CN109312321A - 包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物 - Google Patents
包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β‑半乳糖苷酶活性的多肽的组合物，用于在例如动物饲料中使用。本发明进一步涉及具有β‑半乳糖苷酶活性的多肽、具有半乳聚糖酶活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞，连同产生和使用这些多肽的方法。
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发明背景
技术领域
本发明涉及包括具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物，用于在例如动物饲料中使用。本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性的多肽、具有半乳聚糖酶活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞，连同产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
大豆是原产于东亚的豆类物种，且是全球第二大饲料作物，也是应用于动物饲料中最大的蛋白质来源。大豆可以经制造(脱脂)以生产以产生大豆粉(SBM)，并且SBM是动物饲料的一种重要的廉价的高质量蛋白质来源。其他常见的豆类有鹰嘴豆、羽扇豆、小扁豆、花生、豆类或豌豆，也可加工并用作动物饲料。豆类，例如大豆，含有大量的半乳聚糖多糖，需要通过酶的降解来释放糖，从而释放能量。
然而，很少有解决方案能有效地降解半乳聚糖多糖，且因此豆类中的能量不能被动物充分利用。高达70％的农民开支来自动物饲料的成本。
Shipkowski等人在Applied and Environmental Microbiology[应用与环境微生物],2006,72(12),7730中披露了β-半乳糖苷酶LacA和半乳聚糖酶GalA以及这两种酶在降解半乳聚糖中的用途。Tabachnikov等人在Febs Journal[FEBS期刊],2013,280(3),950中披露了β-半乳糖苷酶GanB和半乳聚糖酶GanA以及这两种酶在降解半乳聚糖中的用途。然而，如本文所披露的，这些现有的技术解决方案对于从豆类(例如大豆)释放半乳糖并不是很有效。因此，本发明的目的是提供从半乳聚糖多糖中有效释放糖的解决方案，从而改善豆类的营养价值，通过重新配制饮食以减少饲料成本或为动物提供更多能量以改善动物的生长。
发明内容
本发明涉及包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽的组合物。
本申请进一步涉及包含本发明所述的一种或多种多肽的颗粒；包含本发明所述的一种或多种多肽的动物饲料添加剂；包含本发明所述的一种或多种多肽的液体配制品；包含本发明所述的一种或多种多肽的动物饲料和粒化动物饲料；从植物基材料中释放半乳糖的方法；改善动物的一个或多个表现参数的方法，以及本发明的组合物在动物饲料中、在动物饲料添加剂中、在制备用于在动物饲料中使用的组合物、用于改善动物饲料的营养价值、用于提高动物饲料的消化率、用于改善动物的一个或多个表现参数和/或用于从植物基材料中释放半乳糖的用途。
本发明还涉及具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的分离的多肽；编码本发明的多肽的多核苷酸；核酸构建体；表达载体；包含这些多核苷酸的重组宿主细胞；以及制备这些多肽的方法。
序列表概述
SEQ ID NO:1是从柯恩氏菌属物种(Cohnella sp)-60555分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是来自柯恩氏菌属物种-60555的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是具有His-标签的SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5是从Cohnella xylanilytica分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:6是如从SEQ ID NO:5推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是来自Cohnella xylanilytica的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8是具有His-标签的SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是从Paenibacillus tundrae分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:10是如从SEQ ID NO:9推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11是来自Paenibacillus tundrae的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是具有His-标签的SEQ ID NO:11的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13是从巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:14是如从SEQ ID NO:13推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是来自巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16是具有His-标签的SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
SEQ ID NO:17是从类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus sp)-62603分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:18是如从SEQ ID NO:17推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:19是来自类芽孢杆菌属物种-62603的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:20是具有His-标签的SEQ ID NO:19的氨基酸序列。
SEQ ID NO:21是从解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:22是如从SEQ ID NO:21推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:23是来自解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:24是具有His-标签的SEQ ID NO:23的氨基酸序列。
SEQ ID NO:25是从类芽孢杆菌属物种-18179分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:26是如从SEQ ID NO:25推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27是来自类芽孢杆菌属物种-18179的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28是具有His-标签的SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
SEQ ID NO:29是从皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。(D448RG)
SEQ ID NO:30是如从SEQ ID NO:29推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31是来自皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:32是具有His-标签的SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
SEQ ID NO:33是从Paenibacillus xylanexedens分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:34是如从SEQ ID NO:33推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:35是来自Paenibacillus xylanexedens的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36是具有His-标签的SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
SEQ ID NO:37是从Cohnella laeviribosi分离的GH53半乳聚糖酶的基因序列。
SEQ ID NO:38是如从SEQ ID NO:37推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:39是来自Cohnella laeviribosi的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:40是具有His-标签的SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
SEQ ID NO:41是从类芽孢杆菌属物种-18026分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:42是如从SEQ ID NO:41推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:43是从短小芽孢杆菌分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:44是如从SEQ ID NO:43推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:45是如从具有MHHHHHH-标签的SEQ ID NO:43推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:46是从Bacillus nealsonii分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:47是如从SEQ ID NO:46推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:48是如从具有MHHHHHH-标签的SEQ ID NO:46推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:49是从Burkholderia sediminicola分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:50是如从SEQ ID NO:49推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:51是如从具有MHHHHHH-标签的SEQ ID NO:49推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:52是从嗜碱芽孢杆菌分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:53是如从SEQ ID NO:52推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:54是如从具有MHHHHHH-标签的SEQ ID NO:52推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:55是从芽孢杆菌属物种-11182分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:56是如从SEQ ID NO:55推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:57是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:55推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:58是从芽孢杆菌属物种-62759分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:59是如从SEQ ID NO:58推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:60是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:58推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:61是从类芽孢杆菌属物种-18054分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:62是如从SEQ ID NO:61推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:63是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:61推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:64是从类芽孢杆菌属物种-62047分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:65是如从SEQ ID NO:64推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:66是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:64推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:67是从类芽孢杆菌属物种62603分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:68是如从SEQ ID NO:67推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:69是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:67推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:70是从Paenibacillus woosongensis分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:71是如从SEQ ID NO:70推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:72是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:70推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:73是从类芽孢杆菌属物种62253分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:74是如从SEQ ID NO:73推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:75是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:73推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:76是从类芽孢杆菌属物种62758分离的GH42β-半乳糖苷酶的基因序列。
SEQ ID NO:77是如从SEQ ID NO:76推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:78是如从具有MHHHHHHPR-标签的SEQ ID NO:76推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:79是来自披露于WO1997/032014中的特异腐质霉的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:80是来自披露于WO1997/032014中的嗜热毁丝霉的成熟GH53半乳聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:81是GH53半乳聚糖酶保守基序：GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE。
SEQ ID NO:82是GH53半乳聚糖酶保守基序：WADP[A/G]xQxKPxAW。
SEQ ID NO:83是GH42β-半乳糖苷酶保守基序：DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M]。
SEQ ID NO:84是克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)分泌信号。
SEQ ID NO:85是来自枯草芽孢杆菌(菌株168)的GH42β-半乳糖苷酶LacA的氨基酸序列，所述枯草芽孢杆菌由Shipkowski等人披露于Applied and EnvironmentalMicrobiology[应用与环境微生物],2006,72(12),7730(Swissprot：O07012)中。
SEQ ID NO:86是来自枯草芽孢杆菌(菌株168)的GH53半乳聚糖酶GalA的氨基酸序列，所述枯草芽孢杆菌由Shipkowski等人披露于Applied and EnvironmentalMicrobiology[应用与环境微生物],2006,72(12),7730(Swissprot：O07013)中。
SEQ ID NO:87是来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的GH42β-半乳糖苷酶ganB的氨基酸序列，所述嗜热脂肪土芽孢杆菌由Tabachnikov等人披露于Febs Journal[FEBS期刊],2013,280(3),950 7730(Swissprot：F8TRX0)中。
SEQ ID NO:88是来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的GH53半乳聚糖酶ganA的氨基酸序列，所述嗜热脂肪土芽孢杆菌由Tabachnikov等人披露于Febs Journal[FEBS期刊],2013,280(3),950 7730(Swissprot：F8TRX1)中。
定义
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占用同一染色体基因座的基因的两个或更多个替代形式中任一者。等位基因变异通过突变天然地产生，并且可能导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
动物：术语“动物”是指除人类以外的所有动物。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如，动物，如绵羊、山羊、牛(例如，肉牛、奶牛和牛犊)、鹿、yank、骆驼、美洲驼和袋鼠。非反刍动物包括单胃动物，例如，猪(包括但不限于小猪、成长猪、和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；鱼(包括但不限于琥珀鱼、巨滑舌鱼、魮鱼、鲈鱼、蓝鱼、bocachico、鲤科鱼、鲶鱼、cachama、鲤鱼、鲶鱼、卡特拉鱼、遮目鱼、嘉鱼、丽鱼科鱼、军曹鱼、鳕鱼、小翻车鱼、金头鲷、石首鱼、鳗鱼、虾虎鱼、金鱼、丝足鱼、石斑鱼、guapote、大比目鱼、爪哇鱼(java)、野鲮属鱼、莱鱼(lai)、泥鳅、鲭鱼、牛奶鱼、银鲈、泥鱼、鲻鱼、帕高鱼(paco)、pearlspot、pejerrey、河鲈鱼、狗鱼、鲳参鱼、斜齿鳊、鲑鱼、虾米鱼(sampa)、加拿大鰤鲈、黑鲈、海鲤、发光鱼(shiner)、睡鲨(sleeper)、黑鱼、鲷鱼、锯盖鱼、比目鱼、刺足鱼、鲟鱼、翻车鱼、香鱼(sweetfish)、丁鲷、特罗尔鱼(terror)、罗非鱼、鳟鱼、鲔鱼、多宝鱼、白鳟鱼、白斑鱼和白鱼)；和甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
动物饲料：术语“动物饲料”是指适合于、或打算用于由动物摄入的任何化合物、制剂、或混合物。单胃动物的动物饲料通常包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)，而反刍动物的动物饲料通常包括草料(包括粗粮和青贮)，并且可以进一步包括浓缩物连同维生素、矿物质、酶、直接饲养的微生物、氨基酸和/或其他饲料成分(例如在预混物中)。
β-半乳糖苷酶：术语“β-半乳糖苷酶”意指β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(EC3.2.1.23)，其催化β-D-半乳糖苷中末端非还原性β-D-半乳糖残基的水解，例如乳糖(1,4-O-β-D-吡喃半乳糖-D-葡萄糖)、寡糖、糖脂和糖蛋白。可以使用4-硝基苯基β-D-半乳吡喃糖苷(可从Megazyme国际公司(Megazyme International)，布雷，威克洛郡，爱尔兰(Bray,Co.Wicklow,Ireland)获得)作为底物在室温下在100mM MES(西格玛公司)缓冲液pH 7.0±0.05确定β-半乳糖苷酶活性。将酶稀释于2-倍稀释液并将4-硝基苯基β-D-半乳吡喃糖苷底物溶解于含有酶的溶液中。β-半乳糖苷酶活性在缓冲液中通过测量释放的pNP在405nm时的吸光度作为时间的函数直接进行跟踪。详细的测定可在本文所述的β-半乳糖苷酶测定中找到。在一个方面，本发明的多肽具有SEQ ID NO:42的多肽的至少60％、例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的β-半乳糖苷酶活性。
体重增加：术语“体重增加”是指在给定时间段期间动物的活重增加，例如，从第1天到第21天的体重增加。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子的反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录物本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列步骤进行加工，包括剪接。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由可读框决定，该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA、或其组合。
控制序列：术语“控制序列”是指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制性酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
表达：术语“表达”包括涉及多肽的产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，该DNA分子包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
饲料转化率：术语“饲料转化率”是指用来增加动物的体重一个指定量的喂给动物的饲料量。改善的饲料转化率意指较低的饲料转化率。通过“较低的饲料转化率”或“改善的饲料转化率”，其意味着当饲料不包括所述饲料添加剂组合物时，与以将动物体重增加到相同量所需的饲料量相比，在饲料中使用饲料添加剂组合物导致需要将更少量的饲料喂给动物，以增加动物的体重一个指定量。
饲料效率：术语“饲料效率”是指当动物在一段时间内被任意喂养或喂养指定量的食物时每单位饲料的体重增加量。“增加的饲料效率”是指根据本发明的饲料添加剂组合物在饲料中的使用导致与不用所存在的所述饲料添加剂组合物喂养的动物相比，每单位饲料摄入的增加的增重。
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺失的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中所述片段具有β-半乳糖苷酶活性或半乳聚糖酶活性。
在一个方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少90％，例如SEQ ID NO:3的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少286个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少284个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少464个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少285个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少284个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少616个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少619个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少618个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少588个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少618个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少617个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少619个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少621个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少621个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少620个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少616个氨基酸、SEQID NO:74的至少616个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少617个氨基酸。
在另一方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少92％，例如SEQ ID NO:3的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少292个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少290个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少474个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少291个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少290个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少630个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少632个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少632个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少601个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少632个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少631个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少632个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少635个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少634个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少633个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少630个氨基酸、SEQID NO:74的至少630个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少631个氨基酸。
在另一方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少94％，例如SEQ ID NO:3的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少298个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少297个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少485个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少297个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少643个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少646个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少645个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少614个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少645个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少644个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少646个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少649个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少648个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少647个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少643个氨基酸、SEQID NO:74的至少643个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少644个氨基酸。
在另一方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少96％，例如SEQ ID NO:3的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少305个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少303个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少495个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少304个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少303个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少657个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少660个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少659个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少627个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少659个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少658个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少660个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少663个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少662个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少661个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少657个氨基酸、SEQID NO:74的至少657个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少658个氨基酸。
在另一方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少98％，例如SEQ ID NO:3的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少311个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少309个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少505个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少310个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少309个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少671个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少674个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少673个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少640个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少673个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少672个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少674个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少677个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少676个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少675个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少671个氨基酸、SEQID NO:74的至少671个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少672个氨基酸。
在另一方面，所述片段包含成熟多肽全长的至少99％，例如SEQ ID NO:3的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:7的至少314个氨基酸、SEQ ID NO:11的至少312个氨基酸、SEQ IDNO:15的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:19的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:23的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:27的至少510个氨基酸、SEQ ID NO:31的至少313个氨基酸、SEQ ID NO:35的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:39的至少312个氨基酸、SEQ ID NO:42的至少678个氨基酸、SEQ ID NO:44的至少681个氨基酸、SEQ ID NO:47的至少680个氨基酸、SEQ ID NO:50的至少647个氨基酸、SEQ ID NO:53的至少680个氨基酸、SEQ ID NO:56的至少679个氨基酸、SEQ ID NO:59的至少681个氨基酸、SEQ ID NO:62的至少684个氨基酸、SEQ ID NO:65的至少683个氨基酸、SEQ ID NO:68的至少682个氨基酸、SEQ ID NO:71的至少678个氨基酸、SEQID NO:74的至少678个氨基酸或SEQ ID NO:77的至少679个氨基酸。
半乳聚糖酶：术语“半乳聚糖酶”，也称作内切-1,4-β-半乳聚糖酶，是指阿拉伯半乳聚糖内切-β-1,4-半乳聚糖酶(E.C.3.2.1.89)，催化I型阿拉伯半乳聚糖中(1→4)-β-D-半乳糖苷键的水解。可以使用由Lever(Analytical Biochemistry[分析生物化学]47,273-279,1972)研发的比色测定通过还原末端确定半乳聚糖酶活性。半乳聚糖酶产生还原末端糖，其与PAHBAH反应，从而产生颜色的变化，该颜色变化在用于该测定的条件下与酶活性成比例。详细的测定可在本文所述的半乳聚糖酶测定中找到。
本发明的半乳聚糖酶具有SEQ ID NO:3的多肽的至少60％、例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的半乳聚糖酶活性。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包括本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的一种物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:2的氨基酸-32至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:4的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至318，并且SEQ ID NO:6的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:7的氨基酸1至318。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至326。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:10的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:10的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:12的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:14的氨基酸-35至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:15的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:16的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:18的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:18的氨基酸-31至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:19的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:22的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:22的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:23的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:24的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:26的氨基酸1至516，并且SEQ ID NO:26的氨基酸-29至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:27的氨基酸1至516。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:28的氨基酸1至524。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:30的氨基酸1至317，并且SEQ ID NO:30的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:31的氨基酸1至317。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:32的氨基酸1至325。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:34的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:34的氨基酸-33至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:35的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:36的氨基酸1至324。
在一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:38的氨基酸1至316，并且SEQ ID NO:38的氨基酸-31至-1是信号肽。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:39的氨基酸1至316。在一个替代性方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:42的氨基酸1至685。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:44的氨基酸1至688。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:45的氨基酸1至695。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:47的氨基酸1至687。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:48的氨基酸1至694。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:50的氨基酸1至654。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:51的氨基酸1至661。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:53的氨基酸1至687。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:54的氨基酸1至694。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:56的氨基酸1至686。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:57的氨基酸1至695。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:59的氨基酸1至688。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:60的氨基酸1至697。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:62的氨基酸1至691。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:63的氨基酸1至700。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:65的氨基酸1至690。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:66的氨基酸1至699。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:68的氨基酸1至689。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:69的氨基酸1至698。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:71的氨基酸1至685。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:72的氨基酸1至694。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:74的氨基酸1至685。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:75的氨基酸1至694。
在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:77的氨基酸1至686。在另一方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:78的氨基酸1至695。
本领域已知，宿主细胞可以产生由同一多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即，具有不同C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。本领域还已知，不同的宿主细胞不同地加工多肽，且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单-链或双链的核酸分子，所述核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，所述核酸分子包含一个或多个控制序列。
营养素消化率：术语“营养素消化率”意指从胃肠道或胃肠道的指定区段(例如小肠)处消失的营养素的部分。营养素消化率可测量为所给予至受试者的营养素与受试者粪便中所排出来的营养素之间的差值、或给予至受试者的营养素与保留在胃肠道指定区段(例如回肠)上的消化物中的营养素之间的差值。
如在此使用的，营养素消化率可通过在一段时间期间收集总排泄物，测量所摄入营养素与所排泄的营养素之间的差值；或利用不会被动物吸收，并允许研究者计算整个胃肠道或胃肠道区段中所消失的营养的量的惰性标记物来测量。这种惰性标记物可以是二氧化钛、氧化铬或酸不溶性灰分。消化率可表示为营养素在饲料中的百分比，或表示为可消化的营养素的质量单位/饲料中的营养素的质量单位。如在此使用的，营养素消化率涵盖淀粉消化率、脂肪消化率、蛋白质消化率和氨基酸消化率。
如在此使用的，能量消化率意指所消耗的饲料总能量减去粪便的总能量，或所消耗的饲料总能量减去动物胃肠道指定区段(例如回肠)上的剩余消化物的总能量。如在此使用的，代谢能是指表观代谢能，并且意指所消耗的饲料总能量减去粪便、尿和消化的气体产物中包含的总能量。能量消化率和代谢能可测量为总能量的摄取与粪便中排泄的或胃肠道指定区段中存在的消化物中的总能量之间的差值，其使用与测量营养素消化率相同的方法，针对氮排泄进行适当校正以计算饲料的代谢能。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意思指这样一种配置，在该配置中，一个控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，这样使得该控制序列引导该编码序列的表达。
每kg大豆粉释放的半乳糖(g)：术语“每kg大豆粉释放的半乳糖(g)”意指在大豆粉与酶孵育后，释放至上清液中的半乳糖的量(以克计)。出于本发明的目的，每kg大豆粉释放的半乳糖可以如在本文半乳糖SBM测定中描述的，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时确定。
在一个更具体的实施例中，由碾磨至0.5mm粒径的大豆粉和0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05制备10w/v％大豆粉浆料。将含有10w/v％大豆粉浆料的孵育容器加热至一个稳定的温度40℃±2℃，同时搅拌。当达到稳定温度后，向孵育容器中添加六个D-(+)-半乳糖标准品，使孵育容器内的浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.157mg半乳糖每mL孵育体积。一式两份地孵育每个标准品。然后将稀释的酶按达到所需浓度所需的体积分别添加到各自的孵育容器中(以mg EP/kg大豆粉)。一式三份地孵育每个酶处理。此外，包括两次三个孵育容器不含标准品或酶处理作为空白处理以获得大豆粉浆液中基线半乳糖浓度。将孵育容器在40℃±2℃孵育2小时，同时搅拌。孵育后将容器在5℃下在1500g离心15分钟。然后，在基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名称K-RAFGA)的测定中分析上清液，然后如本文半乳糖SBM测定中描述的计算半乳糖的浓度。
植物基材料：术语“植物基材料”是指来自于分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
序列一致性：两个氨基酸序列之间者两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势],16:276-277)(优选3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性的程度。使用版本6.1.0。所用的任选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。Needle标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化(nobrief)选项获得)被用作百分比一致性，并且如下计算：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European MolecularBiology Open Software Suite[EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,见上文)(优选3.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,见上文)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性的程度。使用版本6.1.0。所用的任选参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)替代矩阵。Needle标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化(nobrief)选项获得)被用作百分比一致性，并且如下计算：
(一致的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指使一个或多个(例如，若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的多核苷酸；其中该子序列编码具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的片段。
基本上纯的多肽：术语“基本上纯的多肽”意指含有按重量计至多10％、至多8％、至多6％、至多5％、至多4％、至多3％、至多2％、至多1％、以及至多0.5％的其他多肽材料的制剂，这些其他多肽材料是所述基本上纯的多肽天然或重组地相关的。优选地，该多肽按存在于制剂中的总多肽材料的重量计是至少92％纯的，例如至少94％纯的、至少95％纯的、至少96％纯的、至少97％纯的、至少98％纯的、至少99％纯的、至少99.5％纯的、以及100％纯的。本发明的多肽优选处于基本上纯的形式。例如，这可以通过采用熟知的重组方法或采用经典的纯化方法制备多肽来完成。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(若干个)位置包含改变(即，一个或多个(若干个)氨基酸残基的取代、插入和/或缺失)的具有半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸置换占据一个位置的氨基酸；缺失意指去除占据一个位置的氨基酸；并且插入意指邻近占据一个位置的氨基酸添加1-3个氨基酸。在一个方面，本发明的半乳聚糖酶变体具有SEQ ID NO:3的多肽的至少60％、例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的半乳聚糖酶活性。在一个方面，本发明的β-半乳糖苷酶变体具有SEQ ID NO:42的多肽的至少60％、例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的β-半乳糖苷酶活性。
命名
出于本发明的目的，命名[Y/F]意指在该位置处的氨基酸可以是酪氨酸(Try，Y)或苯丙氨酸(Phe，F)。同样，如在此所述，命名[V/G/A/I]意指在该位置处的氨基酸可以是缬氨酸(Val，V)、甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)或异亮氨酸(Ile，I)，对于如本文所述的其他组合，依次类推。除非进一步另有限制，氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
具体实施方式
β-半乳糖苷酶是一种糖苷水解酶，其水解β-D-半乳糖苷中末端非还原性β-D-半乳糖残基，例如存在于例如豆类、蔬菜、谷物、谷类食物等的乳糖、寡糖、糖脂和糖蛋白。半乳聚糖酶是一种糖基水解酶，其水解I型阿拉伯半乳聚糖中内切半乳糖苷键。
诸位发明人已经发现，来自糖苷水解酶家族42(在此称为GH42)的β-半乳糖苷酶与一种或多种GH53半乳聚糖酶组合出乎意料地擅长通过降解半乳聚糖聚合物释放半乳糖，所述半乳聚糖聚合物发现于豆类(例如大豆)的果胶中。使用单一酶种类不导致半乳糖的显著释放。
Shipkowski等人和Tabachnikov等人同时披露β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶的组合，LacA和GalA的组合和GanB和GanA的组合均不能释放如在本发明披露的酶的组合的半乳糖的浓度(参见实例14)。另外，GalA和GanA均不包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQID NO:81)或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
可以将半乳聚糖的降解测量为当例如用GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶处理大豆粉时释放到上清液中的半乳糖的量。增加的溶解量将导致更多的半乳糖被释放，这可以使用例如如在本文所述的半乳糖SBM测定方法来检测。
包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物
因此，在第一方面，本发明涉及包括一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽的组合物。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ IDNO:83)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)且该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)且该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。在一个更优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ IDNO:82)且该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。
在另一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该变体释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、例如至少15g、例如至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目(Bacillales)，优选分类学上类芽孢杆菌科(Paenibacillaceae)。在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上类芽孢杆菌科，并且具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中：
(a)该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)；以及
(b)当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目，优选分类学上类芽孢杆菌科。在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上类芽孢杆菌科，并且具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中：
(a)该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)；以及
(b)当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目，优选分类学上类芽孢杆菌科。在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上类芽孢杆菌科，并且具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中：
(a)该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)；
(b)该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)；以及
(c)当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目，优选分类学上类芽孢杆菌科。在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上类芽孢杆菌科，并且具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少85％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少95％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在一个实施例中，该组合物是包含核心的颗粒，该核心包含(a)根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶，以及(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
在一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)。在替代性实施例中，该GH53多肽包含基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。在一个优选的实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的组合物，其中该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至316或由其组成；
(b)该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至318或由其组成；
(c)该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至316或由其组成；
(d)该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至316或由其组成；
(e)该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至316或由其组成；
(f)该多肽包含SEQ ID NO:23的氨基酸1至316或由其组成；
(g)该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至516或由其组成；
(h)该多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸1至317或由其组成；
(i)该多肽包含SEQ ID NO:35的氨基酸1至316或由其组成；
(j)该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或由其组成；以及
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性且包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代，优选保守取代；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且其中该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至685或由其组成；
(b)该多肽包含SEQ ID NO:44的氨基酸1至688或由其组成；
(c)该多肽包含SEQ ID NO:47的氨基酸1至687或由其组成；
(d)该多肽包含SEQ ID NO:50的氨基酸1至654或由其组成；
(e)该多肽包含SEQ ID NO:53的氨基酸1至687或由其组成；
(f)该多肽包含SEQ ID NO:56的氨基酸1至686或由其组成；
(g)该多肽包含SEQ ID NO:59的氨基酸1至688或由其组成；
(h)该多肽包含SEQ ID NO:62的氨基酸1至691或由其组成；
(i)该多肽包含SEQ ID NO:65的氨基酸1至690或由其组成；
(j)该多肽包含SEQ ID NO:68的氨基酸1至689或由其组成；
(k)该多肽包含SEQ ID NO:71的氨基酸1至685或由其组成；
(l)该多肽包含SEQ ID NO:74的氨基酸1至685或由其组成；
(m)该多肽包含SEQ ID NO:77的氨基酸1至686或由其组成；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性且包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代，优选保守取代；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)或(o)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在第一方面的任一部分的一个实施例中，该组合物(例如，颗粒)包含每千克组合物至少0.01mg的多肽(酶蛋白)，例如每千克组合物至少0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物至多250g的多肽，例如每千克组合物至少150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg。在一个实施例中，该组合物包含每千克组合物在0.01mg至250g之间的多肽(酶蛋白)，例如每千克组合物在0.02mg、0.05mg、0.10mg、0.2mg、0.5mg、1.0mg、2mg、5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、1.0g、2.5g、5g、7.5g、10g、25g、50g、75g或100g至每千克组合物的150g、100g、50g、40g、30g、20g、10g、7.5g、5g、2.5g、1.0g、750mg、500mg、250mg、100mg、50mg、25mg、10mg、5mg、2.5mg或1mg之间，或其任何组合。在第一方面的任一部分的一个实施例中，半乳聚糖酶与β-半乳糖苷酶的比在100:1至1:100的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内，例如50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或例如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内。
在第一方面的任一部分的一个实施例中，该组合物(例如，颗粒)包含一种或多种调配剂(例如本文描述的那些)，优选地选自以下列表的调配剂，该列表由以下组成甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土、麦芽糊精、环糊精、小麦、PVA、乙酸盐、磷酸盐和纤维素，优选地选自以下列表，该列表由以下组成：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第一方面的任一部分的一个实施例中，该组合物(例如，颗粒)包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选地选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三乙酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第一方面的任一部分的一个实施例中，该组合物(例如，颗粒)包含一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选地选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、肉食杆菌属、丁酸梭菌、梭菌属、屎肠球菌、肠球菌属、乳酸杆菌属、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属、明串珠菌属、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、丙酸杆菌属、以及链球菌属或其任何组合。
组合
本发明的第一方面的具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽的具体组合如下。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ IDNO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:3的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ IDNO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:7的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:11的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:15的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:19的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:23的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:27的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:31的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:35的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:42的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ IDNO:44的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQID NO:47的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:50的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:53的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:56的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:59的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ IDNO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:62的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:65的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:68的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:71的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:74的GH42多肽。在一个实施例中，本发明的组合物包含SEQ ID NO:39的GH53多肽和SEQ ID NO:77的GH42多肽。
在一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH 6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
具有半乳聚糖酶活性的多肽
在第二方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:2的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:3具有至少82％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:3具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:3具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:3具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:4；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:3的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:3中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
这些氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基-末端或羧基末端延伸，例如氨基末端的甲硫氨酸残基；多至20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],学术出版社(Academic Press)，纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一种技术中，在分子中的每个残基处引入单丙氨酸突变，并测试所得的突变分子的β-半乳糖苷酶活性以鉴定对分子活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单一或多种氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量自动化筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的诱变多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许迅速确定多肽中个体氨基酸残基的重要性。
该多肽可为杂合多肽，其中一个多肽的区域在另一个多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可为融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一个多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一个多肽的多核苷酸与本发明多核苷酸融合而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于相同的启动子和终止子的控制之下。还可使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可进一步包含两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割而释放这两个多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人，2003，J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人，2000，J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人，1997，Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人，1995，Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人，1991，Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人，1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人，1995，Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人，1989,Proteins[蛋白质]；Structure,Function,and Genetics[结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens，2003，Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
碳水化合物分子通常在翻译后修饰过程中附接至来自真菌来源的多肽。为了辅助质谱分析，该多肽可以用内切糖苷酶孵育以使各N-连接的位置去糖基化。对于每个去糖基化的N-连接位点，一个N-乙酰己糖胺仍然在该蛋白质主链上。
在一个实施例中，第二方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第三方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:6的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:6的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸1至318或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:7具有至少83％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:7具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:7具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:7具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:7具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:7相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:8相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:8；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至318或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸1至326或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:7的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:7中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:7中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:7中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第三方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第四方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:10的成熟多肽具有至少99.0％，例如至少99.3％、至少99.6％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:10的成熟多肽相差多达3个氨基酸，例如1、2或3个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:11具有至少99.0％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少99.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:11具有至少99.6％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:11相差多达3个氨基酸，例如1、2或3个氨基酸。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:12相差多达3个氨基酸，例如1、2或3个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:12；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.0％，例如至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:11的变体，其包含在1至3个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2或3个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:11中的取代、缺失和/或插入的数目不超过3，例如1、2或3个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:11中保守取代的数目(优选保守取代)不超过3，例如1、2或3个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第四方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第五方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、或至少99.6％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性的多肽，其与SEQID NO:15具有至少96.4％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少96.7％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少97.6％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少98.6％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15具有至少99.6％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:15相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:16相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:16；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、或至少99.6％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:15的变体，其包含在1至11个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:15中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQID NO:15中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第五方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第六方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:18的成熟多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:18的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:18的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:19具有至少84％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQID NO:19具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:19具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:19相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:20相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:20；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:19的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:20的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:19的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:19中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:19中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:19中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第六方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第七方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:22的成熟多肽具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、或至少99.6％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:22的成熟多肽相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:22的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:22的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:22的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性的多肽，其与SEQID NO:23具有至少96.4％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少96.7％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少97.6％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少98.6％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.0％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.3％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23具有至少99.6％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:23相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:24相差多达11个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:24；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:23的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％或至少99.6％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:23的变体，其包含在1至1个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:23中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ IDNO:23中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第七方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第八方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:26的成熟多肽具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:26的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:26的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:26的氨基酸1至516或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性的多肽，其与SEQID NO:27具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:27具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:27相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:28相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:27的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:28；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:27的氨基酸1至516或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:28的氨基酸1至524或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:27的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:27中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:27中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:27中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第八方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第九方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:30的成熟多肽具有至少99.3％，例如至少99.6％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:30的成熟多肽相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:30的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸1至317或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:31具有至少99.3％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:31具有至少99.6％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:31相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:32相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:31的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:32；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸1至317或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:32的氨基酸1至325或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.3％、例如至少99.6％或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第九方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:31的变体，其包含在1至2个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1或2个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:31中的取代、缺失和/或插入的数目不超过2，例如1或2个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:31中保守取代的数目(优选保守取代)不超过2，例如1或2个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第九方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第十方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:34的成熟多肽具有至少99.3％，例如至少99.6％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:34的成熟多肽相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:34的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:34的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:35具有至少99.3％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:35具有至少99.6％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:35相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:36相差多达2个氨基酸，例如1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:35的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:36；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:35的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:36的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.3％、例如至少99.6％或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:7的变体，其包含在1至2个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1或2个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:7中的取代、缺失和/或插入的数目不超过2，例如1或2个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:7中保守取代的数目(优选保守取代)不超过2，例如1或2个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ IDNO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
在第十一方面，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性并且与SEQ ID NO:38的成熟多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有半乳聚糖酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ IDNO:38的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:38的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:38的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:38的氨基酸1至316或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性、与SEQ ID NO:39具有至少83％序列一致性的多肽。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:39具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:39相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:40相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:39的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:40；或者是其片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:40的氨基酸1至324或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十一方面的延续中，本发明涉及具有半乳聚糖酶活性的SEQ ID NO:35的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:35中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:35中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:35中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十一方面的多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQID NO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
具有β-半乳糖苷酶活性的多肽
在第十二方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:42的成熟多肽具有至少82％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:42具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:42具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:42具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:42具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:42的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:42的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:42的成熟多肽或由其组成。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:42的氨基酸1至685或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十二方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:42的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:42中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:42中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:42中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十二方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十三方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:44的成熟多肽具有至少99.8％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:44具有至少99.9％序列一致性。
在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽相差1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:45；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:44的氨基酸1至688或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:45具有至少99.8％，例如至少99.9％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:45的成熟多肽相差1或2个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:45的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:45的氨基酸1至695或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少99.8％、例如至少99.9％或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十三方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:44的变体，其包含在1至2个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1或2个位置。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:44中的取代、缺失和/或插入的数目不超过2，例如1或2个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:44中保守取代的数目(优选保守取代)不超过2，例如1或2个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十三方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十四方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:47的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:47具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:47具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:47具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:47具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:47的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:47的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:48；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:47的氨基酸1至687或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:48具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:48的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:48的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:48的氨基酸1至694或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十四方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:47的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:47中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:47中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:47中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十四方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十五方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:50的成熟多肽具有至少90％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:50具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:50具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:50的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:50的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:51；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:50的氨基酸1至654或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:51具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:51的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:51的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:51的氨基酸1至661或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十五方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:50的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:50中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:50中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:50中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在第十六方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:53的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:53具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:53具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:53具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:53具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:53的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:53的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:54；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:53的氨基酸1至687或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:54具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:54的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:54的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:54的氨基酸1至694或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十六方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:53的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:53中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:53中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:53中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十六方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十七方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:56具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:56具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:56具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:56具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:56的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:57；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:56的氨基酸1至686或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:57具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:57的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:57的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:57的氨基酸1至695或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十七方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:56的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:56中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:56中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:56中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十七方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十八方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:59的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:59具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:59具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:59具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:59具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:59的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:59的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:60；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:59的氨基酸1至688或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:60具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:60的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:60的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:60的氨基酸1至697或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:58的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十八方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:59的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:59中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:59中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:59中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十八方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第十九方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:62的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:62具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:62具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:62具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:62具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:62的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:63；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:62的氨基酸1至691或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:63具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:63的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:63的氨基酸1至700或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:61的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第十九方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:62的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:62中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:62中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:62中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第十九方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第二十方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:65的成熟多肽具有至少88％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:65具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:65具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:65具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:65的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:65的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:66；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:65的氨基酸1至690或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:66具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:66的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:66的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:66的氨基酸1至699或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:64的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:65的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:65中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:65中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:65中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQID NO:83)。
在第二十一方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:68的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:68具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:68具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:68具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:68具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:68的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:68的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:69；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:68的氨基酸1至689或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:69具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:69的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:69的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:69的氨基酸1至698或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:67的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十一方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:68的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:68中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:68中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:68中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十一方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。
在第二十二方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:71的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:71具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:71具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:71具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:71具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:71的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:71的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:72；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:71的氨基酸1至685或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十二方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:72具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:72的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:72的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:72的氨基酸1至694或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十二方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十二方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:71的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:71中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:71中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:71中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十二方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。
在第二十三方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:74的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:74具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:74具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:74具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:74具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:74的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:75；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:74的氨基酸1至685或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十三方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:75具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:75的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:75的氨基酸1至694或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十三方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十三方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:74的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:74中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:74中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:74中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十三方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。
在第二十四方面，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性并且与SEQ ID NO:77的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少85％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少86％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少87％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少88％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少89％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:77具有至少90％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少91％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少92％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少93％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:77具有至少94％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少95％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少96％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少97％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ IDNO:77具有至少98％序列一致性。在一个实施例中，该多肽与SEQ ID NO:77具有至少99％序列一致性。
在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:77的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列和N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签，例如SEQ ID NO:78；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:77的氨基酸1至686或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十四方面的延续中，本发明进一步涉及具有β-半乳糖苷酶活性、与SEQ IDNO:78具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性的多肽，这些多肽具有β-半乳糖苷酶活性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:78的成熟多肽相差多达50个氨基酸，例如1与50个之间的氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包括SEQ ID NO:78的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成；或者是其片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的长度。在另一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:78的氨基酸1至695或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十四方面的延续中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的、具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性。在一个另外的实施例中，该多肽已经被分离。
在第二十四方面的延续中，本发明涉及具有β-半乳糖苷酶活性的SEQ ID NO:77的变体，其包含在1至50个位置的一个或多个氨基酸改变(即取代、缺失和/或插入或其任一组合)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置。在一个实施例中，在SEQ ID NO:77中包括一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:77中的取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:77中保守取代的数目(优选保守取代)不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本发明的第二方面中描述了氨基酸变化和保守取代的实例。
在一个实施例中，第二十四方面的多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。
具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的多肽的来源
本发明的具有β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如在此结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面，从给定来源获得的多肽被分泌至细胞外。
具有半乳聚糖酶活性的多肽是细菌多肽，优选来自厚壁菌门或更优选来自芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽来自芽孢杆菌科，或来自类芽孢杆菌科，或来自柯恩氏菌属，或来自柯恩氏菌属物种-60555，Cohnella xylanilytica或Cohnella laeviribosi。在另一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽是来自芽孢杆菌目，或来自类芽孢杆菌科，或来自类芽孢杆菌属或来自Paenibacillus tundrae物种、巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)物种、类芽孢杆菌物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)物种、类芽孢杆菌物种-18179、皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)物种或Paenibacillus xylanexedens物种的细菌。
具有β-半乳糖苷酶活性的多肽是细菌多肽，优选来自厚壁菌门或更优选来自芽孢杆菌目。在一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽来自芽孢杆菌目，或来自芽孢杆菌科，或来自芽孢杆菌属或来自短小芽孢杆菌物种、Bacillus nealsoniis物种、嗜碱芽孢杆菌物种、芽孢杆菌物种-11182或芽孢杆菌物种-62759。在另一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的多肽是来自芽孢杆菌目，或来自类芽孢杆菌科，或来自类芽孢杆菌属或来自类芽孢杆菌物种-18026、类芽孢杆菌物种-18054、类芽孢杆菌物种-62047、类芽孢杆菌物种-62603、Paenibacillus woosongensis物种、类芽孢杆菌物种-62253或类芽孢杆菌物种-62758。
在一个实施例中，具有β-半乳糖苷酶活性的多肽是细菌多肽，优选来自变形菌门，更优选来自伯克霍尔德氏菌目，来自于伯克霍尔德氏菌科，或来自伯克霍尔德氏菌属或来自Burkholderia sediminicola物种。
应理解的是对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学的等效物(equivalent)，例如，无性型(anamorph)，而与他们已知的种名无关。本领域普通技术人员将容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection,NorthernRegional Research Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域已知的。然后可通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可通过利用本领域普通技术人员所知的技术(参见，例如Sambrook等人，1989，见上文)分离或克隆多核苷酸。
包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的液体配制品
在第二十五方面，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；以及
(C)水。
在第二十五方面的一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)20％至80％w/w的多元醇；以及
(D)水。
在第二十五方面的一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；以及
(D)水。
在第二十五方面的一个实施例中，本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的一种或多种GH53多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的一种或多种GH42多肽的液体配制品，其中该液体配制品包含：
(A)0.001％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽；
(B)0.001％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽；
(C)20％至80％w/w的多元醇；
(D)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；以及
(E)水。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)。在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:65)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:66)并且该GH42多肽包含基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M](SEQ ID NO:83)。在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQID NO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)或(l)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度；
并且该GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少90％或至少95％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽获得自或可获得自分类学上类芽孢杆菌科。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH6.5，在40℃孵育2小时，该组合物释放至少12g，例如至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种调配剂(例如本文描述的那些)，优选地选自以下列表的调配剂，该列表由以下组成甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选地选自以下列表，该列表由以下组成：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种多元醇，优选地选自下组的多元醇，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、具有平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和具有平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)，更优选地选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)或其任何组合。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选地25％-75％的多元醇、更优选地30％-70％的多元醇、更优选地35％-65％的多元醇或最优选地40％-60％的多元醇。在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％的多元醇，优选地25％-75％的多元醇、更优选地30％-70％的多元醇、更优选地35％-65％的多元醇或最优选地40％-60％的多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、具有平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和具有平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含20％-80％多元醇(即多元醇的总量)，优选地25％-75％多元醇、更优选地30％-70％多元醇、更优选地35％-65％多元醇或最优选地40％-60％多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选地0.05％至1.0％w/w的防腐剂或最优选地0.1％至0.5％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，优选地0.02％至1.5％w/w的防腐剂、更优选地0.05％至1.0％w/w的防腐剂或最优选地0.1％至0.5％w/w的防腐剂，其中防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在第九方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至25％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽，优选0.05％至20％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽、更优选地0.2％至15％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽、更优选地0.5％至15％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽或最优选地1.0％至10％w/w的具有β-半乳糖苷酶活性的多肽。
在第九方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含0.01％至25％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽，优选0.05％至20％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽、更优选地0.2％至15％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽、更优选地0.5％至15％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽或最优选地1.0％至10％w/w的具有半乳聚糖酶活性的多肽。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种另外的酶。该一种或多种另外的酶优选地选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三乙酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在第二十五方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种益生菌。该一种或多种益生菌优选地选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、肉食杆菌属、丁酸梭菌、梭菌属、屎肠球菌、肠球菌属、乳酸杆菌属、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属、明串珠菌属、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、丙酸杆菌属、以及链球菌属或其任何组合。
改善动物性能的方法
在第二十六方面，本发明涉及改善动物的一个或多个表现参数的方法，所述方法包括给予一种或多种动物本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如在第二十五方面描述的液体配制品。
本发明的第二十六方面还涉及动物的一个或多个表现参数改善的方法，所述方法包括向一种或多种动物给予动物饲料添加剂，所述动物饲料添加剂包含本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种氨基酸或其任何组合。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十六方面还涉及改善动物的一个或多个表现参数的方法，所述方法包括向一种或多种动物给予动物饲料，所述动物饲料包含本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’和植物基材料的部分中。在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料包含一种或多种如在此定义的微生物。在一个优选的实施例中，该动物饲料是已经粒化的。
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
在一个实施例中，该表现参数选自以下列表，该列表由以下组成：体重增加(BWG)、欧洲生产效率因子(EPEF)以及饲料转化率(FCR)。
释放半乳糖的方法
在第二十七方面，本发明涉及从植物基材料中释放半乳糖的方法，所述方法包括用本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物处理植物基材料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如在第二十五方面描述的液体配制品。
本发明的第二十七方面还涉及从植物基材料中释放半乳糖的方法，所述方法包括用包含本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物的动物饲料添加剂处理植物基材料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包含一种或多种另外的酶、一种或多种微生物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种氨基酸或其任何组合。在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
用于改善动物饲料的营养价值的方法
术语改善动物饲料的营养价值意指提高饲料中的营养素的可利用性。营养价值具体是指改善非淀粉多糖(NSP)级分的溶解和降解，例如在细胞壁的果胶网络中的半乳聚糖聚糖，从而增加可以被动物利用的半乳糖的释放的量。因此，改善的半乳糖释放将导致饲料营养价值的改善，导致生长速率和/或体重增加和/或饲料转化(即相对于体重增加的饲料摄取量)增加。
在第二十八方面，本发明涉及改善动物饲料的营养价值的方法，所述方法包括用本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物处理的动物饲料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，动物饲料包括来自分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如在第二十五方面描述的液体配制品。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十八方面还涉及改善动物饲料的营养价值的方法，所述方法包括用包含本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物的动物饲料添加剂处理动物饲料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，动物饲料包括来自分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
在一个优选的实施例中，该动物饲料是已经粒化的。可以在造粒步骤之前用本发明的酶处理该动物饲料，或在造粒步骤之后喷雾至其上。
降低动物饲料的抗营养效果的方法
后肠中寡糖的过量导致由于肠胀气的抗营养效果。通过减少寡糖的发酵，可以减少一些动物饲料的抗营养效果，导致改善肠道和动物健康。
在第二十九方面，本发明涉及改善动物饲料的营养价值的方法，所述方法包括用本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物处理的动物饲料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，动物饲料包括来自分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如在第二十五方面描述的液体配制品。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第二十九方面还涉及改善动物饲料的营养价值的方法，所述方法包括用包含本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物的动物饲料添加剂处理动物饲料，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或‘组合’的部分中。在一个实施例中，动物饲料包括来自分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
在一个优选的实施例中，该动物饲料是已经粒化的。可以在造粒步骤之前用本发明的酶处理该动物饲料，或在造粒步骤之后喷雾至其上。
制备动物饲料的方法
在第三十方面，本发明涉及制备动物饲料的方法，所述方法包括混合本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或含有植物基材料的‘组合’的部分中。
在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个优选的实施例中，该组合物是如在第二十五方面描述的液体配制品。
在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该组合物包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个优选的实施例中，该组合物是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
本发明的第三十方面还涉及制备动物饲料的方法，所述方法包括混合本文定义的本发明的第一方面或本发明的第一方面的任一实施例的组合物，例如在涉及‘包含GH42β-半乳糖苷酶和GH53半乳聚糖酶的组合物’的部分中或含有植物基材料的‘组合’部分中。在一个实施例中，动物饲料包括来自分类学上蔷薇亚纲的植物基材料。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。在一个实施例中，该动物饲料将具有改善的营养素消化率。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的调配剂。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种如在此定义的微生物。在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种维生素、一种或多种矿物质和/或一种或多种氨基酸。在一个优选的实施例中，该动物饲料添加剂是任选地包含盐和/或蜡和/或面粉包衣的颗粒。
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。在一方面，植物基材料来自分类学上豆目，例如豆科，优选云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科，或更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族。在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
在一个优选的实施例中，该动物饲料是已经粒化的。可以在造粒步骤之前用本发明的酶处理该动物饲料，或在造粒步骤之后喷雾至其上。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明多肽的分离的多核苷酸。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域中已知的并且包括从基因组DNA或cDNA，或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南]，学术出版社(Academic Press)，纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以克隆自芽孢杆菌属的菌株或相关有机体，并且因此，例如可以是该多核苷酸多肽编码区的等位基因变体或物种变体。
编码本发明多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，这些核酸构建体包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，这个或这些控制序列指导编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作所述多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可为合意的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域已知的。
该控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含转录控制序列，其介导该多肽的表达。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型及杂合型启动子，并且可以是由编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus，1994，Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人，1988，Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述在Gilbert等人，1980，Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；以及Sambrook等人，1989，见上文。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中，用于指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的实例是获得自以下酶的基因的启动子：构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶-样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉半乳聚糖酶I、里氏木霉半乳聚糖酶II、里氏木霉半乳聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延长因子，以及NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导序列已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶的基因的经修饰的启动子，其中未翻译的前导序列已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，从以下酶的基因获得有用的启动子：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1，ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。终止子与编码该多肽的多核苷酸的3’-末端可操作地连接。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从针对以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶-样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉半乳聚糖酶I、里氏木霉半乳聚糖酶II、里氏木霉半乳聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
用于酵母宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。由Romanos等人,1992(见上文)描述了酵母宿主细胞的其他有用终止子。
控制序列还可为启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区，其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区域的实例是从以下获得的：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
该控制序列也可以是前导序列，一种对宿主细胞翻译很重要的非翻译mRNA区域。该前导子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5’-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得的。
对于酵母宿主细胞适合的前导序列从以下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列也可以是多聚腺苷化序列，一种与多核苷酸3’-末端可操作地连接并在转录时由宿主细胞识别为向转录的mRNA添加聚腺苷酸残基的信号序列。可以使用在宿主细胞中起作用的任何聚腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选聚腺苷酸化序列是从以下的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的多聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.Cellular Biol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列也可为编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’-端可固有地含有在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5'-末端可含有对于编码序列为外来的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837生麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。Romanos等人(1992，见上文)描述了其他有用的信号肽编码序列。
控制序列也可为编码处于多肽的N-末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下酶的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可为合意的是添加调节序列，所述调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac以及trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是那些允许基因扩增的序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下被扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸将与调控序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体，其可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在这些位点处的插入或取代。可替代地，多核苷酸可通过将该多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可方便地经受重组DNA程序并且可引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线状或闭合的环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以包含用于确保自我复制的任何装置。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同包含待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标志物是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养性等。
细菌选择性标志物的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标志物。用于酵母宿主细胞的适合的标志物包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于，adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、连同其等效物。优选地用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。优选用于木霉属细胞中的是adeA、adeB、amdS、hph和pyrG基因。
选择性标记可为双选择性标记系统，如WO 2010/039889中描述的。在一个方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选包含允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可包含用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置整合的可能性，整合的元件应包含足够数量的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，其与相应的靶序列具有高度的序列一致性以增强同源重组的可能性。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一个方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
对于自主复制，载体可以进一步包含使载体能够在所讨论的宿主细胞中自主地进行复制的复制起点。复制起点可为在细胞中有功能的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是容许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点，以及容许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060和pAMβ1。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
用于丝状真菌细胞中的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res[核酸研究]15:9163-9175；WO 00/24883)。AMA1基因的分离和包括该基因的质粒或载体的构建可根据WO 00/24883披露的方法完成。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标志基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标志基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接以上所描述的元件以构建本发明的重组表达载体的方法是本领域的技术人员熟知的(参见，例如，Sambrook等人，1989，见上文)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接到一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，这个或这些控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择会在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
宿主细胞可为在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可为任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌细胞、解淀粉芽孢杆菌细胞、短芽孢杆菌细胞、环状芽孢杆菌细胞、克劳氏芽孢杆菌细胞、凝结芽孢杆菌细胞、坚强芽孢杆菌细胞、灿烂芽孢杆菌细胞、迟缓芽孢杆菌细胞、地衣芽孢杆菌细胞、巨大芽孢杆菌细胞、短小芽孢杆菌细胞、嗜热脂肪芽孢杆菌细胞、枯草芽孢杆菌细胞和苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞也可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于马链球菌细胞、化脓性链球菌细胞、乳房链球菌细胞、和马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829，或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人，2004，Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人，1989，J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)或转导(参见例如，Burke等人，2001，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。可通过如下方法实现将DNA引入到链球菌属细胞：例如天然感受态(naturalcompetence)(参见，例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见，例如，Catt和Jollick，1991，Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见，例如，Buckley等人，1999，Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见，例如，Clewell，1981，Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和全部有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人所定义的，在：Ainsworth andBisby's Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby的真菌大词典],第8版,1995,CABInternational[国际CAB],University Press[大学出版社],Cambridge[剑桥],英国)。
真菌宿主细胞可为酵母细胞。如在此所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如酵母的生物学与活性(Skinner,Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)所描述那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁弗酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人，1995，见上文)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(例如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametesversicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
真菌细胞可以通过下述过程转化，该过程涉及原生质体形成、原生质体的转化、以及以本身已知的方式的细胞壁的再生。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023，Yelton等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人，1988，Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法在Malardier等人，1989，Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787中描述。可使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente，于Abelson,J.N.和Simon,M.I.编,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.)，纽约；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明多肽的方法，该方法包括：(a)培养细胞，该细胞处于其野生型形式，在有益于产生该多肽的条件下产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。在一方面，该细胞是柯恩氏菌属细胞。在一方面，该细胞是柯恩氏菌属物种-60555细胞。在一方面，该细胞是Cohnella xylanilytica细胞。在一方面，该细胞是Cohnella laeviribosi细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属细胞。在一方面，该细胞是Paenibacillus tundra细胞。在一方面，该细胞是巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62603细胞。在一方面，该细胞是解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-18179细胞。在一方面，该细胞是皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)细胞。在一方面，该细胞是Paenibacillus xylanexedens细胞。
在一方面，该细胞是短小芽孢杆菌细胞。在一方面，该细胞是Bacillus nealsonii细胞。在一方面，该细胞是嗜碱芽孢杆菌细胞。在一方面，该细胞是芽孢杆菌属物种-11182细胞。在一方面，该细胞是芽孢杆菌属物种-62759细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-18026细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-18054细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62047细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62603细胞。在一方面，该细胞是Paenibacillus woosongensis细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62253细胞。在一方面，该细胞是类芽孢杆菌属物种-62758细胞。在一方面，该细胞是Burkholderia sediminicola细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，包含(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该多肽。
这些宿主细胞是在适合于使用本领域中已知的方法产生这些多肽的营养介质中培养的。例如，可通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，所述培养在适合的介质中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。该培养是使用本领域中已知的程序，在适合的营养介质中发生，该营养介质包含碳和氮来源及无机盐。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果多肽被分泌到营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于该多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养介质回收多肽。在一个方面，回收包含多肽的发酵液。
可通过本领域已知的多种方法纯化多肽以获得基本上纯的多肽，所述方法包括但不限于层析(例如，离子交换、亲和、疏水、层析聚焦和大小排阻)、电泳方法(例如，制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见，例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)。
在一个替代性方面，不回收多肽，而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作多肽的来源。
植物中的产生
本发明还涉及分离的植物，例如转基因植物、植物部分或植物细胞，其包括本发明的多肽，从而以可回收的量表达和产生多肽或结构域。可从植物或植物部分回收多肽或结构域。可替代地，含有该多肽或结构域的植物或植物部分可以按原样用于改善食品或饲料的质量，例如改善营养价值、可口性及流变学特性，或破坏抗营养因素。
转基因植物可为双子叶的(双子叶植物)或单子叶的(单子叶植物)。单子叶植物的实例是草，如草地早熟禾(蓝草，早熟禾属)；饲用草，如羊茅属(Festuca)、黑麦草属(Lolium)；温带草，如翦股颖属(Agrostis)；和谷类，例如小麦、燕麦、黑麦、大麦、稻、高粱、以及玉蜀黍(玉米)。
双子叶植物的实例是烟草、豆类(如羽扇豆(lupins)、马铃薯、糖甜菜(sugarbeet)、豌豆、豆(bean)和大豆(soybean))、以及十字花科植物(十字花科(familyBrassicaceae))(如花椰菜、油菜籽、以及紧密相关的模式生物拟南芥)。
植物部分的实例是茎、愈伤组织、叶、根、果实、种子和块茎、以及包含这些部分的独立组织，例如，表皮、叶肉、薄壁组织(parenchyme)、维管组织、分生组织。
植物细胞和具体的植物细胞区室(如叶绿体、质外体、线粒体、液泡、过氧化物酶体和细胞质)也被认为是植物部分。
同样包括于本发明范围内的是这些植物、植物部分以及植物细胞的后代。
可根据本领域已知的方法构建表达该多肽或结构域的转基因植物或植物细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽或结构域的方法，其包括(a)在有益于产生该多肽或结构域的条件下培养转基因植物或植物细胞，该转基因植物或植物细胞包含编码该多肽或结构域的多核苷酸；和(b)回收该多肽或结构域。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包括本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，所述宿主细胞被用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵介质和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是包含有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如在本申请中使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。发酵液可含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，发酵液是未分级的且包含耗尽的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一个实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在一个具体实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐，或前述中的两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐，或前述中的两种或更多种的混合物。
在一方面，该组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于：山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在允许蛋白合成的碳限制条件下孵育之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，该细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如在此所述的，全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以除去不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所描述的方法来产生。
酶组合物
优选地，这些组合物富含本发明第一方面的多肽。术语“富集”表示组合物的β-半乳糖苷酶活性和半乳聚糖酶活性已增加，例如富集因子为至少1.1，例如至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少3.0、至少4.0、至少5.0、至少10。在一个实施例中，该组合物包括本发明第一方面的多肽和一种或多种调配剂，如在下文“调配剂”部分中所述。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第二方面的多肽(SEQ ID NO:3)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第三方面的多肽(SEQ ID NO:7)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第四方面的多肽(SEQ ID NO:11)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第五方面的多肽(SEQ ID NO:15)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第六方面的多肽(SEQ ID NO:19)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第七方面的多肽(SEQ ID NO:23)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第八方面的多肽(SEQ ID NO:27)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第九方面的多肽(SEQ ID NO:31)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第十方面的多肽(SEQ ID NO:35)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有半乳聚糖酶活性的本发明的第十一方面的多肽(SEQ IDNO:39)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十二方面的多肽(SEQ IDNO:42)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十三方面的多肽(SEQ IDNO:44)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十四方面的多肽(SEQ IDNO:47)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十五方面的多肽(SEQ IDNO:50)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十六方面的多肽(SEQ IDNO:53)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十七方面的多肽(SEQ IDNO:56)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十八方面的多肽(SEQ IDNO:59)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第十九方面的多肽(SEQ IDNO:62)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第二十方面的多肽(SEQ IDNO:65)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第二十一方面的多肽(SEQID NO:68)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第二十二方面的多肽(SEQID NO:71)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第二十三方面的多肽(SEQID NO:74)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
本发明还涉及包含具有β-半乳糖苷酶活性的本发明的第二十四方面的多肽(SEQID NO:77)的组合物。在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种调配剂。
该组合物可以包含本发明的多肽作为主要酶促组分，例如单组分组合物。此类组合物可以进一步包含如在下文‘调配剂’部分中描述的调配剂。可替代地，该组合物可以包含多种酶活性，例如一种或多种(例如若干种)选自下组的酶，该组由以下组成：植酸酶、半乳聚糖酶、蛋白酶、磷脂酶、葡萄糖苷酸酶、溶血磷脂酶、淀粉酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶、β-木糖苷酶内切-1,4-β-半乳聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、纤维素酶、纤维二糖水解酶、β-糖苷酶、普鲁兰酶或其任何混合物。
目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种使用半乳聚糖酶(例如，在饲料中)：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围是每kg底物的mg半乳聚糖酶蛋白(ppm)。目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种给予β-半乳糖苷酶(例如，在饲料中)：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围是每kg底物的mgβ-半乳糖苷酶蛋白(ppm)。进一步考虑了，半乳聚糖酶与β-半乳糖苷酶的比在100:1至1:100的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内，例如50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或例如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内。
配制品
本发明的酶可以配制为液体或固体。针对液体配制品，该调配剂可以包括多元醇(像例如，甘油、乙二醇或丙二醇)、盐(像例如，氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾)或糖或糖衍生物(像例如，糊精、葡萄糖、蔗糖、和山梨醇)。因此，在一个实施例中，该组合物是一种液体组合物，该液体组合物包括本发明的多肽和一种或多种选自以下列表的调配剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、糊精、葡萄糖、蔗糖、和山梨醇。该液体配制品可以喷涂在已经历粒化的饲料上，或可以添加至供给动物的饮用水中。
针对固体配制品，该配制品可以是例如作为颗粒、喷雾干粉或聚结物(例如如在WO2000/70034中披露的)。调配剂可以包括盐(有机的或无机的锌、钠、钾或钙盐，像例如，如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)。
在一个实施例中，该组合物是一种固体组合物，例如喷雾干燥组合物，该固体组合物包括本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶和一种或多种选自以下列表的调配剂，该列表由以下组成：氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素。在一个优选实施例中，该调配剂选自以下化合物中的一种或多种：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、硫酸镁和碳酸钙。
本发明还涉及包含本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶的酶颗粒/颗粒任选地与一种或多种另外的酶的组合。该颗粒由核，以及任选地包围该核一个或多个包衣(外层)构成。
典型地，颗粒(granule/particle)的粒度，测量为当量球径(基于体积的平均粒度)是20-2000μm，具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小(size reduction)法、转鼓造粒(drumgranulation)和/或高剪切造粒。
用于制备该核心的方法可以发现于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；由C.E.Capes编辑的Particle size enlargement[粒径增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]中。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制品技术，例如：
a)喷雾干燥产物，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含有酶的颗粒状物质；
b)成层的(layered)产物，其中酶作为层包被在预成型的惰性核心颗粒周围，其中将含有酶的溶液雾化，通常流化床设备中(其中预形成的核心粒子被流化)雾化，含有酶的溶液粘附于核心粒子并干燥，在核心颗粒的表面上留下干燥酶的层。如果能找到具有期望尺寸的有用的核心粒子，则该方法可获得具有期望尺寸的颗粒。这种类型的产物描述于，例如，WO 97/23606中；
c)吸收的(absorbed)粒子，其中不是将酶包被为核心周围的层，而是使酶被吸收到核心的表面上和/或表面中。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤压或压片产品，其中含酶糊剂被挤压成丸或在压力下被压入小孔并切成颗粒随后干燥。这种颗粒通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，十分高的挤压压力增加了酶糊剂中的热生成量，这样对酶有害；
e)颗粒化的产物，其中含酶的粉末悬浮于熔化的蜡中并且，例如，通过转盘喷雾器将悬浮液喷射到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔德克尔出版社])。所获得产物是一种产物，其中酶被均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上。US 4,016,040和US 4,713,245也是涉及此技术的文献；
f)混合造粒产物，其中将液体添加到例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并附聚，并且粒子将构建，形成包括酶的颗粒。这样的方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在该方法的一种具体产品中，其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机，将由作为活性化合物的酶、填充剂和粘合剂等组成的微粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-微粒(T-granulate)。增强的团粒更加坚固，释放较少的酶粉尘。
g)粒度减小(size reduction)，其中通过磨碎或压碎含有酶的较大的粒子、丸粒、片体(tablet)、坯块(briquette)等而产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑)；Principles of Powder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；约翰威利父子公司(John Wiley&Sons))中；
h)流化床造粒，其包括将细粒(particulate)悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流化的粒子上。被喷射的液滴击中的粒子湿润并发粘。粘性的粒子与其它粒子碰撞并粘附于其上而形成颗粒；
i)可对核心进行干燥，如在流化床干燥器中干燥。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃-90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包括酶的核在包衣之前包含少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。在干燥之后，这些核优选包含0.1-10％w/w水。
该核心可以包括另外材料例如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包括粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。
该核心典型地作为均匀的共混物可以包括多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
在一个实施例中，核心包含选自下组的材料，该组由以下组成：盐(如乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、硫酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌、山梨酸锌、硫酸锌)、淀粉或糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、糖或糖衍生物(像例如，蔗糖、糊精、葡萄糖、乳糖、山梨醇)、有机小分子、淀粉、面粉、纤维素和矿物质以及粘土矿物质(也称作含水层状硅酸铝)。在一个实施例中，该核心包括粘土矿物质，例如高岭石或高岭土。
核心可以包括惰性颗粒，其中酶被吸附到该惰性颗粒之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性颗粒的表面上。
该核心可以具有20μm-2000μm，具体地50μm-1500μm、100μm-1500μm或250μm-1200μm的直径。
该核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个可任选的包衣可以包括盐和/或蜡和/或面粉包衣，或其他适合的包衣材料。
该包衣可以以按核心重量计至少0.1％，例如至少0.5％、1％或5％的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选地是至少0.1μm厚，具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施例中，包衣的厚度为低于100μm，例如低于60μm，或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应理解为极少有孔或无孔的包衣，从而使得它所包裹/封装的核心单元极少有或没有未包被区域。该层或包衣在厚度上应当特别均匀。
该包衣可以进一步包含其他本领域已知的材料，例如，填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣按重量计可以包括至少60％的盐，例如，按重量计，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
所述盐可以从盐溶液(其中所述盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中所述细颗粒是小于50μm，例如小于10μm或小于5μm)中添加。
该盐包衣可以包括单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃下在100g水中至少0.1g的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如，至少1g/100g水，例如，至少5g/100g水。
盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物、碳酸盐或简单有机酸(小于10个碳原子，例如6个或更少碳原子)的盐，例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子，铵离子或第一过渡系的金属离子，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根、次磷酸根、焦磷酸二氢根(dihydrogenpyrophosphate)、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、正硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、山梨酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别地，可以使用碱金属或碱土金属的硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐，或者简单有机酸的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃具有超过60％的恒定湿度，具体地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如在WO1997/05245、WO 1998/54980、WO 1998/55599、WO 2000/70034、WO 2006/034710、WO 2008/017661、WO 2008/017659、WO 2000/020569、WO 2001/004279、WO 1997/05245、WO 2000/01793、WO 2003/059086、WO 2003/059087、WO 2007/031483、WO 2007/031485、WO 2007/044968、WO 2013/192043、WO 2014/014647和WO 2015/197719中所描述，或是例如在WO2001/00042中描述的聚合物包衣。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)以及柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2、乙酸镁、乙酸钙、苯甲酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、山梨酸钙、硫酸钙、乙酸钾、苯甲酸钾、碳酸钾、氯化钾、柠檬酸钾、山梨酸钾、乙酸钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、硫酸钠、乙酸锌、苯甲酸锌、碳酸锌、氯化锌、柠檬酸锌和山梨酸锌。
该盐可以处于无水形式，或它可以是水合盐，即，具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地，作为盐溶液使用该盐，例如使用流化床。
蜡包衣按重量计可以包括至少60％的蜡，例如，按重量计，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
蜡的具体实例是聚乙二醇；聚丙烯；巴西棕榈蜡；小烛树蜡；蜂蜡；氢化植物油或动物脂油例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)、聚乙烯醇(PVA)、氢化牛脂、氢化棕榈油、氢化棉籽油和/或氢化豆油；脂肪酸醇；单甘油酯和/或二甘油酯，例如甘油硬脂酸酯，其中硬脂酸酯是硬脂酸和棕榈酸的混合物；微晶蜡；石蜡；以及脂肪酸，例如氢化的线性长链脂肪酸和其衍生物。优选的蜡是棕榈油或氢化棕榈油。
该颗粒可以包含核心(包含本发明的β-半乳糖苷酶和/或半乳聚糖酶)、一种或多种盐包衣和一种或多种蜡包衣。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于WO 1993/07263、WO1997/23606和WO 2016/149636中。
可以产生非粉尘颗粒，如美国专利号4,106,991以及4,661,452中所披露，并且这些颗粒可任选地通过在本领域中已知的方法来涂布。该包衣材料可以是蜡包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是具有平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有从16个到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；具有从12个碳原子至20个碳原子并且存在15个至80个环氧乙烷单元的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
该颗粒进一步包括一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶的分布更均匀，并且还减少了由于不同的粒度，不同酶的物理隔离。用于生产多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据披露于EP 238,216中的方法制备的受保护的酶。
因此，在另外的方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：
(a)包含根据本发明的β-半乳糖苷酶的核心，和
(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
因此，在另外的方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：
(a)包含根据本发明的半乳聚糖酶的核心，和
(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
因此，在另外的方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：
(a)包含根据本发明的β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶的核心，和
(b)包衣，该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的蜡包衣。在一个实施例中，该包衣包含如本文所述的盐包衣和蜡包衣。
植物基材料
在一个实施例中，植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲，例如分类学上豆目或分类学上十字花目。
在一个实施例中，植物基材料来自豆科，例如云实亚科或含羞草亚科或蝶形花亚科。在一个实施例中，植物基材料来自蝶形花亚科，例如相思子族或紫穗槐族或Bossiaeeae或Brongniartieae或鹰嘴豆族或猪屎豆族或黄檀族或山蚂蝗族或Dipterygeae或山豆根族或蚕豆族或山羊豆族或染料木族或岩黄耆族或Hypocalypteae或槐蓝族或百脉根族或崖豆族或Mirbelieae或菜豆族或黄花木族或补骨脂族或洋槐族或Sesbanieae或槐族或Swartzieae或黄华族或车轴草族。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自菜豆族，例如Adenodolichos或Alistilus或两型豆属或Ancistrotropis或块茎豆属或虫豆属或Bionia或Bolusafra或紫铆属或木豆属或毛蔓豆属或Camptosema或刀豆属或距瓣豆属或Cleobulia或蝶豆属或旋花豆属或Cochliasanthus或Collaea或Cologania或Condylostylis或Cratylia或Cymbosema或Decorsea或Dioclea或Dipogon或Dolichopsis或扁豆属或山黑豆属或野扁豆属或雀脷珠属或刺桐属或千斤拔属或乳豆属或大豆属或一叶豆属或Helicotropis或珊瑚豌豆属或扁豆属或Leptospron或大翼豆属或硬皮豆属或闭荚藤属或黧豆属或Mysanthus或爪哇大豆属或Neorautanenia或Nesphostylis或土黄芪属或拟大豆属或Otoptera或Oxyrhynchus或豆薯属或豆薯属或菜豆属或苞护豆属或毒扁豆属或Pseudeminia或Pseudovigna或四棱豆属或葛属或Ramirezella或Rhodopis或鹿霍属或宿苞豆属或Sigmoidotropis或华扁豆属或Spathionema或密花豆属或楔柱豆属或碧玉藤属或Strophostyles或钩豆属或琼豆属或Vandasina或Vatovaea或豇豆属或Wajira。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自大豆属，例如烟豆或白色大豆(Glycine albicans)或金丝黄大豆(Glycine aphyonota)或沙生大豆(Glycinearenaria)或Glycine argyrea或灰色大豆(Glycine canescens)或澎湖大豆或弯叶大豆(Glycine curvata)或野生豆(Glycine cyrtoloba)或扁豆荚大豆(Glycinedolichocarpa)或镰叶大豆(Glycine falcata)或Glycine gracei或毛枝大豆(Glycinehirticaulis)或Glycine lactovirens或阔叶大豆(Glycine latifolia)或Glycinelatrobeana或小叶大豆(Glycine microphylla)或Glycine peratosa或Glycinepindanica或Glycine pullenii或黄紫大豆(Glycine rubiginosa)或Glycine stenophita或Glycine syndetika或烟豆或短绒野大豆或大豆种T1或大豆种T5或半野生大豆或大豆(大豆)或大豆x野大豆或野大豆(野生大豆)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自木豆属，例如木豆(树豆)、Cajanus cajanifolius和蔓草虫豆。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自菜豆属，例如尖叶菜豆(Phaseolus acutifolius)(花菜豆)或宽叶菜豆(Phaseolus acutifoliusvar.latifolius)或淡色菜豆(Phaseolus albescens)或白花菜豆(Phaseolusalbiflorus)或Phaseolus albinervus或Phaseolus altimontanus或Phaseolusamblyosepalus或狭叶菜豆(Phaseolus angustissimus)或奥古斯菜豆(Phaseolusaugusti)或玻利维亚菜豆(Phaseolus bolivianus)或钟形菜豆(Phaseoluscampanulatus)或卡特氏菜豆(Phaseolus carteri)或Phaseolus chiapasanus或荷包豆(多花菜豆)或荷包豆(Phaseolus coccineus subsp.Coccineus)或多花荷包豆(Phaseoluscoccineus subsp.polyanthus)或哥斯达黎加菜豆(Phaseolus costaricensis)或Phaseolus dasycarpus或Phaseolus dumosus或Phaseolus esperanzae或Phaseolusesquincensis或丝叶菜豆(Phaseolus filiformis)(瘦豆)或无毛菜豆(Phaseolusglabellus)或Phaseolus gladiolatus或Phaseolus grayanus或欣顿菜豆(Phaseolushintonii)或Phaseolus jaliscanus或Phaseolus juquilensis或疏花菜豆(Phaseoluslaxiflorus)或Phaseolus leptostachyus或木质菜豆(Phaseolus lignosus)或棉豆(利马豆)或Phaseolus macrolepis或Phaseolus maculatifolius或斑点菜豆(Phaseolusmaculatus)(cocolmeca bean)或Phaseolus maculatus subsp.ritensis或Phaseolusmacvaughii或Phaseolus magnilobatus或Phaseolus marechalii或Phaseolusmicranthus或小果菜豆(Phaseolus microcarpus)或柔枝菜豆(Phaseolus mollis)或Phaseolus neglectus或纳尔逊氏菜豆(Phaseolus nelsonii)或结节菜豆(Phaseolusnodosus)或Phaseolus novoleonensis或Phaseolus oaxacanus或Phaseolusoligospermus或Phaseolus pachyrrhizoides或小叶菜豆(Phaseolus parvifolius)或微小菜豆(Phaseolus parvulus)或少花菜豆(Phaseolus pauciflorus)或长梗菜豆(Phaseolus pedicellatus)或Phaseolus perplexus或Phaseolus persistentus或Phaseolus plagiocylix或Phaseolus pluriflorus或多形菜豆(Phaseolus polymorphus)或Phaseolus polystachios或Phaseolus polystachios subsp.sinuatus或Phaseoluspolystachios subsp.smilacifolius或网纹菜豆(Phaseolus reticulatus)或圆菜豆(Phaseolus rotundatus)或柳叶菜豆(Phaseolus salicifolius)或Phaseolussonorensis或Phaseolus talamancensis或针叶菜豆(Phaseolus tenellus)或德州菜豆(Phaseolus texensis)或Phaseolus tuerckheimii或菜豆(法国菜豆)或菜豆aborigineusaborigineus或矮菜豆(Phaseolus vulgaris var.nanus)或黄毛菜豆(Phaseolus xanthotrichus)或Phaseolus xolocotzii或Phaseolus zimapanensis。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自鹰嘴豆族，例如鹰嘴豆属，例如Cicer anatolicum或鹰嘴豆(鹰嘴豆)或Cicer bijugum或Cicer canariense或Cicerchorassanicum或楔叶鹰嘴豆(Cicer cuneatum)或Cicer echinospermum或弯叶鹰嘴豆(Cicer flexuosum)或多花鹰嘴豆(Cicer floribundum)或希腊鹰嘴豆(Cicer graecum)或虎尾鹰嘴豆(Cicer incisum)或Cicer isauricum或犹太鹰嘴豆(Cicer judaicum)或Cicerkermanense或Cicer macracanthum或小叶鹰嘴豆(Cicer microphyllum)或Cicermontbretii或多叶鹰嘴豆(Cicer multijugum)或Cicer nuristanicum或尖齿鹰嘴豆(Cicer oxyodon)或长叶鹰嘴豆(Cicer pinnatifidum)或尖刺鹰嘴豆(Cicer pungens)或丽庆鹰嘴豆(Cicer rechingeri)或网状鹰嘴豆(Cicer reticulatum)或准噶尔鹰嘴豆(Cicer songaricum)或Cicer spiroceras或Cicer stapfianum或Cicer subaphyllum或Cicer tragacanthoides或Cicer yamashitae。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自染料木族，例如Adenocarpus或Anarthrophyllum或Argyrocytisus或银豆属或Calicotome或Chamaecytisus或Cytisophyllum或金雀花属或Dichilus或Echinospartum或Erinacea或染料木属或Gonocytisus或Hesperolaburnum或毒豆属或Lembotropis或羽扇豆属或Melolobium或Petteria或Podocytisus或Polhillia或Retama或Sellocharis或鹰爪豆属或Stauracanthus或Teline或荆豆属。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自蚕豆族，例如香豌豆属或兵豆属或豌豆属或Vavilovia或蚕豆属。在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自兵豆属，例如兵豆(小扁豆)或兵豆亚种小扁豆(Lens culinaris subsp.culinaris)或兵豆亚种odemensis或兵豆亚种绒毛兵豆(Lens culinaris subsp.tomentosus)或蓝兵豆(Lens cyanea)或Lens ervoides或拉蒙兵豆(Lens lamottei)或黑兵豆(Lens nigricans)或东方兵豆(Lens orientalis)(野兵豆)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自野豌豆属，例如Viciagarinensis或Vicia sojakii或丽庆野豌豆(Vicia rechingeri)或库尔德野豌豆(Viciakurdica)或多叶野豌豆或Vicia akhmaganica或变异野豌豆(Vicia variabilis)或Viciavariegata或波斯野豌豆(Vicia persica)或二节野豌豆(Vicia kotschyana)或Viciahirta或簇生野豌豆(Vicia gregaria)或Vicia ciceroidea或Vicia cappadocica或巴氏野豌豆(Vicia balansae)或光叶野豌豆(Vicia aucheri)或Vicia sp.'telaponensis'或脉叶野豌豆(Vicia venulosa)或毛野豌豆或窄叶野豌豆(Vicia stenophylla)或西库拉野豌豆(Vicia sicula)或Vicia sibthorpii或Vicia semiglabra或缠绕野豌豆(Viciascandens)或松林野豌豆(Vicia pinetorum)或Vicia picta或栉野豌豆(Viciapectinata)或少叶野豌豆(Vicia paucifolia)或巴勒斯坦野豌豆(Vicia palaestina)或Vicia onobrychioides或黄白野豌豆(Vicia ochroleuca)或Vicia nataliae或蒙特威野豌豆(Vicia montevidensis)或Vicia monardii或小花野豌豆(Vicia minutiflora)或曼西野豌豆(Vicia menziesii)或大花野豌豆或Vicia malosana或新月野豌豆(Vicialunata)或白花野豌豆(Vicia leucantha)或莱文沃斯野豌豆(Vicia leavenworthii)或拉里萨野豌豆(Vicia larissae)或伊朗野豌豆(Vicia iranica)或灰白野豌豆(Viciaincana)或Vicia hololasia或粉花野豌豆(Vicia glauca)或Vicia freyniana或佛罗里达野豌豆(Vicia floridana)或纤枝野豌豆(Vicia filicaulis)或Vicia ferreirensis或微细野豌豆(Vicia exigua)或Vicia dennesiana或塞浦路斯野豌豆(Vicia cypria)或Viciacretica或新疆野豌豆或Vicia claessensii或Vicia chaetocalyx或卡西亚野豌豆(Viciacassia)或Vicia capreolata或凯撒利亚野豌豆(Vicia caesarea)或二年生野豌豆(Viciabiennis)或贝加尔野豌豆或居高野豌豆(Vicia altissima)或高山野豌豆或尖叶野豌豆(Vicia acutifolia)或绢毛野豌豆(Vicia pubescens)或微花(Vicia cirrhosa)或Viciakoeieana或北野豌豆或多茎野豌豆(Vicia multicaulis)或小花野豌豆(Viciaparviflora)或拟蚕豆野豌豆(Vicia vicioides)或狭叶野豌豆(Vicia tenuifolia)或Vicia orobus或黑野豌豆(Vicia nigra)或裂叶野豌豆(Vicia incisa)或Viciaepetiolaris或Vicia crocea或少花野豌豆(Vicia sparsiflora)或西南野豌豆或二色野豌豆或Vicia cassubica或单花野豌豆(Vicia monantha)(单花野豌豆)或灰色野豌豆(Vicia cinerea)或Vicia oroboides或藏野豌豆(Vicia tibetica)或加罗林野豌豆(Vicia caroliniana)(加罗林野豌豆或林生野豌豆)或Vicia disperma或Viciaesdraelonensis或艳丽野豌豆(Vicia pulchella)或墨西哥野豌豆(Vicia mexicana)或伊卡里亚岛野豌豆(Vicia leucophaea)或矮野豌豆(Vicia humilis)或Vicia barbazitae或比利牛斯野豌豆(Vicia pyrenaica)或Vicia qatmensis或宽翼野豌豆(Vicialathyroides)或尖叶野豌豆(Vicia cuspidata)或Vicia dionysiensis或短茎野豌豆(Vicia abbreviata)或野豌豆或Vicia sericocarpa或Vicia noeana或Vicia hyrcanica或杂交野豌豆(Vicia hybrida)或Vicia galeata或Vicia ciliatula或Vicia assyriaca或虎掌野豌豆(Vicia tigridis)或安纳托利野豌豆(Vicia anatolica)或林生野豌豆(Vicia sylvatica)或灌丛野豌豆(Vicia dumetorum)或柔枝野豌豆(Vicia mollis)或Vicia aintabensis或褐色野豌豆(Vicia peregrina)或黄花野豌豆(Vicia lutea)(黄野豌豆)或大花野豌豆(Vicia grandiflora)或节枝野豌豆(Vicia articulata)或美洲野豌豆(Vicia americana)或密叶野豌豆(Vicia michauxii)或Vicia vicina或柳叶野豌豆或四籽野豌豆(Vicia tetrasperma)或苦野豌豆(Vicia ervilia)或孟加拉野豌豆(Viciabenghalensis)(深紫野豌豆或冬野豌豆)或Vicia angustipinnata或黑龙江野豌豆或歪头菜或假香野碗豆或豆状野豌豆(Vicia pisiformis)或日本野豌豆(Vicia nipponica)或黑色野豌豆(Vicia nigricans)或线叶野豌豆(Vicia linearifolia)或日本野豌豆(Viciajaponica)或Vicia hirticalycina或Vicia fauriae或朝鲜野豌豆(Vicia chosenensis)或三齿萼野豌豆(Vicia bungei)或二叶野豌豆(Vicia bifolia)或山野豌豆或Viciamontbretii或齿叶野豌豆(Vicia serratifolia)或深裂野豌豆(Vicia paucijuga)或Vicia kalakhensis或Vicia johannis或Vicia hyaeniscyamus或Vicia galilaea或Viciaeristalioides或Vicia bithynica或Vicia melanops或Vicia ludoviciana或褐毛野豌豆(Vicia pannonica)或法国野豌豆或密毛野豌豆(Vicia villosa)或粗毛野豌豆(Viciahirsuta)或紫花野豌豆(Vicia sativa)(箭舌豌豆)或蚕豆(蚕豆或蚕豆)或广布野碗豆(Vicia cracca)(鸟豌豆)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自豌豆属，例如阿比西尼亚豌豆(Pisum abyssinicum)(阿比西尼亚豌豆)或绒叶豌豆(Pisum fulvum)或豌豆(豌豆)或亚洲豌豆(Pisum sativum subsp.asiaticum)或高豌豆(Pisum sativum subsp.elatius)(野生豌豆)或短小豌豆(Pisum sativum var.pumilio)(叙利亚饲料豌豆)或Pisumsativum subsp.jomardii或Pisum sativum subsp.Sativum或饲料豌豆(Pisum sativumvar.arvense)或Pisum sativum var.choresmicum或Pisum sativum var.macrocarpon(糖荚豌豆)或Pisum sativum var.ponderosum或Pisum sativum var.tibetanicum或外高加索豌豆(Pisum sativum subsp.transcaucasicum)。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自黄檀族，例如长足甲属或合明属或Amicia或Andira或落花生属或Brya或Bryaspis或Cascaronia或正裂果属或Chaetocalyx或Chapmannia或Cranocarpus或Cyclocarpa或黄檀属或川续断属或Discolobium或Etaballia或Fiebrigiella或Fissicalyx或睫苞豆属或Geoffroea或Grazielodendron或Humularia或Hymenolobium或Inocarpus或Kotschya或Machaerium或Maraniona或Nissolia或Ormocarpopsis或链荚木属或Paramachaerium或Peltiera或Pictetia或Platymiscium或Platypodium或Poiretia或紫檀属或Ramorinoa或Riedeliella或Smithia或Soemmeringia或Steinbachiella或柱花草属或Tipuana或Weberbauerella或丁葵草属。
在一个实施例中，来自蝶形花亚科的植物基材料是来自落花生属，例如Appressipila(amendoim bravo)或Arachis batizocoi或短柄落花生(Arachisbrevipetiolata)或Arachis burchellii或Arachis burkartii或Arachis cardenasii或Arachis chiquitana或科伦蒂纳落花生(Arachis correntina)或克鲁斯落花生(Arachiscruziana)或Arachis decora或Arachis diogoi或蔓花生或蔓花生x Arachisstenosperma或无毛落花生(Arachis glabrata)(amendoim-bravo)或无毛落花生(Arachisglabrata var.glabrata)或Arachis glabrata var.hagenbeckii或无毛落花生(Arachisglabrata)x花生或Arachis glandulifera或深蓝落花生(Arachis guaranitica)或沼生落花生(Arachis helodes)或赫尔曼氏落花生(Arachis hermannii)或霍氏落花生(Arachishoehnei)或花生(花生)或Arachis hypogaea subsp.Fastigiata或普通花生(Arachishypogaea var.vulgaris)(西班牙花生)或落花生(Arachis hypogaea subsp.Hypogaea)或粗毛花生(Arachis hypogaea var.hirsuta)或Arachis ipaensis或Arachis ipaensis xArachis magna 或Arachis kempff-mercadoi或Arachis kretschmeri或Arachiskuhlmannii或线叶落花生(Arachis linearifolia)或土黄色落花生(Arachis lutescens)或Arachis magna或大型落花生(Arachis major)或Arachis matiensis或细籽落花生(Arachis microsperma)或山地落花生(Arachis monticola)或沼生落花生(Arachispalustris)或巴拉圭落花生(Arachis paraguariensis)或Arachis paraguariensissubsp.capibarensis或巴拉圭落花生(Arachis paraguariensis subsp.paraguariensis)或Arachis pflugeae或平托花生(Arachis pintoi)或早发落花生(Arachis praecox)或细叶落花生(Arachis pusilla)(amendoim de caracar)或Arachis repens或Arachisrigonii或Arachis schinini或Arachis simpsonii或狭叶落花生(Arachis stenophylla)或Arachis stenosperma或Arachis stenosperma x Arachis cardenasii或Arachissylvestris(amendoim do porco)或Arachis trinitensis或Arachis triseminata或球茎落花生(Arachis tuberosa)或强壮落花生(Arachis valida)或绒毛落花生(Arachisvillosa)或Arachis villosulicarpa或威廉姆斯落花生(Arachis williamsii)。
在一方面，植物基材料来自分类学上十字花目，例如十字花科，优选芸苔族，更优选芸苔属。
在一个实施例中，来自芸苔族的植物基材料是来自芸苔属，例如光叶芸苔(Brassica aucheri)、巴利阿里芸苔(Brassica balearica)、Brassica barrelieri、隆线芸苔(Brassica carinata)(阿比西尼亚芥菜)、隆线芸苔(Brassica carinata)x欧洲油菜、隆线芸苔(Brassica carinata)x芜菁、Brassica cretica、弯折芸苔(Brassica deflexa)、Brassica desnottesii、Brassica drepanensis、长穗芸苔(Brassica elongata)、灌木芸苔(Brassica fruticulosa)、Brassica fruticulosa subsp.cossoniana、毛里塔尼芸灌木苔亚(Brassica fruticulosa subsp.mauritanica)、Brassica fruticulosasubsp.rifana、Brassica gravinae、Brassica hilarionis、杂交栽培芸苔(Brassicahybrid cultivar)、灰白芸苔(Brassica incana)、海岛芸苔(Brassica insularis)、Brassica insularis subsp.insularis、芥菜(印度芥菜)、粗茎芥菜(Brassica junceavar.crassicaulis)、抱子芥(Brassica juncea var.gemmifera)、细枝芥菜、印度芥菜(Brassia juncea)、多头芥菜(Brassica juncea var.multiceps)、Brassica junceavar.multisecta、Brassica juncea var.napiformis(芥菜疙瘩)、皱叶芥菜、Brassicajuncea var.strumata、Brassica juncea var.subintegrifolia、膨胀芥菜(Brassicajuncea var.tumida)(榨菜)、Brassica juncea var.utilis、大果芸苔(Brassicamacrocarpa)、Brassica maurorum、蒙大拿芸苔(Brassica montana)、欧洲油菜(油菜)、Brassica napus subsp.rapifera(瑞典芜菁)、欧洲油菜变种甘蓝型油菜(Brassica napusvar.napus)(一年生油菜)、欧洲油菜x芜菁、黑芥菜(Brassica nigra)(黑芥)、Brassicanigra var.abyssinica、甘蓝、白花甘蓝(Brassica oleracea var.albiflora)、芥蓝(Brassica oleracea var.alboglabra)(芥蓝)、Brassica oleracea var.botrytis(花椰菜)、头花甘蓝(卷心菜)、多肋甘蓝(贝德福德卷心菜(Bedford cabbage))、抱子甘蓝(Brassica oleracea var.gemmifera)(抱子甘蓝)、球茎甘蓝(Brassica oleraceavar.gongylodes)(苤蓝)、意大利甘蓝(Brassica oleracea var.italica)(花茎甘蓝(asparagus broccoli))、Brassica oleracea var.medullosa(marrow-stem kale)、野甘蓝、多枝甘蓝(Brassica oleracea var.ramosa)(枝丛甘蓝)、Brassica oleraceavar.sabauda、绿色甘蓝(绿色)(羽衣甘蓝)、甘蓝x北京芜菁、Brassica oxyrrhina、平卧芸苔(Brassica procumbens)、芜菁(荠菜)、中华芜菁(Brassica rapa subsp.chinensis)(小白菜)、菜心芜菁(Brassica rapa var.parachinensis)(菜心)、紫色芜菁(Brassica rapavar.purpuraria)(紫茎芥菜)、塌棵菜、京菜(Brassica rapa subsp.nipposinica)(日本沙拉菜(mizuna))、Brassica rapa var.perviridis(kabuna)、Brassica rapasubsp.oleifera(biennial turnip rape)、芜菁(Nippo-oleifera Group)、北京芜菁(Brassica rapa subsp.pekinensis)(大白菜)、Brassica rapa subsp.rapa(芜菁甘蓝)、Brassica rapa var.oleifera、芜菁x黑芥菜、Brassica repanda、Brassica repandasubsp.baldensis、Brassica repanda subsp.blancoana、Brassica repandasubsp.cadevallii、Brassica repanda subsp.confusa、光叶Brassica repandasubsp.glabrescens、Brassica repanda subsp.gypsicola、Brassica repandasubsp.latisiliqua、Brassica repanda subsp.maritima、Brassica repandasubsp.repanda、岩栖Brassica repanda subsp.saxatilis、石生Brassica rupestris、Brassica ruvo(broccoletto)、Brassica souliei、抱茎Brassica soulieisubsp.amplexicaulis、锐刺芸苔(Brassica spinescens)、Brassica tournefortii、密毛芸苔(Brassica villosa)或Brassica villosa subsp.Bivoniana。
在具体的实施例中，植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。在一个优选的实施例中，植物基材料是大豆或大豆粉。
动物饲料和动物饲料添加剂
本发明还涉及包含本发明的一种或多种β-半乳糖苷酶和本发明的一种或多种半乳聚糖酶的动物饲料组合物和动物饲料添加剂。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含调配剂、本发明的一种或多种β-半乳糖苷酶和本发明的一种或多种半乳聚糖酶。在另外的实施例中，该调配剂包括以下化合物中的一种或多种：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、高岭土和纤维素。
动物饲料组合物或饮食具有相对高的蛋白含量。家禽和猪饮食的特征如WO 01/58275，表B第2-3栏所示。鱼饮食可被表征为该表B第4栏中所示的。此外，这类鱼食通常具有200-310g/kg的粗脂肪含量。
根据本发明的动物饲料组合物具有50-800g/kg的粗蛋白含量，并且此外还包含在此所要求保护的至少一种本发明的β-半乳糖苷酶和至少一种本发明的半乳聚糖酶。
而且，或在(上面显示的粗蛋白含量的)替换方案中，本发明的动物饲料组合物具有10-30MJ/kg的可代谢能量的含量；和/或0.1-200g/kg的钙含量；和/或0.1-200g/kg的有效磷含量；和/或0.1-100g/kg的甲硫氨酸含量；和/或0.1-150g/kg的甲硫氨酸加半胱氨酸含量；和/或0.5-50g/kg的赖氨酸含量。
在具体实施例中，可代谢能量、粗蛋白、钙、磷、甲硫氨酸、甲硫氨酸加半胱氨酸、和/或赖氨酸的含量落入WO 01/58275，表B，范围2、3、4或5(R.2-5)中的任何一个中。
粗蛋白以氮(N)乘以系数6.25计算，即粗蛋白(g/kg)＝N(g/kg)X 6.25。通过凯氏定氮法(Kjeldahl method)测定氮含量(A.O.A.C.,1984，Official Methods of Analysis[官方分析方法]第14版,Association of Official Analytical Chemists[官方分析化学家集],华盛顿特区)。
可代谢能量可根据NRC出版物Nutrient requirements in swine[猪的营养需求]，第九次再版1988，subcommittee on swine nutrition,committee on animalnutrition,board of agriculture,national research council[国家研究委员会农业部动物营养协会猪营养分会]。美国国家科学院出版社(National Academy Press)，华盛顿特区，第2-6页和欧洲家禽饲养材料能量值表(European Table of Energy Values forPoultry Feed-stuffs)，斯克得霍特(Spelderholt)家禽研究与推广中心，7361DA贝克贝亨(Beekbergen)，荷兰。Grafisch bedrijf Ponsen&looijen公司，瓦赫宁恩(Wageningen)，ISBN 90-71463-12-5计算。
可基于饲料表，如在Veevoedertabel[饲料表]1997，gegevens over chemischesamenstelling[化学成分数据]，verteerbaarheid en voederwaarde vanvoedermiddelen[饲料的消化率和营养价值]，Central Veevoederbureau[中央饲料局]，Runderweg 6，8219pk Lelystad[莱利斯塔德].ISBN 90-72839-13-7中所述的，计算在动物全饮食中的钙、有效磷和氨基酸的膳食含量。
在具体实施例中，本发明的动物饲料组合物包含如上定义的至少一种植物蛋白。
本发明的动物饲料组合物还可以包含动物性蛋白，如肉和骨粉、羽毛粉、和/或鱼粉，通常量为0-25％。本发明的动物饲料组合物还可以包含具有可溶物的干酒糟(DriedDistillers Grains with Solubles，DDGS)，通常量为0-30％。
本发明的动物饲料组合物还可以包含昆虫蛋白，例如来自黄粉虫(mealworm)、家蝇、黑水虻的蛋白，通常处于粉形式。昆虫粉可以全部或部分替代鱼粉，并且因此可以构成全部饲料的0％-10％。
在再进一步具体的实施例中，本发明的动物饲料组合物包含0-80％玉蜀黍；和/或0-80％高粱；和/或0-70％小麦；和/或0-70％大麦；和/或0-30％燕麦；和/或0％-40％大豆粉；和/或0-25％鱼粉；和/或0-25％肉和骨粉；和/或0-20％乳清。
该动物饲料可以包括植物蛋白。在具体实施例中，这些植物蛋白的蛋白含量是至少为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％(w/w)。植物蛋白可以衍生自植物蛋白来源，如豆类和谷类，例如得自蝶形花科(豆科)、十字花科、苋科和早熟禾科植物的材料，如大豆粉饼、羽扇豆粉饼、油菜籽粉饼及其组合。
在一个具体实施例中，植物蛋白来源是来自豆科(Fabaceae)的一种或多种植物的材料，如大豆、羽扇豆、豌豆、豆。在另一个具体实施例中，植物蛋白来源是得自苋科的一种或多种植物，例如甜菜、糖甜菜、菠菜或奎奴亚藜的材料。植物蛋白来源的其他实例是油菜、海甘蓝和卷心菜。在另一个具体实施例中，大豆是一种优选的植物蛋白来源。植物蛋白来源的其他实例是谷物，如大麦、小麦、黑麦、燕麦、玉蜀黍(玉米)、水稻、和高粱。
可将动物饮食制成例如糊状饲料(非粒化)或粒化饲料。通常，混合研磨的饲料并根据所讨论的这些种类的说明添加充足量的必需维生素和矿物质。以固体或液体酶配制品的形式添加酶。例如，对于糊状饲料，在成分混合步骤前或期间可添加固体或液体酶配制品。对于粒化饲料而言，也可以在饲料成分步骤之前或过程中添加该(液体或固体)β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶酶制剂。典型地，液体β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶酶制剂包括本发明的β-半乳糖苷酶和本发明的半乳聚糖酶，任选地伴随着多元醇(例如甘油、乙二醇或丙二醇)，并且是在压丸步骤后添加，例如通过将该液体配制品喷涂至丸粒上。也可以将酶掺入饲料添加剂或预混物。
可替代地，可以通过冷冻液体酶溶液与填充剂(例如研磨的大豆粉)的混合物，并且然后冻干该混合物，来制备β-半乳糖苷酶/半乳聚糖酶。
在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料包括一种或多种微生物。在一个实施例中，该动物饲料包括一种或多种维生素。在一个实施例中，该动物饲料包括一种或多种矿物质。在一个实施例中，该动物饲料包括一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该动物饲料包括一种或多种其他饲料成分。
在另一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种另外的酶。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种微生物。在一个实施例中，该动物饲料包括本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种维生素。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种矿物质。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种氨基酸。在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种其他饲料成分。
在另外的实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包括一种或多种本发明的多肽、一种或多种调配剂和一种或多种选自以下列表的组分，该列表由以下组成：一种或多种另外的酶；一种或多种微生物；一种或多种维生素；一种或多种矿物质；一种或多种氨基酸；以及一种或多种其他饲料成分。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种调配剂，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种另外的酶，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种益生菌，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种维生素，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种矿物质，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种氨基酸，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种益生元，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种有机酸，优选本文如下描述的。
在一个实施例中，该动物饲料添加剂包括一种或多种植生素，优选本文如下描述的。
对于每种酶，饮食中的最终酶浓度在0.01-200mg酶蛋白/kg饮食的范围内，优选地在0.05-100mg/kg饮食之间，更优选地0.1-50mg，甚至更优选地0.2-20mg酶蛋白/kg动物饮食。
目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种给予半乳聚糖酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围是每kg饲料的mg半乳聚糖酶蛋白(ppm)。目前考虑以下述量(剂量范围)中的一种或多种给予β-半乳糖苷酶：0.01-200；0.05-100；0.1-50；0.2-20；0.1-1；0.2-2；0.5-5；或1-10，其中所有这些范围是每kg饲料的mgβ-半乳糖苷酶蛋白(ppm)。进一步考虑了，半乳聚糖酶与β-半乳糖苷酶的比在100:1至1:100的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内，例如50:1至1:50、50:1至1:10、25:1至1:5、10:1至1:2或例如10:1至1:50、5:1至1:25、2:1至1:10的半乳聚糖酶:β-半乳糖苷酶的范围内。
为了确定每kg饲料中半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶蛋白的mg数，从饲料组合物中纯化半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶，并且使用相关试验(参见如下半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶活性)确定经纯化的半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶的比活性。也可以使用相同的测定同样地确定饲料组合物的半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性，并且根据这两个确定结果，计算以mg半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶蛋白/kg饲料表示的剂量。
在一个具体实施例中，本发明的动物饲料添加剂意在以0.01％至10.0％；更优选0.05％至5.0％；或0.2％至1.0％(％指g添加剂/100g饲料)的水平包括(或规定为必须包括)在动物饮食或饲料中。具体地说，对预混物也是如此。
将同样的原理应用于确定饲料添加剂中的半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶蛋白的mg数。当然，如果样品使用了用于制备饲料添加剂或饲料的半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶，可以由此样品确定比活性(不需要从饲料组合物或添加剂中纯化半乳聚糖酶或β-半乳糖苷酶)。
另外的酶
在另一个实施例中，在此描述的这些组合物任选地包括一种或多种酶。可以根据来自NC-IUBMB,1992的酶命名手册(handbook Enzyme Nomenclature from NC-IUBMB,1992)对酶进行分类，也可参见因特网上的ENZYME网站：http://www.expasy.ch/enzyme/。ENZYME是相对于酶命名法的信息储库。它主要基于国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUB-MB)，学术出版社公司(Academic Press，Inc.)，1992的推荐并且描述了所表征的酶的每种类型，为所述酶提供EC(酶委员会)编号(Bairoch A.The ENZYME database[酶数据库],2000,Nucleic Acids Res[核酸研究]28:304-305)。这种IUB-MB酶命名法是基于它们的底物特异性，有时基于它们的分子机制；这样的分类法不反映这些酶的结构特征。
Henrissat等人在“The carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in 2013[2013年的碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]”,Nucl.Acids Res.[核酸研究](2014年1月1日)42(D1):D490-D495中描述了某些糖苷水解酶(例如内切葡聚糖酶、半乳聚糖酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、溶菌酶和半乳糖苷酶)的另一种分类；还参见www.cazy.org。
因此，本发明的组合物还可以包括选自下组的至少一种其他的酶，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶(EC 3.1.1.23)、酰基甘油酯酶(EC 3.1.1.72)、α-淀粉酶(EC3.2.1.1)、β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)、阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55)、纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)、纤维素酶(EC 3.2.1.4)、阿魏酸酯酶(EC 3.1.1.73)、半乳糖苷酶(EC3.2.1.89)、α-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)、β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)、β-葡聚糖酶(EC3.2.1.6)、β-糖苷酶(EC 3.2.1.21)、三乙酰基甘油脂肪酶(EC 3.1.1.3)、溶血磷脂酶(EC3.1.1.5)、溶菌酶(EC 3.2.1.17)、α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)(EC 3.2.1.25)、植酸酶(EC 3.1.3.8、EC 3.1.3.26、EC 3.1.3.72)、磷脂酶A1(EC3.1.1.32)、磷脂酶A2(EC 3.1.1.4)、磷脂酶D(EC 3.1.4.4)、蛋白酶(EC 3.4)、支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、木聚糖酶(EC 3.2.1.8、EC 3.2.1.136)、β-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)或其任何组合。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含植酸酶(EC 3.1.3.8或3.1.3.26)。可商购的植酸酶的实例包括Bio-FeedTM植酸酶(诺维信公司(Novozymes))、P、NP和HiPhos(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、NatuphosTM(巴斯夫公司(BASF))、NatuphosTM E(巴斯夫公司(BASF))、和Blue(AB酶公司(AB Enzymes))、(Huvepharma)、Phytase(Aveve Biochem)、XP(范恩尼姆/杜邦公司(Verenium/DuPont))和PHY(杜邦公司(DuPont))。其他优选的植酸酶包括描述于，例如，WO 98/28408、WO00/43503、和WO 03/066847中的那些。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。可商购的木聚糖酶的实例包括WX(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))、XT和Barley(AB维斯塔公司(AB Vista))、(范恩尼姆公司(Verenium))、X(Huvepharma)、XB(木聚糖酶/β-葡聚糖酶，杜邦公司(DuPont))和XAP(木聚糖酶/淀粉酶/蛋白酶，杜邦公司(DuPont))、XG10(木聚糖酶/葡聚糖酶)和02 CS(木聚糖酶/葡聚糖酶/果胶酶，AveveBiochem)、和Naturgrain(BASF)。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含蛋白酶(EC 3.4)。可商购的蛋白酶的实例包括ProAct(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))。
在一个具体实施例中，本发明的组合物包含α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)。可商购的α-淀粉酶的实例包括A和RumiStarTM(帝斯曼营养产品公司(DSMNutritional Products))。
在一个实施例中，本发明的组合物包含多成分的酶产品，例如Octazyme(Framelco)、G2、VP和MultiGrain(帝斯曼营养产品公司(DSM Nutritional Products))、Excel或Advance(安迪苏(Adisseo))。
摄生物(Eubiotics)
摄生物是被设计为在胃肠道给出微生物群落的健康平衡的化合物。摄生物涵盖大量不同的饲料添加剂，例如益生菌、益生元、植生素(精华油)和有机酸，其在下文更加详细地描述。
益生素
在一个实施例中，该动物饲料组合物进一步包含一种或多种另外的益生菌。在一个具体实施例中，该动物饲料组合物进一步包括来自以下属中的一个或多个属的细菌：乳杆菌属、乳球菌属、链球菌属、芽孢杆菌属、片球菌属、肠球菌属、明串珠菌属、Carnobacterium、杆菌属、丙酸杆菌属、双歧杆菌属、梭菌属和巨型球菌属(Megasphaera)或其任何组合。
在一个优选的实施例中，该动物饲料组合物进一步包括来自以下菌株中的一个或多个菌株的细菌：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、屎肠球菌、肠球菌属和片球菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属、嗜酸乳杆菌、乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)、乳酸乳球菌、两歧双歧杆菌、特氏丙酸杆菌(Propionibacteriumthoenii)、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、丁酸梭菌、动物双歧杆菌动物专化型(Bifidobacterium animalis ssp.animalis)、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌唾液专化型(Lactobacillus salivarius ssp.salivarius)、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、丙酸杆菌属。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料还包括来自以下枯草芽孢杆菌菌株中的一个或多个的细菌：3A-P4(PTA-6506)、15A-P4(PTA-6507)、22C-P1(PTA-6508)、2084(NRRL B-500130)、LSSA01(NRRL-B-50104)、BS27(NRRLB-501 05)、BS 18(NRRL B-50633)、BS 278(NRRL B-50634)、DSM 29870、DSM 29871、DSM 32315、NRRL B-50136、NRRL B-50605、NRRL B-50606、NRRL B-50622和PTA-7547。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包括来自以下短小芽孢杆菌菌株中的一个或多个的细菌：NRRL B-50016、ATCC 700385、NRRL B-50885或NRRL B-50886。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料进一步包括来自以下地衣芽孢杆菌菌株中的一个或多个的细菌：NRRL B 50015、NRRL B-50621或NRRL B-50623。
在一个更优选的实施例中，组合物、动物饲料添加剂或动物饲料还包括来自以下解淀粉芽孢杆菌菌株中的一个或多个的细菌：DSM 29869、DSM 29869、NRRL B 50607、PTA-7543、PTA-7549、NRRL B-50349、NRRL B-50606、NRRL B-50013、NRRL B-50151、NRRL B-50141、NRRL B-50147或NRRL B-50888。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数为1x 104和1x 1014CFU/kg的干物质之间，优选地1x 106和1x 1012CFU/kg的干物质之间，并且更优选地1x 107至1x1011CFU/kg的干物质之间。在一个更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数为1x 108和1x 1010CFU/kg的干物质之间。
该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数为1x 105和1x 1015CFU/动物/天之间，优选地1x 107和1x 1013CFU/动物/天之间，并且更优选地1x 108和1x 1012CFU/动物/天之间。在一个更优选的实施例中，该动物饲料组合物中的每种细菌菌株的细菌计数为1x109和1x 1011CFU/动物/天之间。
在另一个实施例中，该一种或多种细菌菌株以稳定的孢子形式存在。
可商购产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、Alterion(Adisseo)、Enviva PRO(杜邦动物营养公司(DuPont AnimalNutrition))、Max、Guard、和(科汉森公司(Chr.Hansen))、sol、me、(Biomin)、(混合酶+益生菌，杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))、和(Norel/Evonik)和PY1(赢创公司(Evonik))。
益生元
益生元是诱导微生物(如细菌和真菌)生长或活性的物质，其有助于其宿主的健康。益生元是典型的不可消化的纤维化合物，其通过未消化的胃肠道上半部分，通过作为其底物刺激定殖于大肠的优势细菌的生长或活性。通常，益生元增加胃肠(GI)道内双歧杆菌和乳酸菌的数量或活性。
酵母衍生物(灭活的全酵母或酵母细胞壁)也可以被认为是益生元。它们通常包含锰寡糖、酵母β-葡聚糖或蛋白质成分，并且通常源自酵母，酿酒酵母，的细胞壁。
酵母产品的实例是和Agrimos(拉曼动物营养公司(Lallemand AnimalNutrition))。
植生素
植生素是一组自然生长促进剂或非抗生素生长促进剂，其用作饲料添加剂，源自草药、香料或其他植物。植生素可以是由精油/提取物、精油/提取物、单一植物和植物的混合物(草药产品)或精油/提取物/植物的混合物(专业产品)制备的单一物质。
植生素的实例有迷迭香、鼠尾草、牛至、百里香、丁香和柠檬草。精油的实例是百里香酚、丁子香酚、间甲酚、香兰素、水杨酸盐、间苯二酚、邻甲氧基苯酚、姜辣素、熏衣草油、紫罗酮、鸢尾酮、桉油精、薄荷醇、薄荷油、α-蒎烯；柠檬烯、茴香脑、芳樟醇、二氢茉莉酮酸甲酯、香芹酚、丙酸/丙酸盐、乙酸/乙酸盐、丁酸/丁酸盐、迷迭香油、丁香油、香叶醇、松油醇、香茅醇、水杨酸戊酯和/或水杨酸苄酯、肉桂醛、植物多酚(鞣酸)、姜黄和姜黄提取物。
可商购产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))；CinergyTM、CinergyTM FIT、BiacidTM、(Cargill)、和DC(Biomin)和Envivo EO(杜邦动物营养公司(DuPont Animal Nutrition))。
有机酸
有机酸(C1-C7)是自然界中广泛分布的植物或动物组织的正常成分。它们主要是通过大肠中碳水化合物的微生物发酵形成。它们经常被用于猪和家禽生产中，作为抗生素生长促进剂的替代品，因为它们对鸡的坏死性肠炎和幼猪的大肠杆菌感染等肠道问题具有预防作用。有机酸可作为单组份或通常2或3种不同有机酸的混合物出售。有机酸的例子有丙酸、甲酸、柠檬酸、乳酸、山梨酸、苹果酸、乙酸、富马酸、苯甲酸、丁酸和酒石酸或其盐(通常是钠或钾盐，例如二甲酸钾)。
可商购产品的实例是(帝斯曼营养产品公司(DSM NutritionalProducts))、Lupro-Lupro-Lupro-Lupro-NA(巴斯夫公司(BASF))、正丁酸AF(OXEA)、BiacidTM、ProhacidTM Classic和ProhacidTM AdvanceTM(嘉吉公司(Cargill))、(Biomin)和Adimix Precision(Nutriad)。
预混物
将如以上在此示例的饲料添加剂的组合物合并到动物饲料例如家禽饲料中在实际情况下是使用一种浓缩剂或一种预混料进行的。预混料是指一种或多种微小成分与稀释剂和/或载体的一种优选地均匀的混合物。预混料用于促进微小成分在较大混合物中均匀分散。根据本发明的一种预混料可以作为固体(例如作为水溶性粉末)或液体添加到饲料成分或饮用水中。
氨基酸
本发明的组合物还可包括一种或多种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。
维生素和矿物质
在另一个实施例中，该动物饲料可以包括一种或多种维生素，例如一种或多种脂溶性维生素和/或一种或多种水溶性维生素。在另一个实施例中，该动物饲料可任选地包括一种或多种矿物质，例如一种或多种痕量矿物质和/或一种或多种巨量矿物质。
通常，脂溶性维生素-和水溶-性维生素、以及痕量矿物质形成了一种所谓的旨在添加到饲料中的预混料的部分，而大量矿物质通常被分开地添加到饲料中。
脂-溶性维生素的非限制性实例包括维生素A、维生素D3、维生素E、以及维生素K，例如维生素K3。
水-溶性维生素的非限制性实例包括维生素B12、生物素和胆碱、维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、叶酸和泛酸盐，例如Ca-D-泛酸盐。
痕量矿物质的非限制性实例包括硼、钴、氯化物、铬、铜、氟化物、碘、铁、锰、钼、硒和锌。
巨量矿物质的非限制性实例包括钙、镁、钾和钠。
在WO 01/58275的表A中，列出了这些组分的营养需求(以家禽和仔猪/猪为例)。营养需求指的是应在饮食中提供指定浓度的这些组分。
在可替代的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含WO 01/58275的表A中指定的单独组分中的至少一种。至少一种指的是一种或两种或三种或四种等直至所有十三种、或直至所有十五种单独组分中的任一种，一种或多种。更具体地，该至少一种单独组分以提供在表A的第四栏或第五栏或第六栏说明的范围内的饲料中浓度(in-feed-concentration)的量包括在本发明的添加剂内。
在仍另外的实施例中，本发明的动物饲料添加剂包含以下维生素中的至少一种，优选使得其饲料内浓度落入下表1中所限定的范围之内(分别对于仔猪饮食和肉鸡饮食)。
表1：一般性维生素建议
其他饲料成分
本发明的组合物可以进一步包括着色剂、稳定剂、生长改善添加剂和香料化合物/调味品、多不饱和脂肪酸(PUFA)；活性氧产生物质、抗微生物肽和抗真菌多肽。
着色剂的实例是类葫萝卜素，例如β-胡萝卜素、虾青素、和叶黄素。
香料化合物/调味品的实例是甲氧甲酚，茴香醚，十、十一和/或十二内酯、紫罗酮、鸢尾酮、姜辣素、哌啶、亚丙基苯酞(propylidene phatalide)、亚丁基苯酞(butylidenephatalide)、辣椒素和鞣质。
抗微生物肽(AMP)的实例是CAP18、林可霉素(Leucocin)A、三色肽(Tritrpticin)、Protegrin-1、死亡素(Thanatin)、防卫素(Defensin)、乳铁蛋白、乳铁蛋白肽、和奥维司匹林(Ovispirin)如诺维司匹林(Novispirin)(罗伯特莱勒(Robert Lehrer)，2000)、菌丝霉素(Plectasins)以及他汀类，包含在WO 03/044049和WO 03/048148中所披露的化合物和多肽，以及以上的保留了抗微生物活性的变体或片段。
抗真菌多肽(AFP)的实例是巨大曲霉(Aspergillus giganteus)和黑曲霉的肽，连同其保留了抗真菌活性的变体和片段，如在WO 94/01459和WO 02/090384中披露的。
多不饱和脂肪酸的实例为C18、C20和C22多不饱和脂肪酸，如花生四烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和γ-亚油酸。
活性氧生成种类的实例为化学品，如过硼酸盐、过硫酸盐或过碳酸盐；和酶，如氧化酶、氧合酶或合成酶。
本发明的组合物可以进一步包括至少一种氨基酸。用于动物饲料的氨基酸的实例是赖氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。
用途
本发明还针对用于使用具有半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性的多肽或其组合物(用于例如动物饲料)的方法。本发明还针对用于使用具有半乳聚糖酶和/或β-半乳糖苷酶活性的多肽或其组合物的方法，如例如以下所描述的那些。
在动物饲料中的用途
本发明还针对用于在动物饲料中使用本发明的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶的方法。
术语动物包括所有动物。动物的实例为非反刍动物和反刍动物。反刍动物包括例如，动物，如绵羊、山羊、和牛，例如，肉牛、奶牛和牛犊。在具体实施例中，动物为非反刍动物。非反刍动物包括单胃动物，例如，猪(包括但不限于小猪、成长猪、和母猪)；家禽，如火鸡、鸭和鸡(包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡)；马(包括但不限于热血马、冷血马和温血马)、小牛；和鱼(包括但不限于，鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼)；和甲壳动物(包括但不限于虾和对虾)。
在根据本发明的用途中，可在饮食之前，之后或同时向动物饲喂半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶。优选后者。
在一个具体实施例中，明确限定了将半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶添加至饲料或动物饲料添加剂中的形式。明确限定指的是如经大小排阻色谱法(参见WO 01/58275的实例12)测定的，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂至少为50％纯。在其他具体实施例中，如通过此方法确定的，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂为至少60％、70％、80％、85％、88％、90％、92％、94％、或至少95％纯。
明确限定的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂是有利的。例如，对于实质上不受其他半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶干扰或污染的半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶而言，更容易确定它在饲料中的正确剂量。术语正确配量具体指得到一致和恒定的结果的目标，和基于所希望的效果优化剂量的能力。
然而，为了在动物饲料中使用，半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶不必那么纯；它可例如包括其他酶，在此情况下它可被定义为半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂。
该半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂可以(a)直接加入饲料，或者(b)它可以用于随后加入饲料(或者用于处理过程中)的一种或多种中间组合物，如饲料添加剂或者预混物的生产。不论是否根据上述(a)或(b)来使用，上文所述的纯度指的都是原始半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶制剂的纯度。
本发明的优选实施例
在下面的一组项目中描述了本发明的优选实施例。
1.一种组合物，所述组合物包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽。
2.如项目1所述的组合物，其中所述GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
3.如项目1至2中任一项所述的组合物，其中所述GH53多肽和所述GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
4.如项目1至3中任一项所述的组合物，其中所述GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(k)SEQ ID NO:3的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)SEQ ID NO:7的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(m)SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(n)SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)SEQ ID NO:19的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(p)SEQ ID NO:23的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(q)SEQ ID NO:27的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(r)SEQ ID NO:31的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(s)SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(t)SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(u)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)或(t)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(v)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)或(t)的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(w)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)或(u)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
5.如项目4所述的组合物，其中所述GH53多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQ ID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ IDNO:6的氨基酸1至318、SEQ ID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ IDNO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ ID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ IDNO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
6.如项目1至5中任一项所述的组合物，其中所述GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(n)SEQ ID NO:42的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)SEQ ID NO:44的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(p)SEQ ID NO:47的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(q)SEQ ID NO:50的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(r)SEQ ID NO:53的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(s)SEQ ID NO:56的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(t)SEQ ID NO:59的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(u)SEQ ID NO:62的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:65的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:68的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:71的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)SEQ ID NO:74的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(z)SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(aa)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)或(z)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(ab)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)或(z)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(ac)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)或(z)的多肽的片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
7.如项目6所述的组合物，其中所述GH42多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:42的氨基酸1至685、SEQ ID NO:44的氨基酸1至688、SEQ ID NO:45的氨基酸1至695、SEQ IDNO:47的氨基酸1至687、SEQ ID NO:48的氨基酸1至694、SEQ ID NO:50的氨基酸1至654、SEQID NO:51的氨基酸1至661、SEQ ID NO:53的氨基酸1至687、SEQ ID NO:54的氨基酸1至694、SEQ ID NO:56的氨基酸1至686、SEQ ID NO:57的氨基酸1至695、SEQ ID NO:59的氨基酸1至688、SEQ ID NO:60的氨基酸1至697、SEQ ID NO:62的氨基酸1至691、SEQ ID NO:63的氨基酸1至700、SEQ ID NO:65的氨基酸1至690、SEQ ID NO:66的氨基酸1至699、SEQ ID NO:68的氨基酸1至689、SEQ ID NO:69的氨基酸1至698、SEQ ID NO:71的氨基酸1至685、SEQ ID NO:72的氨基酸1至694、SEQ ID NO:74的氨基酸1至685、SEQ ID NO:75的氨基酸1至694、SEQ IDNO:77的氨基酸1至686或SEQ ID NO:78的氨基酸1至695。
8.如项目1至7中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包括一种或多种调配剂。
9.如项目8所述的组合物，其中所述一种或多种调配剂选自下组，该组由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
10.如项目1至9中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包括一种或多种另外的酶。
11.如项目10所述的组合物，其中所述一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三乙酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
12.如项目1至11中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包括一种或多种微生物。
13.如项目12所述的组合物，其中所述一种或多种微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘菌芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、肉食杆菌属、丁酸梭菌、梭菌属、屎肠球菌、肠球菌属、乳酸杆菌属、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳酸杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属、明串珠菌属、埃氏巨型球菌(Megasphaera elsdenii)、巨型球菌属、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、片球菌属、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)、丙酸杆菌属、以及链球菌属或其任何组合。
14.如项目1至13中任一项所述的组合物，其中当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mgβ-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH6.5，在40℃孵育2小时，所述组合物释放至少12g半乳糖每kg大豆粉。
15.如项目14所述的组合物，其中所述组合物释放至少13g、例如至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g、至少20g或至少22g半乳糖每kg大豆粉。
16.如项目1至15中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包括植物基材料。
17.如项目16所述的组合物，其中所述植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。
18.如项目16所述的组合物，其中所述植物基材料来自豆科，优选蝶形花亚科。
19.如项目16所述的组合物，其中所述植物基材料来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
20.如项目16所述的组合物，其中所述植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。
21.一种颗粒，所述颗粒包含如项目1至15中任一项所述的组合物。
22.如项目21所述的颗粒，其中所述颗粒是包衣的。
23.如项目22所述的颗粒，其中所述包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
24.一种动物饲料添加剂，所述动物饲料添加剂包含如项目1至15中任一项所述的组合物或如项目21至23中任一项所述的颗粒。
25.如项目24所述的动物饲料添加剂，所述动物饲料添加剂进一步包含选自以下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
26.一种动物饲料，所述动物饲料包含如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂和植物基材料。
27.如项目26所述的动物饲料，其中所述植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲，优选来自豆科、更优选蝶形花亚科或甚至更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
28.如项目26所述的动物饲料，其中植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。
29.一种粒化动物饲料，所述粒化动物饲料包含植物基材料和如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂。
30.如项目29所述的粒化动物饲料，其中所述植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲，优选来自豆科、更优选蝶形花亚科或甚至更优选来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
31.如项目29所述的粒化动物饲料，其中植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。
32.如项目29至31中任一项所述的种粒化动物饲料，其中将如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒或如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂喷涂在颗粒上。
33.一种液体配制品，所述液体配制品包含如项目1至15中任一项所述的组合物。
34.如项目34所述的液体配制品，其中所述具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的给药为液体配制品的0.001％至25％w/w之间，优选0.01％至25％w/w、更优选0.05％至20％w/w、更优选0.2％至15％w/w、甚至更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w多肽。
35.如项目33至34中任一项所述的液体配制品，其中所述具有半乳聚糖酶活性的多肽的给药为液体配制品的0.001％至25％w/w之间，优选0.01％至25％w/w、更优选0.05％至20％w/w、更优选0.2％至15％w/w、甚至更优选0.5％至15％w/w或最优选1.0％至10％w/w多肽。
36.如项目33至35中任一项所述的液体配制品，其中所述配制品进一步包含20％至80％w/w的多元醇。
37.如项目36所述的液体配制品，其中所述多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、具有平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和具有平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
38.如项目33至37中任一项所述的液体配制品，其中所述配制品进一步包含0.01％至2.0％w/w的防腐剂。
39.如项目38所述的液体配制品，其中所述防腐剂选自下组，该组由以下组成：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
40.如项目33至39中任一项所述的液体配制品，所述液体配制品进一步包含选自以下列表的一种或多种组分，该列表由以下组成：
一种或多种酶；
一种或多种微生物；
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种植生素；
一种或多种益生元；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
41.一种制备动物饲料的方法，所述方法包括将如项目33至40中任一项所述的液体配制品应用于植物基材料上。
42.如项目41所述的方法，其中所述液体配制品通过喷涂应用。
43.如项目41至42中任一项所述的方法，其中所述植物基材料选自下组，该组由以下组成：大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(fava bean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。
44.如项目41至43中任一项所述的方法，其中所述植物基材料处于粒状形式。
45.一种粒化动物饲料，所述粒化动物饲料使用如项目41至44中任一项所述的方法制备。
46.一种从植物基材料中释放半乳糖的方法，所述方法包括用如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品处理所述植物基材料。
47.一种改善动物的一个或多个表现参数的方法，所述方法包括向一种或多种动物给予如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目26至28中任一项所述的动物饲料、如项目29至32或45中任一项所述的粒化动物饲料或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
48.如项目47所述的方法，其中所述表现参数选自以下列表，该列表由以下组成：体重增加(BWG)、欧洲生产效率因子(EPEF)以及饲料转化率(FCR)或其任何组合。
49.一种用于改善动物饲料营养价值的方法，所述方法包括向所述饲料中添加如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
50.一种制备动物饲料的方法，所述方法包括混合如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
51.一种用于减少动物饲料的抗营养效果的方法，所述方法包括向所述饲料中添加如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂或如项目33至40中任一项所述的液体配制品。
52.如项目46至51中任一项所述的方法，其中所述植物基材料来自分类学上蔷薇亚纲。
53.如项目46至51中任一项所述的方法，其中所述植物基材料来自豆科，优选蝶形花亚科。
54.如项目46至51中任一项所述的方法，其中所述植物基材料来自菜豆族、鹰嘴豆族、染料木族、野碗豆族、黄檀族或菜豆族或其任何组合。
55.如项目46至51中任一项所述的方法，其中所述植物基材料是大豆、野生大豆、豆类、羽扇豆、花菜豆、红花菜豆、瘦豆(slimjim bean)、利马豆、法国菜豆、蚕豆(favabean)、鹰嘴豆、小扁豆、花生、西班牙花生、卡诺拉、油菜籽(油菜)或豌豆或处于其加工形式例如大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白质浓缩物(SPC)、发酵大豆粉(FSBM)或其任何组合。
56.如项目1至15中任一项所述的组合物、如项目21至23中任一项所述的颗粒、如项目24至25中任一项所述的动物饲料添加剂、如项目26至28中任一项所述的动物饲料、如项目29至32或45中任一项所述的粒化动物饲料或如项目33至40中任一项所述的液体配制品：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在制备用于在动物饲料中使用的组合物中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物的一个或多个表现参数；和/或
用于从分类学上蔷薇亚纲的植物基材料中释放半乳糖的用途。
57.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有半乳聚糖酶活性，所述分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:7的多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:11的多肽具有至少99.0％，例如至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:15的多肽具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:19的多肽具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO:23的多肽具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO:27的多肽具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO:31的多肽具有至少99.3％，例如至少99.6％或100％序列一致性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO:35的多肽具有至少99.3％，例如至少99.6％或100％序列一致性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO:39的多肽具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(k)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(l)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(m)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少99.0％，例如至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(n)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(o)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列具有至少84％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(p)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列具有至少96.4％，例如至少96.7％、至少97.0％、至少97.3％、至少97.6％、至少98.0％、至少98.3％、至少98.6％、至少99.0％、至少99.3％、至少99.6％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(q)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少86％，例如至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(r)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列具有至少99.3％，例如至少99.6％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(s)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列具有至少99.3％，例如至少99.6％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(t)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少83％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(u)SEQ ID NO:3的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:7的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2或3个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:15的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)SEQ ID NO:19的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(z)SEQ ID NO:23的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(aa)SEQ ID NO:27的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ab)SEQ ID NO:31的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1或2个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ac)SEQ ID NO:35的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1或2个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ad)SEQ ID NO:39的变体，其中该变体具有半乳聚糖酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ae)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(af)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(ag)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)或(ad)的多肽的片段，该片段具有半乳聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
58.根据项目57所述的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQ ID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQ ID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ IDNO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ ID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ IDNO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
59.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有β-半乳糖苷酶活性，所述分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:42的多肽具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO:44的多肽具有至少99.8％，例如至少99.9％或100％序列一致性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO:50的多肽具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO:65的多肽具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；
(n)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列具有至少82％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(o)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列具有至少99.8％，例如至少99.9％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(p)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(q)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列具有至少90％，例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(r)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(s)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(t)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:58的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(u)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:61的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(v)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:64的成熟多肽编码序列具有至少88％，例如至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(w)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:67的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(x)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(y)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(z)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列具有至少80％，例如至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性的多核苷酸编码；
(aa)SEQ ID NO:42的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ab)SEQ ID NO:44的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1或2个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ac)SEQ ID NO:47的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ad)SEQ ID NO:50的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ae)SEQ ID NO:53的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(af)SEQ ID NO:56的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ag)SEQ ID NO:59的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ah)SEQ ID NO:62的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ai)SEQ ID NO:65的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(aj)SEQ ID NO:68的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ak)SEQ ID NO:71的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(al)SEQ ID NO:74的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(am)SEQ ID NO:77的变体，其中该变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(an)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)或(am)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(ao)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)或(am)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(ap)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)、(ae)、(af)、(ag)、(ah)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)或(am)的多肽的片段，该片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
60.根据项目59所述的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:42的氨基酸1至685、SEQ ID NO:44的氨基酸1至688、SEQ ID NO:45的氨基酸1至695、SEQ IDNO:47的氨基酸1至687、SEQ ID NO:48的氨基酸1至694、SEQ ID NO:50的氨基酸1至654、SEQID NO:51的氨基酸1至661、SEQ ID NO:53的氨基酸1至687、SEQ ID NO:54的氨基酸1至694、SEQ ID NO:56的氨基酸1至686、SEQ ID NO:57的氨基酸1至695、SEQ ID NO:59的氨基酸1至688、SEQ ID NO:60的氨基酸1至697、SEQ ID NO:62的氨基酸1至691、SEQ ID NO:63的氨基酸1至700、SEQ ID NO:65的氨基酸1至690、SEQ ID NO:66的氨基酸1至699、SEQ ID NO:68的氨基酸1至689、SEQ ID NO:69的氨基酸1至698、SEQ ID NO:71的氨基酸1至685、SEQ ID NO:72的氨基酸1至694、SEQ ID NO:74的氨基酸1至685、SEQ ID NO:75的氨基酸1至694、SEQ IDNO:77的氨基酸1至686或SEQ ID NO:78的氨基酸1至695。
61.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如项目57至60中任一项所述的多肽。
62.一种核酸构建体或表达载体，所述核酸构建体或表达载体包含可操作地连接至一个或多个控制序列的如项目48所述的多核苷酸，所述一个或多个控制序列指导所述多肽在表达宿主中的产生。
63.一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包括如项目61所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接至指导所述多肽产生的一个或多个控制序列上。
64.一种产生如项目57至60中任一项所述的多肽的方法，所述方法包括：
(a)在有益于产生所述多肽的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；以及
(b)回收所述多肽。
65.一种产生如项目57至60中任一项所述的多肽的方法，所述方法包括：
(a)在有益于产生所述多肽的条件下培养如项目63所述的重组宿主细胞；以及(b)回收所述多肽。
66.一种转基因植物、植物部分或植物细胞，所述转基因植物、植物部分或植物细胞用编码如项目57至60中任一项的多肽的多核苷酸转化。
67.一种全培养液配制品或细胞培养组合物，所述全培养液配制品或细胞培养组合物包含如项目57至60中任一项的所述的多肽。
68.一种组合物，所述组合物包含如项目57至60中任一项所述的多肽。
69.如项目68所述的组合物，所述组合物进一步包含一种或多种调配剂。
70.如项目69所述的组合物，其中所述一种或多种调配剂选自下组，该组由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
71.如项目68至70中任一项所述的组合物，所述组合物处于颗粒的形式。
72.如项目71所述的组合物，其中所述颗粒是包衣的。
73.如项目72所述的组合物，其中所述包衣包含盐和/或蜡和/或面粉包衣。
74.如项目68至73中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
75.如项目74所述的组合物，其中所述一种或多种另外的酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三乙酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
本发明由以下实例进一步说明，所述实例不应当解释为限制本发明的范围。
实例
菌株
半乳聚糖酶来源于通过标准微生物分离技术从环境样品分离的细菌菌株。鉴定菌株并基于16S核糖体基因的DNA测序对分类进行指定(表2)。
表2：细菌菌株的分离
1保藏为DSMZ15478/CECT 7022
2保藏为DSMZ14046
3保藏为NRRL B-50016
4保藏为NCIMB 40263
用来自凯杰公司(Qiagen)(希尔登(Hilden)，德国)的DNA酶血液和组织试剂盒(DNeasy Blood&Tissue Kit)从单个菌株的纯培养物中分离染色体DNA，并使用Illumina技术进行全基因组测序。基因组测序，随后的读取和基因发现的装配(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
对来自CAZY数据库家族GH53的半乳聚糖酶的基因组序列进行分析(Lombard等人，The Carbohydrate-active enzymes database CAZy.[碳水化合物活性酶数据库CAZy]Nucleic Acids Res[核酸研究]2013,42:D490-D495)。该分析鉴定了编码推定的半乳聚糖酶的十个基因，该基因具SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33和37中给出的核苷酸序列。
还对来自CAZY数据库家族GH42的β-半乳糖苷酶的基因组序列进行分析(Lombard等人，The Carbohydrate-active enzymes database CAZy.[碳水化合物活性酶数据库CAZy]Nucleic Acids Res[核酸研究]2013,42:D490-D495)。该分析鉴定了编码推定的β-半乳糖苷酶的十三个基因，该基因具SEQ ID NO:41、43、46、49、52、55、58、61、64、67、70、73和76中给出的核苷酸序列。
β-半乳糖苷酶测定
可以使用4-硝基苯基β-D-半乳吡喃糖苷(可从Megazyme国际公司(MegazymeInternational)，布雷，威克洛郡，爱尔兰(Bray,Co.Wicklow,Ireland)获得)如下确定β-半乳糖苷酶活性。
使用100mM MES(西格玛公司)缓冲液pH 7.0±0.05以2倍稀释酶并且然后添加4-硝基苯基β-D-半乳吡喃糖苷(1mg/ml于100mM MES缓冲液pH 7.0±0.05)至含有酶的溶液中。各自的半乳糖苷酶活性在缓冲液中通过测量释放的pNP(对硝基笨基)在室温下(通常为23℃)在405nm时的吸光度5钟作为时间的函数直接进行跟踪。酶的浓度的1mg/mL是一个好的起始点；然而其取决于不同的酶及其比活性。
使用1-5分钟的时间窗口和0-2分钟的吸光度窗口，活性被计算为吸光度与时间(单位：mOD/min)的曲线的斜率。然后，通过将酶的活性除以酶的浓度(单位：(mOD/min)/(mg/ml))，可以将酶的活性转化为比活性。
半乳聚糖酶测定
半乳聚糖酶活性可以使用还原末端比色法测定。将10％大豆粉底物(由研磨至0.5mm粒径的大豆粉制备而成)用固体分配器填充到96孔格式的板中。测定了大豆粉添加前后的重量，并在平板上均匀分布的情况下估计了每孔的底物量。
将酶在100mM活性缓冲液中(100mM乙酸盐、100mM MES、100mM甘氨酸于0.01％Triton X100、1mM CaCl2，pH 6.5)稀释至0.6ppm(溶液中的最终酶浓度)，并在40℃摇动样本持续2小时。将样本在3000xg离心5分钟和转移每个样本的75μl(上清液)至一个新的PCR-板。添加75μl活性缓冲液至每个样品，然后添加75μl的停止溶液(15mg/ml PAHBAH(SigmaH-9882)于Ka-Na-酒石酸/NaOH溶液中，pH>10)的溶液。将溶液在95℃下混合10分钟，然后在10℃下混合1分钟，并将样品被转移到一个新的96MTP并在405nm处测量吸光度。
半乳糖SBM测定
简介
采用分光光度法对富含半乳糖的底物；大豆粉进行水解后，测定了半乳糖单糖在溶液中的浓度。
总结，一种或多种酶在10w/v％大豆粉浆液pH 6.5±0.05在40℃±2℃下孵育2小时。然后基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名K-RAFGA)在测定中对上清液进行分析。首先，上清液中的α-D-半乳糖转化至与β-D-半乳糖，使用半乳糖变旋酶。然后β-D-半乳糖在β-半乳糖脱氢酶存在下被NAD+氧化至D-半乳糖酸。反应中形成的NADH含量与上清液中D-半乳糖含量呈化学计量关系。然后用340nm吸光度的增加来测量NADH浓度。
大豆粉浆液
由大豆粉碾磨至0.5mm粒径和0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05制备10w/v％大豆粉浆料。
将0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05加热至温度约40℃，同时搅拌。将预热的缓冲液转移至大豆粉中。搅拌所得的浆液，同时加热(此时不需监测温度-加热仅用于保证搅拌浆液的同时温度不会降低太多)。然后用预湿的大口径吸管将浆液转移至在其中孵育的容器中。从混合物的大约中心点吸取浆液。从混合浆液到转移到最后一个孵育容器的时间最多是15分钟。调整搅拌速度至粒子在浆液中均匀分布。
酶的稀释
将酶用超纯水稀释至所希望的浓度。酶被稀释到的浓度是基于每mL(mg EP/mL)的mg酶蛋白中的酶的前浓度和每个孵育容器中干物质(大豆粉)的质量(kg)。
D-(+)-半乳糖标准品
由D-(+)-半乳糖和超纯水制备标准曲线。通过将D-(+)-半乳糖溶解于超纯水中最终达到250mg半乳糖/mL的浓度，制备D-(+)-半乳糖原液。将原液稀释两倍，以获得浓度为250、125、62.5、31.25、15.625和7.813mg半乳糖/mL的六种标准品。
大豆粉上α-半乳糖苷酶的孵育
将含有10w/v％大豆粉浆料的孵育容器加热至一个稳定的温度40℃±2℃，同时搅拌。当达到稳定温度后，向孵育容器中添加六个D-(+)-半乳糖标准品，使孵育容器内的浓度为5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.157mg半乳糖每mL孵育体积。一式两份地孵育每个标准品。
然后将稀释的酶按达到所需浓度所需的体积分别添加到各自的孵育容器中(以mgEP/kg大豆粉)。一式三份地孵育每个酶处理。
此外，包括两次三个孵育容器不含标准品或酶处理作为空白处理以获得大豆粉浆中液基线半乳糖浓度。
孵育容器在40℃±2℃孵育2小时，同时搅拌。孵育后在5℃下在1500g离心15分钟。
半乳糖浓度的确定
然后基于来自Megazyme公司的棉子糖/半乳糖试剂盒(产品名K-RAFGA)在测定中对离心的孵育容器中的上清液进行分析。测定中使用来自于K-RAFGA试剂盒的三种试剂：测定缓冲液(在试剂盒中瓶1中提供和准备)、β-NAD试剂(在试剂盒中瓶2中提供，在使用前如在试剂盒中描述的)和GalDH+GalM溶液(在试剂盒中瓶3中提供，在使用前在超纯水中1:1稀释)。下面描述的所有步骤都是使用Eppendorf 5075自动吸液系统进行的。
首先，将来自离心的孵育容器的上清液在0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05中稀释10倍(1份上清液加9份0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液，pH 6.5±0.05)。
然后将每个稀释的上清液的69μL转移到一个新的容器中并添加34μL超纯水至稀释的上清液(从现在开始称为测定样品)。然后添加69μL测定缓冲液至测定样品中，随后稀释于687μL超纯水中。将34μLβ-NAD试剂添加到测定样品中，随后添加14μL GalDH+GalM溶液并和剧烈混合。
然后转移每个测定样品的262μL到96孔微量滴定板。在340nm在40℃±2℃下持续时间20分钟或直到每个孔的吸光度已经达到稳定水平测量96孔微量滴定板每个孔的吸光度。当达到稳定吸光度时，这种稳定吸光度在以后的计算中会用到。
半乳糖浓度的计算
来自孵育容器中半乳糖标准品的测定样品的吸光度被用作标准曲线(6种标准品，5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.157mg半乳糖每mL孵育体积，n＝2每标准品)。用excel计算半乳糖标准曲线方程，其中y为OD340，并且x为每mL孵育体积mg半乳糖中半乳糖浓度：
每个样品每mL孵育体积mg半乳糖中的半乳糖浓度由下式计算：
然后，以干物质为基础计算半乳糖浓度(每kg大豆粉中g半乳糖)，并在下面的实例中报告：
实例1：来自柯恩氏菌属物种-60555、Cohnella xylanilytica、Paenibacillustundra、巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)、类芽孢杆菌属物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)、类芽孢杆菌属物种-18179、皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)、Paenibacillus xylanexedens和Cohnellalaeviribosi(SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)的GH53半乳聚糖酶的克隆
通过PCR扩增编码半乳聚糖酶的基因，并将其与调节元件、亲和纯化标签和同源区融合以重组到枯草芽孢杆菌基因组中。线性整合构建体是SOE-PCR融合产物(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)，Engineering hybrid geneswithout the use of restriction enzymes,gene splicing by overlap extension[不使用限制酶，通过重叠延伸的基因剪接的工程化杂种基因]Gene[基因]77:61-68)，该融合产物由两个枯草芽孢杆菌染色体区域之间的基因连同强启动子与氯霉素抗性标记的融合制备。SOE PCR方法也描述于专利申请WO 2003095658中。
在三联启动子系统(如WO 99/43835中所述)的控制下表达该基因，该启动子系统由包括稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。
用克劳氏芽孢杆菌分泌信号(编码以下氨基酸序列：MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA，SEQ ID NO:84)代替天然的分泌信号来表达该基因。此外表达构建体导致自然成熟蛋白上氨基末端聚组氨酸纯化标签的添加，其允许酶通过固定化金属离子亲和层析纯化。
该SOE-PCR产物被转化进枯草芽孢杆菌中并且在染色体上通过同源重组将其整合到果胶裂解酶位点中。随后，选择一个包含对应的半乳聚糖酶表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶包含100ml基于淀粉丰富的培养基。在30℃至37℃下的3-5天培养时间后，通过离心收获包含酶的上清液并通过固定化的金属亲和层析对这些酶进行纯化。
实例2：来自柯恩氏菌属物种-60555、Cohnella xylanilytica、Paenibacillustundra、巴西诺类芽孢杆菌(Paenibacillus barcinonensis)、类芽孢杆菌属物种-62603、解木聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillus xylanilyticus)、类芽孢杆菌属物种-18179、皮尔瑞俄类芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)、Paenibacillus xylanexedens和Cohnellalaeviribosi(SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)的GH53半乳聚糖酶的纯化
将来自实例1的上清液的pH调节至pH 8，通过0.2μM滤器进行过滤，并且然后施加于5ml HisTrapTM excel柱上(通用电气医疗集团生命科学部(GE Healthcare LifeSciences)，匹兹堡(Pittsburgh)，美国)。在加载之前，该柱已经在5个柱体积(CV)的50mMTris/HCl(pH 8)中平衡好。为了去除未结合的材料，将该柱用8CV的50mM Tris/HCl(pH 8)进行洗涤，靶标的洗脱是用50mM HEPES(pH 7)+10mM咪唑获得。将洗脱的蛋白在HiPrepTM26/10脱盐柱(通用电气医疗集团生命科学部(GE Healthcare Life Sciences)，匹兹堡(Pittsburgh)，美国)上进行脱盐，将该脱盐柱使用3CV的50mM HEPES(pH 7)+100mM NaCl进行平衡。也将此缓冲液用于靶标的洗脱，并且流速是10ml/min。选择相关部分，并且基于色谱图和SDS-PAGE分析进行合并。
实例3：来自类芽孢杆菌属物种-18026(SEQ ID NO:42)的GH42β-半乳糖苷酶的克隆
通过PCR扩增编码β-半乳糖苷酶的基因，并将其与调节元件、亲和纯化标签和同源区融合以重组到枯草芽孢杆菌基因组中。线性整合构建体是SOE-PCR融合产物(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)，Engineering hybrid geneswithout the use of restriction enzymes,gene splicing by overlap extension[不使用限制酶，通过重叠延伸的基因剪接的工程化杂种基因]Gene[基因]77:61-68)，该融合产物由两个枯草芽孢杆菌染色体区域之间的基因连同强启动子与氯霉素抗性标记的融合制备。SOE PCR方法也描述于专利申请WO 2003095658中。
在三联启动子系统(如WO 99/43835中所述)的控制下表达该基因，该启动子系统由包括稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。
该SOE-PCR产物被转化进枯草芽孢杆菌中并且在染色体上通过同源重组将其整合到果胶裂解酶位点中。随后，选择一个包含β-半乳糖苷酶表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶包含100ml基于淀粉丰富的培养基。在30℃至37℃下的3-5天培养时间后，通过离心收获包含酶的上清液并通过固定化的金属亲和层析对这些酶进行纯化。
实例4：来自类芽孢杆菌属物种-18026(SEQ ID NO:42)的GH42β-半乳糖苷酶的纯化
向滤液中添加1.2M硫酸铵。在0.2μm PES过滤器(Nalge Nunc国际集团，Nalgene实验室耗材目录号595-4520)上过滤后，将滤液装载在用1.2M硫酸铵在25mM HEPES(pH 7.5)中预平衡的Phenyl SepharoseTM 6快流柱(高载量)(通用电气医疗集团(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西州(NJ)，美国)中，并且用不具有硫酸铵的25mM HEPES(pH7.5)洗脱结合的蛋白质。将这些部分合并并且将其施加至在12.5mM HEPES(pH 7.8)中预平衡的SephadexTM G-25(中等)(通用电气医疗集团(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西州(NJ)，美国)柱上，并且用相同缓冲液洗脱(等度)。将这些部分施加到在12.5mM HEPES(pH 7.8)中预平衡的SOURCETM 15Q(通用电气医疗集团(GEHealthcare)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西州(NJ)，美国)柱上，并且用从0-1000mM氯化钠的线性梯度、对结合蛋白进行洗脱。
实例5：来自短小芽孢杆菌、Bacillus nealsonii、Burkholderia sediminicola、嗜碱芽孢杆菌、芽孢杆菌物种-11182、芽孢杆菌物种-62759、类芽孢杆菌属物种-18054、类芽孢杆菌属物种-62047、类芽孢杆菌属物种-62603、Paenibacillus woosongensis、类芽孢杆菌属物种-62253、类芽孢杆菌属物种-62758(SEQ ID NO:45、48、51、54、57、60、63、66、69、72、75和78)的GH42β-半乳糖苷酶的克隆
通过PCR扩增编码β-半乳糖苷酶的基因，并将其与调节元件、亲和纯化标签和同源区融合以重组到枯草芽孢杆菌基因组中。线性整合构建体是SOE-PCR融合产物(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)，Engineering hybrid geneswithout the use of restriction enzymes,gene splicing by overlap extension[不使用限制酶，通过重叠延伸的基因剪接的工程化杂种基因]Gene[基因]77:61-68)，该融合产物由两个枯草芽孢杆菌染色体区域之间的基因连同强启动子与氯霉素抗性标记的融合制备。SOE PCR方法也描述于专利申请WO 2003095658中。
在三联启动子系统(如WO 99/43835中所述)的控制下表达该基因，该启动子系统由包括稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。
此外表达构建体导致自然成熟蛋白上氨基末端聚组氨酸纯化标签的添加，其允许酶通过固定化金属离子亲和层析纯化。
该SOE-PCR产物被转化进枯草芽孢杆菌中并且在染色体上通过同源重组将其整合到果胶裂解酶位点中。随后，选择一个包含对应的β-半乳糖苷酶表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶包含100ml基于淀粉丰富的培养基。在30℃至37℃下的3-5天培养时间后，通过离心收获包含酶的上清液并通过固定化的金属亲和层析对这些酶进行纯化。
实例6：来自短小芽孢杆菌、Bacillus nealsonii、Burkholderia sediminicola、嗜碱芽孢杆菌、芽孢杆菌物种-11182、芽孢杆菌物种-62759、类芽孢杆菌属物种-18054、类芽孢杆菌属物种-62047、类芽孢杆菌属物种-62603、Paenibacillus woosongensis、类芽孢杆菌属物种-62253、类芽孢杆菌属物种-62758(SEQ ID NO:45、48、51、54、57、60、63、66、69、72、75和78)的GH42β-半乳糖苷酶的纯化
如实例2所述纯化GH42β-半乳糖苷酶。
实例7：使用GH53半乳聚糖酶水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定使用半乳聚糖酶(SEQ ID NO:79和80)从大豆粉释放的半乳糖。结果呈现于下表3中。
表3：使用已知的半乳聚糖酶从大豆粉释放半乳糖
结果显示单独使用GH53半乳聚糖酶从大豆粉中不释放显著量的半乳糖。
实例8：使用已知的GH53半乳聚糖酶与GH42β-半乳糖苷酶的组合水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定使用半乳聚糖酶(SEQ ID NO:79或80)和β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42、45、48或51)从大豆粉释放的半乳糖。结果呈现于下表4、5和6中。
表4：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:80)与GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)
的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
表5：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:79)与GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)
的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
表6：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ
ID
NO:79)与GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:45、
48或51)的组合从大豆粉释放半乳糖
ABC：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的Tukey HSD比较平均值。
结果证实两种GH53半乳聚糖酶与GH42β-半乳糖苷酶一起比单独使用半乳聚糖酶，可从大豆粉种释放显著更高量的半乳糖(来自表3)。
实例9：使用GH53半乳聚糖酶与八种GH42β-半乳糖苷酶的组合水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定使用半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)和八种β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42、57、60、63、66、69、72和75)从大豆粉释放的半乳糖。结果呈现于下表7中。
表7：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与八种GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
42、57、60、63、66、69、72和75)的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
结果证实测试的所有的GH42β-半乳糖苷酶与GH53半乳聚糖酶组合比单独使用半乳聚糖酶，可从大豆粉种释放显著更高量的半乳糖(来自表3)。
实例10：使用GH53半乳聚糖酶与六种GH42β-半乳糖苷酶的组合水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定使用半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)和六种β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42、45、48、51、54和78)从大豆粉释放的半乳糖。结果呈现于下表8、9和10中。
表8：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与三种GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
42、48和54)的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
表9：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与三种GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:
42、45和51)的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
表10：使用GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与三种GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID
NO:
42和78)的组合从大豆粉释放半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
结果证实测试的所有的GH42β-半乳糖苷酶与GH53半乳聚糖酶组合比单独使用半乳聚糖酶，可从大豆粉种释放显著更高量的半乳糖(来自表3)。
实例11：使用GH42β-半乳糖苷酶与十种GH53半乳聚糖酶的组合水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定使用β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)和十种半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36和40)从大豆粉释放的半乳糖。结果呈现于下表11、12和13中。
表11：来自使用β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)和十种半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、
8、12和16)的大豆粉的半乳糖释放
ABC：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的Tukey HSD比较平均值。
表12：来自使用β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)和十种半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、
20、24和28)的大豆粉的半乳糖释放
ABCD：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的Tukey HSD比较平均值。
表13：来自使用β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)和十种半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、
32、36和40)的大豆粉的半乳糖释放
ABCD：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的Tukey HSD比较平均值。
结果证实测试的所有的GH53半乳聚糖酶与GH42β-半乳糖苷酶组合比单独使用半乳聚糖酶，可从大豆粉种释放显著更高量的半乳糖(来自表3)。
实例12：单独使用GH53半乳聚糖酶、单独使用GH42β-半乳糖苷酶或GH53半乳聚糖酶与GH42β-半乳糖苷酶组合使用水解大豆粉(SBM)
使用半乳糖SBM测定确定单独使用三种不同的GH42β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42、51和78)或单独使用三种不同的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4、28和40)从大豆粉中释放的半乳糖。也测试了使用GH42β-半乳糖苷酶之一与GH53半乳聚糖酶之一的三种不同组合以证实酶的组合的协同效应。结果呈现于下表14中。
表14：单独使用GH53半乳聚糖酶、单独使用GH42β-半乳糖苷酶或GH53半乳聚糖酶
与GH42β-半乳糖苷酶组合从大豆粉中释放的半乳糖
AB：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的TukeyHSD比较平均值。
结果证实单独使用GH53半乳聚糖酶或单独使用GH42β-半乳糖苷酶在测试条件下均不释放显著量的半乳糖。然而，测试的GH53半乳聚糖酶与GH42β-半乳糖苷酶的三种组合均从大豆粉中释放显著量的半乳糖，证实了没得组合的协同作用。
实例13：包含半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶的动物饲料和动物饲料添加剂
动物饲料添加剂
将含有0.01g至10g半乳聚糖酶和0.01g至10gβ-半乳糖苷酶半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶(例如SEQ ID NO:3、4、7、8、11、12、15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35、36、39或40的一种或多种和SEQ ID NO:42、44、47、50、53、56、59、62、65、68、71、74或77的一种或多种)的配制品添加至如下预混物中(每公斤预混物)：
动物饲料
这是一个动物饲料的实例(肉鸡饲料)，其包含如上文描述的动物饲料添加剂：
62.55％玉米
33.8％大豆粉(50％粗蛋白)
1.0％大豆油
0.2％DL-蛋氨酸
0.22％DCP(磷酸二钙)
0.76％CaCO3(碳酸钙)
0.32％沙子
0.15％NaCl(氯化钠)
1％的上述预混物
将成分混合，将饲料在所希望的温度下粒化，例如60℃、65℃、75℃、80℃、85℃、90℃或甚至95℃。
液体配制品
半乳聚糖酶和β-半乳糖苷酶(例如SEQ ID NO:3、4、7、8、11、12、15、16、19、20、23、24、27、28、31、32、35、36、39或40的一个或多个和SEQ ID NO:42、44、47、50、53、56、59、62、65、68、71、74或77的一个或多个)的液体配制品含有0.1％至10w/w酶蛋白(两者加在一起)、40％-60％甘油、0.1％至0.5％苯甲酸钠和水。将液体配制品喷涂在上文所述的粒化动物饲料(在这种情况下，动物饲料添加剂不包括本发明的β-半乳糖苷酶或半乳聚糖酶)。
实例14：使用现有技术LacA和GalA或ganB和ganA的组合水解大豆粉(SBM)
Shipkowski等人在Applied and Environmental Microbiology[应用与环境微生物学],2006,72(12),7730中描述了来自于枯草芽孢杆菌(菌株168)GH53半乳聚糖酶GalA(Swissprot：O07013，SEQ ID NO:86)和GH42β-半乳糖苷酶LacA(Swissprot：O07012，SEQ IDNO:85)。
Tabachnikov等人在Febs Journal[FEBS杂志],2013,280(3),950 7730中描述了来自于嗜热脂肪土芽孢杆菌的GH53半乳聚糖酶ganA(Swissprot：F8TRX1，SEQ ID NO:88)和GH42β-半乳糖苷酶ganB(Swissprot：F8TRX0，SEQ ID NO:87)。
使用半乳糖SBM使用现有技术GalA+LacA的组合和现有技术ganA+ganB的组合测定从大豆粉中释放的半乳糖。作为阴性对照，运行一个空白样品。作为阳性对照，使用具有SEQID NO:42的GH42β-半乳糖苷酶和具有SEQ ID NO:4的GH53半乳糖苷酶。结果呈现于下表15中。
表15：使用现有技术β-半乳糖苷酶和半乳聚糖酶从大豆粉中释放半乳糖
ABC：在不共享大写字母的列中的值显著不同(p<0.05)。通过SAS JMP 11中的Tukey HSD比较平均值。
结果证实现有技术组合与本发明的GH53半乳聚糖酶(SEQ ID NO:4)与本发明的GH35β-半乳糖苷酶(SEQ ID NO:42)一起相比从大豆粉中释放显著少量的半乳糖。
在此描述和要求保护的发明在范围上不受在此披露的具体方面限制，因为这些方面旨在说明本发明的若干方面。任何等同方面意欲在本发明的范围之内。实际上，除了在此所示和描述的那些之外，对于本领域的技术人员而言本发明的各种修改将从前述的说明书变得显而易见。这样的修改也预期落入所附权利要求书的范围之内。在发生冲突的情况下，以包括定义在内的本披露为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 包含具有半乳聚糖酶活性的多肽
和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物
<130> 14074-WO-PCT
<150> EP16170964.7
<151> 2016-05-24
<160> 88
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 1047
<212> DNA
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1044)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(96)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (97)..(1044)
<400> 1
atg atg ttc aag aga acg gta acg ggc atg atg gcc ttg ctg ctg gtg 48
Met Met Phe Lys Arg Thr Val Thr Gly Met Met Ala Leu Leu Leu Val
-30 -25 -20
ctg gct ctg ttc gtc gcg caa ggt tcg cag ccg cac caa gcc gcc gcg 96
Leu Ala Leu Phe Val Ala Gln Gly Ser Gln Pro His Gln Ala Ala Ala
-15 -10 -5 -1
gcg ccg tcg ttc gcc aaa ggg gcg gac atc agc tgg gtg ccg gga atg 144
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
gaa gcc cag ggg tac aag tgg aag gac aag aac ggc gtg cag cgg gac 192
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
att ttg gac att ttg aaa aac gat tat cag atc aac tcc gtg cgc atc 240
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
cgc gtg tgg gtc aac cct tcg agc agc tac acg aac ggg tac ctg aac 288
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
aag gac cgt gcg gcc gcg ctg gcg aag cgg gcc aag gcg gcg ggg atg 336
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
agc gtc atg ctg acg ctc cat tac agc gac agc tgg gcg gac ccc ggc 384
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
caa cag acg aag ccg gcg gca tgg aag agc tac acg ttc cag caa ctg 432
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
atg gac gcc gtg tgg aac tgg aca cgc gac gtc atg acg acg atg cag 480
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
115 120 125
gcg aac ggc gtg acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac 528
Ala Asn Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
aac ggc atg ctg tgg gac gac ggc aag gct tcg ctc agc atg aag aat 576
Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn
145 150 155 160
tat gcg tgg ctc gtg aac acg ggc aac aac gcg gtg aag tcg atc agc 624
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
agc tcg acc aag acg atc gtg cac ctg gcc aac ggc tac gac aat tcg 672
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
ctg ttc gtc tgg aac atc gga ggc ttg atc gcc aac gga gcg acg ttc 720
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
gac atc atc ggc atg tcg ctc tat ccg agc gcg tcg gat tgg tcg gcc 768
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
aag gtg acg cag acg atc gcg aac gcg aac gac atg atc tcg cgt tac 816
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
ggc aag ccg atc atg gtg acg gag atc ggc atg gac tac agc cag ccg 864
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
agc gcg gcc aag agc ttc gtg tcg gac atc aag acg aag atc cgc aac 912
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
ctg tcc ggc ggc aag ggg caa ggc gtg ttc tac tgg gag ccc gaa gcg 960
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
acg ccc ggc tac aac ggc ggc tac agc atg ggc gcc tgg caa gcg gac 1008
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
atg aag ccg acg atc gcg ctc gag ggc ttc tgg aac taa 1047
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
<210> 2
<211> 348
<212> PRT
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<400> 2
Met Met Phe Lys Arg Thr Val Thr Gly Met Met Ala Leu Leu Leu Val
-30 -25 -20
Leu Ala Leu Phe Val Ala Gln Gly Ser Gln Pro His Gln Ala Ala Ala
-15 -10 -5 -1
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
<210> 3
<211> 316
<212> PRT
<213> 柯恩氏菌属物种-60555
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 3
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln
115 120 125
Ala Asn Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Ser Gln Pro
245 250 255
Ser Ala Ala Lys Ser Phe Val Ser Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Gln Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Trp Asn
305 310 315
<210> 4
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 4
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser
50 55 60
Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala
65 70 75 80
Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Lys Ser Tyr Thr Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr
115 120 125
Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ala Asn Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ala Lys Val Thr Gln Thr Ile Ala Asn
225 230 235 240
Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Ile Met Val Thr Glu
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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Ser Met Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu
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Gly Phe Trp Asn
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<213> Cohnella xylanilytica
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 信号肽
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (88)..(1041)
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atg ttg cgc aaa gcg gtt gcg gtg ttc atc acc ttg gtg ttg gga ctg 48
Met Leu Arg Lys Ala Val Ala Val Phe Ile Thr Leu Val Leu Gly Leu
-25 -20 -15
act cta cta tcg gcg cag gga gga cga ccg cag gaa gcg gcg gcg gct 96
Thr Leu Leu Ser Ala Gln Gly Gly Arg Pro Gln Glu Ala Ala Ala Ala
-10 -5 -1 1
ccg tcg ttc gct aag gga gcg gac atc agc tgg gtg ccg gga atg gaa 144
Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
gcg caa ggg tac agg tgg aag gac aag aac ggc gtg cag cgg gac atc 192
Ala Gln Gly Tyr Arg Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
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ctg gac att ctc aag aac gat tac cag atc aac tcc gtc cgc att cgg 240
Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
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gta tgg gtc aat cct tcg agc agc tat acg aac ggc tac ctg aac aag 288
Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
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gac cgg gcg gcc gcg ctc gcg aag cgg gcg aag gcg gcg ggg ctc agc 336
Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser
70 75 80
gtc atg ctg acg ctg cat tac agc gac agc tgg gcc gac ccc ggg aag 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag acg aag ccg gcg gcg tgg gcc ggg tac aac ttc cag cag ctg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Gly Tyr Asn Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110 115
gac gcg gtg tgg aac tgg acg cgc gag gtc atg acg acg atg cag gcc 480
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Glu Val Met Thr Thr Met Gln Ala
120 125 130
agc ggg gtg acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac aac 528
Ser Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
135 140 145
ggc atg ctg tgg gac gac ggg aag gcc tcg ctg agc atg aag aat tac 576
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr
150 155 160
gcc tgg ctc gtc aac acg ggc aac aac gcg gtc aag tcg atc agc agc 624
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
ggg acg aaa acg atc gtg cat ctc gcc aac ggg tac gac aat tcg ttg 672
Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190 195
ttc gtc tgg aac atc ggc ggc ctg atc gcg aac ggc gcc acg ttc gac 720
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp
200 205 210
att atc ggc atg tcg ctg tat ccg agc gcg tcc gac tgg tcc tcg aag 768
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ser Lys
215 220 225
gtg acg cag acg atc tcc aac gcg aac gat atg atc tcc cgg tac ggc 816
Val Thr Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
aag ccg atc atg atc acg gag atc ggc atg gac tac aac cag ccg tcg 864
Lys Pro Ile Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser
245 250 255
gcg gcc aag agc ttc gtc gcg gat atc aag acg aag atc cgc agc ctg 912
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Ser Leu
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tcc ggc ggc cga ggg ctc ggc gtc ttc tac tgg gag ccg gag gcg acc 960
Ser Gly Gly Arg Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
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ccg ggt tat aac gga ggc tat aac aag gga gcc tgg cag gca gac atg 1008
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met
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aag ccg acg atc gct ctc gaa ggt ttt ctg aac taa 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 6
<211> 347
<212> PRT
<213> Cohnella xylanilytica
<400> 6
Met Leu Arg Lys Ala Val Ala Val Phe Ile Thr Leu Val Leu Gly Leu
-25 -20 -15
Thr Leu Leu Ser Ala Gln Gly Gly Arg Pro Gln Glu Ala Ala Ala Ala
-10 -5 -1 1
Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
Ala Gln Gly Tyr Arg Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
20 25 30 35
Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
40 45 50
Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
55 60 65
Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser
70 75 80
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Gly Tyr Asn Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110 115
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Glu Val Met Thr Thr Met Gln Ala
120 125 130
Ser Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
135 140 145
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr
150 155 160
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190 195
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Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ser Lys
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Val Thr Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
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Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Ser Leu
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<211> 318
<212> PRT
<213> Cohnella xylanilytica
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(318)
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Ala Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Arg Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln
20 25 30
Arg Asp Ile Leu Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val
35 40 45
Arg Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr
50 55 60
Leu Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala
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Gly Leu Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp
85 90 95
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Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Glu Val Met Thr Thr
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Met Gln Ala Ser Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu
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Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met
145 150 155 160
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
165 170 175
Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp
180 185 190
Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala
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Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp
210 215 220
Ser Ser Lys Val Thr Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Arg Ser Leu Ser Gly Gly Arg Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln
290 295 300
Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
305 310 315
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<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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<400> 8
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35 40 45
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50 55 60
Ser Ser Ser Tyr Thr Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala
65 70 75 80
Leu Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Ser Val Met Leu Thr Leu
85 90 95
His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Thr Lys Pro Ala
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Asp
145 150 155 160
Asp Gly Lys Ala Ser Leu Ser Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn
165 170 175
Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile
180 185 190
Val His Leu Ala Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile
195 200 205
Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser
210 215 220
Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Ser Ser Lys Val Thr Gln Thr Ile
225 230 235 240
Ser Asn Ala Asn Asp Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Ile Met Ile
245 250 255
Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe
260 265 270
Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Ser Leu Ser Gly Gly Arg Gly
275 280 285
Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly
290 295 300
Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala
305 310 315 320
Leu Glu Gly Phe Leu Asn
325
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<211> 1050
<212> DNA
<213> Paenibacillus tundrae
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
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atg ttc aaa aat gta agg ggt ttc aag aca tcc atc atg ttg gct ttt 48
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Thr Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
gtt ttg tta ttc acc tcc atc atg ttg ccc gca ggt cag cat gcc agc 96
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
gca gca cca agt ttc gcc aaa gga gcc gac atc agc tgg gtt ccc gga 144
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gcc caa ggt tac aaa tgg aaa gat aaa aac ggg gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
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gac atc att gat att ttg aaa aag gac tat caa att aac tcc gtt cgc 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
att cgg gtc ttt gtt aat cct tcg aat gat tat ggg aac ggt tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aat aag gaa cgt gcg gct aca ctc gca caa cgt gct aaa aat gcc ggc 336
Asn Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gta atg ctt acc ctg cat tac agc gac tct tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggt caa cag acc aaa cca gct gcc tgg aaa aac tat acc ttc caa cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctc atg gac gca gtg tgg aat cac aca cgt gat gtc atg act gcg atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
caa agc aaa ggc gtt acc ccg gac tgg gta cag atc ggg aat gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agt aac ggc atg tta tgg gaa gat ggt aaa gca tcc acc aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aac tat gcg tgg ctg gtg aac aca ggc cat aat gca gtg aaa tcc ctg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
agc agt ggc acc aaa acc att gtg cac ctg gca ggt ggg gat gat aac 672
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctc tat gta tgg aat att ggt ggt ttg atc aat aat gga gct aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttt gac atg att gcc atg tcc ctc tac cct tcg gct tcc ggc tgg aac 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtg acg aat acg gta aac aat gcc aag gat atg atc aac cgt 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
tat ggc aaa gag atc atc atc tcc gaa att ggc atg gat aat aac cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
gct gca gca ggt aaa agt ttt gtt gcg gcg atg aaa aac caa atc cgc 912
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
aat ctg ccg aat ggc aaa gga aaa ggc gta ttc tac tgg gag cct cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca ggt tat aac agt ggc tac ggc aaa ggc gct tgg caa tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg ccg aca gtt gtc atg gaa gga ttt att gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 10
<211> 349
<212> PRT
<213> Paenibacillus tundrae
<400> 10
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Thr Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 11
<211> 316
<212> PRT
<213> Paenibacillus tundrae
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 11
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
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50 55 60
Lys Glu Arg Ala Ala Thr Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
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130 135 140
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Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
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Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala
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Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg Asn
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Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
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Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
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165 170 175
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180 185 190
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Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
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<213> 巴西诺类芽孢杆菌（Paenibacillus barcinonensis）
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<220>
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Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Val Lys Thr Ser Val Leu Leu
-35 -30 -25 -20
gca ttg gtt ttg tta ttt act tct att ctg ctg cct gca ggc cag cac 96
Ala Leu Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Leu Leu Pro Ala Gly Gln His
-15 -10 -5
gcc agc gcc gca ccg agc ttt gcc aag gga gct gac atc agc tgg gtt 144
Ala Ser Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val
-1 1 5 10
ccc ggc atg gag gct caa ggg tac aaa tgg aag gat aaa aac ggg gta 192
Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val
15 20 25
caa cgt gat att att gat att ttg aaa aag gat tac caa att aac tcc 240
Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser
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gtt cgt att cgg gta ttc gtt aat cca tcg aac gat tat ggt aac ggt 288
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gca ggc atg agt gtc atg ctc aca ctt cac tac agc gat tcc tgg gca 384
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gac cca ggc aaa caa agc aaa cca gcg gca tgg aaa aat tac tcc ttc 432
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caa cag ctc atg gac gct gtc tgg aat tat aca cgt gaa gtg atg aca 480
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gct atg caa aac aaa ggg gtt acg ccg gac tgg gta cag atc ggt aac 528
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130 135 140
gaa aca agc aac ggc atg tta tgg gat gac ggg aaa gcc tct gtt aac 576
Glu Thr Ser Asn Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn
145 150 155
atg aaa aac tat gca tgg ctc gtg aac aca gga cat aat gcg gta aaa 624
Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys
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tcc att agc agc ggc acc aaa acg atc gtt cat ctg gcc ggt ggc gac 672
Ser Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp
175 180 185
gac aat gcg ctg tat gtc tgg aat att ggc ggc ctg atc aac aac ggc 720
Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly
190 195 200 205
gct aac ttt gac atg atc gct atg tcg ctt tac cct tcc gct tcc ggc 768
Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly
210 215 220
tgg aat act gcg gtg acc aac acg gtc aac aat gca aag gat atg atc 816
Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile
225 230 235
aat cgg tac ggc aaa gag atc atg atc tcc gaa att ggc atg gac aac 864
Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn
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aat cag gcg gcg gca ggc aaa agc ttc gta gct gcg atg aaa aat caa 912
Asn Gln Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln
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Ile Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu
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ccg cag gct aca cct ggc tat aac ggt gga tac ggt aaa ggc gct tgg 1008
Pro Gln Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp
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Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
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<212> PRT
<213> 巴西诺类芽孢杆菌（Paenibacillus barcinonensis）
<400> 14
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Lys Val Lys Thr Ser Val Leu Leu
-35 -30 -25 -20
Ala Leu Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Leu Leu Pro Ala Gly Gln His
-15 -10 -5
Ala Ser Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val
-1 1 5 10
Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val
15 20 25
Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser
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Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly
50 55 60
Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn
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Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn Tyr Thr Arg Glu Val Met Thr
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Ala Met Gln Asn Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn
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145 150 155
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160 165 170
Ser Ile Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp
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Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly
190 195 200 205
Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly
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Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn
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Asn Gln Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln
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Ile Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu
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290 295 300
Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 15
<211> 316
<212> PRT
<213> 巴西诺类芽孢杆菌（Paenibacillus barcinonensis）
<400> 15
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Lys Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
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Met Asp Ala Val Trp Asn Tyr Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
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Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
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<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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<400> 16
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala
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195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Gly Phe Ile Asp
<210> 17
<211> 1044
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌物种-62603
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 信号肽
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<220>
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<222> (94)..(1041)
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Met Lys Arg Arg Phe Tyr Ser Leu Thr Leu Val Val Ala Leu Leu Met
-30 -25 -20
act att ttt gga gtg aat ggg gga tct gtg ccg cag gtc agc gca gct 96
Thr Ile Phe Gly Val Asn Gly Gly Ser Val Pro Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
cct gca ttc gcg aaa ggt gcg gac att agc tgg gta gtc ggc atg gag 144
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu
5 10 15
gcg caa ggg tat acg tgg aag gac aaa aac ggc gta act agg gac att 192
Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile
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att caa att ttg aag cag gat tac caa atc aac tcc gta cgt att cga 240
Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
gta ttc gtc aat cct tct tcg aac tat ggc aac ggg tat atg aat aaa 288
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys
50 55 60 65
gat cgc gct gca acc ttg gcg aag cgg gcg aag gat gct ggg atg agc 336
Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser
70 75 80
gtc atg ctt aca ttg cat tac agc gat tcg tgg gcg gac ccc gga aaa 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag aca aag cca gcg gct tgg gca agc tat tcg ttc cag cag ctg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110
gat gca gtt tat aat cat acg cgt gag gta atg aca gct atg caa agc 480
Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser
115 120 125
aaa ggt gtc aca ccg gat tgg gtg caa atc ggc aac gaa acg aac gat 528
Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp
130 135 140 145
ggc atg ctc tgg aat gac ggg aaa gct tcc tta aac atg caa aac tac 576
Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr
150 155 160
gct tgg ctg atc aac act ggc aac aat gcg gtc aag tcc att agt tca 624
Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
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180 185 190
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Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr Lys
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gtt acg caa acg gtc agc aac tcc aac aat atg ata tcg cgt tat ggc 816
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230 235 240
aag ccg gtt atg att acc gaa att ggt atg gat tat aac cag cct gcc 864
Lys Pro Val Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ala
245 250 255
gct gcc aaa agc ttt gtc gct gat ata aag aca aaa ata cgt aat att 912
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile
260 265 270
gca ggt gga aaa ggg ctt ggc gtg ttt tat tgg gaa ccg gaa gcg acc 960
Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
cct ggt tat aac gga ggt tat aat aag gga gct tgg cag gcg gac ggc 1008
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly
290 295 300 305
aaa cca aca att gcg ctt gac ggc ttc ttg aat taa 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
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<210> 18
<211> 347
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌物种-62603
<400> 18
Met Lys Arg Arg Phe Tyr Ser Leu Thr Leu Val Val Ala Leu Leu Met
-30 -25 -20
Thr Ile Phe Gly Val Asn Gly Gly Ser Val Pro Gln Val Ser Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu
5 10 15
Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile
20 25 30
Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys
50 55 60 65
Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser
70 75 80
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met
100 105 110
Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser
115 120 125
Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp
130 135 140 145
Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr
150 155 160
Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Ala Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp
195 200 205
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr Lys
210 215 220 225
Val Thr Gln Thr Val Ser Asn Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
Lys Pro Val Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ala
245 250 255
Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile
260 265 270
Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly
290 295 300 305
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 19
<211> 316
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌物种-62603
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 19
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Lys Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Tyr Asn His Thr Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn
130 135 140
Asp Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Ala Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr
210 215 220
Lys Val Thr Gln Thr Val Ser Asn Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Pro Val Met Ile Thr Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro
245 250 255
Ala Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn
260 265 270
Ile Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp
290 295 300
Gly Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp Gly Phe Leu Asn
305 310 315
<210> 20
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 20
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Val Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Thr Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Thr Arg Asp Ile Ile Gln Ile Leu Lys Gln Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Ser
50 55 60
Asn Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Asp Arg Ala Ala Thr Leu Ala
65 70 75 80
Lys Arg Ala Lys Asp Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Ala Ser Tyr Ser Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Tyr Asn His Thr
115 120 125
Arg Glu Val Met Thr Ala Met Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asp Gly Met Leu Trp Asn Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Leu Asn Met Gln Asn Tyr Ala Trp Leu Ile Asn Thr Gly
165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ala Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ala Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Thr Ser Ala Asp Trp Ser Thr Lys Val Thr Gln Thr Val Ser Asn
225 230 235 240
Ser Asn Asn Met Ile Ser Arg Tyr Gly Lys Pro Val Met Ile Thr Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ala Ala Ala Lys Ser Phe Val Ala
260 265 270
Asp Ile Lys Thr Lys Ile Arg Asn Ile Ala Gly Gly Lys Gly Leu Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
290 295 300
Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ile Ala Leu Asp
305 310 315 320
Gly Phe Leu Asn
<210> 21
<211> 1050
<212> DNA
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌（Paenibacillus xylanilyticus）
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
<400> 21
atg ctt aaa ttt gta agg ggt tac aaa aca tcg att gct ctt gtt ctt 48
Met Leu Lys Phe Val Arg Gly Tyr Lys Thr Ser Ile Ala Leu Val Leu
-30 -25 -20
gtg ttg ttg ttc acc tcc att atg ctg cct gtg ggt cag cat gtc agc 96
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Val Gly Gln His Val Ser
-15 -10 -5
gca gca ccc agc ttc gcc aag ggg gct gat ata agc tgg gta cca ggc 144
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gcg caa ggg tac aaa tgg aaa gac aaa aat ggt gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
gac att att gat att ttg aaa aac gat tat cag atc aac tcg gtt cgt 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
atc cgg gtg ttt gtt aat cct tct aat gat tac ggc aac ggg tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aat aag gat cgt gtc gct gct ttg gca cag cgg gcc aaa aac gcg ggc 336
Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gtc atg ttg act ctg cac tac agt gat tcc tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggc caa cag acc aaa ccg gca gcc tgg aaa aac tac acc ttc cag cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctg atg gat gcc gtt tgg aat cat aca cgc gat gtg atg acg gcc atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
cag agt aaa ggg gtt acg cct gac tgg gta caa atc ggg aac gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agc aac ggc atg tta tgg gag gac ggt aaa gcg tcc acg aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aat tac gca tgg ctg gtg aac acg ggc cat aat gcc gtc aag tcc atg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met
160 165 170 175
agt aca ggg acc aaa acg att gtc cat ctt gca ggc ggt gac gac aat 672
Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctt tat gta tgg aat atc ggc gga ctg atc aac aac ggt gcc aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttc gat atg att gcc atg tcc ctc tat cct tcg gct tcc ggc tgg aat 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtc acc aat acg gtg aat aat gcc aag gac ttg atc aac cgc 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg
225 230 235
tac ggc aaa gag att atc gtc tca gaa atc ggc atg gac aac aat cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
ccc gca gct ggc aaa agt ttc gtt gct gcg atg aaa aat caa ttc cgc 912
Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg
260 265 270
aac ctg cca aat ggg aaa gga aaa ggc gta ttc tac tgg gag ccg cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca ggt tat aac ggt ggt tac ggc aaa ggc gct tgg cag tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg cca aca gcg gtc atg gaa gga ttt ata gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 22
<211> 349
<212> PRT
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌（Paenibacillus xylanilyticus）
<400> 22
Met Leu Lys Phe Val Arg Gly Tyr Lys Thr Ser Ile Ala Leu Val Leu
-30 -25 -20
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Val Gly Gln His Val Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met
160 165 170 175
Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg
225 230 235
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 23
<211> 316
<212> PRT
<213> 解木聚糖类芽孢杆菌（Paenibacillus xylanilyticus）
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 23
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Ser
130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Met Ser
165 170 175
Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg Tyr
225 230 235 240
Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Pro
245 250 255
Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg Asn
260 265 270
Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
290 295 300
Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 24
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 24
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn
50 55 60
Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn Lys Asp Arg Val Ala Ala Leu Ala
65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
85 90 95
Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp
100 105 110
Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr
115 120 125
Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp
130 135 140
Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly
145 150 155 160
Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly
165 170 175
His Asn Ala Val Lys Ser Met Ser Thr Gly Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn
225 230 235 240
Ala Lys Asp Leu Ile Asn Arg Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Val Ser Glu
245 250 255
Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Pro Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala
260 265 270
Ala Met Lys Asn Gln Phe Arg Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly
275 280 285
Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr
290 295 300
Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Ala Val Met Glu
305 310 315 320
Gly Phe Ile Asp
<210> 25
<211> 1638
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌物种-18179
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1635)
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> 该基因具有可替代的启动密码子gtg，其通常为
Val编码，但当它是第一个密码子时被翻译成Met。
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(87)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (88)..(1635)
<400> 25
gtg ggt aaa tgg gtt aga gct att gct tta gca ggt gta gtt gca ctt 48
Val Gly Lys Trp Val Arg Ala Ile Ala Leu Ala Gly Val Val Ala Leu
-25 -20 -15
ttt aca tct atg atc act cct ctt caa gaa aca aag gct gct gga ggc 96
Phe Thr Ser Met Ile Thr Pro Leu Gln Glu Thr Lys Ala Ala Gly Gly
-10 -5 -1 1
ttc gtt atg ggg gga gac gtt tca atg ctc cat gaa gtt gag cag tta 144
Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu
5 10 15
ggc ggg aag ttt tac gat cag ggc act cca aag gat gct ttg caa att 192
Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile
20 25 30 35
tta agc gca cat ggc atg aat gct gtc cga ttg cgt cta tgg gtt gac 240
Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp
40 45 50
ccg tat gac agt ttc gga aat cct tat ggc ggt gga aca aac gat ctg 288
Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu
55 60 65
gct acg act ata tct ctt gca cag cga gcg aag gca caa ggt atg gag 336
Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu
70 75 80
gtg ctg ctg gat ttt cac ttc agt gat ttc tgg gca gac cca ggg aag 384
Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
cag aac aag cct aaa gct tgg cag agc tta acg tac aac cag ctg ctt 432
Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu
100 105 110 115
act acg gta tat gat tat acg cat agt gta att acg caa atg aaa gcg 480
Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala
120 125 130
gct ggc gtg atg cct gat atg gtt cag gta gga aac gag gca agc agc 528
Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser
135 140 145
ggc atc ctc tgg aat gat ggc aag gtg ggg gga ggc att gat gat ttt 576
Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe
150 155 160
acg aaa ctc gga gaa ctg ttt acc tct gct att aat ggg att aat gcg 624
Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala
165 170 175
gcc ctc agc tct agt gag aac att gag att gtt ctg cat ttg gat cat 672
Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His
180 185 190 195
ggc ggc gac aac aat tta tac act tgg tgg ttc gat aaa att gaa gcg 720
Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala
200 205 210
gag aac gtg gat tac gat att atc ggc ttg acc tac tat ccg ttt tgg 768
Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp
215 220 225
cat gga acg atg gga gaa ttg gcg tat aat ctt aat gcg atc agc agt 816
His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser
230 235 240
cgt tac aat aag gac gta atg att gtg gaa acg tcg tat ggc ttt acg 864
Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr
245 250 255
ctg gat gat ggt gat ggt tta ggc aac tct ttt tac acg gcg gaa gaa 912
Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu
260 265 270 275
agc att ggg ggt tac ccg gct aca gta gaa ggc cag acg gcg tat ttg 960
Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu
280 285 290
cgg gat ttg aag gaa att gtt agg gat gtc cca aac aac cgc ggc cgc 1008
Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg
295 300 305
ggc att ttc tgg tgg gag ccg aca tgg ctg cct gtt gca ggg gct aac 1056
Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn
310 315 320
tgg ggg acg gat gca ggc aag ctg tac aac aat gat act gga cta cta 1104
Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu
325 330 335
tct aat cct tgg gac aat cag acc ttg ttt gat ttt aat gga aat gtg 1152
Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val
340 345 350 355
ttg tct aca gtt tca gta ttt aca caa agt gct cca acc aac ctt gtt 1200
Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val
360 365 370
gct aat cat agc ttt gag gcc gat ggt tgg aca aca aca cca tct agc 1248
Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser
375 380 385
tgg aat cgc tgg gca gcc gat acg gca tcc tat aat gct att aag gtt 1296
Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val
390 395 400
gaa gaa aac ggt att acg ggc agc tat aag ctg acg cat tgg agt gat 1344
Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp
405 410 415
tct gct tat gag gcc tct acg tac cag act gtt tca gga tta agc aat 1392
Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn
420 425 430 435
ggt acc tat act tta tcc gct tgg gtg ctt aac agt ggc gga caa aat 1440
Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn
440 445 450
acg ctg cag ctt tac gct aaa aat tac ggg ggt tca gaa cgg aac gtc 1488
Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val
455 460 465
aat ctt cct gtt agc cca aca aag tgg gta aaa gta aaa att gaa aac 1536
Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn
470 475 480
atc agt gtt aca aat ggt caa atc gaa tta ggc att tat tca gat gcg 1584
Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala
485 490 495
aat gct gat aat tgg atg aac ctc gat aac gtc aaa ctt tat aaa aca 1632
Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr
500 505 510 515
aac tag 1638
Asn
<210> 26
<211> 545
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌物种-18179
<400> 26
Val Gly Lys Trp Val Arg Ala Ile Ala Leu Ala Gly Val Val Ala Leu
-25 -20 -15
Phe Thr Ser Met Ile Thr Pro Leu Gln Glu Thr Lys Ala Ala Gly Gly
-10 -5 -1 1
Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu
5 10 15
Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile
20 25 30 35
Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp
40 45 50
Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu
55 60 65
Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu
70 75 80
Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu
100 105 110 115
Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala
120 125 130
Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser
135 140 145
Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe
150 155 160
Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala
165 170 175
Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His
180 185 190 195
Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala
200 205 210
Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp
215 220 225
His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser
230 235 240
Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr
245 250 255
Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu
260 265 270 275
Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu
280 285 290
Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg
295 300 305
Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn
310 315 320
Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu
325 330 335
Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val
340 345 350 355
Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val
360 365 370
Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser
375 380 385
Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val
390 395 400
Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp
405 410 415
Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn
420 425 430 435
Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn
440 445 450
Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val
455 460 465
Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn
470 475 480
Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala
485 490 495
Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr
500 505 510 515
Asn
<210> 27
<211> 516
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌物种-18179
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(516)
<400> 27
Ala Gly Gly Phe Val Met Gly Gly Asp Val Ser Met Leu His Glu Val
1 5 10 15
Glu Gln Leu Gly Gly Lys Phe Tyr Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala
20 25 30
Leu Gln Ile Leu Ser Ala His Gly Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu
35 40 45
Trp Val Asp Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr
50 55 60
Asn Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ser Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln
65 70 75 80
Gly Met Glu Val Leu Leu Asp Phe His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp
85 90 95
Pro Gly Lys Gln Asn Lys Pro Lys Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn
100 105 110
Gln Leu Leu Thr Thr Val Tyr Asp Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln
115 120 125
Met Lys Ala Ala Gly Val Met Pro Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu
130 135 140
Ala Ser Ser Gly Ile Leu Trp Asn Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile
145 150 155 160
Asp Asp Phe Thr Lys Leu Gly Glu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly
165 170 175
Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ser Ser Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His
180 185 190
Leu Asp His Gly Gly Asp Asn Asn Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys
195 200 205
Ile Glu Ala Glu Asn Val Asp Tyr Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr
210 215 220
Pro Phe Trp His Gly Thr Met Gly Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala
225 230 235 240
Ile Ser Ser Arg Tyr Asn Lys Asp Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr
245 250 255
Gly Phe Thr Leu Asp Asp Gly Asp Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr
260 265 270
Ala Glu Glu Ser Ile Gly Gly Tyr Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr
275 280 285
Ala Tyr Leu Arg Asp Leu Lys Glu Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn
290 295 300
Arg Gly Arg Gly Ile Phe Trp Trp Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala
305 310 315 320
Gly Ala Asn Trp Gly Thr Asp Ala Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr
325 330 335
Gly Leu Leu Ser Asn Pro Trp Asp Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn
340 345 350
Gly Asn Val Leu Ser Thr Val Ser Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr
355 360 365
Asn Leu Val Ala Asn His Ser Phe Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr
370 375 380
Pro Ser Ser Trp Asn Arg Trp Ala Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala
385 390 395 400
Ile Lys Val Glu Glu Asn Gly Ile Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His
405 410 415
Trp Ser Asp Ser Ala Tyr Glu Ala Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly
420 425 430
Leu Ser Asn Gly Thr Tyr Thr Leu Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly
435 440 445
Gly Gln Asn Thr Leu Gln Leu Tyr Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu
450 455 460
Arg Asn Val Asn Leu Pro Val Ser Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys
465 470 475 480
Ile Glu Asn Ile Ser Val Thr Asn Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr
485 490 495
Ser Asp Ala Asn Ala Asp Asn Trp Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu
500 505 510
Tyr Lys Thr Asn
515
<210> 28
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(524)
<400> 28
His His His His His His Pro Arg Ala Gly Gly Phe Val Met Gly Gly
1 5 10 15
Asp Val Ser Met Leu His Glu Val Glu Gln Leu Gly Gly Lys Phe Tyr
20 25 30
Asp Gln Gly Thr Pro Lys Asp Ala Leu Gln Ile Leu Ser Ala His Gly
35 40 45
Met Asn Ala Val Arg Leu Arg Leu Trp Val Asp Pro Tyr Asp Ser Phe
50 55 60
Gly Asn Pro Tyr Gly Gly Gly Thr Asn Asp Leu Ala Thr Thr Ile Ser
65 70 75 80
Leu Ala Gln Arg Ala Lys Ala Gln Gly Met Glu Val Leu Leu Asp Phe
85 90 95
His Phe Ser Asp Phe Trp Ala Asp Pro Gly Lys Gln Asn Lys Pro Lys
100 105 110
Ala Trp Gln Ser Leu Thr Tyr Asn Gln Leu Leu Thr Thr Val Tyr Asp
115 120 125
Tyr Thr His Ser Val Ile Thr Gln Met Lys Ala Ala Gly Val Met Pro
130 135 140
Asp Met Val Gln Val Gly Asn Glu Ala Ser Ser Gly Ile Leu Trp Asn
145 150 155 160
Asp Gly Lys Val Gly Gly Gly Ile Asp Asp Phe Thr Lys Leu Gly Glu
165 170 175
Leu Phe Thr Ser Ala Ile Asn Gly Ile Asn Ala Ala Leu Ser Ser Ser
180 185 190
Glu Asn Ile Glu Ile Val Leu His Leu Asp His Gly Gly Asp Asn Asn
195 200 205
Leu Tyr Thr Trp Trp Phe Asp Lys Ile Glu Ala Glu Asn Val Asp Tyr
210 215 220
Asp Ile Ile Gly Leu Thr Tyr Tyr Pro Phe Trp His Gly Thr Met Gly
225 230 235 240
Glu Leu Ala Tyr Asn Leu Asn Ala Ile Ser Ser Arg Tyr Asn Lys Asp
245 250 255
Val Met Ile Val Glu Thr Ser Tyr Gly Phe Thr Leu Asp Asp Gly Asp
260 265 270
Gly Leu Gly Asn Ser Phe Tyr Thr Ala Glu Glu Ser Ile Gly Gly Tyr
275 280 285
Pro Ala Thr Val Glu Gly Gln Thr Ala Tyr Leu Arg Asp Leu Lys Glu
290 295 300
Ile Val Arg Asp Val Pro Asn Asn Arg Gly Arg Gly Ile Phe Trp Trp
305 310 315 320
Glu Pro Thr Trp Leu Pro Val Ala Gly Ala Asn Trp Gly Thr Asp Ala
325 330 335
Gly Lys Leu Tyr Asn Asn Asp Thr Gly Leu Leu Ser Asn Pro Trp Asp
340 345 350
Asn Gln Thr Leu Phe Asp Phe Asn Gly Asn Val Leu Ser Thr Val Ser
355 360 365
Val Phe Thr Gln Ser Ala Pro Thr Asn Leu Val Ala Asn His Ser Phe
370 375 380
Glu Ala Asp Gly Trp Thr Thr Thr Pro Ser Ser Trp Asn Arg Trp Ala
385 390 395 400
Ala Asp Thr Ala Ser Tyr Asn Ala Ile Lys Val Glu Glu Asn Gly Ile
405 410 415
Thr Gly Ser Tyr Lys Leu Thr His Trp Ser Asp Ser Ala Tyr Glu Ala
420 425 430
Ser Thr Tyr Gln Thr Val Ser Gly Leu Ser Asn Gly Thr Tyr Thr Leu
435 440 445
Ser Ala Trp Val Leu Asn Ser Gly Gly Gln Asn Thr Leu Gln Leu Tyr
450 455 460
Ala Lys Asn Tyr Gly Gly Ser Glu Arg Asn Val Asn Leu Pro Val Ser
465 470 475 480
Pro Thr Lys Trp Val Lys Val Lys Ile Glu Asn Ile Ser Val Thr Asn
485 490 495
Gly Gln Ile Glu Leu Gly Ile Tyr Ser Asp Ala Asn Ala Asp Asn Trp
500 505 510
Met Asn Leu Asp Asn Val Lys Leu Tyr Lys Thr Asn
515 520
<210> 29
<211> 1053
<212> DNA
<213> 皮尔瑞俄类芽孢杆菌（Paenibacillus peoriae）
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1050)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1050)
<400> 29
atg aaa aca ggt aac cgc acg atg gta ttt gcg atg ttg atc ttg ctt 48
Met Lys Thr Gly Asn Arg Thr Met Val Phe Ala Met Leu Ile Leu Leu
-30 -25 -20
tcc agc tta ttg tat ccg ttc ggc tct gta ggg ttg ggt gcg gct tcg 96
Ser Ser Leu Leu Tyr Pro Phe Gly Ser Val Gly Leu Gly Ala Ala Ser
-15 -10 -5
gcc gcc cct gct ttc gcc aaa gga gca gat ata agc tgg gta gca gga 144
Ala Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gcg caa ggt atg act tgg aag gat aaa aag ggt gtt cgt cga 192
Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg
20 25 30
gat ata ctg caa att ttg cga gat gac tat cag atc aac tcg gta cgt 240
Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
atc cgt gtg tgg gta aac ccc gac atg aaa gat tat gca agc gga tac 288
Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr
50 55 60
atg aat gcc gaa aag gca gca gaa ctg gcg cag cga gct aaa aaa ttg 336
Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu
65 70 75
ggt atg agc gtt atg ctg act cta cat tat agt gat tcc tgg gca gat 384
Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp
80 85 90 95
cca ggg caa cag aac aaa cct tat gcg tgg cgc aat ttt aca ttt aca 432
Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr
100 105 110
caa ctc atg gat gca gtc tgg tct cat acg gtt tat gtt atg aac acg 480
Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr
115 120 125
atg aaa agc aag ggg gta aca ccg gac tgg gtg cag atc ggt aat gag 528
Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu
130 135 140
acg aac aat gga atg ctc tgg gaa gac ggc aaa gct tcg gtg aac atg 576
Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met
145 150 155
aaa aac tat gcc tgg ctc gtc aat aca ggt aat aat gct gta aaa tcg 624
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
160 165 170 175
gta agc agc agt act aaa acg ata gta cat tta gcc aac ggg gat aac 672
Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn
180 185 190
ggt tcc gtg ttg aac tgg aat atc ggc gga ctg att gat aat gga gct 720
Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala
195 200 205
cag ttt gat ctc atc ggg ctg tct ctg tat ccg tct cct tct gac tgg 768
Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp
210 215 220
cag ggc aag gtg gat cag acg att acg aat gcc aat aac ctc att gcc 816
Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala
225 230 235
aaa tac ggt aaa ggt att gtc atc agt gaa atc ggg atg gaa tat aac 864
Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn
240 245 250 255
gaa cct gca gct tcc aag gca ttt att tct gca atc aaa aca aag gtt 912
Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val
260 265 270
cgg aac atg gga ggc ggc aaa ggc aca ggg gta ttt tat tgg gag ccg 960
Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
gct gca act cca ggt tac aat caa ggt tat aac aaa ggt gct tgg cag 1008
Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln
290 295 300
gct gac ggt aaa cca acc tca gct ttg gag gga ttt gta aat taa 1053
Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 30
<211> 350
<212> PRT
<213> 皮尔瑞俄类芽孢杆菌（Paenibacillus peoriae）
<400> 30
Met Lys Thr Gly Asn Arg Thr Met Val Phe Ala Met Leu Ile Leu Leu
-30 -25 -20
Ser Ser Leu Leu Tyr Pro Phe Gly Ser Val Gly Leu Gly Ala Ala Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg
20 25 30
Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr
50 55 60
Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu
65 70 75
Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp
80 85 90 95
Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr
100 105 110
Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr
115 120 125
Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu
130 135 140
Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met
145 150 155
Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser
160 165 170 175
Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn
180 185 190
Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala
195 200 205
Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp
210 215 220
Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala
225 230 235
Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn
240 245 250 255
Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val
260 265 270
Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro
275 280 285
Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln
290 295 300
Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 31
<211> 317
<212> PRT
<213> 皮尔瑞俄类芽孢杆菌（Paenibacillus peoriae）
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(317)
<400> 31
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg Asp
20 25 30
Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu Gly
65 70 75 80
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
85 90 95
Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His Thr Val Tyr Val Met Asn Thr Met
115 120 125
Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Lys
145 150 155 160
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Val
165 170 175
Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Asn Gly Asp Asn Gly
180 185 190
Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala Gln
195 200 205
Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp Gln
210 215 220
Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala Lys
225 230 235 240
Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn Glu
245 250 255
Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val Arg
260 265 270
Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Ala
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala
290 295 300
Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu Glu Gly Phe Val Asn
305 310 315
<210> 32
<211> 325
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(325)
<400> 32
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Ala Gly Met Glu Ala Gln Gly Met Thr Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Lys Gly Val Arg Arg Asp Ile Leu Gln Ile Leu Arg Asp Asp
35 40 45
Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg Val Trp Val Asn Pro Asp Met
50 55 60
Lys Asp Tyr Ala Ser Gly Tyr Met Asn Ala Glu Lys Ala Ala Glu Leu
65 70 75 80
Ala Gln Arg Ala Lys Lys Leu Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His
85 90 95
Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Gln Gln Asn Lys Pro Tyr Ala
100 105 110
Trp Arg Asn Phe Thr Phe Thr Gln Leu Met Asp Ala Val Trp Ser His
115 120 125
Thr Val Tyr Val Met Asn Thr Met Lys Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp
130 135 140
Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp
145 150 155 160
Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Lys Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr
165 170 175
Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Val Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val
180 185 190
His Leu Ala Asn Gly Asp Asn Gly Ser Val Leu Asn Trp Asn Ile Gly
195 200 205
Gly Leu Ile Asp Asn Gly Ala Gln Phe Asp Leu Ile Gly Leu Ser Leu
210 215 220
Tyr Pro Ser Pro Ser Asp Trp Gln Gly Lys Val Asp Gln Thr Ile Thr
225 230 235 240
Asn Ala Asn Asn Leu Ile Ala Lys Tyr Gly Lys Gly Ile Val Ile Ser
245 250 255
Glu Ile Gly Met Glu Tyr Asn Glu Pro Ala Ala Ser Lys Ala Phe Ile
260 265 270
Ser Ala Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Met Gly Gly Gly Lys Gly Thr
275 280 285
Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Ala Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Gln Gly
290 295 300
Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ala Asp Gly Lys Pro Thr Ser Ala Leu
305 310 315 320
Glu Gly Phe Val Asn
325
<210> 33
<211> 1050
<212> DNA
<213> Paenibacillus xylanexedens
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1047)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (100)..(1047)
<400> 33
atg ttc aaa aat gta agg ggt ttc agg ata tcc atc atg ttg gct ttt 48
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Arg Ile Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
gtt ttg tta ttc acc tcc atc atg ttg ccc gca ggt cag cat gcc agc 96
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
gca gca cca agt ttc gcc aaa gga gcc gac atc agt tgg gtt ccc gga 144
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
atg gaa gct caa ggc tac aaa tgg aaa gat aaa aac ggg gta cag cgt 192
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
gac atc att gat att ttg aaa aat gac tat caa atc aat tcc gtt cgt 240
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
att cgg gtc ttt gtt aat cct tcg aac gat tat ggg aac ggt tac atg 288
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
aac aag gat cgt gcg gct gca ctc gca caa cgt gcc aag aat gcc ggc 336
Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
atg agc gta atg ctc acc ctg cac tac agc gat tcc tgg gca gac cct 384
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
ggt caa cag acc aaa cca gct gcc tgg aaa aac tac acg ttc cag cag 432
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
ctc atg gat gcg gtg tgg aat cac aca cgt gat gtc atg act gca atg 480
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
caa agc aaa ggc gtt acc ccg gac tgg gta cag atc ggg aat gaa aca 528
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
agc aac ggc atg tta tgg gaa gat ggc aaa gca tct acc aac atg aaa 576
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
aac tat gcg tgg ctg gta aac aca ggc cat aat gca gtg aaa tcc ctg 624
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
agc agc ggc acc aaa acc att gtg cat ctg gca ggt gga gat gat aac 672
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
gcc ctc tat gta tgg aat att gga ggc ctg atc aat aac gga gcc aac 720
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
ttt gac atg att gcg atg tcc ctc tac cct tcg gct tcc ggc tgg aac 768
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
aca gct gtg acg aat aca gta aac aat gcc aag gat atg atc aac cgt 816
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
tat ggc aaa gag atc att atc tcc gaa att ggt atg gac aat aac cag 864
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
gct gca gct ggt aaa agt ttt gtt gcg gcg atg aaa aac caa atc cgc 912
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
aat ctg ccg aat ggt aaa ggc aaa ggc gta ttc tac tgg gag cct cag 960
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
gct aca cca gga tac aac agc ggc tat ggc aaa ggt gca tgg caa tcg 1008
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
aat atg atg ccg acg gta gtc atg gaa gga ttt att gac tag 1050
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 34
<211> 349
<212> PRT
<213> Paenibacillus xylanexedens
<400> 34
Met Phe Lys Asn Val Arg Gly Phe Arg Ile Ser Ile Met Leu Ala Phe
-30 -25 -20
Val Leu Leu Phe Thr Ser Ile Met Leu Pro Ala Gly Gln His Ala Ser
-15 -10 -5
Ala Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly
-1 1 5 10 15
Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg
20 25 30
Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg
35 40 45
Ile Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met
50 55 60
Asn Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly
65 70 75
Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro
80 85 90 95
Gly Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln
100 105 110
Leu Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met
115 120 125
Gln Ser Lys Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr
130 135 140
Ser Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys
145 150 155
Asn Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu
160 165 170 175
Ser Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn
180 185 190
Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn
195 200 205
Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn
210 215 220
Thr Ala Val Thr Asn Thr Val Asn Asn Ala Lys Asp Met Ile Asn Arg
225 230 235
Tyr Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln
240 245 250 255
Ala Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg
260 265 270
Asn Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln
275 280 285
Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser
290 295 300
Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 35
<211> 316
<212> PRT
<213> Paenibacillus xylanexedens
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 35
Ala Pro Ser Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Asn Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
Arg Val Phe Val Asn Pro Ser Asn Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Met Asn
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Ala Ala Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met
65 70 75 80
Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly
85 90 95
Gln Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Lys Asn Tyr Thr Phe Gln Gln Leu
100 105 110
Met Asp Ala Val Trp Asn His Thr Arg Asp Val Met Thr Ala Met Gln
115 120 125
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130 135 140
Asn Gly Met Leu Trp Glu Asp Gly Lys Ala Ser Thr Asn Met Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly His Asn Ala Val Lys Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Gly Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala
180 185 190
Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe
195 200 205
Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Gly Trp Asn Thr
210 215 220
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225 230 235 240
Gly Lys Glu Ile Ile Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Asn Asn Gln Ala
245 250 255
Ala Ala Gly Lys Ser Phe Val Ala Ala Met Lys Asn Gln Ile Arg Asn
260 265 270
Leu Pro Asn Gly Lys Gly Lys Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn
290 295 300
Met Met Pro Thr Val Val Met Glu Gly Phe Ile Asp
305 310 315
<210> 36
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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65 70 75 80
Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Val Met Leu Thr Leu His Tyr
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165 170 175
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180 185 190
Leu Ala Gly Gly Asp Asp Asn Ala Leu Tyr Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Asn Asn Gly Ala Asn Phe Asp Met Ile Ala Met Ser Leu Tyr
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Val Phe Tyr Trp Glu Pro Gln Ala Thr Pro Gly Tyr Asn Ser Gly Tyr
290 295 300
Gly Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asn Met Met Pro Thr Val Val Met Glu
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<221> CDS
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<220>
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<220>
<221> 成熟肽
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Met Lys Arg Lys Thr Phe Gly Trp Leu Leu Thr Ala Leu Leu Gly Leu
-30 -25 -20
acc ctg gcg ctc ggc aac gcc gtg tct ccc ggc gac gcg aaa gcc gcc 96
Thr Leu Ala Leu Gly Asn Ala Val Ser Pro Gly Asp Ala Lys Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
ccg gca ttt gcg aaa ggc gcg gac atc agc tgg gtt ccg ggc atg gag 144
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
gcg caa ggg tac aaa tgg aag gac aaa aac ggc gtg cag cgg gac atc 192
Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
20 25 30
att gat att tta aag cag gat tac cag atc aac tcc gtc cgg atc cgc 240
Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
gtg ttt gtc aat ccg tca agc gat tac ggc aac ggc tac ttg aac aag 288
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
50 55 60 65
gaa cgc gcg gcc gac ttg gcc cag cgg gcg aaa aac gcc ggc atg agc 336
Glu Arg Ala Ala Asp Leu Ala Gln Arg Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser
70 75 80
gtc atg ctg acg ctg cac tac agc gat tcg tgg gcg gac ccc ggc aag 384
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
caa acc aag ccg gcc gcg tgg caa aat tat acg ttc gag caa ttg atg 432
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Gln Asn Tyr Thr Phe Glu Gln Leu Met
100 105 110
gac gcc gta tgg aac tgg acg cgc gat gtg atg acg acg atg cag agc 480
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ser
115 120 125
aga ggc gtt acg ccg gac tgg gtg cag atc ggc aac gag acg aac aac 528
Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
130 135 140 145
ggc atg ctg tgg gat gac ggc aag gcg tcc gtc aac atg cgt aat tac 576
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Arg Asn Tyr
150 155 160
gcc tgg ctc gtc aat acc ggc aac aat gcg gtc aag tcg atc agc agc 624
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
tcc acg aag acg atc gtc cat ctt tcc aac ggc tac gac aat tcg ctg 672
Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu
180 185 190
ttc gtc tgg aac atc ggt ggg ctg atc agc aac ggc gcg acg ttt gac 720
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe Asp
195 200 205
att atc ggc atg tcg ctg tac ccg tcc gcg tcc gac tgg cag acg aag 768
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr Lys
210 215 220 225
gtc aat cag acg atc agc aac gcg aac gat ctg att tcg cgc tac ggc 816
Val Asn Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Leu Ile Ser Arg Tyr Gly
230 235 240
aag agc atc atg atc tcc gaa atc ggc atg gac tac aac cag cct tcg 864
Lys Ser Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser
245 250 255
gcc gcg aag agc ttc atc tcc gac atc aag acg aag gtc cgg aat ctt 912
Ala Ala Lys Ser Phe Ile Ser Asp Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Leu
260 265 270
tcc gga ggc aaa ggg ctt ggc gtg ttt tat tgg gag ccc gag gct acc 960
Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
ccc ggc tac aac ggc ggc tac aac aag ggc gcc tgg cag tcc gac atg 1008
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp Met
290 295 300 305
aag ccg acg atc gcg ctg gaa ggc ttc ctg aac tga 1044
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
310 315
<210> 38
<211> 347
<212> PRT
<213> Cohnella laeviribosi
<400> 38
Met Lys Arg Lys Thr Phe Gly Trp Leu Leu Thr Ala Leu Leu Gly Leu
-30 -25 -20
Thr Leu Ala Leu Gly Asn Ala Val Ser Pro Gly Asp Ala Lys Ala Ala
-15 -10 -5 -1 1
Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu
5 10 15
Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile
20 25 30
Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile Arg
35 40 45
Val Phe Val Asn Pro Ser Ser Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys
50 55 60 65
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70 75 80
Val Met Leu Thr Leu His Tyr Ser Asp Ser Trp Ala Asp Pro Gly Lys
85 90 95
Gln Thr Lys Pro Ala Ala Trp Gln Asn Tyr Thr Phe Glu Gln Leu Met
100 105 110
Asp Ala Val Trp Asn Trp Thr Arg Asp Val Met Thr Thr Met Gln Ser
115 120 125
Arg Gly Val Thr Pro Asp Trp Val Gln Ile Gly Asn Glu Thr Asn Asn
130 135 140 145
Gly Met Leu Trp Asp Asp Gly Lys Ala Ser Val Asn Met Arg Asn Tyr
150 155 160
Ala Trp Leu Val Asn Thr Gly Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser
165 170 175
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180 185 190
Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe Asp
195 200 205
Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr Lys
210 215 220 225
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230 235 240
Lys Ser Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser
245 250 255
Ala Ala Lys Ser Phe Ile Ser Asp Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Leu
260 265 270
Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala Thr
275 280 285
Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp Met
290 295 300 305
Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
310 315
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<211> 316
<212> PRT
<213> Cohnella laeviribosi
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(316)
<400> 39
Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met
1 5 10 15
Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp
20 25 30
Ile Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp Tyr Gln Ile Asn Ser Val Arg Ile
35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe
195 200 205
Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr
210 215 220
Lys Val Asn Gln Thr Ile Ser Asn Ala Asn Asp Leu Ile Ser Arg Tyr
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Gly Lys Ser Ile Met Ile Ser Glu Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro
245 250 255
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260 265 270
Leu Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Glu Ala
275 280 285
Thr Pro Gly Tyr Asn Gly Gly Tyr Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp
290 295 300
Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu Gly Phe Leu Asn
305 310 315
<210> 40
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(324)
<400> 40
His His His His His His Pro Arg Ala Pro Ala Phe Ala Lys Gly Ala
1 5 10 15
Asp Ile Ser Trp Val Pro Gly Met Glu Ala Gln Gly Tyr Lys Trp Lys
20 25 30
Asp Lys Asn Gly Val Gln Arg Asp Ile Ile Asp Ile Leu Lys Gln Asp
35 40 45
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Asp Tyr Gly Asn Gly Tyr Leu Asn Lys Glu Arg Ala Ala Asp Leu Ala
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145 150 155 160
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165 170 175
Asn Asn Ala Val Lys Ser Ile Ser Ser Ser Thr Lys Thr Ile Val His
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Tyr Asp Asn Ser Leu Phe Val Trp Asn Ile Gly Gly
195 200 205
Leu Ile Ser Asn Gly Ala Thr Phe Asp Ile Ile Gly Met Ser Leu Tyr
210 215 220
Pro Ser Ala Ser Asp Trp Gln Thr Lys Val Asn Gln Thr Ile Ser Asn
225 230 235 240
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245 250 255
Ile Gly Met Asp Tyr Asn Gln Pro Ser Ala Ala Lys Ser Phe Ile Ser
260 265 270
Asp Ile Lys Thr Lys Val Arg Asn Leu Ser Gly Gly Lys Gly Leu Gly
275 280 285
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290 295 300
Asn Lys Gly Ala Trp Gln Ser Asp Met Lys Pro Thr Ile Ala Leu Glu
305 310 315 320
Gly Phe Leu Asn
<210> 41
<211> 2058
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌物种-18026
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2055)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2055)
<400> 41
atg acg aag caa cat gca ccc att agc agc aag ctt ccc gtc ctc atg 48
Met Thr Lys Gln His Ala Pro Ile Ser Ser Lys Leu Pro Val Leu Met
1 5 10 15
cat ggg gcg gac tat aac ccg gat cag tgg ctg cac gac ccg gca gtg 96
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20 25 30
ctg gag gag gac atc cgt ctg atg aag ctg gcg ggc tgc aat gtc atg 144
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala Gly Cys Asn Val Met
35 40 45
gcc gtc ggt att ttc tca tgg gcg gct ttg gag cct gcg gag ggc agc 192
Ala Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Ala Leu Glu Pro Ala Glu Gly Ser
50 55 60
ttt acg ttc gaa tgg ctg gat ggg gta ctg aac cgt ttt gct gag aat 240
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Gly Val Leu Asn Arg Phe Ala Glu Asn
65 70 75 80
gga atc tat gcg tgg ctg gcg aca ccg agc gga gcg cgt ccg gcc tgg 288
Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tcg gag aaa tac ccg gag gtc aga cgc gtg gag gcc aac cgg gtg 336
Met Ser Glu Lys Tyr Pro Glu Val Arg Arg Val Glu Ala Asn Arg Val
100 105 110
cgc aat ctg cac ggc atg cgt cac aac cac tgc tat aca tcg ccg gtg 384
Arg Asn Leu His Gly Met Arg His Asn His Cys Tyr Thr Ser Pro Val
115 120 125
tac cgt gag aaa acg gca atc atc aat gcc aag ctg gcg gag cgc tac 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile Ile Asn Ala Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
ggc agc cat ccg gcc gtc atc ggc tgg cat atc tcc aat gaa ttc ggc 480
Gly Ser His Pro Ala Val Ile Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Phe Gly
145 150 155 160
ggc gac tgc cac tgc gat tac tgc cag gat gcg ttc cgc ggg tgg ctg 528
Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr Cys Gln Asp Ala Phe Arg Gly Trp Leu
165 170 175
cag aag aaa tat gga acg ctg gaa gca ctc aat atg gcg tgg tgg acg 576
Gln Lys Lys Tyr Gly Thr Leu Glu Ala Leu Asn Met Ala Trp Trp Thr
180 185 190
tcc ttc tgg gcg cat aca tac acg gat tgg agc cag gtg gaa tca ccg 624
Ser Phe Trp Ala His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro
195 200 205
gcc cgc cat ggc gaa atg atg gtg cac ggc cat aat ctg gat tgg cgc 672
Ala Arg His Gly Glu Met Met Val His Gly His Asn Leu Asp Trp Arg
210 215 220
cga ttt gtg acg gat caa acc gta gac ttc tgc cgg cat gag atc gat 720
Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg His Glu Ile Asp
225 230 235 240
gcg gtg cgc ggc gcg aat tct tcg ctg ccg gtc acg acg aat atg cac 768
Ala Val Arg Gly Ala Asn Ser Ser Leu Pro Val Thr Thr Asn Met His
245 250 255
atg atc gaa gga ctg gat tac cgg aag ttc tcc gag atc ctg gac gtc 816
Met Ile Glu Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Phe Ser Glu Ile Leu Asp Val
260 265 270
atc tcc tgg gat gcg tac ccg acc tgg cat gag cac aag gac gac agc 864
Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Glu His Lys Asp Asp Ser
275 280 285
cag ctg gcg gcg tct gtg gcg ttc tac cac gac ctg tac cgc tcg ctg 912
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aag caa aag ccg ttt ctg ctg atg gag agc acg cca tcg ctg acg aac 960
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tgg cag ccg gta agc aag ctg aag cag ccg ggc atg cac cag ctg tcc 1008
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Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
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Pro Ser Glu Thr Ala Ile Leu Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Val
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aag gat gcg cag ggg ccc cgt aat atg ggg atc cat tac gag gaa acc 1296
Lys Asp Ala Gln Gly Pro Arg Asn Met Gly Ile His Tyr Glu Glu Thr
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Val Tyr Ala His His Arg Ala Leu Trp Gln Gln Gly Ile Ala Ala Asp
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Val Ile Gly Ser Glu Asp Gly Phe Ala Gly Tyr Lys Leu Ile Ile Ala
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<211> 685
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<213> 类芽孢杆菌物种-18026
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Met Ile Glu Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Phe Ser Glu Ile Leu Asp Val
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275 280 285
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<213> 短小芽孢杆菌
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2064)
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att gac gaa gat ttt cga tta atg aag ctt gca cac tgt caa aca ttc 144
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Glu Pro Leu Arg Glu Leu Thr Pro His Ile Pro Val Thr Thr Asn Phe
245 250 255
atg ggc gac tac ccg cat atg cgc cca ttc ctt ggg ctg gat tat cat 816
Met Gly Asp Tyr Pro His Met Arg Pro Phe Leu Gly Leu Asp Tyr His
260 265 270
caa ttt gca aaa gag gtc gac gtg att tca tgg gat agc tat cca gca 864
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275 280 285
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Trp His Ser Gly Arg Glu Thr Thr Ser Glu Leu Ala Ser Asn Val Ala
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Phe Val His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Asp Gly Gln Pro Phe Leu
305 310 315 320
gtt atg gag agt aca ccg agc ctt gtg aac tgg cat gaa gtg aat aag 1008
Val Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Val Asn Trp His Glu Val Asn Lys
325 330 335
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His Thr Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Asp Leu Gly Lys Gln Leu Glu
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ata tac gat tgg gaa aac cac tgg gcc att gat gat gca caa ggc tta 1296
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aat aat aca aac aaa cgc tat gta gag gct tgt caa act cac tat cga 1344
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Ser Phe Trp Lys Lys Gly Ile Pro Val Asp Ile Val Gly Met Glu Lys
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taa 2067
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<211> 688
<212> PRT
<213> 短小芽孢杆菌
<400> 44
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610 615 620
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675 680 685
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<211> 695
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(695)
<400> 45
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225 230 235 240
Asn Phe Tyr Gln Asn Glu Ile Glu Pro Leu Arg Glu Leu Thr Pro His
245 250 255
Ile Pro Val Thr Thr Asn Phe Met Gly Asp Tyr Pro His Met Arg Pro
260 265 270
Phe Leu Gly Leu Asp Tyr His Gln Phe Ala Lys Glu Val Asp Val Ile
275 280 285
Ser Trp Asp Ser Tyr Pro Ala Trp His Ser Gly Arg Glu Thr Thr Ser
290 295 300
Glu Leu Ala Ser Asn Val Ala Phe Val His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu
305 310 315 320
Lys Asp Gly Gln Pro Phe Leu Val Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Val
325 330 335
Asn Trp His Glu Val Asn Lys Val Lys His Lys Gly Met Ala His Leu
340 345 350
Ser Ala Ile Gln Ala Ile Ala His Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe
355 360 365
Gln Trp Arg Gln Gly Arg Gly Ala Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val
370 375 380
Val Asp His Ser Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Gln Glu Val Ala
385 390 395 400
Asp Leu Gly Lys Gln Leu Glu Gln Leu Gln Pro Ile Ala Gly Thr Ser
405 410 415
Val Gln Pro Glu Val Ala Ile Ile Tyr Asp Trp Glu Asn His Trp Ala
420 425 430
Ile Asp Asp Ala Gln Gly Leu Asn Asn Thr Asn Lys Arg Tyr Val Glu
435 440 445
Ala Cys Gln Thr His Tyr Arg Ser Phe Trp Lys Lys Gly Ile Pro Val
450 455 460
Asp Ile Val Gly Met Glu Lys Asp Phe Ser Ser Tyr Arg Val Leu Val
465 470 475 480
Ala Pro Met Leu Tyr Met Ile Lys Pro Gly Val Ala Glu Lys Ile Glu
485 490 495
Ala Phe Val Lys Lys Gly Gly Ile Phe Ile Ala Thr Tyr Trp Ser Gly
500 505 510
Met Val Asp Glu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro
515 520 525
Leu Arg His Val Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ile Asn Thr Leu Met
530 535 540
Pro Asp Glu His Val Leu Ile Thr Thr Gly Asn Gly Arg Thr Tyr His
545 550 555 560
Val Gly Gln Tyr Cys Glu Ser Ile His Pro Glu Thr Ala Ser Val Leu
565 570 575
Gly His Phe Glu Asn Gly Cys Tyr Glu Gly Gln Pro Ala Leu Thr Val
580 585 590
His Pro Phe Gly Asp Gly Lys Ala Tyr Tyr Met Ala Ser Glu Asn Glu
595 600 605
Gln Ile Phe Tyr Asp Glu Phe Tyr Glu Asp Leu Ile Ala Gly Met Gly
610 615 620
Ile Gln Pro Val Leu Ser Ser Val Ile Pro Glu Gly Val Ser Val Gln
625 630 635 640
Lys Arg Thr Asp Gly Thr Gln Asp Tyr Val Phe Met Met Asn Phe Thr
645 650 655
Glu Glu Leu Gln Asn Ile Ser Leu Asp Ser Ala Glu Ser Tyr Glu Asn
660 665 670
Met Leu Thr Glu Glu Gln Val Pro Asp Gln Leu Gln Leu Asp Pro Tyr
675 680 685
Glu Tyr Val Ile Leu Lys Lys
690 695
<210> 46
<211> 2064
<212> DNA
<213> Bacillus nealsonii
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2061)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2061)
<400> 46
atg gca aac aaa gag aaa aca ttt gtt aca gat gct aaa ttt atg ctg 48
Met Ala Asn Lys Glu Lys Thr Phe Val Thr Asp Ala Lys Phe Met Leu
1 5 10 15
cat ggc ggc gat tat aac cct gat cag tgg ctg gac cgt cca gat att 96
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
tta gcg gat gac att aag ctg atg cag ctg tcc cac aca aac act ttc 144
Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Gln Leu Ser His Thr Asn Thr Phe
35 40 45
tcg ctt ggg ata ttt gcg tgg agc gcc ttg gaa cca gag gaa ggt gtc 192
Ser Leu Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
tat cat ttt gaa tgg ctt gat gag gtg ata gaa aga att cat ggt att 240
Tyr His Phe Glu Trp Leu Asp Glu Val Ile Glu Arg Ile His Gly Ile
65 70 75 80
ggc ggc aaa gtg att ttg gct acg cca agc ggt gca aga cct gca tgg 288
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tcc cat aaa tat ccg gag gtg ctg cgt gtt gac ggc gct aga agg 336
Met Ser His Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asp Gly Ala Arg Arg
100 105 110
aag cag ctc cat ggc ggg cgc cat aat cac tgc ttc tct tct agt gtt 384
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Ser Val
115 120 125
tat aga gaa aaa aca cag cag att aac aga ttg ctt gct gaa aga tac 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
ggc agc cat ccg gct ttg ctg atg tgg cat att tcc aat gaa tat ggc 480
Gly Ser His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggg gaa tgt cat tgt gat acc tgt cag gaa gcc ttc cga caa tgg ctg 528
Gly Glu Cys His Cys Asp Thr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu
165 170 175
aag aaa aag tac gac aat aac ttg aag gct gtc aat gat gct tgg tgg 576
Lys Lys Lys Tyr Asp Asn Asn Leu Lys Ala Val Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
ggg ccg ttt tgg agc cac aca tac agt gac tgg tca cag att gaa tct 624
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Tyr Ser Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
cct tct cca gtc ggt gag aat gca gtg cac ggc tta aac ttg gat tgg 672
Pro Ser Pro Val Gly Glu Asn Ala Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
cgc cga ttt gtg aca gac cag aca att gac ttt ttt gag aat gaa att 720
Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Asp Phe Phe Glu Asn Glu Ile
225 230 235 240
gtt cca att aaa gag att tca cca gat att ccg att act aca aat ttg 768
Val Pro Ile Lys Glu Ile Ser Pro Asp Ile Pro Ile Thr Thr Asn Leu
245 250 255
atg gca gat aca ttt gat ttg att cca ttc caa agt ctt gat tac agc 816
Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ser Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
aag ttt gcg cgt cac gta gat gtg ata agc tgg gat gca tat cct gct 864
Lys Phe Ala Arg His Val Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
tgg cat aat gat tgg gaa aca aca gcg gat tta gcg gtg aag gtt ggc 912
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asp Leu Ala Val Lys Val Gly
290 295 300
ttc att aat gat tta ttc cgc agt tta aaa gag cag ccg ttt ttg ctg 960
Phe Ile Asn Asp Leu Phe Arg Ser Leu Lys Glu Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
atg gag tca aca cca agt gct gtc aac tgg cat aaa gtc aat aaa gcg 1008
Met Glu Ser Thr Pro Ser Ala Val Asn Trp His Lys Val Asn Lys Ala
325 330 335
aaa cgt cca ggc atg cat ttg ctt tct tct atg cag atg gtt gcc cat 1056
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Val Ala His
340 345 350
ggt tct gac agc gtt cta tac ttc cag tgg cgc aaa tcg cgt ggg tcg 1104
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
tca gag aag ttt cac ggt gca gtt gtt gac cat gat aac agc ccg gat 1152
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Pro Asp
370 375 380
aac cgg gtg ttc cag gaa gtc gcc aag gtc ggt aca acg ctg gaa aag 1200
Asn Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Lys Val Gly Thr Thr Leu Glu Lys
385 390 395 400
ctg acc gat att gtc ggt aca aat cgt gta gca gat aca gcc atc ctg 1248
Leu Thr Asp Ile Val Gly Thr Asn Arg Val Ala Asp Thr Ala Ile Leu
405 410 415
tat gat tgg gaa aat aac tgg gcg ctg aat gat gcg caa ggc tac gga 1296
Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Tyr Gly
420 425 430
tta gac acg aag cgc tat ccg caa aca ttg cag cag cat tat cgc aca 1344
Leu Asp Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Gln His Tyr Arg Thr
435 440 445
ttt tgg gag cag gat gtt cca gtt gat gtg atc aca aag gaa aac gat 1392
Phe Trp Glu Gln Asp Val Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Asn Asp
450 455 460
ttt tct aaa tac cgt ctg ttg att gtg ccg atg ctc tat tta gca agt 1440
Phe Ser Lys Tyr Arg Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Ala Ser
465 470 475 480
gaa gag acg att gcc cgc tta aaa gcg tat gta gca aat ggc ggt acg 1488
Glu Glu Thr Ile Ala Arg Leu Lys Ala Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr
485 490 495
tta atc atg aca tat ata agc gga atc gtg aat gag cat gac tta acg 1536
Leu Ile Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile Val Asn Glu His Asp Leu Thr
500 505 510
tat atg gaa ggc tgg cat caa gat ctg caa gac atg ttt ggc cta aat 1584
Tyr Met Glu Gly Trp His Gln Asp Leu Gln Asp Met Phe Gly Leu Asn
515 520 525
cca att gaa aca gat aca ctt tat ccg aaa gat gct aac act gtc cat 1632
Pro Ile Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Lys Asp Ala Asn Thr Val His
530 535 540
tac gaa ggc aag gat tat gta ctg aag gat tat gca acc gtt gta aat 1680
Tyr Glu Gly Lys Asp Tyr Val Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Val Asn
545 550 555 560
att gcc tct gct aat gtg gaa ggt gtg tat aaa gaa gat ttt tat gca 1728
Ile Ala Ser Ala Asn Val Glu Gly Val Tyr Lys Glu Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
aac aca gca gca gta aca agc aat gct tat gag aat ggg aaa gct tac 1776
Asn Thr Ala Ala Val Thr Ser Asn Ala Tyr Glu Asn Gly Lys Ala Tyr
580 585 590
tat att ggc ggc cga tta gat gat gag ttt cat ctt gct ttc tac ggc 1824
Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Asp Asp Glu Phe His Leu Ala Phe Tyr Gly
595 600 605
aag ctt att gaa gaa ttg tca tta aag cca gat tac gcg ata aca cat 1872
Lys Leu Ile Glu Glu Leu Ser Leu Lys Pro Asp Tyr Ala Ile Thr His
610 615 620
ggc agc gga gta tct gtt caa gca aga caa gat gaa ggt aaa gag tat 1920
Gly Ser Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Asp Glu Gly Lys Glu Tyr
625 630 635 640
ctc ttt att atg aac ttt aca gaa gat acg cag cca gtt gtc ctt ggc 1968
Leu Phe Ile Met Asn Phe Thr Glu Asp Thr Gln Pro Val Val Leu Gly
645 650 655
agt gaa gta aag gat gtt att act ggt gag cag ctt cat ggc agt ata 2016
Ser Glu Val Lys Asp Val Ile Thr Gly Glu Gln Leu His Gly Ser Ile
660 665 670
aag cta gat aag tat gaa gtg aga ata gta gag aaa gta aaa ggc taa 2064
Lys Leu Asp Lys Tyr Glu Val Arg Ile Val Glu Lys Val Lys Gly
675 680 685
<210> 47
<211> 687
<212> PRT
<213> Bacillus nealsonii
<400> 47
Met Ala Asn Lys Glu Lys Thr Phe Val Thr Asp Ala Lys Phe Met Leu
1 5 10 15
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Gln Leu Ser His Thr Asn Thr Phe
35 40 45
Ser Leu Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
Tyr His Phe Glu Trp Leu Asp Glu Val Ile Glu Arg Ile His Gly Ile
65 70 75 80
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Met Ser His Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asp Gly Ala Arg Arg
100 105 110
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Ser Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Gly Ser His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Asp Thr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu
165 170 175
Lys Lys Lys Tyr Asp Asn Asn Leu Lys Ala Val Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Tyr Ser Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Val Gly Glu Asn Ala Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Asp Phe Phe Glu Asn Glu Ile
225 230 235 240
Val Pro Ile Lys Glu Ile Ser Pro Asp Ile Pro Ile Thr Thr Asn Leu
245 250 255
Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ser Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
Lys Phe Ala Arg His Val Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asp Leu Ala Val Lys Val Gly
290 295 300
Phe Ile Asn Asp Leu Phe Arg Ser Leu Lys Glu Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Ser Thr Pro Ser Ala Val Asn Trp His Lys Val Asn Lys Ala
325 330 335
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Val Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Pro Asp
370 375 380
Asn Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Lys Val Gly Thr Thr Leu Glu Lys
385 390 395 400
Leu Thr Asp Ile Val Gly Thr Asn Arg Val Ala Asp Thr Ala Ile Leu
405 410 415
Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Tyr Gly
420 425 430
Leu Asp Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Gln His Tyr Arg Thr
435 440 445
Phe Trp Glu Gln Asp Val Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Asn Asp
450 455 460
Phe Ser Lys Tyr Arg Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Ala Ser
465 470 475 480
Glu Glu Thr Ile Ala Arg Leu Lys Ala Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr
485 490 495
Leu Ile Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile Val Asn Glu His Asp Leu Thr
500 505 510
Tyr Met Glu Gly Trp His Gln Asp Leu Gln Asp Met Phe Gly Leu Asn
515 520 525
Pro Ile Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Lys Asp Ala Asn Thr Val His
530 535 540
Tyr Glu Gly Lys Asp Tyr Val Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Val Asn
545 550 555 560
Ile Ala Ser Ala Asn Val Glu Gly Val Tyr Lys Glu Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
Asn Thr Ala Ala Val Thr Ser Asn Ala Tyr Glu Asn Gly Lys Ala Tyr
580 585 590
Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Asp Asp Glu Phe His Leu Ala Phe Tyr Gly
595 600 605
Lys Leu Ile Glu Glu Leu Ser Leu Lys Pro Asp Tyr Ala Ile Thr His
610 615 620
Gly Ser Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Asp Glu Gly Lys Glu Tyr
625 630 635 640
Leu Phe Ile Met Asn Phe Thr Glu Asp Thr Gln Pro Val Val Leu Gly
645 650 655
Ser Glu Val Lys Asp Val Ile Thr Gly Glu Gln Leu His Gly Ser Ile
660 665 670
Lys Leu Asp Lys Tyr Glu Val Arg Ile Val Glu Lys Val Lys Gly
675 680 685
<210> 48
<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(694)
<400> 48
Met His His His His His His Met Ala Asn Lys Glu Lys Thr Phe Val
1 5 10 15
Thr Asp Ala Lys Phe Met Leu His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln
20 25 30
Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Gln
35 40 45
Leu Ser His Thr Asn Thr Phe Ser Leu Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala
50 55 60
Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val Tyr His Phe Glu Trp Leu Asp Glu Val
65 70 75 80
Ile Glu Arg Ile His Gly Ile Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro
85 90 95
Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Met Ser His Lys Tyr Pro Glu Val Leu
100 105 110
Arg Val Asp Gly Ala Arg Arg Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn
115 120 125
His Cys Phe Ser Ser Ser Val Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Ile Asn
130 135 140
Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr Gly Ser His Pro Ala Leu Leu Met Trp
145 150 155 160
His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly Gly Glu Cys His Cys Asp Thr Cys Gln
165 170 175
Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu Lys Lys Lys Tyr Asp Asn Asn Leu Lys
180 185 190
Ala Val Asn Asp Ala Trp Trp Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Tyr Ser
195 200 205
Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser Pro Ser Pro Val Gly Glu Asn Ala Val
210 215 220
His Gly Leu Asn Leu Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile
225 230 235 240
Asp Phe Phe Glu Asn Glu Ile Val Pro Ile Lys Glu Ile Ser Pro Asp
245 250 255
Ile Pro Ile Thr Thr Asn Leu Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro
260 265 270
Phe Gln Ser Leu Asp Tyr Ser Lys Phe Ala Arg His Val Asp Val Ile
275 280 285
Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala
290 295 300
Asp Leu Ala Val Lys Val Gly Phe Ile Asn Asp Leu Phe Arg Ser Leu
305 310 315 320
Lys Glu Gln Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Ala Val Asn
325 330 335
Trp His Lys Val Asn Lys Ala Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser
340 345 350
Ser Met Gln Met Val Ala His Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln
355 360 365
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
370 375 380
Asp His Asp Asn Ser Pro Asp Asn Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Lys
385 390 395 400
Val Gly Thr Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asp Ile Val Gly Thr Asn Arg
405 410 415
Val Ala Asp Thr Ala Ile Leu Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu
420 425 430
Asn Asp Ala Gln Gly Tyr Gly Leu Asp Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr
435 440 445
Leu Gln Gln His Tyr Arg Thr Phe Trp Glu Gln Asp Val Pro Val Asp
450 455 460
Val Ile Thr Lys Glu Asn Asp Phe Ser Lys Tyr Arg Leu Leu Ile Val
465 470 475 480
Pro Met Leu Tyr Leu Ala Ser Glu Glu Thr Ile Ala Arg Leu Lys Ala
485 490 495
Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr Leu Ile Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile
500 505 510
Val Asn Glu His Asp Leu Thr Tyr Met Glu Gly Trp His Gln Asp Leu
515 520 525
Gln Asp Met Phe Gly Leu Asn Pro Ile Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro
530 535 540
Lys Asp Ala Asn Thr Val His Tyr Glu Gly Lys Asp Tyr Val Leu Lys
545 550 555 560
Asp Tyr Ala Thr Val Val Asn Ile Ala Ser Ala Asn Val Glu Gly Val
565 570 575
Tyr Lys Glu Asp Phe Tyr Ala Asn Thr Ala Ala Val Thr Ser Asn Ala
580 585 590
Tyr Glu Asn Gly Lys Ala Tyr Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Asp Asp Glu
595 600 605
Phe His Leu Ala Phe Tyr Gly Lys Leu Ile Glu Glu Leu Ser Leu Lys
610 615 620
Pro Asp Tyr Ala Ile Thr His Gly Ser Gly Val Ser Val Gln Ala Arg
625 630 635 640
Gln Asp Glu Gly Lys Glu Tyr Leu Phe Ile Met Asn Phe Thr Glu Asp
645 650 655
Thr Gln Pro Val Val Leu Gly Ser Glu Val Lys Asp Val Ile Thr Gly
660 665 670
Glu Gln Leu His Gly Ser Ile Lys Leu Asp Lys Tyr Glu Val Arg Ile
675 680 685
Val Glu Lys Val Lys Gly
690
<210> 49
<211> 1965
<212> DNA
<213> Burkholderia sediminicola
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1962)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(1962)
<400> 49
atg caa ctt ggt gtt tgc tac tac ccc gaa caa tgg ccg cgt tcg atg 48
Met Gln Leu Gly Val Cys Tyr Tyr Pro Glu Gln Trp Pro Arg Ser Met
1 5 10 15
tgg gcc gac gat gcg aaa cgt atg gtc gag ctc ggc atc acg cat gtg 96
Trp Ala Asp Asp Ala Lys Arg Met Val Glu Leu Gly Ile Thr His Val
20 25 30
cgg atc gcc gaa ttc gcg tgg agc cgg atg gaa ccg cgc gcc ggc gaa 144
Arg Ile Ala Glu Phe Ala Trp Ser Arg Met Glu Pro Arg Ala Gly Glu
35 40 45
ttc gcc tgg gac tgg ctc gat gaa gcc gtt gag acg ctc gcg gcc gaa 192
Phe Ala Trp Asp Trp Leu Asp Glu Ala Val Glu Thr Leu Ala Ala Glu
50 55 60
ggg ctg aaa ctc gtg cta ggc aca ccg acc gcg tcg ccg ccg aaa tgg 240
Gly Leu Lys Leu Val Leu Gly Thr Pro Thr Ala Ser Pro Pro Lys Trp
65 70 75 80
ctg atc gat gcg cac ccg gat gtt ttg ccg gta cgt gcg gac ggc gtg 288
Leu Ile Asp Ala His Pro Asp Val Leu Pro Val Arg Ala Asp Gly Val
85 90 95
cgc tgg aat ttc ggc tcg cgt cgc cac tac gat att tcc agc gaa acc 336
Arg Trp Asn Phe Gly Ser Arg Arg His Tyr Asp Ile Ser Ser Glu Thr
100 105 110
tat cgg cgt gag tgc gta cgt att gtc acc gcg atg gcg gag cgc tat 384
Tyr Arg Arg Glu Cys Val Arg Ile Val Thr Ala Met Ala Glu Arg Tyr
115 120 125
gga cgg cac ccg tct atc gtt gcg tgg cag acc gac aac gaa ctc ggc 432
Gly Arg His Pro Ser Ile Val Ala Trp Gln Thr Asp Asn Glu Leu Gly
130 135 140
tgc cac gag acc gtg ccg agt tat tcg ggc gcg gca ctg gcg cgc ttt 480
Cys His Glu Thr Val Pro Ser Tyr Ser Gly Ala Ala Leu Ala Arg Phe
145 150 155 160
cag acg tgg ttg cag cat cgc tac gag cgc gtc gag gcg ttg aac gat 528
Gln Thr Trp Leu Gln His Arg Tyr Glu Arg Val Glu Ala Leu Asn Asp
165 170 175
gca tgg ggc aat gtg ttc tgg agc atg gag tat ccg tcg ttc gat acg 576
Ala Trp Gly Asn Val Phe Trp Ser Met Glu Tyr Pro Ser Phe Asp Thr
180 185 190
atc ggc ctg ccg aac cgc acg ccc acc gac gcc aat ccg atc cat ttg 624
Ile Gly Leu Pro Asn Arg Thr Pro Thr Asp Ala Asn Pro Ile His Leu
195 200 205
ctc gac ttc cgc cgt ttc atg tcg gat gag gtg gcg agc ttc cat cgc 672
Leu Asp Phe Arg Arg Phe Met Ser Asp Glu Val Ala Ser Phe His Arg
210 215 220
gag cag atc gac gtg ctg cgt cag cat gcg ccc aag gcg gat ctt ctg 720
Glu Gln Ile Asp Val Leu Arg Gln His Ala Pro Lys Ala Asp Leu Leu
225 230 235 240
cat aac ttc atg ggc ttc ttc acg acc ttc gat cat tac cgc ttc gcc 768
His Asn Phe Met Gly Phe Phe Thr Thr Phe Asp His Tyr Arg Phe Ala
245 250 255
gaa gac aac gcg ctc gac gtg gcg acg tgg gat agc tat ccg atc gcg 816
Glu Asp Asn Ala Leu Asp Val Ala Thr Trp Asp Ser Tyr Pro Ile Ala
260 265 270
cgc acg gaa tcg atc gca ctg cct gaa gag cag aag gcg cgt tac gca 864
Arg Thr Glu Ser Ile Ala Leu Pro Glu Glu Gln Lys Ala Arg Tyr Ala
275 280 285
cgt acc gcg cat ccg gac gtc tcg gcg ttc gat cac gac cgc tac cgc 912
Arg Thr Ala His Pro Asp Val Ser Ala Phe Asp His Asp Arg Tyr Arg
290 295 300
gcg atc ggc gcc ggc cgt ttc tgg gtg atg gag caa cag gca ggg ccg 960
Ala Ile Gly Ala Gly Arg Phe Trp Val Met Glu Gln Gln Ala Gly Pro
305 310 315 320
gtg aac tgg gcg ccg tgg aat ccg gtg ccg gcg aag ggc atg gtc agg 1008
Val Asn Trp Ala Pro Trp Asn Pro Val Pro Ala Lys Gly Met Val Arg
325 330 335
ctg tgg gca tac gaa gca ttc gcg cat ggg gcg gaa ctg gtg tcg tat 1056
Leu Trp Ala Tyr Glu Ala Phe Ala His Gly Ala Glu Leu Val Ser Tyr
340 345 350
ttc cgc tgg cgt cag tgt ccg tat gcg cag gaa cag atg cat tcg ggt 1104
Phe Arg Trp Arg Gln Cys Pro Tyr Ala Gln Glu Gln Met His Ser Gly
355 360 365
ctc aac ttg ccg aac aac gaa ctg tcg cct ggc ggc atc gaa gtg cag 1152
Leu Asn Leu Pro Asn Asn Glu Leu Ser Pro Gly Gly Ile Glu Val Gln
370 375 380
cag gcg gcg cat gaa att gcc tcg tcc gca gcg cta tcc gga ctc ggt 1200
Gln Ala Ala His Glu Ile Ala Ser Ser Ala Ala Leu Ser Gly Leu Gly
385 390 395 400
gcg ccg acg cgc gcg gcc acc gcg atc gtg ttc gac tac gag acg cag 1248
Ala Pro Thr Arg Ala Ala Thr Ala Ile Val Phe Asp Tyr Glu Thr Gln
405 410 415
tgg atg ttc gag att cag cgt cat ggc aaa acc ttc gat tac cag acg 1296
Trp Met Phe Glu Ile Gln Arg His Gly Lys Thr Phe Asp Tyr Gln Thr
420 425 430
ctg gcg ttc gac tac tac gag gcg ctg cgt gaa ctc ggc ctc gac gtc 1344
Leu Ala Phe Asp Tyr Tyr Glu Ala Leu Arg Glu Leu Gly Leu Asp Val
435 440 445
gat atc gtg tcg agc aag gcc gat ctt tcg ccg tac cgg tta gtg gtg 1392
Asp Ile Val Ser Ser Lys Ala Asp Leu Ser Pro Tyr Arg Leu Val Val
450 455 460
gtg ccg agt att gcc gtg atc aac gac acg ctc gtc gac cag atc gag 1440
Val Pro Ser Ile Ala Val Ile Asn Asp Thr Leu Val Asp Gln Ile Glu
465 470 475 480
cag agt tcg gcg caa tgg gta ttc ggt ccg agg agc ggt tcg aag acc 1488
Gln Ser Ser Ala Gln Trp Val Phe Gly Pro Arg Ser Gly Ser Lys Thr
485 490 495
acg acc ttt gcc att cct tcg agc ttg ccg ccc ggc gcg ttg caa cgc 1536
Thr Thr Phe Ala Ile Pro Ser Ser Leu Pro Pro Gly Ala Leu Gln Arg
500 505 510
gtt ctg ccg atg cag gtg ctc gaa gtc gaa acg ctg cgt ccg acg ctt 1584
Val Leu Pro Met Gln Val Leu Glu Val Glu Thr Leu Arg Pro Thr Leu
515 520 525
acg cca gcg ctt tcg atc gga gac acg cag ggc gtt gca ctg cat tgg 1632
Thr Pro Ala Leu Ser Ile Gly Asp Thr Gln Gly Val Ala Leu His Trp
530 535 540
cgc gag cac gtt cgc gcc aat ggc gag aca acc gtc gac gcg caa ttc 1680
Arg Glu His Val Arg Ala Asn Gly Glu Thr Thr Val Asp Ala Gln Phe
545 550 555 560
gac gac acg tgg ccc gcg atc ctc acc cac gga aga gtt cgc tat gtg 1728
Asp Asp Thr Trp Pro Ala Ile Leu Thr His Gly Arg Val Arg Tyr Val
565 570 575
gcg ggt tgg ttg tcg cac gcg ttg cat cgc gag gtg ttg cag cgg gcc 1776
Ala Gly Trp Leu Ser His Ala Leu His Arg Glu Val Leu Gln Arg Ala
580 585 590
gcg aaa gat gcc ggc atc gag acg cag cac ctg gct gat ggc ttg cgc 1824
Ala Lys Asp Ala Gly Ile Glu Thr Gln His Leu Ala Asp Gly Leu Arg
595 600 605
att cgc cgg cgc ggc gat ctg acc ttc gcg ttc aac ttc ggg ccg gag 1872
Ile Arg Arg Arg Gly Asp Leu Thr Phe Ala Phe Asn Phe Gly Pro Glu
610 615 620
cca gtg caa gcg cct gcg cca gcc aat gcg acg ttt gtg ctg gga cat 1920
Pro Val Gln Ala Pro Ala Pro Ala Asn Ala Thr Phe Val Leu Gly His
625 630 635 640
tcg gaa ttg aaa acc ggc gac gtc tgc gcg tgg agg aac acg tag 1965
Ser Glu Leu Lys Thr Gly Asp Val Cys Ala Trp Arg Asn Thr
645 650
<210> 50
<211> 654
<212> PRT
<213> Burkholderia sediminicola
<400> 50
Met Gln Leu Gly Val Cys Tyr Tyr Pro Glu Gln Trp Pro Arg Ser Met
1 5 10 15
Trp Ala Asp Asp Ala Lys Arg Met Val Glu Leu Gly Ile Thr His Val
20 25 30
Arg Ile Ala Glu Phe Ala Trp Ser Arg Met Glu Pro Arg Ala Gly Glu
35 40 45
Phe Ala Trp Asp Trp Leu Asp Glu Ala Val Glu Thr Leu Ala Ala Glu
50 55 60
Gly Leu Lys Leu Val Leu Gly Thr Pro Thr Ala Ser Pro Pro Lys Trp
65 70 75 80
Leu Ile Asp Ala His Pro Asp Val Leu Pro Val Arg Ala Asp Gly Val
85 90 95
Arg Trp Asn Phe Gly Ser Arg Arg His Tyr Asp Ile Ser Ser Glu Thr
100 105 110
Tyr Arg Arg Glu Cys Val Arg Ile Val Thr Ala Met Ala Glu Arg Tyr
115 120 125
Gly Arg His Pro Ser Ile Val Ala Trp Gln Thr Asp Asn Glu Leu Gly
130 135 140
Cys His Glu Thr Val Pro Ser Tyr Ser Gly Ala Ala Leu Ala Arg Phe
145 150 155 160
Gln Thr Trp Leu Gln His Arg Tyr Glu Arg Val Glu Ala Leu Asn Asp
165 170 175
Ala Trp Gly Asn Val Phe Trp Ser Met Glu Tyr Pro Ser Phe Asp Thr
180 185 190
Ile Gly Leu Pro Asn Arg Thr Pro Thr Asp Ala Asn Pro Ile His Leu
195 200 205
Leu Asp Phe Arg Arg Phe Met Ser Asp Glu Val Ala Ser Phe His Arg
210 215 220
Glu Gln Ile Asp Val Leu Arg Gln His Ala Pro Lys Ala Asp Leu Leu
225 230 235 240
His Asn Phe Met Gly Phe Phe Thr Thr Phe Asp His Tyr Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Asp Asn Ala Leu Asp Val Ala Thr Trp Asp Ser Tyr Pro Ile Ala
260 265 270
Arg Thr Glu Ser Ile Ala Leu Pro Glu Glu Gln Lys Ala Arg Tyr Ala
275 280 285
Arg Thr Ala His Pro Asp Val Ser Ala Phe Asp His Asp Arg Tyr Arg
290 295 300
Ala Ile Gly Ala Gly Arg Phe Trp Val Met Glu Gln Gln Ala Gly Pro
305 310 315 320
Val Asn Trp Ala Pro Trp Asn Pro Val Pro Ala Lys Gly Met Val Arg
325 330 335
Leu Trp Ala Tyr Glu Ala Phe Ala His Gly Ala Glu Leu Val Ser Tyr
340 345 350
Phe Arg Trp Arg Gln Cys Pro Tyr Ala Gln Glu Gln Met His Ser Gly
355 360 365
Leu Asn Leu Pro Asn Asn Glu Leu Ser Pro Gly Gly Ile Glu Val Gln
370 375 380
Gln Ala Ala His Glu Ile Ala Ser Ser Ala Ala Leu Ser Gly Leu Gly
385 390 395 400
Ala Pro Thr Arg Ala Ala Thr Ala Ile Val Phe Asp Tyr Glu Thr Gln
405 410 415
Trp Met Phe Glu Ile Gln Arg His Gly Lys Thr Phe Asp Tyr Gln Thr
420 425 430
Leu Ala Phe Asp Tyr Tyr Glu Ala Leu Arg Glu Leu Gly Leu Asp Val
435 440 445
Asp Ile Val Ser Ser Lys Ala Asp Leu Ser Pro Tyr Arg Leu Val Val
450 455 460
Val Pro Ser Ile Ala Val Ile Asn Asp Thr Leu Val Asp Gln Ile Glu
465 470 475 480
Gln Ser Ser Ala Gln Trp Val Phe Gly Pro Arg Ser Gly Ser Lys Thr
485 490 495
Thr Thr Phe Ala Ile Pro Ser Ser Leu Pro Pro Gly Ala Leu Gln Arg
500 505 510
Val Leu Pro Met Gln Val Leu Glu Val Glu Thr Leu Arg Pro Thr Leu
515 520 525
Thr Pro Ala Leu Ser Ile Gly Asp Thr Gln Gly Val Ala Leu His Trp
530 535 540
Arg Glu His Val Arg Ala Asn Gly Glu Thr Thr Val Asp Ala Gln Phe
545 550 555 560
Asp Asp Thr Trp Pro Ala Ile Leu Thr His Gly Arg Val Arg Tyr Val
565 570 575
Ala Gly Trp Leu Ser His Ala Leu His Arg Glu Val Leu Gln Arg Ala
580 585 590
Ala Lys Asp Ala Gly Ile Glu Thr Gln His Leu Ala Asp Gly Leu Arg
595 600 605
Ile Arg Arg Arg Gly Asp Leu Thr Phe Ala Phe Asn Phe Gly Pro Glu
610 615 620
Pro Val Gln Ala Pro Ala Pro Ala Asn Ala Thr Phe Val Leu Gly His
625 630 635 640
Ser Glu Leu Lys Thr Gly Asp Val Cys Ala Trp Arg Asn Thr
645 650
<210> 51
<211> 661
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(661)
<400> 51
Met His His His His His His Met Gln Leu Gly Val Cys Tyr Tyr Pro
1 5 10 15
Glu Gln Trp Pro Arg Ser Met Trp Ala Asp Asp Ala Lys Arg Met Val
20 25 30
Glu Leu Gly Ile Thr His Val Arg Ile Ala Glu Phe Ala Trp Ser Arg
35 40 45
Met Glu Pro Arg Ala Gly Glu Phe Ala Trp Asp Trp Leu Asp Glu Ala
50 55 60
Val Glu Thr Leu Ala Ala Glu Gly Leu Lys Leu Val Leu Gly Thr Pro
65 70 75 80
Thr Ala Ser Pro Pro Lys Trp Leu Ile Asp Ala His Pro Asp Val Leu
85 90 95
Pro Val Arg Ala Asp Gly Val Arg Trp Asn Phe Gly Ser Arg Arg His
100 105 110
Tyr Asp Ile Ser Ser Glu Thr Tyr Arg Arg Glu Cys Val Arg Ile Val
115 120 125
Thr Ala Met Ala Glu Arg Tyr Gly Arg His Pro Ser Ile Val Ala Trp
130 135 140
Gln Thr Asp Asn Glu Leu Gly Cys His Glu Thr Val Pro Ser Tyr Ser
145 150 155 160
Gly Ala Ala Leu Ala Arg Phe Gln Thr Trp Leu Gln His Arg Tyr Glu
165 170 175
Arg Val Glu Ala Leu Asn Asp Ala Trp Gly Asn Val Phe Trp Ser Met
180 185 190
Glu Tyr Pro Ser Phe Asp Thr Ile Gly Leu Pro Asn Arg Thr Pro Thr
195 200 205
Asp Ala Asn Pro Ile His Leu Leu Asp Phe Arg Arg Phe Met Ser Asp
210 215 220
Glu Val Ala Ser Phe His Arg Glu Gln Ile Asp Val Leu Arg Gln His
225 230 235 240
Ala Pro Lys Ala Asp Leu Leu His Asn Phe Met Gly Phe Phe Thr Thr
245 250 255
Phe Asp His Tyr Arg Phe Ala Glu Asp Asn Ala Leu Asp Val Ala Thr
260 265 270
Trp Asp Ser Tyr Pro Ile Ala Arg Thr Glu Ser Ile Ala Leu Pro Glu
275 280 285
Glu Gln Lys Ala Arg Tyr Ala Arg Thr Ala His Pro Asp Val Ser Ala
290 295 300
Phe Asp His Asp Arg Tyr Arg Ala Ile Gly Ala Gly Arg Phe Trp Val
305 310 315 320
Met Glu Gln Gln Ala Gly Pro Val Asn Trp Ala Pro Trp Asn Pro Val
325 330 335
Pro Ala Lys Gly Met Val Arg Leu Trp Ala Tyr Glu Ala Phe Ala His
340 345 350
Gly Ala Glu Leu Val Ser Tyr Phe Arg Trp Arg Gln Cys Pro Tyr Ala
355 360 365
Gln Glu Gln Met His Ser Gly Leu Asn Leu Pro Asn Asn Glu Leu Ser
370 375 380
Pro Gly Gly Ile Glu Val Gln Gln Ala Ala His Glu Ile Ala Ser Ser
385 390 395 400
Ala Ala Leu Ser Gly Leu Gly Ala Pro Thr Arg Ala Ala Thr Ala Ile
405 410 415
Val Phe Asp Tyr Glu Thr Gln Trp Met Phe Glu Ile Gln Arg His Gly
420 425 430
Lys Thr Phe Asp Tyr Gln Thr Leu Ala Phe Asp Tyr Tyr Glu Ala Leu
435 440 445
Arg Glu Leu Gly Leu Asp Val Asp Ile Val Ser Ser Lys Ala Asp Leu
450 455 460
Ser Pro Tyr Arg Leu Val Val Val Pro Ser Ile Ala Val Ile Asn Asp
465 470 475 480
Thr Leu Val Asp Gln Ile Glu Gln Ser Ser Ala Gln Trp Val Phe Gly
485 490 495
Pro Arg Ser Gly Ser Lys Thr Thr Thr Phe Ala Ile Pro Ser Ser Leu
500 505 510
Pro Pro Gly Ala Leu Gln Arg Val Leu Pro Met Gln Val Leu Glu Val
515 520 525
Glu Thr Leu Arg Pro Thr Leu Thr Pro Ala Leu Ser Ile Gly Asp Thr
530 535 540
Gln Gly Val Ala Leu His Trp Arg Glu His Val Arg Ala Asn Gly Glu
545 550 555 560
Thr Thr Val Asp Ala Gln Phe Asp Asp Thr Trp Pro Ala Ile Leu Thr
565 570 575
His Gly Arg Val Arg Tyr Val Ala Gly Trp Leu Ser His Ala Leu His
580 585 590
Arg Glu Val Leu Gln Arg Ala Ala Lys Asp Ala Gly Ile Glu Thr Gln
595 600 605
His Leu Ala Asp Gly Leu Arg Ile Arg Arg Arg Gly Asp Leu Thr Phe
610 615 620
Ala Phe Asn Phe Gly Pro Glu Pro Val Gln Ala Pro Ala Pro Ala Asn
625 630 635 640
Ala Thr Phe Val Leu Gly His Ser Glu Leu Lys Thr Gly Asp Val Cys
645 650 655
Ala Trp Arg Asn Thr
660
<210> 52
<211> 2064
<212> DNA
<213> 嗜碱芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2061)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2061)
<400> 52
atg tca aac ttt gag aaa tca cga gtt act aac gca gaa ttt atg ctc 48
Met Ser Asn Phe Glu Lys Ser Arg Val Thr Asn Ala Glu Phe Met Leu
1 5 10 15
cat ggc gga gat tac aac ccc gat caa tgg tta gat cga cct gat ata 96
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
tta gcg gat gat ttg cag ttg atg aaa ttg tcc gat tcg aat aca ttc 144
Leu Ala Asp Asp Leu Gln Leu Met Lys Leu Ser Asp Ser Asn Thr Phe
35 40 45
tcc att ggt att ttt gcc tgg agt gcc ctt gag cca gaa gaa ggt gtt 192
Ser Ile Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
tat cag ttt gaa tgg atg gat gag att ttt aac aat att cac gaa ata 240
Tyr Gln Phe Glu Trp Met Asp Glu Ile Phe Asn Asn Ile His Glu Ile
65 70 75 80
ggt gga aaa gtc att ttg gcg aca ccg agc ggg gct cgt cct gct tgg 288
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tca caa aag tat cca gaa gtg ttg cgt gtc aat gaa aag cgg atg 336
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Glu Lys Arg Met
100 105 110
aag caa ctg cat ggt gga aga cat aat cat tgt ttt agc tct aaa gtg 384
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Lys Val
115 120 125
tac cgc gag aag act caa caa atg aat cgt cta tta gcc aaa aga tat 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Met Asn Arg Leu Leu Ala Lys Arg Tyr
130 135 140
gga aac cat cct gct ctt tta atg tgg cat att tcc aat gaa tat ggt 480
Gly Asn His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggc gaa tgc cat tgt gac aac tgt caa cat gct ttt aga gaa tgg ttg 528
Gly Glu Cys His Cys Asp Asn Cys Gln His Ala Phe Arg Glu Trp Leu
165 170 175
aag tca aag tat aac aat gat tta aaa gca tta aac gac gca tgg tgg 576
Lys Ser Lys Tyr Asn Asn Asp Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
gga cca ttc tgg agt cat aca ttc agc aat tgg tca caa att gaa tct 624
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Ser Asn Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
cca tca cca att ggg gaa agt atg gtt cat ggc tta aac tta gat tgg 672
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Ser Met Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
cga cga ttc gta act gac caa acg att tcc ttt tat gaa aat gaa gtg 720
Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Glu Asn Glu Val
225 230 235 240
gtg cca tta aga gaa gta tcg cct acc att ccg att aca aca aat ttt 768
Val Pro Leu Arg Glu Val Ser Pro Thr Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
atg gct gat aca ttc gat ttg att cca ttc caa ggt ctc gat tat agt 816
Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro Phe Gln Gly Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
aag ttt gcc aaa cac tta gat gtc atc agt tgg gat gct tat ccg gct 864
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
tgg cat aat gat tgg gaa acg acc gcc aat tta gcg atg aaa gtc ggc 912
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asn Leu Ala Met Lys Val Gly
290 295 300
ttt att aat gat tta tat cga agc atg aag cag caa ccg ttc ttg ttg 960
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Met Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
atg gag tct acg cca agc ggg gtt aac tgg cat agt gtg aat aaa gtc 1008
Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly Val Asn Trp His Ser Val Asn Lys Val
325 330 335
aaa cgt cct gga atg cat tta ctt tcc tcg atg caa atg att gcc cat 1056
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala His
340 345 350
ggt tct gat agt gtg ctt tat ttc cag tgg aga aaa tca aga ggt tct 1104
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
tct gag aag ttt cat ggt gca gtg gtg gac cat gat aat agt gct gag 1152
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ala Glu
370 375 380
aat cgt gtg ttt aag gaa gtc gct caa gtt ggc gaa act tta aaa gca 1200
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Gln Val Gly Glu Thr Leu Lys Ala
385 390 395 400
ctt cct aat gtt gtc ggt act aac cgt ccg tcg gaa gtg gcg att ttg 1248
Leu Pro Asn Val Val Gly Thr Asn Arg Pro Ser Glu Val Ala Ile Leu
405 410 415
tat gat tgg gaa aac aat tgg gca ctc aat gat gca caa ggg ttt ggc 1296
Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
atg gag aca aaa cgt tat cca caa acg ttg caa gaa cat tat cgt cca 1344
Met Glu Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Glu His Tyr Arg Pro
435 440 445
ttt tgg gaa aag gac att cca gtt gat gtc att acg aaa gaa caa gat 1392
Phe Trp Glu Lys Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp
450 455 460
ttt tct gcg tat aaa ttg tta atc gtt ccg atg ttg tat tta gtg agt 1440
Phe Ser Ala Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser
465 470 475 480
gaa gat acg att tca cga tta aaa gcg ttt gtc gca aat ggc ggt aga 1488
Glu Asp Thr Ile Ser Arg Leu Lys Ala Phe Val Ala Asn Gly Gly Arg
485 490 495
ttg gtc atg act tat ata agt gga att gta aat gaa tac gat ttg acg 1536
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile Val Asn Glu Tyr Asp Leu Thr
500 505 510
tat tta ggt gga tgg cat tca gct ctt caa gaa atg ttt gga att aag 1584
Tyr Leu Gly Gly Trp His Ser Ala Leu Gln Glu Met Phe Gly Ile Lys
515 520 525
cca ctt gaa acg gat acg tat tat cca aat gat aaa aat tac gtt cag 1632
Pro Leu Glu Thr Asp Thr Tyr Tyr Pro Asn Asp Lys Asn Tyr Val Gln
530 535 540
tat cat aat aag tcg tat gta tta aaa gat tat gca acg gta ctt gag 1680
Tyr His Asn Lys Ser Tyr Val Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Leu Glu
545 550 555 560
gtt cat tct gca aaa gta gaa ggg caa tac ctt gaa gat ttt tat gca 1728
Val His Ser Ala Lys Val Glu Gly Gln Tyr Leu Glu Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
cat aca cca gcc gta aca agc cat tct tat aaa gaa gga aaa act tat 1776
His Thr Pro Ala Val Thr Ser His Ser Tyr Lys Glu Gly Lys Thr Tyr
580 585 590
tat att ggg gca cgt tta gaa gcc gat ttc caa cgc gat ttt tat aat 1824
Tyr Ile Gly Ala Arg Leu Glu Ala Asp Phe Gln Arg Asp Phe Tyr Asn
595 600 605
caa gtg att gag gat ttg gca tta gag tct gta agt caa gtg aaa cat 1872
Gln Val Ile Glu Asp Leu Ala Leu Glu Ser Val Ser Gln Val Lys His
610 615 620
gga aaa ggc gtc tcc gtt caa gca aga caa gac gaa gaa aat gat tat 1920
Gly Lys Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Asp Glu Glu Asn Asp Tyr
625 630 635 640
cta ttt gtt atg aat ttt acg gaa gaa agt caa aca gta gag ttt cca 1968
Leu Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Glu Ser Gln Thr Val Glu Phe Pro
645 650 655
tca acc gtt caa gat ctt gtc acc aat gaa aag ctg tac ggg gat gtc 2016
Ser Thr Val Gln Asp Leu Val Thr Asn Glu Lys Leu Tyr Gly Asp Val
660 665 670
acc cta gag aag tat gaa gta aga att gtt caa caa cca aga gtt taa 2064
Thr Leu Glu Lys Tyr Glu Val Arg Ile Val Gln Gln Pro Arg Val
675 680 685
<210> 53
<211> 687
<212> PRT
<213> 嗜碱芽孢杆菌
<400> 53
Met Ser Asn Phe Glu Lys Ser Arg Val Thr Asn Ala Glu Phe Met Leu
1 5 10 15
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
Leu Ala Asp Asp Leu Gln Leu Met Lys Leu Ser Asp Ser Asn Thr Phe
35 40 45
Ser Ile Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
Tyr Gln Phe Glu Trp Met Asp Glu Ile Phe Asn Asn Ile His Glu Ile
65 70 75 80
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Glu Lys Arg Met
100 105 110
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Lys Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Met Asn Arg Leu Leu Ala Lys Arg Tyr
130 135 140
Gly Asn His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Asp Asn Cys Gln His Ala Phe Arg Glu Trp Leu
165 170 175
Lys Ser Lys Tyr Asn Asn Asp Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Ser Asn Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Ser Met Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Glu Asn Glu Val
225 230 235 240
Val Pro Leu Arg Glu Val Ser Pro Thr Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro Phe Gln Gly Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asn Leu Ala Met Lys Val Gly
290 295 300
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Met Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly Val Asn Trp His Ser Val Asn Lys Val
325 330 335
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ala Glu
370 375 380
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Gln Val Gly Glu Thr Leu Lys Ala
385 390 395 400
Leu Pro Asn Val Val Gly Thr Asn Arg Pro Ser Glu Val Ala Ile Leu
405 410 415
Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
Met Glu Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Glu His Tyr Arg Pro
435 440 445
Phe Trp Glu Lys Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp
450 455 460
Phe Ser Ala Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser
465 470 475 480
Glu Asp Thr Ile Ser Arg Leu Lys Ala Phe Val Ala Asn Gly Gly Arg
485 490 495
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile Val Asn Glu Tyr Asp Leu Thr
500 505 510
Tyr Leu Gly Gly Trp His Ser Ala Leu Gln Glu Met Phe Gly Ile Lys
515 520 525
Pro Leu Glu Thr Asp Thr Tyr Tyr Pro Asn Asp Lys Asn Tyr Val Gln
530 535 540
Tyr His Asn Lys Ser Tyr Val Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Leu Glu
545 550 555 560
Val His Ser Ala Lys Val Glu Gly Gln Tyr Leu Glu Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
His Thr Pro Ala Val Thr Ser His Ser Tyr Lys Glu Gly Lys Thr Tyr
580 585 590
Tyr Ile Gly Ala Arg Leu Glu Ala Asp Phe Gln Arg Asp Phe Tyr Asn
595 600 605
Gln Val Ile Glu Asp Leu Ala Leu Glu Ser Val Ser Gln Val Lys His
610 615 620
Gly Lys Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Asp Glu Glu Asn Asp Tyr
625 630 635 640
Leu Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Glu Ser Gln Thr Val Glu Phe Pro
645 650 655
Ser Thr Val Gln Asp Leu Val Thr Asn Glu Lys Leu Tyr Gly Asp Val
660 665 670
Thr Leu Glu Lys Tyr Glu Val Arg Ile Val Gln Gln Pro Arg Val
675 680 685
<210> 54
<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(694)
<400> 54
Met His His His His His His Met Ser Asn Phe Glu Lys Ser Arg Val
1 5 10 15
Thr Asn Ala Glu Phe Met Leu His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln
20 25 30
Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile Leu Ala Asp Asp Leu Gln Leu Met Lys
35 40 45
Leu Ser Asp Ser Asn Thr Phe Ser Ile Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala
50 55 60
Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val Tyr Gln Phe Glu Trp Met Asp Glu Ile
65 70 75 80
Phe Asn Asn Ile His Glu Ile Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro
85 90 95
Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu
100 105 110
Arg Val Asn Glu Lys Arg Met Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn
115 120 125
His Cys Phe Ser Ser Lys Val Tyr Arg Glu Lys Thr Gln Gln Met Asn
130 135 140
Arg Leu Leu Ala Lys Arg Tyr Gly Asn His Pro Ala Leu Leu Met Trp
145 150 155 160
His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly Gly Glu Cys His Cys Asp Asn Cys Gln
165 170 175
His Ala Phe Arg Glu Trp Leu Lys Ser Lys Tyr Asn Asn Asp Leu Lys
180 185 190
Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Ser
195 200 205
Asn Trp Ser Gln Ile Glu Ser Pro Ser Pro Ile Gly Glu Ser Met Val
210 215 220
His Gly Leu Asn Leu Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile
225 230 235 240
Ser Phe Tyr Glu Asn Glu Val Val Pro Leu Arg Glu Val Ser Pro Thr
245 250 255
Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro
260 265 270
Phe Gln Gly Leu Asp Tyr Ser Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile
275 280 285
Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala
290 295 300
Asn Leu Ala Met Lys Val Gly Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Met
305 310 315 320
Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly Val Asn
325 330 335
Trp His Ser Val Asn Lys Val Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser
340 345 350
Ser Met Gln Met Ile Ala His Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln
355 360 365
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
370 375 380
Asp His Asp Asn Ser Ala Glu Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Gln
385 390 395 400
Val Gly Glu Thr Leu Lys Ala Leu Pro Asn Val Val Gly Thr Asn Arg
405 410 415
Pro Ser Glu Val Ala Ile Leu Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu
420 425 430
Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly Met Glu Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr
435 440 445
Leu Gln Glu His Tyr Arg Pro Phe Trp Glu Lys Asp Ile Pro Val Asp
450 455 460
Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp Phe Ser Ala Tyr Lys Leu Leu Ile Val
465 470 475 480
Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser Glu Asp Thr Ile Ser Arg Leu Lys Ala
485 490 495
Phe Val Ala Asn Gly Gly Arg Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile
500 505 510
Val Asn Glu Tyr Asp Leu Thr Tyr Leu Gly Gly Trp His Ser Ala Leu
515 520 525
Gln Glu Met Phe Gly Ile Lys Pro Leu Glu Thr Asp Thr Tyr Tyr Pro
530 535 540
Asn Asp Lys Asn Tyr Val Gln Tyr His Asn Lys Ser Tyr Val Leu Lys
545 550 555 560
Asp Tyr Ala Thr Val Leu Glu Val His Ser Ala Lys Val Glu Gly Gln
565 570 575
Tyr Leu Glu Asp Phe Tyr Ala His Thr Pro Ala Val Thr Ser His Ser
580 585 590
Tyr Lys Glu Gly Lys Thr Tyr Tyr Ile Gly Ala Arg Leu Glu Ala Asp
595 600 605
Phe Gln Arg Asp Phe Tyr Asn Gln Val Ile Glu Asp Leu Ala Leu Glu
610 615 620
Ser Val Ser Gln Val Lys His Gly Lys Gly Val Ser Val Gln Ala Arg
625 630 635 640
Gln Asp Glu Glu Asn Asp Tyr Leu Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Glu
645 650 655
Ser Gln Thr Val Glu Phe Pro Ser Thr Val Gln Asp Leu Val Thr Asn
660 665 670
Glu Lys Leu Tyr Gly Asp Val Thr Leu Glu Lys Tyr Glu Val Arg Ile
675 680 685
Val Gln Gln Pro Arg Val
690
<210> 55
<211> 2061
<212> DNA
<213> 芽孢杆菌属物种-11182
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2058)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2058)
<400> 55
atg tca aca cta aag aaa aca caa gtg aca aaa gcg gat ttt atg ctt 48
Met Ser Thr Leu Lys Lys Thr Gln Val Thr Lys Ala Asp Phe Met Leu
1 5 10 15
cat gga ggc gat tat aat cct gat cag tgg ctg gac cgc cct gat ata 96
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
ctg gca gat gac atc aaa ctg atg aag ctt gcg cat aca aat acc ttt 144
Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Lys Leu Ala His Thr Asn Thr Phe
35 40 45
tca gtg ggg atc ttc gcc tgg agc gcc ctt gaa cct gag gaa ggg cat 192
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly His
50 55 60
ttt acc ttc gaa tgg ctt gat gag atc atc aat aat atc gac gga atc 240
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Glu Ile Ile Asn Asn Ile Asp Gly Ile
65 70 75 80
ggc ggc aag gta atc ctt gct act cca agc ggc gcc cgc cct gca tgg 288
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tcg cag aag tat cct gag gtc ctc agg gta aac ggg gag agg gtc 336
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Gly Glu Arg Val
100 105 110
aaa cag ctt cat ggc ggc agg cac aac cat tgc ttt acg tct gag gtc 384
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val
115 120 125
tac cgc gag aaa act cgg aag atc aac agg ctc ctt gct gaa aga tat 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Arg Lys Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
gca ggc cac cct gcg ctc ctg atg tgg cac att tcc aat gag tat ggc 480
Ala Gly His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggg gaa tgc cac tgc agc agc tgc cag gca gcc ttc cgg aac tgg ctg 528
Gly Glu Cys His Cys Ser Ser Cys Gln Ala Ala Phe Arg Asn Trp Leu
165 170 175
aaa gag aaa tac aat cat aat ctc aaa gca ttg aat gac gcc tgg tgg 576
Lys Glu Lys Tyr Asn His Asn Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
ggt cct ttc tgg agc cat act ttc agc gat tgg gaa cag atc gag tcc 624
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Ser Asp Trp Glu Gln Ile Glu Ser
195 200 205
cct tcg ccg atc ggg gaa aat gct gtt cac ggc ctt aac ctg gat tgg 672
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Asn Ala Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
cgc cgc ttt ata aca gac cag acg atc tct ttt tat aaa aac gaa atc 720
Arg Arg Phe Ile Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Lys Asn Glu Ile
225 230 235 240
gta cct tta agg gag att aca ccc ggt att cca atc aca acc aat ttc 768
Val Pro Leu Arg Glu Ile Thr Pro Gly Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
atg gca gat aca atg gat ctt atc ccg ttc cag gcc ctt gat tat tcc 816
Met Ala Asp Thr Met Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ala Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
aag ttt gcc aag cat ctg gat gtc atc agc tgg gat gcc tat cct gcc 864
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
tgg cat aat gac tgg gag tcc aca gcg aat ctt gcc atg aag aca gct 912
Trp His Asn Asp Trp Glu Ser Thr Ala Asn Leu Ala Met Lys Thr Ala
290 295 300
ttt atc gat gat tta tat cgc agt ctg aaa cag cag ccg ttt ctg ctg 960
Phe Ile Asp Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
atg gag tct acg cca agc gct gta aac tgg cac cct gtc aat aaa gcg 1008
Met Glu Ser Thr Pro Ser Ala Val Asn Trp His Pro Val Asn Lys Ala
325 330 335
aag cgt ccc ggc atg cac ctt tta tct tcc atg cag atg atc gcc cac 1056
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala His
340 345 350
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Gly Ser Asp Ser Val Met Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
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tct gag aag ttc cat gga gcg gtt gta gac cat gat aat agt gcc gat 1152
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ala Asp
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aac cgg gtc ttc aag gaa gtc gcg gca gtg ggt gaa act ctt gaa aag 1200
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Ala Val Gly Glu Thr Leu Glu Lys
385 390 395 400
ctt tct gct gtc gta gga acc agc cgc cct gct gaa gct gcc atc ctg 1248
Leu Ser Ala Val Val Gly Thr Ser Arg Pro Ala Glu Ala Ala Ile Leu
405 410 415
tat gac tgg gaa agc aat tgg gcc ctg aac gat gcc cag ggg ttc ggt 1296
Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
ctg gaa acg aaa caa tat ccg caa aca ctg cag gaa cat tac cgc acc 1344
Leu Glu Thr Lys Gln Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Glu His Tyr Arg Thr
435 440 445
ttc tgg gaa aaa gat att cca gtg gat gtc atc aca aaa gag cag gat 1392
Phe Trp Glu Lys Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp
450 455 460
ttt acg gca tac aag ctg att atc gcc ccg atg ctg tat ctg gca agc 1440
Phe Thr Ala Tyr Lys Leu Ile Ile Ala Pro Met Leu Tyr Leu Ala Ser
465 470 475 480
aaa gaa acg att gca agg ctg aaa tcc ttt gtg gcc ggc ggc ggt aca 1488
Lys Glu Thr Ile Ala Arg Leu Lys Ser Phe Val Ala Gly Gly Gly Thr
485 490 495
ctg gtt atg tcc tat atc agc ggt gtg gtt gac gaa aat gat ctt gtc 1536
Leu Val Met Ser Tyr Ile Ser Gly Val Val Asp Glu Asn Asp Leu Val
500 505 510
cat ttt ggc gga tgg ccg ctg gac ctt cag gaa acc ttc ggg ctg aag 1584
His Phe Gly Gly Trp Pro Leu Asp Leu Gln Glu Thr Phe Gly Leu Lys
515 520 525
cct gtc gag act gat act tta tat cct ggg gac agc aac cag gta act 1632
Pro Val Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Gln Val Thr
530 535 540
tat aaa gac aaa caa tat atg ctg aaa gat tat gcg act gtt att gag 1680
Tyr Lys Asp Lys Gln Tyr Met Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Ile Glu
545 550 555 560
ctg gcc ggc gca aaa gcc gac ggg aca tat gaa cag gat ttc tat gct 1728
Leu Ala Gly Ala Lys Ala Asp Gly Thr Tyr Glu Gln Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
ggc ctc ccg gct gtc aca agc cac cag tat aaa gaa gga aac gct tat 1776
Gly Leu Pro Ala Val Thr Ser His Gln Tyr Lys Glu Gly Asn Ala Tyr
580 585 590
tat atc gga ggc cgc ctg gat gca gaa ttc cac cgg gat ttt tac agc 1824
Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Asp Ala Glu Phe His Arg Asp Phe Tyr Ser
595 600 605
aga ttg atg gcc gga ttg agc ttg aag gct gcc ttc cct gtc aag cat 1872
Arg Leu Met Ala Gly Leu Ser Leu Lys Ala Ala Phe Pro Val Lys His
610 615 620
gag agc ggg gtt tct gtg cag gta agg caa gat ggg gaa aag gat tat 1920
Glu Ser Gly Val Ser Val Gln Val Arg Gln Asp Gly Glu Lys Asp Tyr
625 630 635 640
ata ttt gtc atg aac ttc act gaa gag aag cag act gcg gtt ttt gag 1968
Ile Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Glu Lys Gln Thr Ala Val Phe Glu
645 650 655
cag cag gca aaa gat att ctg act aac gaa gaa ctg tcc ggt gaa gtc 2016
Gln Gln Ala Lys Asp Ile Leu Thr Asn Glu Glu Leu Ser Gly Glu Val
660 665 670
agt ttg aat cct tac gaa gtt aag ata gca gaa aga acc aga taa 2061
Ser Leu Asn Pro Tyr Glu Val Lys Ile Ala Glu Arg Thr Arg
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<210> 56
<211> 686
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种-11182
<400> 56
Met Ser Thr Leu Lys Lys Thr Gln Val Thr Lys Ala Asp Phe Met Leu
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His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
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Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Lys Leu Ala His Thr Asn Thr Phe
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Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly His
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Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Glu Ile Ile Asn Asn Ile Asp Gly Ile
65 70 75 80
Gly Gly Lys Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Gly Glu Arg Val
100 105 110
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Thr Arg Lys Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Ala Gly His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Ser Ser Cys Gln Ala Ala Phe Arg Asn Trp Leu
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Lys Glu Lys Tyr Asn His Asn Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Ser Asp Trp Glu Gln Ile Glu Ser
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Arg Arg Phe Ile Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Lys Asn Glu Ile
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Val Pro Leu Arg Glu Ile Thr Pro Gly Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
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260 265 270
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
Trp His Asn Asp Trp Glu Ser Thr Ala Asn Leu Ala Met Lys Thr Ala
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Phe Ile Asp Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
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Met Glu Ser Thr Pro Ser Ala Val Asn Trp His Pro Val Asn Lys Ala
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Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Met Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ala Asp
370 375 380
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Ala Val Gly Glu Thr Leu Glu Lys
385 390 395 400
Leu Ser Ala Val Val Gly Thr Ser Arg Pro Ala Glu Ala Ala Ile Leu
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Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
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435 440 445
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485 490 495
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675 680 685
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<211> 695
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
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65 70 75 80
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85 90 95
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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485 490 495
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515 520 525
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530 535 540
Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Gln Val Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Tyr Met
545 550 555 560
Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Ile Glu Leu Ala Gly Ala Lys Ala Asp
565 570 575
Gly Thr Tyr Glu Gln Asp Phe Tyr Ala Gly Leu Pro Ala Val Thr Ser
580 585 590
His Gln Tyr Lys Glu Gly Asn Ala Tyr Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Asp
595 600 605
Ala Glu Phe His Arg Asp Phe Tyr Ser Arg Leu Met Ala Gly Leu Ser
610 615 620
Leu Lys Ala Ala Phe Pro Val Lys His Glu Ser Gly Val Ser Val Gln
625 630 635 640
Val Arg Gln Asp Gly Glu Lys Asp Tyr Ile Phe Val Met Asn Phe Thr
645 650 655
Glu Glu Lys Gln Thr Ala Val Phe Glu Gln Gln Ala Lys Asp Ile Leu
660 665 670
Thr Asn Glu Glu Leu Ser Gly Glu Val Ser Leu Asn Pro Tyr Glu Val
675 680 685
Lys Ile Ala Glu Arg Thr Arg
690 695
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<212> DNA
<213> 芽孢杆菌属物种-62759
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2064)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2064)
<400> 58
atg cct gac aat gaa aaa act tac gtg aca aaa gca aac ttt atg ctt 48
Met Pro Asp Asn Glu Lys Thr Tyr Val Thr Lys Ala Asn Phe Met Leu
1 5 10 15
cat ggt ggc gat tat aac cca gat cag tgg tta gac cga cct gat atc 96
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
ctt gcc gat gat gtg aag tta atg aag cta tca cat tca aat act ttt 144
Leu Ala Asp Asp Val Lys Leu Met Lys Leu Ser His Ser Asn Thr Phe
35 40 45
tcg gtt gga att ttt gca tgg agt gca ctt gaa cca caa gaa ggt gtc 192
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Gln Glu Gly Val
50 55 60
tac caa ttt gaa tgg tta gat gag atc ttc gag aat att tac aaa att 240
Tyr Gln Phe Glu Trp Leu Asp Glu Ile Phe Glu Asn Ile Tyr Lys Ile
65 70 75 80
ggt ggt cgt gtg att ttg gcg acc cca agt ggt gct cgt cca gcg tgg 288
Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tca gca aag tac cca gaa gtg ctt cgc gtt aat agt tca aga gtg 336
Met Ser Ala Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Ser Ser Arg Val
100 105 110
aaa cag cta cat ggg ggg cga cat aat cat tgt ttc aca tca gaa gtg 384
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val
115 120 125
tac cgt gat aaa acc cag gaa atg aat cga tta tta gct gag aga tat 432
Tyr Arg Asp Lys Thr Gln Glu Met Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
gga agt cat cca gcc tta ctg atg tgg cat atc tca aat gag tat ggt 480
Gly Ser His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggc gag tgt cac tgt gat aag tgt cag act gca ttt aga agc tgg gtt 528
Gly Glu Cys His Cys Asp Lys Cys Gln Thr Ala Phe Arg Ser Trp Val
165 170 175
aag cga aaa tat aat gat gat tta aaa gcg tta aat gac gca tgg tgg 576
Lys Arg Lys Tyr Asn Asp Asp Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
gga ccg ttc tgg agc cat aca att agt gat tgg tca cag gta gaa tct 624
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Ile Ser Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser
195 200 205
cct tct ccg att ggg gaa aat atg gtt cat ggc ctg aac ttg gat tgg 672
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Asn Met Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
cgt aga ttt att aca gac caa acg atc tca ttc tat caa aac gaa att 720
Arg Arg Phe Ile Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Gln Asn Glu Ile
225 230 235 240
gta ccg ctc aga aag ttg act cca gaa att cca att aca acg aat ttc 768
Val Pro Leu Arg Lys Leu Thr Pro Glu Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
atg gca gac aca cat gat ctt att cct ttt cag gca ttg gat tac agc 816
Met Ala Asp Thr His Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ala Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
aag ttt gct aag cat tta gat gtg att agc tgg gat gcg tat cca gct 864
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
tgg cat aat gat tgg gaa acc aca gct gac tta gcg gca aaa gta gcg 912
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asp Leu Ala Ala Lys Val Ala
290 295 300
ttt ata aat gat ttg tat cgt agc cta aag caa caa ccg ttc ttg tta 960
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
atg gag tca acc cct agt gga gtt aat tgg cat gaa gta aat aag gct 1008
Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly Val Asn Trp His Glu Val Asn Lys Ala
325 330 335
aaa agg ccg gga atg cac cta tta tca tca ctc caa atg gta gca cat 1056
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Leu Gln Met Val Ala His
340 345 350
gga tct gat agt gtc ctt tat ttc cag tgg cga aag tct cgg gga tct 1104
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
tca gag aaa ttt cat ggt gcg gtt gtt gat cat gat aac agc tcg gaa 1152
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ser Glu
370 375 380
aat cgt gta ttt aaa gaa gtt gct agc tta gga gaa aaa ttg gag aaa 1200
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Ser Leu Gly Glu Lys Leu Glu Lys
385 390 395 400
ctc acg gat gtt gta ggt gcg aat cgt cct gct gat gtt gct gta ctg 1248
Leu Thr Asp Val Val Gly Ala Asn Arg Pro Ala Asp Val Ala Val Leu
405 410 415
tat gac tgg gag agt aat tgg gcg tta aat gat gcc caa ggc ttc ggg 1296
Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
gta aag acg aag ctg tat cct caa aca ctt caa caa cat cac aaa tca 1344
Val Lys Thr Lys Leu Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Gln His His Lys Ser
435 440 445
ttc tgg gag agg gat att cca gtt gat gta att aca aag gaa cag gat 1392
Phe Trp Glu Arg Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp
450 455 460
ttc gcg gct tac aaa cta ctt att gtt cca atg ctc tac ctt gta agt 1440
Phe Ala Ala Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser
465 470 475 480
gaa gaa acc att tca cgc ttg aaa acc tat gtt gcc aac ggt ggc act 1488
Glu Glu Thr Ile Ser Arg Leu Lys Thr Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr
485 490 495
ttg gtg atg act tat att agt ggt ttg gtt aat gag cat gac tta acg 1536
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Leu Val Asn Glu His Asp Leu Thr
500 505 510
tat tta ggt ggg tgg cat aag gat ctt caa gaa atc ttt gga atg aag 1584
Tyr Leu Gly Gly Trp His Lys Asp Leu Gln Glu Ile Phe Gly Met Lys
515 520 525
cca gtt gaa aca gat aca tta tat cca tct gat tct aat acg gtg aat 1632
Pro Val Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Ser Asp Ser Asn Thr Val Asn
530 535 540
tac cac ggt gac act tat caa tta aag gat tat gca agt att cta gaa 1680
Tyr His Gly Asp Thr Tyr Gln Leu Lys Asp Tyr Ala Ser Ile Leu Glu
545 550 555 560
gtc gat acg gct act gtt gaa ggt atg tat gtt gat gac ttc tat gca 1728
Val Asp Thr Ala Thr Val Glu Gly Met Tyr Val Asp Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
aat aca gct gct att aca agc aat caa tat caa aat ggc aaa acg tat 1776
Asn Thr Ala Ala Ile Thr Ser Asn Gln Tyr Gln Asn Gly Lys Thr Tyr
580 585 590
tat att ggt gct cgc atg gaa cat gga ttt cag cag gcc ttt tat caa 1824
Tyr Ile Gly Ala Arg Met Glu His Gly Phe Gln Gln Ala Phe Tyr Gln
595 600 605
gaa tta att gaa gaa tta tca ctg gcc cct gtt gca tca gtt aaa cat 1872
Glu Leu Ile Glu Glu Leu Ser Leu Ala Pro Val Ala Ser Val Lys His
610 615 620
aat gaa ggt gtt tca gtg caa gta aga caa ggt cca gaa agt gat tat 1920
Asn Glu Gly Val Ser Val Gln Val Arg Gln Gly Pro Glu Ser Asp Tyr
625 630 635 640
atc ttt gtt atg aac ttt act gaa aag aaa caa tca gtc acc ttc gac 1968
Ile Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Lys Lys Gln Ser Val Thr Phe Asp
645 650 655
tca cag gtt aca gat ctg ctg acg gga gaa gct gtt tct agc gag gtt 2016
Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu Thr Gly Glu Ala Val Ser Ser Glu Val
660 665 670
gtg ttg gat ata tat gag gtg aaa att gta gag aag gtt aga ggt aag 2064
Val Leu Asp Ile Tyr Glu Val Lys Ile Val Glu Lys Val Arg Gly Lys
675 680 685
tag 2067
<210> 59
<211> 688
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种-62759
<400> 59
Met Pro Asp Asn Glu Lys Thr Tyr Val Thr Lys Ala Asn Phe Met Leu
1 5 10 15
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
Leu Ala Asp Asp Val Lys Leu Met Lys Leu Ser His Ser Asn Thr Phe
35 40 45
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Gln Glu Gly Val
50 55 60
Tyr Gln Phe Glu Trp Leu Asp Glu Ile Phe Glu Asn Ile Tyr Lys Ile
65 70 75 80
Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Met Ser Ala Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Ser Ser Arg Val
100 105 110
Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val
115 120 125
Tyr Arg Asp Lys Thr Gln Glu Met Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Gly Ser His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Asp Lys Cys Gln Thr Ala Phe Arg Ser Trp Val
165 170 175
Lys Arg Lys Tyr Asn Asp Asp Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp
180 185 190
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Ile Ser Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Asn Met Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
Arg Arg Phe Ile Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Gln Asn Glu Ile
225 230 235 240
Val Pro Leu Arg Lys Leu Thr Pro Glu Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
Met Ala Asp Thr His Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ala Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Ala Asp Leu Ala Ala Lys Val Ala
290 295 300
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly Val Asn Trp His Glu Val Asn Lys Ala
325 330 335
Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Leu Gln Met Val Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Ser Glu
370 375 380
Asn Arg Val Phe Lys Glu Val Ala Ser Leu Gly Glu Lys Leu Glu Lys
385 390 395 400
Leu Thr Asp Val Val Gly Ala Asn Arg Pro Ala Asp Val Ala Val Leu
405 410 415
Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
420 425 430
Val Lys Thr Lys Leu Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Gln His His Lys Ser
435 440 445
Phe Trp Glu Arg Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp
450 455 460
Phe Ala Ala Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser
465 470 475 480
Glu Glu Thr Ile Ser Arg Leu Lys Thr Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr
485 490 495
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Leu Val Asn Glu His Asp Leu Thr
500 505 510
Tyr Leu Gly Gly Trp His Lys Asp Leu Gln Glu Ile Phe Gly Met Lys
515 520 525
Pro Val Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Ser Asp Ser Asn Thr Val Asn
530 535 540
Tyr His Gly Asp Thr Tyr Gln Leu Lys Asp Tyr Ala Ser Ile Leu Glu
545 550 555 560
Val Asp Thr Ala Thr Val Glu Gly Met Tyr Val Asp Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
Asn Thr Ala Ala Ile Thr Ser Asn Gln Tyr Gln Asn Gly Lys Thr Tyr
580 585 590
Tyr Ile Gly Ala Arg Met Glu His Gly Phe Gln Gln Ala Phe Tyr Gln
595 600 605
Glu Leu Ile Glu Glu Leu Ser Leu Ala Pro Val Ala Ser Val Lys His
610 615 620
Asn Glu Gly Val Ser Val Gln Val Arg Gln Gly Pro Glu Ser Asp Tyr
625 630 635 640
Ile Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Lys Lys Gln Ser Val Thr Phe Asp
645 650 655
Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu Thr Gly Glu Ala Val Ser Ser Glu Val
660 665 670
Val Leu Asp Ile Tyr Glu Val Lys Ile Val Glu Lys Val Arg Gly Lys
675 680 685
<210> 60
<211> 697
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(697)
<400> 60
Met His His His His His His Pro Arg Met Pro Asp Asn Glu Lys Thr
1 5 10 15
Tyr Val Thr Lys Ala Asn Phe Met Leu His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro
20 25 30
Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile Leu Ala Asp Asp Val Lys Leu
35 40 45
Met Lys Leu Ser His Ser Asn Thr Phe Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp
50 55 60
Ser Ala Leu Glu Pro Gln Glu Gly Val Tyr Gln Phe Glu Trp Leu Asp
65 70 75 80
Glu Ile Phe Glu Asn Ile Tyr Lys Ile Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala
85 90 95
Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Met Ser Ala Lys Tyr Pro Glu
100 105 110
Val Leu Arg Val Asn Ser Ser Arg Val Lys Gln Leu His Gly Gly Arg
115 120 125
His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val Tyr Arg Asp Lys Thr Gln Glu
130 135 140
Met Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr Gly Ser His Pro Ala Leu Leu
145 150 155 160
Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly Gly Glu Cys His Cys Asp Lys
165 170 175
Cys Gln Thr Ala Phe Arg Ser Trp Val Lys Arg Lys Tyr Asn Asp Asp
180 185 190
Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Gly Pro Phe Trp Ser His Thr
195 200 205
Ile Ser Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro Ser Pro Ile Gly Glu Asn
210 215 220
Met Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp Arg Arg Phe Ile Thr Asp Gln
225 230 235 240
Thr Ile Ser Phe Tyr Gln Asn Glu Ile Val Pro Leu Arg Lys Leu Thr
245 250 255
Pro Glu Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met Ala Asp Thr His Asp Leu
260 265 270
Ile Pro Phe Gln Ala Leu Asp Tyr Ser Lys Phe Ala Lys His Leu Asp
275 280 285
Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala Trp His Asn Asp Trp Glu Thr
290 295 300
Thr Ala Asp Leu Ala Ala Lys Val Ala Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg
305 310 315 320
Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Gly
325 330 335
Val Asn Trp His Glu Val Asn Lys Ala Lys Arg Pro Gly Met His Leu
340 345 350
Leu Ser Ser Leu Gln Met Val Ala His Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr
355 360 365
Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala
370 375 380
Val Val Asp His Asp Asn Ser Ser Glu Asn Arg Val Phe Lys Glu Val
385 390 395 400
Ala Ser Leu Gly Glu Lys Leu Glu Lys Leu Thr Asp Val Val Gly Ala
405 410 415
Asn Arg Pro Ala Asp Val Ala Val Leu Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp
420 425 430
Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly Val Lys Thr Lys Leu Tyr Pro
435 440 445
Gln Thr Leu Gln Gln His His Lys Ser Phe Trp Glu Arg Asp Ile Pro
450 455 460
Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln Asp Phe Ala Ala Tyr Lys Leu Leu
465 470 475 480
Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser Glu Glu Thr Ile Ser Arg Leu
485 490 495
Lys Thr Tyr Val Ala Asn Gly Gly Thr Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser
500 505 510
Gly Leu Val Asn Glu His Asp Leu Thr Tyr Leu Gly Gly Trp His Lys
515 520 525
Asp Leu Gln Glu Ile Phe Gly Met Lys Pro Val Glu Thr Asp Thr Leu
530 535 540
Tyr Pro Ser Asp Ser Asn Thr Val Asn Tyr His Gly Asp Thr Tyr Gln
545 550 555 560
Leu Lys Asp Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Val Asp Thr Ala Thr Val Glu
565 570 575
Gly Met Tyr Val Asp Asp Phe Tyr Ala Asn Thr Ala Ala Ile Thr Ser
580 585 590
Asn Gln Tyr Gln Asn Gly Lys Thr Tyr Tyr Ile Gly Ala Arg Met Glu
595 600 605
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Leu Ala Pro Val Ala Ser Val Lys His Asn Glu Gly Val Ser Val Gln
625 630 635 640
Val Arg Gln Gly Pro Glu Ser Asp Tyr Ile Phe Val Met Asn Phe Thr
645 650 655
Glu Lys Lys Gln Ser Val Thr Phe Asp Ser Gln Val Thr Asp Leu Leu
660 665 670
Thr Gly Glu Ala Val Ser Ser Glu Val Val Leu Asp Ile Tyr Glu Val
675 680 685
Lys Ile Val Glu Lys Val Arg Gly Lys
690 695
<210> 61
<211> 2076
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种-18054
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2073)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2073)
<400> 61
atg aca aaa ccg aaa cgt tat tcg ccg atc agc gcc aag ctg ccg gta 48
Met Thr Lys Pro Lys Arg Tyr Ser Pro Ile Ser Ala Lys Leu Pro Val
1 5 10 15
ttt atg cac gga gcg gac tat aac ccg gat caa tgg ctg gac cgg ccc 96
Phe Met His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro
20 25 30
gat gtg ctt gag gaa gat atc cgg ctg atg aag ctc gcc ggc tgc aat 144
Asp Val Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala Gly Cys Asn
35 40 45
gtg atg gcc gta ggc ata ttc ggc tgg acc gcg att gag ccg gag gaa 192
Val Met Ala Val Gly Ile Phe Gly Trp Thr Ala Ile Glu Pro Glu Glu
50 55 60
ggc cga ttt aca ttc gaa tgg ctc gac gaa gta ttg gac cgc ttt gcc 240
Gly Arg Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Glu Val Leu Asp Arg Phe Ala
65 70 75 80
gcc aac ggc att tat gcc tgg ctt gcg acg ccg agc ggc gcg cgt ccc 288
Ala Asn Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro
85 90 95
gca tgg atg tcg gcc cgt tac ccg gag gtg ctg cgg gta gct gca aat 336
Ala Trp Met Ser Ala Arg Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Ala Ala Asn
100 105 110
cgc gtc cgc aat ttg cac gga gca aga cat aat cat tgc tac tct tcg 384
Arg Val Arg Asn Leu His Gly Ala Arg His Asn His Cys Tyr Ser Ser
115 120 125
ccg gtc tat cgc gag aaa gcg gcg ttg atg aac ggc aag ctg gcg gag 432
Pro Val Tyr Arg Glu Lys Ala Ala Leu Met Asn Gly Lys Leu Ala Glu
130 135 140
cgc tac gcg cag cat ccg gca gtc gtc ggc tgg cat atc tcg aat gaa 480
Arg Tyr Ala Gln His Pro Ala Val Val Gly Trp His Ile Ser Asn Glu
145 150 155 160
tac ggc gga gat tgc cat tgc gag tat tgc cag gat gct ttc cgc gac 528
Tyr Gly Gly Asp Cys His Cys Glu Tyr Cys Gln Asp Ala Phe Arg Asp
165 170 175
tgg ctg cag cgc aag tac ggc agt ctg gag gcg ctc aac aaa gcg tgg 576
Trp Leu Gln Arg Lys Tyr Gly Ser Leu Glu Ala Leu Asn Lys Ala Trp
180 185 190
tgg gcg gca ttc tgg agc cat acg tat acg gat tgg tcg cag gtg gag 624
Trp Ala Ala Phe Trp Ser His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu
195 200 205
tcg ccg gct ccg cat gga gaa aat gcc gtt cac gcg atg aat ctg gac 672
Ser Pro Ala Pro His Gly Glu Asn Ala Val His Ala Met Asn Leu Asp
210 215 220
tgg aag cga ttc gtc acg gac caa acc gtc gac ttc tgc cgc cat gag 720
Trp Lys Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg His Glu
225 230 235 240
atc gca ccg ctt cga gcg ctc aat ccg gcg ctg ccg gtt acg acc aat 768
Ile Ala Pro Leu Arg Ala Leu Asn Pro Ala Leu Pro Val Thr Thr Asn
245 250 255
atg atg gac ctg ttc gag ggg ttg gac tac tgg aag ttt gcc gat gtg 816
Met Met Asp Leu Phe Glu Gly Leu Asp Tyr Trp Lys Phe Ala Asp Val
260 265 270
ctg gac gtc att tca tgg gac gct tat ccg acc tgg cat gcg ggc aag 864
Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Ala Gly Lys
275 280 285
gat gac agc cgt ctc gca gcc tgg ttt gcc atg aac cat gat ata ttc 912
Asp Asp Ser Arg Leu Ala Ala Trp Phe Ala Met Asn His Asp Ile Phe
290 295 300
cgg tcg ctt aag ggc ggt cag cct ttt atg ctg atg gaa agc acg cct 960
Arg Ser Leu Lys Gly Gly Gln Pro Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro
305 310 315 320
agc ctg acg aat tgg cag gcg gtg agc aag ctg aag cgc ccg ggc atg 1008
Ser Leu Thr Asn Trp Gln Ala Val Ser Lys Leu Lys Arg Pro Gly Met
325 330 335
cat aag ctg tcg tcg ctg cag gcc gtt gcg cat ggg gcg gat acg gtg 1056
His Lys Leu Ser Ser Leu Gln Ala Val Ala His Gly Ala Asp Thr Val
340 345 350
caa tat ttt caa tgg cgc aaa agc aga ggc tcc agc gag aaa ttt cac 1104
Gln Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His
355 360 365
gga gcg gtc gtc gat cat gtc gga cat gaa cat acg cgc gtg ttt cgc 1152
Gly Ala Val Val Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Arg
370 375 380
gat gtg gcg gag ctt ggc gag acg ctc ggc aaa ctg acg gat att atc 1200
Asp Val Ala Glu Leu Gly Glu Thr Leu Gly Lys Leu Thr Asp Ile Ile
385 390 395 400
ggg acc ggc gtg ccg gcg gaa gcg gct att att ttc gac tgg gaa aat 1248
Gly Thr Gly Val Pro Ala Glu Ala Ala Ile Ile Phe Asp Trp Glu Asn
405 410 415
cgc tgg gcg gtc aag gat gcg caa ggc ccg cgc aat atg ggc att cac 1296
Arg Trp Ala Val Lys Asp Ala Gln Gly Pro Arg Asn Met Gly Ile His
420 425 430
tac gag gat acg gtg ctg ctt cat tat aaa gca ttg tgg gag aaa ggc 1344
Tyr Glu Asp Thr Val Leu Leu His Tyr Lys Ala Leu Trp Glu Lys Gly
435 440 445
att tcc gtc gat gtt gtg tcg atg gat gcg gac ttg tcc ggc tac aag 1392
Ile Ser Val Asp Val Val Ser Met Asp Ala Asp Leu Ser Gly Tyr Lys
450 455 460
ctc gta atc gct cct atg ctg tac atg gtg cgt ccc ggc gtc ggg gaa 1440
Leu Val Ile Ala Pro Met Leu Tyr Met Val Arg Pro Gly Val Gly Glu
465 470 475 480
aaa atc gag cga ttt gtc gaa gaa gga ggc aca ttc gtc tcc acc tat 1488
Lys Ile Glu Arg Phe Val Glu Glu Gly Gly Thr Phe Val Ser Thr Tyr
485 490 495
tgg tca ggc atc gtg gac gac aac gat ctt tgt tat ctt ggc ggt ttt 1536
Trp Ser Gly Ile Val Asp Asp Asn Asp Leu Cys Tyr Leu Gly Gly Phe
500 505 510
cca ggt ccg ctg cgc aag acg ctc ggc ata tgg gcc gag gag gcg gaa 1584
Pro Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ala Glu
515 520 525
ggg ctg tac gat gag gat cgc aac gaa atc gca ttg acc tca ggc gga 1632
Gly Leu Tyr Asp Glu Asp Arg Asn Glu Ile Ala Leu Thr Ser Gly Gly
530 535 540
aga ctg gca ggc atg gaa ggg cca tac gag gtg cat gag ctt tgc gag 1680
Arg Leu Ala Gly Met Glu Gly Pro Tyr Glu Val His Glu Leu Cys Glu
545 550 555 560
ctt gtc cat gcc gag acg gcc gag gtg ctg ggc gtg tac acg gac gat 1728
Leu Val His Ala Glu Thr Ala Glu Val Leu Gly Val Tyr Thr Asp Asp
565 570 575
ttc tac gcc ggc aga ccg gcg ctg acc gtc aac aag ctg ggc aaa ggc 1776
Phe Tyr Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr Val Asn Lys Leu Gly Lys Gly
580 585 590
cgt gcc tac tac ttg gcg gcc agg gcg aaa gag cct ttc tac gaa cag 1824
Arg Ala Tyr Tyr Leu Ala Ala Arg Ala Lys Glu Pro Phe Tyr Glu Gln
595 600 605
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Phe Tyr Arg Ile Val Val Glu Glu Ala Gly Val Arg Gly Ala Leu Glu
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gcg gaa ctt ccg gca ggt gtt acc gcc cag ctg cgg acg gac ggg gaa 1920
Ala Glu Leu Pro Ala Gly Val Thr Ala Gln Leu Arg Thr Asp Gly Glu
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gcc gac tat atc ttt ctg ctg aac ttc agc ggc aag ccg cag cag gtt 1968
Ala Asp Tyr Ile Phe Leu Leu Asn Phe Ser Gly Lys Pro Gln Gln Val
645 650 655
gcg ctg gat cat cgg caa tac gac gat atg gag tcg ggc aat aga tta 2016
Ala Leu Asp His Arg Gln Tyr Asp Asp Met Glu Ser Gly Asn Arg Leu
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ctc gaa aac atg gcg tac ctt ccg gct aac ggc gcc aag gtg ctg cga 2064
Leu Glu Asn Met Ala Tyr Leu Pro Ala Asn Gly Ala Lys Val Leu Arg
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aga aaa agc taa 2076
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<211> 691
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种-18054
<400> 62
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245 250 255
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260 265 270
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Asp Asp Ser Arg Leu Ala Ala Trp Phe Ala Met Asn His Asp Ile Phe
290 295 300
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305 310 315 320
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<222> (1)..(2070)
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<222> (1)..(2070)
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tac cgc gag aag gtc aac atc atg aat acg aag ctt gcc gag cgt tat 432
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225 230 235 240
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Pro Leu Arg Ala Ala Asn Ser Glu Leu Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met
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Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Asp Asn Asn Gly Asp
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Met Thr Asn Trp Gln Pro Ile Ser Lys Leu Lys Arg Pro Gly Met His
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595 600 605
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Tyr Val Phe Val Ser Asn Phe Ser Asn Lys Asp Val Thr Val Pro Leu
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145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Ser Tyr Cys Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Leu
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660 665 670
Ala Leu Glu Leu Ser Ala Tyr Ser Cys Arg Ile Leu Lys Arg Ser Ser
675 680 685
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Met Asn Thr Lys Leu Ala Glu Arg Tyr Ala Gln His Pro Ala Val Ile
145 150 155 160
Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly Gly Glu Cys His Cys Ser Tyr
165 170 175
Cys Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Leu Lys Asn Lys Tyr Gly Thr Leu
180 185 190
Glu Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Thr Thr Phe Trp Ser His Thr Tyr
195 200 205
Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro Thr Pro Arg Gly Glu Asn Ala
210 215 220
Val His Gly Gln Asn Val Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr
225 230 235 240
Val Asp Phe Cys Arg Lys Glu Ile Glu Pro Leu Arg Ala Ala Asn Ser
245 250 255
Glu Leu Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met Leu Asp Phe Glu Pro Leu Asn
260 265 270
Tyr Trp Lys Phe Thr Glu Val Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr
275 280 285
Pro Thr Trp His Asp Asn Asn Gly Asp Glu Ala Glu Leu Ala Ala Trp
290 295 300
Ile Ala Leu Asn His Asp Val Phe Arg Ser Leu Lys Gly Gly Lys Pro
305 310 315 320
Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Met Thr Asn Trp Gln Pro Ile
325 330 335
Ser Lys Leu Lys Arg Pro Gly Met His Met Leu Ser Ser Leu Gln Ala
340 345 350
Val Ala His Gly Ser Asp Thr Val Gln Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser
355 360 365
Arg Gly Ser Ser Glu Lys Leu His Gly Ala Val Val Asp His Val Gly
370 375 380
His Glu His Thr Arg Val Phe Arg Asp Val Ala Glu Leu Gly Glu Arg
385 390 395 400
Leu Ser Lys Leu Thr Glu Val Val Gly Thr Thr Val Lys Pro Glu Val
405 410 415
Ala Leu Ile Tyr Asp Trp Glu Asn Arg Trp Ala Val Lys Asp Ser Gln
420 425 430
Gly Pro Arg Asn Ser Gly Leu Lys Tyr Glu Glu Thr Ala Lys Arg His
435 440 445
Tyr Arg Pro Leu Trp Asp Leu Gly Val Pro Val Asp Val Ile Asp Ser
450 455 460
Glu Cys Ser Phe Asp Ser Tyr Lys Leu Val Ile Ala Pro Met Leu Tyr
465 470 475 480
Met Val Arg Pro Gly Val Gly Glu Lys Ile Glu Arg Phe Val Glu Asn
485 490 495
Gly Gly Thr Phe Val Ala Thr Tyr Trp Ser Gly Ile Val Asp Glu Asn
500 505 510
Asp Leu Cys Phe Leu Thr Gly Phe Pro Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu
515 520 525
Gly Ile Trp Ser Glu Glu Ile Asp Ser Leu His Asp His Asp Ser Asn
530 535 540
Arg Val Val Met Asn Asp Gly Asn Ser Leu Gly Leu Gly Gly Glu Tyr
545 550 555 560
Glu Ala Arg Glu Leu Cys Asp Leu Ile His Leu Glu Gly Ala Glu Ala
565 570 575
Leu Ala Val Tyr Gly Asp Asp Phe Tyr Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr
580 585 590
Val Asn Lys Leu Gly Lys Gly Lys Ala Tyr Tyr Ile Ala Ser Arg Asn
595 600 605
Glu Ala Ala Phe Thr Lys Gln Leu Leu Ala Ala Leu Val Ser Glu Ala
610 615 620
Gly Ile Lys Arg Val Leu Glu Ser Glu Leu Pro Tyr Gly Val Thr Ala
625 630 635 640
Gln Leu Arg Thr Asp Gly Arg Asn Asp Tyr Val Phe Val Ser Asn Phe
645 650 655
Ser Asn Lys Asp Val Thr Val Pro Leu Asp Gly Arg Asn Tyr Thr Asp
660 665 670
Leu Leu Thr Gly Asp Pro Glu Gly Ala Ala Leu Glu Leu Ser Ala Tyr
675 680 685
Ser Cys Arg Ile Leu Lys Arg Ser Ser Asn Ala
690 695
<210> 67
<211> 2070
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种- 62603
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2067)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2067)
<400> 67
atg agt atg aaa ttt ccc ccg ata agt gca aaa att ccg caa atg ctg 48
Met Ser Met Lys Phe Pro Pro Ile Ser Ala Lys Ile Pro Gln Met Leu
1 5 10 15
cat ggt gca gat tat aat cca gat caa tgg cag aag tat cct gag gtg 96
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Gln Lys Tyr Pro Glu Val
20 25 30
ctg gag gaa gac atc cgc ctc atg aag ctt gca cat tgc aac gtg atg 144
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala His Cys Asn Val Met
35 40 45
tct gta ggc att ttt gca tgg atg gcg atc gag ccg gag gaa ggc gta 192
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Met Ala Ile Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
ttt aca ttt gaa tgg ctg gac acg ttg ctt gat aaa ttt gct gct aac 240
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Thr Leu Leu Asp Lys Phe Ala Ala Asn
65 70 75 80
ggc atc tat gcc ttg ctt gct aca cca agc gga gca cgc ccg gtt tgg 288
Gly Ile Tyr Ala Leu Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Val Trp
85 90 95
atg tct caa aaa tat ccg gaa gtg ctg cgc gtt gca cct aac gga att 336
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Ala Pro Asn Gly Ile
100 105 110
cgt aat ttg cat ggt gcg cgt cat aac cac tgc ttc agc tca cct gta 384
Arg Asn Leu His Gly Ala Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Pro Val
115 120 125
tat cgc gag aag gta acg atc atg aac tcg aag ctg gca gaa cgt tat 432
Tyr Arg Glu Lys Val Thr Ile Met Asn Ser Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
tcg gat cat cct gcg gtc atc ggc tgg cat ata tca aat gaa tat ggc 480
Ser Asp His Pro Ala Val Ile Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggc gaa tgt cac tgc tcg tat tgt gaa gac gct ttc cgc gac tgg ttg 528
Gly Glu Cys His Cys Ser Tyr Cys Glu Asp Ala Phe Arg Asp Trp Leu
165 170 175
aaa aat aaa tac ggt aca cta gaa gca ctt aac gat gct tgg tgg acg 576
Lys Asn Lys Tyr Gly Thr Leu Glu Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Thr
180 185 190
acg ttc tgg agc cat acg tat acc gat tgg agc caa gtc gag tcg cca 624
Thr Phe Trp Ser His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro
195 200 205
acc gag cgt ggc gag aaa gcg gtt cac ggc cag aat gtt gac tgg aga 672
Thr Glu Arg Gly Glu Lys Ala Val His Gly Gln Asn Val Asp Trp Arg
210 215 220
aga ttc gtt acg gat caa acg gtt gat ttc tgc cgc aac gaa att gct 720
Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg Asn Glu Ile Ala
225 230 235 240
ccg ctg cgc gcc gct aat agt gag ctt ccg att acg acg aac ttt atg 768
Pro Leu Arg Ala Ala Asn Ser Glu Leu Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met
245 250 255
ctt gat ttt gag ccg ctt aac tat tgg aag ttt aca gag ctg ctc gat 816
Leu Asp Phe Glu Pro Leu Asn Tyr Trp Lys Phe Thr Glu Leu Leu Asp
260 265 270
atg att tcg tgg gat gct tat cca act tgg cac gac aat ggc gga gac 864
Met Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Asp Asn Gly Gly Asp
275 280 285
gac agc gag caa gcg gcg tgg atc ggc ttt aac cat gat gtg ttt cgt 912
Asp Ser Glu Gln Ala Ala Trp Ile Gly Phe Asn His Asp Val Phe Arg
290 295 300
tcg ctt ggc ggc gga aag ccg ttc atg ctg atg gaa agc acg ccg agc 960
Ser Leu Gly Gly Gly Lys Pro Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser
305 310 315 320
atg acg aac tgg cag ccg atc agc aaa gtg aag cgt cca ggg atg cac 1008
Met Thr Asn Trp Gln Pro Ile Ser Lys Val Lys Arg Pro Gly Met His
325 330 335
atg ctg tca tcg cta caa gcg gtg gca cat ggc tca gat act gtt cag 1056
Met Leu Ser Ser Leu Gln Ala Val Ala His Gly Ser Asp Thr Val Gln
340 345 350
tat ttc cag tgg cgc aag agc aga ggc tca agc gag aag ctg cat ggt 1104
Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Leu His Gly
355 360 365
gca gta gtg gac cat gtc ggc cat gag cat act cgc gtt ttc cgc gat 1152
Ala Val Val Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Arg Asp
370 375 380
gtg gct gag ctt ggc gaa gct ttg gag aaa ctt act gaa gta gta ggt 1200
Val Ala Glu Leu Gly Glu Ala Leu Glu Lys Leu Thr Glu Val Val Gly
385 390 395 400
aca act gtg aag cca gag gta gcg ctt atc tat gat tgg gaa aat cgc 1248
Thr Thr Val Lys Pro Glu Val Ala Leu Ile Tyr Asp Trp Glu Asn Arg
405 410 415
tgg gca gta aag gat tcg caa ggc ccg cgc aat agc ggt ctt cat tat 1296
Trp Ala Val Lys Asp Ser Gln Gly Pro Arg Asn Ser Gly Leu His Tyr
420 425 430
gaa gaa acg gct aaa cgc cat tac cgt ccg ttc tgg gat ctg ggt gta 1344
Glu Glu Thr Ala Lys Arg His Tyr Arg Pro Phe Trp Asp Leu Gly Val
435 440 445
cca gtg gac att att gat tcg gaa tgc agc ttt gat tcg tac aag ctt 1392
Pro Val Asp Ile Ile Asp Ser Glu Cys Ser Phe Asp Ser Tyr Lys Leu
450 455 460
ctt att gct ccg atg tta tat atg gtg cgt cca ggt gta ggc gag cgc 1440
Leu Ile Ala Pro Met Leu Tyr Met Val Arg Pro Gly Val Gly Glu Arg
465 470 475 480
att gaa cgt ttt gtt gaa aat ggc ggt act ttc atc gct act tat tgg 1488
Ile Glu Arg Phe Val Glu Asn Gly Gly Thr Phe Ile Ala Thr Tyr Trp
485 490 495
aca ggc atc gtt gat gag aat gat cta tgc ttc ctt aca ggt ttc cca 1536
Thr Gly Ile Val Asp Glu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Thr Gly Phe Pro
500 505 510
gga ccg ctg cgc aag acg ctt ggg atc tgg tcc gag gag atc gat tcg 1584
Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ser Glu Glu Ile Asp Ser
515 520 525
ctg cat gat cat gat tcc aat cag gtc gtg ctg aag gac gga aat aag 1632
Leu His Asp His Asp Ser Asn Gln Val Val Leu Lys Asp Gly Asn Lys
530 535 540
ctt gga ctg agc ggc caa tat aca gca cgc gag ctg tgt gat ctc atc 1680
Leu Gly Leu Ser Gly Gln Tyr Thr Ala Arg Glu Leu Cys Asp Leu Ile
545 550 555 560
cat ctt gaa ggg gcg gag gca ctt gct gta tat gga gag gat ttc tat 1728
His Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Ala Val Tyr Gly Glu Asp Phe Tyr
565 570 575
gcg ggt cgc cct gcc tta acg gta aat cat ttg ggt gca ggc aaa gcc 1776
Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr Val Asn His Leu Gly Ala Gly Lys Ala
580 585 590
tac tat gtt gca tcg cgc aac gaa gca tct ttt aca aac gat ttt ctg 1824
Tyr Tyr Val Ala Ser Arg Asn Glu Ala Ser Phe Thr Asn Asp Phe Leu
595 600 605
act cga att ata gag caa gag ggg ata aag cga gtt ctt gat tcc gag 1872
Thr Arg Ile Ile Glu Gln Glu Gly Ile Lys Arg Val Leu Asp Ser Glu
610 615 620
ctg ccg caa ggc gta act gca caa tta aga acg gat ggg gtg aac gac 1920
Leu Pro Gln Gly Val Thr Ala Gln Leu Arg Thr Asp Gly Val Asn Asp
625 630 635 640
tac gtc ttt gta tcc aat ttc agt gca aat gag gct tcg gtt gct tta 1968
Tyr Val Phe Val Ser Asn Phe Ser Ala Asn Glu Ala Ser Val Ala Leu
645 650 655
gat gct cag cag tat aca gat ttg ttg acg ggt tcg gct cta aac aac 2016
Asp Ala Gln Gln Tyr Thr Asp Leu Leu Thr Gly Ser Ala Leu Asn Asn
660 665 670
agt gtt gaa ttg aag cct tac ggc tgc cgg atc ttg aaa cga gtt tcg 2064
Ser Val Glu Leu Lys Pro Tyr Gly Cys Arg Ile Leu Lys Arg Val Ser
675 680 685
aaa taa 2070
Lys
<210> 68
<211> 689
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种- 62603
<400> 68
Met Ser Met Lys Phe Pro Pro Ile Ser Ala Lys Ile Pro Gln Met Leu
1 5 10 15
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Gln Lys Tyr Pro Glu Val
20 25 30
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala His Cys Asn Val Met
35 40 45
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Met Ala Ile Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Thr Leu Leu Asp Lys Phe Ala Ala Asn
65 70 75 80
Gly Ile Tyr Ala Leu Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Val Trp
85 90 95
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Ala Pro Asn Gly Ile
100 105 110
Arg Asn Leu His Gly Ala Arg His Asn His Cys Phe Ser Ser Pro Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Val Thr Ile Met Asn Ser Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Ser Asp His Pro Ala Val Ile Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Ser Tyr Cys Glu Asp Ala Phe Arg Asp Trp Leu
165 170 175
Lys Asn Lys Tyr Gly Thr Leu Glu Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Thr
180 185 190
Thr Phe Trp Ser His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro
195 200 205
Thr Glu Arg Gly Glu Lys Ala Val His Gly Gln Asn Val Asp Trp Arg
210 215 220
Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg Asn Glu Ile Ala
225 230 235 240
Pro Leu Arg Ala Ala Asn Ser Glu Leu Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met
245 250 255
Leu Asp Phe Glu Pro Leu Asn Tyr Trp Lys Phe Thr Glu Leu Leu Asp
260 265 270
Met Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Asp Asn Gly Gly Asp
275 280 285
Asp Ser Glu Gln Ala Ala Trp Ile Gly Phe Asn His Asp Val Phe Arg
290 295 300
Ser Leu Gly Gly Gly Lys Pro Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser
305 310 315 320
Met Thr Asn Trp Gln Pro Ile Ser Lys Val Lys Arg Pro Gly Met His
325 330 335
Met Leu Ser Ser Leu Gln Ala Val Ala His Gly Ser Asp Thr Val Gln
340 345 350
Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Leu His Gly
355 360 365
Ala Val Val Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Arg Asp
370 375 380
Val Ala Glu Leu Gly Glu Ala Leu Glu Lys Leu Thr Glu Val Val Gly
385 390 395 400
Thr Thr Val Lys Pro Glu Val Ala Leu Ile Tyr Asp Trp Glu Asn Arg
405 410 415
Trp Ala Val Lys Asp Ser Gln Gly Pro Arg Asn Ser Gly Leu His Tyr
420 425 430
Glu Glu Thr Ala Lys Arg His Tyr Arg Pro Phe Trp Asp Leu Gly Val
435 440 445
Pro Val Asp Ile Ile Asp Ser Glu Cys Ser Phe Asp Ser Tyr Lys Leu
450 455 460
Leu Ile Ala Pro Met Leu Tyr Met Val Arg Pro Gly Val Gly Glu Arg
465 470 475 480
Ile Glu Arg Phe Val Glu Asn Gly Gly Thr Phe Ile Ala Thr Tyr Trp
485 490 495
Thr Gly Ile Val Asp Glu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Thr Gly Phe Pro
500 505 510
Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ser Glu Glu Ile Asp Ser
515 520 525
Leu His Asp His Asp Ser Asn Gln Val Val Leu Lys Asp Gly Asn Lys
530 535 540
Leu Gly Leu Ser Gly Gln Tyr Thr Ala Arg Glu Leu Cys Asp Leu Ile
545 550 555 560
His Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Ala Val Tyr Gly Glu Asp Phe Tyr
565 570 575
Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr Val Asn His Leu Gly Ala Gly Lys Ala
580 585 590
Tyr Tyr Val Ala Ser Arg Asn Glu Ala Ser Phe Thr Asn Asp Phe Leu
595 600 605
Thr Arg Ile Ile Glu Gln Glu Gly Ile Lys Arg Val Leu Asp Ser Glu
610 615 620
Leu Pro Gln Gly Val Thr Ala Gln Leu Arg Thr Asp Gly Val Asn Asp
625 630 635 640
Tyr Val Phe Val Ser Asn Phe Ser Ala Asn Glu Ala Ser Val Ala Leu
645 650 655
Asp Ala Gln Gln Tyr Thr Asp Leu Leu Thr Gly Ser Ala Leu Asn Asn
660 665 670
Ser Val Glu Leu Lys Pro Tyr Gly Cys Arg Ile Leu Lys Arg Val Ser
675 680 685
Lys
<210> 69
<211> 698
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(698)
<400> 69
Met His His His His His His Pro Arg Met Ser Met Lys Phe Pro Pro
1 5 10 15
Ile Ser Ala Lys Ile Pro Gln Met Leu His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro
20 25 30
Asp Gln Trp Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu
35 40 45
Met Lys Leu Ala His Cys Asn Val Met Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp
50 55 60
Met Ala Ile Glu Pro Glu Glu Gly Val Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp
65 70 75 80
Thr Leu Leu Asp Lys Phe Ala Ala Asn Gly Ile Tyr Ala Leu Leu Ala
85 90 95
Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Val Trp Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu
100 105 110
Val Leu Arg Val Ala Pro Asn Gly Ile Arg Asn Leu His Gly Ala Arg
115 120 125
His Asn His Cys Phe Ser Ser Pro Val Tyr Arg Glu Lys Val Thr Ile
130 135 140
Met Asn Ser Lys Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Asp His Pro Ala Val Ile
145 150 155 160
Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly Gly Glu Cys His Cys Ser Tyr
165 170 175
Cys Glu Asp Ala Phe Arg Asp Trp Leu Lys Asn Lys Tyr Gly Thr Leu
180 185 190
Glu Ala Leu Asn Asp Ala Trp Trp Thr Thr Phe Trp Ser His Thr Tyr
195 200 205
Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro Thr Glu Arg Gly Glu Lys Ala
210 215 220
Val His Gly Gln Asn Val Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr
225 230 235 240
Val Asp Phe Cys Arg Asn Glu Ile Ala Pro Leu Arg Ala Ala Asn Ser
245 250 255
Glu Leu Pro Ile Thr Thr Asn Phe Met Leu Asp Phe Glu Pro Leu Asn
260 265 270
Tyr Trp Lys Phe Thr Glu Leu Leu Asp Met Ile Ser Trp Asp Ala Tyr
275 280 285
Pro Thr Trp His Asp Asn Gly Gly Asp Asp Ser Glu Gln Ala Ala Trp
290 295 300
Ile Gly Phe Asn His Asp Val Phe Arg Ser Leu Gly Gly Gly Lys Pro
305 310 315 320
Phe Met Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Met Thr Asn Trp Gln Pro Ile
325 330 335
Ser Lys Val Lys Arg Pro Gly Met His Met Leu Ser Ser Leu Gln Ala
340 345 350
Val Ala His Gly Ser Asp Thr Val Gln Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser
355 360 365
Arg Gly Ser Ser Glu Lys Leu His Gly Ala Val Val Asp His Val Gly
370 375 380
His Glu His Thr Arg Val Phe Arg Asp Val Ala Glu Leu Gly Glu Ala
385 390 395 400
Leu Glu Lys Leu Thr Glu Val Val Gly Thr Thr Val Lys Pro Glu Val
405 410 415
Ala Leu Ile Tyr Asp Trp Glu Asn Arg Trp Ala Val Lys Asp Ser Gln
420 425 430
Gly Pro Arg Asn Ser Gly Leu His Tyr Glu Glu Thr Ala Lys Arg His
435 440 445
Tyr Arg Pro Phe Trp Asp Leu Gly Val Pro Val Asp Ile Ile Asp Ser
450 455 460
Glu Cys Ser Phe Asp Ser Tyr Lys Leu Leu Ile Ala Pro Met Leu Tyr
465 470 475 480
Met Val Arg Pro Gly Val Gly Glu Arg Ile Glu Arg Phe Val Glu Asn
485 490 495
Gly Gly Thr Phe Ile Ala Thr Tyr Trp Thr Gly Ile Val Asp Glu Asn
500 505 510
Asp Leu Cys Phe Leu Thr Gly Phe Pro Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu
515 520 525
Gly Ile Trp Ser Glu Glu Ile Asp Ser Leu His Asp His Asp Ser Asn
530 535 540
Gln Val Val Leu Lys Asp Gly Asn Lys Leu Gly Leu Ser Gly Gln Tyr
545 550 555 560
Thr Ala Arg Glu Leu Cys Asp Leu Ile His Leu Glu Gly Ala Glu Ala
565 570 575
Leu Ala Val Tyr Gly Glu Asp Phe Tyr Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr
580 585 590
Val Asn His Leu Gly Ala Gly Lys Ala Tyr Tyr Val Ala Ser Arg Asn
595 600 605
Glu Ala Ser Phe Thr Asn Asp Phe Leu Thr Arg Ile Ile Glu Gln Glu
610 615 620
Gly Ile Lys Arg Val Leu Asp Ser Glu Leu Pro Gln Gly Val Thr Ala
625 630 635 640
Gln Leu Arg Thr Asp Gly Val Asn Asp Tyr Val Phe Val Ser Asn Phe
645 650 655
Ser Ala Asn Glu Ala Ser Val Ala Leu Asp Ala Gln Gln Tyr Thr Asp
660 665 670
Leu Leu Thr Gly Ser Ala Leu Asn Asn Ser Val Glu Leu Lys Pro Tyr
675 680 685
Gly Cys Arg Ile Leu Lys Arg Val Ser Lys
690 695
<210> 70
<211> 2058
<212> DNA
<213> Paenibacillus woosongensis
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2055)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2055)
<400> 70
atg acg aag aaa ttt cca ccg atc agc gac agg ctt ccc gtc ttg atg 48
Met Thr Lys Lys Phe Pro Pro Ile Ser Asp Arg Leu Pro Val Leu Met
1 5 10 15
cac gga gcg gat tat aac ccg gac caa tgg ctg cat gat cca aag gtg 96
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val
20 25 30
ctg gaa gag gat atc cgc atg atg aag ctc gcc aac tgc aac gta atg 144
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Met Met Lys Leu Ala Asn Cys Asn Val Met
35 40 45
gcg ctt ggc atg ttc tcc tgg gct gct ctt gaa cct gaa gaa ggg gta 192
Ala Leu Gly Met Phe Ser Trp Ala Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
ttt acg ttt gaa tgg ctg gac cgg gta ctc gat tcg ttt gcg gcg aac 240
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Arg Val Leu Asp Ser Phe Ala Ala Asn
65 70 75 80
ggc att tat gcc tgg ctg tcc acg cca agc ggc gca cgc ccg gcc tgg 288
Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ser Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tcg gcg aaa tat acc gaa gtg ctg cgg gtg gag aag aac cgc gtc 336
Met Ser Ala Lys Tyr Thr Glu Val Leu Arg Val Glu Lys Asn Arg Val
100 105 110
cgc aat ttg cat ggc atg aga cat aat cac tgc tac aca tcc ccg gtt 384
Arg Asn Leu His Gly Met Arg His Asn His Cys Tyr Thr Ser Pro Val
115 120 125
tac cgg gag aag aca gcg atc att aac ggc aag ctg gcg gag cgc tac 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile Ile Asn Gly Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
gga aac cat cct gcc gtc atc ggc tgg cat att tcg aac gag ctg ggc 480
Gly Asn His Pro Ala Val Ile Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Leu Gly
145 150 155 160
gga gac tgc cat tgc gac tat tgt cag gag gcg ttc cgg gca tgg ctg 528
Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Ala Trp Leu
165 170 175
aag gag aaa tat ggc acg ctg gag aag ctt aat ttt gcc tgg tgg aca 576
Lys Glu Lys Tyr Gly Thr Leu Glu Lys Leu Asn Phe Ala Trp Trp Thr
180 185 190
tcc ttc tgg gcc cat acg tac acc gat tgg agt cag atc gag tcg cct 624
Ser Phe Trp Ala His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser Pro
195 200 205
gct cct cac ggg gaa aat atg gtt cac gga cag aac ctg gac tgg cgc 672
Ala Pro His Gly Glu Asn Met Val His Gly Gln Asn Leu Asp Trp Arg
210 215 220
cgt ttc gtg acc gat caa atg acg gat ttc tgc aat cat gag atc cag 720
Arg Phe Val Thr Asp Gln Met Thr Asp Phe Cys Asn His Glu Ile Gln
225 230 235 240
tcc gtg aag aag gcg aat cct gcc ttg ccg gcg acg acg aat atg cat 768
Ser Val Lys Lys Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His
245 250 255
atg acg gat ggg ctg gac tac cgg aaa ctg gcc aag att ctt gac gtc 816
Met Thr Asp Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Leu Ala Lys Ile Leu Asp Val
260 265 270
att tcc tgg gat gtg tat ccg acc tgg cat gat tat aaa aat gac att 864
Ile Ser Trp Asp Val Tyr Pro Thr Trp His Asp Tyr Lys Asn Asp Ile
275 280 285
gag ctg ggc gct tcg gtc tct ttc tgg cat gat ctg tat cgt tcg ctg 912
Glu Leu Gly Ala Ser Val Ser Phe Trp His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu
290 295 300
cag cag aag cca ttc ctg ctg atg gag agt acg ccg agc ctg aca aac 960
Gln Gln Lys Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn
305 310 315 320
tgg cag ccg gtc agc aag ctg aag cag ccg ggc atg cat aag ctg tcc 1008
Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu Lys Gln Pro Gly Met His Lys Leu Ser
325 330 335
tcc ctg cag gcg gtc gct cac ggc tcg gat tcc gtg caa tat ttc cag 1056
Ser Leu Gln Ala Val Ala His Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln
340 345 350
tgg cgc aag agc aga ggc tcc agc gag aaa ttc cac ggg gcg gtc gtg 1104
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
355 360 365
gat cac gtt gga cat gag cat aca aga gtg ttc aag gat gtc gcc gat 1152
Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Lys Asp Val Ala Asp
370 375 380
ttg gga cgt acg ctt gcc gat att tcc gag att gcg ggc acg ccg act 1200
Leu Gly Arg Thr Leu Ala Asp Ile Ser Glu Ile Ala Gly Thr Pro Thr
385 390 395 400
ccg gcg aag aca gcg att ctc ttc gat tgg gat aat cgc tgg gcc gta 1248
Pro Ala Lys Thr Ala Ile Leu Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Val
405 410 415
cag gat gcg caa gga ccg cgc aat tca ggc atc cat tat gag gag acg 1296
Gln Asp Ala Gln Gly Pro Arg Asn Ser Gly Ile His Tyr Glu Glu Thr
420 425 430
gta atc gcg cat cac cgg gcg att tgg gag cag ggc gta ccg acg gat 1344
Val Ile Ala His His Arg Ala Ile Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp
435 440 445
att atc ggc tcg gag gat gac ttt agc ggt tat aag ctg atc gtt gct 1392
Ile Ile Gly Ser Glu Asp Asp Phe Ser Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala
450 455 460
cca atg ctg tat ctg tgc cgt gag gag acg ggc cgc gag ctg gag aag 1440
Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg Glu Glu Thr Gly Arg Glu Leu Glu Lys
465 470 475 480
ttc gtt gag aat ggc gga act ctg gtt acg acc tac tgg tcc ggc atc 1488
Phe Val Glu Asn Gly Gly Thr Leu Val Thr Thr Tyr Trp Ser Gly Ile
485 490 495
gtc gat gag cat gat ctg tgc cat ctt ggc ggg ttt cca ggg ccg ctg 1536
Val Asp Glu His Asp Leu Cys His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu
500 505 510
cgc aag acg ctt ggc atc tgg gcg gag gag atc gaa gga ttg tac gat 1584
Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp
515 520 525
cat gac cgg aac ggc ata gcg atg gcc gag ggc aat gaa ctg ggc ttc 1632
His Asp Arg Asn Gly Ile Ala Met Ala Glu Gly Asn Glu Leu Gly Phe
530 535 540
acg ggc agc ttc gag tcc cat gaa atc tgc gag ctg att cat acg gaa 1680
Thr Gly Ser Phe Glu Ser His Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu
545 550 555 560
ggc gcc gag gta ttg gga acc tat acg gac agc ttc tat gcg ggc aaa 1728
Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr Tyr Thr Asp Ser Phe Tyr Ala Gly Lys
565 570 575
ccg gca ttg act gtg aac cgc ttc ggg caa ggc cgc gct tac cat atg 1776
Pro Ala Leu Thr Val Asn Arg Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met
580 585 590
gcg acg cgc ctg aag gac gat ttc ctg ggc gag ttc tac aag cag atc 1824
Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp Phe Leu Gly Glu Phe Tyr Lys Gln Ile
595 600 605
gtt aat gtc gca ggc gtt gac cgg gtt att cat act gaa ctg cct gcc 1872
Val Asn Val Ala Gly Val Asp Arg Val Ile His Thr Glu Leu Pro Ala
610 615 620
ggc gtg acc gct cag gtc cgg acg gat ggg gaa ttc gat tat gtg ttc 1920
Gly Val Thr Ala Gln Val Arg Thr Asp Gly Glu Phe Asp Tyr Val Phe
625 630 635 640
gtg atg aac ttc agc gga cag gag cag cat gta caa ctg gat gat cgt 1968
Val Met Asn Phe Ser Gly Gln Glu Gln His Val Gln Leu Asp Asp Arg
645 650 655
caa tat gtg aat atg gaa aca ggc gaa gcg ttg agc gga aaa ctc acc 2016
Gln Tyr Val Asn Met Glu Thr Gly Glu Ala Leu Ser Gly Lys Leu Thr
660 665 670
ttg cct gtt cac gga gta gtt gta ttg aaa cgt ccg gct taa 2058
Leu Pro Val His Gly Val Val Val Leu Lys Arg Pro Ala
675 680 685
<210> 71
<211> 685
<212> PRT
<213> Paenibacillus woosongensis
<400> 71
Met Thr Lys Lys Phe Pro Pro Ile Ser Asp Arg Leu Pro Val Leu Met
1 5 10 15
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val
20 25 30
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Met Met Lys Leu Ala Asn Cys Asn Val Met
35 40 45
Ala Leu Gly Met Phe Ser Trp Ala Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp Arg Val Leu Asp Ser Phe Ala Ala Asn
65 70 75 80
Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ser Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Met Ser Ala Lys Tyr Thr Glu Val Leu Arg Val Glu Lys Asn Arg Val
100 105 110
Arg Asn Leu His Gly Met Arg His Asn His Cys Tyr Thr Ser Pro Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile Ile Asn Gly Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Gly Asn His Pro Ala Val Ile Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Leu Gly
145 150 155 160
Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Ala Trp Leu
165 170 175
Lys Glu Lys Tyr Gly Thr Leu Glu Lys Leu Asn Phe Ala Trp Trp Thr
180 185 190
Ser Phe Trp Ala His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser Pro
195 200 205
Ala Pro His Gly Glu Asn Met Val His Gly Gln Asn Leu Asp Trp Arg
210 215 220
Arg Phe Val Thr Asp Gln Met Thr Asp Phe Cys Asn His Glu Ile Gln
225 230 235 240
Ser Val Lys Lys Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His
245 250 255
Met Thr Asp Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Leu Ala Lys Ile Leu Asp Val
260 265 270
Ile Ser Trp Asp Val Tyr Pro Thr Trp His Asp Tyr Lys Asn Asp Ile
275 280 285
Glu Leu Gly Ala Ser Val Ser Phe Trp His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu
290 295 300
Gln Gln Lys Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn
305 310 315 320
Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu Lys Gln Pro Gly Met His Lys Leu Ser
325 330 335
Ser Leu Gln Ala Val Ala His Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln
340 345 350
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
355 360 365
Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Lys Asp Val Ala Asp
370 375 380
Leu Gly Arg Thr Leu Ala Asp Ile Ser Glu Ile Ala Gly Thr Pro Thr
385 390 395 400
Pro Ala Lys Thr Ala Ile Leu Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Val
405 410 415
Gln Asp Ala Gln Gly Pro Arg Asn Ser Gly Ile His Tyr Glu Glu Thr
420 425 430
Val Ile Ala His His Arg Ala Ile Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp
435 440 445
Ile Ile Gly Ser Glu Asp Asp Phe Ser Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala
450 455 460
Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg Glu Glu Thr Gly Arg Glu Leu Glu Lys
465 470 475 480
Phe Val Glu Asn Gly Gly Thr Leu Val Thr Thr Tyr Trp Ser Gly Ile
485 490 495
Val Asp Glu His Asp Leu Cys His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu
500 505 510
Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp
515 520 525
His Asp Arg Asn Gly Ile Ala Met Ala Glu Gly Asn Glu Leu Gly Phe
530 535 540
Thr Gly Ser Phe Glu Ser His Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu
545 550 555 560
Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr Tyr Thr Asp Ser Phe Tyr Ala Gly Lys
565 570 575
Pro Ala Leu Thr Val Asn Arg Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met
580 585 590
Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp Phe Leu Gly Glu Phe Tyr Lys Gln Ile
595 600 605
Val Asn Val Ala Gly Val Asp Arg Val Ile His Thr Glu Leu Pro Ala
610 615 620
Gly Val Thr Ala Gln Val Arg Thr Asp Gly Glu Phe Asp Tyr Val Phe
625 630 635 640
Val Met Asn Phe Ser Gly Gln Glu Gln His Val Gln Leu Asp Asp Arg
645 650 655
Gln Tyr Val Asn Met Glu Thr Gly Glu Ala Leu Ser Gly Lys Leu Thr
660 665 670
Leu Pro Val His Gly Val Val Val Leu Lys Arg Pro Ala
675 680 685
<210> 72
<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(694)
<400> 72
Met His His His His His His Pro Arg Met Thr Lys Lys Phe Pro Pro
1 5 10 15
Ile Ser Asp Arg Leu Pro Val Leu Met His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro
20 25 30
Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val Leu Glu Glu Asp Ile Arg Met
35 40 45
Met Lys Leu Ala Asn Cys Asn Val Met Ala Leu Gly Met Phe Ser Trp
50 55 60
Ala Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val Phe Thr Phe Glu Trp Leu Asp
65 70 75 80
Arg Val Leu Asp Ser Phe Ala Ala Asn Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ser
85 90 95
Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Met Ser Ala Lys Tyr Thr Glu
100 105 110
Val Leu Arg Val Glu Lys Asn Arg Val Arg Asn Leu His Gly Met Arg
115 120 125
His Asn His Cys Tyr Thr Ser Pro Val Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile
130 135 140
Ile Asn Gly Lys Leu Ala Glu Arg Tyr Gly Asn His Pro Ala Val Ile
145 150 155 160
Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Leu Gly Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr
165 170 175
Cys Gln Glu Ala Phe Arg Ala Trp Leu Lys Glu Lys Tyr Gly Thr Leu
180 185 190
Glu Lys Leu Asn Phe Ala Trp Trp Thr Ser Phe Trp Ala His Thr Tyr
195 200 205
Thr Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser Pro Ala Pro His Gly Glu Asn Met
210 215 220
Val His Gly Gln Asn Leu Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Met
225 230 235 240
Thr Asp Phe Cys Asn His Glu Ile Gln Ser Val Lys Lys Ala Asn Pro
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His Met Thr Asp Gly Leu Asp Tyr
260 265 270
Arg Lys Leu Ala Lys Ile Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Val Tyr Pro
275 280 285
Thr Trp His Asp Tyr Lys Asn Asp Ile Glu Leu Gly Ala Ser Val Ser
290 295 300
Phe Trp His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Gln Gln Lys Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu
325 330 335
Lys Gln Pro Gly Met His Lys Leu Ser Ser Leu Gln Ala Val Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Val Gly His Glu His
370 375 380
Thr Arg Val Phe Lys Asp Val Ala Asp Leu Gly Arg Thr Leu Ala Asp
385 390 395 400
Ile Ser Glu Ile Ala Gly Thr Pro Thr Pro Ala Lys Thr Ala Ile Leu
405 410 415
Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Val Gln Asp Ala Gln Gly Pro Arg
420 425 430
Asn Ser Gly Ile His Tyr Glu Glu Thr Val Ile Ala His His Arg Ala
435 440 445
Ile Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp Ile Ile Gly Ser Glu Asp Asp
450 455 460
Phe Ser Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg
465 470 475 480
Glu Glu Thr Gly Arg Glu Leu Glu Lys Phe Val Glu Asn Gly Gly Thr
485 490 495
Leu Val Thr Thr Tyr Trp Ser Gly Ile Val Asp Glu His Asp Leu Cys
500 505 510
His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp
515 520 525
Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp His Asp Arg Asn Gly Ile Ala
530 535 540
Met Ala Glu Gly Asn Glu Leu Gly Phe Thr Gly Ser Phe Glu Ser His
545 550 555 560
Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr
565 570 575
Tyr Thr Asp Ser Phe Tyr Ala Gly Lys Pro Ala Leu Thr Val Asn Arg
580 585 590
Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp
595 600 605
Phe Leu Gly Glu Phe Tyr Lys Gln Ile Val Asn Val Ala Gly Val Asp
610 615 620
Arg Val Ile His Thr Glu Leu Pro Ala Gly Val Thr Ala Gln Val Arg
625 630 635 640
Thr Asp Gly Glu Phe Asp Tyr Val Phe Val Met Asn Phe Ser Gly Gln
645 650 655
Glu Gln His Val Gln Leu Asp Asp Arg Gln Tyr Val Asn Met Glu Thr
660 665 670
Gly Glu Ala Leu Ser Gly Lys Leu Thr Leu Pro Val His Gly Val Val
675 680 685
Val Leu Lys Arg Pro Ala
690
<210> 73
<211> 2058
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种- 62253
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2055)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2055)
<400> 73
atg acg acc aaa ttt gcc ccg ata agc gat aaa ctg acc gtg ctc atg 48
Met Thr Thr Lys Phe Ala Pro Ile Ser Asp Lys Leu Thr Val Leu Met
1 5 10 15
cac ggc gcc gac tat aat ccc gac caa tgg ctg cac gat ccg aag gtg 96
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val
20 25 30
ctg gag gaa gac atc cgg ctc atg aag ctg gct ggc tgc aac gtg atg 144
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala Gly Cys Asn Val Met
35 40 45
gcc gtc ggc att ttc tcc tgg gcc gca ttc gag ccg acc gaa ggc aac 192
Ala Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Ala Phe Glu Pro Thr Glu Gly Asn
50 55 60
ttc aac ttc gaa tgg atg gac aag gtg ctc gat tcg ttc gcg gcg aac 240
Phe Asn Phe Glu Trp Met Asp Lys Val Leu Asp Ser Phe Ala Ala Asn
65 70 75 80
ggc atc tac gct tgg ctg gcg acg ccg agc ggc gcg cgt ccg gca tgg 288
Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg agc gcc aag tat ccg gag gtg ctc cgc acg gaa gcg aat cgc gta 336
Met Ser Ala Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Thr Glu Ala Asn Arg Val
100 105 110
cgc aac ctg cac ggc atg cgg cat aac cac tgc aac acg tcg ccg gtc 384
Arg Asn Leu His Gly Met Arg His Asn His Cys Asn Thr Ser Pro Val
115 120 125
tat cgc gag aag acg gcg atc atc aac ggc aag ctc gcg gag cgc tat 432
Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile Ile Asn Gly Lys Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
ggc aac cat ccg gct gtc ctc ggc tgg cat att tcg aac gaa ttc ggc 480
Gly Asn His Pro Ala Val Leu Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Phe Gly
145 150 155 160
ggc gat tgt cat tgc gac tac tgc caa gaa gcg ttc cgc caa tgg ctg 528
Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu
165 170 175
cag aag aaa tac ggc tcg ctc gat gcg ctc aac agc gca tgg tgg acg 576
Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asp Ala Leu Asn Ser Ala Trp Trp Thr
180 185 190
acg ttc tgg gcg cac acg tac acc gat tgg agc caa gtg gaa tcg ccg 624
Thr Phe Trp Ala His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro
195 200 205
gct ccg cac ggc gag aac atg gtg cac ggc cac aac ctc gac tgg cgc 672
Ala Pro His Gly Glu Asn Met Val His Gly His Asn Leu Asp Trp Arg
210 215 220
cgc ttc gtg aca gac cag acg gtg gac ttc tgc cgc cac gag att gaa 720
Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg His Glu Ile Glu
225 230 235 240
tcg gtg cgc agc gcg aat ccg tcg ctg ccg gcg acg acg aac atg cac 768
Ser Val Arg Ser Ala Asn Pro Ser Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His
245 250 255
atg atc gaa ggg ctc gac tac cgc aaa ttc gca gag gtg ctc gac gta 816
Met Ile Glu Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Phe Ala Glu Val Leu Asp Val
260 265 270
att tcc tgg gat gct tac cca acg tgg cac gag caa gtg gac gac agc 864
Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Glu Gln Val Asp Asp Ser
275 280 285
cag ctg ggc gca tcg gtc gcg ttc tac cat gac ttg tac cgc tcg ctg 912
Gln Leu Gly Ala Ser Val Ala Phe Tyr His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu
290 295 300
aag cat aag ccg ttc ctg ctc atg gag agc acg ccg agc ttg acg aac 960
Lys His Lys Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn
305 310 315 320
tgg cag ccg gtg agc aag ctg aag cag ccg ggc atg cac cag ctg tcg 1008
Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu Lys Gln Pro Gly Met His Gln Leu Ser
325 330 335
tcg ctg cag gcg atc gcg cac ggt tcg gat tcc gtt caa tac ttc caa 1056
Ser Leu Gln Ala Ile Ala His Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln
340 345 350
tgg cgc aaa agc cgg ggc tcg agc gag aaa ttc cac ggc gcg gtc gtc 1104
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
355 360 365
gac cat gtc ggt cac gag cat acg cgc gtg ttc caa gac gtc gcg aag 1152
Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Gln Asp Val Ala Lys
370 375 380
ctc ggc cag acg atg aag gac att tcg gcc gtc gtc ggc acg gta acg 1200
Leu Gly Gln Thr Met Lys Asp Ile Ser Ala Val Val Gly Thr Val Thr
385 390 395 400
ccg tct cag acc gct att ctc ttc gac tgg gac aac cgt tgg gcg atc 1248
Pro Ser Gln Thr Ala Ile Leu Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Ile
405 410 415
aag gat tcg caa ggt ccg cgc aat atg ggc atc aaa tac gag gag acc 1296
Lys Asp Ser Gln Gly Pro Arg Asn Met Gly Ile Lys Tyr Glu Glu Thr
420 425 430
gtc tac gcc cat cac cgc gcg ctg tgg gag cag ggc gtg ccg acc gat 1344
Val Tyr Ala His His Arg Ala Leu Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp
435 440 445
atc atc ggc tcg gaa cag gat ttc gcg ggc tac aag ctc atc gtg gcg 1392
Ile Ile Gly Ser Glu Gln Asp Phe Ala Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala
450 455 460
ccg atg ctg tac ctg tgc cgc gag gag acg ggc cgc aag ctg gag caa 1440
Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg Glu Glu Thr Gly Arg Lys Leu Glu Gln
465 470 475 480
ttc gtg gag cag ggc ggc acg ctc gtg gcc acg tac tgg tcg ggc gtc 1488
Phe Val Glu Gln Gly Gly Thr Leu Val Ala Thr Tyr Trp Ser Gly Val
485 490 495
gtc gac gag cat gac ctg tgc cac ctc ggc ggg ttc ccg ggt ccg ctg 1536
Val Asp Glu His Asp Leu Cys His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu
500 505 510
cgc aag acg ctc ggc att tgg gcg gag gag atc gag ggc ttg tac gac 1584
Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp
515 520 525
cat gac cgc aac ggc gtc gcg ctg gcg gaa ggc aat gct ctc ggc ctg 1632
His Asp Arg Asn Gly Val Ala Leu Ala Glu Gly Asn Ala Leu Gly Leu
530 535 540
caa ggc gag ttc gaa gcg ggc gaa atc tgc gag ctg atc cat aca gag 1680
Gln Gly Glu Phe Glu Ala Gly Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu
545 550 555 560
ggc gcg gag gtg ctc ggc acg tat acg agc agc ttc tac gcg gga cgt 1728
Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr Tyr Thr Ser Ser Phe Tyr Ala Gly Arg
565 570 575
ccg gcc ctt acg ctg aac cgg ttc ggt caa gga cgc gcc tac cat atg 1776
Pro Ala Leu Thr Leu Asn Arg Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met
580 585 590
gcg acg cgg ctg aag gac gac ttc ctg ggc gcg ttc tac aag cgg atc 1824
Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp Phe Leu Gly Ala Phe Tyr Lys Arg Ile
595 600 605
gta gaa gaa gcg ggc gtg gcg cgc gcg atc gac gcg gag ctg ccg gcc 1872
Val Glu Glu Ala Gly Val Ala Arg Ala Ile Asp Ala Glu Leu Pro Ala
610 615 620
ggc gtg acg gca cag gtg cgc acg gac ggc gag acc gac ttc atc ttc 1920
Gly Val Thr Ala Gln Val Arg Thr Asp Gly Glu Thr Asp Phe Ile Phe
625 630 635 640
ctc atg aac ttc agc ggc tcg gag cag cag gtt gag ctt gat gcg ggc 1968
Leu Met Asn Phe Ser Gly Ser Glu Gln Gln Val Glu Leu Asp Ala Gly
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Gly Tyr Arg Asp Met Glu Ser Gly Glu Pro Ala Asp Thr Ala Val Lys
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ctg ccg gtc aac ggt att cga ctg ctg acg cgc caa gcc taa 2058
Leu Pro Val Asn Gly Ile Arg Leu Leu Thr Arg Gln Ala
675 680 685
<210> 74
<211> 685
<212> PRT
<213> 类芽孢杆菌属物种- 62253
<400> 74
Met Thr Thr Lys Phe Ala Pro Ile Ser Asp Lys Leu Thr Val Leu Met
1 5 10 15
His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val
20 25 30
Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu Met Lys Leu Ala Gly Cys Asn Val Met
35 40 45
Ala Val Gly Ile Phe Ser Trp Ala Ala Phe Glu Pro Thr Glu Gly Asn
50 55 60
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Gly Asn His Pro Ala Val Leu Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Phe Gly
145 150 155 160
Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr Cys Gln Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu
165 170 175
Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu Asp Ala Leu Asn Ser Ala Trp Trp Thr
180 185 190
Thr Phe Trp Ala His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro
195 200 205
Ala Pro His Gly Glu Asn Met Val His Gly His Asn Leu Asp Trp Arg
210 215 220
Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Val Asp Phe Cys Arg His Glu Ile Glu
225 230 235 240
Ser Val Arg Ser Ala Asn Pro Ser Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His
245 250 255
Met Ile Glu Gly Leu Asp Tyr Arg Lys Phe Ala Glu Val Leu Asp Val
260 265 270
Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Thr Trp His Glu Gln Val Asp Asp Ser
275 280 285
Gln Leu Gly Ala Ser Val Ala Phe Tyr His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu
290 295 300
Lys His Lys Pro Phe Leu Leu Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn
305 310 315 320
Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu Lys Gln Pro Gly Met His Gln Leu Ser
325 330 335
Ser Leu Gln Ala Ile Ala His Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln
340 345 350
Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val
355 360 365
Asp His Val Gly His Glu His Thr Arg Val Phe Gln Asp Val Ala Lys
370 375 380
Leu Gly Gln Thr Met Lys Asp Ile Ser Ala Val Val Gly Thr Val Thr
385 390 395 400
Pro Ser Gln Thr Ala Ile Leu Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Ile
405 410 415
Lys Asp Ser Gln Gly Pro Arg Asn Met Gly Ile Lys Tyr Glu Glu Thr
420 425 430
Val Tyr Ala His His Arg Ala Leu Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp
435 440 445
Ile Ile Gly Ser Glu Gln Asp Phe Ala Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala
450 455 460
Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg Glu Glu Thr Gly Arg Lys Leu Glu Gln
465 470 475 480
Phe Val Glu Gln Gly Gly Thr Leu Val Ala Thr Tyr Trp Ser Gly Val
485 490 495
Val Asp Glu His Asp Leu Cys His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu
500 505 510
Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp
515 520 525
His Asp Arg Asn Gly Val Ala Leu Ala Glu Gly Asn Ala Leu Gly Leu
530 535 540
Gln Gly Glu Phe Glu Ala Gly Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu
545 550 555 560
Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr Tyr Thr Ser Ser Phe Tyr Ala Gly Arg
565 570 575
Pro Ala Leu Thr Leu Asn Arg Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met
580 585 590
Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp Phe Leu Gly Ala Phe Tyr Lys Arg Ile
595 600 605
Val Glu Glu Ala Gly Val Ala Arg Ala Ile Asp Ala Glu Leu Pro Ala
610 615 620
Gly Val Thr Ala Gln Val Arg Thr Asp Gly Glu Thr Asp Phe Ile Phe
625 630 635 640
Leu Met Asn Phe Ser Gly Ser Glu Gln Gln Val Glu Leu Asp Ala Gly
645 650 655
Gly Tyr Arg Asp Met Glu Ser Gly Glu Pro Ala Asp Thr Ala Val Lys
660 665 670
Leu Pro Val Asn Gly Ile Arg Leu Leu Thr Arg Gln Ala
675 680 685
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<211> 694
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(694)
<400> 75
Met His His His His His His Pro Arg Met Thr Thr Lys Phe Ala Pro
1 5 10 15
Ile Ser Asp Lys Leu Thr Val Leu Met His Gly Ala Asp Tyr Asn Pro
20 25 30
Asp Gln Trp Leu His Asp Pro Lys Val Leu Glu Glu Asp Ile Arg Leu
35 40 45
Met Lys Leu Ala Gly Cys Asn Val Met Ala Val Gly Ile Phe Ser Trp
50 55 60
Ala Ala Phe Glu Pro Thr Glu Gly Asn Phe Asn Phe Glu Trp Met Asp
65 70 75 80
Lys Val Leu Asp Ser Phe Ala Ala Asn Gly Ile Tyr Ala Trp Leu Ala
85 90 95
Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp Met Ser Ala Lys Tyr Pro Glu
100 105 110
Val Leu Arg Thr Glu Ala Asn Arg Val Arg Asn Leu His Gly Met Arg
115 120 125
His Asn His Cys Asn Thr Ser Pro Val Tyr Arg Glu Lys Thr Ala Ile
130 135 140
Ile Asn Gly Lys Leu Ala Glu Arg Tyr Gly Asn His Pro Ala Val Leu
145 150 155 160
Gly Trp His Ile Ser Asn Glu Phe Gly Gly Asp Cys His Cys Asp Tyr
165 170 175
Cys Gln Glu Ala Phe Arg Gln Trp Leu Gln Lys Lys Tyr Gly Ser Leu
180 185 190
Asp Ala Leu Asn Ser Ala Trp Trp Thr Thr Phe Trp Ala His Thr Tyr
195 200 205
Thr Asp Trp Ser Gln Val Glu Ser Pro Ala Pro His Gly Glu Asn Met
210 215 220
Val His Gly His Asn Leu Asp Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr
225 230 235 240
Val Asp Phe Cys Arg His Glu Ile Glu Ser Val Arg Ser Ala Asn Pro
245 250 255
Ser Leu Pro Ala Thr Thr Asn Met His Met Ile Glu Gly Leu Asp Tyr
260 265 270
Arg Lys Phe Ala Glu Val Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro
275 280 285
Thr Trp His Glu Gln Val Asp Asp Ser Gln Leu Gly Ala Ser Val Ala
290 295 300
Phe Tyr His Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys His Lys Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Thr Asn Trp Gln Pro Val Ser Lys Leu
325 330 335
Lys Gln Pro Gly Met His Gln Leu Ser Ser Leu Gln Ala Ile Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Val Gln Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Val Gly His Glu His
370 375 380
Thr Arg Val Phe Gln Asp Val Ala Lys Leu Gly Gln Thr Met Lys Asp
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Ile Ser Ala Val Val Gly Thr Val Thr Pro Ser Gln Thr Ala Ile Leu
405 410 415
Phe Asp Trp Asp Asn Arg Trp Ala Ile Lys Asp Ser Gln Gly Pro Arg
420 425 430
Asn Met Gly Ile Lys Tyr Glu Glu Thr Val Tyr Ala His His Arg Ala
435 440 445
Leu Trp Glu Gln Gly Val Pro Thr Asp Ile Ile Gly Ser Glu Gln Asp
450 455 460
Phe Ala Gly Tyr Lys Leu Ile Val Ala Pro Met Leu Tyr Leu Cys Arg
465 470 475 480
Glu Glu Thr Gly Arg Lys Leu Glu Gln Phe Val Glu Gln Gly Gly Thr
485 490 495
Leu Val Ala Thr Tyr Trp Ser Gly Val Val Asp Glu His Asp Leu Cys
500 505 510
His Leu Gly Gly Phe Pro Gly Pro Leu Arg Lys Thr Leu Gly Ile Trp
515 520 525
Ala Glu Glu Ile Glu Gly Leu Tyr Asp His Asp Arg Asn Gly Val Ala
530 535 540
Leu Ala Glu Gly Asn Ala Leu Gly Leu Gln Gly Glu Phe Glu Ala Gly
545 550 555 560
Glu Ile Cys Glu Leu Ile His Thr Glu Gly Ala Glu Val Leu Gly Thr
565 570 575
Tyr Thr Ser Ser Phe Tyr Ala Gly Arg Pro Ala Leu Thr Leu Asn Arg
580 585 590
Phe Gly Gln Gly Arg Ala Tyr His Met Ala Thr Arg Leu Lys Asp Asp
595 600 605
Phe Leu Gly Ala Phe Tyr Lys Arg Ile Val Glu Glu Ala Gly Val Ala
610 615 620
Arg Ala Ile Asp Ala Glu Leu Pro Ala Gly Val Thr Ala Gln Val Arg
625 630 635 640
Thr Asp Gly Glu Thr Asp Phe Ile Phe Leu Met Asn Phe Ser Gly Ser
645 650 655
Glu Gln Gln Val Glu Leu Asp Ala Gly Gly Tyr Arg Asp Met Glu Ser
660 665 670
Gly Glu Pro Ala Asp Thr Ala Val Lys Leu Pro Val Asn Gly Ile Arg
675 680 685
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<211> 2061
<212> DNA
<213> 类芽孢杆菌属物种- 62758
<220>
<221> CDS
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<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(2058)
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Met Leu Lys Gln Ser Lys Ser Tyr Val Thr Lys Ala Gln Ser Met Leu
1 5 10 15
cat ggt ggc gac tat aat cct gat caa tgg tta gat cag cca gac att 96
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Gln Pro Asp Ile
20 25 30
ttg gca gat gat atc aaa tta atg aag ctt gcg aat aca aat aca ttc 144
Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Lys Leu Ala Asn Thr Asn Thr Phe
35 40 45
tca gta ggt att ttt gct tgg agt gcc tta gag ccg gag gaa gat gtc 192
Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Asp Val
50 55 60
tat aac ttt gag tgg cta gat gaa ata att aat aat att tat aac aat 240
Tyr Asn Phe Glu Trp Leu Asp Glu Ile Ile Asn Asn Ile Tyr Asn Asn
65 70 75 80
ggt gga cgt gtc atc ctg gca aca cct agt ggt gca cgt cct gct tgg 288
Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
atg tct cag aaa tat cca gaa gtg cta cgt gtt aat gaa aga cgc gag 336
Met Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Glu Arg Arg Glu
100 105 110
aaa tta tta cat gga gga cgt cat aac cac tgc ttc acg tct gag gtt 384
Lys Leu Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Glu Val
115 120 125
tat cgt gag aag acg cat aag ata aac ggt ttg tta gca gag cga tat 432
Tyr Arg Glu Lys Thr His Lys Ile Asn Gly Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
ggc gat cat cct gct tta ctg atg tgg cat att tcg aat gag tat ggt 480
Gly Asp His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
ggt gaa tgt cac tgt gat aaa tgt cag gag gct ttc aga acc tgg ttg 528
Gly Glu Cys His Cys Asp Lys Cys Gln Glu Ala Phe Arg Thr Trp Leu
165 170 175
aag ggc aaa tat aat aat gat cta aag gca ttg aat gat tca tgg tgg 576
Lys Gly Lys Tyr Asn Asn Asp Leu Lys Ala Leu Asn Asp Ser Trp Trp
180 185 190
gga ccc ttc tgg agt cac acg atc ttt gat tgg tca caa att gaa tct 624
Gly Pro Phe Trp Ser His Thr Ile Phe Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
ccc tca cca att ggg gaa agt gcc gtt cat ggc ttg aac tta gat tgg 672
Pro Ser Pro Ile Gly Glu Ser Ala Val His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
cgt cgc ttt gtt acc gac caa aca att gat ttt tac gaa aat gaa att 720
Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Asp Phe Tyr Glu Asn Glu Ile
225 230 235 240
gta cca ttg cgg gaa atg acg cct gct gtg cca att aca acg aac ttc 768
Val Pro Leu Arg Glu Met Thr Pro Ala Val Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
atg gct gat aca ttt gat tta att cca ttt caa tca ctt gat tat agt 816
Met Ala Asp Thr Phe Asp Leu Ile Pro Phe Gln Ser Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
aaa ttt gct aag cat gtc gat gta atc agc tgg gat gct tat cct gca 864
Lys Phe Ala Lys His Val Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
tgg cat aat gat tgg gaa aca acc gat aat ctt gcg atg aaa gtg ggc 912
Trp His Asn Asp Trp Glu Thr Thr Asp Asn Leu Ala Met Lys Val Gly
290 295 300
ttt att aat gac ctt tat cgt agc ttg aaa cag cag ccg ttt cta tta 960
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
atg gag tca acg cca agt ctt gta aac tgg cat aat gtc aac aag gcc 1008
Met Glu Ser Thr Pro Ser Leu Val Asn Trp His Asn Val Asn Lys Ala
325 330 335
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Lys Arg Pro Gly Met His Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Val Ala His
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Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
tct gag aaa ttc cat ggt gct gcg gta gat cat gac aat agt acg gaa 1152
Ser Glu Lys Phe His Gly Ala Ala Val Asp His Asp Asn Ser Thr Glu
370 375 380
aat cgt gtg ttt caa gag gtt gcc aaa gta gga gat gta tta ggg aaa 1200
Asn Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Lys Val Gly Asp Val Leu Gly Lys
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ctg gaa gat gtc gta ggg acc aac cgc ccc gct gat gta gca atc ctt 1248
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Tyr Asp Trp Glu Ser Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Gly
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Arg Lys Thr Lys Gln Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Glu His Tyr Arg Thr
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ttc tgg gag caa gac att cca gtc gat gtc att aca aaa gat gaa gac 1392
Phe Trp Glu Gln Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Asp Glu Asp
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ttt tca aac tac aag cta cta att gtc cca atg ctc tat tta atg agt 1440
Phe Ser Asn Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Met Ser
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gag gag aca att agt cgg ttg aag gca ttt gtt gct aat ggt gga aga 1488
Glu Glu Thr Ile Ser Arg Leu Lys Ala Phe Val Ala Asn Gly Gly Arg
485 490 495
tta gtc atg acc tat att agt gga ttg gtg aat gag cac gat ctt gct 1536
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Leu Val Asn Glu His Asp Leu Ala
500 505 510
tat tta ggt ggc tgg cat agt gat ctt caa gaa atc ttt ggt atg gag 1584
Tyr Leu Gly Gly Trp His Ser Asp Leu Gln Glu Ile Phe Gly Met Glu
515 520 525
ccg aaa gaa aca gat acc tac tat cct agt gat cgt aac tat gtt cag 1632
Pro Lys Glu Thr Asp Thr Tyr Tyr Pro Ser Asp Arg Asn Tyr Val Gln
530 535 540
ttc cgt aat aac tcc tat gaa gta aag gat tat gca acc gtc ctt cag 1680
Phe Arg Asn Asn Ser Tyr Glu Val Lys Asp Tyr Ala Thr Val Leu Gln
545 550 555 560
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Gln Gly Ser Ala Arg Thr Glu Gly Val Tyr Gln Glu Asp Phe Tyr Lys
565 570 575
gat aca ccg gct gtt atg agt cat gaa tat aac aag ggg aaa agc tat 1776
Asp Thr Pro Ala Val Met Ser His Glu Tyr Asn Lys Gly Lys Ser Tyr
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tat ata ggg gca cgt ctt aat caa cag ttc cat agg gac ttc tac caa 1824
Tyr Ile Gly Ala Arg Leu Asn Gln Gln Phe His Arg Asp Phe Tyr Gln
595 600 605
gaa att att gac gaa tta gga ctt agt ccg gtt gtt act gtc aaa cat 1872
Glu Ile Ile Asp Glu Leu Gly Leu Ser Pro Val Val Thr Val Lys His
610 615 620
ggg aaa ggt gtc tct ata cag aca aga caa ggc gag gat acg gac tat 1920
Gly Lys Gly Val Ser Ile Gln Thr Arg Gln Gly Glu Asp Thr Asp Tyr
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gtg ttc gtt atg aat ttc act gaa caa acg caa cag gta gaa ttt act 1968
Val Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Gln Thr Gln Gln Val Glu Phe Thr
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tct gct gta aaa gat ctt gta aca ggg gaa gag cta att ggt gaa gtg 2016
Ser Ala Val Lys Asp Leu Val Thr Gly Glu Glu Leu Ile Gly Glu Val
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Thr Leu Asn Thr Tyr Glu Val Arg Ile Val Ala Cys Lys Arg
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Met Leu Lys Gln Ser Lys Ser Tyr Val Thr Lys Ala Gln Ser Met Leu
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Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Lys Leu Ala Asn Thr Asn Thr Phe
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Tyr Arg Glu Lys Thr His Lys Ile Asn Gly Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
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Gly Asp His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr Gly
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<211> 695
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 带有His-标签的成熟序列
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(695)
<400> 78
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545 550 555 560
Val Lys Asp Tyr Ala Thr Val Leu Gln Gln Gly Ser Ala Arg Thr Glu
565 570 575
Gly Val Tyr Gln Glu Asp Phe Tyr Lys Asp Thr Pro Ala Val Met Ser
580 585 590
His Glu Tyr Asn Lys Gly Lys Ser Tyr Tyr Ile Gly Ala Arg Leu Asn
595 600 605
Gln Gln Phe His Arg Asp Phe Tyr Gln Glu Ile Ile Asp Glu Leu Gly
610 615 620
Leu Ser Pro Val Val Thr Val Lys His Gly Lys Gly Val Ser Ile Gln
625 630 635 640
Thr Arg Gln Gly Glu Asp Thr Asp Tyr Val Phe Val Met Asn Phe Thr
645 650 655
Glu Gln Thr Gln Gln Val Glu Phe Thr Ser Ala Val Lys Asp Leu Val
660 665 670
Thr Gly Glu Glu Leu Ile Gly Glu Val Thr Leu Asn Thr Tyr Glu Val
675 680 685
Arg Ile Val Ala Cys Lys Arg
690 695
<210> 79
<211> 331
<212> PRT
<213> 特异腐质霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(331)
<400> 79
Leu Gln Tyr Lys Gly Val Asp Trp Ser Ser Val Met Val Glu Glu Arg
1 5 10 15
Ala Gly Val Arg Tyr Lys Asn Val Asn Gly Gln Glu Lys Pro Leu Glu
20 25 30
Tyr Ile Leu Ala Glu Asn Gly Val Asn Met Val Arg Gln Arg Val Trp
35 40 45
Val Asn Pro Trp Asp Gly Asn Tyr Asn Leu Asp Tyr Asn Ile Gln Leu
50 55 60
Ala Arg Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Gly Leu Tyr Ile Asn Phe His
65 70 75 80
Tyr Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Ala His Gln Thr Thr Pro Ala Gly
85 90 95
Trp Pro Ser Asp Ile Asn Asn Leu Ala Trp Lys Leu Tyr Asn Tyr Thr
100 105 110
Leu Asp Ser Met Asn Arg Phe Ala Asp Ala Gly Ile Gln Val Asp Ile
115 120 125
Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Thr Gln Gly Leu Leu Trp Pro Leu Gly
130 135 140
Lys Thr Asn Asn Trp Tyr Asn Ile Ala Arg Leu Leu His Ser Ala Ala
145 150 155 160
Trp Gly Val Lys Asp Ser Arg Leu Asn Pro Lys Pro Lys Ile Met Val
165 170 175
His Leu Asp Asn Gly Trp Asn Trp Asp Thr Gln Asn Trp Trp Tyr Thr
180 185 190
Asn Val Leu Ser Gln Gly Pro Phe Glu Met Ser Asp Phe Asp Met Met
195 200 205
Gly Val Ser Phe Tyr Pro Phe Tyr Ser Ala Ser Ala Thr Leu Asp Ser
210 215 220
Leu Arg Arg Ser Leu Asn Asn Met Val Ser Arg Trp Gly Lys Glu Val
225 230 235 240
Ala Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Thr Ser Cys Pro Tyr Pro Arg Tyr
245 250 255
Gln Phe Pro Ala Asp Val Arg Asn Val Pro Phe Ser Ala Ala Gly Gln
260 265 270
Thr Gln Tyr Ile Gln Ser Val Ala Asn Val Val Ser Ser Val Ser Lys
275 280 285
Gly Val Gly Leu Phe Tyr Trp Glu Pro Ala Trp Ile His Asn Ala Asn
290 295 300
Leu Gly Ser Ser Cys Ala Asp Asn Thr Met Phe Thr Pro Ser Gly Gln
305 310 315 320
Ala Leu Ser Ser Leu Ser Val Phe His Arg Ile
325 330
<210> 80
<211> 332
<212> PRT
<213> 嗜热毁丝霉
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(332)
<400> 80
Ala Leu Thr Tyr Arg Gly Val Asp Trp Ser Ser Val Val Val Glu Glu
1 5 10 15
Arg Ala Gly Val Ser Tyr Lys Asn Thr Asn Gly Asn Ala Gln Pro Leu
20 25 30
Glu Asn Ile Leu Ala Ala Asn Gly Val Asn Thr Val Arg Gln Arg Val
35 40 45
Trp Val Asn Pro Ala Asp Gly Asn Tyr Asn Leu Asp Tyr Asn Ile Ala
50 55 60
Ile Ala Lys Arg Ala Lys Ala Ala Gly Leu Gly Val Tyr Ile Asp Phe
65 70 75 80
His Tyr Ser Asp Thr Trp Ala Asp Pro Ala His Gln Thr Met Pro Ala
85 90 95
Gly Trp Pro Ser Asp Ile Asp Asn Leu Ser Trp Lys Leu Tyr Asn Tyr
100 105 110
Thr Leu Asp Ala Ala Asn Lys Leu Gln Asn Ala Gly Ile Gln Pro Thr
115 120 125
Ile Val Ser Ile Gly Asn Glu Ile Arg Ala Gly Leu Leu Trp Pro Thr
130 135 140
Gly Arg Thr Glu Asn Trp Ala Asn Ile Ala Arg Leu Leu His Ser Ala
145 150 155 160
Ala Trp Gly Ile Lys Asp Ser Ser Leu Ser Pro Lys Pro Lys Ile Met
165 170 175
Ile His Leu Asp Asn Gly Trp Asp Trp Gly Thr Gln Asn Trp Trp Tyr
180 185 190
Thr Asn Val Leu Lys Gln Gly Thr Leu Glu Leu Ser Asp Phe Asp Met
195 200 205
Met Gly Val Ser Phe Tyr Pro Phe Tyr Ser Ser Ser Ala Thr Leu Ser
210 215 220
Ala Leu Lys Ser Ser Leu Asp Asn Met Ala Lys Thr Trp Asn Lys Glu
225 230 235 240
Ile Ala Val Val Glu Thr Asn Trp Pro Ile Ser Cys Pro Asn Pro Arg
245 250 255
Tyr Ser Phe Pro Ser Asp Val Lys Asn Ile Pro Phe Ser Pro Glu Gly
260 265 270
Gln Thr Thr Phe Ile Thr Asn Val Ala Asn Ile Val Ser Ser Val Ser
275 280 285
Arg Gly Val Gly Leu Phe Tyr Trp Glu Pro Ala Trp Ile His Asn Ala
290 295 300
Asn Leu Gly Ser Ser Cys Ala Asp Asn Thr Met Phe Ser Gln Ser Gly
305 310 315 320
Gln Ala Leu Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Arg Ile
325 330
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 81是保守基序 GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 保守基序的位置3处的氨基酸是
苏氨酸（T）或蛋氨酸（M）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 保守基序的位置6处的氨基酸是
色氨酸（W）或蛋氨酸（M）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 保守基序的位置9处的氨基酸是
异亮氨酸（I）或缬氨酸（V）。
<400> 81
Gly Val Xaa Pro Asp Xaa Val Gln Xaa Gly Asn Glu
1 5 10
<210> 82
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 82是保守基序WADP[A/G]xQxKPxAW。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> 保守基序的位置5处的氨基酸是
丙氨酸（A）或甘氨酸（G）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 保守基序的位置6处的氨基酸是任意
氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> 保守基序的位置8处的氨基酸是任意
氨基酸。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> 保守基序的位置11处的氨基酸是任意
氨基酸。
<400> 82
Trp Ala Asp Pro Xaa Xaa Gln Xaa Lys Pro Xaa Ala Trp
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO: 83是保守基序DW[K/R]RF[V/I]T[A/D]Q[T/M]。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (3)..(3)
<223> 保守基序的位置3处的氨基酸是
赖氨酸（K）或精氨酸（R）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> 保守基序的位置6处的氨基酸是
缬氨酸（V）或异亮氨酸（I）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> 保守基序的位置8处的氨基酸是
丙氨酸（A）或天冬氨酸（D）。
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> 保守基序的位置10处的氨基酸是
苏氨酸（T）或蛋氨酸（M）。
<400> 83
Asp Trp Xaa Arg Phe Xaa Thr Xaa Gln Xaa
1 5 10
<210> 84
<211> 27
<212> PRT
<213> 克劳氏芽孢杆菌（Bacillus clausii）
<400> 84
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala
20 25
<210> 85
<211> 687
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 85
Met Met Ser Lys Leu Glu Lys Thr His Val Thr Lys Ala Lys Phe Met
1 5 10 15
Leu His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp
20 25 30
Ile Leu Ala Asp Asp Ile Lys Leu Met Lys Leu Ser His Thr Asn Thr
35 40 45
Phe Ser Val Gly Ile Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly
50 55 60
Val Tyr Gln Phe Glu Trp Leu Asp Asp Ile Phe Glu Arg Ile His Ser
65 70 75 80
Ile Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala
85 90 95
Trp Leu Ser Gln Thr Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Ala Ser Arg
100 105 110
Val Lys Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Leu Thr Ser Lys
115 120 125
Val Tyr Arg Glu Lys Thr Arg His Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg
130 135 140
Tyr Gly His His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Ile Ser Asn Glu Tyr
145 150 155 160
Gly Gly Asp Cys His Cys Asp Leu Cys Gln His Ala Phe Arg Glu Trp
165 170 175
Leu Lys Ser Lys Tyr Asp Asn Ser Leu Lys Thr Leu Asn His Ala Trp
180 185 190
Trp Thr Pro Phe Trp Ser His Thr Phe Asn Asp Trp Ser Gln Ile Glu
195 200 205
Ser Pro Ser Pro Ile Gly Glu Asn Gly Leu His Gly Leu Asn Leu Asp
210 215 220
Trp Arg Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Tyr Glu Asn Glu
225 230 235 240
Ile Ile Pro Leu Lys Glu Leu Thr Pro Asp Ile Pro Ile Thr Thr Asn
245 250 255
Phe Met Ala Asp Thr Pro Asp Leu Ile Pro Tyr Gln Gly Leu Asp Tyr
260 265 270
Ser Lys Phe Ala Lys His Val Asp Ala Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro
275 280 285
Val Trp His Asn Asp Trp Glu Ser Thr Ala Asp Leu Ala Met Lys Val
290 295 300
Gly Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu
305 310 315 320
Leu Met Glu Cys Thr Pro Ser Ala Val Asn Trp His Asn Val Asn Lys
325 330 335
Ala Lys Arg Pro Gly Met Asn Leu Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala
340 345 350
His Gly Ser Asp Ser Val Leu Tyr Phe Gln Tyr Arg Lys Ser Arg Gly
355 360 365
Ser Ser Glu Lys Leu His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Ser Pro
370 375 380
Lys Asn Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Lys Val Gly Glu Thr Leu Glu
385 390 395 400
Arg Leu Ser Glu Val Val Gly Thr Lys Arg Pro Ala Gln Thr Ala Ile
405 410 415
Leu Tyr Asp Trp Glu Asn His Trp Ala Leu Glu Asp Ala Gln Gly Phe
420 425 430
Ala Lys Ala Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Gln Gln His Tyr Arg
435 440 445
Thr Phe Trp Glu His Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu Gln
450 455 460
Asp Phe Ser Pro Tyr Lys Leu Leu Ile Val Pro Met Leu Tyr Leu Ile
465 470 475 480
Ser Glu Asp Thr Val Ser Arg Leu Lys Ala Phe Thr Ala Asp Gly Gly
485 490 495
Thr Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Val Val Asn Glu His Asp Leu
500 505 510
Thr Tyr Thr Gly Gly Trp His Pro Asp Leu Gln Ala Ile Phe Gly Val
515 520 525
Glu Pro Leu Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Lys Asp Arg Asn Ala Val
530 535 540
Ser Tyr Arg Ser Gln Ile Tyr Glu Met Lys Asp Tyr Ala Thr Val Ile
545 550 555 560
Asp Val Lys Thr Ala Ser Val Glu Ala Val Tyr Gln Glu Asp Phe Tyr
565 570 575
Ala Arg Thr Pro Ala Val Thr Ser His Glu Tyr Gln Gln Gly Lys Ala
580 585 590
Tyr Phe Ile Gly Ala Arg Leu Glu Asp Gln Phe Gln Arg Asp Phe Tyr
595 600 605
Glu Gly Leu Ile Thr Asp Leu Ser Leu Ser Pro Val Phe Pro Val Arg
610 615 620
His Gly Lys Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Asp Gln Asp Asn Asp
625 630 635 640
Tyr Ile Phe Val Met Asn Phe Thr Glu Glu Lys Gln Leu Val Thr Phe
645 650 655
Asp Gln Ser Val Lys Asp Ile Met Thr Gly Asp Ile Leu Ser Gly Asp
660 665 670
Leu Thr Met Glu Lys Tyr Glu Val Arg Ile Val Val Asn Thr His
675 680 685
<210> 86
<211> 429
<212> PRT
<213> 枯草芽孢杆菌
<400> 86
Met Lys Ser Lys Val Lys Met Phe Phe Ala Ala Ala Ile Val Trp Ser
1 5 10 15
Ala Cys Ser Ser Thr Gly Tyr Ala Ala Ala Ile Glu Lys Glu Lys His
20 25 30
Val Ser Glu Leu Arg Ala Glu Asp Leu Phe Val Lys Lys Val Glu Gly
35 40 45
Met Asn Lys Asp Phe Ile Lys Gly Ala Asp Val Ser Ser Val Ile Ala
50 55 60
Leu Glu Asn Ser Gly Val Thr Phe Tyr Asn Thr Asn Gly Lys Arg Gln
65 70 75 80
Asp Ile Phe Thr Thr Leu Lys Gln Ala Gly Val Asn Tyr Val Arg Val
85 90 95
Arg Ile Trp Asn His Pro Tyr Asp Ser Asn Gly Asn Gly Tyr Gly Gly
100 105 110
Gly Asn Asn Asp Val Gln Lys Ala Ile Glu Ile Gly Lys Arg Ala Thr
115 120 125
Ala Asn Gly Met Lys Val Leu Ala Asp Phe His Tyr Ser Asp Phe Trp
130 135 140
Ala Asp Pro Ala Lys Gln Lys Val Pro Lys Ala Trp Ala Asn Leu Ser
145 150 155 160
Phe Glu Ala Lys Lys Ala Lys Leu Tyr Glu Tyr Thr Lys Gln Ser Leu
165 170 175
Gln Lys Met Ile Lys Glu Gly Val Asp Ile Gly Met Val Gln Val Gly
180 185 190
Asn Glu Thr Thr Gly Gly Phe Ala Gly Glu Thr Asp Trp Thr Lys Met
195 200 205
Cys Gln Leu Phe Asn Glu Gly Ser Arg Ala Val Arg Glu Thr Asn Ser
210 215 220
Asn Ile Leu Val Ala Leu His Phe Thr Asn Pro Glu Thr Ala Gly Arg
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Ile Ala Glu Thr Leu Ser Lys Asn Lys Val Asp Tyr Asp
245 250 255
Val Phe Ala Ser Ser Tyr Tyr Pro Phe Trp His Gly Thr Leu Gln Asn
260 265 270
Leu Thr Ser Val Leu Lys Ala Val Ala Asn Thr Tyr Gly Lys Lys Val
275 280 285
Met Val Ala Glu Thr Ser Tyr Thr Tyr Thr Ala Glu Asp Gly Asp Gly
290 295 300
His Gly Asn Thr Ala Pro Lys Ser Gly Gln Thr Leu Pro Tyr Pro Ile
305 310 315 320
Ser Val Gln Gly Gln Ala Thr Ala Val Arg Asp Val Met Glu Ala Val
325 330 335
Ala Asn Thr Gly Lys Ala Gly Leu Gly Val Phe Tyr Trp Glu Pro Ala
340 345 350
Trp Ile Pro Val Gly Pro Lys Thr Gln Ile Glu Lys Asn Lys Val Leu
355 360 365
Trp Glu Thr Tyr Gly Ser Gly Trp Ala Ser Ser Tyr Ala Ala Glu Tyr
370 375 380
Asp Pro Glu Asp Ala Gly Lys Trp Tyr Gly Gly Ser Ala Val Asp Asn
385 390 395 400
Gln Ala Leu Phe Asp Phe Asn Gly His Pro Leu Pro Ser Leu Gln Val
405 410 415
Phe Gln Tyr Ala Glu Ser Gly His Ile Pro Lys Lys Arg
420 425
<210> 87
<211> 686
<212> PRT
<213> 嗜热脂肪土芽孢杆菌
<400> 87
Met Pro Lys Tyr Glu Arg Thr Tyr Thr Thr Gln Ala Asn Phe Ile Leu
1 5 10 15
His Gly Gly Asp Tyr Asn Pro Asp Gln Trp Leu Asp Arg Pro Asp Ile
20 25 30
Leu Gln Ala Asp Leu Glu Leu Met Lys Leu Ser His Thr Asn Thr Phe
35 40 45
Thr Val Gly Val Phe Ala Trp Ser Ala Leu Glu Pro Glu Glu Gly Val
50 55 60
Tyr Arg Phe Glu Trp Leu Asp Lys Val Phe Asp Asp Ile Tyr Arg Ile
65 70 75 80
Gly Gly Arg Val Ile Leu Ala Thr Pro Ser Gly Ala Arg Pro Ala Trp
85 90 95
Leu Ser Gln Lys Tyr Pro Glu Val Leu Arg Val Asn Ala Ala Arg Val
100 105 110
Arg Gln Leu His Gly Gly Arg His Asn His Cys Phe Thr Ser Ser Val
115 120 125
Tyr Arg Glu Lys Thr Gln His Ile Asn Arg Leu Leu Ala Glu Arg Tyr
130 135 140
Gly Asp His Pro Ala Leu Leu Met Trp His Val Ser Asn Glu Tyr Gly
145 150 155 160
Gly Glu Cys His Cys Asn Leu Cys Gln Glu Ala Phe Arg Glu Trp Leu
165 170 175
Lys Lys Lys Tyr Asn His Asp Leu Asp Ala Leu Asn Ala Ala Trp Trp
180 185 190
Thr Ser Phe Trp Ser His Thr Tyr Thr Asp Trp Ser Gln Ile Glu Ser
195 200 205
Pro Ser Pro Ile Gly Glu His Thr Ile His Gly Leu Asn Leu Asp Trp
210 215 220
Lys Arg Phe Val Thr Asp Gln Thr Ile Ser Phe Phe Glu Asn Glu Ile
225 230 235 240
Val Pro Leu Arg Glu Leu Thr Pro His Ile Pro Ile Thr Thr Asn Phe
245 250 255
Met Ala Asp Thr His Asp Leu Ile Pro Phe Gln Gly Leu Asp Tyr Ser
260 265 270
Lys Phe Ala Lys His Leu Asp Val Ile Ser Trp Asp Ala Tyr Pro Ala
275 280 285
Trp His Asn Asp Trp Glu Ser Thr Ala Asp Leu Ala Met Lys Val Gly
290 295 300
Phe Ile Asn Asp Leu Tyr Arg Ser Leu Lys Gln Gln Pro Phe Leu Leu
305 310 315 320
Met Glu Cys Thr Pro Ser Leu Val Asn Trp His Lys Val Asn Lys Ala
325 330 335
Lys Arg Pro Gly Met His Phe Leu Ser Ser Met Gln Met Ile Ala His
340 345 350
Gly Ser Asp Ser Ile Leu Tyr Phe Gln Trp Arg Lys Ser Arg Gly Ser
355 360 365
Phe Glu Lys Phe His Gly Ala Val Val Asp His Asp Asn Arg Thr Asp
370 375 380
Ser Arg Val Phe Gln Glu Val Ala Glu Val Gly Lys Ala Leu Lys Lys
385 390 395 400
Met Ser Gly Ile Val Gly Thr Asn Arg Pro Ala Glu Val Ala Ile Leu
405 410 415
Tyr Asp Trp Glu Asn Asn Trp Ala Leu Asn Asp Ala Gln Gly Phe Ala
420 425 430
Ala Glu Thr Lys Arg Tyr Pro Gln Thr Leu Val Gln His Tyr Arg Pro
435 440 445
Phe Trp Glu Arg Asp Ile Pro Val Asp Val Ile Thr Lys Glu His Asp
450 455 460
Phe Ser Arg Tyr Lys Leu Leu Ile Ala Pro Met Leu Tyr Leu Val Ser
465 470 475 480
Glu Glu Thr Ile Ala Arg Leu Lys Glu Phe Val Ala Asn Gly Gly Thr
485 490 495
Leu Val Met Thr Tyr Ile Ser Gly Ile Val Asp Glu His Asp Leu Ala
500 505 510
Tyr Leu Gly Gly Trp His Gln Asp Leu Arg Glu Met Phe Gly Met Glu
515 520 525
Pro Ile Glu Thr Asp Thr Leu Tyr Pro Arg Asp Arg Asn Ser Val His
530 535 540
Tyr Arg Gly Arg Ser Tyr Glu Leu Lys Asp Tyr Ala Thr Val Ile Lys
545 550 555 560
Ile His Ala Ala Thr Val Glu Gly Val Tyr Glu Asp Asp Phe Tyr Ala
565 570 575
Asp Thr Pro Ala Val Thr Ser Asn Gln Tyr Gly Lys Gly Gln Ala Tyr
580 585 590
Tyr Ile Gly Gly Arg Leu Glu Asp Gln Phe His Arg Asp Phe Tyr Gln
595 600 605
Glu Leu Met Glu Lys Leu Asp Leu Arg Pro Val Leu Phe Val Lys His
610 615 620
Glu Lys Gly Val Ser Val Gln Ala Arg Gln Ala Pro Glu Cys Asp Tyr
625 630 635 640
Val Phe Ile Met Asn Phe Thr Glu Glu Lys Gln Ala Val Val Leu Glu
645 650 655
Glu Lys Val Lys Asp Leu Phe Thr Gly Glu Glu Ile Val Gly Glu Ile
660 665 670
Met Leu Asp Lys Tyr Glu Val Arg Val Val Glu Lys Arg Arg
675 680 685
<210> 88
<211> 814
<212> PRT
<213> 嗜热脂肪土芽孢杆菌
<400> 88
Met Gly Lys Gln Phe Leu Phe Val Leu Val Ala Met Met Val Met Ile
1 5 10 15
Met Ser Phe Ser Ser Asn His Ile His Lys Ala Ala Ala Asp Ser Tyr
20 25 30
Asn Tyr Leu Ile Asn Gly Gly Phe Glu Ser Asp Phe Trp Ala Asp Gly
35 40 45
Ser Trp Thr Val Thr Thr Gln Asp Trp Ser Ser Val Asp Leu Gln Arg
50 55 60
Phe Ser Tyr Ser Asn Asp Ala Trp Ile Val Pro Asn Glu Gly Asp Ser
65 70 75 80
Ala Phe Lys Tyr Trp Ile Arg Asp Ile Ala Asn Gly Asn Gln Thr Phe
85 90 95
Thr Leu Lys Gln Thr Ile Gly Gln Leu Pro Pro Gly Ser Tyr Glu Leu
100 105 110
Ser Val Gln Ser Met Gly Gly Ala Gly Asp Glu Ala Gly Tyr Ile Gln
115 120 125
Leu Phe Ala Gly Asp Lys Met Ala Asp Ala Val Val Thr Lys Gly Tyr
130 135 140
Asn Ser Trp Glu Thr Val Lys Leu Glu Phe Thr Leu Glu Glu Glu Ala
145 150 155 160
Ser Asn Phe Glu Val Gly Ala Ile Val Thr Gly Glu Pro Asn Ala Trp
165 170 175
Gly Tyr Met Asp His Phe Gln Leu Val Ser Leu Asn Ser Ala Gly Gly
180 185 190
Arg Glu Met Pro Lys Pro Val Pro Ala Asp Ile Phe Val Lys Arg Val
195 200 205
Asp Gly Leu Ser Lys Glu Phe Ile Lys Gly Val Asp Val Ser Ser Ile
210 215 220
Ile Ala Leu Glu Asp Ser Gly Val Lys Phe Tyr Asn Ala Ala Gly Lys
225 230 235 240
Lys Gln Asp Ile Phe Lys Thr Leu Lys Glu Ala Gly Ile Asn Tyr Val
245 250 255
Arg Val Arg Val Trp Asn Asp Pro Tyr Asp Ala Lys Gly His Gly Tyr
260 265 270
Gly Gly Gly Asn Asn Asp Leu Glu Lys Ala Ile Glu Ile Gly Lys Arg
275 280 285
Ala Thr Ala Ser Gly Met Lys Leu Leu Val Asp Phe His Tyr Ser Asp
290 295 300
Phe Trp Ala Asp Pro Ala Lys Gln Arg Pro Pro Lys Ala Trp Ala Lys
305 310 315 320
Leu Asn Phe Glu Ala Lys Lys Lys Ala Leu Tyr Arg Phe Thr Lys Glu
325 330 335
Ser Leu Lys Ala Met Leu Lys Glu Lys Ile Gln Val Gly Met Val Gln
340 345 350
Ile Gly Asn Glu Thr Asn Gly Ala Phe Val Gly Glu Thr Asp Trp Ala
355 360 365
Lys Ile Cys Glu Leu Leu Asn Ala Gly Ser Arg Ala Val Arg Glu Thr
370 375 380
Ser Pro Asn Ile Leu Val Val Leu His Phe Thr Asn Pro Glu Thr Pro
385 390 395 400
Gly Arg Tyr Ala Ser Ile Ala Lys Thr Leu Ala Glu His Lys Val Asp
405 410 415
Tyr Asp Val Phe Ala Ser Ser Tyr Tyr Pro Phe Trp His Gly Thr Leu
420 425 430
Ala Asn Leu Thr Ser Val Leu Lys Tyr Val Ala Asn Thr Tyr Leu Lys
435 440 445
Lys Val Met Val Ala Glu Thr Ser Tyr Pro Tyr Thr Thr Glu Asp Gly
450 455 460
Asp Gly His Glu Asn Thr Ala Pro Lys Ser Ser Gly Gln Thr Leu Asn
465 470 475 480
Tyr Pro Ile Thr Val Gln Gly Gln Ala Asn Ala Ile Arg Asp Val Ile
485 490 495
Gln Ala Val Ala Ala Val Gly Lys Pro Gly Ile Gly Val Phe Tyr Trp
500 505 510
Glu Pro Ala Trp Ile Pro Val Gly Pro Pro Glu Gln Leu Lys Gln Asn
515 520 525
Glu Lys Lys Trp Glu Lys Tyr Gly Ser Gly Trp Ala Ser Ser Phe Ala
530 535 540
Ala Glu Tyr Asp Pro Asp Ala Ala Met Trp His Gly Gly Ser Ala Val
545 550 555 560
Asp Asn Gln Ala Leu Phe Asp Phe Asn Gly Arg Pro Leu Pro Ser Leu
565 570 575
Asn Val Phe Lys Tyr Val Asp Thr Gly Ala Val Ala Pro Leu Lys Ile
580 585 590
Asp Glu Ile Lys Asp Ile Tyr Ile Arg Ala Ala Phe Gly Glu Gln Val
595 600 605
Val Leu Pro Thr Thr Val Thr Ala Thr Tyr Asn Asp Gly Ser Lys His
610 615 620
Leu Val Ser Val Lys Trp Asp Gln Ala Ala Leu Glu Gln Ala Leu Arg
625 630 635 640
Thr Gly Val Gly Thr Tyr Val Ile Gln Gly Val Val Glu Gly Gly Glu
645 650 655
Thr Val Lys Ala His Leu Glu Ile Thr Pro Lys Asn Tyr Val Val Asn
660 665 670
Pro Ser Phe Glu Asp Gln Asp Arg Thr Met Trp Asn Ile Ile Tyr Arg
675 680 685
Asn Gly Thr Ser Pro His Thr Asp Tyr Leu Glu Lys Ala Thr Asp Ala
690 695 700
Lys Ser Gly Asn Tyr Ser Leu His Phe Tyr Ser Asn Glu Ala Val Asp
705 710 715 720
Phe Gln Val Glu Gln Thr Ile Thr Gly Leu Lys Pro Gly Tyr Tyr Asn
725 730 735
Leu Ser Met Phe Leu Gln Ala Gly Asp Ala Pro Asn Ala Glu Ile Tyr
740 745 750
Leu Tyr Ala Lys Thr Gly Asp Lys Glu Tyr Arg Ala Ala Ala Ser Val
755 760 765
Asn Gly Trp Leu Asn Trp Ser Ser Pro Glu Ile His Asp Ile Tyr Ile
770 775 780
Ala Asp Gly Thr Val Thr Ile Gly Ala Ser Ile Lys Ala Asn Gly Gly
785 790 795 800
Ala Trp Gly Thr Leu Asp Asp Phe Gln Leu Tyr Gln Thr Lys
805 810
Claims (25)
1.一种组合物，所述组合物包含一种或多种具有半乳聚糖酶活性的GH53多肽和一种或多种具有β-半乳糖苷酶活性的GH42多肽。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述GH53多肽包含基序GV[T/M]PD[W/M]VQ[I/V]GNE(SEQ ID NO:81)和/或基序WADP[A/G]xQxKPxAW(SEQ ID NO:82)。
3.如权利要求1至2中任一项所述的组合物，其中所述GH53多肽和所述GH42多肽获得自或可获得自分类学上芽孢杆菌目。
4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述GH53多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:39的变体，其中所述变体具有半乳聚糖酶活性并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(l)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(m)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(n)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)或(k)的多肽的片段，所述片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
5.如权利要求4所述的组合物，其中所述GH53多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQ ID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ IDNO:6的氨基酸1至318、SEQ ID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ IDNO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ ID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ IDNO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
6.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述GH42多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(n)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQID NO:56、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中所述变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(o)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(p)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(q)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)或(n)的多肽的片段，所述片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
7.如权利要求6所述的组合物，其中所述GH42多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:42的氨基酸1至685、SEQ ID NO:44的氨基酸1至688、SEQ ID NO:45的氨基酸1至695、SEQ IDNO:47的氨基酸1至687、SEQ ID NO:48的氨基酸1至694、SEQ ID NO:50的氨基酸1至654、SEQID NO:51的氨基酸1至661、SEQ ID NO:53的氨基酸1至687、SEQ ID NO:54的氨基酸1至694、SEQ ID NO:56的氨基酸1至686、SEQ ID NO:57的氨基酸1至695、SEQ ID NO:59的氨基酸1至688、SEQ ID NO:60的氨基酸1至697、SEQ ID NO:62的氨基酸1至691、SEQ ID NO:63的氨基酸1至700、SEQ ID NO:65的氨基酸1至690、SEQ ID NO:66的氨基酸1至699、SEQ ID NO:68的氨基酸1至689、SEQ ID NO:69的氨基酸1至698、SEQ ID NO:71的氨基酸1至685、SEQ ID NO:72的氨基酸1至694、SEQ ID NO:74的氨基酸1至685、SEQ ID NO:75的氨基酸1至694、SEQ IDNO:77的氨基酸1至686或SEQ ID NO:78的氨基酸1至695。
8.如权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中当在如下反应条件下进行时：20mg半乳聚糖酶和20mg β-半乳糖苷酶每kg大豆粉于10％w/v 0.1M柠檬酸-磷酸盐缓冲液中，pH6.5，在40℃孵育2小时，所述组合物释放至少12g半乳糖每kg大豆粉。
9.一种颗粒，所述颗粒包含如权利要求1至8中任一项所述的组合物。
10.一种动物饲料添加剂，所述动物饲料添加剂包含
(a)如权利要求1至8中任一项所述的组合物或如权利要求9所述的颗粒以及
(b)一种或多种选自下列表的组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；
一种或多种氨基酸；
一种或多种益生元；
一种或多种植生素；
一种或多种有机酸；以及
一种或多种其他饲料成分。
11.一种动物饲料，所述动物饲料包含植物基材料和如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒或如权利要求10所述的动物饲料添加剂。
12.一种粒化动物饲料，所述粒化动物饲料包含植物基材料和如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒或如权利要求10所述的动物饲料添加剂。
13.一种液体配制品，所述液体配制品包含如权利要求1至8中任一项所述的组合物。
14.一种从植物基材料中释放半乳糖的方法，所述方法包括用如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂或如权利要求13所述的液体配制品处理所述植物基材料。
15.一种改善动物的一个或多个表现参数的方法，所述方法包括向一种或多种动物给予如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂或如权利要求13所述的液体配制品。
16.如权利要求1至8中任一项所述的组合物、如权利要求9所述的颗粒、如权利要求10所述的动物饲料添加剂或如权利要求13所述的液体配制品：
在动物饲料中；
在动物饲料添加剂中；
在制备用于在动物饲料中使用的组合物中；
用于改善动物饲料的营养价值；
用于提高动物饲料的消化率；
用于改善动物的一个或多个表现参数；和/或
用于从分类学上蔷薇亚纲的植物基材料中释放半乳糖的用途。
17.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有半乳聚糖酶活性，所述分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少82％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:7的多肽具有至少83％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:11的多肽具有至少99.0％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少96.4％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:19的多肽具有至少84％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:23的多肽具有至少96.4％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少86％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:31的多肽具有至少99.3％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:35的多肽具有至少99.3％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少83％序列一致性的多肽；
(k)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少82％序列一致性的多核苷酸编码；
(l)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少83％序列一致性的多核苷酸编码；
(m)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少99.0％序列一致性的多核苷酸编码；
(n)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少96.4％序列一致性的多核苷酸编码；
(o)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:17的成熟多肽编码序列具有至少84％序列一致性的多核苷酸编码；
(p)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:21的成熟多肽编码序列具有至少96.4％序列一致性的多核苷酸编码；
(q)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少86％序列一致性的多核苷酸编码；
(r)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:29的成熟多肽编码序列具有至少99.3％序列一致性的多核苷酸编码；
(s)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:33的成熟多肽编码序列具有至少99.3％序列一致性的多核苷酸编码；
(t)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列具有至少83％序列一致性的多核苷酸编码；
(u)SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:39的变体，其中所述变体具有半乳聚糖酶活性并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(v)SEQ ID NO:11的变体，其中所述变体具有半乳聚糖酶活性并且包含在1、2或3个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(w)SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:23的变体，其中所述变体具有半乳聚糖酶活性并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(x)SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:35的变体，其中所述变体具有半乳聚糖酶活性并且包含在1或2个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(y)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；以及
(z)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(aa)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)或(x)的多肽的片段，所述片段具有半乳聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
18.根据权利要求17所述的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2的氨基酸1至316、SEQ ID NO:3的氨基酸1至316、SEQ ID NO:4的氨基酸1至324、SEQ ID NO:6的氨基酸1至318、SEQ ID NO:7的氨基酸1至318、SEQ ID NO:8的氨基酸1至326、SEQ IDNO:10的氨基酸1至316、SEQ ID NO:11的氨基酸1至316、SEQ ID NO:12的氨基酸1至324、SEQID NO:14的氨基酸1至316、SEQ ID NO:15的氨基酸1至316、SEQ ID NO:16的氨基酸1至324、SEQ ID NO:18的氨基酸1至316、SEQ ID NO:19的氨基酸1至316、SEQ ID NO:20的氨基酸1至324、SEQ ID NO:22的氨基酸1至316、SEQ ID NO:23的氨基酸1至316、SEQ ID NO:24的氨基酸1至324、SEQ ID NO:26的氨基酸1至516、SEQ ID NO:27的氨基酸1至516、SEQ ID NO:28的氨基酸1至524、SEQ ID NO:30的氨基酸1至317、SEQ ID NO:31的氨基酸1至317、SEQ ID NO:32的氨基酸1至325、SEQ ID NO:34的氨基酸1至316、SEQ ID NO:35的氨基酸1至316、SEQ IDNO:36的氨基酸1至324、SEQ ID NO:38的氨基酸1至316、SEQ ID NO:39的氨基酸1至316或SEQ ID NO:40的氨基酸1至324。
19.一种分离的多肽，所述分离的多肽具有β-半乳糖苷酶活性，所述分离的多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少82％序列一致性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:44的多肽具有至少99.8％序列一致性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:50的多肽具有至少90％序列一致性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:53的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:56的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:59的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:62的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:65的多肽具有至少88％序列一致性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:71的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:74的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:77的多肽具有至少80％序列一致性的多肽；
(n)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:41的成熟多肽编码序列具有至少82％序列一致性的多核苷酸编码；
(o)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列具有至少99.8％序列一致性的多核苷酸编码；
(p)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(q)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列具有至少90％序列一致性的多核苷酸编码；
(r)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(s)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(t)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:58的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(u)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:61的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(v)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:64的成熟多肽编码序列具有至少88％序列一致性的多核苷酸编码；
(w)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:67的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(x)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:70的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(y)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:73的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(z)多肽，该多肽由与SEQ ID NO:76的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性的多核苷酸编码；
(aa)SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56、SEQID NO:59、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:77的变体，其中所述变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ab)SEQ ID NO:44的变体，其中所述变体具有β-半乳糖苷酶活性并且包含在1或2个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合；
(ac)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)或(ab)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(ad)多肽，该多肽包含(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)或(ab)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(ae)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(j)、(k)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(v)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)或(ab)的多肽的片段，所述片段具有β-半乳糖苷酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
20.根据权利要求19所述的多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:42的氨基酸1至685、SEQ ID NO:44的氨基酸1至688、SEQ ID NO:45的氨基酸1至695、SEQ IDNO:47的氨基酸1至687、SEQ ID NO:48的氨基酸1至694、SEQ ID NO:50的氨基酸1至654、SEQID NO:51的氨基酸1至661、SEQ ID NO:53的氨基酸1至687、SEQ ID NO:54的氨基酸1至694、SEQ ID NO:56的氨基酸1至686、SEQ ID NO:57的氨基酸1至695、SEQ ID NO:59的氨基酸1至688、SEQ ID NO:60的氨基酸1至697、SEQ ID NO:62的氨基酸1至691、SEQ ID NO:63的氨基酸1至700、SEQ ID NO:65的氨基酸1至690、SEQ ID NO:66的氨基酸1至699、SEQ ID NO:68的氨基酸1至689、SEQ ID NO:69的氨基酸1至698、SEQ ID NO:71的氨基酸1至685、SEQ ID NO:72的氨基酸1至694、SEQ ID NO:74的氨基酸1至685、SEQ ID NO:75的氨基酸1至694、SEQ IDNO:77的氨基酸1至686或SEQ ID NO:78的氨基酸1至695。
21.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码如权利要求17至20中任一项所述的多肽。
22.一种核酸构建体或表达载体，所述核酸构建体或表达载体包含如权利要求21所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接至指导在表达宿主内产生所述多肽的一个或多个控制序列。
23.一种重组宿主细胞，所述重组宿主细胞包含如权利要求21所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接至指导所述多肽的产生的一个或多个控制序列。
24.一种产生如权利要求17至20中任一项所述的多肽的方法，所述方法包括：
(a)在有益于产生所述多肽的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生所述多肽；以及
(b)回收所述多肽。
25.一种产生如权利要求17至20中任一项所述的多肽的方法，所述方法包括：
(a)在有益于产生所述多肽的条件下培养如权利要求23所述的重组宿主细胞；以及
(b)回收所述多肽。
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