CN107970270A - 一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，将杜仲叶干燥、粉碎、过筛，以乙醇水溶液为溶剂，磁力搅拌、加热回流或微波加热提取总黄酮，采用离心或抽滤进行液‑固分离，得到杜仲叶一次固体残渣和总黄酮初提液；取干燥后的杜仲叶一次固体残渣，以水为溶剂，预浸泡后，采用超声波或微波方式提取多糖，将提取液离心或抽滤进行液‑固分离，得到杜仲叶二次固体残渣和多糖上清液；二次固体残渣用来做饲料或肥料。本发明分步提取杜仲叶中的总黄酮和多糖，采用加热回流、超声波和微波技术的不同组合方式进行提取，是一种灵活、高效、快速、简便、节省溶剂、温度要求低、耗时少的提取方法。

Description

一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法
技术领域
本发明属于植物有效成分的提取技术领域，具体涉及一种分步提取杜仲叶中的总黄酮和多糖的方法。
背景技术
杜仲( Eucommia ulmoides Oliver)为杜仲科(Eucommiaceae)植物，本科仅属1种，是仅存于我国的第三纪孑遗植物，属我国珍稀濒危第二类保护树种。杜仲是一种很神奇的植物，全身除木材外，皮、叶、果、枝条都含有丰富的次生代谢物，是一种多天然活性物质、多功能的植物。杜仲皮、 叶、 花、 果实等所含物质相似，迄今发现的化学成分多达138种，主要为木脂素类、苯丙素类、环烯醚萜类、黄酮类化合物，还有多糖、酚类、三萜类、甾类、有机酸；此外，还含有丰富的营养成分，如氨基酸、脂肪和微量元素等。现代研究表明，杜仲的多种药效成分和营养成分，主要为黄酮和多糖类等，如杜仲多糖、槲皮素、山柰酚、芦丁、杜仲醇、杜仲胶、杜仲苷、松脂醇二葡萄糖苷和维生素等，有良好的降压、利尿、保肝、抗肿瘤、抗菌、抗衰老和中枢镇静等多种药理作用，因此近年来在临床上的应用越来越广泛，临床需求量显著增加。
杜仲叶为杜仲科植物杜仲的干燥叶，别名丝棉树、丝棉皮、玉丝皮，与杜仲皮有相同的有效成分和药理作用，完全可以以叶代皮入药。可在夏、秋二季枝叶茂盛时采收，晒干或低温烘干。黄酮和多糖的提取方法有醇提法、超声提取法、大孔树脂吸附分离法、微波提取法、半仿生法和酶法，其中以乙醇作为溶剂提取总黄酮，以水作为溶剂提取多糖的工艺最为常见。此种方法成本低廉，有效成分提取相对完全，适合大规模工业化生产。中国专利CN101461835 B“杜仲黄酮多频组合超声浸取办法”介绍了杜仲黄酮多频组合超声浸取方法，是将杜仲和乙醇水溶液的混合物，用多频复合、交变超声浸取黄酮的方法，间歇或连续操作，比单频超声浸取效果相对要好。中国专利CN 101914472 A“一种杜仲叶提取物及其制备方法和应用”介绍了一种关于杜仲叶提取物的工艺研究，是将杜仲叶用水煎煮并过滤，调整滤液的pH值5.5-7.5，得到杜仲叶提取物，并将其应用于乳酸菌发酵培养促进剂，以显著提高发酵液含活性菌数量，效果显著。中国专利CN 104688801 A“一种复合酶结合超声自杜仲叶提取杜仲黄酮的生产工艺”介绍了一种复合酶结合超声对杜仲叶中黄酮进行提取的工艺方法，是将杜仲叶粉碎过筛，并向粉末中加3-5倍水浸泡，同时加入纤维素酶和果胶酶，调节pH值使其酶解，然后煮沸使酶失活，再向其中加入乙醇进行超声浸提，提取液过滤、浓缩，并采用大孔树脂分离、洗脱、浓缩得到总黄酮纯品。上述专利采用超声、浸泡等不同工艺方法提取杜仲中的黄酮，对设备要求较高，对杜仲有效成分提取单一、不够充分，不能对活性成分达到最大限度的提取，所述方法也不易实现大规模生产。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种低成本、高效率、节能环保地从杜仲叶中分步获得总黄酮、多糖等活性成分的方法，实现杜仲叶活性组分的充分提取利用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）将杜仲叶干燥、粉碎、过筛，加入乙醇水溶液，采用磁力搅拌、加热回流或者微波加热的方式提取总黄酮，提取结束后，将混合料液冷却，采用离心或抽滤进行液-固分离，得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，分析初提液中的总黄酮浓度，计算总黄酮纯度和得率；
（2）将步骤（1）分离得到的杜仲叶一次固体残渣干燥后，加入去离子水中预浸泡，然后采用超声或微波提取多糖，提取结束后，将提取液离心或抽滤，分离得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，分析上清液中的多糖浓度，计算多糖纯度和得率。
（3）将步骤（2）分离得到的杜仲叶二次固体残渣用来做饲料或肥料。
所述步骤（1）中的杜仲叶干燥、粉碎后，过20-100目筛。
所述步骤（1）中乙醇水溶液的体积分数为10-90%，杜仲叶与乙醇水溶液的料液比为1:8-1:40 g/mL。
所述步骤（1）中采用磁力搅拌、加热回流提取总黄酮时的提取温度为40-90℃，回流提取时间为30-360 min。
所述步骤（1）中采用微波加热方式提取总黄酮时的微波温度为40-80℃，微波功率为100-1000W，微波提取时间为1-30 min。
所述步骤（1）中，采用硝酸铝法分析初提液中总黄酮浓度。
所述步骤（2）中的杜仲叶一次固体残渣，置于干燥箱干燥，所述的干燥温度为40-90℃；所述的杜仲叶一次固体残渣与去离子水的料液比为1:8-1:40 g/ml，预浸泡时间为0-240 min.
所述步骤（2）中采用超声方式提取多糖时的超声功率为80-400 W，超声提取温度40-60℃，超声时间5-60 min。
所述步骤（2）中采用微波加热方式提取多糖时的微波温度为50-100℃，微波功率为100-1000 W，微波提取时间为1-30 min。
所述步骤（2）中采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度。
本发明的有益效果：本发明具有如下的优点和有益效果：
（1）本发明针对总黄酮和多糖在不同溶剂中的溶解性能差异，采用不同溶剂分步从杜仲叶中提取总黄酮和多糖，对杜仲叶有效成分进行了最大程度的提取利用。
（2）本发明基于传统的提取工艺，选取无毒无害的提取溶剂乙醇水溶液和水，成本低廉。
（3）本发明采用加热回流和微波加热两种技术提取杜仲叶总黄酮；进一步采用超声波和微波技术提取杜仲叶一次固体残渣中的多糖；将加热回流、超声、微波多种技术进行不同组合，是一种灵活、高效、快速、简便、节省溶剂、温度要求低、耗时少的提取方法。
（4）本发明分别采用硝酸铝法、苯酚-硫酸法分析总黄酮和多糖，操作便捷，数据结果干扰少、可信度高，且及时快速。
（5）本发明从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖，第一步使用加热回流浸提或微波提取的方法提取总黄酮，然后进行二次提取，使用超声或微波提取多糖，最后的残渣，可以做饲料或肥料。这种分步提取获得总黄酮和多糖的方法极大地提高了有效成分的提取效率，加热回流、超声或微波技术灵活组合，可避免高温对提取成分活性的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围，该领域的技术熟练人员可以根据上述发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末50 g，按照1:8 g/ml的料液比加入体积分数为10%的乙醇水溶液，在40℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮30 min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度9.93%，得率0.68%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在40℃下烘干，称取杜仲叶一次固体残渣干粉20 g，按照1:8 g/ml的料液比加入去离子水，采用超声方式提取多糖，不经预浸泡，直接在40℃、超声功率80W条件下，超声波提取5min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算上清液中的多糖纯度0.81%，得率0.03%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例2
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末5 kg，按照1:15 g/ml的料液比加入体积分数为50%的乙醇水溶液，在70℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮40min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度14.89%，得率1.06%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在60℃下烘干，称取杜仲叶一次固体残渣干粉2 kg，按照1:15 g/ml的料液比加入去离子水，采用超声方式提取多糖，预浸泡时间为120min，在50℃、超声功率320W的条件下，超声波提取30min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度2.01%，得率0.07%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例3
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末10 kg，按照1:30 g/ml的料液比加入体积分数为90%的乙醇水溶液，在90℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮360min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度16.11%，得率1.14%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在90℃下烘干，称取杜仲叶干粉4 kg，按照1:40 g/ml的料液比加入去离子水，采用超声方式提取多糖，预浸泡240 min，在60℃、超声功率400 W的条件下，超声波提取60 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度1.97%，得率0.07%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例4
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末50 g，按照1:8 g/ml的料液比加入体积分数为10%的乙醇水溶液，在40℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮30min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度10.84%，得率0.72%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在40℃下烘干，称取杜仲叶一次固体残渣干粉20 g，按照1:8 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，不经预浸泡，直接微波提取，控制温度50℃、微波功率100W的条件下，微波提取1min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度0.87%，得率0.04%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次残渣用来做饲料或肥料。
实施例5
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末5 kg，按照1:15 g/ml的料液比加入体积分数为50%的乙醇水溶液，在70℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮40 min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度14.94%，得率1.07%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在60℃下干燥，称取杜仲叶一次固体残渣干粉2 kg，按照1:15 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，预浸泡120 min后，控制温度80℃，微波功率800 W，微波提取10 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度2.13%，得率0.07%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例6
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末10 kg，按照1:40 g/ml的料液比加入体积分数为80%的乙醇水溶液，在90℃水浴条件下，磁力搅拌、加热回流提取总黄酮360min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算初提液中的总黄酮纯度16.24%，得率1.12%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在90℃下干燥，称取杜仲叶干粉4 kg，按照1:40 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，预浸泡240 min后，控制温度100℃，微波功率1000 W，微波提取30 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖，计算出上清液中的多糖纯度1.71%，得率0.06%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例7
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末50 g，按照1:8 g/ml的料液比加入体积分数为10%的乙醇水溶液，采用微波加热方式提取总黄酮，控制温度40℃，微波功率100W，微波提取时间1 min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算出初取液中的总黄酮纯度6.51%，得率0.43%；
（2）将杜仲叶一次残渣置于干燥箱，在40℃下干燥，称取杜仲叶一次固体残渣干粉20g，按照1:8 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，不经预浸泡，控制温度50℃，微波功率为100W，微波提取1 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度1.08%，得率0.06%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次残渣用来做饲料或肥料。
实施例8
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末5 kg，按照1:15 g/ml的料液比加入体积分数为50%的乙醇水溶液，采用微波加热方式提取总黄酮，控制温度70 ℃，微波功率800W，微波提取时间10 min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算出初提液中的总黄酮纯度8.58%，得率0.74%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在60 ℃下烘干，称取杜仲叶一次固体残渣干粉2kg，按照1:15 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，预浸泡时间为120 min，控制温度80 ℃，微波功率为800 W，微波提取时间10 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度2.03%，得率0.07%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
实施例9
本实施例的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，步骤如下：
（1）称取干燥、粉碎、过20-100目筛的杜仲叶粉末10 kg，按照1:40 g/ml的料液比加入体积分数为90%的乙醇水溶液，采用微波加热方式提取总黄酮，控制温度80 ℃下，微波功率1000 W，微波提取时间30 min，冷却、过滤、分离，分别得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，采用硝酸铝法分析初提液中的总黄酮浓度，计算出初提液中的总黄酮纯度9.01%，得率0.83%；
（2）将杜仲叶一次固体残渣置于干燥箱，在85℃下烘干，称取杜仲叶干粉4 kg，按照1:40 g/ml的料液比加入去离子水，采用微波加热方式提取多糖，预浸泡240 min，控制温度100℃，微波功率1000 W，微波提取30 min，冷却、过滤、分离，得到杜仲叶二次固体残渣和提取液上清液，采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度，计算出上清液中的多糖纯度1.12%，得率0.07%；
（3）杜仲叶提取总黄酮和多糖后，得到的二次固体残渣用来做饲料或肥料。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将杜仲叶干燥、粉碎、过筛，加入乙醇水溶液，采用磁力搅拌、加热回流或者微波加热的方式提取总黄酮，提取结束后，将混合料液冷却，采用离心或抽滤进行液-固分离，得到杜仲叶一次固体残渣和初提液，分析初提液中的总黄酮浓度，计算总黄酮纯度和得率；
（2）将步骤（1）分离得到的杜仲叶一次固体残渣干燥后，加入去离子水中预浸泡，然后采用超声或微波提取多糖，提取结束后，将提取液离心或抽滤，分离得到杜仲叶二次固体残渣和上清液，分析上清液中的多糖浓度，计算多糖纯度和得率；
（3）将步骤（2）分离得到的杜仲叶二次固体残渣用来做饲料或肥料。
2.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的杜仲叶干燥、粉碎后，过20-100目筛。
3.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中乙醇水溶液的体积分数为10-90%，杜仲叶与乙醇水溶液的料液比为1:8-1:40 g/mL。
4.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中采用磁力搅拌、加热回流提取总黄酮时的提取温度为40-90℃，回流提取时间为30-360 min。
5.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中采用微波加热方式提取总黄酮时的微波控制温度为40-80℃，微波功率为100-1000W，微波提取时间为1-30 min。
6.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，采用硝酸铝法分析初提液中总黄酮浓度。
7.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的工艺方法，其特征在于，所述步骤（2）中的杜仲叶一次固体残渣，置于干燥箱干燥，所述的干燥温度为40-90℃；所述的杜仲叶一次固体残渣与去离子水的料液比为1:8-1:40 g/ml，预浸泡时间为0-240 min。
8.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中采用超声方式提取多糖时的超声功率为80-400 W，超声提取温度40-60℃，超声时间5-60 min。
9.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中采用微波加热方式提取多糖时的微波温度为50-100℃，微波功率为100-1000 W，微波提取时间为1-30 min。
10.根据权利要求1所述的从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，其特征在于，所述步骤（2）中采用苯酚-硫酸法分析上清液中的多糖浓度。
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