CN107325139A - 一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷的方法,所采取的技术方案是:以蓝靛果提取物为原料,采取高速匀质破碎酶解技术、负压空化强化提取技术、低温絮凝沉降技术、中压快闪反相柱层析技术及重结晶技术等得到精制的矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷,纯度可达95%以上。本发明方法绿色环保,步骤少,耗时短,目标化合物的损失少,产品得率和纯度都很高,适合于规模化生产,具有较高的经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种从蓝靛果中提取纯化功能性有效成分花色苷的方法,具体是从蓝靛果中快速高效提取纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的方法。
背景技术
蓝靛果(Lonicera caerulea L.)为忍冬科忍冬属,多年生落叶小灌木。具有清热解毒、稳定血压、改善肝脏的解毒功能、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗疲劳、调节免疫、保护视力、促进身体良好发育等功效。蓝靛果果实中富含花色苷类化合物,花色苷是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素,是花青素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物,结构母核是3,5,7-三羟基-2-苯基苯并吡喃阳离子。其安全、无毒、营养价值高、并且还具有清除自由基、改善视力、预防和治疗心血管疾病等一系列的药理作用,在食品、保健品、化妆品、医药等领域具有很大的开发应用潜力。
近年来,人工合成花色苷的途径比较复杂,且存在成本高、安全性低等特点,因此,从植物中提取、纯化花色苷已经成为当今研究的热点,富含花色苷的蓝靛果也成为学者们研究天然花色苷的重要原料之一。我国一般用有机溶剂提取法,超声波提取法和超临界流体萃取技术等。传统的有机溶剂提取法提取时间长,得率低;而超临界流体萃取花色苷,又存在投资大,能耗大等缺点。本发明的不同之处在于探究了一条经济、有效、绿色的提取和纯化蓝靛果花色苷的技术,不仅得率高,而且纯度高,促进了我国蓝靛果的资源深度开发和高效利用。
发明内容
本发明旨在提供一种简单、绿色、快速、高效、低成本、高收率,从蓝靛果中提取分离纯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的熟化路线。
为实现上述发明目的,本发明采用的技术方案如下:
一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法,其特征在于按如下工艺步骤进行:
A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料:新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3~8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5~10min,用冰醋酸或柠檬酸调节浆液pH为3.5~5.5,加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300~700U/mL,然后在35~50℃条件下酶解2~5h,过滤,收集滤液、滤渣;
B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣:上述滤渣按质量体积比加入10~20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取,提取温度为25~40℃,提取压力为-0.04~-0.08MPa,提取2~4次,每次30~60min,合并提取液与步骤A所得滤液,减压除去2/3溶液。
C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液:上述浓缩滤液中加入50%~70%的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀,置于0~8℃下放置24~48h,分离得到上清液和沉淀,再将沉淀在35~50℃下减压干燥,得富集物。
D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷:上述低温絮凝沉降富集物加入20%甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶:上样体积为柱体积的1/12~1/5;等度洗脱选用的洗脱剂为20%甲醇,洗脱流速为20~35mL/min,然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测,合并相同流份,减压浓缩至干,得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。
E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用50%~70%的乙醇反复重结晶得到纯度可达95%的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。
本发明具有如下优点:
1.本发明对蓝靛果资源进行高效合理的利用,产品的附加值高。
2.采用高速匀质破碎酶解技术、负压空化强化提取技术、低温絮凝沉降技术、中压快闪反相柱层析技术及重结晶技术等用于矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的提取分离,所得产品得率高、纯度高。
3.该方法绿色环保,步骤少,耗时短,耗能低,成本低,操作简便,适合大规模化生产。
附图说明
图1为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结构
图2为花色苷的HPLC色谱图
(A)矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品HPLC色谱图
(B)蓝靛果粗提物HPLC色谱图
(C)纯化后HPLC色谱图
图3为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的二级质谱图
具体实施方式:
实例1
一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法,按如下工艺步骤进行:
A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料:1kg新鲜的蓝靛果5L的水进行高速匀质破碎6min,用柠檬酸调节浆液pH为4.0,加入纤维素酶使酶浓度为450U/mL,然后在40℃条件下酶解3h,过滤,收集滤液、滤渣;
B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣:上述滤渣按质量体积比加入15L乙醇溶液进行负压空化强化提取,提取温度为40℃,提取压力为-0.05MPa,提取2次,每次50min,合并提取液与步骤A所得滤液,减压除去2/3溶液。
C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液:上述浓缩滤液中加入60%的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀,置于4℃下放置24h,分离得到上清液和沉淀,再将沉淀在40℃下减压干燥,得富集物。
D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷:上述低温絮凝沉降富集物加入20%甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶:上样体积为柱体积的1/7;等度洗脱选用的洗脱剂为20%甲醇,洗脱流速为30mL/min,然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测,合并相同流份,减压浓缩至干,得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。
E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用甲醇反复重结晶得到纯度为95.5%的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷1.48g。
实例2
一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法,按如下工艺步骤进行:
A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料:1kg新鲜的蓝靛果7L的水进行高速匀质破碎8min,用冰醋酸调节浆液pH为5.0,加入纤维素酶和果胶酶的复合酶使纤维素酶浓度为300U/mL、果胶酶浓度为200U/mL,然后在45℃条件下酶解4h,过滤,收集滤液、滤渣;
B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣:上述滤渣按质量体积比加入10L乙醇溶液进行负压空化强化提取,提取温度为35℃,提取压力为-0.07MPa,提取3次,每次30min,合并提取液与步骤A所得滤液,减压除去2/3溶液。
C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液:上述浓缩滤液中加入55%的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀,置于6℃下放置32h,分离得到上清液和沉淀,再将沉淀在45℃下减压干燥,得富集物。
D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷:上述低温絮凝沉降富集物加入20%甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶:上样体积为柱体积的1/10;等度洗脱选用的洗脱剂为20%甲醇,洗脱流速为25mL/min,得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷流份,然后减压浓缩至干,得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。
E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用甲醇反复重结晶得到纯度为96.3%的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷1.56g。
Claims (1)
1.一种从蓝靛果中快速高效提取纯化花色苷的方法,其特征在于按如下工艺步骤进行:
A.高速匀质破碎酶解蓝靛果原料:新鲜的蓝靛果按质量体积比加入3~8倍原料质量的水进行高速匀质破碎5~10min,用柠檬酸、冰醋酸调节浆液pH为3.5~5.5,加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为300~700U/mL,然后在35~50℃条件下酶解2~5h,过滤,收集滤液、滤渣;
B.负压空化强化提取蓝靛果滤渣:上述滤渣按质量体积比加入10~20倍滤渣质量的乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取,提取温度为25~40℃,提取压力为-0.04~-0.08MPa,提取2~4次,每次30~60min,合并提取液与步骤A所得滤液,减压除去2/3溶液。
C.低温絮凝沉降蓝靛果浓缩滤液:上述浓缩滤液中加入50%~70%的乙醇配置饱和溶液后搅拌均匀,置于0~8℃下放置24~48h,分离得到上清液和沉淀,再将沉淀在35~50℃下减压干燥,得富集物。
D.中压快闪反相柱层析分离矢车菊素-3-O-葡萄糖苷:上述低温絮凝沉降富集物加入20%甲醇至刚好溶解后进行中压快闪反相色谱柱层析。其中柱填料为ODS-C18反相硅胶:上样体积为柱体积的1/12~1/5;等度洗脱选用的洗脱剂为20%甲醇,洗脱流速为20~35mL/min,然后在检测波长520nm下进行HPLC的检测,合并相同流份,减压浓缩至干,得到矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体。
E.矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的结晶:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷单体用50%~70%的乙醇反复重结晶得到纯度可达95%的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。
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