CN109122669B - 一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用 - Google Patents

一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用。细胞冷冻液，配方为：PBS中加入5％～25％的蛋白，加入3％～15％细胞稳定剂A，加入1％～10％细胞稳定剂B，加入0.01％～0.1％抑菌剂。本发明细胞冷冻液成功解决了现有细胞冷冻干燥技术中存在的冷冻干燥后细胞完整率极低或细胞膜结构蛋白与细胞内容物活性成分不能完好保留的问题。本发明干式肿瘤细胞质控品的制备方法是直接用含有细胞膜膜结构和内容物的人源性肿瘤细胞株来制备的质控品，该质控品本身就是来源于人的肿瘤细胞，与临床液体活检检测样本中同类肿瘤细胞具有相同的特性，本法所制备质控品适合于临床液体活检的质量控制,可促进临床液体活检大范围推广应用。

Description

一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用
技术领域
本发明属于生物检测试剂领域；涉及一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用。
背景技术
“液体活检技术”即从体液(血液、尿或胸腹水)中捕捉自由游走的癌细胞或癌DNA，以获得关于小肿瘤或潜藏肿瘤的信息。这将使医生能够监控癌症患者对治疗的反应，及时发现复发的早期征兆，甚至能早期发现癌变的迹象。
现在诸多企业加快了相关技术的研发速度。Qiagen、罗氏、Illumina等成熟的生物技术公司，以及Guardant Health、Foundation Medicine等初创公司，都在竞相将液体活检技术商业化，并计划在未来几年应用于临床。
液体活检临床检验分析过程的质量控制对检验结果的准确性具有重要影响，临床检验质量控制确保了临床检验的准确性和有效性。所以，液体活检临床应用首先要有稳定可靠的质控品，干式细胞质控品相对液态细胞质控品保存效期更长，质量更稳定。
肿瘤细胞株作为研究细胞癌变机理、肿瘤转移、肿瘤放疗和化疗敏感性分子基础等生物医学问题的重要材料，在不影响其细胞膜结构、外观形态以及内部主要成分(DNA和蛋白质)的前提下，建立一套肿瘤细胞长期保存的方法有着重要意义，能够解决临床上液体活检项目对肿瘤细胞质控品的强烈需求。
目前高效地冷冻干燥肿瘤细胞株面临着许多技术问题。如细胞在降温和复温的过程中极容易受溶液冻结、融化、以及溶液渗透压力变化等因素的作用造成“溶液损伤”或“胞内冰损伤”，从而使得恢复率很低[1]。
因此，能保持肿瘤细胞膜的形态与结构及主要内容物活性的肿瘤细胞干式细胞质控品的制备方法是急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液。
本发明的另一目的是提供该细胞冷冻液的应用。
本发明的又一目的是提供一种干式肿瘤细胞质控品。
本发明的目的可通过以下技术方案实现：
一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液，配方为：PBS中加入5％～25％(g/100mL) 的蛋白，3％～15％(v/v)细胞稳定剂A，1％～10％(g/100mL)细胞稳定剂B，0.01％～0.1％ (g/100mL)抑菌剂；其中所述的蛋白选自猪、牛、羊的酪蛋白、乳清蛋白或血清白蛋白中的一种或多种；所述的细胞稳定剂A选自猪、牛、羊血清或胎牛血清中的任意一种或多种；所述的细胞稳定剂B选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖等糖类中的任意一种或多种。
所述的PBS浓度为0.005M～0.1M；pH为6.8～7.5。
所述的抑菌剂选自硫柳汞、叠氮钠中的任意一种。
所述的细胞冷冻液，优选配方为PBS中加入5％～10％的蛋白，加入3％～10％细胞稳定剂A，加入1％～8％细胞稳定剂B，加入0.01％～0.03％抑菌剂。
所述的细胞冷冻液进一步优选配方为5g牛血清白蛋白(BSA)，10mL胎牛血清(FBS)，6g 海藻糖，20mg硫柳汞，加入70mL 0.01M，pH7.0～7.4的PBS中溶解混匀，PBS定容至100mL。
本发明所述的细胞冷冻液在冷冻干燥肿瘤细胞中的应用。
本发明所述的细胞冷冻液在制备干式肿瘤细胞质控品中的应用。
一种干式肿瘤细胞质控品的制备方法，包括细胞的准备、细胞的固定和细胞的冷冻干燥；所述的细胞冷冻干燥步骤中使用本发明所述的细胞冷冻液。
所述的细胞的准备包括细胞的复苏、细胞传代培养和细胞的收集；细胞的固定包括细胞固定和固定后细胞收集；细胞的冷冻干燥包括细胞与冷冻液共孵育和/或上冷冻干燥机冷冻干燥。
所述的细胞固定方法优选培养的人源肿瘤细胞离心去上清，加入5％～50％的有机溶剂室温固定4h～24h；所述的有机溶剂选自：甲醇、甲醛、乙醇或丙酮。
所述的细胞冷冻干燥温度及时间优选：
设置温度：区段一:-50℃，区段二:-30℃，区段三:-15℃，区段四:0℃，区段五20℃；
设置时间：区段一:7h，区段二:9h，区段三:9h，区段四:9h，区段五:14h，一共冷冻干燥48h。
按照本发明所述的制备方法制备的干式肿瘤细胞质控品。
所述的肿瘤细胞优选肺部肿瘤细胞、肝胆肿瘤细胞、食管肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胃部肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胰腺肿瘤细胞、甲状腺肿瘤细胞、乳腺肿瘤细胞、卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑部肿瘤细胞、白血病细胞、耳鼻喉肿瘤细胞、膀胱肿瘤细胞、肾脏肿瘤细胞、或其他肿瘤细胞。
所述的肺部肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：NCI-H1734、SH-543、SH-416、SH-437、SH-498、SH-224、NCI-H2347、NCI-H2126、NCI-H23、SH-289、NCI-H2228、 NCI-H1944、NCI-H292[H292]、NCI-H838[H838]、NCI-H1437[H1437]、MSTO-211H、 95-D、Calu-1，A549、NCI-H358、NCI-H1299、NCI-H1650[H-1650,H1650]、HCC827、 NCI-H1395、NCI-H1975[H-1975,H1975]、LTEP-a-2、SPC-A-1，NCI-H226、SK-MES-1、 NCI-H460[H460]、NCI-H661、NCI-H1688、NCI-H446[H446]、QG-56；
所述的肝胆肿瘤细胞选自：Hep G2、HuH-7、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405、Hep3B2.1-7、QGY-7701、QGY-7703、SK-HEP-1、SMMC-7721、Li-7、RBE、HCCC-9810、 GBC-SD；
所述的食管肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：Eca-109、TE-1、TE-10、TE-11、 KYSE-150；
所述的胃部肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：NCI-N87、KATO III、MGC80-3、 SNU-1、HGC-27、AGS、SGC-7901、BGC-823；
所述的结直肠肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：LS513、LoVo、Caco-2、HCT-15、 DLD-1、NCI-H716[H716]、COLO 320DM、SW948、SW480、SW1116、COLO-320、 CW-2、LS174T、RKO、HT-29、COLO 205、HCT 116、LoVo、SW620、HCT-8[HRT-18]、 Hce-8693；
所述的胰腺肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：PANC-1、MIA、PaCa-2、HPAF-II、 CFPAC-1、SW1990、BxPC-3、AsPC-1；
所述的甲状腺肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：ARO KHM-5M、TTA1、KTC-1、Hth83、HTh-7、CAL-62C643、BHT101、B-CPAP、ACT-1、8305C、Ocut-2C、KMH-2 FRO、TT、SW579[SW 579；SW-579]；
所述的乳腺肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：MCF7、ZR-75-30、MDA-MB-415、 HCC1937、Bcap-37、Hs 578T、MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468、ZR-75-1、 SK-BR-3、MDA-MB-436、BT-474[BT474]、BT-549、T-47D；
所述的卵巢肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：HO-8910、NIH:OVCAR-3、SK-OV-3、HO-8910PM、Caov-3[Caov3]、ES-2；
所述的子宫肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：HeLa、HeLa 229、C-33A、MS751、 ME-180、SiHa、HCC 94[HCC941122]、HEC-1-A、HEC-1-B、RL95-2；
所述的脑部肿瘤细胞进一步优选自以下肿瘤细胞株：U-87MG、U-118MG、SHG-44、U251、A172、IMR-32、SH-SY5Y、SK-N-BE(2)、SK-N-SH、SK-N-MC；
所述的白血病细胞进一步优选自：Kasumi-1、CEM/C1、SUP-B15、MV-4-11、HuT 78、A3、 Jurkat、Clone E6-1、6T-CEM、Dami、K-562、HEL、Kasumi-1、Reh、MOLT-4、AML-193、 MEG-01、THP-1、HL-60、KU812；
所述的耳鼻喉肿瘤细胞进一步优选自：Tca-8113、Acc-2、Acc-3、KB、FaDu、HEp-2、CNE；
所述的膀胱肿瘤细胞进一步优选自：TCCSUP、5637、SCaBER、T24、UM-UC-3、J82、 SW780[SW-780,SW780]、RT4；
所述的肾脏肿瘤细胞进一步优选自：ACHN、769-P、SW-13、786-O[786-0]；
所述的其他肿瘤细胞进一步优选自：A-431、A-375[A375]、VCaP、22Rv1、DU 145、LNCaP Clone FGC、PC-3、JEG-3、JAR。
本发明所述的干式肿瘤细胞质控品在制备肿瘤检测试剂中的应用。
所述的检测试剂为免疫磁珠法检测试剂，流式细胞检测试剂或其他方法学建立的循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)检测试剂。
有益效果：
现有的细胞冷冻液,如血液细胞和骨髓细胞的细胞冷冻液[2][3]常添加糖和高分子聚合物。本发明不添加高分子聚合物，改用乳蛋白和动物血清，成功解决了现有细胞冷冻干燥技术中存在的冷冻干燥后细胞完整率极低或细胞膜蛋白活性成分不能完好保留的问题。本发明干式肿瘤细胞质控品的制备方法是直接用含有相关细胞膜蛋白的细胞来制备质控品，其质控品本身就是来源于人的肿瘤细胞，和临床液体活检检测样本的来源相同，适合于临床液体活检的质量控制, 促进临床液体活检大范围推广应用。同时，细胞冷冻液的应用，使得制备的干式肿瘤细胞质控品细胞膜蛋白活性成分及活性完好保留，干式细胞质控品较之液体细胞质控品更加稳定。用流式方法检测患者全血等体液样本中肿瘤细胞时，本发明干式质控细胞作为阳性对照优于肿瘤活细胞作为阳性对照。
干式法制备的肿瘤质控细胞相比于活肿瘤细胞，还具有以下优点：
①制备好的干式肿瘤质控细胞冻干粉可以放在4℃长期保存，即用即取，不需要迁就活细胞培养时间、状态，实验安排更加灵活；
②前期处理只需加入纯水溶解即可获得细胞悬液，而不需进行消化、洗涤、离心等繁琐步骤，更简单、快捷；
③流式细胞术是一种定量检测方法，荧光抗体与细胞表面抗原结合后，此细胞可被检出，但在活细胞处理过程中，由于应激，或受培养条件变化等影响，其表面抗原表达处于动态变化过程，而质控细胞经过固定等处理环节，已将细胞定格于某一状态，不再改变，从而其表面抗原处于稳定状态，并且这些处理方法对抗原有一定的保护作用，因此在流式定量检测中，质控细胞结合荧光抗体的稳定性要优于活细胞。
④流式细胞仪每次检测都需调节电压、补偿、检测参数等，这些都与每次用于实验的细胞状态有关，因此实验设计中往往还需加入单标管，用于调节这些参数，这无形中增加了实验劳动量，也消耗更多抗体。而干式质控细胞是统一处理，细胞状态相对于活细胞较稳定，只需调节一次仪器参数，之后都可以延用第一次的参数，节省了实验时间和成本。
附图说明
图1实施例8细胞冷冻液制备的细胞质控品(A图)、现有技术中的细胞冷冻液I制备的细胞质控品(B图)和现有技术中的细胞冷冻液II制备的细胞质控品(C图)在复溶第1天免疫磁珠检测巴氏染色镜检照片。由图可见复溶第1天，A较B和C细胞形态饱满。
图2实施例8细胞冷冻液制备的细胞质控品(A图)、现有技术中的细胞冷冻液I制备的细胞质控品(B图)和现有技术中的细胞冷冻液II制备的细胞质控品(C图)在复溶后4℃保存第 5天免疫磁珠检测巴氏染色镜检照片。由图可见复溶第5天，A较B和C细胞数量多且形态相对饱满。
图3实施例8细胞冷冻液制备的细胞质控品(A图)、现有技术中的细胞冷冻液I制备的细胞质控品(B图)和现有技术中的细胞冷冻液II制备的细胞质控品(C图)在复溶后4℃保存第 10天免疫磁珠检测巴氏染色镜检照片。由图可见复溶第10天，A较B和C细胞数量多且形态相对饱满。
图4实施例8细胞冷冻液制备的细胞质控品(A图)、现有技术中的细胞冷冻液I制备的细胞质控品(B图)和现有技术中的细胞冷冻液II制备的细胞质控品(C图)在复溶后4℃保存第 20天免疫磁珠检测巴氏染色镜检照片。由图可见复溶第20天，A较B和C细胞数量多。
图5健康体检者外周血白细胞流式细胞仪检测结果
健康体检者外周血白细胞，未加荧光标记的NJ001抗体作为空白对照(A图)，健康体检者外周血白细胞，加入5μl荧光标记的NJ001抗体作为阴性对照(B图)。由图可见健康体检者外周血白细胞空白对照和阴性对照阳性率均为0.00％。
图6SPC-A1活细胞阳性对照流式细胞仪检测结果
SPC-A1活细胞，未加荧光标记的NJ001抗体作为空白对照(A图)，SPC-A1活细胞，加入5μl 荧光标记的NJ001抗体作为阳性对照(B图)。由图可见SPC-A1活细胞空白对照阳性率为0.00％，阳性对照阳性率为90.53％。
图7干式SPC-A1质控细胞阳性对照流式细胞仪检测结果
干式SPC-A1质控细胞未加荧光标记的NJ001抗体作为空白对照(A图)，干式SPC-A1质控细胞，加入5μl荧光标记的NJ001抗体作为阳性对照(B图)。由图可见干式SPC-A1质控细胞空白对照阳性率为0.00％，干式SPC-A1质控细胞阳性对照阳性率为98.23％。
具体实施方式
实施例1
25g酪蛋白，3mL FBS，2g葡萄糖，10mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.01M，pH7.0)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例2
5g BSA，15mL FBS，10g蔗糖，100mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.1M，pH7.4)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例3
5g酪蛋白，15mL小牛血清，6g果糖，50mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.01M，pH7.4) 中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例4
20g酪蛋白，6mL FBS，8g葡萄糖，20mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.01M，pH7.0)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例5
15g BSA，15mL FBS，6g蔗糖，30mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.1M，pH7.4)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例6
10g酪蛋白，15mL小牛血清，4g果糖，40mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.01M，pH7.4) 中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例7
25g BSA，5mL小牛血清，8g乳糖，80mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.1M，pH7.0)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例8
5g BSA，10mL FBS，6g海藻糖，20mg硫柳汞，加入70mL PBS(0.01M，pH7.0)中溶解混匀，PBS定容至100mL。
实施例9
人肺癌细胞系SPC-A1于含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中，37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。
培养5天长满瓶的SPC-A1细胞用胰酶消化，离心弃培养上清，PBS洗3次；30％甲醇固定 8小时，PBS洗2次；加入实施例8的细胞冷冻液中6小时，分装于西林瓶中，每瓶1mL。
装有细胞的西林瓶放入冷冻干燥机中，温度设置：区段一-50℃，区段二-30℃，区段三 -15℃，区段四0℃，区段五20℃；时间设置：区段一7h，区段二9h，区段三9h，区段四9h，区段五14h。一共冷冻干燥48h，取出放4℃冰箱保存。
实施例10
人肺癌细胞系SPC-A1于含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中，37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。
培养5天长满瓶的SPC-A1细胞用胰酶消化，离心弃培养上清，PBS洗3次；30％甲醇固定 8小时，PBS洗2次；分别加入实施例8的细胞冷冻液、现有技术中的细胞冷冻液I(10％PVP 和5％蔗糖)[2]和现有技术中的细胞冷冻液II(12％PVP和4％海藻糖)[3]中6小时，分装于西林瓶中，每瓶1mL。
装有细胞的西林瓶放入冷冻干燥机中，温度设置：区段一-50℃，区段二-30℃，区段三 -15℃，区段四0℃，区段五20℃。时间设置：区段一7h，区段二9h，区段三9h，区段四9h，区段五14h。一共冷冻干燥48h，取出放4℃冰箱保存。
三种细胞冷冻液冻干的细胞质控品纯水复溶后同时用免疫磁珠法检测。三种细胞冷冻液冻干的细胞质控品纯水复溶后在4℃分别保存5天、10天和20天同时用免疫磁珠法检测。
免疫磁珠法检测通过将包被有NJ001单克隆抗体(ZL2011103446839)的免疫磁珠与液体标本共孵育，利用磁场力捕获NJ001单抗所识别的表达SP70抗原的肿瘤细胞，从而达到分离标本中肿瘤细胞的目的。进一步经巴氏染色和镜检以明确细胞的病理诊断。
免疫磁珠法检测实验步骤：
1)向三种细胞冷冻液冻干的细胞质控品(SPC-A1冻干粉)的小瓶中分别加入1mL超纯水，混匀；
2)向EP管中分别加入：900μL生理盐水+100μL实施例8的细胞冷冻液制备的细胞质控品复溶液+10μL磁珠；
3)另取一支EP管，向其中加入：900μL生理盐水+100μL现有技术细胞冷冻液I制备的细胞质控品复溶液+10μL磁珠；
4)另取一支EP管，向其中加入：900μL生理盐水+100μL现有技术细胞冷冻液II 制备的细胞质控品复溶液+10μL磁珠；
5)将三支EP管置于摇床室温孵育1h；
6)EP管置于磁力架上，上下颠倒30次后吸尽液体弃之，随后分别加入1mL PBST重复洗涤三次，最后用100μL PBS重悬；
7)各取50μL重悬液分别涂片，进行巴氏染色；
8)镜检并扫描玻片；
9)三种细胞冷冻液冻干的细胞质控品纯水复溶后在4℃分别保存第5天、第10天和第 20天再次重复“第2)～第8)步”。
实验结果表：
本发明细胞冷冻液制备的细胞质控品较现有技术中的细胞冷冻液I和现有技术中的细胞冷冻液II制备的细胞质控品的细胞形态饱满，且复溶后保存比较稳定(图1-4)。
实施例11
A阴性对照
1、取1只健康体检者血常规，白细胞(7～8)×109/L；
2、吸取100μl全血至流式管中，加入5μl荧光抗体，混匀，室温避光孵育20min；
3、配制溶血素工作液：100μl溶血素原液+900μl去离子水；
4、加入1ml“3”中溶血素工作液，室温避光反应10min；
5、加入2ml 1×PBS，1000rpm/min，5min离心洗涤2次，直接倒去上层PBS；
6、600μl 1×PBS重悬，流式细胞仪检测。
B SPC-A1活细胞
1、取出处于对数生长期SPC-A1细胞，倒置显微镜镜下观察细胞形态：密度达90％，形态正常；
2、加入适量1×PBS洗2遍，弃去；
3、加入胰酶2ml，铺满整个皿底为宜，放入培养箱消化2min左右；
4、镜下见细胞变小、细胞空隙变大则停止消化；
5、弃去胰酶，加入适量1640完全培养液停止消化，吹打下所有细胞；
6、1×PBS洗1遍，1000rpm/min，5min离心弃去，加入适量1×PBS重悬，计数；
7、调整细胞浓度，分装于1只流式管，细胞总数4×104，体积100μl，不足以PBS补齐；
8、加入5μl荧光抗体，室温避光孵育20min；
9、加入2ml 1×PBS，1000rpm/min，5min离心洗涤2次；
10、直接倒去上层PBS，300μl 1×PBS重悬，流式细胞仪检测。
C质控细胞
1、取出质控细胞SPC-A1干粉，加入1ml纯水完全溶解，计数；
2、分装于2只流式管：空白对照管、阳性对照管，2×104个细胞/管，剩余4℃保存，10天之内使用完毕；
3、补充1×PBS至体系为100μl，混匀；
4、加入5μl荧光抗体，室温避光孵育20min；
5、加入2ml 1×PBS，800rpm/min，8min离心洗涤1次；
6、小心吸去PBS，300μl 1×PBS重悬，流式细胞仪检测。
流式细胞检测结果如下：
阴性对照健康体检者外周血白细胞阳性率为0.00％(如图5B)，阳性对照SPC-A1活细胞阳性率为90.53％(如图6B)，阳性对照干式SPC-A1质控细胞阳性率为98.23％(如图7B)。实验结果表明在用流式方法检测患者全血等体液样本中肿瘤细胞时，干式SPC-A1质控细胞作为阳性对照优于SPC-A1活细胞。
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Claims (10)

1. 一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液，其特征在于所述的细胞冷冻液配方为0.01M，pH7.0~7.4的PBS中加入5%~10%的BSA， 10%~15%FBS， 5%~8%海藻糖 及 0.01%~0.03%硫柳汞。
2.权利要求1所述的细胞冷冻液在冷冻干燥肿瘤细胞中的应用。
3.权利要求1所述的细胞冷冻液在制备干式肿瘤细胞质控品中的应用。
4.一种干式肿瘤细胞质控品的制备方法，包括细胞的准备、细胞的固定和细胞的冷冻干燥；其特征在于所述的细胞冷冻干燥步骤中使用权利要求1所述的细胞冷冻液；所述的细胞固定方法为培养的肿瘤细胞离心去上清，加入5%~50%的有机溶剂25-28℃固定4h~24h；所述的有机溶剂选自：甲醇、甲醛或乙醇。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于细胞的冷冻干燥条件为：
设置温度：区段一: -50℃，区段二: -30℃，区段三: -15℃，区段四: 0℃，区段五: 20℃；
设置时间：区段一:7h，区段二:9h，区段三:9h，区段四:9h，区段五:14h，一共冷冻干燥48h。
6.按照权利要求4~5中任一项所述的制备方法制备的干式肿瘤细胞质控品。
7.根据权利要求6所述的干式肿瘤细胞质控品，其特征在于所述的肿瘤细胞选自肺部肿瘤细胞、肝胆肿瘤细胞、食管肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胃部肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胰腺肿瘤细胞、甲状腺肿瘤细胞、乳腺肿瘤细胞、卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑部肿瘤细胞、白血病细胞、耳鼻喉肿瘤细胞、膀胱肿瘤细胞、肾脏肿瘤细胞或其他肿瘤细胞。
8.根据权利要求7所述的干式肿瘤细胞质控品，其特征在于所述的肺部肿瘤细胞选自：NCI-H1734、 SH-543 、SH-416 、SH-437、 SH-498 、SH-224、 NCI-H2347、NCI-H2126 、NCI-H23、SH-289、 NCI-H2228、NCI-H1944、 NCI-H292 [H292] 、NCI-H838 [H838]、 NCI-H1437[H1437] 、MSTO-211H 、95-D 、Calu-1， A549、 NCI-H358 、NCI-H1299、 NCI-H1650 [H-1650, H1650]、 HCC827、NCI-H1395 、NCI-H1975 [H-1975, H1975]、 LTEP-a-2、 SPC-A-1，NCI-H226、SK-MES-1、NCI-H460 [H460] 、NCI-H661、NCI-H1688、 NCI-H446 [H446] 、QG-56；
所述的肝胆肿瘤细胞选自：Hep G2、 HuH-7 、BEL-7402、 BEL-7404 、BEL-7405 、Hep3B2.1-7 、QGY-7701、 QGY-7703、 SK-HEP-1、 SMMC-7721、Li-7、RBE、HCCC-9810、GBC-SD；
所述的食管肿瘤细胞选自： Eca-109、 TE-1 、TE-10、 TE-11、KYSE-150；
所述的胃部肿瘤细胞选自： NCI-N87 、 KATO III、 MGC80-3、 SNU-1 、HGC-27、AGS、SGC-7901、 BGC-823；
所述的结直肠肿瘤细胞选自： LS513 、LoVo、Caco-2、 HCT-15、 DLD-1、 NCI-H716[H716]、 COLO 320DM、SW948 、SW480、 SW1116 、COLO-320 、CW-2 、LS 174T、 RKO、HT-29、COLO 205、 HCT 116、 LoVo、 SW620、HCT-8 [HRT-18]、Hce-8693；
所述的胰腺肿瘤细胞选自： PANC-1、 MIA 、PaCa-2 、HPAF-II 、CFPAC-1 、SW1990、BxPC-3、AsPC-1；
所述的甲状腺肿瘤细胞选自： ARO KHM-5M、 TTA1、 KTC-1 、Hth83 、HTh-7 、CAL-62C643 、BHT101 、B-CPAP 、ACT-1、 8305C 、Ocut-2C 、KMH-2 FRO、TT、SW579 [SW 579; SW-579]；
所述的乳腺肿瘤细胞选自： MCF7、 ZR-75-30、 MDA-MB-415、 HCC1937 、Bcap-37 、Hs578T、 MDA-MB-231、 MDA-MB-453 、MDA-MB-468、 ZR-75-1、SK-BR-3 、 MDA-MB-436、BT-474[BT474] 、BT-549、 T-47D；
所述的卵巢肿瘤细胞选自： HO-8910、 NIH:OVCAR-3 、SK-OV-3 、HO-8910PM、Caov-3[Caov3]、ES-2；
所述的子宫肿瘤细胞选自： HeLa、 HeLa 229、 C-33 A、MS751、 ME-180、SiHa、HCC 94[HCC941122]、HEC-1-A 、HEC-1-B、RL95-2；
所述的脑部肿瘤细胞选自： U-87 MG 、U-118 MG、SHG-44 、U251、A172、IMR-32 、SH-SY5Y 、SK-N-BE(2)、 SK-N-SH、SK-N-MC；
所述的白血病细胞选自： Kasumi-1、CEM/C1、SUP-B15、MV-4-11、HuT 78、 A3 、Jurkat、Clone E6-1、 6T-CEM、Dami、K-562、HEL、Kasumi-1、Reh、MOLT-4、AML-193、MEG-01、THP-1、HL-60、KU812；
所述的耳鼻喉肿瘤细胞选自： Tca-8113、Acc-2、 Acc-3、KB、FaDu、HEp-2、CNE；
所述的膀胱肿瘤细胞选自： TCCSUP、5637、SCaBER、T24 、UM-UC-3 、J82 、SW 780 [SW-780, SW780]、 RT4；
所述的肾脏肿瘤细胞选自： ACHN 、 769-P、SW-13、786-O [786-0]；
所述的其他肿瘤细胞选自： A-431 、A-375 [A375]、VCaP、 22Rv1、 DU 145 、LNCaPClone FGC、 PC-3、JEG-3、JAR。
9.权利要求6~8中任一项所述的干式肿瘤细胞质控品在制备肿瘤检测试剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述的检测试剂为免疫磁珠法检测试剂，流式细胞检测试剂，或其他方法学建立的循环肿瘤细胞检测试剂。
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