CN109053834B - 一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法 - Google Patents
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Abstract
一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的方法,是一种花青素提取、分离及纯化的技术手段。以富含高纯度矢车菊素‑3‑葡萄糖苷的蓝果忍冬这一新兴材料作为材料,利用溶剂萃取法进行提取,SPE固相萃取技术进行分离,高效液相色谱法(HPLC)进行鉴定,可快速、高效、低成本的获得高纯度的矢车菊素‑3‑葡萄糖苷,解决目前由于自然界中花青素种类繁多,分离高纯度的单体难度较大这一难题,具有广泛的应用价值及市场前景。
Description
技术领域
本发明属于花青素提取领域技术,主要涉及一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法。
背景技术
蓝果忍冬(Lonicera caerulea L.)是一种多年生灌木属的忍冬科,原产于北半球,主要分布于俄罗斯,日本,中国,北美和北欧国家。古时,蓝果忍冬的果实已被中国,日本等国家用作药用。成熟果实呈椭圆形,深蓝色至紫色。果实中含有丰富的生物活性物质,如维生素C,花青素,酚酸和黄类黄酮等。尤其是其花青素含量,平均可达1,300mg CE/100gFW,比蓝莓、树莓、黑加仑、草莓的花青素含量高出数倍,是一种优质的花青素提取材料。其中,矢车菊素-3-葡萄糖苷单体高达90%以上,是目前自然界含矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度最高的植物。
花青素是植物组织中常见的黄酮类化合物,是一种重要的水溶性色素,与果实的颜色和品质有着密切的关系。花青素具有很强的抗氧化性,可清除人体自由基,缓解衰老。同时,具有预防神经元疾病,心血管疾病,抗癌症,抗糖尿病,抗炎等功效,对人类的健康有诸多益处。近年来,人工合成着色剂一直存在安全性的争议,花青素作为一种天然色素,具有无毒害,可替代人工合成色素的特点,因此,具有很强的开发利用潜能。
花青素的提取、分离纯化是进来研究领域较为活跃的一个方面,常见的提取方法有溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、超高压辅助提取等。常见的分离方法有纸层析、薄层层析、柱层析等。由于自然界中花青素的种类广发,分离高纯度的单体难度较大,而以含有高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的蓝果忍冬作为材料,结合甲醇溶剂提取法,SPE固相萃取技术进行分离,纯化及通过高效液相色谱(HPLC)进行鉴定,即可快速高效的获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足,提供一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,达到快速分离花青素的效果,实现制备高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的目的。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的:
1、一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,该方法包括以下步骤:
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻,冻干并研磨成粉末;
(2)用甲醇作为萃取剂,以合适的料液比进行提取,使用摇床振荡,离心,取上清液;
(3)残渣用一定体积的甲醇在相同的条件下再次萃取,合并上清液,并在40℃下旋蒸浓缩,获得粗提液;
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯,甲醇和0.01MHCl预处理;
(5)添加粗提液至C18柱上,用0.01M HCl洗脱糖,用乙酸乙酯洗脱吸附的非花色素苷多酚,然后用酸性甲醇(0.1%HCl的甲醇溶液,v/v)洗脱吸附的花青素,直至洗脱液变为无色,收集花青素;
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜;
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物,发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
2、根据1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(1)所述的提取过程中的料液比参数是:蓝果忍冬冻干果粉:甲醇为1:6-8;摇床振荡转速为200-300rpm,时间为1-3h;离心转速为6000-10000rpm,时间为5-10min。
3、根据1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(2)所述的一定体积的甲醇为:2-3倍体积。
4、根据1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(3)所述的C18Sep-Pak柱预处理参数是:乙酸乙酯(5-15mL),甲醇(5-15mL),0.01M HCl(10-20mL)。
5、根据1所述的一种蓝果忍冬中提取高纯度矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(4)所述的洗脱花青素的参数是:添加1-3mL粗提掖至C18柱上,用0.01M HCl(10-15mL),乙酸乙酯(30-50mL),酸性甲醇(10-20mL)依次洗脱。
本方法以蓝果忍冬作为试材,先用80%甲醇%作为萃取剂进行提取,将获得粗提液通过SPE固相萃取技术进行分离纯化,获得纯化的花青素。将纯化的花青素旋蒸浓缩,得到高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷,并通过高效液相色谱(HPLC)进行鉴定。该方法可快速高效的获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷,操作简单,成本较低。
附图说明
附图为本工艺技术路线图。
具体实施方式
实施例1:
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻,冻干并研磨成粉末;
(2)用甲醇作为萃取剂,以1:6的料液比进行提取,使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h,6000-10000rpm离心5-10min,取上清液;
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取,合并上清液,并在40℃下旋蒸浓缩,获得粗提液;
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯(5-15mL),甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理;
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上,用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖,用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚,然后用酸性甲醇(0.1%HCl的甲醇溶液,v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素,直至洗脱液变为无色,收集花青素;
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜;
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物,发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
实施例2:
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻,冻干并研磨成粉末;
(2)用甲醇作为萃取剂,以1:7的料液比进行提取,使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h,6000-10000rpm离心5-10min,取上清液;
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取,合并上清液,并在40℃下旋蒸浓缩,获得粗提液;
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯(5-15mL),甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理;
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上,用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖,用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚,然后用酸性甲醇(0.1%HCl的甲醇溶液,v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素,直至洗脱液变为无色,收集花青素;
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜;
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物,发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
实施例3:
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻,冻干并研磨成粉末;
(2)用甲醇作为萃取剂,以1:8的料液比进行提取,使用摇床在200-300rpm下振荡1-3h,6000-10000rpm离心5-10min,取上清液;
(3)残渣用2-3倍体积的甲醇在相同的条件下再次萃取,合并上清液,并在40℃下旋蒸浓缩,获得粗提液;
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化。将C18Sep-Pak柱(Waters,Wexford,Ireland)依次用乙酸乙酯(5-15mL),甲醇(5-15mL)和0.01M HCl(10-20mL)预处理;
(5)添加1-3mL粗提液至C18柱上,用0.01M HCl(10-15mL)洗脱糖,用乙酸乙酯(30-50mL)洗脱吸附的非花色素苷多酚,然后用酸性甲醇(0.1%HCl的甲醇溶液,v/v)(10-20mL)洗脱吸附的花青素,直至洗脱液变为无色,收集花青素;
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜;
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物,发现可获得高纯度的矢车菊素-3-葡萄糖苷。
Claims (5)
1.一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法:其特征在于,该方法包括以下步骤:
(1)将新鲜的蓝果忍冬果实在-20℃冷冻,冻干并研磨成粉末;
(2)用80%甲醇作为萃取剂,以合适的料液比进行提取,使用摇床振荡,离心,取上清液;
(3)残渣用一定体积的甲醇在相同的条件下再次萃取,合并上清液,并在40℃下旋蒸浓缩,获得粗提液;
(4)将浓缩液通过SPE装置进行纯化,将C18Sep-Pak柱依次用乙酸乙酯,甲醇和0.01MHCl预处理;
(5)添加粗提液至C18柱上,用0.01M HCl洗脱糖,用乙酸乙酯洗脱吸附的非花色素苷多酚,然后用0.1%HCl的甲醇溶液v/v,洗脱吸附的花青素,直至洗脱液变为无色,收集花青素;
(6)将收集得到的花青素在40℃下旋蒸并过滤膜;
(7)利用HPLC测定经过SPE纯化后的花青素提取物,发现可获得矢车菊素-3-葡萄糖苷。
2.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(2)所述的提取过程中的料液比参数是:蓝果忍冬冻干果粉:甲醇为1:6-8;摇床振荡转速为200-300rpm,时间为1-6h;离心转速为6000-10000rpm,时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(3)所述的一定体积的甲醇为:2-3倍体积。
4.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(4)所述的C18Sep-Pak柱预处理参数是:乙酸乙酯5-15mL,甲醇5-15mL,0.01M HCl10-20mL。
5.根据权利要求1所述的一种蓝果忍冬中提取矢车菊素-3-葡萄糖苷的方法,其特征在于,步骤(5)所述的洗脱花青素的参数是:添加1-3mL粗提液至C18柱上,用0.01M HCl 10-15mL,乙酸乙酯30-50mL,酸性甲醇10-20mL依次洗脱。
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