CN109053834A - 一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法 - Google Patents

一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109053834A
CN109053834A CN201811080864.3A CN201811080864A CN109053834A CN 109053834 A CN109053834 A CN 109053834A CN 201811080864 A CN201811080864 A CN 201811080864A CN 109053834 A CN109053834 A CN 109053834A
Authority
CN
China
Prior art keywords
purity
methanol
anthocyanidin
extracted
fruit honeysuckle
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811080864.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109053834B (zh
Inventor
张妍
霍俊伟
谢佳璇
秦栋
刘佩
刘化禹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northeast Agricultural University
Original Assignee
Northeast Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northeast Agricultural University filed Critical Northeast Agricultural University
Priority to CN201811080864.3A priority Critical patent/CN109053834B/zh
Publication of CN109053834A publication Critical patent/CN109053834A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109053834B publication Critical patent/CN109053834B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法，是一种花青素提取、分离及纯化的技术手段。以富含高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的蓝果忍冬这一新兴材料作为材料，利用溶剂萃取法进行提取，SPE固相萃取技术进行分离，高效液相色谱法(HPLC)进行鉴定，可快速、高效、低成本的获得高纯度的矢车菊素‑3‑葡萄糖苷，解决目前由于自然界中花青素种类繁多，分离高纯度的单体难度较大这一难题，具有广泛的应用价值及市场前景。

Description

一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法
技术领域
本发明属于花青素提取领域技术，主要涉及一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法。
背景技术
蓝果忍冬(Lonicera caerulea L.)是一种多年生灌木属的忍冬科，原产于北半球，主要分布于俄罗斯，日本，中国，北美和北欧国家。古时，蓝果忍冬的果实已被中国，日本等国家用作药用。成熟果实呈椭圆形，深蓝色至紫色。果实中含有丰富的生物活性物质，如维生素C，花青素，酚酸和黄类黄酮等。尤其是其花青素含量，平均可达1,300mg CE/100gFW，比蓝莓、树莓、黑加仑、草莓的花青素含量高出数倍，是一种优质的花青素提取材料。其中，矢车菊素-3-葡萄糖苷单体高达90％以上，是目前自然界含矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度最高的植物。
花青素是植物组织中常见的黄酮类化合物，是一种重要的水溶性色素，与果实的颜色和品质有着密切的关系。花青素具有很强的抗氧化性，可清除人体自由基，缓解衰老。同时，具有预防神经元疾病，心血管疾病，抗癌症，抗糖尿病，抗炎等功效，对人类的健康有诸多益处。近年来，人工合成着色剂一直存在安全性的争议，花青素作为一种天然色素，具有无毒害，可替代人工合成色素的特点，因此，具有很强的开发利用潜能。
花青素的提取、分离纯化是进来研究领域较为活跃的一个方面，常见的提取方法有溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、超高压辅助提取等。常见的分离方法有纸层析、薄层层析、柱层析等。由于自然界中花青素的种类广发，分离高纯度的单体难度较大，而以含有高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的蓝果忍冬作为材料，结合甲醇溶剂提取法，SPE固相萃取技术进行分离，纯化及通过高效液相色谱(HPLC)进行鉴定，即可快速高效的获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，达到快速分离花青素的效果，实现制备高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的目的。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
1、一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；
(2)用甲醇作为萃取剂，以合适的料液比进行提取，使用摇床振荡，离心，取上清液；
(3)残渣用一定体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯，甲醇和0.01MHCl预处理；
(5)添加粗提液至C18柱上，用0.01M HCl洗脱糖，用乙酸乙酯洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
2、根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(1)所述的提取过程中的料液比参数是：蓝果忍冬冻干果粉：甲醇为1:6-8；摇床振荡转速为200-300rpm，时间为1-3h；离心转速为6000-10000rpm，时间为5-10min。
3、根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(2)所述的一定体积的甲醇为：2-3倍体积。
4、根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(3)所述的C18Sep-Pak柱预处理参数是：乙酸乙酯(5-15mL)，甲醇(5-15mL)，0.01M HCl(10-20mL)。
5、根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(4)所述的洗脱花青素的参数是：添加1-3mL粗提掖至C18柱上，用0.01M HCl(10-15mL)，乙酸乙酯(30-50mL)，酸性甲醇(10-20mL)依次洗脱。
本方法以蓝果忍冬作为试材，先用80％甲醇％作为萃取剂进行提取，将获得粗提液通过SPE固相萃取技术进行分离纯化，获得纯化的花青素。将纯化的花青素旋蒸浓缩，得到高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷，并通过高效液相色谱(HPLC)进行鉴定。该方法可快速高效的获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷，操作简单，成本较低。
附图说明
附图为本工艺技术路线图。
具体实施方式
实施例1：
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；
(2)用甲醇作为萃取剂，以1:6的料液比进行提取，使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h，6000-10000rpm离心5-10min，取上清液；
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯(5-15mL)，甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理；
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上，用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖，用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
实施例2：
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；
(2)用甲醇作为萃取剂，以1:7的料液比进行提取，使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h，6000-10000rpm离心5-10min，取上清液；
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯(5-15mL)，甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理；
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上，用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖，用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
实施例3：
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；
(2)用甲醇作为萃取剂，以1:8的料液比进行提取，使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h，6000-10000rpm离心5-10min，取上清液；
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱(Waters，Wexford，Ireland)依次用乙酸乙酯(5-15mL)，甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理；
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上，用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖，用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。

Claims (5)

1.一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法：其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻，冻干并研磨成粉末；
(2)用80％甲醇作为萃取剂，以合适的料液比进行提取，使用摇床振荡，离心，取上清液；
(3)残渣用一定体积的甲醇在相同的条件下再次萃取，合并上清液，并在40℃下旋蒸浓缩，获得粗提液；
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯，甲醇和0.01MHCl预处理；
(5)添加粗提液至C18柱上，用0.01M HCl洗脱糖，用乙酸乙酯洗脱吸附的非花色素苷多酚，然后用酸性甲醇(0.1％HCl的甲醇溶液，v/v)洗脱吸附的花青素，直至洗脱液变为无色，收集花青素；
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜；
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物，发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(1)所述的提取过程中的料液比参数是：蓝果忍冬冻干果粉：甲醇为1:6-8；摇床振荡转速为200-300rpm，时间为1-6h；离心转速为6000-10000rpm，时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(2)所述的一定体积的甲醇为：2-3倍体积。
4.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(3)所述的C18Sep-Pak柱预处理参数是：乙酸乙酯(5-15mL)，甲醇(5-15mL)，0.01M HCl(10-20mL)。
5.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法，其特征在于，步骤(4)所述的洗脱花青素的参数是：添加1-3mL粗提掖至C18柱上，用0.01M HCl(10-15mL)，乙酸乙酯(30-50mL)，酸性甲醇(10-20mL)依次洗脱。
CN201811080864.3A 2018-09-17 2018-09-17 一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法 Active CN109053834B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811080864.3A CN109053834B (zh) 2018-09-17 2018-09-17 一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811080864.3A CN109053834B (zh) 2018-09-17 2018-09-17 一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109053834A true CN109053834A (zh) 2018-12-21
CN109053834B CN109053834B (zh) 2022-03-11

Family

ID=64761844

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811080864.3A Active CN109053834B (zh) 2018-09-17 2018-09-17 一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109053834B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108830A (zh) * 2019-05-06 2019-08-09 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105566414A (zh) * 2016-01-25 2016-05-11 浙江大学 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法
CN107325139A (zh) * 2016-11-10 2017-11-07 东北林业大学 一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105566414A (zh) * 2016-01-25 2016-05-11 浙江大学 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法
CN107325139A (zh) * 2016-11-10 2017-11-07 东北林业大学 一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IRENA PALIKOVA等: "Constituents and Antimicrobial Properties of Blue Honeysuckle: A Novel Source for Phenolic Antioxidants", 《J. AGRIC. FOOD CHEM.》 *
L.C. KERIO等: "Characterization of anthocyanins in Kenyan teas: Extraction and identification", 《FOOD CHEMISTRY》 *
吴涛: "花色苷对肥胖的干预及其相关机理的研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *
陈亮 等: "野生桑葚中花色苷成分分析", 《食品工业科技》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108830A (zh) * 2019-05-06 2019-08-09 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法
CN110108830B (zh) * 2019-05-06 2021-02-26 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109053834B (zh) 2022-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101353362B (zh) 矢车菊素3-o-葡萄糖苷的提取方法
Obouayeba et al. Phytochemical analysis, purification and identification of Hibiscus anthocyanins
CN102229633B (zh) 一种从葡萄皮中分离制备五种高纯度花色苷单体的方法
CN101220062A (zh) 一种同时制备甜菊苷和莱鲍迪苷a的方法
CN104892687B (zh) 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法
CN107325138A (zh) 一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法
CN105566414B (zh) 从杨梅果肉中分离纯化四种黄酮糖苷的方法
CN106242953A (zh) 一种从丹凤牡丹籽壳中制备白藜芦醇的方法
CN101343225A (zh) 高纯度二咖啡酰奎宁酸类化合物的制备方法
CN107698458A (zh) 一种n1,n5‑双(对香豆酰)亚精胺的提取方法
CN103130851B (zh) 一种从萝卜皮中分离制备四种天竺葵素衍生物的方法
CN101863935A (zh) 1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯对照品的制备方法
Wei et al. An efficient preparative procedure for main flavone aglycones from Equisetum palustre L. using macroporous resin followed by gel resin flash chromatography
CN109053834A (zh) 一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法
CN107573255B (zh) 一种从辣椒果实中分离纯化辣椒碱和二氢辣椒碱的方法
CN109293509A (zh) 一种从竹叶提取物中制备高纯度绿原酸的方法
CN110511200B (zh) 一种从马蔺子中分离Hopeaphenol或/和Isohopeaphenol的方法
CN101921301B (zh) 一种从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法
CN115010618A (zh) 一种可降尿酸的金色酰胺醇酯分离纯化方法及其应用
CN102796154B (zh) 一种从茄子皮中分离制备高纯度酰化的飞燕草素衍生物的方法
CN104628694B (zh) 一种从火炬树果实中提取木犀草素和木犀草素‑7‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷的方法
CN104788990B (zh) 一种从腊八蒜中提取和分离黄色素的方法
CN103570795A (zh) 一种雷公藤红素的制备方法
Lu et al. Efficient counter-current chromatographic isolation and structural identification of two new cinnamic acids from Echinacea purpurea
CN108484711B (zh) 一种制备绞股蓝皂苷li的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant