溶菌酶活性在405nm处的光密度(OD)测量增加至少0.20。
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