CN109055350A - 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法 - Google Patents

一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109055350A
CN109055350A CN201811200195.9A CN201811200195A CN109055350A CN 109055350 A CN109055350 A CN 109055350A CN 201811200195 A CN201811200195 A CN 201811200195A CN 109055350 A CN109055350 A CN 109055350A
Authority
CN
China
Prior art keywords
spore
strain
griseofulvin
bacterium colony
double dish
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811200195.9A
Other languages
English (en)
Inventor
赵楠
赵一楠
涂顺根
胡志远
郭文
徐思
郭志坚
六成
吴建
于海庆
张世军
贾云星
郭明春
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
INNER MONGOLIA GELINTE PHARMACEUTICAL Co Ltd
Original Assignee
INNER MONGOLIA GELINTE PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by INNER MONGOLIA GELINTE PHARMACEUTICAL Co Ltd filed Critical INNER MONGOLIA GELINTE PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority to CN201811200195.9A priority Critical patent/CN109055350A/zh
Publication of CN109055350A publication Critical patent/CN109055350A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor

Landscapes

  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，首先把选取好的菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从中吸取单孢子悬液1ml稀释作对照，另取滤液加入双碟中，其中双碟有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；用紫外线均匀照射30min，用黑布罩住，用无菌水稀释后，均匀涂布于平皿，形成单菌落，移入恒温箱中培养，8天后菌落长好，挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天；成熟后的菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的10个斜面，转接斜面，培养成熟后，再进行摇瓶复筛；选取复筛后单位较高的5个斜面，将对应编号的斜面埋沙土，进行保藏。本发明能够进一步提高发酵单位，使菌种保持优良特性。

Description

一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法
技术领域
本发明属于灰黄霉素菌种的诱变方法技术领域，具体的说是涉及一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法。
背景技术
灰黄霉素为抗生素类原料药，中文别名灰霉素、微晶灰黄霉素，灰黄霉素成品为白色或类白色的微细粉末，其主要针对毛发癣菌、小孢子菌、表皮癣菌等浅表部真菌具有良好抗菌作用，灰黄霉素适用于各种癣病的治疗，包括头癣、须癣、体癣、股癣、足癣和甲癣。现有技术中大量制备灰黄霉素的方法中一般都是以灰黄霉素发酵液为原料，经过一系列的制备步骤，浓缩结晶得到灰黄霉素重结晶体，最后灰黄霉素重结晶体经过丁醇洗涤、乙醇洗涤、干燥、超微粉碎等步骤得到灰黄霉素原料药。现有技术中灰黄霉素发酵液中的灰黄霉素菌种不够优良，菌种问题会直接影响到灰黄霉素成品原料药的品质和产量，所以要想改进灰黄霉素的制备方法，提高产量，必须从源头入手，即需要采用高品质的灰黄霉素菌种来制备灰黄霉素发酵液。
发明内容
本发明为了克服现有技术存在的不足，提供一种能够提高发酵单位、使菌种保持优良特性的通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，该诱变灰黄霉素菌种的方法具体包括如下步骤：
a、首先把选取好的灰黄霉素菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从孢子悬液中吸取单孢子悬液1ml，稀释作对照，另取孢子滤液加入双碟中，其中双碟中放置有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；
b、然后用紫外线对双碟中的孢子滤液均匀照射20～30min，照射完紫外线后用黑布罩住双碟；
c、紫外照射后细胞产生复活作用，以极快的速度将双碟中的孢子滤液用无菌水稀释，用无菌水稀释后的孢子滤液均匀涂布于平皿，耙匀，形成单菌落，移入温度设定为28℃±1℃的恒温箱中培养；
d、恒温箱中培养8天后菌落长好，菌落外观美观、大小均匀、孢子雪白、厚实丰满，形成单菌落；
e、再挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天，培养后的成熟菌落大小均匀、厚实、孢子丰满，进行编号；
f、将步骤e中的成熟菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的10～15个斜面，转接斜面，并编号；
g、用已选取编号的斜面，通过挖块进行摇瓶复筛，选取复筛后效价高的5～6个对应斜面孢子，埋沙土保藏备用。
其中步骤b中紫外线照射的步骤为：先开动转盘，使紫外线照射均匀，再打开双碟，进行紫外线诱变照射，照射时间为25min，照射完毕后关掉紫外线及转盘，盖上双碟。
本发明的有益效果是：本发明为了克服现有技术中存在的不足，进一步提高发酵单位，使菌种保持优良特性，特采用硫酸二乙酯加紫外照射对灰黄霉素的菌种进行诱变。采用本发明诱变方法诱变出的灰黄霉素菌种在用于制备灰黄霉素时，能够大幅度降低生产成本，同时节约了能源，有效提高劳动生产率，很好的克服了现有技术中灰黄霉素发酵液中菌种不够优良的缺陷。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作详细描述。
实施例1：一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，该诱变灰黄霉素菌种的方法具体包括如下步骤：a、首先把选取好的灰黄霉素菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从孢子悬液中吸取单孢子悬液1ml，稀释作对照，另取孢子滤液加入双碟中，其中双碟中放置有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；b、然后用紫外线对双碟中的孢子滤液均匀照射20min，先开动转盘，使紫外线照射均匀，再打开双碟，进行紫外线诱变照射，照射完毕后关掉紫外线及转盘，照射完紫外线后用黑布罩住双碟；c、紫外照射后细胞产生复活作用，以极快的速度将双碟中的孢子滤液用无菌水稀释，用无菌水稀释后的孢子滤液均匀涂布于平皿，耙匀，形成单菌落，移入温度设定为28℃的恒温箱中培养；d、恒温箱中培养8天后菌落长好，菌落外观美观、大小均匀、孢子雪白、厚实丰满，形成单菌落；e、再挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天，培养后的成熟菌落大小均匀、厚实、孢子丰满，进行编号；f、将步骤e中的成熟菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的10个斜面，转接斜面，并编号；g、用已选取编号的斜面，通过挖块进行摇瓶复筛，选取复筛后效价高的5个对应斜面孢子，埋沙土保藏备用。
实施例2：一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，该诱变灰黄霉素菌种的方法具体包括如下步骤：a、首先把选取好的灰黄霉素菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从孢子悬液中吸取单孢子悬液1ml，稀释作对照，另取孢子滤液加入双碟中，其中双碟中放置有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；b、然后用紫外线对双碟中的孢子滤液均匀照射30min，照射完紫外线后用黑布罩住双碟；c、紫外照射后细胞产生复活作用，以极快的速度将双碟中的孢子滤液用无菌水稀释，用无菌水稀释后的孢子滤液均匀涂布于平皿，耙匀，形成单菌落，移入温度设定为27℃的恒温箱中培养；d、恒温箱中培养8天后菌落长好，菌落外观美观、大小均匀、孢子雪白、厚实丰满，形成单菌落；e、再挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天，培养后的成熟菌落大小均匀、厚实、孢子丰满，进行编号；f、将步骤e中的成熟菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的15个斜面，转接斜面，并编号；g、用已选取编号的斜面，通过挖块进行摇瓶复筛，选取复筛后效价高的6个对应斜面孢子，埋沙土保藏备用。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (2)

1.一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，其特征在于：所述诱变灰黄霉素菌种的方法具体包括如下步骤：
a、首先把选取好的灰黄霉素菌落用玻璃珠打碎，制成孢子悬液，从孢子悬液中吸取单孢子悬液1ml，稀释作对照，另取孢子滤液加入双碟中，其中双碟中放置有事先配制好的含有硫酸二乙酯的培养基；
b、然后用紫外线对双碟中的孢子滤液均匀照射20～30min，照射完紫外线后用黑布罩住双碟；
c、紫外照射后细胞产生复活作用，以极快的速度将双碟中的孢子滤液用无菌水稀释，用无菌水稀释后的孢子滤液均匀涂布于平皿，耙匀，形成单菌落，移入温度设定为28℃±1℃的恒温箱中培养；
d、恒温箱中培养8天后菌落长好，菌落外观美观、大小均匀、孢子雪白、厚实丰满，形成单菌落；
e、再挑取分生孢子单菌落接入斜面培养8天，培养后的成熟菌落大小均匀、厚实、孢子丰满，进行编号；
f、将步骤e中的成熟菌落接入摇瓶进行初筛，选取效价单位高于出发菌种3％的10～15个斜面，转接斜面，并编号；
g、用已选取编号的斜面，通过挖块进行摇瓶复筛，选取复筛后效价高的5～6个对应斜面孢子，埋沙土保藏备用。
2.根据权利要求1所述的一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法，其特征在于：步骤b中紫外线照射的步骤为：先开动转盘，使紫外线照射均匀，再打开双碟，进行紫外线诱变照射，照射时间为25min，照射完毕后关掉紫外线及转盘，盖上双碟。
CN201811200195.9A 2018-10-16 2018-10-16 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法 Pending CN109055350A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811200195.9A CN109055350A (zh) 2018-10-16 2018-10-16 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811200195.9A CN109055350A (zh) 2018-10-16 2018-10-16 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109055350A true CN109055350A (zh) 2018-12-21

Family

ID=64764866

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811200195.9A Pending CN109055350A (zh) 2018-10-16 2018-10-16 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109055350A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112080438A (zh) * 2020-10-15 2020-12-15 内蒙古格林特制药有限责任公司 一种灰黄霉素低产沫菌种及低产沫菌种的制备方法和应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050186675A1 (en) * 1998-06-24 2005-08-25 Case Western Reserve University Allelic series of genomic modifications in cells
CN102154129A (zh) * 2011-01-10 2011-08-17 南京农业大学 一株降解棉酚的红冬孢酵母及其应用
EP2383344A4 (en) * 2009-01-13 2012-06-13 Consejo Superior Investigacion REGULATORY GENES OF PLANT BREEDING, PROMOTERS, GENETIC CONSTRUCTS CONTAINING THEM AND USES THEREOF
CN103275047A (zh) * 2013-05-23 2013-09-04 内蒙古格林特制药有限责任公司 一种灰黄霉素的制备方法
CN104531548A (zh) * 2014-09-26 2015-04-22 江西师范大学 雄烯二酮耐底物突变株及其诱变选育方法
CN105567658A (zh) * 2016-03-10 2016-05-11 东北农业大学 一种混合诱变蜡状芽孢杆菌产磷脂酶c的方法
CN108165497A (zh) * 2017-12-22 2018-06-15 吕玲 一种高产莫纳克林k的红曲菌株培育方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050186675A1 (en) * 1998-06-24 2005-08-25 Case Western Reserve University Allelic series of genomic modifications in cells
EP2383344A4 (en) * 2009-01-13 2012-06-13 Consejo Superior Investigacion REGULATORY GENES OF PLANT BREEDING, PROMOTERS, GENETIC CONSTRUCTS CONTAINING THEM AND USES THEREOF
CN102154129A (zh) * 2011-01-10 2011-08-17 南京农业大学 一株降解棉酚的红冬孢酵母及其应用
CN103275047A (zh) * 2013-05-23 2013-09-04 内蒙古格林特制药有限责任公司 一种灰黄霉素的制备方法
CN104531548A (zh) * 2014-09-26 2015-04-22 江西师范大学 雄烯二酮耐底物突变株及其诱变选育方法
CN105567658A (zh) * 2016-03-10 2016-05-11 东北农业大学 一种混合诱变蜡状芽孢杆菌产磷脂酶c的方法
CN108165497A (zh) * 2017-12-22 2018-06-15 吕玲 一种高产莫纳克林k的红曲菌株培育方法

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
L B YIN等: "Enhancement of pectinase production by ultraviolet irradiation and diethyl sulfate mutagenesis of a Fusarium oxysporum isolate", 《GENET MOL RES》 *
Y F ZHANG等: "Genome shuffling of Lactocoxxus lactis subspecies lactis YF11 for improving nisin Z production and comparative analysis", 《J DAIRY SCI》 *
YU LIU等: "Selection of Zygosaccharomyces rouxii starins resistant to cadmium with improved removal abilities through ultraviolet-diethyl sulfate cooperative mutagenesis", 《ENVIRON SCI POLLUT RES INT》 *
YUN-HUAN BAI等: "Lactobacillus bulgaricus mutants decompose uremic toxins", 《REN FAIL》 *
党建章主编: "《发酵工艺教程 第2版》", 31 July 2016, 中国轻工业出版社 *
王轩等: "一株低产桔霉素红曲菌种的筛选 ", 《中国食品添加剂》 *
程水明等: "《微生物学实验》", 31 March 2015, 华中科技大学出版社 *
赵凯等: "高产紫杉醇菌株的诱变选育及其差异表达基因消减cDNA文库的构建 ", 《微生物学报》 *
韩立亚等: "复合诱变选育高产纤维素酶绿色木霉菌株 ", 《安徽农业科学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112080438A (zh) * 2020-10-15 2020-12-15 内蒙古格林特制药有限责任公司 一种灰黄霉素低产沫菌种及低产沫菌种的制备方法和应用
CN112080438B (zh) * 2020-10-15 2023-05-12 内蒙古格林特制药有限责任公司 一种灰黄霉素低产沫菌种及低产沫菌种的制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102515920B (zh) 蛹虫草的培养及其口服片剂的制备
CN102037856B (zh) 一种简易蛹虫草菌种复壮的方法
CN103290077A (zh) 一种利用黄杆菌高效生产维生素k2的方法
CN102864114B (zh) 一种恩拉霉素高产菌株及其制备方法和应用
CN101926461A (zh) 一种蛹虫草纳米粉的制备方法
CN105961021B (zh) 一种白色蛹虫草生产工艺
CN103858676B (zh) 一种北虫草液体菌种的制备方法
CN107164297B (zh) 一种促进牛樟芝菌丝体生长和活性产物合成的方法
CN109055350A (zh) 一种通过硫酸二乙酯及紫外线诱变灰黄霉素菌种的方法
CN103865886A (zh) 猪伪狂犬病毒的培养方法
CN102600507B (zh) 一种细胞培养支架材料及其制备方法
CN104726526B (zh) 一种利用鱼皮制备用于治疗伤口愈合的活性肽的方法
WO2019062354A1 (zh) 真菌诱导子、其制备方法及利用该真菌诱导子进行白芨种苗快繁的方法
CN105316246B (zh) β-胡萝卜素高产菌种及其应用
CN103141391A (zh) 一种西洋参不定根组织培养方法
WO2022088284A1 (zh) 一种蚕蛹虫草片剂的制备方法
CN105087446A (zh) 一株高产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌
CN105624142A (zh) 一种提高刺糖多孢菌的多杀菌素发酵产量的方法
CN107211774B (zh) 一种防治杞柳瘿蚊的方法
CN207678485U (zh) 一种蝙蝠蛾幼虫接种体菌源的双相膜式反应器
CN104726444A (zh) 一种高开环率洛伐他汀的生产方法
CN106987534B (zh) 一种胡椒鲜果生物脱皮制备白胡椒的方法
CN110100917A (zh) 一种散茶发花工艺
KR20160028314A (ko) 메탄올에 의해 변이된 아스퍼질러스 속 미생물을 이용한 시트르산의 제조방법
CN109468308B (zh) 一种纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌原生质体融合的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181221

RJ01 Rejection of invention patent application after publication