CN109055341A - 一种分离提纯木瓜蛋白酶的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种双水相萃取‑超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法,具体操作步骤为:将木瓜汁采用反复冻融的方法破壁后收集上层清液得到木瓜蛋白酶粗提液,再采用羟甲基纤维素钠‑无机盐双水相萃取,并置于超声波中超声15‑20分钟,再静置8‑15分钟,取上相在截留相对分子质量为5000的透析膜中透析12‑20小时后,再经冷冻干燥得木瓜蛋白酶粉末。本发明双水相萃取和超声波联合的方法对木瓜蛋白酶进行提纯,具有选择性高,体系分相速度快的优点,且操作简便,设备常规,适合工业化生产。本发明所述方法制得木瓜蛋白酶末中木瓜蛋白酶纯度高达97.1%,总收率高达84.2%。
Description
技术领域
本发明属于生化分离技术领域,涉及一种木瓜蛋白酶的分离提纯方法,尤其涉及一种双水相萃取-超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法。
背景技术
木瓜蛋白酶广泛存在于番木瓜未成熟果实的乳汁中,它是由212个氨基酸组成的蛋白质单链,具有耐高温、活性强、稳定性好,蛋白质水解能力强等特征,还具有凝乳、解脂和溶菌活力,是能作用于各类蛋白质的纯天然产物。对pH变化和金属离子及去垢剂不敏感,其用途很多,目前已广泛的应用于食品、化工、轻纺工业、医药卫生等各个行业。在肉类加工中,木瓜蛋白酶是最好的肉类嫩化剂,这是因为木瓜蛋白酶与其他蛋白酶相比,其热稳定性较高。将木瓜蛋白酶用于对冷冻贮存过程中啤酒处理,能水解啤酒内蛋白质,部分水解一些已形成的复合物,产生更多的多肽或氨基酸,保证啤酒在冷冻过程中的高清澈度,同时改善啤酒口感及原有多肽和氨基酸的组成和比例,有效地改良啤酒品质。因此,研究、探讨、寻求最佳提取工艺对木瓜蛋白酶的开发、制备和应用具有极其重要的意义。提取木瓜蛋白酶的传统方法有:超滤法、盐析法、有机溶剂法、絮凝法、亲和层析法等。
双水相萃取技术近年来愈来愈得到研究者的青睐,其相对传统的分离纯化技术具有提纯效率高、设备常规、操作简便,适于大规模生产等优点,且不存在有机溶剂的残留问题,易于放大和连续操作,各种参数可按比例放大而产物收率并不降低。双水相萃取是利用组分在两个互不相溶的水相中的溶解度不同而达到分离的萃取技术。双水相萃取中使用的双水相是由两种互不相溶的高分子溶液或者互不相溶的盐溶液和高分子溶液组成。然而现有的双水相萃取技术需要在体系分相后辅以离心等操作,从而加速系统分相,并向体系中加入中性盐KCl增加目标产物的分配系数和收率增加了操作难度和经济成本。因此,开发一种步骤简单,设备常规,分离效果好,分离效率高的双水相萃取分离木瓜蛋白酶的方法是目前亟待解决的问题。
食品的风味,能刺激消费者的感官及心理,使各种食品呈现出各自的特征,鲜味作为一种独立味感,在欧美常将鲜味剂作为风味添加剂。在食品中添加鲜味剂,可增强食品的一些风味特征,进而改善食品的适口性,使食品更加美味。近年来,随着食品工业生产规模的日益扩大,国内外快餐食品的快速发展,有力地促进了添加剂市场的增长。特别是除味精以外的营养性天然鲜味剂增长速度最快。鲜味剂按组成可以分为氨基酸类、核苷酸类、有机酸类和复合鲜味剂四类。其中,复合鲜味剂是由两种及两种以上鲜味剂组合而成的复合物,分为复配型和天然型两种,可以增强食品的鲜味,抑制不良风味。复配型复合鲜味剂,是指用科学方法在各种天然调味料中添加味精、有机酸、甜味剂等具有不同增味效果的原料配制成的调味产品。复合调味料不但有特殊风味,且具有一定的营养价值。复合调味料添加在食品中,其生产应用具有很大的市场潜力,可以改善单一鲜味剂的不足,有助于调高产品的鲜度。天然型鲜味剂有水解物和萃取物。大多数水解物是由天然的植物、动物、微生物内生物大分子通过水解而得到,包括植物、动物和微生物的水解物。萃取物包括各种肉和蔬菜的萃取物。天然风味鲜味剂种类较多,但主要的鲜味物质是氨基酸类和核苷酸类,由于其他物质的存在和各自比例的差异,可以赋予食品以单一鲜味剂所没有的独特风味。近年来,随着人们对健康饮食的要求越来越高,天然鲜味剂受到了越来越多的关注。
中国专利201510239088.7公开了一种纯天然鲜味剂及其制备方法,该鲜味剂主要是由包括如下步骤的方法制备得到:将菌菇、鲣鱼、海带经过粉碎、泡发、萃取、过滤、浓缩、再加入酵母提取物、盐调配制备得到。本发明制得的鲜味剂,与味精等市售化学性鲜味剂相比,不仅鲜香自然、醇厚明显、回味持久、呈味和谐,而且营养、天然、无毒、安全,最大程度提取并保留各原料本身原有的特点。
中国专利CN201010255553.3公开了一种天然富肽型鲜味剂及其制备方法,所述制备方法主要包括如下步骤:以军曹鱼、马氏珠母贝、凡纳滨对虾三种海鲜为原料,打浆后得到浆液;可控酶解:将上述浆液混合加水调至混合浆液浓度30~50wt%,调pH值6.0~8.0,添加木瓜蛋白酶水解;调pH值,升温,添加复合风味蛋白酶,水解,控制固形物浓度10~15%,酶解结束后灭酶,获得水解产物;离心过滤;发酵脱腥:将上述酶解液灭菌后冷却至室温,按酶解液重量接种乳酸菌,发酵,获得无腥苦味的发酵液;超滤:将上述发酵液稀释至固形物浓度2-5%,通过截留分子量为6000Da的超滤膜,获得分子量6000Da以下的富含短肽产物;浓缩;高压均质;喷雾干燥。所制备得到的鲜味剂兼具调味与营养的双重作用。
中国专利201310006088.3公开了一种鲜味调味料及其制备方法,该鲜味调味料由以下组分组成:酵母抽提物10~50份、食盐10~50份、糖类5~20份、粉状填充料5~40份、酱油粉1~10份、醋粉0.1~5份、蛋白类物质1~10份以及香辛料粉3~20份。该鲜味调味料采用的原料全部具有食品属性,不添加味精、呈味核苷酸二钠、干贝素、人工提取氨基酸或各式香精等任何属于食品添加剂范畴的组分。由于酵母抽提物中富含多种天然存在的呈味氨基酸、多肽和B族维生素等,制备的鲜味调味料不仅具有天然、安全和营养健康的优势,而且风味浓郁饱满,口感绵厚悠长。
现有技术中制备的鲜味剂公开了鲜味剂具有调味和营养的双重作用,回味持久,但是鲜味剂在pH 6-pH 7之间时,其鲜味最强,当食品pH<4.1或pH>8.5时,大多数鲜味剂均失去其鲜味。因此,需要提供一种不仅风味浓郁饱满、鲜香自然,并且有着pH适应范围广的鲜味剂。
发明内容
本发明提供了一种双水相萃取-超声波联合分离提纯木瓜蛋白酶的方法,所用设备常规,操作简便,分离效率高,适合工业化生产。
本发明解决技术问题所采用的技术方案为:
一种高效分离提纯木瓜蛋白酶的方法,包括如下步骤:
(a)粗提液制备:将木瓜乳汁加入水中浸泡4-6小时后,于-20℃下冷冻3-8小时后,再于25℃融化,如此反复冻融3~4次破壁,再将所得溶液离心处理后,收集上清液即为含木瓜蛋白酶的粗提液,通过冷冻使细胞膜的疏水键结构破裂,同时细胞内形成冰晶对细胞壁造成机械破裂,从而使得胞内木瓜蛋白酶析出,并溶于水中,再通过离心去除不溶物得到含藻蓝蛋白的粗提液。
(b)双水相萃取:向步骤(a)所得含木瓜蛋白酶的粗提液中加入羟甲基纤维素钠和无机盐,震荡混合后,超声15-20分钟,再静置8-15分钟,收集上相。采用羟甲基纤维素钠和无机盐构成双水相萃取体系,替代高聚合物,降低了生产成本。双水相萃取体系由互不相溶的羟甲基纤维素钠和无机盐构成,利用木瓜蛋白酶在羟甲基纤维素钠和无机盐中的选择性分配,使其与粗提液中其他杂质分离,从而达到分离纯化的目的。然而单纯双水相萃取分相速度较慢,通常需要静置4-6小时后,再在离心作用下才能分相,且所得木瓜蛋白酶的纯度不高。本发明在加入双水相萃取液的同时,辅以超声作用,能够加快分子运动,从而加快分相速度,提高体系的分配系数,在短时间内获得木瓜蛋白酶含量较高的上相。
(c)成品制备:将步骤(b)所得上相在截留相对分子质量为5000的透析膜中透析12-20小时后得藻蓝蛋白水溶液,再于-15~-10℃冷冻干燥12-20小时得藻蓝蛋白粉末。
作为优选,步骤(a)中木瓜乳汁与水的质量比为1:50-70。
作为优选,步骤(b)中无机盐为硫酸铵、硫酸钠或硫酸镁中的一种。
作为优选,步骤(b)中所述羟甲基纤维素钠质量为双水相体系总质量的20-25%,无机盐质量为双水相体系总质量的12-16%,含木瓜蛋白酶的粗提液的质量为双水相体系总质量的59-66%。不同浓度组成的双水相体系萃取效果不同,羟甲基纤维素钠浓度过低,分相困难;随着羟甲基纤维素钠浓度在一定范围内的增加,双水相体系两相差别较大,利于木瓜蛋白酶白在上相中富集,其他水溶性杂质在下相中富集,但是随着羟甲基纤维素钠浓度继续增大,更多的杂质进入上相,使上相中木瓜蛋白酶的纯度降低。随着无机盐浓度在一定范围内的提高,物质在两相中界面张力增大,有利于木瓜蛋白酶在上相富集,杂质在下相富集;当无机盐浓度更大时,上相体积逐渐减小,同时粘度逐渐增大,不利于木瓜蛋白酶在上相的富集。
本发明可以概述为:本发明的目的是提供了一种调味料复合鲜味剂,不仅风味浓郁饱满,鲜香自然,并且天然、安全,可用于多种食品的调味。其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉2-12份、大蒜粉1-10份、生姜粉1-10份、鲜香菇6-12份、鲜虾皮20-30份、干贝40-60份、盐8-15份、黄豆粉10-20份、陈皮粉2-8份、昆布2-10份、山楂粉2-10份、木瓜蛋白酶0.2-1份和水80-140份。本发明提供的调味料复合鲜味剂pH适应范围广,在不同pH下均有很强的鲜度,可以有效地改善食物的涩味和苦味。本发明属于食品添加剂技术领域,具体涉及一种调味料复合鲜味剂及其制备方法。
针对现有技术的不足,本发明的目的是提供了一种鲜味剂,其不仅风味浓郁饱满,鲜香自然,并且pH适应范围广,可以去除食物中的苦涩味。
为了实现上述目的,本发明提供了如下技术方案:
一种调味料复合鲜味剂,其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉2-12份、大蒜粉1-10份、生姜粉1-10份、鲜香菇6-12份、鲜虾皮20-30份、干贝40-60份、盐8-15份、黄豆粉10-20份、陈皮粉2-8份、昆布2-10份、山楂粉2-10份、木瓜蛋白酶0.2-1份和水80-140份。
优选地,所述的调味料复合鲜味剂,其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉4-9份、大蒜粉2-8份、生姜粉2-8份、鲜香菇7-11份、鲜虾皮22-28份、干贝45-55份、盐9-14份、黄豆粉12-18份、陈皮粉3-7份、昆布4-9份、山楂粉3-8份、木瓜蛋白酶0.3-0.8份和水90-130份。
更优选地,所述的调味料复合鲜味剂,其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉5-8份、大蒜粉4-7份、生姜粉3-6份、鲜香菇8-11份、鲜虾皮24-26份、干贝48-52份、盐10-13份、黄豆粉13-16份、陈皮粉4-6份、昆布5-7份、山楂粉4-7份、木瓜蛋白酶0.4-0.6份和水100-120份。
更进一步优选地,所述的调味料复合鲜味剂,其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉7份、大蒜粉6份、生姜粉4份、鲜香菇10份、鲜虾皮25份、干贝50份、盐12份、黄豆粉14份、陈皮粉5份、昆布6份、山楂粉5份、木瓜蛋白酶0.5份和水115份。
所述的木瓜蛋白酶的活度为50万U/g。
另一方面,本发明提供了一种调味料复合鲜味剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布蒸煮后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至45-60℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解30-60min后,升温至90-100℃,灭酶10-30min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉、陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂。
所述步骤(1)中的蒸煮温度为80-100℃,蒸煮时间为10-40min。
所述步骤(4)中喷雾干燥的条件为:进风温度为160-190℃,出风温度为70-100℃。
优选地,所述步骤(1)中的蒸煮温度为85-95℃,蒸煮时间为15-35min。优选地,所述步骤(2)中的酶解温度为50-60℃,酶解时间为30-50min,灭酶时间为15-25min。
优选地,所述步骤(4)中喷雾干燥的条件为:进风温度为170-180℃,出风温度为80-90℃。
本发明的有益效果为:
(1)本发明提供了一种调味料复合鲜味剂,不仅风味浓郁饱满,鲜香自然,并且天然、安全,可用于多种食品的调味。
(2)本发明提供的调味料复合鲜味剂pH适应范围广,在不同pH下均有很强的鲜度。
(3)本发明提供的调味料复合鲜味剂还可以有效地改善食物的涩味和苦味。
(4)本发明提供的调味料复合鲜味剂的生产步骤简单,生产周期短,质量稳定。
具体实施方式
实施例1一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉2份、大蒜粉10份、生姜粉1份、鲜香菇6份、鲜虾皮20份、干贝60份、盐8份、黄豆粉10份、陈皮粉2份、昆布2份、山楂粉2份、木瓜蛋白酶0.2份和水80份。
其制备方法为:
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布在80℃下蒸煮10min后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至45℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解30min后,然后升温至90℃,灭酶10min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉、陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂,喷雾干燥的条件为:进风温度为160℃,出风温度为70℃。
实施例2一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉12份、大蒜粉1份、生姜粉10份、鲜香菇12份、鲜虾皮30份、干贝40份、盐15份、黄豆粉20份、陈皮粉8份、昆布10份、山楂粉10份、木瓜蛋白酶1份和水140份。
其制备方法为:
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布在100℃下蒸煮40min后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至60℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解60min后,然后升温至100℃,灭酶30min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂,喷雾干燥的条件为:进风温度为190℃,出风温度为100℃。
实施例3一种调味料复合鲜味剂
一种调味料复合物鲜味剂量:其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉4份、大蒜粉8份、生姜粉2份、鲜香菇7份、鲜虾皮22份、干贝45份、盐14份、黄豆粉18份、陈皮粉7份、昆布9份、山楂粉3份、木瓜蛋白酶0.8份和水130份。
其制备方法为:
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布在85℃下蒸煮15min后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至50℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解30min后,然后升温至95℃,灭酶15min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉、陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂,喷雾干燥的条件为:进风温度为170℃,出风温度为80℃。
实施例4一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉9份、大蒜粉2份、生姜粉8份、鲜香菇11份、鲜虾皮28份、干贝55份、盐9份、黄豆粉12份、陈皮粉3份、昆布4份、山楂粉8份、木瓜蛋白酶0.3份和水90份。
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布在95℃下蒸煮35min后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至60℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解50min后,然后升温至95℃,灭酶25min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉、陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂,喷雾干燥的条件为:进风温度为180℃,出风温度为90℃。
实施例5一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉8份、大蒜粉7份、生姜粉3份、鲜香菇8份、鲜虾皮26份、干贝52份、盐10份、黄豆粉13份、陈皮粉4份、昆布5份、山楂粉4份、木瓜蛋白酶0.6份和水100份。
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布在90℃下蒸煮30min后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至55℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解40min后,然后升温至95℃,灭酶20min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉、陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂,喷雾干燥的条件为:进风温度为175℃,出风温度为85℃。
实施例6一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉5份、大蒜粉4份、生姜粉6份、鲜香菇11份、鲜虾皮24份、干贝48份、盐13份、黄豆粉16份、陈皮粉6份、昆布7份、山楂粉7份、木瓜蛋白酶0.4份和水120份。
其制备方法同实施例5。
实施例7一种调味料复合鲜味剂
其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉7份、大蒜粉6份、生姜粉4份、鲜香菇10份、鲜虾皮25份、干贝50份、盐12份、黄豆粉14份、陈皮粉5份、昆布6份、山楂粉5份、木瓜蛋白酶0.5份和水115份。
其制备方法同实施例5。
对比例1一种调味料复合鲜味剂
配方基本同实施例7,与实施例7的差别在于:不含黄豆粉。
制备方法基本同实施例7,与实施例7的差别在于:制备方法中不加入黄豆粉。
对比例2一种调味料复合鲜味剂
配方基本同实施例7,与实施例7的差别在于:不含昆布。
制备方法基本同实施例7,与实施例7的差别在于:制备方法中不加入昆布。
对比例3一种调味料复合鲜味剂
配方基本同实施例7,与实施例7的差别在于:不含山楂粉。
制备方法基本同实施例7,与实施例7的差别在于:制备方法中不加入山楂粉。
对比例4中国专利CN201510239088.7实施例1中提供的鲜味剂
实验例1pH对鲜味剂溶液滋味的影响
将实施例1-7和对比例1-2和对比例4制备得到的复合鲜味剂分别用0.2%盐水配制成浓度为0.5g/mL的溶液,然后用1mol/L的柠檬酸或碳酸钠溶液将实施例1-7和对比例1-3中的各鲜味剂溶液的pH依次均调整为4.5、6.0、7.0、8.5,之后再通过感官评价各鲜味剂溶液的鲜味及其他滋味的变化。
采用定量描述法对各鲜味剂进行感官评价,由经过感官品评并筛选后的20位感官品评员组成评定小组,对各鲜味剂溶液的感官指标进行评定打分,收集评价结果,取平均值,进行统计分析。鲜味剂溶液的感官品评评分尺度如表1所示,统计分析结果如表2所示
表1
评分 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
鲜味强度 | 极弱 | 很弱 | 较弱 | 稍弱 | 中等 | 稍强 | 较强 | 很强 | 极强 |
表2
从上述实验结果可以看出本发明实施例1-7提供的调味料复合鲜味剂气味浓郁,对pH适应范围广,在不同pH的下均有很强的鲜度,感官评价效果高于对比例1-2和对比例4。
实验例2鲜味剂对苦涩味的影响
在烹饪苦瓜的过程中加入等量的实施例1-7和对比例2-3制备的鲜味剂,对照组为不加入鲜味剂,然后再通过感官评价评价各鲜味剂的鲜味强度、去除苦味、涩味的效果。
鲜味剂溶液的感官品评评分尺度如表3所示,统计分析结果如表4所示:
表3
评分 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
鲜味强度 | 极弱 | 很弱 | 较弱 | 稍弱 | 中等 | 稍强 | 较强 | 很强 | 极强 |
苦味强度 | 极弱 | 很弱 | 较弱 | 稍弱 | 中等 | 稍强 | 较强 | 很强 | 极强 |
涩味强度 | 极弱 | 很弱 | 较弱 | 稍弱 | 中等 | 稍强 | 较强 | 很强 | 极强 |
表4
鲜味 | 苦味 | 涩味 | |
对照组 | 2.1 | 7.9 | 8.2 |
实施例1 | 7.1 | 3.1 | 4.2 |
实施例2 | 6.9 | 2.8 | 3.9 |
实施例3 | 7.3 | 2.9 | 3.6 |
实施例4 | 7.0 | 3.3 | 4.1 |
实施例5 | 6.9 | 2.6 | 4.3 |
实施例6 | 7.2 | 2.8 | 3.7 |
实施例7 | 7.1 | 2.6 | 3.8 |
对比例2 | 4.5 | 4.2 | 5.1 |
对比例3 | 5.0 | 4.6 | 5.6 |
对比例4 | 4.2 | 5.1 | 6.0 |
从上述实验结果可以看出,本发明实施例1-7提供的调味料复合鲜味剂,在烹饪的过程中,不仅鲜味浓郁,并且可以有效地去除菜品中的苦味和涩味,优于对比例2-4。
惟以上所述者,仅为本发明之较佳实施例而已,当不能以此限定本发明实施之范围,即大凡依本发明权利要求及发明说明书所记载的内容所作出简单的等效变化与修饰,皆仍属本发明权利要求所涵盖范围之内。此外,摘要部分和标题仅是用来辅助专利文件搜寻之用,并非用来限制本发明之权利范围。
Claims (10)
1.一种分离提纯木瓜蛋白酶的方法,其特征在于:包括如下步骤:
(a)粗提液制备:将木瓜乳汁加入水中浸泡4-6小时后,于-20℃下冷冻3-8小时后,再于25℃融化,如此反复冻融3~4次破壁,再将所得溶液离心处理后,收集上清液即为含木瓜蛋白酶的粗提液;
(b)双水相萃取:向步骤(a)所得含木瓜蛋白酶的粗提液中加入羟甲基纤维素钠和无机盐,震荡混合后,超声15-20分钟,再静置8-15分钟,收集上相;
(c)成品制备:将步骤(b)所得上相在截留相对分子质量为5000的透析膜中透析12-20小时后得木瓜蛋白酶水溶液,再于-15~-10℃冷冻干燥12-20小时得木瓜蛋白酶粉末。
2.如权利要求1所述分离提纯木瓜蛋白酶的方法,其特征在于:所述步骤(a)中木瓜乳汁与水的质量比为1:50-70;所述步骤(b)中无机盐为硫酸铵、硫酸钠或硫酸镁中的一种。
3.如权利要求1所述分离提纯木瓜蛋白酶的方法,其特征在于:所述步骤(b)羟甲基纤维素钠质量为双水相体系总质量的20-25%,无机盐质量为双水相体系总质量的12-16%,含木瓜蛋白酶的粗提液的质量为双水相体系总质量的59-66%。
4.一种调味料复合鲜味剂,其特征在于:其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉2-12份、大蒜粉1-10份、生姜粉1-10份、鲜香菇6-12份、鲜虾皮20-30份、干贝40-60份、盐8-15份、黄豆粉10-20份、陈皮粉2-8份、昆布2-10份、山楂粉2-10份、木瓜蛋白酶0.2-1份和水80-140份;优选地,其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉4-9份、大蒜粉2-8份、生姜粉2-8份、鲜香菇7-11份、鲜虾皮22-28份、干贝45-55份、盐9-14份、黄豆粉12-18份、陈皮粉3-7份、昆布4-9份、山楂粉3-8份、木瓜蛋白酶0.3-0.8份和水90-130份。
5.如权利要求4所述的调味料复合鲜味剂,其特征在于:其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉5-8份、大蒜粉4-7份、生姜粉3-6份、鲜香菇8-11份、鲜虾皮24-26份、干贝48-52份、盐10-13份、黄豆粉13-16份、陈皮粉4-6份、昆布5-7份、山楂粉4-7份、木瓜蛋白酶0.4-0.6份和水100-120份。
6.如权利要求5所述的调味料复合鲜味剂,其特征在于:其制备原料按重量份计地包括:洋葱粉7份、大蒜粉6份、生姜粉4份、鲜香菇10份、鲜虾皮25份、干贝50份、盐12份、黄豆粉14份、陈皮粉5份、昆布6份、山楂粉5份、木瓜蛋白酶0.5份和水115份。
7.如权利要求4-6任意一项所述的调味料复合物鲜味剂的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)将配方用量的鲜香菇、鲜虾皮、干贝、黄豆粉和昆布蒸煮后,冷却至室温后将其加入到打浆机中,并向打浆机中加入配方用量的水,制得浆状物A;
(2)将步骤(1)得到的浆状物A加热至45-60℃,向其中加入配方用量的木瓜蛋白酶,酶解30-60min后,然后升温至90-100℃,灭酶10-30min,冷却至室温后得到酶解产物B;
(3)将步骤(2)得到的酶解产物B经过高速离心过滤,得到酶解液C;
(4)将步骤(3)得到的酶解液C与配方用量的洋葱粉、大蒜粉、生姜粉陈皮粉、盐和山楂粉,混合均匀后,进行喷雾干燥,即得到所述的调味料复合鲜味剂。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中的蒸煮温度为80-100℃,蒸煮时间为10-40min;优选地,所述步骤(1)中的蒸煮温度为85-95℃,蒸煮时间为15-35min。
9.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中的酶解温度为50-60℃,酶解时间为30-50min,灭酶时间为15-25min。
10.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于:所述步骤(4)中喷雾干燥的条件为:进风温度为160-190℃,出风温度为70-100℃;优选地,所述步骤(4)中喷雾干燥的条件为:进风温度为170-180℃,出风温度为80-90℃。
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